KR20100037038A - Ｐｐａｒδ 아고니스트 함유 의약 - Google Patents

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Abstract

마이봄선 상피 세포 및 각막 상피 세포의 증식 촉진제, 및 마이봄선 기능부전 및 건성안 등의 안 질환 치료제를 제공하고자 한다. 유효 성분으로 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세테이트, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세테이트 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세테이트, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유한 제제를 마이봄선 상피 세포 또는 각막 상피 세포의 증식 촉진제 및 마이봄선 기능부전 및 건성안 등의 안 질환 치료제로 사용한다.
마이봄선 상피 세포, 각막 상피 세포, 증식 촉진제, 마이봄선 기능부전, 건성안

Description

ＰＰＡＲΔ 아고니스트 함유 의약 {PHARMACEUTICAL CONTAINING PPARΔ AGONIST}
본 발명은 PPAR (퍼옥시좀 증식체 활성화 수용체; Peroxisome Proliferator-Activated Receptor) δ 아고니스트를 유효 성분으로 함유하는, 마이봄선 상피 세포 또는 각막 상피 세포의 증식 촉진제에 관한 것이다.
마이봄선은 상하의 눈꺼풀(안검) 둘 다에 내포된 지질 생성 선이며, 눈꺼풀의 속눈썹으로부터 결막 측에 위치하는 개구부를 통해 지질을 분비한다. 누액을 구성하는 지질층은, 마이봄선으로부터 공급되는 지질을 성분으로 함유하고 있어, 눈 표면으로부터의 누액의 증발을 방지한다. 마이봄선 기능부전 또는 마이봄선염 환자는, 마이봄선의 기능이 저하하여 지질의 분비 수준이 더 적기 때문에, 과다증발성 (hyperevaporative) 건성안, 건성안에 수반되는 각결막 상피 장애, 각막 상피 미란 및 각막 궤양 등이 발생하는 것으로 알려져 있다.
또한, 각막은, 상피와 외경계막 (보우만막(Bowman's membrane), 실질, 내경계막 (데스메막(Descemet's membrane)) 및 내피로 이루어져 있다. 각막은 안구의 맨 앞부분에 위치하고 있어, 외부 환경의 영향을 받기 쉽고, 그 결과로 여러 가지의 장애가 발생한다. 각막 상피 세포의 창상 또는 결손에 수반되는 질환의 예로서는, 건성안 증후군, 각막 궤양, 표층 점상 각막염, 각막 상피 미란, 춘계 결막염, 아토피성 각결막염 등의 각막 병변에 수반되는 눈 알러지성 질환 등을 들 수 있다.
한편, PPAR 은, 대부분의 척추동물에서 발현되는 핵내 수용체의 일종이며, 세포내의 당 또는 지질 대사 및 세포 분화에 밀접하게 관련된 전사 인자 군으로 간주되고 있다. 이의 아류형으로서는, α, β 및 γ 형태가 알려져 있다. PPARδ 는, PPARβ 로 표기되는 경우도 있다(비특허 문헌 1).
눈 조직에서 PPAR 의 분포로서는, 토끼의 각막 상피 세포에서의 PPARα 및 β 의 발현이 알려져 있다(비특허 문헌 2).
주로 PPARγ 활성화 작용을 갖는 것으로 간주되는 5-[4-(6-메톡시-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-2-일메톡시)벤질]티아졸리딘-2,4-디온이 각결막 장애의 치료제로서 이용될 수 있다는 것(특허 문헌 1 및 2) 및 안 질환(결막염, 건성안 증후군, 각막염 등) 의 치료에 있어서 PPARα, δ 또는 γ 아고니스트가 투여되는 것 (특허 문헌 3) 이 보고되어 있다. 또한, PPARα 에 관해서는, 간, 신장 등에 분포하여, 지질 대사 및 수송에 작용한다는 것이 알려져 있다. 나아가 이의 아고니스트가 각막 질환의 치료제로서 이용될 수 있다는 것도 보고되어 있다(특허 문헌 4). PPARδ 아고니스트에 대해서는, 래트 피지선 상피 세포의 증식 및 분화를 촉진하는 것(비특허 문헌 3) 및 피부의 창상 치유를 촉진하는 것(비특허 문헌 4)이 보고되어 있다. 그 외에도, 비(非)-티아졸리딘디온 PPAR 리간드와 GLP-1 유도체를 투여함으로써 β-세포의 증식을 자극하는 방법(특허 문헌 5), 피오글리타존 (PPARγ 아고니스트) 이 백혈병 세포, 전립선 암 세포 등의 증식을 저해하는 것(특허 문헌 6) 등이 알려져 있다.
그러나, PPARα, δ 또는 γ 의 각 동물종 및 각 조직 또는 세포에 있어서의 발현 및 기능에 대해서는 아직 불명한 점이 많아, PPARδ 아고니스트가 인간의 안 질환에 유용한가에 대해서 정확하게는 알려지지 않고 있다.
특허 문헌 1: WO2005/039574
특허 문헌 2: JP-A-2001-39976
특허 문헌 3: WO2002/076177
특허 문헌 4: JP-A-2005-008570
특허 문헌 5: WO2002/69994
특허 문헌 6: WO1998/25598
비(非)-특허 문헌 1: J Med Chem 2000, 43: 527-550
비(非)-특허 문헌 2: J Biol Chem 2000, 275: 2837
비(非)-특허 문헌 3: Molecular Genetic and Metabolism 2001, 74: 362-369
비(非)-특허 문헌 4: Am J Clin Dermatol 2003, 4(8): 523-530
발명의 개시
발명이 해결하고자 하는 과제
본 발명의 목적은, 건성안 등의 안 질환의 근본적인 치료가 될 수 있는 마이봄선 상피 세포 및 각막 상피 세포의 증식을 촉진할 수 있는 약제, 그 촉진제를 사용한 마이봄선 기능부전, 각막 상피 장애, 건성안 등의 안 질환의 치료제를 제공하는 것이다.
과제를 해결하는 수단
본 발명자들은 상기 언급한 과제의 관점에서, 예의 연구를 거듭하여, 특정의 PPARδ 아고니스트가, 마이봄선 상피 세포 및 각막 상피 세포의 증식을 촉진함에 있어서 우수한 작용을 나타내는 것을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
따라서, 본 발명은 적어도 하기 측면들을 포함한다.
(1) [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 마이봄선 상피 세포의 증식 촉진제.
(2) [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 각막 상피 세포의 증식 촉진제.
(3) [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 마이봄선 기능부전의 치료제.
(4) [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 각막 상피 장애의 치료제.
(5) [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 건성안의 치료제.
(6) 상기 언급한 (5) 에 있어서, 건성안이 과다증발성 건성안인 치료제.
(7) 마이봄선 상피 세포의 증식 촉진제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
(8) 각막 상피 세포의 증식 촉진제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
(9) 마이봄선 기능부전의 치료제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
(10) 각막 상피 장애의 치료제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
(11) 건성안의 치료제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
(12) 상기 언급한 (11) 에 있어서, 건성안이 과다증발성 건성안인 용도.
(13) 마이봄선 상피 세포의 증식의 촉진을 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 마이봄선 상피 세포의 증식을 촉진하는 방법.
(14) 각막 상피 세포의 증식의 촉진을 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 각막 상피 세포의 증식을 촉진하는 방법.
(15) 마이봄선 기능부전의 치료를 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 마이봄선 기능부전을 치료하는 방법.
