KR20090057074A - 혈관형성 억제 및 혈관형성 관련 질환 치료 방법 - Google Patents

혈관형성 억제 및 혈관형성 관련 질환 치료 방법 Download PDF

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KR20090057074A
KR20090057074A KR1020097006446A KR20097006446A KR20090057074A KR 20090057074 A KR20090057074 A KR 20090057074A KR 1020097006446 A KR1020097006446 A KR 1020097006446A KR 20097006446 A KR20097006446 A KR 20097006446A KR 20090057074 A KR20090057074 A KR 20090057074A
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닐 피. 데사이
부옹 트리에우
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아브락시스 바이오사이언스, 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물 (예컨대, 단백질 함유 조성물)을 투여함으로써 개체 내에서 혈관형성을 억제하는 방법을 제공한다. 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이지만 일부 실시태양에서 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다. 본원에 기재된 방법은 노인성 황반 변성, 당뇨성 망막증, 류마티스성 관절염, 건선 및 암과 같은 혈관형성 관련 질환을 치료하기에 유용하다.
콜히친, 티오콜히친, 알부민, 혈관형성

Description

혈관형성 억제 및 혈관형성 관련 질환 치료 방법 {METHODS OF INHIBITING ANGIOGENESIS AND TREATING ANGIOGENESIS-ASSOCIATED DISEASES}
본 출원은 혈관형성 억제 및 혈관형성 관련 질환 치료 방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 출원은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 유효량의 조성물을 투여함으로써 혈관형성을 억제하고 혈관형성 관련 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
혈관형성은 새로운 혈관을 형성하는 고도로 조절된 생물학적 과정이다. 비제어된 혈관형성은 많은 질환을 일으킬 수 있다. 이러한 질환 중 하나는 노인성 황반변성 ("AMD")이며, 이는 황반 및 망막 색소 상피와 같은 눈의 각종 구조들 내로 새로운 혈관이 침입하는 것을 특징으로 한다. 혈관형성이 관련된 다른 질환은 관절 활막의 혈관에서 혈관형성이 발생되는 류마티스성 관절염이다. 새로운 혈관 네트워크를 형성하는 것에 더하여, 내피 세포는 판누스 성장 및 연골 파괴를 일으키는 반응성 산소종 및 인자를 방출한다. 비제어된 혈관형성은 또한 당뇨성 망막증, 건선, 재협착증 및 신생혈관 녹내장과 같은 질환과 관련된다.
추가로, 혈관형성은 또한 종양 형성 및 전이에 관여한다. 예를 들어, 지름이 약 2 밀리미터보다 커지는 종양은 독자적인 혈액 공급원을 얻어야 하며, 새로운 모세혈관의 성장을 유발시킴으로써 이를 달성하는 것으로 알려졌다. 이러한 새로운 혈관이 종양 내에 삽입된 후, 이들은 종양의 성장에 필수적인 영양소와 성장 인자를 제공하고 종양 세포의 전이를 촉진시킨다.
혈관형성 관련 질환을 치료하기 위하여 혈관형성을 구체적으로 표적화하는 항혈관형성제가 개발되어 왔다. 예를 들어, 미국 특허 6,919,309호; 미국 특허 출원 공개 2006/0009412호; 및 PCT 출원 공개 WO04/027027 및 WO05/117876가 참조된다. 또한, 확립된 혈관계를 표적으로 하는 작용제 (소위 "혈관 표적제(Vascular Targeting Agent)" 또는 VTA)가 또한 개발되었다. 이러한 작용제는 내피 세포의 미세소관 세포골격을 선택적으로 약화시켜, 결국 혈관을 폐색시키고 혈류를 중단하는 세포의 형태를 심하게 변화시킴으로써 작용하는 것으로 생각된다. 예를 들어, WO 2005/113532가 참고된다.
티오콜히친 이량체는 종래에 설명된 소수성 화합물이다. 예를 들어, 미국 특허 6,627,774호가 참고된다. 이러한 화합물은 이중 작용 메카니즘, 즉, 항미세소관 활성 및 토포이소머라제 I 억제 활성을 갖는다 (문헌[Raspaglio et al., Biochem. Pharmacol. 2005, 69(1): 113-21]). 암 치료용 세포독성 화학요법제로서 티오콜히친 이량체의 나노입자 알부민-결합 제제 Nab-5404 및 Nab-5676가 개발되었다. 예를 들어, 문헌[Bernacki et al., Proc . Amer . Assoc . Cancer Res ., vol. 46, 2005 #2390] 및 PCT 특허 출원 PCT/US2006/006167이 참조된다. Nab-5404를 24 mg/kg, qd x 5로 정맥내 투여한 경우, A121 난소 종양 이종이식에서 종양을 완전히 퇴행시켜 치유할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
본원에서 참조된 모든 문헌, 특허, 특허 출원 및 공개된 특허 출원의 개시는 본원에 전체로서 참고로 도입된다.
발명의 요약
본 발명은 한 측면에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 유효량의 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)의 양 (즉, 투여시 포함량)이 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 mg/m2 신체표면 중 어느 것 미만인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 유효량의 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)의 양은 약 0.05, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 또는 0.6 mg/kg 중 어느 것 미만인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 약 3주 당 1회, 2주 당 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회 또는 매일 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 (중단되거나 중단되지 않고) 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 개월 또는 그 이상 동안 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 정맥내, 안내(intraocular), 동맥내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로 중 어느 것으로 투여된다.
본원에 기재된 방법에서 사용되는 조성물은 추가로 담체 단백질과 같은 생체적합성 중합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 유효량의 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)의 양은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 mg/m2 신체표면 중 어느 것 미만인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 유효량의 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)의 양은 약 0.05, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 또는 0.6 mg/kg 중 어느 것 미만인 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 함유 조성물은 계면활성제를 실질적으로 함유하지 않는다 (예컨대, 무함유). 일부 실시태양에서, 조성물은 약 3주 당 1회, 2주 당 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회 또는 매일 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 (중단되거나 중단되지 않고) 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 개월 또는 그 이상 동안 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 정맥내, 안내, 동맥내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로 중 어느 것으로 투여된다.
본원에 기재된 방법에서 사용되는 조성물은 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 입자 (예컨대, 미세입자 또는 나노입자)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 나노입자를 포함하는 유효량의 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)의 양은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 mg/m2 신체표면 중 어느 것 미만인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 나노입자를 포함하는 유효량의 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)의 양은 약 0.05, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 또는 0.6 mg/kg 중 어느 것 미만인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 약 3주 당 1회, 2주 당 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회 또는 매일 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 (중단되거나 중단되지 않고) 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 개월 또는 그 이상 동안 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 정맥내, 안내, 동맥내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로 중 어느 것으로 투여된다.
일부 실시태양에서, 조성물내 입자의 평균 지름은 약 200 nm 이하이다. 일부 실시태양에서, 입자 함유 조성물은 실질적으로 계면활성제를 함유하지 않는다 (예컨대, 무함유). 일부 실시태양에서, 조성물 내 단백질 (예컨대, 알부민) 대 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 중량비는 약 18:1 이하, 예컨대 9:1 이하이다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 담체 단백질 (예컨대, 알부민)로 코팅된다. 일부 실시태양에서, 조성물내 입자의 평균 지름은 약 200 nm 이하이고, 조성물은 실질적으로 계면활성제를 함유하지 않는다 (예컨대, 무함유). 일부 실시태양에서, 조성물 내 입자 (특히 나노입자)의 평균 지름은 약 200 nm 이하이고, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 단백질 (예컨대, 알부민)로 코팅된다. 상기 특징들의 다른 조합도 또한 고려된다. 일부 실시태양에서, 입자 조성물은 Nab-5404이다. 다른 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 입자 조성물은 또한 하나 이상의 상기 특징들을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 콜히친, 티오콜히친 또는 이들의 유도체의 2개의 (동일하거나 상이한) 서브유닛을 포함한다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 하나 이상의 티오콜히친 서브유닛을 포함한다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 2개의 티오콜히친 서브유닛을 포함한다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 하기 화학식 (I)의 화합물이다.
Figure 112009018701392-PCT00001
식 중, 각 서브유닛의 B는 메톡시 또는 메틸티오기이고, R2는 메톡시, 히드록실 또는 R3과 함께 메틸렌디옥시이고, R3은 메톡시, 히드록실 또는 R2와 함께 메틸렌디옥시이고, X는 연결기이다. 일부 실시태양에서, X는 하나 이상의 탄소 원자를 함유한다.
일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 하기의 화학식 (II)의 화합물이다.
