KR20100006600A

KR20100006600A - 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로함유하는 고혈압의 예방 및 치료용 조성물

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Publication number: KR20100006600A
Application number: KR1020080066784A
Authority: KR
Inventors: 허길원; 김광우; 남정숙; 최종원; 최용석; 어명희; 김옥선; 조순영
Original assignee: 강릉원주대학교산학협력단
Priority date: 2008-07-10
Filing date: 2008-07-10
Publication date: 2010-01-21

Abstract

본 발명은 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 본 발명의 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물은 고혈압 동물모델의 혈중 혈압 저하 및 혈중, 동맥, 심장, 폐, 신장조직의 안지오텐신변환효소(ACE)의 감소 효과를 나타냄으로써, 고혈압의 예방 및 치료용 약학조성물 또는 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

고등어, 분획 건조 분말, 추출물, 혈압, 안지오텐신변환효소, 고혈압

Description

고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 치료용 조성물{A composition comprising a dried powder of Mackerel fraction or extract thereof for preventing and treating hypertension}

본 발명은 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

[문헌 1] 문현경, 박정현. 2001년도 국민건강영양조사 자료를 이용한 고혈압 유무에 따른 식생활 비교 및 평가. 한국영양학회지, 40(4), pp.347-361, 2007

[문헌 2] 장유경, 권종숙, 조여원, 김영혜. 임상영양학. 신광출판사, 2005

[문헌 3] 이기원, 명춘옥, 박영심, 박태선, 남혜원, 김은경, 장미라. 한국인의 식생활 100년 평가(Ⅱ). 신광출판사, 1998

[문헌 4] 김은경, 남혜원, 박영심, 명춘옥, 이기완. 생활주기영양학. 신광출판사, 2005

[문헌 5] Marklund S, Marklund G. Involvement of the superoxide anion radical in the autoxidation of pyrogallol and a convenient assay for superoxide dismutase. Eur J Biochem. 47(3), 469-74, 1974

[문헌 6] Joshua, M.T., Robert, W.S.,The American Journal of Medicine., 114, pp588-598, 2003; Ondetti, M.A., Rubin, B., Cushman, D.W.,Science., 196, pp441, 1997

[문헌 7] 유성은 등, Study on the development of new antihypertensives. 한국화학연구원, pp.370, 1993

[문헌 8] Krege, J.H., Hodgin, J.B., Hagaman, J.R. and Smithies, O., A nonivasive computerized tail-cuff system for measuring blood pressure in mice, Hypertension, 25(5), 1111-1115, 1995

[문헌 9] Cushman, D.W. and Cheung, H.S., Specthrophotometric assay and propertiesof the angiotensin I converting enzyme. Life Sci. 7, 633-639, 1968

[문헌 10] Gorski, T.P., and Campbell, D.J., Angiotensin-Converting Enzyme determination in plasma during therapy with converting enzyme inhibitor. Two Methods Compared, CLIN. CHEM. 37(8), 1390-1393, 1991