(16) 각막 상피 장애의 치료를 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 각막 상피 장애를 치료하는 방법.
(17) 건성안의 치료를 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 건성안을 치료하는 방법.
(18) 상기 언급한 (17) 에 있어서, 건성안이 과다증발성 건성안인 방법.
발명의 효과
본 발명은, 마이봄선 상피 세포 또는 각막 상피 세포의 증식을 촉진하는 신규의 마이봄선 상피 세포 증식 촉진제 또는 각막 상피 세포 증식 촉진제를 제공한다. 또한, 본 발명의 치료제는, 예를 들어, 마이봄선 기능부전, 각막 상피 장애, 건성안 등의 질환의 치료 또는 개선에 유효하게 사용될 수 있다.
도면의 간단한 설명
도 1 은, 배양된 인간 각막 상피 세포 (상단), 배양된 토끼 각막 상피 세포 (중단), 및 배양된 원숭이 마이봄선 상피 세포 (하단) 에서의 PPARα, δ, γ 의 mRNA 의 발현을 나타낸다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
본 발명은 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염 (이하 때로 집합적으로 "본 발명의 화합물"이라고 칭함) 을 유효 성분으로 함유하는, 마이봄선 상피 세포의 증식 촉진제를 제공한다. 상기 촉진제는 마이봄선 상피 세포의 증식을 촉진한다. 또한, 본 발명은 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 함유하는, 각막 상피 세포의 증식 촉진제를 제공한다. 상기 촉진제는 각막 상피 세포의 증식을 촉진한다. 본 발명에서 세포 증식 촉진제란, 세포 분열을 촉진하여 세포수를 증가시키는 작용을 갖는 것, 및 세포사를 억제하여 세포수를 증가시키는 작용을 갖는 것의 양자를 의미한다.
본 발명의 촉진제에 유효 성분으로서 함유되는 3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산 (CAS No. 515138-06-4):
Figure 112009077793309-PCT00001
은 PPARδ 아고니스트 활성을 갖는 화합물로서, WO2003/033493 (특히 실시예 5) 에 기재되어 있다.
본 발명의 촉진제에 유효 성분으로 함유되는 [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 (CAS No. 500581-25-8):
Figure 112009077793309-PCT00002
은 PPARδ 아고니스트 활성을 갖는 화합물로서, WO2003/016291 (특히 실시예 3) 에 기재되어 있다.
본 발명의 촉진제에 유효 성분으로 함유되는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 (CAS No. 500581-27-1):
Figure 112009077793309-PCT00003
은 PPARδ 아고니스트 활성을 갖는 화합물로서, WO2003/016291 (특히 실시예 6) 에 기재되어 있다.
이들 화합물의 약리학적으로 허용되는 염의 예로서는, 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속; 칼슘, 마그네슘 등의 알칼리토금속 등과의 금속염을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물에는, 그의 용매화물도 포함된다.
본 발명에 있어서 PPARδ 아고니스트란, PPARδ 의 리간드 결합 도메인 (LBD) 에 결합하여, 상기 수용체를 활성화하여, PPAR 표적 유전자의 전사를 조절 하는 물질이다. PPARδ 아고니스트 활성은, 포유동물 세포에 내재하는 다른 핵 수용체의 영향을 제외하기 위해, LBD 와 효모의 GAL4 와의 키메라 수용체와 리포터 유전자를 사용한 효모 투-하이브리드 (two-hybrid) 방법에 의해 측정할 수 있다. 구체적인 측정 방법의 예로서는, 참조 문헌 [T.M. Willson 등, Journal of Medicinal Chemistry, 2000, vol. 43, No. 4, p. 528-550] 및 [J.M. Lehmann 등, The Journal of Biological Chemistry, 1995, vol. 270, No. 22, p. 12953-12956] 에 기재된 PPAR-GAL4 검정을 들 수 있다. 본 발명의 화합물은 WO2003/033493, 실시예 12 및 WO2003/016291, 실시예 51 에 기재된 방법들에 의해, PPARδ 아고니스트 활성을 갖는 것으로 확인되었다.
본 발명의 화합물은 WO2003/033493 (특히 실시예 5) 및 WO2003/016291 (특히 실시예 3, 6) 의 기재에 준하여 합성가능하다.
본 발명의 촉진제에 있어서, 유효 성분의 함량은 일반적으로 0.000001 - 1 중량%, 바람직하게는 0.00001 - 1 중량%, 가장 바람직하게는 0.0001 - 0.1 중량% 이다.
본 발명의 촉진제는 상기 언급한 유효 성분들 외에 임의의 담체를 포함할 수 있다. 이러한 담체의 예로서는 용매 (예컨대, 물, 알콜 등), 완충액 (예컨대, 인산 완충액, 아세트산 완충액, 붕산 완충액, 탄산 완충액, 시트르산 완충액, Tris 완충액, 글루탐산, 엡실론 아미노카프로산 등), 보존제 (예컨대, 염화벤즈알코늄, 염화벤즈에토늄, 글루콘산 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 벤질 알콜, 데히드로아세트산나트륨, 파라옥시벤조산의 에스테르류, 에데트산나트륨, 붕산 등), 등장화제 (예컨대, 염화나트륨, 염화칼륨, 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 붕산, 글루코오스, 프로필렌 글리콜 등) 등을 들 수 있다.
본 발명의 촉진제는 약제 또는 시험용 시약 등으로서 생체내 또는 시험관내 사용가능하다.
본 발명의 촉진제를 시험용 시약으로 사용하는 경우, 생리학 및 생화학 분야에서의 시험용 시약으로서 다양한 양태로 이용가능하다.
본 발명의 촉진제를 약제로서 사용하는 경우, 이는, 마이봄선 상피 세포의 증식을 촉진 하기 때문에, 마이봄선 상피 세포의 손상 또는 위축에 수반되는 질환, 및 마이봄선 상피 세포의 기능 저하에 의해 초래되는 질환의 치료제로서 유용하다. 상기 질환의 예로서는 마이봄선 기능부전, 마이봄선염 등을 들 수 있다. 나아가 마이봄선 상피 세포는, 누액 중에 지질 성분을 분비하고, 이 지질은 누액의 증발을 막아, 누액층을 안정화하기 때문에, 본 발명의 치료제는 누액 중의 지질 이상 (분비 감소, 성분 변화) 에 수반되는 질환에 대해 유용하다. 상기 질환의 예로서는, 과다증발성 건성안을 들 수 있다.
나아가, 본 발명의 촉진제는 각막 상피 세포의 증식을 촉진하기 때문에, 각막 상피 세포의 손상 (즉, 창상 또는 결손) 에 수반되는 질환의 치료제로서도 또한 유용하다. 본 발명의 촉진제는, 각막 상피 장애, 구체적으로, 쇼그렌 증후군, 스티븐스-존슨 증후군, 건성 각결막염 (건성안) 등의 내인성 질환에 수반되는 각막 상피 장애; 수술후, 약물 사용, 외상, 각막 궤양, 마이봄선염, 콘택트 렌즈 착용 동안의 외인성 질환 등의 외인성 질환에 수반되는 각막 상피 장애; 춘계 결막염, 아토피성 각결막염 등의 각막 병변을 수반하는 눈 알러지성 질환에 수반되는 각막 상피 장애의 치료제로서 유용하다. 본 발명의 촉진제는 또한, 표층 점상 각막염, 각막 상피 미란의 치료에도 유용하다. 게다가, 본 발명의 촉진제는, 각막 창상 치유 촉진제로서도 또한 유용하다.
