KR20090111679A - 황기추출물을 함유한 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 미백 화장료에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 미백 유효성분으로서 황기추출물을 함유하는 미백화장료에 관한 것이다. 본 발명의 황기추출물은 미백제 총 건조중량에 대하여 0.0001 ~ 10.0 중량%의 함량으로 함유되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 의한 황기추출물을 함유하는 미백화장료는 티로시나아제 효소의 활성을 억제하는 작용과 그에 따른 멜라닌 색소의 생성을 억제하는 작용에 의한 미백효과가 우수할 뿐 아니라, 피부에 자극이 없고 안전하다.

황기추출물, 미백, 화장료,

Description

황기추출물을 함유한 미백용 화장료 조성물 {Whitening cosmetic composition including the extract of Astragali Radix}

본 발명은 피부의 미백을 위한 화장료에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 미백 유효성분으로서 황기추출물을 함유하는 미백화장료에 관한 것이다.

피부색은 주로 피부 세포 속에 함유된 멜라닌 색소의 양에 따라 좌우되는데, 멜라닌 색소가 많을수록 피부가 검게 된다. 이 멜라닌 색소는 표피의 기저층에 존재하는 멜라노사이트라는 세포에서 티로시나아제에 의해 티로신으로부터 생성된다.

멜라닌 색소 침착은 자외선으로부터 피부를 보호하는 자연스러운 인체의 방어 메커니즘이다. 그러나 햇빛, 호르몬 변화, 염증, 약제 등 여러 가지 원인에 의해 멜라닌이 과잉 생산될 경우, 인체에 기미, 주근깨를 형성하고 피부노화를 촉진하며 피부암의 유발에 관여하는 것으로 알려졌다.(G. C. Romero, et al., J. Clin . Invest , 99, pp.635, 1997)

이제까지 피부에서의 색소침착 방지는 주로 다음의 몇 가지 관점에서 연구되어 왔다. 첫째로, 멜라닌 합성의 주효소인 티로시나아제 활성을 조절하기 위하여 티로시나아제 합성 저해물질이나 티로시나아제의 기질에 대한 길항물질을 개발한다. 둘째로, 멜라닌 생합성 장소인 멜라노사이트의 기능을 저하시키기 위해 멜라노사이트에 독성을 나타내는 물질을 개발한다. 셋째로, 도파의 산화방지를 위해 도파 환원 물질을 개발한다. (A. L. Soon and S. J. Lee, Korea Beautymagazine, 6, 239, 2000)

멜라닌 과잉침착은 인체의 병리적 문제의 원인이 되기도 하지만, 미용적인 측면의 문제로도 인식되고 있어, 멜라닌 형성 억제에 대한 많은 연구가 진행되어 왔다. 멜라닌 생합성 저해제는 의약품, 화장품, 식품 등에서 피부질환 치료제, 식품갈변방지제, 피부미백제 등에 적용되고 있다. 기존에는 멜라닌의 생성과정을 억제하는 미백원료로 아스콜빈산, 코직산, 알부틴, 하이드로퀴논 등이 사용되고 있다. 그러나 이상의 미백원료는 강한 미백효과에도 불구하고 제품 안전성이 낮다는 문제가 있다. (K. H. Jung and M. S. Thesis, Konkuk University, Seoul, Korea, 2002)

따라서 천연식물의 추출물은 이용한 미백원료는 효과와 제품의 안전성으로 인해서 날로 각광을 받고 있는 실정이다.

황기는 콩과(Legumninosae)에 속하는 다년생초본인 단너삼(Astragalus membranaceus BUNCE)의 뿌리로 한반도 각지에서 자생하는데, 자당, 글루쿠론산, 점액질, 아미노산, 콜린, 베타인, 엽산 등을 함유한다. 신농본초경에 최초로 기록되어 있는데, 예로부터 독성과 부작용이 없다고 알려졌으며, 한국, 중국 및 아시아 각지의 전통 의약품으로 다양하게 활용되어 왔다. 하지만 피부에 관하여서는 새살을 돋게 한다는 효능(生肌)만 있을 뿐 미백과 관련하여서는 연구가 전무한 실정이다.

본 발명자는 종래의 미백물질들이 갖는 문제점을 해결하고 보다 우수한 미백효과를 발휘하는 원료를 찾기 위해 천연물 중에서 과색소 침착 방지에 유효한 물질들을 검색한 결과 황기추출물이 티로시나아제의 저해 물질일 뿐만 아니라 멜라닌 색소의 생성을 억제한다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 뛰어난 미백 효과를 가지면서 안전성이 높은 황기추출물이 함유된 미백화장료를 제공하는 것이다.