혈압이란 혈관 내에서 혈액이 흐를 때 혈관 벽에 나타나는 압력을 말하며, 일반적으로 혈압이라 하면 동맥혈압을 말한다. 혈압은 심장이 수축할 때의 혈압인 최대혈압과 확장할 때의 혈압인 최소혈압을 측정한다. 혈압은 늘 일정하지는 않다. 건강한 사람에 있어서의 혈압도 아침에는 낮고 오후에는 높아지며, 운동, 식사나 추위 등으로 올라가고 잠을 자면 떨어진다. 또한 나이가 많아질수록 혈압은 상승하고, 폐경 이전의 여성은 남성보다 혈압이 낮으나 폐경 이후(갱년기)에는 남성보다도 급격히 높아지는 경향이 있다. 고혈압은 만성 순환기계 질환 중 발생빈도가 가장 높은 질환으로 최근 그 발생빈도가 증가하고 있는 추세이다(문현경, 박정현. 2001년도 국민건강영양조사 자료를 이용한 고혈압 유무에 따른 식생활 비교 및 평가. 한국영양학회지, 40(4), pp.347-361, 2007). 또한 고혈압은 비교적 증상이 없는 편이지만 뇌졸중, 심부전, 관상동맥질환 등 치명적인 합병증을 유발할 수 있기 때문에 보다 적극적인 환자 관리와 치료가 요구되고 있다. 일반적으로 고혈압은 발생원인에 따라 일차성 고혈압과 이차성 고혈압으로 분류되고 있으며 본태성 고혈압으로 일컬어지고 있는 일차성 고혈압은 특별한 원이이 없이 혈압의 상승이 유발된다(장유경, 권종숙, 조여원, 김영혜. 임상영양학. 신광출판사, 2005). 현재까지 본태성 고혈압의 발생 기작은 확실하게 밝혀지지 않고 있으나 다양한 유전적 요인과 음주, 흡연, 스트레스, 과다한 식염섭취, 비만, 나이 등의 환경적 요인이 주 원인으로 고혈압 환자의 대부분이 본태성 고혈압에 속하며 성인병의 주요 질환으로서 그 유병율이 증가하고 있는 실정이다(이기원, 명춘옥, 박영심, 박태선, 남혜원, 김은경, 장미라. 한국인의 식생활 100년 평가(Ⅱ). 신광출판사, 1998).

전세계적으로 심혈관 질환은 사망의 주요 원인 중 하나로, 심혈관 질환의 예방을 위해서는 위험 요인을 조기에 제거하고 관리하는 것이 중요하다. 그 중 가장 일 반적이고 필수적인 것이 고혈압 치료이며, 고혈압이 떨어지면 치명적, 비치명적 뇌졸중 및 관동맥질환이 감소하는 것이 임상연구에서 밝혀지면서 적극적인 혈압조절의 중요성이 강조되고 있다. 혈압강하 효과가 강력할수록 뇌졸중, 주요 심혈관 질환 등의 상대적 위험도가 유의하게 감소한다. 따라서 최근에 고혈압을 치료하는 것이 매우 중요한 요소로 떠오르고 있다(김은경, 남혜원, 박영심, 명춘옥, 이기완. 생활주기영양학. 신광출판사, 2005).

고혈압은 주로 RAS(renin-angiotensin system)에 의한 생리학적 기전으로 설명되고 있다. 안지오텐신 Ⅰ(Angiotensin Ⅰ)은 혈압상승에 중요한 역할을 하는 안지오텐신 Ⅱ(angiotensin Ⅱ (ang Ⅱ))의 전구체역할을 하며 안지오텐신 전화 효소(angiotensin converting enzyme, ACE)에 의해 대부분 Ang Ⅱ로 전환된다. 특히, Ang Ⅱ는 안지오텐신 Ⅱ-타입 1-수용체(angiotensin Ⅱ-type 1 (AT1)-receptor)와 결합하여 혈관수축과 알도스테론의 분비를 증가시킴으로써 직접적으로 혈압상승에 관여하는 물질로 알려져있다(Marklund S, Marklund G. Involvement of the superoxide anion radical in the autoxidation of pyrogallol and a convenient assay for superoxide dismutase. Eur J Biochem. 47(3), 469-74, 1974).

오늘날 고혈압 치료제로 널리 사용되고 있는 약물로는 에날라프 릴(enalapril), 캅토프릴(captopril), 조페노프릴(zofenopril), 리시노프릴(lisinopril) 같은 ACE 저해제와 로사르탄(losartan), 칸다사르탄(candasartan), 일베사르탄(irbesartan) 등과 같은 AT1-수용체 차단제가 있다(Joshua, M.T., Robert, W.S.,The American Journal of Medicine., 114, pp588-598, 2003; Ondetti, M.A., Rubin, B., Cushman, D.W.,Science., 196, pp441, 1997). 그러나 이러한 약제들은 미각이상, 백혈구 감소, 혈관부종, 간기능이상 및 마른기침 등의 부작용이 많다(유성은 등, Study on the development of new antihypertensives. 한국화학연구원, pp.370, 1993).

