KR20100007180A - 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명은 이를 위해 동물의 조직으로부터 골수를 채취하여 유핵세포를 분리하는 유핵세포 분리단계; 및 상기 유핵세포와 제1형 콜라겐(collagen) 그리고 아파타이트(apatite)의 생체기질성분을 상호 혼합하는 단계;로 이루어진다.

상기와 같이 구성된 본 발명은 골수유래 유핵세포와 콜라겐 기반의 기질조성물을 동시에 골 결손부위에 주입함으로써 골 전도성, 골 형성성, 골 모세포 분화유도능 등을 제공하여 골 생성을 촉진하는 효과가 있고 또한 기질조성물이 의료용으로 사용할 수 있는 공정 및 품질관리를 통하여 고품질을 보장할 수 있고 또한 대량생산이 가능하며 아울러 필요에 따라서 환자의 골수유래 유핵세포와 함께 혹은 단독으로 사용할 수 있으며 더하여 세포치료제에 비해 단시간에 저렴한 비용으로 환자에게 적용할 수 있고 이로 인해 제품의 품질과 신뢰성을 대폭 향상시켜 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 것이다.

골절, 골(뼈)재생, 콜라겐, 아파타이트, 골수유래 유핵세포.

Description

뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법{method manufacture of bone recovery collagen gel composition}

본 발명은 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 골수유래 유핵세포와 콜라겐 기반의 기질조성물을 동시에 골 결손부위에 주입함으로써 골 전도성, 골 형성성, 골 모세포 분화유도능 등을 제공하여 골 생성을 촉진하는 효과가 있고 또한 기질조성물이 의료용으로 사용할 수 있는 공정 및 품질관리를 통하여 고품질을 보장할 수 있고 또한 대량생산이 가능하며 아울러 필요에 따라서 환자의 골수유래 유핵세포와 함께 혹은 단독으로 사용할 수 있으며 더하여 세포치료제에 비해 단시간에 저렴한 비용으로 환자에게 적용할 수 있고 이로 인해 제품의 품질과 신뢰성을 대폭 향상시켜 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 것이다.

본 발명은 본 출원인이 선출원하여 등록받은 특허 출원번호 제2006-0091325호(등록번호 제0834718호)(명칭: 뼈 재생을 도모하는 뼈 형성촉진 세포조성물 및 그 제조방법)를 개량 발명한 것임을 밝혀두는 바이다.

주지하다시피 골다공증은 뼈의 구성성분이 서서히 소실되면서 뼈에 거친 경석이나 스펀지처럼 작은 구멍이 많이 나서 쉽게 부러지는 상태를 말하며 정상적인 뼈에 비하여 뼈 안에 구멍이 많이 생기는 질병이라고 할 수 있고 뼈 자체의 무게가 줄어들고, 미세구조가 얇아지고 약해지므로써 조그만 충격에도 뼈가 쉽게 부러질 수 있는 상태가 된다. 평소에 통증이나 아무런 증상 없이 조용히 진행되다가 어느날 갑자기 뼈가 부러지게 되면 그때야 비로소 골다공증이 있음을 알게 되며 가볍게 넘어졌는데도 손목이나 골반, 척추 뼈가 부러지고 심한 고통이 있고 특히 골반과 척추골절은 통증이 매우 심하고 수술을 필요로 하며 수개월 동안 누워서 지내야 하는 고통을 감수해야 할 뿐만 아니라 회복 후에도 신체장애가 잔존하는 것으로 알려져 있다.

뼈는 계속해서 분해되고 교체되는데, 즉, 파골세포가 오래된 뼈를 파괴, 흡수하며 조골세포가 대신 새로운 뼈를 만드는 리모델링 프로세스가 지속 된다. 뼈조직의 이러한 항상성이 깨어져서 뼈의 흡수속도가 재생속도를 초과하면 골다공증이 발생하게 되는 데 그 원인은 다양한 요인들, 즉 여성, 마르고 작은 체형, 고령, 골다공증 가족력, 폐경(자궁적출술도 포함), 월경불순(생리가 거르는 경우), 신경쇠약, 부신피질호르몬이나 항경련제를 쓴 경우, 남자에서 저 남성 호르몬 증인 경우, 운동부족, 흡연, 과음, 아시아인과 코카시아인(아프리카와 히스파닉 미국인은 덜함), 조기 폐경(45세 이전)된 여성, 카페인과 알코올의 과도한 섭취, 그리고 칼슘 섭취 부족 등의 가종 요인들의 결합에 의하여 발생하는 것으로 알려져 있다.