Figure 112009018701392-PCT00002
식 중, B1은 메톡시 또는 메틸티오기이고, B2는 메톡시 또는 메틸티오기이고, n은 0 내지 8의 정수이고, Y는 CH2 기 이거나, n이 1인 경우 또한 화학식 NH인 기일 수 있다. 일부 실시태양에서, n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 중 어느 하나이다 (예컨대, 이들로 구성된 군으로부터 선택됨). 일부 실시태양에서 n은 1이다. 일부 실시태양에서, n은 1이고, Y는 NH이다. 일부 실시태양에서 n은 2이다.
일부 실시태양에서, B1 및 B2는 둘 다 메톡시기이다. 일부 실시태양에서, B1 및 B2는 둘 다 메틸티오기이다. 일부 실시태양에서, B1은 메톡시기이고 B2는 메틸티오기이다. 일부 실시태양에서, B1은 메틸티오기이고 B2는 메톡시기이다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 IDN5404, IDN5676, IDN5800 및 IDN5801 중 어느 것이다 (일부 실시태양에서는 이들로 구성된 군으로부터 선택됨). 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 IDN5404이다. 일부 실시태 양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 IDN5676이다.
일부 실시태양에서, 알부민과 IDN5404, IDN5676, IDN5800 및 IDN5801 중 하나를 포함하는 나노입자를 포함하는 조성물 (이하, 각각 "Nab-5404," "Nab-5676," "Nab-5800" 및 "Nab-5801"으로 나타냄)을 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 및 Nab-5801 중 어느 것)를 개체에 투여하는 것을 포함하고, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 및 Nab-5801 중 어느 것)는 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이며, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 및 Nab-5801 중 어느 것)의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 유효량의 Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 및 Nab-5801 중 어느 것)를 개체에 투여하는 것을 포함하고, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 및 Nab-5801 중 어느 것)의 양은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 mg/m2 신체표면 중 어느 것 미만인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 유효량의 Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 및 Nab-5801 중 어느 것)를 개체에 투여하는 것을 포함하고, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 및 Nab-5801 중 어느 것)의 양은 약 0.05, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 또는 0.6 mg/kg 중 어느 것 미만인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 약 3주 당 1회, 2주 당 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회 또는 매일 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 (중단되거나 중단되지 않고) 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 개월 또는 그 이상 동안 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 정맥내, 안내, 동맥내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로 중 어느 것으로 투여된다.
본원에 기재된 방법은 일반적으로 혈관형성 관련 질환의 치료에 유용하다. 일부 실시태양에서, 혈관형성 관련 질환은 예를 들어, 안질환 (예컨대, 황반변성, 당뇨성 망막증 또는 신생혈관 녹내장), 심혈관계 질환 (예컨대, 재협착증 및 아테롬성경화증), 피부 질환 (예컨대, 건선) 및 관절염 (예컨대, 류마티스성 관절염)을 비롯한 비종양성 혈관형성 관련 질환이다.
예를 들어, 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물은 비종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물은 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 입자 (예컨대, 나노입자)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 비종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다. 일부 실시태양에서, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)를 개체에 투여하는 것을 포함하고, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)는 비종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다.
일부 실시태양에서, 혈관형성 관련 질환은 예를 들어, 암 및 양성 종양을 비롯한 종양 관련 질환이다. 본원에 기재된 방법으로 치료될 수 있는 암은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 유방암, 직장결장암, 직장암, 비소세포 폐암, 비호지킨 림프종 (NHL), 신세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 카포시 육종, 카르시노이드 암종, 두경부암, 흑색종, 난소암, 중피종, 신경교종, 교아세포종, 신경아세포종 및 다발성 골수종을 포함한다. 일부 실시태양에서, 암은 충실성 종양 (예컨대, 전이성 충실성 종양)이다. 예로써, 암의 치료 방법이 이하에 추가로 기재된다.
예를 들어, 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이며, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 상응하는 최대 허용 투여량 ("MTD")의 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% 중 어느 것 미만인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이고, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이며, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 상응하는 MTD의 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% 중 어느 것 미만인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 입자 (예컨대, 나노입자)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404)를 포함하는 입자 (예컨대, 나노입자)를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 상응하는 MTD의 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% 중 어느 것 미만인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)를 개체에 투여하는 것을 포함하고, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-58Ol)는 암을 치료하는 데 유효한 양이며, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)를 개체에 투여하는 것을 포함하고, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)는 암을 치료하는 데 유효한 양이며, Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800 또는 Nab-5801)의 양은 Nab-5404 (또는 Nab-5676, Nab-5800, 또는 Nab-5801)의 상응하는 MTD의 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% 중 어느 것 미만인, 개체 내 암의 치료 방법이 제공된다.
또한 본원에 기재된 방법에 유용한 제약 조성물, 단위 투여량, 키트 및 제품이 제공된다.
본원에 기재된 다양한 실시태양의 하나, 일부 또는 모든 특성이 결합되어 본 발명의 다른 실시태양을 형성한다는 것이 이해될 것이다.
도면의 간단한 설명
도 1A는 MX-1 유방암종 세포를 사용한, 미세소관 형성에 대한 Nab-5404의 효과를 나타낸다. 도 1B는 MX-1 유방암종 세포를 사용한, 미세소관 형성에 대한 Nab-5676의 효과를 나타낸다.
도 2A 내지 2C는 대조군 비히클 (PBS, 2A), 0.6 μg/ml Nab-5404 (2B) 및 μg/ml Nab-5676 (2C)로 처리한 후의 MX-1 세포 내 염색된 미세소관 네트워크의 현미경사진을 나타낸다.
도 3은 미세혈관/세관 형성으로 평가한 Nab-5404, Nab-5676 및 CA4P의 항혈관형성 활성을 나타낸다. 세포는 1일에 다양한 화합물과 함께 인큐베이션하였고, 염색된 12일에 염색되었다. 도 3A 내지 3D는 대조군 비히클 (3C), 0.01 μg/ml Nab-5404 (3A), 0.01 μg/ml Nab-5676 (3B) 및 0.01 μg/ml CA4P (3D)로 처리한 후의 세관 형성 현미경사진을 제공한다.
도 4는 0.0 내지 100 μg/ml의 농도 범위에 걸쳐 Nab-5404, Nab-5676 및 CA4-P로 처리된 세포에 대한 세관 길이의 비교를 나타낸다.
도 5는 미세혈관/세관 형성 또는 파괴로 평가한 Nab-5404 및 Nab-5676의 항혈관형성 활성을 나타낸다. 세포는 8일에 다양한 화합물과 함께 인큐베이션하였고, 11일에 염색하였다. 도 5A 내지 5C는 대조군 비히클 (5A), 0.01 μg/ml Nab-5404 (5B) 및 0.01 μg/ml Nab-5676 (5C)로 처리한 후 세관 형성의 현미경사진을 제공한다. 도 4D는 0.0 내지 10 μg/ml의 농도 범위에 걸쳐 Nab-5404 및 Nab-5676으로 처리된 세포에 대한 세관 길이의 비교를 나타낸다.
도 6은 미세혈관/세관 형성 또는 파괴로 평가한 Nab-5404의 항혈관형성 활성 을 나타낸다. 세포는 11일에 다양한 농도의 화합물과 함께 인큐베이션하였고, 12일에 염색되었다. 도 6A 내지 6F는 대조군 비히클 (6A), 0.001 μg/ml Nab-5404 (6B), 0.01 μg/ml Nab-5404 (6C), 0.1 μg/ml Nab-5404 (6D), 1 μg/ml Nab-5404 (6E) 및 10.0 μg/ml Nab-5404 (6F)로 처리한 후 세관 형성 및 파괴의 현미경사진을 제공한다.
도 7은 미세혈관/세관 형성 또는 파괴로 평가한 Nab-5676의 항혈관형성 활성을 나타낸다. 세포는 11일에 다양한 농도의 화합물과 함께 인큐베이션하였고, 12일에 염색되었다. 도 7A 내지 7F는 대조군 비히클 (7A), 0.001 μg/ml Nab-5676 (7B), 0.01 μg/ml Nab-5676 (7C), 0.1 μg/ml Nab-5676 (7D), 1 μg/ml Nab-5676 (7E) 및 10.0 μg/ml Nab-5676 (7F)로 처리한 후 세관 형성 및 파괴의 현미경사진을 나타낸다.
도 8은 미세혈관/세관 형성 또는 파괴로 평가한 CA4P의 항혈관형성 활성을 나타낸다. 세포는 11일에 다양한 농도의 화합물과 함께 인큐베이션하였고, 12일에 염색되었다. 도 8A 내지 8C는 각각 0.01, 0.1, 및 1.0 μg/ml CA4P로 처리한 후 세관 형성 및 파괴의 현미경사진을 나타낸다.