본 발명의 황기추출물로 티로시나아제 활성저해실험과 도파 산화활성 저해실험 및 멜라닌생성 저해실험을 수행하였다. 그 결과 황기추출물이 티로시나아제의 활성을 저해하고 도파산화의 활성을 저해하며, 아울러 멜라닌의 생성을 억제하는 효능을 가짐을 확인하여, 본 발명의 황기추출물이 미백화장료로서 유용함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 황기추출물은 티로시나아제의 활성 및 도파 산화활성을 저해하고 멜라닌 생성을 억제하여, 황기추출물을 함유하는 본 발명의 조성물은 미백화장료로 유용하게 이용될 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 황기로부터 추출한 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 미백화장료를 제공한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 황기추출물을 황기에서 추출하는 과정을 살펴보면, 황기의 잡질을 제거하고 채집, 음건한 다음 마쇄하여 분말화한 후, 황기 시료 중량의 약 2 내지 20배에 달하는 부피의 물 및 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C₁ 내지 C₄의 저급 알콜의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 에탄올을 가하여 20 내지 50℃에서 약 3시간 내지 48일, 바람직하게는 20시간 내지 30시간 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여 2 내지 5회, 바람직하게는 2 ~ 3회 추출한 후에, 이를 통상의 방에 따라 여과, 농축 및 건조하여 각각의 추출물을 얻을 수 있다. (Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis. 3rd Ed. pp 6-7, 1998).

상기와 같은 방법으로 얻어진 황기추출물의 미백 효능을 확인하여 본 결과, 본 발명의 황기추출물은 티로시나아제 저해 및 멜라닌 생성 저해 효과가 탁월함을 확인하였다.

본 발명은 미백 효능을 갖는 황기추출물을 포함하는 화장료를 제공한다. 본 발명의 황기추출물을 함유하는 미백제는 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없는데, 예를 들면, 화장수, 에센스, 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 및 바디오일 등과 같은 기초제품 화장료나 파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등과 같은 색조제품 화장료의 제형을 가질 수 있다.

본 발명의 미백화장료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물 을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 방법에 따라 제조할 수 있다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 황기추출물의 제조

황기의 수피 및 잎 1 ㎏을 건조, 분쇄하여 에탄올 5,000 ml를 가한 후 상온에서 24시간 동안 교반하여, 진공여과에 의해 상층액을 회수하였다. 이 과정을 3회 반복하여 상층액을 모은 후, 감압농축하여 수득한다.

실험예 1. 황기추출물 투여에 의한 티로시나아제 활성저해시험

실시예 1에서 수득된 황기추출물에 대하여 티로시나아제 저해효과를 측정하였다. 티로시나아제는 인체 내의 멜라닌 생합성 경로에서 가장 중요한 초기 속도 결정단계에 관여하는 효소로서 많은 미백 성분이 이 효소를 억제하는 작용기전을 가지고 있다. 황기추출물 시료를 0.1 M 인산염완충액 (pH 6.5)에 녹여 희석한 것을 시료액으로 하였다 (25 mg/ml, 50 mg/ml). 시험관에 0.1 M 인산염완충액 200 ㎕와 시료액 20 ㎕ 그리고 머쉬룸 티로시나아제 (1500 ~ 2000 U/mL) 20 ㎕를 순서대로 넣는다. 이 용액에 1.5 mM 티로신 액 40 ㎕를 넣고 37℃에서 10-15분간 반응시킨 다. 그리고 이것을 엘리자 리더기 (ELISA reader)를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정한다. 대조군은 공시료액으로 시료액 대신 0.1 M 인산염완충액을 넣는다. 그 결과 하기 도 1에 나타난 바와 같이, 대조군이 100.0 ± 1.7%의 티로시나아제 활성을 나타내었으며 황기추출물 25 mg/ml 투여군과 50 mg/ml 투여군은 각각 43.4 ± 5.7%, 33.1 ± 2.0%의 티로시나아제 활성을 나타내었다. 이처럼 황기추출물의 투여는 대조군에 비해 현저한 티로시나아제 저해 효과를 가지고 있음을 확인하였다 (p<0.05).