골다공증은 미국보다 아시아인의 발생률이 더 높아서 2,899만명 이상의 미국인이 앓고 있으며( 그 중 80%가 여성) 오늘날 1,000만인이 이미 이 질환을 가지고 있고 1,800만명 이상은 저밀도이라서 골다공증의 위험이 증가가 예상된다. 50세 이상 미국의 백인들은 2명 중 1명 여성과 8명 중 1명 남성이 골다공증과 관계되는 골절 경험한 바가 있고 50세 이상 아프리카 미국인의 10%가 골다공증, 30%는 저밀도로 골다공증 위험에 노출되어 있다. 골다공증에 의해 연간 150만 이상 골절을 일으키며, 이 중 300,000명은 고관절골절, 700,000명은 척추골절, 250,000명은 손목골절, 300,000명은 기타골절을 일으킨다고 알려져 있다. 미국의 경우 매년 12,000,000회의 골절이 발생하며 그 중 골반골절이 147,000회에서 250,000회를 차지하고, 그 중 80%가 가벼운 외상에 의한 것이며 여성의 약 40%가 80세에 이를 때까지 적어도 한 번의 척추골절을 경험하게 되고, 80대 후반이 되면 여성의 3분의 1과 남성의 6분의 1이 골반골절을 경험하게 된다. 골반골절환자의 25%에서 50%는 치료 후에도 혼자 걸을 수가 없고, 이러한 골절은 사망률과도 연관성이 있다고 알려져 있다.

상기한 골다공증을 치료하기 위하여 개발된 치료 방법 중 비스포스포네이트나 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 등과 같이 기존에 확립된 골다공증 치료법은 일차적으로 뼈의 흡수를 억제하는 것으로 추가적인 골 소실을 억제하는 효과 있어서 골다공증의 진행을 억제하는 것으로 알려져 있다. 또한 골다공증 등의 원인에 의한 국소부위의 골절이나 골 재생이 필요한 부위에는 골 이식이나 자기유래뼈세포치료제 등을 사용하여 골유합이나 골 재생을 도모할 수 있다.

그러나 상기 종래기술은 파골세포의 활동을 억제하여 골 흡수를 방지 함으로써 추가적인 골다공증의 진행을 차단하므로, 실재적인 골 재생을 촉진하지는 못하는 문제가 있다. 또한 상기의 골 이식이나 자기유래 뼈 세포치료제 등을 사용하는 경우 광범위한 부위의 생물학적 골 재생을 얻기는 어려운 단점이 있다.

그리고 골 이식에 의한 골 재생의 단점을 극복하기 위하여 세포치료제 개발은 가속화되고 있으나 부착성 세포의 전신적 적용이나 혈류를 통한 시술은 어려운 것으로 알려져 있다. 이는 부착성 세포의 경우 적절한 기질에 부착되어 있지 않으면 사멸하므로 혈류를 통한 세포주입이 불가하기 때문이다.

좀더 종래의 기술을 살펴보면, 국소부위에 뼈 결손이나 뼈 괴사가 발생한 경우 동종 골이식, 자가 골이식, 혹은 국소용 자기유래 뼈세포치료제 이식 등을 이용한 치료방법을 사용하였고 골다공증과 같은 광범위한 부위의 골 결손이 발생한 경우 비스포스포네이트등의 골 흡수 억제제를 사용하는 치료방법을 사용해왔다. 동종 골이식은 질병의 전파가능성, 이식재의 공급부족, 면역적인 문제, 그리고 자기조직으로의 완전한 재생의 어려움 등이 문제점으로 남아있으며 자가 골이식은 이러한 문제점들을 보완해주나 공여부위의 확보 곤란, 공여부위의 병적현상 등의 문제가 존재한다. 이러한 골이식의 문제점들을 해결하기 위하여 개발된 치료법이 자기유래 뼈세포치료제이며 골수로부터 분리된 뼈 형성 전구세포들을 대량증식시키고 뼈형성 세포로 분화시켜 뼈 재생이 필요한 부위에 이식하여 국소적인 뼈 재생을 도모할 수 있는 기술로 알려져 있다. 그러나 상기의 기술들은 모두 국소적인 뼈 재생에만 사용될 수 있고 비어 있는 뼈 공간을 채워주는 역할만 기대할 뿐, 광범위하게 분포된 뼈 결핍 현상, 예를 들면 골다공증에 의한 전신적인 뼈 결핍 현상 및 골괴사증에 의한 광범위한 골결핍증 등을 치료하기는 어려운 단점이 있다. 또한 골다공증을 치료하기 위해 사용되는 골흡수 억제제는 골재생 촉진능력이 부재하여 골다공증에의한 광범위한 골손상을 치료하는 데는 한계가 존재한다.