그러므로 치료효과가 우수하고 인체에 무해한 천연물을 이용한 고혈압에 의한 질환의 예방 및 치료용 조성물의 개발이 절실히 요구된다.

이에 본 발명자는 삼면이 바다인 우리나라에서 손쉽게 구할 수 있는 고등어를 이용하여 공해유발, 유기용매 추출조작 및 버리는 부분없이 각 부위를 분획하여, 혈압을 상승시켜 고혈압(hypertension)을 유도하는 물질로 알려진 아세트산납(lead acetate)를 섭취케한 고혈압쥐에 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 투여하여 고혈중 혈압 저하 및 혈중, 동맥벽, 심장, 폐, 신장조직의 안지오텐신변환효소(ACE)의 감소 효과를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 “고등어 분획”은 고등어의 전체 몸통, 살, 내장, 머리, 지느러미, 뼈, 꼬리, 연골, 껍질, 근육, 눈, 및 아가미로 구성되는 군으로부터 하나 이상 선택된 부위, 바람직하게는 전체 몸통, 살, 내장, 머리, 지느러미, 뼈 및 꼬리로 구성되는 군으로부터 하나 이상 선택된 부위, 보다 바람직하게는 전체 몸통 또는 살로부터 분획함을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 “고혈압”은 문맥고혈압(portal hypertension), 임신고혈압(pregnancy-induced hypertension), 심장성고혈압(heart hypertension), 내분비성 고혈압(endocrine hypertension), 신장고혈압(renovascular hypertension), 굴혈관고혈압(sinusoidal hypertension), 신성 고혈압(renal hypertension), 동맥성 고혈압(arterial hypertension), 신혈관성고혈압(renovascular hypertension) 및 폐고혈압(pulmonary hypertension)으로 이루어진 군으로 선택된 하나 이상의 질환, 바람직하게는 동맥성 고혈압, 심장성 고혈압, 폐고혈압 및 신장성고혈압으로 이루어진 군으로 선택된 하나 이상의 질환, 보다 바람직하게는 동맥성 고혈압을 포함하는 것임을 특징으로 한다.

상기 고등어 분획물의 약학조성물은 총 중량에 대하여 0.1 내지 50 중량%로 사용이 가능하다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 하기와 같은 공정으로 수득가능하다.

본 발명의 고등어 분획 건조 분말은 동해, 남해, 서해 등의 인근 해역 또는 태평양, 대서양 등의 원양 해역에서 포획한 고등어의 이물질 및 염분을 물로 세척하여 제거하는 제 1단계; 상기 고등어를 전체 몸통, 살, 내장, 머리, 지느러미, 뼈, 꼬리, 연골, 껍질, 근육, 눈 및 아가미 등의 분획들로 나누어 절단하는 공정을 거쳐 각 분획물을 얻는 제 2단계; 상기 각 분획물을 진공동결 건조법, 일광 건조법 등의 건조법을 수행하는 제 3단계 공정을 포함하는 제조공정을 통하여 본원 발명의 고등어 분획 건조분말을 수득할 수 있으며;

본 발명의 고등어 분획 추출물은 상기 공정의 제 2단계의 각 분획물을 압축, 마쇄 또는 믹서기를 통한 추출액을 얻는 추출법 및/또는 물, 알콜, 주정 등의 인체에 무해한 추출용매를 이용한 당업계에 잘 알려진 추출방법, 예를들어, 물에 상기 분획물을 넣고 약 12시간 내지 48시간, 바람직하게는 20시간 내지 40시간동안, 60℃ 내지 150℃, 바람직하게는 80℃ 내지 120℃에서 가열 후, 잔사를 제거하는 공정을 통하여 얻은 추출액을 얻는 공정을 추가로 수행한 후에 상기 각 추출물을 여과지로 여과하는 제 3단계 공정을 포함하는 제조공정을 통하여 본원 발명의 고등어 분획 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기의 제조공정으로 얻어진 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨,말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 활성 성분에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름,에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 활성성분의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 활성성분은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 활성성분은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 함유하는 고혈압의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 건강기능식품은 법률(건강기능식품법)이 규정한 바에 따라, 인체 특정 질병을 예방, 그 증상의 완화, 또는 특정 질병의 치료에 도움을 주기 위한 목적으로 인체에 투여되는 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다.