실험예 2. 황기추출물 투여에 의한 도파산화활성저해시험

이 시험방법은 멜라닌 합성과정의 속도결정단계를 촉매하는 티로시나아제의 DOPA 산화반응에 대한 활성저해를 측정하여 미백 성분의 효과를 평가하는 것이다. 실시예 1에서 수득된 황기추출물을 0.1 M 인산염완충액 (pH 7.0)에 녹여 희석한 것을 시료액으로 하였다 (25 mg/ml, 50 mg/ml). 시험관에 0.1 M 인산염완충액 850 ㎕와 시료액 50 ㎕ 그리고 머쉬룸 티로시나아제 (1500 ~ 2000 U/㎖)액 50 ㎕를 순서대로 넣고 37℃에서 6분 동안 반응시킨다. 이 용액에 0.06 mM L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine)액 50 ㎕를 넣은 다음 37℃에서 1 분 동안 반응시킨다. 실험 종료 후 엘리자 리더기 (ELISA reader)를 이용하여 475 nm에서 흡광도를 측정한다. 공시료액으로 시료액 대신 0.1 M 인산염완충액 (pH 7.0)을 넣는다. 실험 결과 하기 도 2에 나타난 바와 같이, 대조군이 100.0 ± 2.6%의 도파산화 활성을 나타내었으며 황기추출물 25 mg/ml 투여군과 50 mg/ml 투여군은 각각 95.2 ± 10.0%, 86.2 ± 3.7%, 의 도파산화 활성을 나타내었다. 이와 같이, 황기추출물의 투여는 대조군에 비해 현저한 도파산화 활성저해 효과를 가지고 있음을 확인하였다 (p<0.05).

실험예 3. 황기추출물의 투여에 의한 멜라닌 색소의 생성 저해 효과 측정

이 시험방법은 세포 배양시 세포내의 멜라닌 생성양을 공시료액과 비교하는 것이다. 본 실험은 B16 멜라노사이트를 적량의 에프비에스 (FBS, fetal bovine serum)가 함유된 디엠이엠 (DMEM) 배지로 6-well plate에 well당 1×10⁵ 개로 접종한 후 5% CO_{2 ,} 37℃하에서 세포가 well 바닥에 약 80% 이상 부착될 때까지 배양한다. 배양 후 배지를 제거하고 실시예 1에서 수득된 황기추출물 시료가 100 μg/ml의 농도로 희석된 배지로 교체한 후 5% CO_2, 37℃하에서 일정시간 배양한다. 배지를 제거한 세포를 피비에스 (PBS, phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수한다. 회수된 세포는 헤마토사이토미터를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000-10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠렛 (pellet)을 얻는다. 이 세포 펠렛 (pellet)은 60℃에서 건조한 후 10% 디엠에스오 (DMSO)가 함유된 1 M 수산화나트륨액 100 ㎕을 넣어 60ㅇ℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻는다. 이 액을 가지고 엘리자 리더기 (ELISA reader)로 490 nm에서 흡광도를 측정하여 일정 단백질당 멜라닌양을 구한다. 대조군으로는 세포에 시료 대신 피비에스 (PBS)를 동량 넣어주었으며, 양성대조군으로는 코직산을 시료 와 같은 농도로 넣어주었다. 실험 결과, 하기 도 3에 나타난 바와 같이, 대조군이 100.0 ± 2.2%의 멜라닌 생성을 나타내었으며 코직산을 투여한 군은 87.4 ± 0.1의 멜라닌 생성을 나타내었고, 황기추출물을 투여한 군은 83.4 ± 0.6%의 멜라닌 생성을 나타내었다. 이와 같이 황기추출물은 대조군에 비해 유의하게 B16 멜라노사이트의 멜라닌생성을 억제할 수 있으며 같은 양의 코직산을 사용하는 경우보다 멜라닌 생성량이 적음을 알 수 있다 (p<0.05).

실험예 4. 황기추출물의 투여에 의한 세포 생존률 측정

크리스탈 바이올렛 에세이 (Crystal violet assay)로 황기추출물의 B16 멜라노사이트에 대한 독성여부를 평가한다. 황기추출물 시료를 처리하여 (100 μg/ml) 세포를 배양한 후 배지를 조심스럽게 제거하고 PBS로 세척한다. 이를 제거한 후에 크리스탈 바이올렛 용액(0.2% crystal violet/2 ml 에탄올, 98 ml 정제수 첨가) 50 ㎕를 96 well에 넣는다. 실온에서 10 분간 배양하고 세포가 떨어지지 않게 주의하면서 정제수로 세척한다. 1% SDS (sodium dodecyl sulfate) 100 ㎕를 넣어 염색된 색소를 녹이고 570 nm에서 흡광도를 측정한다. 실험 결과, 하기 도 4에 나타난 바와 같이, 대조군이 100.0 ± 6.8%의 생존률을 나타내었으며 황기추출물 투여군은 101.0 ± 6.4%의 세포 생존률을 나타내었다. 따라서 황기추출물은 세포 생존률에 영향을 주지 않음을 확인할 수 있었다.