상기한 문제점을 해결하기 위해 본 출원인이 선출원하여 등록받은 상기 "뼈 재생을 도모하는 뼈 형성촉진 세포조성물"이 구비된다.

그러나 상기한 종래의 기술도 장시간의 세포배양과정을 거쳐야 하는 커다란 문제점이 발생 되었다.

이를 보다 상세히 설명하면, 국소부위에 뼈 결손이나 괴사가 발생한 경우 동종골이식, 자가골이식, 혹은 국소용 자기유래 뼈세포치료제 이식 등을 이용한 치료방법을 사용하였다. 동종골이식은 질병의 전파가능성, 이식재의 공급부족, 면역적인 문제, 그리고 자기조직으로의 완전한 재생의 어려움 등이 문제점으로 남아 있으며 자가골이식은 이러한 문제점들을 보완해주나 공여부위의 확보 곤란, 공여부위의 병적현상 등의 문제가 존재한다. 이러한 골이식의 문제점들을 해결하기 위하여 개발된 치료법이 자기유래 뼈세포 치료제이며 골수로부터 분리된 뼈 형성 전구세포들을 대량 증식시키고 뼈 형성세포로 분화시켜 뼈 재생이 필요한 부위에 이식하여 국소적인 뼈 재생을 도모할 수 있는 기술로 알려져 있다. 그러나 자기유래 뼈세포 치료제는 환자 맞춤형이라는 장점이 있지만 고가의 제품일 뿐 아니라 제조과정이 복잡하고 한 달 이상의 시간을 요하여 환자의 골 결손 혹은 골절을 진단하는 현장에서 곧바로 사용할 수 없다는 단점이 있다.

특히 상기 종래의 기술은 골이식에 의한 골재생의 단점을 극복하기 위하여 세포치료제 개발은 가속화 되고 있으나 세포치료제 제조공정에 한 달 이상의 장시간이 소요된다는 단점이 있고 자가골이식은 공여부위의 제한, 동종골이식은 질병전파의 위험 등의 단점이 있다.

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 제반 문제점을 해소하기 위하여 안출한 것으로, 동물의 조직으로부터 골수를 채취하여 유핵세포를 분리하는 유핵세포 분리단계; 및 상기 유핵세포와 제1형 콜라겐(collagen) 그리고 아파타이트(apatite)의 생체기질성분을 상호 혼합하는 단계;가 구비됨을 제1목적으로 한 것이고, 제2목적은 콜라겐을 기반으로 하는 기질혼합물로 골전도성(osteoconductivity) 및 골전구세포나 혈관세포 등에 대한 세포친화력을 높여주는 것이며, 제3목적은 골수 등에서 유래하는 유핵세포를 분리하여 상기 기질혼합물과 함께 골 재생이 필요한 부위에 이식하여 줌으로써 뼈 재생을 촉진할 수 있는 뼈 형성 촉진용 조성물을 제공하게 되고, 제4목적은 산업적으로 대량생산 가능한 콜라겐 등 뼈 기질 혼합물을 환자의 골수유래 유핵세포와 혼합하여 골 재생이 필요한 환자에게 단시간 내에 사용할 수 있게 함으로써 골 충진재와 골 재생용 세포를 동시에 부여할 수 있는 주사 가능한 제형의 조성물과 이를 제조할 수 있도록 한 것이며, 제5목적은 본 발명에 의하여 제조되는 뼈 형성 및 촉진용 조성물을 국소 골 형성 필요부위에 주입하면 골 결손부위의 형태에 상관없이 뼈 형성이 필요한 부위에 고루 기질조성물 및 유핵세포를 전달하게 되므로 각종 골절관련 질환을 치료할 수 있게 되며, 제6목적은 이로 인해 제품의 품질과 신뢰성을 대폭 향상시켜 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법을 제공한다.