본 발명은 고혈압의 예방 및 개선효능을 갖는 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품첨가제를 함유한 건강보조식품 또는 식품첨가제를 제공한다.

본원에서 정의되는 “식품학적으로 허용가능한 식품첨가제”는 이미 당업계에 공지된 식품에 미량으로 첨가되는 성분들, 예를 들어, 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함함을 특징으로 한다.

본 발명의 건강보조식품은 건강 음료, 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다.

본 발명의 활성 성분을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

또한, 본 발명이 추구하는 치료 및 예방 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 고혈압의 예방 및 개선효능을 갖는 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 함유한 식품첨가제를 제공한다.

이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 활성 성분의 양은 일반적으로 본 발명의 건강 기능 식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 활성 성 분을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한점이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다.

상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

그밖에 본 발명의 건강보조식품 또는 그 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명은 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물은 고혈압 동물모델의 혈중 혈압 저하 및 혈중, 동맥, 심장, 폐 및 신장의 안지오텐신변화효소를 유의적으로 감소시킴으로써 항고혈압 효과를 나타내므로, 상기 조성물은 고혈압의 예방 및 치료용 약학조성물 또는 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 참고예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

참고예 1. 실험 재료의 준비

실험동물모델 선정

실험동물은 (주)대한바이오 링크로부터 분양받아 동물사내의 명암(12시간 light/dark cycle), 습도(55-60%) 및 온도(24±2℃)는 자동으로 조절되는 ECRS(Environmental controlled rearing system DJ-201D, Daejong instruments, Korea)을 사용하여 2주 가량 충분하게 적응시켜 사육한 체중 200±10g의 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐(SPF)를 사용하였고, 실험 시간 전 24시간 동안 물만 주고 절식하였으며, 이때 효소 활성의 일중 변동을 고려하여 실험동물을 일정시간(오전 10:00-12:00) 내에서 처치하였다.

실시예 1. 고등어의 각각의 부위별 분획물 제조

1-1. 고등어의 분획 건조 분말

고등어(Scomber japonicus)는 체장 31.0±4.2 cm, 체중 503.0±52.4 g으로 2007년 10월 동해연안에서 수확하여 강릉시 주문진 수협으로부터 냉동된 상태로 제공받았다. 냉동된 시료를 해동 후 이물질과 염분을 세척하여 제거한 후 고등어의 전체 몸통, 살, 내장, 머리+꼬리+뼈로 각각 4개의 분획으로 나누어, 진공동결건조(Vaccum Freeze Dryer, PVIFD30A, 한국 일산사)하여 50 메쉬(mesh)로 분쇄하여 고등어의 전체 몸통(이하 ‘K-1’이라 함), 살(이하 ‘K-2’라 함), 내장(이하 ‘K-3’라 함), 머리+꼬리+뼈(이하 ‘K-4’라 함)를 수득하여 하기 실험예에 사용하였다 .

1-2. 고등어의 분획 추출물

상기 1-1에서 수득한 동결건조한 고등어 각 분획 500g을 물 50L에 혼합 한 후, 약 36시간동안 100℃에서 혼합액을 가열하면 고등어 각 분획에 포함된 성분들이 녹여나오게 되는데, 이 때 자유로운 증발을 위해 용기의 상단부를 열어 물 상당량을 증발로 제거한다. 이러한 가열 공정을 거치면 고등어의 살 부위는 대부분은 액상에 녹아 들어가 최종적으로 농도가 짙고 점도가 높은 액상의 추출물이 생성되는데 뼈 등의 고형성분 및 잔존물 일부는 용기 밑바닥에 침전물로 남아 있게 된다. 가열 공정이 끝나면 추출물을 상온으로 식힌 후, 여과지(3M)를 이용하여 여과한 다음, 여액을 회전감압농축기 (EYELA FDU-1100)를 이용하여 감압 농축하여 고등어의 전체 몸통 추출물(이하 ‘KE-1’이라 함) 35g, 살 추출물(이하 ‘KE-2’라 함) 35g, 내장 추출물(이하 ‘KE-3’라 함) 35g, 머리+꼬리+뼈 추출물(이하 ‘KE-4’라 함) 35g을 얻었다.