나아가, 본 발명의 촉진제는 각막 상피 세포 증식 촉진 작용과 마이봄선 상피 세포 증식 작용을 겸비하여, 각막 조직에 직접 작용하는 효과와 마이봄선 세포에 작용하여 누액의 기능을 개선하는 효과를 발휘하기 때문에, 건성안의 치료제로 유용하며, 특히, 과다증발성 건성안의 치료제로서 매우 유용하다.
본 발명의 치료제에 있어서, 상기 유효 성분의 함량은 일반적으로 0.000001 - 1 중량%, 바람직하게는 0.00001 - 1 중량%, 가장 바람직하게는 0.0001 - 0.1 중량%이다.
본 발명의 촉진제 또는 치료제의 투여 대상의 예로서는, 포유동물 (예컨대, 인간, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 고양이, 개, 소, 양, 원숭이 등) 을 들 수 있다.
본 발명의 치료제는 점안제, 첩포제, 연고제, 로션제, 크림제, 경구제 등의 투여 형태로 이용될 수 있고, 상기 언급한 유효 성분에 더하여 임의의 담체, 예를 들어 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 치료제의 투여 경로는 상기 언급한 치료 효과가 발휘되는 한 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 눈으로 국소 투여된다. 눈으로의 국소 투여의 투여 형태의 예로서는, 점안제 및 안연고제를 들 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 치료제를 점안제 또는 안연고제로 사용하는 경우, 안정화제 (예컨대, 아황산수소나트륨, 티오황산나트륨, 에데트산나트륨, 시트르산나트륨, 아스코르브산, 디부틸히드록시톨루엔 등), 가용화제 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 마크로골, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 등), 현탁화제 (예컨대, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스 등), 유화제 (예컨대, 폴리비닐피롤리돈, 대두 레시틴, 난황 레시틴, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리소르베이트 80 등), 완충액 (예컨대, 인산 완충액, 아세트산 완충액, 붕산 완충액, 탄산 완충액, 시트르산 완충액, Tris 완충액, 글루탐산, 엡실론 아미노카프로산 등), 증점제 (viscous agent) (예컨대, 메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 등의 수용성 셀룰로오스 유도체, 콘드로이틴 황산 나트륨, 히알루론산나트륨, 카르복시비닐 중합체, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐피롤리돈, 마크로골 등), 보존제 (예컨대, 염화벤즈알코늄, 염화벤즈에토늄, 글루콘산 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 벤질 알콜, 데히드로아세트산나트륨, 파라옥시벤조산의 에스테르류, 에데트산나트륨, 붕산 등), 등장화제 (예컨대, 염화나트륨, 염화칼륨, 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 붕산, 글루코오스, 프로필렌 글리콜 등), pH 조정제 (예컨대, 염산, 수산화나트륨, 인산, 아세트산 등), 청량화제 (algefacient) (예컨대, l-멘톨, d-캠퍼, d-보르네올, 박하유 등), 연고 기제 (백색 바셀린, 정제 라놀린, 유동 파라핀, 식물유 (올리브유, 동백유, 낙화생유 등) 등) 등을 첨가제로서 첨가할 수 있다. 이들 첨가제의 양은, 첨가제의 종류, 용도 등에 따라 상이하지만, 첨가제의 사용 목적을 달성할 수 있는 농도가 되도록 첨가하면 된다.
본 발명의 치료제를 점안제 또는 안연고제의 형태로 사용하는 경우, 이를 제제 분야에서 통상 이용되는 방법에 따라 제조할 수 있는데, 예를 들어, 제 14 개정 일본약전, 제제 총칙, 점안제의 항 및 눈연고제의 항에 기재된 방법에 근거하여 제조할 수 있다.
점안제의 형태의 예로서는 수성 점안제 (수성 점안액, 수성 현탁 점안액, 점성 점안액 등), 비(非)-수성 점안제 (비(非)-수성 점안액, 비(非)-수성 현탁 점안액 등), 에멀젼 점안제 등을 들 수 있다.
점안제의 pH 는 이의 형태에 따라 적절히 결정되나, 일반적으로는 4 - 8 범위 내이다. 점안제가 수성 점안액인 경우, 그 pH 는 유효 성분의 용해성의 측면에서 pH 6 - 8 로 조정되는 것이 특히 바람직하다.
점안제는 일반적으로 여과 멸균, 조사 멸균 (예컨대, 전자선 멸균, 자외선 멸균, 감마선 멸균 등), 오토클레이브 멸균, 건열 멸균 등의 방법에 의해 무균화된 제제이다.
상기 치료제를 점안제로 제형화하는 경우, 해당 액제는, 눈에 대한 적하를 용이하게 하기 위해 점안량을 제어할 수 있게 하는 소 직경의 액 적하 개구부를 구비한 점안 용기에 충전되는 것이 바람직하다. 상기 용기에 사용되는 물질은, 합성 수지, 유리, 셀룰로오스, 펄프 등이며, 유효 성분 및 기제의 성질 및 사용량에 따라 적절히 선택된다. 압착성 (squeezability) 및 내구성의 측면에서, 상기 용기는 합성 수지제인 것이 바람직하다. 합성 수지의 물질의 구체예로서는, 폴리에틸렌 수지 (예컨대, 저밀도 폴리에틸렌 또는 고밀도 폴리에틸렌), 폴리프로필렌 수지, 에틸렌-프로필렌 공중합체 수지, 폴리(에틸렌 테레프탈레이트) 수지 등을 들 수 있다.
상기 점안 용기의 예로서는 독립적으로 성형된 용기 본체에 스피곳 (spigot) 부재가 끼워져 있는 용기, 용기의 성형과 동시에 액제가 밀봉 윤전되는 일체 성형 충전 용기 (예컨대, WO2004/006826) 등을 들 수 있다. 일체 성형 충전 용기를 이용하는 경우, 용기와 액제가 연속적으로 생산되기 때문에, 비용 또는 위생 측면에서 우수하다. 점안 용기는, 1 회 사용 후 폐기되는 단위 용량형의 용기 (예컨대, JP-A-9-207959) 일 수 있다. 이 용기를 이용하는 경우, 각막에 대해 안전성이 높은, 보존제를 배합하지 않은 제제를 제형화할 수 있다. 또한, 이러한 용기는 UV 차단 필름으로 밀착 포장될 수도 있다. 나아가, 상기 용기는, UV 차단 성능을 강화하기 위해, 착색 (갈색, 녹색, 청색, 황색 등) 될 수도 있다.
본 발명은, 마이봄선 상피 세포의 증식의 촉진을 필요로 하는 대상에 본 발명의 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 마이봄선 상피 세포의 증식을 촉진하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 마이봄선 기능부전의 치료를 위해서 행해지는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은, 각막 상피 세포의 증식의 촉진을 필요로 하는 대상에 본 발명의 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 각막 상피 세포의 증식을 촉진하는 방법을 제공한다. 당해 방법은 각막 상피 장애의 치료를 위해서 행해지는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 건성안으로 고생하는 환자들에게 본 발명의 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 건성안을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 화합물의 유효량은, 투여 대상의 연령, 체중 및 상태, 치료 목적등에 따라 다양하므로 기계적으로 규정할 수는 없다. 본 발명의 촉진제 또는 치료제를 인간에 투여하는 경우에는, 예를 들어, 통상, 본 발명의 화합물을 0.000001 - 1 중량%, 바람직하게는 0.00001 - 1 중량%, 가장 바람직하게는 0.0001 - 0.1 중량%로 함유한 용액을 1 일 1 ~ 8 회, 한쪽 눈/1 회 점안에 1 ~ 2 방울, 즉, 1 회 점안당 약 50 ~ 200 μL 이다. 이러한 범위 내의 농도 및 부피를 가진 용액에 함유되는 화합물의 양을 유효량으로서 예시할 수 있다.