본 발명의 황기추출물을 포함하는 조성물의 제형예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제형예 1. 유연화장수(스킨로션)

하기의 표와 같이 황기추출물을 함유하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(단위: 중량%)
황기추출물	1.0
글리세린	5.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
피이지 1500	1.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
이. 디. 티. 에이-2NA	0.02
벤조페논-9	0.04
소듐 히아루로네이트	5.0
에탄올	10.0
옥틱도데세스-16	0.2
폴리솔베이트 20	0.2
향	0.03
파라-M	0.01
그린 #3	0.003
증류수	잔량
합계	100

제형예 2. 영양화장수

하기의 표와 같이 황기추출물을 함유하는 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(단위: 중량%)
황기추출물	3.0
글리세릴 스테아레이트 SE	1.5
스테아릴알콜	1.5
라놀린	1.5
폴리솔베이트 60	1.3
솔비탄스테아레이트	0.5
경화식물유	1.0
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
트리옥타노인	2.0
디메치콘	0.8
초산토코페롤	0.5
카르복시비닐폴리머	0.12
글리세린	5.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
소듐히아루로네이트	5.0
트리에탄올아민	0.12
향	0.02
파라-M	0.01
그린 #3	0.004
증류수	잔량
합계	100

제형예 3. 에센스

하기의 표와 같이 황기추출물을 함유하는 에센스를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(단위: 중량%)
황기추출물	3.0
글리세린	10.0
베타인	5.0
피이지 1500	2.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
이. 디. 티. 에이-2Na	0.02
벤조페논-9	0.04
히드록시에틸 셀룰로오스	0.1
소듐히아루로네이트	8.0
카르복시비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.18
올틸도데칸올	0.3
옥틸도데세스-16	0.4
에탄올	6.0
향	0.03
파라-M	0.01
그린 #3	0.003
증류수	잔량
합계	100

제제예 4. 영양크림

하기의 표와 같이 황기추출물을 함유하는 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(단위: 중량%)
황기추출물	3.0
친유형 모노스테아린산 글리세린	2.0
세테아릴 알콜	2.2
스테아린산	1.5
밀납	1.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄스테아레이트	0.6
경화식물류	1.0
스쿠알란	3.0
광물유	5.0
트리옥타노인	5.0
디메티콘	1.0
소듐마그네슘실리케이트	0.1
글리세린	5.0
베타인	3.0
트리에탄올아민	1.0
소??히아루로네이트	4.0
향	0.02
파라-M	0.01
그린 #3	0.004
증류수	잔량
합계	100

제형예 5. 맛사지크림

하기의 표와 같이 황기추출물을 함유하는 맛사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(단위: 중량%)
황기추출물	3.0
친유형 모노스테아린산 글리세린	1.5
스테아릴 알콜	1.5
스테아린산	1.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄스테아레이트	0.6
이소스테아릴이소스테레이트	5.0
스쿠알란	5.0
광물유	35.0
디메치콘	0.5
히드록시에틸실룰로오스	0.12
글리세린	6.0
트리에탄올아민	0.7
향	0.02
파라-M	0.01
그린 #3	0.004
증류수	잔량
합계	100

제형예 6. 팩

하기의 표와 같이 황기추출물을 함유하는 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(단위: 중량%)
황기추출물	1.0
폴리비닐알콜	15.0
셀룰로오스검	0.15
글리세린	3.0
피이지 1500	2.0
사이크로데스트린	0.15
DL-판테놀	0.4
알란토인	0.1
그리시리진산모노암모늄	0.3
니코틴아미드	0.5
에탄올	6.0
피이지 40 경화피마자유	0.3
향	0.02
파라-M	0.01
그린 #3	0.004
증류수	잔량
합계	100

도 1은 황기추출물을 투여했을 때 유의하게 티로시나아제의 활성을 저해함을 나타낸 그래프이다.

도 2는 황기추출물을 투여했을 때 유의하게 도파 산화의 활성을 저해함을 나타낸 그래프이다.

도 3은 황기추출물을 B16 멜라노사이트에 투여했을 때 멜라닌 색소 생성량이 유의하게 감소하였음을 나타낸 그래프이다.

도 4는 통상군과 황기추출물을 B16 멜라노사이트에 투여했을 때 세포 생존률이 동일함을 나타낸 그래프이다.

Claims (4)

1. 황기추출물이 미백화장료 총 건조중량에 대하여 0.0001 ~ 10.0 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 미백화장료.
2. 제 1항에 있어서, 에탄올 또는 메탄올 추출 용매로 추출된 황기추출물이 미백화장료 총 건조중량에 대하여 0.0001 ~ 10.0 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 미백화장료.
3. 제 1항에 있어서, 에탄올 또는 메탄올과, 물과의 혼합추출용매로 추출된 황기추출물이 미백화장료 총 건조중량에 대하여 0.0001 ~ 10.0 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 미백화장료.
4. 제 1항에 있어서, 제형이 기초제품 화장료, 색조제품 화장료로서 황기추출물이 미백화장료 총 건조중량에 대하여 0.0001 ~ 10.0 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 미백화장료.

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