KR20100033669A

KR20100033669A - 대나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증의 치료 및예방용 조성물

Info

Publication number: KR20100033669A
Application number: KR1020080092644A
Authority: KR
Inventors: 병 숙 채
Original assignee: 박 현 수
Priority date: 2008-09-22
Filing date: 2008-09-22
Publication date: 2010-03-31
Also published as: KR101058805B1

Abstract

본 발명은 대나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 루푸스양 자가면역성(lupus-like autoimmunity) 증후군 및 IL-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따르면, 본 발명의 루푸스양 증후군의 치료 및 예방용 조성물이 루푸스 양성 증후군에서 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 및 프로스타글란딘(PGE2)의 생성을 억제하고, T 보조세포(Th cell) 활성(activation), T-B 세포 공동활성(costimulation) 및 T 보조세포(Th cell) 아팝토시스(apoptosis) 등 T 세포와 B 세포간의 비정상적인 상호작용을 정상적으로 회복시키며, B 세포 과민 반응(hyperactivity)에 대한 조절효과를 지니고, 혈관염(vasculitis)을 개선시키며, 루푸스양 증후군 발현을 지연시키며, 장기 손상으로부터 보호 작용을 수행함으로써 루푸스양 자가면역성 증후군 예방 및 치료에 사용할 수 있다.

또한 본 발명의 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물이 만성염증질환의 치료에 있어서 표적이 되는 혈중 인터루킨-6(circulating IL-6) 및 인터루킨-6 신호전달을 차단하는 효과를 지님을 밝혀 IL-6 관련 만성염증 치료 및 예방에 사용할 수 있다.

죽력 추출물, 루푸스, 자가면역성, 만성염증, 염증 유도 사이토카인, 프로스타글란딘, T 세포 활성, B 세포 활성

Description

대나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증의 치료 및 예방용 조성물{Composition for treating or preventing lupus-like autoimmunity and chronic inflammatory pathogenesis comprising Jukryeok extract}

본 발명은 루푸스양 자가면역성 증후군 및 IL-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 대나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 루푸스양 자가면역성 증후군 및 IL-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다.

루푸스는 면역조절능력 이상에 의해 생성된 자가 항체가 신체 여러 조직이나 기관에 만성염증을 유발하여 손상을 유발하는 희귀난치성 자가 면역 질환이다. 루푸스는 신장, 폐, 피부, 관절, 중추신경계 등 공격하지 않는 곳이 없으며 천의 얼굴을 가진 병이라 일컬어질 정도로 다양한 증상을 보인다. 관절염, 늑막염, 폐렴, 위장관염, 간염, 빈혈, 백혈구혈소판 감소증, 및 신장염 같은 병리적 증상을 보일 수 있을 뿐만 아니라 가벼운 건망증부터 심한 정신병, 척추신경 마비, 중풍 같은 증상도 올 수 있다. 또한 루푸스 질환은 당뇨병, 동맥경화, 고혈압, 정신신경계 질환 등 만성질환의 발병과 유관함이 밝혀지고 있다. 특히 루푸스 진단기술의 향상으로 인해 5년형과 10년형 환자가 각각 96%와 85%정도 높은 생존율에도 불구하고 아직도 일반인에 비해 3 ~ 5배 증가된 높은 사망률을 보인다. 생존율은 루푸스 환자 70%가 10년 이상 생존하지만 신장이나 중추신경계까지 손상을 일으키는 경우는 심한 고통으로 사망하게 된다. 루푸스환자의 30 ~ 70%는 신경 정신적 장애를 나타내며, 60% 이상에서는 인식능력 감퇴와 우울증을 나타낸다고 보고 되었다.

루푸스에 대한 근본적인 치료제는 없으며, 다만 스테로이드성 및 비스테로이드성 소염제, 항말라이아제, 각종 면역억제제 등 부작용이 높은 치료제에 의존하고 있고, 최근에는 B 세포를 겨냥하여 면역세포로 직접 치료하거나, 항-사이토카인(anti-cytokine) 치료법(anti-TNF-α, anti-IL-1, anti-IL-6, anti-IL-15)이 연구되고 있지만, 부작용 등이 심각하다. 이렇듯 루푸스 치료를 위해서는 면역억제 및 항염증효과를 충족시키는 약물의 개발이 시도되어 왔으나, 부작용이 적으면서 효과적인 식물성 치료제 개발에 대한 관심은 매우 미흡한 실정이다.

루푸스는 T 세포 의존성 B 세포 과다활동(hyperactivity)에 의한 자가 항체 생산과 자가 면역성 전신성 염증반응으로 인한 신장, 피부, 뇌, 폐, 심장 등 장기의 손상의 특징을 보여주는 면역조절능력 상실에 의해 유발되는 자가 면역 질환이다.

루푸스는 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 과생산, T 세 포와 B 세포 간의 상호작용 조절작용 상실로 인한 T 세포 내성(cell tolerance)의 상실 및 B 세포 과다활동(cell hyperactivity) 등 면역조절능력 상실의 특징을 보여주며, 그로 인해 생산된 자가 항체(auto antibody)에 의해 결국 혈관 염, 조직 및 장기손상이 유발되는 보조 T 세포(helper T cell) 의존성 자가면역 질환이다. 따라서 루푸스 양성 자가면역성 만성염증 치료에 있어서 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 및 프로스타글란딘 E2(PGE2) 과생산이나 mRNA 과다발현(overexpression), 보조 T 세포의 과다활동 및 증가된 혈중 혈관 내피 성장인자(VEGF, vascular endothelial growth factor), 억제된 세포 자연사(apoptosis), B 세포 과민반응(overreactivity) 및 생산이 저하된 C 반응성 단백질(C-reactive protein) 등은 치료에 있어서 중요한 표적이 될 수 있는데 현재 루푸스 치료제는 이러한 조건을 충족시키는 약물이 개발되지 못한 상태이다. 따라서 이와 같은 분자생물학적 수준에서 선택적 치료효과를 지니는 새로운 치료제 개발이 필요하다.