이러한 목적 달성을 위하여 본 발명은 동물의 조직으로부터 골수를 채취하여 유핵세포를 분리하는 유핵세포 분리단계; 및 상기 유핵세포와 제1형 콜라겐(collagen) 그리고 아파타이트(apatite)의 생체기질성분을 상호 혼합하는 단계;로 이루어지는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법을 제공한다.

상기에서 상세히 살펴본 바와 같이 본 발명은 동물의 조직으로부터 골수를 채취하여 유핵세포를 분리하는 유핵세포 분리단계; 및 상기 유핵세포와 제1형 콜라겐(collagen) 그리고 아파타이트(apatite)의 생체기질성분을 상호 혼합하는 단계;가 구비되도록 한 것이다.

또한 본 발명은 콜라겐을 기반으로 하는 기질혼합물로 골전도성(osteoconductivity) 및 골전구세포나 혈관세포 등에 대한 세포친화력을 높여주는 것이다.

그리고 본 발명은 골수 등에서 유래하는 유핵세포를 분리하여 상기 기질혼합물과 함께 골 재생이 필요한 부위에 이식하여 줌으로써 뼈 재생을 촉진할 수 있는 뼈 형성 촉진용 조성물을 제공하게 된다.

아울러 본 발명은 산업적으로 대량생산 가능한 콜라겐 등 뼈 기질 혼합물을 환자의 골수유래 유핵세포와 혼합하여 골 재생이 필요한 환자에게 단시간 내에 사용할 수 있게 함으로써 골 충진재와 골 재생용 세포를 동시에 부여할 수 있는 주사 가능한 제형의 조성물과 이를 제조할 수 있도록 한 것이다.

더하여 본 발명은 본 발명에 의하여 제조되는 뼈 형성 및 촉진용 조성물을 국소 골 형성 필요부위에 주입하면 골 결손부위의 형태에 상관없이 뼈 형성이 필요한 부위에 고루 기질조성물 및 유핵세포를 전달하게 되므로 각종 골절관련 질환을 치료할 수 있게 된다.

본 발명은 상기한 효과로 인해 제품의 품질과 신뢰성을 대폭 향상시켜 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 매우 유용한 발명인 것이다.

이하에서는 이러한 효과 달성을 위한 본 발명의 바람직한 실시 예를 첨부된 도면에 따라 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 적용된 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법은 도 1 내지 도 6 에 도시된 바와 같이 구성되는 것이다.

하기에서 본 발명을 설명함에 있어, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략할 것이다.

그리고 후술되는 용어들은 본 발명에서의 기능을 고려하여 설정된 용어들로서 이는 생산자의 의도 또는 관례에 따라 달라질 수 있으므로 그 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다.

먼저, 본 발명은 도 1 에 도시된 바와 같이 동물의 조직으로부터 골수를 채취하여 유핵세포를 분리하는 유핵세포 분리단계를 거친다.

이후 본 발명은 상기 유핵세포와 제1형 콜라겐(collagen) 그리고 아파타이트(apatite)의 생체기질성분을 상호 혼합하는 단계;에 의해 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물을 제조하게 된다.

이때 상기 본 발명에 적용된 아파타이트(apatite)는 인산칼슘을 주성분으로 하는 인산염 광물로, 인의 주요한 광석으로 각종 암석에 들어 있는데, 인공적으로 합성하기도 하고, 비료, 크림, 치약 따위의 원료, 인공 뼈나 이의 재료로 쓰이게 되어 콜라겐과 혼합되면 화학적인 반응에 의해 장시간의 세포배양과정이 배제시킬 수 있게 된다.

그리고 본 발명은 상기 제조된 젤 조성물을 콘넥터(connector) 등이 연결된 주사기에 장착하여 조성물을 혼합함이 바람직하다.

이때 상기 본 발명의 유핵세포 분리단계에서 분리된 세포는 자기유래 유핵세포로 구성된다.