실험예 1. 아세트산납으로 유발된 고혈압 쥐의 혈압 측정

상기 실시예 1에서 수득한 분획물들의 혈압의 감소효과를 측정하기 위하여 기존 문헌에 기재된 테일-커프(tail-cuff)방법을 응용하여 하기와 같은 실험을 하였다(Krege, J.H., Hodgin, J.B., Hagaman, J.R. and Smithies, O., A nonivasive computerized tail-cuff system for measuring blood pressure in mice, Hypertension, 25(5), 1111-1115, 1995).

음용수에 고혈압(aterial hypertension)을 유도하는 물질로 알려진 아세트산납(lead acetate : 이하 ‘LAT’라 함) 100 ppm(0.48 mmol/L)를 첨가하여 임의로 8주간 섭취케 하여 고혈압쥐를 유도하였고, 실시예에서 수득한 고등어의 각 분획을 1% 트윈 80(tween 80)에 용해한 후 생리식염수로 희석하여 고혈압 유도 마지막 4주째부터 각 시료 100, 200 mg/kg을 경구로 투여 하였다. 혈압측정을 위한 적응 훈련은 시료 투여 약 2주전부터 매일 30분간씩 실시하였다. 실험 시작 직전과 실험개시 후 1주일 간격으로 37-38℃로 보온이 되도록 약 5-10분간 가온한 후 보정기로 고정하여 꼬리동맥의 수축기 혈압을 혈압 측정기 유닛(blood pressure measurement unit, LE 5002 Storage Pressure Meter, Lefica, Spain)를 이용하여 측정 하였다. 수축기 혈압은 동물이 정지상태가 있을때 6회이상 측정하여 평균값을 산출하였으며, 혈압측정은 정기적으로 일주일 간격으로 오전 10:00-12:00시 사이에 실시하였 다.

실험결과, 표 1에 나타내는 바와 같이 LAT(lead acetate)에 의하여 고혈압을 유발시킨 대조군의 혈압은 98.6 mmHg으로 다른 시료 쥐보다 다소 높게 나타났으며, 정상군 쥐와 고등어 각 분획 투여 쥐의 혈압은 차이가 나타나지 않았다. 실험 2주째 대조군의 혈압은 정상군의 혈압보다 13.4% 증가 했으며, 혈압이 증가한 상태에서 K-1. K-2, K-3, K-4의 경구 투여시 약간의 혈압 감소는 있었지만 유의적인 차이는 나타나지 않았다(p<0.05). 실험 4주째에 대조군의 혈압은 120.7 mmHg로 나타났으며 정상군의 혈압보다 28.1% 증가하였다. 농도 의존적으로 투여 용량 100, 200 mg/kg에 따라 대조군과 비교시 유의적으로 감소하였다(p<0.05). 즉, LAT에 의하여 고혈압을 유발시킨 대조군의 혈압에 비하여 200 mg/kg 투여농도에서 K-1 및 K-2는 109.3 mmHg 및 105.1 mmHg로 각각 9.44% 및 12.9%로 감소하였다. 실험 8주째 대조군의 혈압은 정상군보다 약 2배의 증가를 보인 171.2 mmHg었고, 농도-의존적으로 투여 용량 100 mg/kg과 200 mg/kg에 따라 K-1에서 168.4 mmHg, 165.1 mmHg, K-2에서 167.3 mmHg, 154.6 mmHg, K-3에서 178.2 mmHg, 176.6 mmHg, K-4에서 170.9 mmHg, 165.3 mmHg로 나타났다. KE-1. KE-2, KE-3, KE-4를 투여한 실험군에서는 K-1. K-2, K-3, K-4보다 낮은 감소효과를 보임으로써, 유의적인 차이가 없었다.