죽력(대나무 오일)은 항산화, 노화방지, 항균, 항피부염 등의 효과를 지니며 주로 당뇨, 고혈압, 아토피성 피부염에 탁월한 효과를 갖는 것으로 알려졌다. 그 외에 암, 콜레스테롤 제거, 팔다리 저림은 물론 미백에도 아주 좋은 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 그러나 죽력이 루푸스 증후군에 효과가 있다고 알려진 바 없다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 대나무에 원적외선을 처리하여 대나무 오일을 추출하는 경우, 루 푸스 양성 증후군에서 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 및 프로스타글란딘(PGE2)의 생성을 억제하고, T 보조세포(Th cell) 활성(activation), T-B 세포 공동활성(costimulation), 및 T 보조세포(Th cell) 아팝토시스(apoptosis) 등 T 세포와 B 세포간의 비정상적인 상호작용을 정상적으로 회복시키며, B 세포 과민 반응(hyperactivity)에 대한 조절효과를 지니고, 혈관염(vasculitis)을 개선시키며, 장기 손상으로부터 보호 작용을 수행함을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.

또한 IL-6는 다양한 기능을 갖는 사이토카인으로써 만성염증에 주 역할을 하고 있으며 혈중 IL-6의 농도는 심혈관계 사망은 물론 모든 질환의 사망과 관련되어 있다고 해도 과언이 아니다(Maggio et al., 2006). IL-6 및 IL-6 신호전달의 차단은 만성염증성 질환의 예방과 치료에 있어서 매우 효과적인 것으로 알려져 있다. 본 발명에서 프로스탄으로 유도된 루푸스양 실험동물은 저농도 IL-6 생산증가의 특징을 보이는데 죽력추출물은 IL-6의 생체 내(in vivo) 및 실험관 내(in vitro) 생성과 mRNA 발현을 억제하였고, IL-6의 강력한 유도제인 프로스타글란딘의 생체 내(in vivo) 및 실험관 내(in vitro) 생성과 mRNA 발현을 억제하였으며, IL-6과 유관한 비정상적인 T 보조세포(Th cell) 활성 및 세포자연사(apoptosis) 및 B 세포 과민성 반응에 대한 조절효과를 지님을 관찰하고, 본　발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 염증 유도성 사이토카인의 생성을 억제하고 면역 세포들의 활성을 억제하는 장점을 갖는 루푸스양 자가면역성 증후군 및 IL-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 루푸스양 자가면역성 증후군 및 IL-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물을 이용한 루푸스양 자가면역성 증후군 및 IL-6 관련 만성염증을 치료 및 예방하는데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 대나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물을 제공한다. 본 발명에 있어서 루푸스양 자가면역성 증후군(lupus-like autoimmunity)이라 함은 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine)의 과생산, T 세포와 B 세포 간의 상호작용 조절작용 상실로 인한 T 세포 내성(cell tolerance)의 상실 및 B 세포 과다활동(cell hyperactivity) 등 면역조절능력 상실의 특징을 갖고, 그로 인해 생산된 자가 항체(auto antibody)에 의해 혈관, 조직 및 장기손상이 유발되는 보조 T 세포(helper T cell) 의존성 자가면역질환을 의미한다. 본 발명의 상기 루푸스양 증후군은 루푸스 양성(positive) 증후군은 물론 루푸스 유사 만성염증 및 자가면역성 증후군을 포함한다. 또한 본 발명에 있어서 인 터루킨-6 관련 만성염증이라 함은 혈중 인터루킨-6의 저농도 수준의 증가로 인해 동맥경화, 심혈관계질환, 알츠하이머, 골다공증, 당뇨병 등 만성염증과 관련된 만성질환을 일으키는 염증을 의미한다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 대나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 루푸스 증후군 예방 또는 치료용 조성물과 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 루푸스 증후군 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 대나무 추출물을 포함하는 대사증후군 치료 또는 예방 효과를 갖는 약학 조성물의 투여방법은 제형에 따라 용이하게 선택될 수 있으며, 산제, 정제, 환제, 과립제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 액, 에멀젼, 현탁액, 시럽제, 외용제, 멸균 주사용액 등의 형태로 제형화 되어 전신 또는 국소적으로 경구 또는 국소적으로 경구 또는 비경구 투여될 수 있으며 특히 경구 투여가 바람직하다. 경구투여를 위한 고형 제형에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제형은 대나무 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 슈크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제형으로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비 경구 투여를 위한 제형에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌클리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브오 일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 대나무 추출물을 포함하는 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다.

본 발명의 대나무 추출물을 포함하는 약학 조성물은 우수한 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방효과를 제공할 뿐만 아니라, 약물에 의한 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.01-10g/kg 범위 내이다.

본 발명의 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물에서, 상기 추출물은 대나무를 광물질에서 발생한 원적외선으로 숙성 및 소성시켜 발생된 증기를 냉각하여 추출된 것이 바람직하다. 죽력은 일반적으로 항아리와 진흙을 이용해 불을 가해 수득한 대나무 진액을 일컫는데, 이를 대나무 오일 또는 죽력 오일이라고도 한다. 그러나 이러한 재래식 방법으로 죽력 오일을 제조하면 제조하는 조건에 따라 추출되는 농도가 일정하지 않으며, 역한 맛이나 불냄새, 타르성분 오염 등 문제점을 안고 있다. 본 발명의 광물질에서 발생한 원적외선으로 숙성 및 소성시켜 발생된 증기를 냉각하여 추출된 사용되는 대나무 추출물(이하 ‘죽력 신물질’이라고도 함, a novel extract of Bamboo lignin)은 이런 문제점을 해결할 수 있다. 본 발명의 상기 대나무 추출물은 물과 열을 이용하 여 재래식으로 추출하지 않고, 광물질에서 발생한 원적외선으로 숙성 및 소성시켜 발생된 증기를 냉각하여 추출하여 열로 인한 변성 없이 물질자체의 성분만을 추출하는 방법으로 얻어진다. 또한 원적외선을 사용하여 나노 수준의 파장을 대나무에 쪼여줌으로써 추출된 본 발명의 대나무 추출물은 인체의 면역계를 증폭 활성화시켜 인체회복력을 높여주며 추출된 추출물의 인체 흡수율이 높고 세포침투력이 높아 만성질환이 갖는 낮은 흡수율과 약리활성을 증가시켜 치료효과를 극대화시킬 수 있는 장점을 지닌다. 뿐만 아니라 항상 추출방법이 일정하고 높은 수득율을 달성할 수 있으며, 유효성분의 함량의 변화를 없앨 수 있다.