그리고 상기 분리된 자기유래 유핵세포는 동물의 골수에서 2∼5mm의 골수를 채취하여 세척공정을 거쳐 유핵세포를 분리하게 된다.

또한 상기 본 발명의 생체기질성분은 콜라겐 말단의 텔로펩타이드(telopeptides)를 제거한 제1형 콜라겐과 아파타이트를 사용하게 된다.

그리고 본 발명의 상기 제1형 콜라겐은 1Ⅹ10⁶~4Ⅹ10⁶ 개의 뼈 형성 능이 있 는 유핵세포 현탁액 0.106ml 당 0.24ml, 아파타이트는 26.93mg 비로 첨가되어 구성된다.

한편 본 발명은 상기의 구성부를 적용함에 있어 다양하게 변형될 수 있고 여러 가지 형태를 취할 수 있다.

그리고 본 발명은 상기의 상세한 설명에서 언급되는 특별한 형태로 한정되는 것이 아닌 것으로 이해되어야 하며, 오히려 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 정신과 범위 내에 있는 모든 변형물과 균등물 및 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

상기와 같이 구성된 본 발명 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법의 실시예를 설명하면 다음과 같다.

우선, 본 발명의 제1실시 예는 다음과 같다.

실시예1) Nude mouse에 시술한 예

먼저 조직으로부터 골수를 채취한 후 유핵세포를 분리하여 현탁액을 준비한다. 생체기질 성분으로 혼합할 제1형 콜라겐과 아파타이트를 준비한다.

그리고 세포현탁액과 제1형 콜라겐 및 아파타이트를 혼합하여 총 1ml의 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물을 준비한다.

암, 수 구별 없이 체중 약 23g 내외의 BALB/c Nude mouse 13마리를 대상으로 견갑골 피하에 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 1ml을 주입하였다.

실험 3주, 6주, 9주에 방사선 촬영 및 육안검사를 한 후, 조직염색을 실시하였다.

도 2는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물1ml을 Nude mouse 견갑골 피하에 주입한사진으로 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물이 정상적으로 주입됨을 알 수 있다.

도 3은 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 1ml을 Nude mouse 견갑골 피하에 주입 9주 후의 방사선 촬영사진으로 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물에 외부로부터 유입되는 세포에 의한 혈관생성이 시작됨을 알 수 있다.

도 4는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 1ml을 Nude mouse 견갑골 피하에 주입 9주 후의 조직염색 사진으로 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물에 외부로부터 유입되는 세포에 의한 콜라겐 생성 및 혈관생성이 시작됨을 알 수 있다.

또한 본 발명의 제2실시 예는 다음과 같다.

실시예2) 10 mm 골절 동물모델에 사용한 예

먼저 조직으로부터 골수를 채취한 후 유핵세포를 분리하여 현탁액을 준비한다. 생체기질 성분으로 혼합할 제1형 콜라겐과 아파타이트를 준비한다.

그리고 세포현탁액과 제1형 콜라겐 및 아파타이트를 혼합하여 총 0.2ml의 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물을 준비한다.

암, 수 구별 없이 체중 약 2.5kg 내외의 뉴질랜드 백색토끼 7마리를 대상으로 3마리는 자가골 이식을 위한 대조군으로, 나머지 4마리는 골수유래 유핵세포를 포함하는 콜라겐 젤 조성물 이식을 위한 실험 군으로 하였다.

토끼의 전완부를 Henry 도달법에 따라 종 절개하여 요골 간부를 노출시킨 후, 톱(saw)을 이용하여 10mm 골 결손을 만들고 골 결손 부위의 골 막은 철저히 제거하였다.

대조군은 미리 장골에서 해면 골을 채취한 후, 골 결손 부위에 골 이식을 하고 피부 및 피하 조직을 봉합하였다.

실험 군은 결손 부위의 빈 공간에 골수유래 유핵세포를 포함하는 세포 조성물을 주입하였다.

실험 3주, 6주, 9주에 방사선 촬영을 한 후, 상부절골부, 하부절골부, 골 결손부의 골유합도 정도에 따라 각각 점수를 주어 이들의 합으로 골절 유합도를 평가하였다.

도 5는 토끼의 전완부에 10mm의 골절을 낸 후 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 주입 후 3주, 9주째 방사선 촬영 사진으로 대조군과 유사한 골 형성을 보임을 알 수 있다.