도 9는 미세혈관 또는 세관 형성 또는 파괴로 평가한 Nab-5404, Nab-5676 및 CA4P의 항혈관형성 활성의 비교를 나타낸다. 세포는 11일에 화합물과 함께 인큐베이션하였고, 12일에 염색되었다. 이 도면은 0.0 내지 10 μg/ml의 농도 범위에 걸쳐 각 화합물로 처리된 세포에 대한 세관 길이를 나타낸다.
도 10은 2 주기의 저투여량/고투여량 스케쥴을 사용한, 이종이식 뮤린 모델 에서 HT-29 종양 성장에 대한 Nab-5404의 효과를 나타낸다. 1차 주기 (0 내지 14일) 투여는 1.7, 2.5 또는 3.4 mg/kg이었고, 2차 주기 (15 내지 30일) 투여는 20, 30 또는 40 mg/kg 이었다. 도 1OA는 0일부터 40일까지의 평균 종양 부피 (n=10)를 나타낸다. 도 1OB는 0 내지 40일에 걸쳐 마우스의 평균 중량 손실 퍼센트를 나타낸다.
도 11은 2 주기의 저투여량/고투여량 스케쥴을 사용한, 이종이식 뮤린 모델에서 HT-29 종양 성장에 대한 Nab-5676의 효과를 나타낸다. 1차 주기 (0 내지 14일) 투여는 1.7, 2.5 또는 3.4 mg/kg이었고, 2차 주기 (15 내지 30일) 투여는 20, 30 또는 40 mg/kg이었다. 도 11A는 0일부터 40일까지의 평균 종양 부피 (n=10)를 나타낸다. 도 11B는 0 내지 40일에 걸쳐 마우스의 평균 중량 손실 퍼센트를 나타낸다.
도 12는 이종이식 뮤린 모델에서 HT-29 종양 성장에 대한 CA4P의 효과를 나타낸다. HT-29 종양은 부피가 900 mm3가 된 후 100 mg/kg으로 처리하였다. 도 12A는 28일부터 41일까지의 평균 종양 부피 (n=10)를 나타낸다 (정사각형 = 비히클 대조군, 다이아몬드 = CA4P 처리). 도 12B는 28 내지 41일에 걸쳐 마우스의 평균 중량 손실 퍼센트를 나타낸다 (정사각형 = 비히클 대조군, 다이아몬드 = CA4P 처리).
발명의 상세한 설명
본 발명은 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물, 구체적으로, 티오콜히친 이량체의 알부민 함유 나노입자 제제, 보다 구체적으로, 시험관내(in vitro)에서 IDN-5404의 알부민 함유 나노입자 제제 ("Nab-5404") 및 IDN-5676의 알부민 함유 나노입자 제제 ("Nab-5676")가 미세혈관 형성을 억제하는데 효과적이고 확립된 미세혈관을 파괴한다는 본 발명자들의 관찰에 부분적으로 기초한다. 문헌[Trieu et al., 97th AACR Annual Meeting, Abstract No. 3823]. 이들 활성에 대한 IC50 수치는 조성물의 시험관내 세포독성 활성에 요구되는 것보다 현저하게 낮다. 본 발명자들은 추가로 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물, 구체적으로, 티오콜히친 이량체의 알부민 함유 나노입자 제제 (예컨대, Nab-5404 및 Nab-5676)가 조성물의 상응하는 최대 허용 투여량 (MTD)보다 훨씬 낮은 투여량으로 생체내(in vivo) 종양 성장을 예방하는데 효과적이라는 것을 관찰하였다. 이러한 관찰은 티오콜히친 이량체 또는 그의 유사체 (예컨대, 콜히친 이량체)를 포함하는 조성물이 그의 세포독성 효과와 독립적으로 항혈관형성 및 혈관 표적화 활성을 갖는다는 점을 의미한다. 유효하고 비세포독성인 양으로 투여된 경우, 조성물은 표적 조직에서 유의한 세포 사멸을 일으키지 않으면서 선택적으로 새로운 혈관의 성장을 표적화하고 혈류를 차단할 수 있다.
콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 유효하고 비세포독성인 양 (즉, 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 양)은 화합물의 세포독성 효과를 최소화하기 위하여 비종양성 혈관형성 관련 질환을 표적화하는데 바람직하다. 유효하고 비세포독성인 양은 또한 암을 치료하는데 유리하다. 세포독성제를 사용한 전통적인 화학요법은 전형적으로 작용제의 세포독성 효과를 최소화하기 위하여 작용제의 최대 허용 투여량과 동일하거나 유사한 양으로 수행된다. 그러나, 이러한 고투여량 스케쥴은 정 상 숙주 세포를 회복시키기 위하여 오랜시간 동안 비치료 기간을 필요로 한다. 한편, 종양 세포는 또한 비치료 기간 동안 성장을 재개할 수 있다. 이는 약물 내성 종양 세포 발생의 위험을 증가시킬 수 있다. 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 비세포독성 투여량 (즉, 양)은 치료 주기 동안 치료가 유의하게 중단되지 않도록 하기 때문에, 약물 내성이 발생되는 위험을 감소시킨다. 또한, 비세포독성 투여량은 약물로 인해 발생하는 부작용 및 외견적 전신성 독성 (예컨대, 중량 손실)이 발생할 가능성을 최소화한다.
따라서, 본 발명은 한 측면에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 혈관형성의 억제 (확립된 혈관신생 표적화 포함) 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 담체 단백질 (예컨대, 알부민) 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다.
다른 측면에서, 본 발명은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 비종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 비 종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양이다.
다른 측면에서, 본 발명은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 종양 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 종양 관련 질환의 치료 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다.
또한 본원에 기재된 방법에 유용한 제약 조성물, 단위 투여량, 키트 및 제품이 제공된다.
일반적으로 "조성물" 또는 "조성물들"은 본 발명의 조성물을 포함하며 발명의 조성물에 적용될 수 있다. 본 발명은 또한 본원에 기재된 성분을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
용어 "개체"는 인간을 비롯한 포유동물이다. 개체는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 인간, 소, 말, 고양이, 개, 설치류, 또는 영장류를 포함한다. 일부 실시태양에서, 개체는 인간이다. 일부 실시태양에서, 개체는 혈관형성 또는 혈관형성 관련 질환(들)을 연구하기 위한 실험용 동물 모델이다.
본 발명은 본원에 언급된 화합물의 에난티오머 및 부분입체이성질체를 비롯한 모든 입체이성질체를 포함한다. 입체화학이 구조상 명시적으로 나타나있지 않 으면, 개시된 구조는 모든 가능한 입체화학적 변이를 포함하는 것이다. 본 발명은 개시된 임의의 키랄 화합물의 모든 에난티오머, 실질적으로 순수한 좌선성 또는 우선성 형태, 또는 라세미 혼합물, 또는 임의의 비율의 에난티오머를 포함한다. 본 발명은 상기 화학식에서 언급된 화합물의 임의의 부분입체이성질체, 실질적으로 순수한 부분입체이성질체 형태 및 모든 비율의 혼합물을 포함한다. 본 발명은 또한 본원에서 언급된 화합물의 모든 수화물을 비롯하여 본원에서 언급된 화합물의 모든 용매화물을 포함한다. 본 발명은 또한 본원에서 언급된 화합물의 결정 및 비결정 형태를 비롯한 모든 다형체를 포함한다. 본 발명은 또한 본원에서 언급된 화합물의 모든 염, 특히 제약상 허용가능한 염을 포함한다. 본원에 개시된 화합물의 대사물질 및 전구약물도 또한 본 발명에 포함된다. 본원에 개시된 화합물의 모든 사용에 있어서, 본 발명은 또한 기재한 바와 같이 화합물의 입체화학, 에난티오머, 부분입체이성질체, 용매화물, 수화물, 다형체, 결정, 비결정, 염, 제약상 허용가능한 염, 대사물질 및 전구약물 변이체의 임의의 또는 모든 사용을 포함한다.
본원에 기재된 본 발명의 측면 및 실시태양은 측면 및 실시태양으로 이루어지고/이루어지거나 본질적으로 이루어지는 것을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
혈관형성의 억제 방법
본 발명은 한 측면에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물 (예컨대, 담체 단백질 함유 조성물)을 투여함으로써 개체 내 혈관형성을 억제하는 방법을 제공한다. 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이다. 그러나, 투여되는 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분하다.