본 발명의 루푸스 증후군의 치료 및 예방용 조성물에서, 상기 광물질은 원적외선을 발생하여 죽력의 추출에 도움이 되는 어떠한 광물질도 될 수 있으나, 바람직하게는 분쇄한 맥반석을 게르마늄, 세리사이트, 옥석, 및 자수정과 혼합한 것이 좋다.

본 발명의 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물에서, 상기 루푸스 증후군의 치료 및 예방은 염증 유도성 사이토카인(cytokine)인 TNF-α, IL-6, IL-10 및 IFN-γ, 그리고 PGE2의 분비를 억제하고, T 세포 및 B 세포의 과다활성을 억제함으로써 수행된다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 본 발명의 대나무 추출물이 염증 유도성 사이토카인(cytokine)인 TNF-α, IL-6, IL-10 및 IFN-γ, 그리고 PGE2의 분비를 억제하고, 인터루킨-6 및 사이클로옥시게나아제(COX)2 mRNA 발현을 억제하였으며, T 보조세포(Th cell) 활성(activation), T-B 세포 공동활성(costimulation), 및 T 보조세포(Th cell) 아팝 토시스(apoptosis) 등 T 세포와 B 세포간의 비정상적인 상호작용을 정상적으로 회복시키며, B 세포 과민 반응(hyperactivity)에 대한 조절효과를 지니고, 혈관염(vasculitis)을 개선시키며, 장기 손상으로부터 보호 작용을 수행함을 확인하였다.

본 발명의 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물에서, 상기 조성물은 건강 기능식품, 건강음료 또는 음료첨가제로 사용 할 수 있으며, 상기 기능성 식품 조성물은 식품 총 중량에 대하여 0.01 내지 80 중량% 혼합하여 루푸스 증후군 개선을 목적으로 한 기능성 음료, 환제, 정제 또는 상기 성분을 건조 분말화하여 충진한 연질 또는 경질 캡슐제의 형태로 이용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 대나무 추출물을 포함하는 조성물은 루푸스 증후군 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 죽력 추출물을 첨가 할 수 있는 식품으로는 예를 들어 각종 식품류, 캔디, 초코릿, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고 분말, 과립, 정제, 환제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드. 예를 들어 포도당, 과당 등의 디사카라이드. 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드. 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알 콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연향미제(타우마틴, 스테비아 추출물. 예를 들어 헤바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초코릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 본 발명의 대나무 추출물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용 할 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 분쇄한 맥반석을 게르마늄, 세리사이트, 옥석, 및 자수정과 혼합하여 광물질을 준비하는 단계; 상기 준비된 광물질에 가열하여 원적외선을 발생시키는 단계; 상기 발생된 원적외선으로 대나무를 숙성 및 소성시켜 증기를 생성시키는 단계; 및 상기 생성된 증기를 냉각하여 죽력을 제조하는 단계를 포함하는 죽력 추출 방법을 제공한다.

본 발명의 죽력 추출 방법에서, 상기 증기를 생성시키는 단계는 250 내지 350 ℃에서 5 내지 7시간 수행하는 것이 바람직하다. 상기 광물질의 온도를 상승시켜 250 내지 350 ℃를 유지하도록 5 내지 7시간 가열하면 대나무의 약재원료는 숙성 및 소성되면서 열에 의하여 증기를 발산하게 된다. 발산된 증기만을 따로 모아서 냉각하면 증기는 액화되어 죽력을 추출할 수 있다. 이때 분쇄한 맥반석을 게 르마늄, 세리사이트, 옥석, 및 자수정과 혼합하여 고온상태를 유지하면 광물질로부터 인체에 유익한 석파동과 석파장 및 음이온, 원적외선 등이 다량으로 방출되고, 이때 방출한 원적외선 등으로 대나무를 숙성 및 소성시켜 죽력(대나무 오일)이 추출되기 때문에 대나무 자체에 존재하던 독성은 중화되어 소멸되고 인체에 필요한 성분만 완전하게 추출된다. 상기 과정에서 광물질의 온도가 250℃ 미만이면 원료의 숙성이 늦어지고, 350℃를 초과하면 고온으로 인하여 약재 고유의 성분에 손상을 초래할 염려가 있다. 또한 가열시간은 5시간 미만에서는 광물질의 온도를 유지하는 시간이 짧아져서 기화 및 액화를 반복하는 횟수가 줄기 때문에 추출액을 제조하기 어려우며, 7시간 이상으로 장시간 가열하면 약재 고유의 성분에 손실이 발생할 염려가 있다.

이하, 본 발명의 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물을 단계별로 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명자들은 분쇄한 맥반석을 게르마늄, 세리사이트, 옥석, 및 자수정과 혼합하여 250 내지 350 ℃에서 5 내지 7시간 동안 유지하면서 대나무 오일(죽력)을 추출하였고, 상기 추출된 대나무 추출물의 루푸스 증후군에 대한 효과를 실험하였다.