또한 본 발명의 제3실시 예는 다음과 같다.

실시예3) 15 mm 골절 동물모델에 사용한 예

먼저 조직으로부터 골수를 채취한 후 유핵세포를 분리하여 현탁액을 준비한다. 생체기질 성분으로 혼합할 제1형 콜라겐과 아파타이트를 준비한다.

그리고 세포현탁액과 제1형 콜라겐 및 아파타이트를 혼합하여 총 0.2ml의 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물을 준비한다.

암, 수 구별 없이 체중 약 2.5kg 내외의 뉴질랜드 백색토끼 18마리를 대상으로 9마리는 대조군으로, 나머지 9마리는 골수유래 유핵세포를 포함하는 콜라겐 젤 조성물 이식을 위한 실험 군으로 하였다.

토끼의 전완부를 Henry 도달법에 따라 종 절개하여 요골 간부를 노출시킨 후, 톱(saw)을 이용하여 15mm 골 결손을 만들고 골 결손 부위의 골 막은 철저히 제거하였다.

대조군은 골 결손 부위를 만든 후, 0.8% 식염수를 이용하여 세척한 후 피부 및 피하 조직을 봉합하였다.

실험 군은 결손 부위의 빈 공간에 골수유래 유핵세포를 포함하는 세포 조성물을 주입하였다.

실험 3주, 6주, 9주에 방사선 촬영을 한 후, 상부절골부, 하부절골부, 골 결손부의 골유합도 정도에 따라 각각 점수를 주어 이들의 합으로 골절 유합도를 평가하였다.

도 6은 토끼의 전완부에 15mm의 골절을 낸 후 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 주입 후 3주, 9주째 방사선 촬영 사진으로 대조군에 비해 월등한 골 형성으로 보임을 알 수 있다.

본 발명 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법의 기술적 사상은 실제로 동일결과를 반복 실시 가능한 것으로, 특히 이와 같은 본원발명을 실시함으로써 기술발전을 촉진하여 산업발전에 이바지할 수 있어 보호할 가치가 충분히 있다.

도 1 은 본 발명에 적용된 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법을 나타낸

흐름도.

도 2 는 본 발명 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 1ml을 Nude mouse 견갑골 피하

에 주입한 사진.

도 3 은 본 발명 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 1ml을 Nude mouse 견갑골 피하

에 주입 9주 후의 방사선 촬영사진.

도 4 는 본 발명 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물 1ml을 Nude mouse 견갑골 피하

에 주입 9주 후의 조직염색 사진.

도 5 는 토끼의 전완부에 10mm의 골절을 낸 후 본 발명 뼈 재생용 콜라겐 젤

조성물 주입 후 3주, 9주째 방사선 촬영 사진.

도 6 은 토끼의 전완부에 15mm의 골절을 낸 후 본 발명 뼈 재생용 콜라겐 젤

조성물 주입 후 3주, 9주째 방사선 촬영 사진.

Claims (5)

1. 동물의 조직으로부터 골수를 채취하여 유핵세포를 분리하는 유핵세포 분리단계; 및

   상기 유핵세포와 제1형 콜라겐(collagen) 그리고 아파타이트(apatite)의 생체기질성분을 상호 혼합하는 단계;로 이루어지는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법.
2. 청구항 1 에 있어서,

   상기 유핵세포 분리단계에서 분리된 세포는 자기유래 유핵세포임을 특징으로 하는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법.
3. 청구항 2 에 있어서,

   상기 분리된 자기유래 유핵세포는 동물의 골수에서 2∼5mm의 골수를 채취하여 세척공정을 거쳐 유핵세포를 분리함을 특징으로 하는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법.
4. 청구항 1 에 있어서,

   상기 생체기질성분은 콜라겐 말단의 텔로펩타이드(telopeptides)를 제거한 제1형 콜라겐과 아파타이트를 사용함을 특징으로 하는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법.
5. 청구항 4 에 있어서,

   상기 제1형 콜라겐은 1Ⅹ10⁶~4Ⅹ10⁶ 개의 뼈 형성 능이 있는 유핵세포 현탁액 0.106ml 당 0.24ml, 아파타이트는 26.93mg 비로 첨가됨을 특징으로 하는 뼈 재생용 콜라겐 젤 조성물의 제조방법.

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