본원에서 사용되는 "혈관형성"은 조직 또는 기관에서 새로운 혈관을 형성하는 과정을 나타낸다. 혈관형성은 전형적으로 내피 세포 및 백혈구에 의해서 방출된 효소에 의해 혈관 기저막이 미란(erosion)됨으로써 시작된다. 그 후, 혈관의 내강을 라이닝하는 내피 세포가 기저막을 통해 돌출된다. 혈관형성 자극은 내피 세포가 미란된 기저막을 통해 이동하는 것을 유발한다. 이동 세포는 모혈관의 "돌기(sprout)"를 형성하며, 여기서 내피 세포의 유사분열 및 증식이 일어난다. 내피 돌기는 서로 합쳐져 모세관 루프를 형성하고 새로운 혈관을 만들게 된다.
"혈관형성 억제"는 예를 들어 안조직, 심혈관계 조직, 피부 조직, 관절염성 조직 및 종양 조직을 비롯한 개체 내 하나 이상의 조직에서 혈관형성을 감소, 방해 또는 저해하는 것을 의미한다. 혈관형성의 억제는 혈관형성 과정의 하나 이상의 단계에 영향을 미침으로써, 예를 들어, 활성화 내피 세포의 이동 및 생존을 감쇠, 모혈관으로부터 세포의 "돌기화"를 방지, 및/또는 새로운 혈관 형성의 방지를 통하여 달성될 수 있다. 미세혈관의 밀도를 변화시키는 것도 또한 용어 "혈관형성 억제"에 포함된다. 용어 "혈관형성 억제"는 또한 확립된 혈관계를 파괴하는 것도 포함한다. "확립된 혈관계를 파괴한다"는 것은 혈관형성에 의해 형성되어 존재하는 혈관계를 폐색시키거나 용해시키거나 그 밖의 영향을 주는 능력을 의미한다. 혈관계의 파괴는 가역적이거나 비가역적일 수 있고, 부분적이거나 완전할 수 있다.
따라서, 본원에서 제공되는 방법은 하나 이상의 다음 측면을 포함한다: 내피 세포 이동의 억제 (예컨대, 감소, 방해 또는 방지), 모혈관으로부터 내피 세포 "돌기화"의 억제 (예컨대, 감소, 방해 또는 방지), 새로운 혈관 형성의 억제 (예컨대, 감소, 방해 또는 방지) 및 혈관형성에 의해서 형성된 확립된 혈관계의 표적화 (예컨대, 폐색, 파괴 또는 붕괴). 일부 실시태양에서, 개체 내 혈관 형성의 억제 (예컨대, 감소, 방해 또는 방지) 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 확립된 혈관계의 파괴 (예컨대, 폐색, 용해, 또는 그 외의 영향) 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 개체의 조직 내에서 미세혈관의 밀도를 감소시키는 방법이 제공된다.
"유효량"은 개체에 단일 또는 복수 용량으로 투여하여 개체 내에 원하는 효과를 제공하는 조성물의 양 또는 투여량을 나타낸다. 예를 들어, 조성물의 양이 개체 내 하나 이상의 조직에서 혈관형성 (예컨대, 혈관형성의 하나 이상의 측면)을 감소, 방해 또는 방지하기에 충분하면, 조성물은 "혈관형성을 억제하는데 유효한 양"이다. 치료의 맥락에서 사용되는 용어 "유효량"은 구체화된 장애, 상태 또는 질환을 치료하기에 충분한 양, 예컨대 하나 이상의 증상을 개선, 완화, 경감 및/또는 지연시키기에 충분한 화합물 또는 조성물의 양을 나타낸다. 유효량은 시험관내 및/또는 생체내에서 결정될 수 있다. 혈관형성 억제를 위한 조성물의 유효량 결정 방법은 당업계에 공지되어 있다.
일부 실시태양에서, 조성물의 양은 안조직 내 혈관형성의 억제에 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 심혈관계 조직 내 혈관형성의 억제에 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 피부 조직 내 혈관형성의 억제에 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 관절염성 조직 내 혈관형성의 억제에 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 종양 조직 내 혈관형성의 억제에 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 새로운 혈관 형성의 억제에 유효하다. 일부 실시 태양에서, 조성물의 양은 모혈관으로부터 내피 세포의 "돌기화" 억제에 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 내피 세포 이동의 억제에 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 확립된 혈관계를 파괴하는데 유효하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 혈관형성 (예컨대, 혈관형성의 임의의 하나 이상의 측면)을 약 5%, 10%, 20%, 40%, 50% 이상 중 어느 것 이상으로 억제하는데 유효하다.
조성물의 양이 콜히친 또는 티오콜히친 이량체가 개체 내에서 유의한 세포 사멸을 일으키기에 불충분한 양이면, 조성물은 "유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 양" (또한 "비세포독성 양"으로도 언급됨)이다. 세포독성은 이하의 하나 이상으로 측정될 수 있다. 예를 들어, 비세포독성 양은 시험관내 세포 생존율 분석에 기초하여 결정될 수 있다. 비세포독성 양은 시험관내 세포 생존율 분석에서 약 50% 이상의 세포 사멸을 일으키기에 불충분한 양일 수 있다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 시험관내 세포 생존율 분석에서 약 40% 이상, 30% 이상, 20% 이상, 10% 이상, 5% 이상, 4% 이상, 3% 이상, 2% 이상, 또는 1% 이상의 세포 사멸 중 어느 하나를 일으키기에 불충분할 수 있다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 시험관내 세포 생존율 분석에서 임의의 측정가능한 세포 사멸을 일으키기에 불충분할 수 있다. 시험관내 생존율 분석에 적합한 세포는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 종양 세포 (예컨대, MX-1 유방암종 세포주, HepG2 간암 세포주 및 HT-29 결장암종 세포주) 및 정상 세포 (예컨대, 원발성 래트 간세포)를 포함한다. 비세포독성 양은 또한 약물 독성의 생체내 분석에 기초하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 비세포독성 양은 생체내 세포독성 분석에서 시험 집단의 약 50% 이상을 사멸시키기에 불 충분한 양일 수 있다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 생체내 세포독성 분석에서 시험 집단의 약 40% 이상, 30% 이상, 20% 이상, 10% 이상, 5% 이상, 4% 이상, 3% 이상, 2% 이상 또는 1% 이상 중 어느 하나를 사멸시키기에 불충분하다. 일부 실시태양에서, 조성물의 양은 생체내 약물 독성 분석에서 시험 집단의 임의의 사멸을 일으키기에 불충분하다. 비세포독성 양은 또한 개체 내에서 외견적 전신성 독성 (예컨대, 중량 손실)을 일으키기 위해 요구되는 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양에 기초하여 결정될 수 있으며, 즉, 임의의 외견적 전신성 독성을 일으키지 않는다면 약물의 양은 비세포독성이다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 비세포독성 양은 약 15% 미만 (예를 들어, 약 10%, 8%, 5% 이하 중 어느 것 미만을 포함)의 중량 손실을 일으키는 양이다.
일부 실시태양에서, 각 투여에서 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 및 15 mg/m2 중 어느 것 미만이다. 예를 들어, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 약 0.25 mg/m2 신체표면 내지 약 15 mg/m2, 약 0.25 mg/m2 내지 약 10 mg/m2, 약 0.25 mg/m2 내지 약 8 mg/m2, 약 0.25 mg/m2 내지 약 4 mg/m2 및 약 0.25 mg/m2 내지 약 2 mg/m2 범위일 수 있다. 일부 실시태양에서, 각 투여에서 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 약 0.05, 0.08, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 또는 0.6 mg/kg 중 어느 것 미만이다. 예를 들어, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 약 0.05 mg/kg 내지 약 0.5 mg/kg, 약 0.08 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg, 및 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.2 mg/mg 범위일 수 있다.
일부 실시태양에서, 콜히친 및 티오콜히친 이량체는 중단되거나 중단되지 않는 오랜 투여 기간 (예컨대, 6 개월 이상) 동안 약물 내성을 일으키지 않는 양이다. 일부 실시태양에서, 콜히친 및 티오콜히친 이량체는 개체 내 유의한 부작용 (예컨대, 화학요법에 전형적으로 수반되는 부작용)을 일으키지 않는 양이다. 화학요법에 전형적으로 수반되는 부작용은 예를 들어, 탈수, 설사, 구역, 구토, 시력 손실 또는 교란 및 빈혈을 포함한다.
조성물의 투여 빈도는 이에 한정되지 않지만 적어도 약 3주 당 1회, 2주 당 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회 또는 매일 한번의 어느 빈도를 포함한다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 약 1주 미만, 예컨대 6, 5, 4, 3, 2 또는 1일 미만이다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 일정하다. 예를 들어, 투여는 매일, 매 2일, 매 3일, 매 4일, 매 5일, 또는 매주 수행될 수 있다. 일부 실시태양에서, 투여를 매일 2회, 매일 3회 또는 더욱 자주 수행할 수 있다.