본 발명의 대나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 루푸스 염증에 있어서 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine: TNF-α, IL-6, IL-10 및 IFN-γ) 및 프로스타글란딘(PGE2)의 혈청(serum) 농도를 억제하였고, 복막 대식 세포(peritoneal macrophage)의 IL-6 및 COX2 mRNA 발현을 억제하였으며, 폐 혈관 투과성(pulmonary vascular permeability), BAL IFN-γ 및 PGE2의 생산을 저하시켰으며, 혈관염성 만성염증과 유관한 혈관내피성장인자(VEGF)의 혈청(serum) 및 기관지 폐포 플루이드(BALF, bronchoalveolar fluid)의 농도를 저하시켰고, 저하된 혈중 C 활성화 단백질(C-reactive protein)을 회복시켰는데, 이는 본 발명의 조성물이 루푸스 양성 자가면역성 염증반응에 나타나는 억제된 면역능을 회복하면서 자가면역성 전신성 염증반응을 억제하고, 폐 손상으로부터 보호효과를 지니며 혈관염성 만성염증을 억제하는 함을 나타내었다.

또한 본 발명의 조성물은 루푸스 양 증후군이 유도된 동물실험에서 유발된 비대해진 비장 및 흉선의 크기를 억제하였고, T 세포 과민반응을 억제하였고, 억제된 T 세포의 세포 자연사의 발현을 증가시켰으며, B 세포 과민반응을 억제적으로 조절하였는데, 이는 본 발명의 조성물이 자가면역성 유발에 중요한 역할을 하는 T 세포 내성(tolerance) 상실 및 그로 인한 B 세포 과민반응을 조절하여 초기진행단계에서 분자수준으로 나타나는 자가면역성 염증반응을 억제시키는 것을 보여준다.

특히 IL-6은 자가면역 질환에서 프로스타글란딘(PGE2)에 의해 생산이 촉진되는 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine)으로 T 세포 활성(cell activation)을 유도하며, 활성화된 T 세포의 세포자연사(apoptosis) 억제에 관여하는 것으로 알려져 있고, 또한 IL-6는 동맥경화, 심혈관계질환, 알츠하이머, 골다공증, 당뇨병 등 만성염증과 관련된 만성질환을 일으키는 염증과 매우 유관한 것으로 알려져 있다. 본 발명의 조성물은 IL-6 및 그와 관련된 PGE2, 활성화된 T 세포 등 에 대한 조절효과를 지녀 루푸스양 자가면역성 염증반응 초기단계에서는 물론 저농도의 IL-6 생산과 관련된 염증(inflammation) 반응을 억제하여 만성염증성 질환에 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.

본 발명자들은 루푸스 양성 자가면역성 염증에 있어서 자가면역성 및 전신성 염증반응을 억제하고 염증반응의 신호작용을 조절하는 등 분자생물학적 수준에서 죽력의 예방 및 치료 효과를 완성시켰다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1. 원적외선을 이용한 대나무 추출물의 추출

대나무 1.2kg을 세척하고 대략 5cm의 크기로 분쇄하였다.

분쇄한 맥반석 70 중량%를 게르마늄 20 중량%, 세리사이트 5 중량%, 옥석 3 중량%, 및 자수정 2 중량%와 혼합하여 총 중량 2kg의 광물질을 준비하였다.

상기 준비된 광물질을 300 ℃로 가열하여 원적외선을 발생시키고 분쇄된 대나무에 원적외선을 쬐어 굽고, 숙성시켰다. 이때 발생된 증기가 빠져나가지 못하게 밀봉하고, 6시간 동안 상기 온도를 유지시켰다. 6시간이 지나서 생성된 증기를 따로 모은 후 냉각하여 대나무 오일(이하 ‘죽력’이라고 한다) 4.8ml(수득율 3%)를 수득하였다.

실시예 2. 죽력의 세포독성 실험

추출된 죽력의 세포 독성을 평가하기 위하여 Raw 264.7 세포를 10% FBS와 1% 항마이코틱-항체(antimycotic-antibiotic)를 포함한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium, GibcoBRL, U.S.A.)배지를 이용하여 37℃, 5% CO₂의 환경에서 배양하였다. 세포독성 측정을 위해서 마우스 대식세포(Raw 264.7)를 96-공 플레이트에 각각 5× 10³ (세포/공)이 되도록 도말(seeding)하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. 세포가 90%의 밀도로 성장한 후 배양액을 교체하여 죽력을 0 내지 10μl/㎖ 농도별로 각각의 웰(well)에 투여하였다. 20시간이 지난 후 MTT 수용액(Promega) 10μl을 가하여 포마존(formazon) 색소를 DMSO에 녹여 마이크로 플레이트 리더(microplate reader)로 570nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존력을 측정하였다.

그 결과 죽력은 10μl/㎖의 고농도에서도 세포독성이 관찰되지 않음을 알 수 있었다(도 1).

실시예 3. 죽력의 TNF-α 생성 억제 측정

상기 실시예 1에서 추출된 본 발명의 죽력의 세포 독성을 평가하기 위하여 마우스 대식세포(Raw 264.7)를 10% FBS와 1% 항마이코틱-항체(antimycotic-antibiotic)를 포함한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium, GibcoBRL, U.S.A.)배지를 이용하여 37℃, 5% CO₂의 환경에서 배양하였다. Raw 세포의 TNF-α 생성능에 미치는 죽력의 억제효과 측정을 위해서 Raw 264.7 세포를 96-well 플레이트에 각각 1× 10⁶ cells/well이 되도록 도말(seeding)하고, 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양(overnight)하였다. 세포 배양액을 교체하여 죽력 추출물을 0 내지 10^-3μl/㎖ 농도별로 각각의 웰(well)에 투여하였다. 1시간 후에 리포다당질(LPS, lipopolysaccharide, Sigma)로 자극하고 6시간 후에 상등액을 회수하였다. 회수된 상등액을 사이토카인 단일항체(cytokine monoclonal antibody, BD Bioscience Pharmingen)를 이용하여 엘리사 방법으로 450 nm에서 측정하였다. 그 결과 죽력 추출물은 리포다당질로 자극된 마우스 대식세포(Raw 264.7)의 TNF-α의 생산능을 농도의존적으로 억제함을 알 수 있었다(도 2).