이하, 본 발명을 실험예를 들어 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에 의해 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다.
(실험예 1)
정상 인간 각막 상피 세포의 세포수 증가에 대한 효과
1. 사용된 세포
정상 인간 각막 상피 세포 (KURABO) 를 사용하였다.
2. 시험 물질 용액의 조제 방법
시험 물질로서, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산 (이하 화합물 A 로 칭함) 을 사용하였다. 화합물 A 를 배양 배지 중의 최종 농도의 200 배 농도가 되도록 에탄올 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 에 용해시키고, 해당 용액을 사용 직전까지 -80℃ 에서 보관하였다.
화합물 A 에 의한 세포수-증가 효과 검토를 위한 세포 배양 배지로서는 HCGS 증식 첨가제 세트 (KURABO) 에 포함된 인슐린, 하이드로코르티손 및 트랜스페린을 EpiLife (KURABO) 에 첨가하여 수득한 배양 배지 (기초 배지) 를 사용하였다.
3. 시험 방법
1) 세포 배양 및 화합물 A 의 첨가
액체 질소 중에 동결 보존된 정상 인간 각막 상피 세포를 해동하고, 그 세포수를 계수하였다. 그 전체량을, HCGS 증식 첨가제 세트 (인슐린, 마우스 유래 상피 성장 인자 mEGF, 하이드로코르티손, 트랜스페린, 소 뇌하수체 추출물) 전부가 첨가된 EpiLife (4 mL, 완전 배지) 로 옮겨, 충분히 현탁시켰다. 당해 세포 현탁액을 피브로넥틴-코팅된 24 웰 플레이트 (Becton Dickinson) 에, 세포수가 2×104 개 세포/500 μL/웰이 되도록 파종하였다(바닥 면적이 2 cm2 이었기 때문에, 1×104 개 세포/cm2).
세포 파종 완료 후, 배양 플레이트를 37℃, 5% CO2, 95% 공기 및 100% 습도로 설정된 배양기 내에서 24 시간 인큐베이션하고, 배양 배지를 400 μL 의 기초 배지 (HCGS 증식 첨가제 중에서, 인슐린, 하이드로코르티손 및 트랜스페린을 첨가한 EpiLife) 로 교환하였다.
그 후 24 시간 후, 배양 배지를 하기의 배양 배지 (각 400 μL) 로 교환하였다.
[1] 기초 배지 단독 (무(無)첨가군)
[2] 기초 배지 + mEGF (최종 농도: 1 ng/mL; 양성 대조군)
[3] 기초 배지 + 화합물 A (최종 농도: 0.1 nM, 1 nM, 0.01 μM, 0.1 μM; 화합물 A 첨가군)
모든 배양 배지의 에탄올 농도를 0.5% 로 균일하게 맞추기 위해, 배양 배지 [1] 및 [2] 각각의 1 mL 에 대해 에탄올 (5 μL) 을 첨가하였다.
2) 세포수 측정
화합물 A 에 의한 자극 개시로부터 24 시간 후, 각 웰의 배양 상청액을 제거 하고, 각 웰에 10% Cell Counting Kit-8 (DOJINDO) 이 첨가된 기초 배지를 200 μL씩 분주하였다. 분주 후, 배양 플레이트를 37℃, 5% CO2, 95% 공기 및 100% 습도로 설정된 배양기 내로 옮겨 2 시간 인큐베이션하였다. 상청액 (100 μL) 을 96 웰 조직 배양용 배양 플레이트 (Corning) 로 옮기고, 각 웰의 450 nm 에서의 흡광도를 마이크로플레이트 판독기 (Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd.) 를 이용하여 측정하고, 이를 세포수 증가의 지표로 사용하였다.
4. 통계학적 분석
무첨가군의 평균 흡광도를 100% 로 하여, 양성 대조군 및 화합물 A 첨가군의 값을 산출하고, Dunnett 다중 비교 검정법 (단측) 에 따라 무첨가군을 화합물 A 첨가군 및 양성 대조군과 비교하였다. 검정의 결과로서 5% 미만의 임계치를 유의한 것으로 판정하였다.
5. 시험 결과
각 군의 세포수 증가 효과를 표 1 에 나타내었다. 측정한 흡광도로부터, 무첨가군의 세포수를 100%로 한 경우, 양성 대조군 및 화합물 A 첨가군의 세포수는 무첨가군의 세포수보다 유의하게 더 높은 것을 알 수 있는데, 이들 군에서는 세포수가 증가하고 있음이 시사된다(p<0.01). 당해 시험 결과로부터, 화합물 A 는 정상 인간 각막 상피 세포의 세포수를 증가시키는 것이 분명해졌다.
군 세포수 증가율 (%) 유의차 (무첨가군과 비교)
무첨가군 100.0±7.7
mEGF 147.5±47.2 **
10-10 M 화합물 A 177.4±20.8 **
10-9 M 화합물 A 169.0±8.2 **
10-8 M 화합물 A 187.4±10.2 **
10-7 M 화합물 A 172.6±16.0 **
배양된 정상 인간 각막 상피 세포에 화합물 A 를 첨가한 경우의 세포수의 변화가, 무첨가군의 평균치를 100% 로 한 경우의 값으로 해서 나타나 있다(평균±표준 편차, N=3-4). 표 중의 ** 는 무첨가군에 대한 유의차 (p<0.01) 를 나타낸다.
(실험예 2)
각막 상피 창상 치유 촉진 작용에 대한 연구
1. 사용 동물
수컷 일본 백색종 토끼 (KITAYAMA LABES Co., Ltd.) 를 사용하였다. 실험 동물은 동물을 사용하는 생물의학 연구에 대한 국제 원칙 (International Guiding Principles for Biomedical Research involving Animals) 에 따라 사용하였다.
2. 시험 물질 점안액의 조제 방법
시험 물질로서 화합물 A 를 사용하였다. 화합물 A 를 하기 비히클에 0.0005% 로 용해하거나 또는 하기 비히클에 0.005% 로 현탁시키고, 이를 점안액으로 사용하였다.
인산이수소나트륨 2수화물 0.05 g
염화나트륨 0.45 g
초순수 적당량
폴리소르베이트 80 0.05 mL
수산화나트륨 적당량
전체량 50 mL (pH 7.0)
화합물 A 투여군에 대한 대조로서, 약제를 포함하지 않은 상기 언급한 비히클 점안군을 이용하였다.
3. 실험 방법
1) 각막 상피 찰과 (scraping)
동물에, Selactal (2% 자일라진; Bayer, Ltd.): Ketalar (5% 케타민; DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED)=1:1 혼합물을 근육내 주사 (1 mL/kg) 하여 전신 마취시키고, 염산 옥시부프로카인 점안액 (Benoxil 점안액 0.4%; Santen Pharmaceutical CO., Ltd.) 을 투여한 후, 안구를 탈구시켰다. 직경 10 mm 의 원형절제기 (trephine) 를 이용하여, 각막 중앙부의 각막 상피 위에 각인 (직경 10 mm) 을 새기고, 입체현미경 하에서, 핸디 라우터를 이용하여 각인된 원 내의 전체 각막 상피 층을 찰과하였다. 찰과 후, 생리 식염수 (OTSUKA PHARMACEUTICAL FACTORY, INC.) 로 각막 표면을 세정하고, 안구를 안와로 다시 위치시켜 각막 상피 찰과 처리를 완료하였다.