조성물의 투여는 장기간에 걸쳐, 예컨대 약 1개월 내지 약 3년에 걸쳐 연장될 수 있다. 예를 들어, 투여 섭생법은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 30 및 36개월 중의 어느 기간에 걸쳐 연장될 수 있다. 일부 실시태양에서, 투여 스케쥴에서 중단이 없다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 약 1주 이하이다.
본원에 기재된 조성물은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 정맥내, 복강내, 안내, 동맥내, 폐내, 경구, 폐포내, 근육내, 기관내, 피하, 안내, 초내, 경피, 흉막경유, 동맥내, 국소, 흡입 (예를 들어, 분무제의 미스트로서), 점막내 (예컨대, 비측 점막을 통해), 피하, 경피, 위장, 관절내, 수조내, 심실내, 직장 (즉, 좌제를 통해), 질 (즉, 질좌제를 통해), 두개내, 요도내, 간내, 및 종양내를 비롯한 당업계의 임의의 경로를 통해 개체에 투여될 수 있다. 일부 실시태양에서, 조성물은 전신성으로 투어된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 국소적으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 정맥내, 안내, 동맥내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로 중 어느 것으로 투여된다.
상기 방법이 안조직 내 혈관형성의 억제에 관한 것이면, 조성물은 눈 또는 안조직에 직접 투여될 수 있다. 조성물은 점안약으로 눈에 국소적으로 투여될 수 있다. 조성물은 또한 눈 또는 눈과 관련된 조직에 주사되어 투여될 수 있다. 조성물은 안내 주사, 눈주위 주사, 망막하 주사, 초자체내 주사, 경중격 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하 주사, 테논낭하 주사, 안구후 주사, 눈둘레 주사, 또는 뒤공막곁 전달을 통해 투여될 수 있다. 조성물은, 예를 들어, 유리질, 방수, 공막, 결막, 공막과 결막 사이의 부위, 망막 맥락막 조직, 황반, 또는 개체의 눈 내 또는 그에 인접한 다른 부위로 투여될 수 있다. 망막 약물 전달을 위한 눈주위 경로의 예시적 설명을 위하여, 문헌[Periocular routes for retianl drug delivery, Raghava et al. (2004), Expert Opin . Drug Deliv, 1(1):99-114]이 참조된다. 조성물은 또한 이식물로서 개체에 투여될 수 있다. 바 람직한 이식물은 장시간에 걸쳐 화합물을 서서히 방출하는 생체적합성 및/또는 생분해성 서방형 제제이다. 약물 전달을 위한 안구 이식물은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 5,501,856호, 5,476,511호 및 6,331,313호가 참조된다. 조성물은 또한, 이에 한정되는 것은 아니지만, 미국 특허 4,454,151호 및 미국 특허 출원 공개 2003/0181531호 및 2004/0058313호에 기재된 이온삼투법을 비롯한 이온삼투요법을 사용하여 개체에 투여될 수 있다.
혈관형성 관련 질환의 치료 방법
본원에 기재된 방법은 일반적으로 혈관형성 관련 질환의 치료에 유용하다. "혈관형성 관련 질환"은 혈관형성이 질환의 한 측면인 질환 또는 장애를 나타낸다. 혈관형성 관련 질환은 이상 혈관형성에 의해서 발생할 수 있다. 일부 실시태양에서, 혈관형성 관련 질환은 적어도 부분적으로 혈관형성에 의해서 매개된다. 일부 실시태양에서, 혈관형성은 혈관형성 관련 질환의 발생에 필수적이다. 혈관형성 관련 질환은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 비종양성 혈관형성 관련 질환, 예컨대 황반변성, 당뇨성 망막증, 류마티스성 관절염, 및 본원에 기재된 다른 질환을 포함한다. 일부 실시태양에서, 혈관형성 관련 질환은 종양 관련 질환, 예컨대 암 또는 양성 종양이다.
본원에 사용된 "치료"는 유익하거나 목적하는 임상 결과를 수득하기 위한 방법이다. 본 발명의 목적을 위해, 유익하거나 목적하는 임상 결과에는 하나 이상의 증상 완화, 질환의 확장 감소, 질환의 안정화된 (즉, 악화되지 않은) 상태, 질환 확산의 예방 또는 지연, 질환 발생 또는 재발의 예방 또는 지연, 질환 진행의 지연 또는 감속, 질환 상태의 개선, 및 완화 (부분적이든 또는 전체적이든) 중 하나 이상이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, "치료"에는 혈관형성 관련 질환의 병리학적 예후 감소가 포함된다. 본 발명의 방법은 임의의 하나 이상의 상기 치료 측면을 고려한다.
비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료
본원에 기재된 방법은 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료에 유용하다.
일부 실시태양에서, 상기 방법은 안조직 내, 예컨대 각막, 망막, 황반 및 맥락막 내의 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료에 유용하다. 상기 방법은 일반적으로 실명, 시력 손실 (예컨대, 시각 명료도 또는 시야의 손실) 및/또는 다양한 안질환에서 발생한 다른 예후를 예방하는데 유용하다. 일부 실시태양에서, 노인성 황반변성 (AMD)을 비롯한 황반변성의 치료 방법이 제공된다. AMD는 임상적으로 황반이라 불리는 망막 부위 내 광수용체 세포가 손상되어 발생하는 중심 시각의 진행성 손실을 특징으로 한다. AMD는 크게 습윤 형태와 건조 형태의 두가지 임상 상태로 구분되고, 건조 형태가 전체 경우의 80 내지 90%를 차지한다. 건조 형태는, 임상적으로 망막 색소 상피 (RPE)와 브루크막 사이에 국소 침착된 황반 초자소구병이 존재하고 위에 놓인 광수용체 위축과 함께 RPE 세포 사멸로 특징되는 지도형위축을 특징으로 한다. 대략 90%의 심각한 시력 손실의 원인이 되는 습윤 AMD는 황반 부위에서의 혈관신생과 이들 새로운 혈관의 누출과 관련된다. 혈액과 유체가 축적되면 망막이 박리되어 급속한 광수용체 변성 및 시력 손실을 일으킬 수 있다. 일반적으로 AMD의 건조 형태가 습윤 형태보다 선행되어 발생하는 것으로 알려져 있다.
본원에 제공된 방법은 특히 황반변성의 습윤 형태를 치료하거나 억제하는데 유용하다. 안조직 내 혈관형성의 억제는 또한 황반변성의 건조 형태가 황반변성의 습윤 형태로 전이되는 것을 예방하거나 지연시킨다. 따라서 본 발명은 또한 황반변성의 건조 형태를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 이에 한정되는 것은 아니지만, 광수용체 세포 손실, 시력 (예를 들어 시각 명료도 및 시야를 포함) 손실 및 망막 박리를 비롯한 황반변성의 하나 이상의 측면 또는 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 다른 관련 측면, 예컨대 광수용체 변성, RPE 변성, 망막 변성, 맥락망막 변성, 원추 변성, 망막 기능장애, 망막 손상, 브루크막 손상, RPE 기능 손실, 정상 황반의 세포외 기질 및/또는 세포의 조직구조 통합성의 손실, 황반 내 세포의 기능 손실 및 광수용체 이영양증이 또한 포함된다.
본원에 기재된 방법으로 치료될 수 있는 다른 비종양성 혈관형성 관련 안질환은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 망막의 혈관신생, 각막의 혈관신생 (예컨대, 트라코마, 감염, 염증, 이식 또는 외상에 의해서 유발되는 것), 당뇨성 망막증, 당뇨성 망막 부종, 당뇨성 황반 부종, 허혈성 망막증, 고혈압성 망막증, 폐색성 망막증, 미숙 망막증, 외상 후의 혈관신생, 감염 후의 혈관신생, 이식 후의 혈관신생, 망막 박리 또는 망막 변성 후의 혈관신생, 신생혈관 녹내장, 전방 및/또는 전방각 혈관신생, 맥락막 혈관신생 (CNV), 망막하 혈관신생, 수정체후부섬유증식증, 안구 히스토플라즈마증 증후군, 근시 변성, 혈관무늬병증, 포도막염, 피부홍조, 수정체후부섬유증식증, 안구 히스토플라즈마증, 및 특발성 중심 장액 맥락망막증을 포함한다. 일부 실시태양에서, 안질환은 당뇨성 망막증이다. 일부 실시태양에서, 안 질환은 신생혈관 녹내장이다.