실시예 4. 루푸스 양성 실험동물에서 염증유도 사이토카인 억제측정

4-1. 루푸스 양성 실험동물의 구축 및 약물투여

6주령 마우스(BALB/c female mice) 60마리를 3개의 군으로 나누어 한 개의 군은 건강한 상태(healthy)를 유지하였고, 나머지 두 개 군은 프리스탄을 투여한 후 한 개의 군에는 본 발명의 죽력 추출물을 투여하고, 나머지 군을 대조군으로 사용하였다.

논문에 기재된 방법(Richards et al., J. Exp. Med., 188(5), 985-90, 1998) 과 동일한 방법으로 6주령 마우스(BALB/c female mice)에 프리스탄(pristane)을 투여하여 루푸스 양성 증후군을 2주간 유도하였다. 죽력 추출물을 10μl/kg으로 매일 14일간 경구투여 하였다. 건강한 생쥐와 비교하여 프리스탄으로 루푸스를 유도한 대조군에서 각종 비정상적인 생체 내(in vivo) 및 실험관 내(in vitro) 면역세포 반응을 확인하였고, 대조군에 비해 죽력 추출물을 투여한 실험군을 관찰하였다.

4-2. 염증 유도성 사이토카인의 분비

루푸스질환에서는 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine)(TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ)의 혈중농도가 높은 것으로 알려져 있다. 상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에 죽력 추출물을 10μl/kg으로 매일 14일간 경구투여 하였다. 각 실험동물을 마취 하에서 혈액을 채취하여 실온에 2시간동안 정치한 후 원심분리하여 혈청을 얻어 -20℃에 사용 전까지 저장하였다. 이 혈청을 사이토카인 단일항체(cytokine monoclonal antibody, BD Bioscience Pharmingen)를 이용하여 엘리사 방법으로 450nm에서 측정하였다. 그 결과 본 발명에서는 상기 루푸스 양성 마우스에서 현저히 증가한 혈중 염증 유도성 사이토카인(TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ)의 농도가 본 발명의 죽력 추출물의 투여로 유의하게 감소되었음을 알 수 있었다(도 3a).

또한 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스의 복강에서 세포를 채취하고 이를 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 2시간 동안 배양하여 부착된 세포만을 얻는다. 이 복 강 마크로파지를 96-well 플레이트에 각각 1× 10⁶ cells/well이 되도록 도말(seeding)하고, 리포다당질 10ug/ml로 6시간동안 자극하여 사이토카인 단일항체(BD Bioscience Pharmingen)를 이용하여 엘리사 방법으로 450nm에서 측정하였다. 그 결과 복강 내 마크로파지의 리포다당질 자극에 의한 현저히 증가한 염증 유도성 사이토카인(TNF-α, IL-6, IL-10)의 생체 외(ex vivo) 생산능은 본 발명의 죽력 추출물의 경구투여로 유의성 있게 감소되었다.

따라서 본 발명의 죽력 추출물이 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine)(TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ)의 생산을 차단하여 루푸스의 전신성 염증반응을 억제함을 알 수 있었다.

실시예 5. 루푸스 양성 마우스에서 프로스타글란딘( PGE2 )의 억제측정

프로스타글란딘(PGE2)은 염증성 인자로 잘 알려져 있으며 T 세포 활성화를 유도하는 B 세포 과민성 반응(hyperactivity)에 중요한 역할을 하는 IL-6 생산을 촉진한다. 상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에 죽력 추출물을 10μl/kg으로 매일 14일간 경구투여 하였다. 실험 종료일에 분리한 혈청을 PGE2 EIA 키트(Cayman Chemical)를 이용하여 제조사의 방법대로 하여 405nm에서 측정하였다.

그 결과 건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스에서 현저히 증가한 프로스타글란딘의 혈중농도가 본 발명의 죽력 추출물의 투여로 유의 하게 감소되었음을 알 수 있었다(도 4a).

또한 건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스에서 상기 실시예 4-1의 방법으로 얻은 복강 마크로파지의 리포다당질의 24시간 자극에 의해 현저히 증가한 PGE2의 생체 외(ex vivo) 생산능은 본 발명의 죽력 추출물에 의해 유의성 있게 감소되었음을 알 수 있었다(도 4b). PGE2는 염증성 인자로 잘 알려져 있으며 T cell 활성화를 유도하여 B cell hyperactivity에 중요한 역할을 하는 IL-6 생산을 촉진하는데, 본 발명의 죽력 추출물이 PGE2의 생산을 억제하는 것으로 보아 루푸스양 증후군은 물론 IL-6 관련 염증반응 억제효과를 지님을 알 수 있었다.

실시예 6. 루푸스 양성 마우스에서 복강 대식세포의 IL-6 및 COX2 의 mRNA 발현

역전사 PCR(RT-PCR)을 수행하기 위해서 루푸스 양성 마우스에서 상기 실시예 4-1의 방법으로 얻은 복강마크로파지 1× 10⁶ cells/well를 리포다당질 10ug/ml로 자극하여 4시간 후에 세포를 회수하여 RN이지(RNeasy) 미니 키트(QIAGEN)를 이용하여 총 RNA를 분리하였다. 정량화한 RNA는 큐언티스크립트 Ⅱ 역전사 효소(Quantiscript Reverse Transcriptase)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 실시간 PCR에 필요한 올리고 프라이머는 바이오니아(BIONEER)를 이용하여 제작하였다. 2 μl의 cDNA에 10 μl의 SYBR 마스터 믹스(Master Mix, QIAGEN), 각각 2μl의 1 μM 센스, 안티센스 프라이머(바이오니아, 한국), 증류수를 넣어 20 μl가 되게 한 후 멀티진 PCR(MultiGene PCR, Labnet International Inc.)로 PCR을 수행하였다. IL-6 프라이머 센스는 5'-CATAGCTACCTGGAGTACATGA-3', IL-6의 안티센스는 5'-CATTCATATTGTCAGTTCTTCG-3', COX2의 센스는 5'-GGCCATGGAGTGGACTTAAA-3', COX2의 안티센스는 5'-ACCTCTCCACCAATGACCTG-3', GAPDH의 센스는 5'-GCCAAGGTCATCCATGACAAC-3', GAPDH의 안티센스는 5'-AGTGTAGCCCAAGATGCCCTT-3'를 사용하였다. PCR 반응의 조건은 94℃에서 15분간 초기활성화 단계를 거친 후 95℃ 15초, 55℃ 30초, 72℃ 30초를 40회 반복하였다.