2) 투여
각막 상피 찰과 당일은 1 일 2 회, 다음날부터 시험 완료시까지는 1 일 4 회로, 상기 처치한 눈에 대해, 화합물 A 점안액 또는 점안액 비히클을 각 회당 50 μL 씩, 마이크로피펫을 이용하여 점안하였다.
3) 평가
모든 동물의 각막 상피 찰과가 완료된 시점을 시험 시작 시간 (0 hr) 으로 하여, 40, 48, 56 및 64 hr 후의 각막 상피 결손 면적을 정량하고, 이를 기초로 각막 상피의 창상 치유를 평가하였다. 정확히 말해, 각 시점에서 상기 처치한 눈에 0.1% 플루오레세인 나트륨 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 용액 (10 μL) 을 점안하고, 즉시 블루 필터 (blue filter) 가 장착된 슬릿 램프 (slit lamp) 를 이용하여 동물의 전안부 사진을 촬영함으로써, 플루오레세인-염색 된 각막 상피 결손 영역을 기록하였다. 현상된 사진을 컴퓨터에 디지털 화상으로서 저장하고, 화상 분석 소프트웨어 (Image-Pro Plus) 를 이용하여 플루오레세인-염색된 각막 상피 결손부의 면적을 측정하였다.
4. 통계학적 분석
각 시점에서 측정된 플루오레세인-염색된 각막 상피 결손부의 면적을, 각 동물의 초기 값을 100%로 하여 산출하고, 이를 잔존 각막 상피 결손의 비율로 하였다. 각 시점에서의 잔존 각막 상피 결손의 비율에 대해, t-검정을 이용하여 비히클 점안군과 화합물 A 점안군과의 비교를 행하였다. 검정의 결과로서 5% 미만의 임계치를 유의미한 것으로 판정하였다.
5. 시험 결과
상기 측정의 각 시점에서 비히클 점안군, 및 0.0005% 및 0.005% 화합물 A 점안군의 잔존 각막 상피 결손의 비율을 표 2 에 나타내었다. 각막 상피 찰과 후 40 시간 후에 0.005% 화합물 A 점안군에서 각막 상피 결손의 비율이 유의하게 감소한 것으로 나타나 있다. 상기 비율은 48 시간 후 0.0005% 및 0.005% 화합물 A 점안군에서 유의하게 감소하였다. 이 시험 결과로부터, 화합물 A 를 점안함으로써, 각막 상피 결손의 창상 치유가 촉진되는 것이 분명해졌다.
군 비히클 점안군 (%) 0.0005% 화합물 A 점안군 (%) 0.005% 화합물 A 점안군 (%)
0 hr (초기 값) 100.0±0.0 100.0±0.0 100.0±0.0
40 hr 후 28.1±5.3 24.8±2.7 18.6±8.0*
48 hr 후 18.1±6.1 11.8±2.9* 9.1±6.4*
56 hr 후 11.1±8.1 3.8±2.8 3.4±3.7
64 hr 후 5.1±6.9 0.8±1.4 0.9±1.3
토끼 눈에 대한 각막 상피 찰과 처치 후, 잔존 각막 상피 결손의 비율 (%) 을, 각 동물에 대해, 초기 값을 100% 로 하여 산출하였다(평균±표준 편차, N=6). 표 중의 * 은 비히클 점안군에 대한 유의차 (p<0.05) 를 나타낸다.
(실험예 3)
마이봄선 상피 세포의 세포수 증가에 대한 효과
1. 원숭이 마이봄선 상피 세포의 조제
적출하여 D-PBS 중에 보관한 원숭이 눈꺼풀을 무균 실험대 (clean bench) 로 옮겨, 하기와 같이 무균적으로 세포 조제를 실시하였다.
적출한 눈꺼풀을 80% 에탄올 중에 30 초간 침지시킨 후, 1% 의 페니실린-스트렙토마이신 (Invitrogen) 이 첨가된 D-PBS 로 3 회 세정하고, 최소 필수 배지 (MEM; Invitrogen) 로 옮겼다. 입체현미경 하에서 눈꺼풀의 마이봄선 조직을 둘러싸는 지방조직 및 근조직을 제거하였다. 이들을, 0.3 U/mL 콜라게나제 A (Roche Diagnostics) 및 2.4 U/mL 디스파제 (dispase) II (Roche Diagnostics) 를 함유한 MEM 으로 옮겨 37 ℃ 에서 4 시간 및 4 ℃ 에서 하룻밤 진탕하였다. 상기 효소-처리된 조직을 입체현미경 하에 두고, 속눈썹 및 눈꺼풀 결합 조직을 제거하여 마이봄선 조직을 단리하였다. 단리한 선 조직에 트립신-EDTA (4 mL, Invitrogen) 를 첨가하고, 혼합물을 37 ℃ 에서 10 분간 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 여기에 10% FBS (Invitrogen) 를 함유한 MEM (5 mL) 을 첨가하여 효소 반응을 정지시키고, 21G 주사 바늘이 구비된 주사 시린지를 이용하여 상기 혼합물의 흡인 배출을 5 회 반복하여 조직 구성 세포를 분산시켰다. 세포 분산액을, 100 μm 및 40 μm 의 나일론 필터 (Cel1 Strainer; Falcon) 에 통과시키고, 이에 포함된, 효소 처리 불가한 세포 덩어리 등을 제거하였다. 상기 필터를 통과시킨 세포 현탁액을 원심분리관 (50 mL) 에 수집하고, 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하였다. 원심분리에 의해 수득한, 목적 세포를 포함한 세포층에, 0.5% 소 혈청 알부민 (BSA; Sigma-Aldrich) 을 포함한 D-PBS 80 μL 을 첨가하고, 세포를 충분히 현탁시켰다. 여기에, Anti-Fibroblast Microbeads (Militenyi Biotec, 20 μL) 를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30 분간 정치시켰다. 항체와의 반응 완료 후, 거기에 0.5% BSA 를 포함한 D-PBS 2 mL 를 첨가하고, 혼합물을 다시 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하였다. 원심분리에 의해 수득한, 목적 세포를 포함한 세포층에, 0.5% BSA를 포함한 D-PBS 1 mL 를 첨가하고, 세포를 충분히 현탁시켰다. 상기 현탁액을, 컬럼 세정 용액 (2 mM EDTA (DOJINDO LABORATORIES) 및 0.5% BSA 를 포함한 D-PBS) 을 이용하여 미리 평형화한 LD 컬럼 (Militenyi Biotec) 에 적가하였다. 그런 다음, 2 mL 의 컬럼 세정 용액을 LD 컬럼에 적가하였다. 세포 현탁액 적가 직후부터 컬럼 세정 용액 적가 완료까지의 기간 동안에, 컬럼에 흡착하지 않은 항체-비표지 목적 세포 (비-섬유아세포) 를 50 mL 원심분리관에 회수하였다. 원심분리관에 회수한 세포를, 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하고, 상청액을 제거하였다. 침강물을, 케라티노사이트 무혈청 제한 배지 (Defined Keratinocyte Serum Free Medium; 5 mL) 에 현탁시키고, 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하고, 상청액을 제거하였다. 다시, 잔류물을 DK-SFM (3 mL) 에 현탁시키고, 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하고, 상청액을 제거하였다. 상기 세포를 DK-SFM (2 mL) 에 현탁시키고, 콜라겐 처리된 6 웰 세포 배양용 멀티-웰 플레이트에 파종하였다. 파종된 세포는, 케라티노사이트 무혈청 제한 배지 (DK-SFM; Invitrogen, 첨부된 보충물을 조제 프로토콜에 지시된 바와 같이 첨가함) 중에서 배양하고, 37 ℃, 5% C02, 95% 공기, 100% 습도로 설정된 배양기 (SANYO) 내에서 배양하고, 배양 배지는 세포가 합류 전 상태 (subconfluent) 에 이를 때까지 48 시간마다 새로운 것으로 교환하였다.