일부 실시태양에서, 심혈관계 질환 예컨대, 아테롬성경화증, 재협착증, 아테롬 및 혈관종을 비롯한 혈관 질환의 치료 방법이 제공된다. 아테롬성경화증은 만성 혈관 상해의 형태이며, 동맥벽 내 일부의 정상 혈관 평활 세포 (VSMC)의 특성이 변화되어 아테롬성 플라크 내 모세관의 치밀한 네트워크를 생성하게 된다. 이들 취약한 미세혈관은 출혈을 일으키고, 혈병을 생성하여, 심근으로 흐르는 혈류를 감소시켜 심장 마비를 일으킬 수 있다. 재협착증은 전형적으로 관상 동맥 우회 수술, 내막절제술 및 심장 이식 후, 특히 심장 기구 혈관성형술, 종절제술, 레이저 절제 또는 혈관내 스텐팅 후에 발생한다. 이는 미세혈관의 광범위한 성장을 수반한다. 심혈관계 조직 내에서 혈관형성을 억제함으로써, 본원에 제공된 방법은 이러한 심혈관계 질환을 치료하기에 유용하다.
일부 실시태양에서, 상기 방법은 류마티스성 관절염의 치료에 유용하다. 류마티스성 관절염은 관절 내 혈관이 혈관형성을 일으키게 되어 연골을 침투하여 파괴하는 광범위하게 혈관이 분포된 조직을 형성하게 되는 것이다. 관절염성 조직 내 혈관형성을 억제함으로써, 본원에 제공된 방법은 류마티스성 관절염을 치료하기에 유용하다. 혈우병 인자 관절의 치료 방법이 또한 제공된다.
일부 실시태양에서, 상기 방법은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 건선, 경피증, 감염 (예를 들어, 고양이 긁힘병, 박테리아성 궤양 등)의 예후로서의 혈관신생 및 다른 피부 장애를 비롯한 혈관형성 관련 피부 질환의 치료에 유용하다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 건선의 치료에 유용하다. 건선은 전세계 인구의 대략 3%에서 발생하는 만성 피부 질환이다. 전자 현미경을 비롯한 조직학적 연구를 통해 건선에서는 피부 혈관 형성의 변화가 두드러진 특징이라는 것이 밝혀졌다. 따라서 피부 조직 내 혈관형성의 억제는 건선의 치료에 유용하다.
본 발명의 방법으로 치료될 수 있는 다른 혈관형성 관련 질환은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 오슬러-웨버(Osler-Webber) 증후군, 유전성 출혈 혈관확장증, 플라크 혈관신생, 모세혈관확장증, 혈관섬유종, 혈관종, 창상 과립화, 자궁내막증 등을 포함한다. 또한, 본 발명은 특히 낭포성 섬유증 환자에 있어서 비측 폴립증의 치료에 유용하다.
혈관형성 관련 질환의 치료 외에도, 본원에 기재된 방법은 또한 혈관형성과 관련된 정상 생리적 조건의 발생을 조정하거나 예방하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법은 배란, 배아의 착상, 태반 형성 등과 관련된 혈관신생을 감쇠시키는데 사용될 수 있고, 따라서 임신 조절 목적에 유용하다.
본원에서는 본원에 기재된 다양한 질환의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물 (예컨대, 담체 단백질을 포함하는 조성물)을 개체에 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 비종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물 (예컨대, 담체 단백질을 포함하는 조성물)을 개체에 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 안질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 혈관형성 관련 안질환 (예를 들어 황반변성, 당뇨성 망막증 또는 신생혈관 녹내장을 포함)의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물 (예컨대, 담체 단백질을 포함하는 조성물)을 개체에 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 심혈관계 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 심혈관계 질환 (예컨대, 재협착증 및 아테롬성경화증)의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물 (예컨대, 담체 단백질을 포함하는 조성물)을 개체에 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 피부 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 혈관형성 관련 피부 질환 (예컨대, 건선)의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물 (예컨대, 담체 단백질을 포함하는 조성물)을 개체에 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 관절염을 치료하는 데 유효한 양인, 관절염 (예컨대, 류마티스성 관절염)의 치료 방법이 제공된다.
일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 조성물은 약 3주 당 1회, 2주 당 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회 또는 매일 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 약 1주 미만, 예컨대 약 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1일 중 어느 것 미만이다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 일정하다. 예를 들어, 투여는 매일, 매 2일, 매 3일, 매 4일, 매 5일, 또는 매주 수행될 수 있다. 일부 실시태양에서, 투여는 매일 2회, 매일 3회 또는 더욱 자주 수행할 수 있다. 조성물의 투여는 (중단되거나 중단되지 않고) 장기간에 걸쳐, 예컨대 약 1개월 내지 약 3년에 걸쳐 연장될 수 있다. 예를 들어, 투여 섭생법은 (중단되거나 중단되지 않고) 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 30 및 36개월 중의 어느 기간에 걸쳐 연장될 수 있다. 일부 실시태양에서, 투여 스케쥴에서 중단이 없다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 약 1주 이하이다.
혈관형성 억제에 의한 종양 관련 질환의 치료 방법
본원에 기재된 방법은 또한 종양 조직 내 혈관형성을 억제하고 암 및 양성 종양과 같은 종양 관련 질환을 치료하는데 유용하다.
혈관형성의 억제 (예를 들어, 새로운 혈관 형성을 억제하거나 확립된 혈관을 표적화시키는 것에 의함)는 일정 크기 이상으로 성장하는 것을 보조하는 충분한 영양소 및 산소가 종양에 공급되는 것을 방지한다. 혈관형성은 원발성 종양 성장 및 전이를 수반하기 때문에, 본원에 제공된 방법은 원발성 부위에서 종양의 신생물성 성장을 억제하고 속발성 부위에서 종양의 전이를 방지할 수 있다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 새로운 혈관 형성을 억제한다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 조성물은 확립된 종양 혈관계를 파괴한다. 예를 들어, 조성물은 종양 혈관계의 선택성 폐색, 용해에 유효할 수 있거나, 그렇지 않으면 가역적이거나 비가역적이고, 부분적이거나 완전하게 영향을 줄 수 있다 (때로는 종양 혈관계를 증식).
본 발명은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 유효량의 조성물의 투여를 통한 (조성물의 양은 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분함 (또한 "비세포독성 투여량"으로도 언급됨)) 종양 관련 질환의 치료 방법을 제공한다. 세포독성제를 사용한 전통적인 화학요법은 전형적으로 작용제의 세포독성 효과를 최대화하기 위하여 작용제의 최대 허용 투여량과 동일하거나 유사한 투여량으로 수행된다. 그러나, 이러한 고투여량 스케쥴은 정상 숙주 세포를 회복시키기 위하여 오랜시간 동안 비치료 기간을 필요로 한다. 한편, 종양 세포는 또한 비치료 기간 동안 성장을 재개할 수 있다. 이는 약물 내성 종양 세포 발생의 위험을 증가시킬 수 있다. 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 비세포독성 투여량은 암 치료에 있어서 치료 주기 동안 치료가 유의하게 중단되지 않도록 하기 때문에, 약물 내성이 발생되는 위험을 감소시킨다.
예를 제공하기 위하여, 본원에서 암의 치료 방법을 추가로 기재한다. 이러한 기재는 일반적으로 양성 종양을 비롯한 모든 종양 관련 질환에 적용되는 것으로 이해된다.
일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이며, 투여 당 조성물 내의 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은, 동일하거나 유사한 투여 스케쥴 또는 전통적인 투여 스케쥴을 따르는 동일한 (또는 유사한) 제제 내의 동일한 (또는 유사한) 콜히친 또는 티오콜히친 이량체에 상응하는 MTD의 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% 중 어느 것 미만인, 개체 내 암 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 투여 당 조성물 내의 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양은 예를 들어 상응하는 MTD의 약 1% 내지 약 12%, 약 1% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 8%, 약 1% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 3% 중 어느 하나를 비롯한 상응하는 MTD의 약 1% 내지 약 15%이다. 콜히친 또는 티오콜히 친 이량체에 대한 MTD는 공지되어 있거나 당업자가 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들어, 주 1회 스케쥴을 따르는 Nab-5404에 대한 MTD는 약 90 내지 100 mg/m2 신체표면이다.
일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 조성물은 약 3주 당 1회, 2주 당 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회 또는 매일 중 어느 것 이상으로 투여된다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 약 1주 미만, 예컨대 약 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1일 미만이다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 일정하다. 예를 들어, 투여는 매일, 매 2일, 매 3일, 매 4일, 매 5일, 또는 매주 수행될 수 있다. 일부 실시태양에서, 투여는 매일 2회, 매일 3회 또는 더욱 자주 수행될 수 있다. 조성물의 투여는 (중단되거나 중단되지 않고) 장기간에 걸쳐, 예컨대 약 1개월 내지 약 3년에 걸쳐 연장될 수 있다. 예를 들어, 투여 섭생법은 (중단되거나 중단되지 않고) 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 30 및 36개월 중의 어느 기간에 걸쳐 연장될 수 있다. 일부 실시태양에서, 투여 스케쥴에서 중단이 없다. 일부 실시태양에서, 각각의 투여 간의 간격은 약 1주 이하이다.