그 결과 건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스에서 본 발명의 죽력 추출물이 복강마크로파지의 4시간 배양에서 현저히 증가한 IL-6 및 COX2의 mRNA 발현을 저하시켜 루푸스양 증후군은 물론 인터루킨-6 관련 염증억제작용을 갖는 것을 알 수 있었다(도 5).

실시예 7. 루푸스 양성 마우스에서 폐 손상 보호 효과

상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스로부터 마취 하에 폐를 채취한 후 PBS 1ml와 기관내 폴리에틸렌 튜브(intratracheal polyethylene tube)를 이용하여 총 폐포세척액을 얻었다. 분리된 폐포세척액 중 조직염증과 관련된 TNF-α 및 IFN-γ농도는 사이토카인 단일항체(cytokine monoclonal antibody, BD Bioscience Pharmingen)를 이용하여 엘리사 방법으로 450 nm에서 측정하였다.

조직 중 TNF-α 및 IFN-γ는 둘 다 조직염증에 관여하지만 특히 IFN-γ는 IgG2 자가항체 생산을 촉진하여 루푸스질환의 활성에 관여하는 것으로 알려졌다. 그 결과 본 발명의 죽력 추출물을 처리한 루푸스 양성 마우스는 처리하지 않은 대 조군에 비하여 기관지 폐포 세척액(BALF, broncho-alveolar lavage fluid)에서 TNF-α보다는 자가면역성과 유관한 IFN-γ의 생산을 억제함을 알 수 있었다(도 6a).

또한 실시예 3과 같은 방법으로 폐포 세척액에 존재하는 PGE2의 양을 측정한 결과 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스는 비투여군에 비해 PGE2의 생산이 억제된 것으로 보아 본 발명의 죽력 추출물이 염증반응을 억제함을 알 수 있었다(도 6b).

그리고 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스는 비투여군에 비해 폐/몸통(lung/body) 중량비(%)가 감소함을 알 수 있었다(도 6c).

마지막으로 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에 에반스 불루(Evans' blue)를 꼬리정맥주사한 4시간 후에 생쥐를 희생시킨 후 폐를 채취하여 포름아미드액에 넣어 인큐베이터에 18시간 배양시킨 후 원심분리하여 상등액을 취해 엘리사를 이용하여 650nm에서 흡광도를 측정하여 폐혈관투과도(pulmonary vascular permeability)를 조사하였다. 그 결과 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 군에서 그렇지 않은 대조군에 비해 폐혈관 투과도가 감소함을 알 수 있었다.

상기와 같은 결과들을 통해 본 발명의 죽력 추출물이 루푸스성 폐염증 억제 및 폐혈관의 보호에 효과적임을 알 수 있었다.

실시예 8. 루푸스 양성 마우스에서 증가한 VEGF 농도의 억제효과

건강한 마우스에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스는 혈청 및 기관지 폐포 세척액(BALF, broncho-alveolar lavage fluid)에서 현저히 증가된 혈관내피 성장인자(VEGF, Vascular Endothelial Growth Factor)의 농도가 관찰된다. 혈관내피 성장인자는 만성염증과 유관한 인자로 혈관염의 유발에 관여한다.

상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에서 실험종료 후 상기 실시예 2-2의 방법으로 채취한 혈청 및 폐포세척액에 존재하는 혈관내피세포 성장인자의 농도를 측정하기 위해 마우스 혈관내피세포 성장인자(mouse VEGF kit, R&D system)를 이용하여 엘리사 방법으로 450 nm에서 측정하여 혈관내피 성장인자의 농도를 측정하였다. 그 결과 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스에서 그렇지 않은 대조군에 비해 혈관내피 성장인자의 농도가 유의하게 감소함을 알 수 있었다(도 7). 따라서 본 발명의 죽력 추출물이 만성염증을 억제하는데 작용함을 알 수 있다.

실시예 9. 루푸스 양성 마우스에서 감소된 C 활성화 단백질( CRP )의 회복

건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스에서는 현저히 감소된 혈청 CRP(C-reactive protein)의 농도가 관찰된다(도 8). 루푸스 질환에서 CRP의 생산이 억제되는데, CRP은 루푸스 질환 발현을 지연시키며, 항체의 생성을 감소시키며, 생존율을 증가시키는 것으로 보고되었다.

상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에서 실험 종료일에 실시예 2-2의 방법으로 분리한 혈청을 마우스 C 활성화 단백질 키트(mouse C-reactive protein kit, IBL-America, Inc.)를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정하 였다. 그 결과 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스에서 그렇지 않은 대조군에 비해 혈청 CRP의 농도가 유의하게 증가됨을 알 수 있었다(도 8). 따라서 본 발명의 죽력 추출물이 루푸스 질환의 치료에 효과적임을 알 수 있다.

실시예 10. 루푸스 양성 마우스에서 림프 조직 비대의 조절

건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스에서는 현저히 증가된 비장 및 흉선의 비대 현상이 관찰된다(도 9).

본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스에서 그렇지 않은 대조군에 비해 비장 및 흉선의 비대 현상이 조절되어 정상크기로 줄어드는 것을 관찰할 수 있었다(도 9). 따라서 본 발명의 죽력 추출물이 루푸스 질환에서 자가면역성을 감소시켜 비대된 림프조직 억제효과를 지님을 알 수 있다.