2. 시험 물질 용액의 조제 방법
시험 물질로서, 화합물 A, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 (이하 화합물 B 로 칭함) 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 (이하 화합물 C 로 칭함) 을 사용하였다. 상기 시험 물질을 배양 배지 중의 최종 농도의 200 배 농도가 되도록 에탄올 (Nacalai Tesque) 에 용해시키고, 당해 용액을 사용 직전까지 -80℃ 에서 보관하였다.
시험 물질에 의한 세포 증식 촉진 효과의 검토를 위해, DK-SFM 으로부터 이에 첨부된 보충물을 제거하여 수득한 배양 배지를 기초 배지 (기초 DK-SFM) 로서 사용하였다. 세포 증식 촉진 효과 확인을 위한 양성 대조로서, 상기 기초 배지에 상기 첨부 보충물을 첨가하여 수득한 배양 배지 (완전 DK-SFM) 를 사용하였다.
3. 시험 방법
1) 배양 플레이트의 콜라겐 처리
배양 플레이트 사용 전날에, 배양 플레이트의 각 웰에 0.01% I형 콜라겐 (Nitta Gelatin Inc.) 을 50 μL 씩 분주하고, 시험 직전까지 4℃ 에서 웰이 코팅되도록 하였다. 시험 당일에, I형 콜라겐 용액을 제거한 후, D-PBS 를 이용하여 배양 플레이트 바닥을 3 회 세정하고, 이를 당해 시험에서 콜라겐-처리 배양 플레이트로서 사용하였다.
2) 세포 배양 및 시험 물질의 첨가
시험에는, 배양 플레이트 (직경 3.5 cm) 에서 합류 전 상태가 되도록 배양하여, 액체 질소 중에 동결 보존한 원숭이 마이봄선 상피 세포를 사용하였다. Cellbanker (Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd.) 에 현탁하여 동결 보존해 둔 세포를 해동한 후, 50 mL 원심분리관으로 옮기고, 10 배량의 완전 DK-SFM 을 첨가하였다. 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하여 세포층을 회수하였다. 수득한 세포 농도가 3×106 세포/mL 가 되도록 적당량의 완전 DK-SFM 을 첨가하였다. 세포 현탁액을, 콜라겐 처리한 96-웰 조직 배양용 배양 플레이트의 바닥 면적 (0.32 cm2) 당 6×104 개 세포/cm2 가 되도록, 각 웰에 64 μL 씩 분주하였다. 세포 파종 완료 후, 배양 플레이트를 37℃, 5% CO2, 95% 공기 및 100% 습도로 설정된 배양기로 옮겨, 24 시간 배양하였다. 배양 배지를 기초 DK-SFM (100 μL) 으로 교환하고, 추가로 24 시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 배양 플레이트의 각 웰의 배양 배지를 각 100 μL 의 하기 배양 배지로 교환하고, 그 배양 플레이트를 배양기에 다시 위치시켜, 세포 자극을 개시하였다.
[1] 기초 배지 단독 (기초 DK-SFM, 무첨가군)
[2] 기초 배지 + 보충물 (완전 DK-SFM, 양성 대조군)
[3] 기초 배지 + 화합물 A (최종 농도: 0.01 μM, 0.1 μM 및 1 μM; 화합물 A 첨가군)
[4] 기초 배지 + 화합물 B (최종 농도: 0.01 μM, 0.1 μM 및 1 μM; 화합물 B 첨가군)
[5] 기초 배지 + 화합물 C (최종 농도: 0.01 μM, 0.1 μM 및 1 μM; 화합물 C 첨가군)
모든 배양 배지의 에탄올 농도를 0.5% 로 균일하게 맞추기 위해 배양 배지 [1] 및 [2] 각각 1 mL 에 대해 에탄올 (5 μL) 을 첨가하였다.
2) 세포수 측정
최초의 세포 자극 48 시간 후, 배양 배지를 새롭게 조제한 상기 언급한 [1] - [5] 의 배양 배지로 교환하였다. 48 시간 후, 다시 배양 배지를 새롭게 조제한 상기 언급한 [1] - [5] 의 배양 배지로 교환하였다. 48 시간 후, 각 웰의 배양 상청액을 제거하고, 각 웰에 10% Cell Counting Kit-8 (DOJINDO) 이 첨가된 기초 배지를 100 μL 씩 분주하였다. 분주 후, 배양 플레이트를 37℃, 5% CO2, 95% 공기 및 100% 습도로 설정된 배양기로 옮겨, 2 시간 동안 인큐베이션하였다. 2 시간 인큐베이션 후, 450 nm 에서의 흡광도를 마이크로플레이트 판독기 (Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd.) 로 측정하고, 이를 세포수 증가의 지표로 사용하였다.
4. 통계학적 분석
무첨가군의 평균 흡광도를 100% 로 하여, 양성 대조군 및 시험 물질 첨가군 각각의 값을 산출하고, Dunnett 다중 비교 검정법 (단측) 을 이용하여, 무첨가군을 시험 물질 첨가군 및 양성 대조군과 비교하였다. 검정의 결과로서 5% 미만의 임계치를 유의한 것으로 판정하였다.
5. 시험 결과
각 군의 세포수증가 촉진 효과를 표 3 에 나타내었다. 측정한 흡광도로부터, 무첨가군의 세포수를 100% 로 한 경우, 각 시험 물질 첨가군에서의 세포수 증가가 무첨가군에서보다 유의하게 더 높은 것을 알 수 있는데, 세포수가 증가하고 있다는 것이 시사된다. 세포수 증가 촉진 효과의 확인을 위한 양성 대조군에서는, 유의미하지 않지만, 세포수 증가 경향이 관찰되었다. 이 시험 결과로부터, 각 시험 물질은 원숭이 마이봄선 상피 세포의 수를 증가시키는 것이 분명해졌다.
군 세포수 증가율 (%) 유의차 (무첨가군과 비교)
무첨가군 100.0±7.1
보충물 114.2±6.7
10-8 M 화합물 A 175.3±9.0 **
10-7 M 화합물 A 177.1±9.7 **
10-6 M 화합물 A 189.8±13.1 **
10-8 M 화합물 B 155.0±28.0 **
10-7 M 화합물 B 174.4±8.9 **
10-6 M 화합물 B 158.8±15.2 **
10-8 M 화합물 C 155.0±11.6 **
10-7 M 화합물 C 175.2±7.8 **
10-6 M 화합물 C 179.4±7.5 **
배양된 원숭이 마이봄선 상피 세포에 각 시험 물질 또는 보충물 (양성 대조) 을 첨가했을 때의 세포수의 변화를, 무첨가군의 평균치를 100% 로 한 경우의 값으로 나타내었다(평균±표준 편차, N=5 또는 10). 표 중의 ** 은 무첨가군에 대한 유의차 (p<0.01) 를 나타낸다.