본 발명의 방법으로 치료될 수 있는 암은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병을 포함한다. 이러한 암의 보다 구체적인 예로는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 편평세포 암, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 샘암종 및 폐의 편평세포 암종 포함), 복막의 암, 간세포 암, 위 또는 위장 암 (위장관 암 포함), 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간암, 유방암, 결장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장 또는 콩팥 암, 전립선암, 외음부 암, 갑상선 암, 간 암종, 두경부암, B-세포 림프종 (저 등급/난포성 비호지킨 림프종 (NHL), 소림프구 (SL) NHL, 중간 등급/난포성 NHL, 중간 등급 미만성 NHL, 고 등급 면역모세포 NHL, 고 등급 림프모구 NHL, 고 등급 소 비-절단 세포 NHL, 거대 질환 NHL, 외투 세포 림프종, AIDS 관련 림프종 및 발덴스트롬 마크로글로블린혈증), 만성 림프성 백혈병 (CLL), 급성 림프모구 백혈병 (ALL), 모발 세포 백혈병, 만성 골수모구 백혈병, 및 이식후 림프증식 장애 (PTLD), 뿐만 아니라 모반증과 관련된 이상 혈관 증식, 부종 (예컨대, 뇌 종양과 관련된 것) 및 메이그 증후군이 포함된다. 본원에 기재된 방법은 특히 편평세포 암종과 같은 광범위한 혈관형성을 수반하는 암의 치료에 유용하다.
일부 실시태양에서, 원발성 종양의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 전이성 암 (즉, 원발성 종양으로부터 전이된 암)의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 진행 단계의 암의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 예를 들어, 진행 유방암, 단계 IV 유방암, 국소 진행 유방암 및 전이성 유방암을 비롯한 유방암 (HER2 양성이거나 HER2 음성일 수 있음)의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시태양에서, 암은 예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC, 예컨대 진행 NSCLC), 소세포 폐암 (SCLC, 예컨대 진행 SCLC) 및 폐 내의 진행성 충실성 악성종양을 비롯한 폐암이다. 일부 실시태양에서, 암은 난소암, 두경부암, 위 악성종양, 흑색종 (전이성 흑색종 포함), 직장결장암, 췌장암 및 충실성 종양 (예컨대, 진행 충실성 종양)이다. 일부 실시태양에서, 암은 유방암, 직장결장암, 직장암, 비소세포 폐암, 비호지킨 림프종 (NHL), 신세포암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 카포시 육종, 카르시노이드 암종, 두경부암, 흑색종, 난소암, 중피종, 신경교종, 교아세포종, 신경아세포종 및 다발성 골수종 중 어느 것이다 (일부 실시태양에서는 이들로 구성된 군으로부터 선택됨). 일부 실시태양에서, 암은 충실성 종양이다.
본원에 기재된 방법은 보조 세팅 (adjuvant setting)으로 실행될 수 있다. "보조 세팅"은 암의 병력을 가졌으며, 일반적으로 (필수적이지는 않음) 수술 (예컨대, 수술 절제), 방사선요법 및 화학요법 등을 비롯한 요법에 반응했던 개체에서의 임상 세팅을 나타낸다. 그러나, 암의 병력 때문에, 이들 개체는 상기 질환 발생의 위험이 있는 것으로 고려된다. "보조 세팅"에서의 치료 또는 투여는 후속 치료 방식을 나타낸다. 위험 정도 (즉, 보조 세팅의 개체가 "고 위험" 또는 "저 위험"으로 고려되는 경우)는 여러 인자, 대부분 통상적으로 처음 치료될 때의 질환 정도에 따라 달라진다. 본원에 제공된 상기 방법은 또한 신보조 세팅 (neoadjuvant setting)으로 실행될 수 있는데, 즉 상기 방법은 원발성/한정적 요법 전에 수행될 수 있다. 일부 실시태양에서, 개체는 이전에 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 이전에 치료를 받아오지 않았다. 일부 실시양태에서, 치료는 1차 요법이다.
본원에 기재된 방법은 다른 암 치료 방법과 연관되어 (예를 들어, 요법 세팅과 조합하여) 수행될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 상기 방법은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 투여하는 1차 요법, 및 2차 요법 을 포함한다. 일부 실시태양에서, 2차 요법은 화학요법이다. 일부 실시태양에서, 2차 요법은 방사선 요법이다. 일부 실시태양에서, 2차 요법은 수술이다. 1차 및 2차 요법은 동시에 또는 순차적으로 수행될 수 있다 (즉, 1차 요법이 2차 요법의 전 또는 후에 수행됨). 일부 실시태양에서, 상기 방법은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 2차 화학요법제와 함께 (동시에 또는 순차적으로) 개체에 공동투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 개체 내 혈관형성을 억제하기에 유효하며, 상기 조성물은 개체 내 세포독성을 일으키기에 불충분한 양이다. 일부 실시태양에서, 2차 화학요법제는 세포독성제이다.
콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물
콜히친 또는 티오콜히친 이량체
본원에 기재된 방법은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물의 투여를 포함한다. 본원에서 사용되는 "콜히친 또는 티오콜히친 이량체"는 콜히친, 티오콜히친 또는 이들의 유도체의 2개의 서브유닛 (동일하거나 상이함)을 함유하는 화합물을 나타낸다. 콜히친 또는 티오콜히친의 "유도체"는, 이에 한정되는 것은 아니지만, 콜히친 또는 티오콜히친과 구조적으로 유사하거나 콜히친 및 티오콜히친과 동일한 일반 화학군인 화합물을 포함한다. 일반적으로, 콜히친 또는 티오콜히친의 유도체 또는 유사체는 콜히친 또는 티오콜히친과 유사한 생물학적, 약리학적, 화학적 및/또는 물리적 특성 (예를 들어, 기능성을 포함)을 갖는다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 하나 이상의 티오콜히친 서브유닛을 갖는다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 2개의 티오콜히친 서 브유닛 (이하 "티오콜히친 이량체"로 나타냄)을 포함한다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 2개의 콜히친 서브유닛 (이하 "콜히친 이량체"로 나타냄)을 포함한다.
일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 하기 화학식 (I)의 화합물이다.
<화학식 I>
Figure 112009018701392-PCT00003
식 중, 각 서브유닛의 B는 메톡시 또는 메틸티오기이고, R2는 메톡시, 히드록실이거나, R3과 함께 메틸렌디옥시이고, R3은 메톡시, 히드록실이거나, R2와 함께 메틸렌디옥시이고, X는 연결기이다.
연결기 X를 도입하기 위하여 광범위한 가교기를 사용할 수 있다. 당업자는 이량체의 콜히친 또는 티오콜히친 단량체 성분이 단일의 반응성 아미노기를 갖고, 중간체 상에 존재하는 임의의 다른 반응성 (친핵성) 기는 당업계에 공지된 기를 사용하여 용이하게 보호될 수 있다는 점을 인식할 것이다. 보호기의 예로는, 예를 들어, 문헌[Greene, T. W., and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, Wiley: New York, 1999]가 참조되며, 상기 문헌의 내용은 본원에 전체로서 참고로 도입된다. 따라서, 아민 관능기와 반응성인 광범위한 가교기가 사용될 수 있다.
일부 실시태양에서, 연결기 X는 하나 이상의 탄소 원자를 포함한다. 예를 들어, 시판되는 (시그마 알드리치) 시약인 말로닐 클로라이드, Cl-C(O)-CH2-C(O)-Cl 을 사용하여 X 기가 -CH2-인 콜히친 이량체를 형성할 수 있다. 유사하게, 여러 길이의 다른 디아실 클로라이드를 사용하여 원하는 길이의 X 기를 형성할 수 있다. 예를 들어, n = 8, Y는 CH2인 화학식 (II)에서, 시판되는 (시그마 알드리치) 시약인 도데칸디오일 디클로라이드, Cl-C(O)-(CH2)10-C(O)-Cl 을 사용하여 X 기가 -(CH2)10-인 이량체를 합성할 수 있다. Y가 NH이고 n = 1인 기에 대하여, 시약 3-이소시아네이토프로판오일 클로라이드 (문헌[Organic Syntheses, Coll. Vol. 6, p.715 (1988); Vol. 59, ρ.195 (1979)])를 사용하여 X가 -NH-CH2CH2-인 연결기 X를 합성할 수 있다. X 연결기를 만들기 위하여 다른 가교 시약을 사용할 수 있다. 당업자는 문헌[Wong, Shan S., Chemistry of Protein Conjugation and Cross Linking, CRC Press: Boca Raton, 1991], 특히, 챕터 2, 섹션 IV(B), 33 내지 38면 (아미노기 반응성 작용제 관련); 챕터 4, 섹션 II, 75 내지 103면 (아미노기 반응성 가교제 관련) 및 챕터 7, 209 내지 220면 (아미노 함유 화합물의 가교에 적합한 절차 및 시약에 대한 가교 반응의 분석 및 절차 관련)을 참조할 수 있다. 상기 언급한 Wong의 문헌 전체 내용, 특히 구체적으로 열거한 부분은 본원에 참조로서 도입된다.