실시예 11. 루푸스 양성 마우스에서 비장의 T 세포 과민성 반응 조절

건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스의 비장세포에서는 B 세포와 상호작용을 하기 위해 T 세포 과민성 반응을 나타내는데, 특히 T 세포 활성과 유관한 CD3⁺CD40L⁺의 발현이 증가된다(도 10).

상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에서 비장세포를 조제한 후 항 Fc 수용체 단일항체(anti-Fc receptor monoclonal antibody 2.4G2)에 배양한 후 FITC-표지 항 CD-3(FITC-labelled anti-CD3, Pharmingen) 및 PE-표지 항 CD40L(PE-labelled anti-CD40L, Pharmingen)로 착색하여 빛을 차단한 상태에서 30분간 배양한 다음 1% 포름알데하이드(paraformaldehyde)로 고정시켜 유세포 측정기(flow cytometry, FACS, Calibur)로 CD3⁺CD40L⁺의 발현을 측정하였다. 그 결과 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스에서 그렇지 않은 대조군에 비해 CD3+CD40L+의 발현이 감소함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 죽력 추출물이 B 세포의 과민반응 유도와 유관한 T 세포의 과민반응을 억제시켜 B 세포 과민반응 및 그로 인한 자가 항체 생산의 특징을 나타내는 루푸스 자가면역성을 억제함을 알 수 있다.

실시예 12. 루푸스 양성 마우스에서 비장의 T 세포의 세포 자연사 조절

건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스의 T 세포 세포자연사는 감소하는 것으로 알려져 있다. 루푸스 양성 마우스에서는 T 세포 자연사에 관여하는 FasL(CD3+FasL)의 발현이 건강한 생쥐에 비해 감소한다.

상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에서 비장세포를 조제한 후 항 Fc 수용체 단일항체(anti-Fc receptor monoclonal antibody 2.4G2)에 배양한 후 FITC-표지 항 CD-3(FITC-labelled anti-CD3, Pharmingen) 및 PE-표지 항 FasL(PE-labelled anti-FasL)로 착색하여 빛을 차단한 상태에서 30분간 배양한 다음 1% 포름알데하이드(paraformaldehyde)로 고정시켜 유세포 측정기(flow cytometry, FACS, Calibur)로 CD3⁺CD40L⁺의 발현을 측정하였다.

또한 상기 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스의 비장세포를 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하루 밤(overnight) 배양한 후 항 Fc 수용체 단일항체(anti-Fc receptor monoclonal antibody 2.4G2)에 배양한 후 FITC-표지 항 CD-3(FITC-labelled anti-CD3, Pharmingen) 및 PE-표지 항 FasL(PE-labelled anti-FasL)로 착색하여 빛을 차단한 상태에서 30분간 배양한 다음 1% 포름알데하이드(paraformaldehyde)로 고정시켜 생체 내 세포사 측정 키트(in situ cell death detection kit, Fluorescein, Roche, U.S.A.)에 의해서 터미널 DNA 전사효소 매개 dUDP 닉 끝단 표지 어쎄이(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labelled,TUNEL assay)를 실행하였다.

그 결과 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스에서 그렇지 않은 대조군에 비해 억제된 FasL(CD3+FasL)의 발현이 증가함을 알 수 있었다(도 11a). 또한 루푸스 양성 마우스에서 감소된 T 세포 및 T 보조 세포의 세포 자연사가 본 발명의 죽력 추출물을 투여한 루푸스 양성 마우스에서 촉진됨을 알 수 있었다(도 11b).

상기와 같은 결과로 본 발명의 죽력 추출물이 T 세포 자연사를 촉진시켜 루푸스에서 T 세포 내성(tolerance) 상실을 초래하는 T 세포의 활성-유도 세포 사멸(activation-induced cell death) 억제를 완화하는 것을 알 수 있다.

실시예 13. 루푸스 양성 마우스에서 비장의 B 세포의 생체 내 과민반응 조절

B 세포에서 CD80 및 CD86의 발현은 B 세포 활성과 관련되어 있는데 루푸스에서는 이들이 과다 발현된다. 상기 실시예 4-1의 방법으로 제조된 루푸스 양성 마우스에서 비장세포를 조제한 후 항 Fc 수용체 단일항체(anti-Fc receptor monoclonal antibody 2.4G2) PE-표지 항 CD45R/B220(PE-labelled anti-CD45R/B220, Pharmingen) 및 FITC-표지 항 CD80(FITC-labelled anti-CD80) 또는 FITC-표지 항 CD86(FITC-labelled anti-CD86)으로 착색하여 빛을 차단한 상태에서 30분간 배양한 다음 1% 포름알데하이드(paraformaldehyde)로 고정시켜 유세포 측정기(flow cytometry, FACS Calibur)로 세포 표면 마커(cell surface marker)의 발현을 측정하였다.

건강한 생쥐에 비해 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스에서는 비장세포에서 과발현된 CD80 및 CD86이 나타난다. 그러나 본 발명의 죽력 추출물(BO)을 투여한 루푸스 양성 마우스에서는 생체 내(in vivo)에서 이들 단백질의 발현이 억제되는 것이 관찰 되었다(도 12).

상기와 같은 결과로 본 발명의 죽력 추출물이 루푸스성 T 세포-B 세포 공동자극(costimulation)의 과활성을 억제하여 B 세포 과민반응을 억제적으로 조절함을 알 수 있었다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 천연 대나무에서 추출한 대나무 오일(죽력)을 용매를 사용하지 않고 원적외선을 사용하여 효과적으로 추출할 수 있다.

또한 본 발명에 따른 원적외선을 사용하여 추출된 대나무 오일은 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방에 있어서 인터루킨-6를 비롯한 염증 유도성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 및 프로스타글란딘(PGE2)의 생성 및 mRNA 발현을 억제하고, T 보조세포(Th cell) 활성(activation), T-B 세포 공동활성(costimulation) 및 T 보조세포(T helper cell) 아팝토시스(apoptosis) 등 T 세포와 B 세포간의 비정상적인 상호작용을 정상적으로 회복시키며, B 세포 과민 반응(hyperactivity)에 대한 조절효과를 지니고, 혈관염(vasculitis)을 개선시키고, 루푸스질환의 발현을 지연시키며, 장기 손상으로부터 보호 작용을 수행함으로써 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방에 사용할 수 있다.