따라서, 혈압의 증가가 가장억제 되었던 부분은 실험 4주째와 마찬가지로 K-1 및 K-2 부분이었으며 특히 K-2가 200 mg/kg 경구 투여구에서 혈압감소가 가장 크게 나타남으로써 하기 실험예의 시료로 사용하였다.

처리군	농도 (㎎/㎏)	혈압 (SBP)(mmHg)
처리군	농도 (㎎/㎏)	0(주)	2(주)	4(주)	6(주)	8(주)
정상군		95.7±4.3^nop	93.2±4.5^p	94.2±3.9^op	96.5±7.8^nop	95.5±3.4^nop
대조군		98.6±5.0^mnop	105.7±3.5^klmn	120.7±5.7ⁱ	159.2±7.4^defg	171.2±5.8^abc
K-1 (몸통)	100	94.2±3.2^op	103.2±4.6^lmnop	114.9±5.3^ijk	152.7±9.6^g	168.4±6.3^abcd
K-1 (몸통)	200	96.7±8.7^nop	102.9±3.2^lmnop	109.3±2.9^jklm	150.2±8.7^gh	165.1±5.2^cdefg
K-2 (육)	100	95.3±6.5^nop	102.2±4.0^lmnop	110.6±3.1^ijkl	149.9±6.2^gh	167.3±5.1^bcd
K-2 (육)	200	94.2±7.4^op	100.3±2.9^lmnop	105.1±2.4^klmno	141.2±5.6^h	154.6±5.6^fg
K-3 (내장)	100	96.9±9.3^nop	104.5±4.9^klmnop	119.3±2.8^ij	156.3±9.2^efg	178.2±4.9^a
K-3 (내장)	200	94.7±5.3^nop	103.6±5.0^lmnop	120.1±3.0ⁱ	155.1±8.3^efg	176.6±3.7^ab
K-4 (머리+꼬리+뼈)	100	96.1±4.9^nop	105.1±4.1^klmno	118.3±2.3^ij	160.4±8.6^defg	170.9±5.3^abc
K-4 (머리+꼬리+뼈)	200	95.6±4.8^nop	104.9±3.8^klmno	119.9±2.8ⁱ	159.8±9.4^defg	165.3±4.5^cde
KE-1 (몸통)	100	95.6±5.2^op	103.8±3.5^lmnop	116.9±4.8^ijk	153.7±7.6^g	169.3±6.3^abcd
KE-1 (몸통)	200	96.9±7.6^nop	103.9±2.6^lmnop	110.3±3.6^jklm	152.3±8.1^gh	167.2±5.2^cdefg
KE-2 (육)	100	96.1±8.5^nop	102.6±1.8^lmnop	110.9±2.1^ijkl	150.2±6.5^gh	167.9±5.1^bcd
KE-2 (육)	200	93.9±2.4^op	101.3±3.9^lmnop	106.3±3.6^klmno	142.3±6.6^h	155.6±5.6^fg
KE-3 (내장)	100	97.9±8.3^nop	104.9±6.1^klmnop	120.3±5.8^ij	157.7±8.2^efg	179.5±3.9^a
KE-3 (내장)	200	95.1±8.3^nop	104.3±5.4^lmnop	122.8±3.0ⁱ	156.2±8.9^efg	177.2±4.7^ab
KE-4 (머리+꼬리+뼈)	100	96.7±3.7^nop	106.3±3.7^klmno	120.5±4.3^ij	161.6±8.5^efg	171.6±4.3^abc
KE-4 (머리+꼬리+뼈)	200	96.3±5.4^nop	105.9±2.4^klmno	121.2±2.8ⁱ	160.2±9.4^defg	166.5±3.5^cde

실험예 2. 아세트산납으로 유발된 고혈압 쥐의 안지오텐신변환효소( ACE : Angiotensine converting enzyme ) 저해 효과

고혈압쥐의 K-2(육)의 안지오텐신변환효소(ACE) 감소효과를 측정하기 위하여 기존 문헌에 기재된 실험방법을 응용하여 하기와 같은 실험을 하였다(Cushman, D.W. and Cheung, H.S., Specthrophotometric assay and propertiesof the angiotensin I converting enzyme. Life Sci. 7, 633-639, 1968; Gorski, T.P., and Campbell, D.J., Angiotensin-Converting Enzyme determination in plasma during therapy with converting enzyme inhibitor. Two Methods Compared, CLIN. CHEM. 37(8), 1390-1393, 1991).