(실험예 4)
정상 인간 각막 상피 세포의 세포수 증가에 대한 효과
1. 사용 세포
정상 인간 각막 상피 세포 (KURABO) 를 사용하였다.
2. 시험 물질 및 조제 방법
시험 물질로서, 화합물 B 또는 화합물 C 를 사용하였다. 화합물 B 및 화합물 C 를 각각 배양 배지 중에서의 최종 농도의 200 배 농도가 되도록 에탄올 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 에 용해시키고, 사용 직전까지 -80℃ 에서 보관하였다.
화합물 B 및 화합물 C 에 의한 세포수 증가 효과 검토를 위한 세포 배양 배지로서는, EpiLife (KURABO) 에, HCGS 증식 첨가제 세트 (KURABO) 에 포함된 인슐린, 하이드로코르티손 및 트랜스페린을 첨가하여 수득한 배양 배지 (기초 배지) 를 사용하였다.
3. 시험 방법
1) 세포 배양 및 시험 물질 첨가
액체 질소 중에 동결 보존한 정상 인간 각막 상피 세포를 해동하고, 세포수를 계수하였다. 그 전체량을, HCGS 증식 첨가제 세트 (인슐린, 마우스 유래 상피 성장 인자 mEGF, 하이드로코르티손, 트랜스페린, 소 뇌하수체 추출물) 전부가 첨가된 EpiLife (4 mL, 완전 배지) 로 옮기고, 충분히 현탁하였다. 이 세포 현탁액을 피브로넥틴-코팅된 24 웰 플레이트 (Becton Dickinson) 에, 2×104 개 세포/500 μL/웰의 세포수로 파종하였다(바닥 면적이 2 cm2 이었기 때문에, 1×104 개 세포/cm2). 세포 파종 완료 후, 배양 플레이트를 37 ℃, 5% C02, 95% 공기 및 100% 습도로 설정된 배양기 내에서 24 시간 동안 인큐베이션하고, 배양 배지를 400 μL 의 기초 배지 (HCGS 증식 첨가제 중, 인슐린, 하이드로코르티손 및 트랜스페린을 첨가한 EpiLife) 로 교환하였다. 그 후 24 시간 후에, 배양 배지를 하기의 배양 배지 (각 400 μL) 로 교환하였다.
[1] 기초 배지 단독 (무첨가군)
[2] 기초 배지 + mEGF (최종 농도: 1 ng/mL; 양성 대조군)
[3] 기초 배지 + 화합물 B (최종 농도: 0.01 μM, 0.1 μM, 1 μM; 화합물 B 첨가군)
[4] 기초 배지 + 화합물 C (최종 농도: 0.01 μM, 0.1 μM, 1 μM; 화합물 C 첨가군)
모든 배양 배지의 에탄올 농도를 0.5% 로 균일하게 맞추기 위해 배양 배지 [1] 및 [2] 각각 1 mL 에 대해 에탄올 (5 μL) 을 첨가하였다.
2) 세포수 측정
화합물 B 또는 화합물 C 에 의한 자극 개시로부터 24 시간 후, 각 웰의 배양 상청액을 제거하고, 각 웰에 10% Cell Counting Kit-8 (DOJINDO) 이 첨가된 기초 배지를 200 μL 씩 분주하였다. 분주 후, 배양 플레이트를 37℃, 5% CO2, 95% 공기 및 100% 습도로 설정된 배양기로 옮겨 2 시간 동안 인큐베이션하였다. 상청액 (100 μL) 을 96 웰 조직 배양용 배양 플레이트 (Corning) 로 옮긴 후, 각 웰의 450 nm 에서의 흡광도를 마이크로플레이트 판독기 (Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd.) 로 측정하고, 이를 세포수 증가의 지표로 사용하였다.
4. 통계학적 분석
무첨가군의 평균 흡광도를 100% 로 하여, 양성 대조군 및 화합물 B 또는 화합물 C 첨가군의 값을 산출하고, Dunnett 다중 비교 검정법 (단측) 에 따라, 무첨가군을 화합물 B 또는 화합물 C 첨가군 및 양성 대조군과 비교하였다. 검정의 결과로서 5% 미만의 임계치를 유의한 것으로 판정하였다.
5. 시험 결과
각 군의 세포수 증가 효과를 표 4 에 나타내었다. 측정한 흡광도로부터, 무첨가군의 세포수 증가를 100% 로 한 경우, 양성 대조군, 화합물 B 첨가군, 및 화합물 C 첨가군의 세포수가 무첨가군의 세포수보다 유의하게 더 높은 것을 알 수 있는데, 이들 군에서 세포수가 증가하고 있다는 것이 시사된다(p<0.01). 이 시험 결과로부터, 화합물 B 와 화합물 C 모두 정상 인간 각막 상피 세포의 세포수를 증가시키는 것이 분명해졌다.
군 세포수 증가율 (%) 유의차 (무첨가군과 비교)
무첨가군 100.0±32.2
mEGF 232.8±22.5 **
10-8 M 화합물 B 252.4±34.7 **
10-7 M 화합물 B 256.4±11.0 **
10-6 M 화합물 B 254.3±11.7 **
10-8 M 화합물 C 243.3±6.6 **
10-7 M 화합물 C 247.5±14.1 **
10-6 M 화합물 C 260.2±2.5 **
배양된 정상 인간 각막 상피 세포에 화합물 B 또는 화합물 C 를 첨가했을 때의 세포수의 변화를, 무첨가군의 평균치를 100% 로 한 경우에 대한 값으로 나타내었다(평균±표준 편차, N=4). 표 중의 ** 은 무첨가군에 대한 유의차 (p<0.01) 를 나타낸다.
(실험예 5)
각막 상피 세포 및 마이봄선 상피 세포에서의 PPARs 의 발현
1. 사용 세포
원숭이 마이봄선 상피 세포는, (실험예 3)과 동일한 방법으로 조제 및 배양한 것을 사용하였다. 인간 각막 상피 세포 (KURABO) 는, 정상 인간 각막 상피 세포 증식용 무혈청 기초 배지 (EpiLife; KURABO) 중에서 37℃, 5% CO2, 95% 공기 및 100% 습도로 설정한 배양기 내에서 배양한 것을 사용하였다. 토끼 각막 상피 세포는, 이하의 방법으로 조제 및 배양한 것을 사용하였다.
안락사시킨 토끼로부터 적출한 안구로부터 각막을 잘라내어, 둘베코 인산 완충 식염수 (D-PBS; Invitrogen) 중에 보관하고, 이를 무균 실험대로 옮겼다. 하기의 세포 조제 조작은 모두 무균적으로 행하였다.