본 발명의 죽력 추출물은 자가면역성 만성염증 조절효과에 대한 기술개발을 통해 고부가 가치, 경쟁력을 갖춘 인프라 창출과 만성염증성질환의 건강식품 및 의약산업의 활성화에 기여할 수 있을 것이다. 또한 루푸스 양성 자가면역성 만성염증질환에 있어서 심각한 독성을 지니는 기존의 치료제를 대신할 수 있는 천연물 치료제 및 치료보조제 개발에 이용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 대나무 추출물의 세포 독성을 평가한 그래프이다.

도 2는 리포다당질(LPS)로 자극된 Raw 264.7 세포의 TNF-α의 생산능에 도시한 그래프이다.

도 3a는 루푸스 양성 실험동물에서 염증반응 유발의 초기단계에서 건강한 생쥐(healthy), 프리스탄으로 유도된 루푸스 양성 마우스(control in pristane), 및 본 발명의 대나무 추출물을 투여한 루푸스양 마우스의 혈중(in vivo) 염증 유도성 사이토카인(TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ)의 농도 변화를 나타낸 그래프다.

도 3b는 루푸스 양성 실험동물에서 염증반응 유발의 초기단계에서 얻어진 복강 대식세포를 6h 동안 리포다당질(LPS)로 자극할 때 염증 유도성 사이토카인(TNF-α, IL-6, IL-10)의 변화를 나타낸 그래프이다.

도 4a는 루푸스 양성 실험동물에서 혈중 PGE2의 농도 변화를 나타낸 그래프이다.

도 4b는 루푸스 양성 실험동물에서 복강 대식세포를 24h 동안 리포다당질(LPS)로 자극할 때 현저히 증가한 PGE2의 생산능에 대한 죽력신물질의 ex vivo 억제효과를 나타낸 도면이다.

도 5는 루푸스 양성 실험동물에서 복강 대식세포를 4h 동안 배양 시 증가한 염증 유도성 사이토카인(TNF-α, IL-6) 및 COX2의 mRNA 발현 변화를 나타낸 그래프이다.

도 6a는 루푸스 양성 실험동물에서 기관지 폐포 세척액(BALF, broncho-alveolar lavage fluid)의 (TNF-α, IFN-γ) 농도를 측정한 그래프이다.

도 6b는 루푸스 양성 실험동물에서 기관지 폐포 세척액(BALF, broncho-alveolar lavage fluid)의 PGE2 농도변화를 측정한 그래프이다.

도 6c는 루푸스 양성 실험동물에서 폐/바디(lung/body) 중량 비(%)를 나타낸 그래프이다.

도 6d는 루푸스 양성 실험동물에서 폐혈관 투과성(pulmonary vascular permeability)의 변화를 나타낸 그래프이다.

도 7는 루푸스 양성 실험동물에서 혈청 및 기관지 폐포 세척액(BALF, broncho-alveolar lavage fluid) 혈관내피 성장인자(VEGF)의 변화를 나타내는 그래프이다.

도 8은 루푸스 양성 실험동물에서 혈청 C 활성화 단백질(serum CRP)의 변화를 나타낸 그래프이다.

도 9은 루푸스 양성 실험동물에서 비장 및 흉선의 비대를 측정한 그래프이다.

도 10는 루푸스 양성 실험동물에서 비장세포의 CD3+CD40L+ 발현에 따른 T 세포의 과민성 반응을 측정한 도면이다.

도 11a는 루푸스 양성 실험동물에서 비장세포의 CD3+FasL+ 발현에 따른 세포자연사(apoptosis) 억제를 나타낸 도면이다.

도 11b는 루푸스 양성 실험동물에서 T 세포 및 T 보조 세포의 세포 자연사의 억제를 나타낸 도면이다.

도 12은 루푸스 양성 실험동물에서 비장세포의 추출한 B cell의 CD80 및 CD86의 발현에 따른 B 세포 과민성 반응을 나타낸 도면이다.

Claims

대나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 루푸스양 자가면역성 증후군 및 인터루킨-6 관련 만성염증 치료 및 예방용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 대나무를 광물질에서 발생한 원적외선으로 소성 및 숙성시켜 발생된 증기를 냉각하여 추출된 것을 특징으로 하는 조성물.
제2항에 있어서, 상기 광물질은 분쇄한 맥반석을 게르마늄, 세리사이트, 옥석, 및 자수정과 혼합한 광물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 루푸스양 자가면역성 증후군 및 IL-6 관련 만성염증 치료 및 예방은 염증 유도성 사이토카인(cytokine)인 종양괴사인자-알파(TNF-α), 인터루킨-6, 인터루킨-10 및 인터페론 감마, 그리고 프로스타글란딘 E2의 분비 및 mRNA 발현을 억제하고, 혈관내피세포 성장인자(VEGF) 및 C 활성화 단백질(C reactive protein) 생산을 조절하며, T 세포 및 B 세포의 과다활성을 억제함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 기능성 식품인 것을 특징으로 하는 조성물.
분쇄한 맥반석을 게르마늄, 세리사이트, 옥석, 및 자수정과 혼합하여 광물질을 준비하는 단계;

상기 준비된 광물질에 가열하여 원적외선을 발생시키는 단계;

상기 발생된 원적외선으로 대나무를 숙성 및 소성시켜 증기를 생성시키는 단계; 및

상기 생성된 증기를 냉각하여 죽력(대나무 오일)을 제조하는 단계를 포함하는 죽력 추출 방법.
제6항에 있어서, 상기 증기를 생성시키는 단계는 250 내지 350 ℃에서 5 내지 7시간 수행하는 것을 특징으로 하는 죽력 추출 방법.