효소액의 제조는 상기 실험에 1의 실험동물을 CO₂ 가스로 마취시키고 신장, 폐, 심장및 흉부대동맥을 1cm가량 적출하였다. 적출한 각 장기를 완충액(Trizma-HCl buffer (pH 7.8, 30 mM KCl, 5 mM magnesium acetate, 0.25 M sucrose, 1% triton 100 함유))에 일정량(100 mL) 마쇄한 후 5,000×g에서 15분간 원심분리한 상등액을 사용하였으며, 상기의 실험은 항상 4℃에서 행하였다. 효소액 1mL에 시료(50 μg/mL) 및 0.5 mL의 기질완충액(100mmol)에 2.0mmol의 FAPGG(2-furanacryloyl-L-phenylalaninlglycine))을 넣고서 37℃에서 3분간 효소의 활성도를 305 nm에서 측정하여 아래의 식에서 산출하였다.

활성도 = (O.D / min×Vt×1000)/(0.5×Vs)

Vt : Final volume

Vs : Sapmle volume

O.D: FAPGG hydrolysis

2-1. 고혈압쥐의 혈중 안지오텐신변환효소 ( ACE ) 측정

실험결과, 표 2에 나타내는 바와 같이 실험 2주째에서는 혈중 안지오텐신변환효소(이하 ‘ACE’ 이라 함) 활성을 약간 억제하였지만 유의적으로 감소시키진 못했다(p<0.05). 실험 4주째에 혈중 ACE 활성은 LAT 유도한 대조군 쥐가 243.2 μmol/min/L로 정상군 169.3 μmol/min/L보다 43.65% 높아졌고, K-2의 농도를 각각 100, 200 mg/kg로 경구 투여한 결과 혈중 ACE 활성이 각각 210.2 μmol/min/L 및 198.2 μmol/min/L로 각각 13.6% 및 18.5%씩 낮추는 효과를 보였다. 실험 6주째부터 시료 전 구간이 ACE 활성이 감소되면서 실험 8주째에 대조군는 169.3 μmol/min/L로 K-2의 농도가 100 mg/kg일때, 165.3 μmol/min/L로 나타나 2.4% ACE 활성을 낮추었다. 따라서 K-2는 혈압을 유의적으로 감소시킴을 확인할 수 있었다.

처리군	농도 (㎎/㎏)	ACE의 활성도(μmol/min/L)
처리군	농도 (㎎/㎏)	0(주)	2(주)	4(주)	6(주)	8(주)
정상군		168.7±20.3^b	173.2±24.6^b	169.3±33.4^b	172.4±27.4^b	170.8±33.0^b
대조군		183.6±14.7^b	200.3±20.1^ab	243.2±25.7^a	198.3±19.8^ab	169.3±25.8^b
K-2 (육)	100	194.2±30.1^b	189.3±15.7^b	210.2±20.6^ab	182.7±29.6^b	165.3±36.3^b
K-2 (육)	200	189.6±21.6^b	180.5±23.2^b	198.2±32.9^ab	190.2±18.7^b	171.3±29.4^b

2-2. 고혈압쥐의 동맥벽 및 심장 조직의 안지오텐신변환효소 ( ACE ) 측정

실험결과, 표 3에 나타내는 바와 같이 동맥벽 및 심장에서 투여 용량(100, 200 mg/kg)에 따른 차이는 없었지만 LAT 유도한 대조군에 비해 ACE 활성을 낮추는 효과를 나타내었다. 또한, 심장조직에서는 투여 용량 200 mg/kg에서 0.066 μmol/min/L로 LAT 유도 혈압 쥐에 비해 7.0% ACE 활성을 낮추는 효과를 나타내었다. 따라서 K-2는 동맥벽과 심장에서 혈압을 유의적으로 감소시킴을 확인할 수 있었다.