적출한 각막 편을 1% 페니실린-스트렙토마이신 (Invitrogen) 이 첨가된 D-PBS 중에서 3 회 세정하고, 최소 필수 배지 (MEM; Invitrogen) 로 옮겼다. MEM 중에 침지시킨 각막 편의 각막 내피 세포 및 데스메막을 안과 수술용 나이프 (Alcon) 로 박리하고, 박리한 각막 편 (각막 실질 및 각막 상피) 을 2.4 U/mL 의 디스파제 II (Roche Diagnostics) 가 첨가된 MEM 으로 옮겼다. 이를 37 ℃에서 1 시간 동안 인큐베이션하고, 디스파제 II 로 처리한 각막 편을 MEM 으로 옮겼다. MEM 중에 침지시킨 각막 편의 각막 상피를 안과용 수술 나이프로 박리하고, 각막 편 잔류물 (각막 실질) 을 MEM 으로부터 제거하였다. 박리한 각막 상피 세포가 함유된 MEM 을 50 mL 원심분리관에 회수하고, 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하고, 상청액을 폐기하여, 각막 상피 세포층을 수득하였다. 각막 상피 세포층에 1 mL 의 트립신-EDTA (Invitrogen) 를 첨가하고, 혼합물을 잘 혼합한 후, 37 ℃ 에서 5 분간 인큐베이션하여 세포-세포 부착을 제거하였다. 여기에 10% 소 태아 혈청 (FBS; Invitrogen) 을 함유한 MEM 9 mL 를 첨가하여 효소 반응을 정지시키고, 혼합물을 다시, 실온에서, 1,500 rpm 으로 5 분간 원심분리하여 각막 상피 세포층을 수득하였다. 수득한 각막 상피 세포층에 1 mL 의 정상 토끼 각막 상피 세포 증식용 무혈청 액체 배지 (RCGM2; KURABO) 를 첨가하여 세포를 현탁시키고, 상기 세포를 9 mL 의 RCGM2 가 첨가된 세포 배양 플레이트 (직경 10 cm, IWAKI) 에 파종하였다. 파종 세포를 37 ℃, 5% C02, 95% 공기, 100% 습도로 설정된 배양기 (SANYO) 내에서 배양하였다. 배양 배지는 시험 당일까지 48 시간마다 새로운 것으로 교환하였다.
2. 시험 방법
1) 세포로부터의 총 RNA 의 추출
TRIzol Reagent (Invitrogen) 에 대한 통상적인 방법에 따라 각 세포로부터 총 RNA 를 추출하였다.
2) 추출된 총 RNA 로부터의 cDNA 의 제조
추출한 총 RNA 를 DNA-free (Ambion) 에 대한 통상적인 방법에 따라 37℃ 에서 30 분간 DNA 분해효소로 처리하여 게놈 DNA 를 제거하였다.
Superscript II 역전사효소 (Invitrogen) 에 대한 통상적인 방법에 따라 상기 추출한 총 RNA 로부터 cDNA 를 제조하였다. 즉, DNA 분해효소로 처리한 1 μg 의 총 RNA 로부터, 랜덤 프라이머 (random primer; Invitrogen) 를 이용해 상기 총 RNA 에 상보적인 cDNA 를 제조하였다.
3) PPARs 유전자의 증폭 (중합효소 연쇄 반응; PCR)
PPARs 유전자의 PCR 은 Platinum PCR SuperMix (Invitrogen) 에 대한 통상적인 방법에 따라 실시하였다. PPARs 프라이머는, 인간, 침팬지, 게잡이 원숭이 (Macaca fascicularis), 소, 마우스 등의 공지의 서열을 참조하여, PCR 산물이 약 200 bps 가 되도록 설계하였다.
Figure 112009077793309-PCT00004
상기 PCR 반응은, 94℃ 에서 2 분 15 초간 반응시킨 후, 94℃ 에서 30 초간, 55℃ 에서 30 초간 및 72℃ 에서 30 초간의 3 단계의 반응을 35회 반복하여 완료하였다. PCR 반응 후의 시료를 2% 아가로오스 겔 상에서 전기영동하고, 겔 내로 분리된 DNA 를 SYBR Gold (Molecular Probes) 를 이용하여 염색하였다. UV 투과조명기 (transilluminator) 상에서 발광시킨 상기 염색된 DNA 의 화상을 디지털 데이터로 저장하였다.
3. 시험 결과
전기 영동 후의 상기 DNA 의 밴드를 도 1 에 나타내었다. 본 시험의 결과로서, 인간 각막 상피 세포 및 원숭이 마이봄선 상피 세포에서는 PPARα, PPARδ 및 PPARγ 모두가 발현된 것이 확인되었다. 토끼 각막 상피 세포에서는 PPARδ 의 발현만이 확인되었다. Bonazzi 등은 토끼 각막 상피 세포에서는 PPARs 중 PPARα 및 PPARβ(=δ) 가 발현된다고 보고한다(Bonazzi A. 등, J. Biol. Chem. (2000); 275 (4): 2837-2844). 상기 보고에서, 그들은 특수한 방법을 이용해 PPARα 를 검출하였는데, 이는, 토끼 각막 상피 세포에서의 PPARα 발현 수준이 매우 적은 것을 시사한다.
본 발명에 따르면, 신규의 마이봄선 상피 세포 증식 촉진제 또는 각막 상피 세포 증식 촉진제가 제공되며, 상기 촉진제는, 마이봄선 상피 세포 또는 각막 상피 세포의 증식을 촉진한다. 또한, 본 발명의 치료제는, 마이봄선 기능부전, 각막 상피 장애, 건성안 등의 질환의 치료 또는 개선에 유효하게 사용될 수 있다.
본 출원은 일본에서 출원된 특허 출원 제 2007-134183 호 (출원일: 2007년 5월 21일) 를 기초로 하며, 이의 내용은 모두 본원에 참조로 포함된다.
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Claims (18)

  1. [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 마이봄선 상피 세포의 증식 촉진제.
  2. [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 각막 상피 세포의 증식 촉진제.
  3. [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 마이봄선 기능부전의 치료제.
  4. [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 각막 상피 장애의 치료제.
  5. [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는, 건성안의 치료제.
  6. 제 5 항에 있어서, 건성안이 과다증발성 건성안인 치료제.
  7. 마이봄선 상피 세포의 증식 촉진제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허 용되는 염의 용도.
  8. 각막 상피 세포의 증식 촉진제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
  9. 마이봄선 기능부전의 치료제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
  10. 각막 상피 장애의 치료제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸 릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
  11. 건성안의 치료제를 제조하기 위한, [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 용도.
  12. 제 11 항에 있어서, 건성안이 과다증발성 건성안인 용도.
  13. 마이봄선 상피 세포의 증식의 촉진을 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 마이봄선 상피 세포의 증식을 촉진하는 방법.
  14. 각막 상피 세포의 증식의 촉진을 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필- 2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 각막 상피 세포의 증식을 촉진하는 방법.
  15. 마이봄선 기능부전의 치료를 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 마이봄선 기능부전을 치료하는 방법.
  16. 각막 상피 장애의 치료를 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 각막 상피 장애를 치료하는 방법.
  17. 건성안의 치료를 필요로 하는 대상에 [3-[2-[4-이소프로필-2-(4-트리플루오로메틸)페닐-5-티아졸릴]에틸]-5-메틸-1,2-벤즈이속사졸-6-일]옥시아세트산, [4-[3-[2-(4-트리플루오로메틸)페닐-4-이소프로필-5-티아졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산 또는 [4-[3-[2-(2-히드록시-4-클로로페닐)-5-이소프로필-4-옥사졸릴]프로피오닐]-2-메틸페녹시]아세트산, 또는 이들의 약리학적으로 허용되는 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 건성안을 치료하는 방법.
  18. 제 17 항에 있어서, 건성안이 과다증발성 건성안인 방법.
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