처리군	농도 (㎎/㎏)	ACE의 활성(μmol/min/g)
		동맥벽(Arota)			심장(Heart)
		0	2	4	0	2	4
정상군		0.50±0.09^b	0.53±0.07^b	0.55±0.06^b	0.042±0.003^c	0.041±0.005	0.043±0.004^c
대조군		0.49±0.07^b	0.59±0.05^b	0.73±0.05^a	0.038±0.002^c	0.061±0.004^b	0.071±0.006^a
K-2 (육)	100	0.51±0.06^b	0.58±0.04^b	0.70±0.06^a	0.041±0.005^c	0.065±0.005^ab	0.068±0.005^ab
K-2 (육)	200	0.48±0.05^b	0.56±0.07^b	0.71±0.08^a	0.040±0.004^c	0.060±0.003^b	0.066±0.006^ab

2-3. 고혈압쥐의 폐 및 신장 조직의 안지오텐신변환효소 ( ACE ) 측정

실험결과, 표 4에 나타내는 바와 같이 4주째에 폐 및 신장에서의 ACE 활성은 K-2의 농도를 각각 100, 200 mg/kg씩 달리한 결과 7.3 μmol/min/L, 7.1 μmol/min/L로 대조군에 비하여 6.4%와 9.0%로 ACE 활성이 낮아졌다. 신장에서는 대조군에 비하여 K-2의 농도가 100mg/kg에서는 1.31 μmol/min/L로 대조군에 비하여 3.0%로 감소하였으며, 200 mg/kg에서 1.28 μmol/min/L로 대조군에 비하여 5.2% ACE 활성을 낮추었다.

따라서, K-2는 폐 및 신장에서 혈압을 유의적으로 감소시킴을 확인할 수 있었다. 또한, 실험 4주, 8주 동안에 K-2는 혈중, 동맥벽, 심장, 폐 및 신장 모두에서 ACE 활성에 미치는 효과를 관찰한 결과 안지오텐신전환효소 활성을 뚜렷히 억제함 확인하였다.

처리군	농도 (㎎/㎏)	ACE의 활성도(μmol/min/g)
		폐(Lung)			신장(Kidney)
		0	2	4	0	2	4
정상군		4.5±0.53^de	4.0±0.67^e	4.6±0.54^cde	0.48±0.09^c	0.52±0.05^c	0.49±0.08^c
대조군		4.8±0.35^bcde	5.8±0.78^bc	7.8±0.91^a	0.50±0.07^c	1.53±0.09^a	1.35±0.06^b
K-2 (육)	100	4.6±0.61^cde	5.7±0.55^bcd	7.3±0.65^a	0.47±0.06^c	1.48±0.05^a	1.31±0.09^b
K-2 (육)	200	4.7±0.42^cde	5.9±0.82^b	7.1±0.58^a	0.52±0.07^c	1.49±0.07^a	1.28±0.08^b

Claims

고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 치료용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 고등어 분획은 고등어의 전체 몸통, 살, 내장, 머리, 지느러미, 뼈, 꼬리, 연골, 껍질, 근육, 눈 및 아가미로 구성되는 군으로부터 하나 이상 선택된 부위로부터 분획함을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 고혈압은 문맥고혈압(portal hypertension), 임신고혈압(pregnancy-induced hypertension), 심장성고혈압(heart hypertension), 내분비성 고혈압(endocrine hypertension), 신장고혈압(renovascular hypertension), 굴혈관고혈압(sinusoidal hypertension), 신성 고혈압(renal hypertension), 동맥성 고혈압(arterial hypertension), 신혈관성고혈압(renovascular hypertension) 및 폐고혈압(pulmonary hypertension)으로 이루어진 군으로 선택된 하나 이상의 질환을 포함함을 특징으로 하는 약학조성물.
상기 고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물은 약학조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 50 중량%으로 포함하는 약학조성물.
고등어 분획 건조 분말 또는 그 추출물을 유효성분으로 함유하는 고혈압의 예방 및 개선용 건강기능식품.
제 5항에 있어서, 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제인 건강기능식품.