일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 하기 화학식 (II)의 화합물이다.
<화학식 II>
Figure 112009018701392-PCT00004
식 중, B1은 메톡시 또는 메틸티오기이고, B2는 메톡시 또는 메틸티오기이고, n은 0 내지 8의 정수이고, Y는 CH2 기이거나, n이 1인 경우 또한 화학식 NH인 기일 수 있다.
일부 실시태양에서, n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 중 어느 하나이다 (일부 실시태양에서는 이들로 구성된 군으로부터 선택됨). 일부 실시태양에서, n은 1이다. 일부 실시태양에서, n은 1이고 Y는 NH이다. 일부 실시태양에서, n은 2이다.
일부 실시태양에서, B1 및 B2는 둘 다 메톡시기이다. 일부 실시태양에서, B1 및 B2는 둘 다 메틸티오기이다. 일부 실시태양에서, B1은 메톡시기이고 B2는 메틸 티오기이다. 일부 실시태양에서, B1은 메틸티오기이고 B2는 메톡시기이다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 IDN5404, IDN5676, IDN5800 및 IDN5801 중 어느 것이다 (일부 실시태양에서는 이들로 구성된 군으로부터 선택됨).
일부 실시태양에서, 화합물은 티오콜히친 이량체 IDN5404이다. IDN5404는 하기 화학식 (III)의 화합물이다.
Figure 112009018701392-PCT00005
일부 실시태양에서, 화합물은 티오콜히친 이량체 IDN5676이다. IDN5676은 하기 화학식 (IV)의 화합물이다.
Figure 112009018701392-PCT00006
생체적합성 중합체 및 담체 단백질
일부 실시태양에서, 본원에 기재된 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 조성물은 추가로 담체 단백질과 같은 생체적합성 중합체를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "생체적합성"은 그것이 도입되는 생물학적 체계를 상당히 변경시키지 않거나 불리한 방식으로 영향을 미치지 않는 물질을 설명한다. 생체적합성 중합체는 천연 또는 합성 생체적합성 물질, 예컨대 단백질, 폴리뉴클레오티드, 다당류 (예를 들어, 전분, 셀룰로스, 덱스트란, 알기네이트, 키토산, 펙틴, 히알루론산 등) 및 지질을 포함한다. 적절한 생체적합성 중합체는 예를 들어 천연 또는 합성 단백질, 예컨대 알부민, 인슐린, 헤모글로빈, 리소자임, 면역글로불린, α-2-마크로글로불린, 피브로넥틴, 비트로넥틴, 피브리노겐, 카제인 등 뿐만 아니라 이들의 임의의 2 이상의 조합을 포함한다. 합성 중합체는 예를 들어 폴리알킬렌 글리콜 (예를 들어, 직쇄 또는 분지쇄), 폴리비닐 알콜, 폴리아크릴레이트, 폴리히드록시에틸 메타크릴레이트, 폴리아크릴산, 폴리에틸옥사졸린, 폴리아크릴아미드, 폴리이소프로필 아크릴아미드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리락티드/글리콜리드 등 및 이들의 조합을 포함한다.
용어 "단백질"은 직쇄이거나 분지쇄일 수도 있는 어떠한 길이의 아미노산의 폴리펩티드 또는 중합체 (전체 길이 또는 단편 포함)를 나타내고, 변형된 아미노산을 포함하고/하거나 비-아미노산이 끼어있을 수 있다. 상기 용어는 또한 자연적으로 또는 중재에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함하고, 예를 들어 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 포스포릴화 또는 임의의 다른 조작 또는 변형을 포함한다. 또한, 예를 들어 아미노산의 하나 이상의 유사체 (예를 들어, 비천연 아미노산 등을 포함) 뿐만 아니라 당업계에 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드가 이 용어에 포함된다. 본원에 기재된 단백질은 자연 발생일 수도 있고, 다시 말해서 천연 공급원 (예컨대, 혈액)으로부터 수득되거나 유래되고, 또는 합성될 수도 있다 (예컨대, 화학적으로 합성되거나 재조합 DNA 기술에 의해 합성됨).
적절한 담체 단백질의 예는 혈액 또는 혈장에서 일반적으로 발견된 단백질을 포함하고, 이것은 이에 한정되지 않지만 알부민, IgA를 비롯한 면역글로불린, 지방단백질, 아포지방단백질 B, α-산 당단백질, β-2-마크로글로불린, 티로글루블린, 트랜스페린, 피브로넥틴, 인자 VII, 인자 VIII, 인자 IX, 인자 X 등을 포함한다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질은 비-혈액 단백질, 예컨대 카제인, α-락트알부민 및 β-락토글로불린이다. 담체 단백질은 천연 유래일 수도 있거나 합성적으로 제조될 수 있다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질은 알부민, 예컨대 인간 혈청 알부민이다. 인간 혈청 알부민(HSA)은 Mr 65K의 고 용해성 공모양의 단백질이고 585개 아미노산으로 구성된다. HSA는 혈장에서 가장 풍부한 단백질이고, 인간 혈장의 콜로이드 삼투압의 70 내지 80％에 달한다. HSA의 아미노산 서열은 총 17개 디술피드 다리, 1개의 유리 티올 (Cys 34) 및 1개의 트립토판 (Trp 214)을 함유한다. HSA 용액의 정맥내 사용은, 신생아 고빌리루 빈혈증의 치료에서 교환수혈과 함께 (예를 들어, 문헌[Finlayson, Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 6, 85-120 (1980)] 참조), 저혈량 쇼크의 예방 및 치료를 위해 지시된다 (예를 들어, 문헌 [Tullis, JAMA, 237, 355-360, 460-463 (1977)] 및 [Houser et al, Surgery , Gynecology and Obstetrics, 150, 811-816 (1980)] 참조]. 소 혈청 알부민과 같은 다른 알부민도 고려된다. 이러한 비-인간 알부민의 사용은 예를 들어 비-인간 포유동물, 예컨대 가축 동물 (가정 애완동물 및 농업용 동물 포함)에서 조성물의 용도와 관련하여 적절할 수 있다.
인간 혈청 알부민(HSA)은 다수의 소수성 결합 부위 (지방산에 대해 전체 8개, HSA의 내인성 리간드)를 갖고 다양한 세트의 약물, 특히 중성 및 음 하전 소수성 화합물에 결합한다 (문헌[Goodman et al, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 제9판, McGraw-Hill New York (1996)]). 2개의 고 친화성 결합 부위가 HSA의 서브도메인 IIA 및 IIIA에 제안되고, 이것은 극성 리간드 특징을 위한 부착 지점으로서 작용하는 표면 근처에서 하전된 리신 및 아르기닌 잔기를 가진 매우 연장된 소수성 포켓이다 (예를 들어 문헌[Fehske et al, Biochem . Pharmcol. 30, 687-92 (1981)], [Vorum, Dan . Med . Bull. 46, 379-99 (1999), Kragh-Hansen, Dan.Med.Bull. 1441, 131-40 (1990)], [Curry et al, Nat . Struct . Biol., 5, 827-35 (1998)], [Sugio et al, Protein . Eng ., 12, 439-46, (1999)], [He et al, Nature, 358, 209-15 (1992)], 및 [Carter et al, Adv . Protein . Chem., 45, 153-203 (1994)] 참조).
예를 제공하기 위하여, 담체 단백질을 이하에서 추가로 설명한다. 이러한 설명은 생체적합성 중합체에 일반적으로 적용되는 것으로 이해된다.
조성물 내에서 담체 단백질 (예컨대 알부민)은 일반적으로 콜히친 또는 티오 콜히친 이량체를 위한 담체로서 작용하고, 다시 말해서 조성물 내의 담체 단백질은 담체 단백질을 포함하지 않는 조성물에 비하여 콜히친 또는 티오콜히친 이량체가 수성 매질 중에서 더욱 쉽게 현탁될 수 있게 하거나 또는 현탁을 유지하는 것을 돕는다. 이것은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 가용화하기 위한 독성 용매의 사용을 피할 수 있고, 이에 따라 상기 독성 용매로 인하여 발생하는 하나 이상의 부작용을 감소시킬 수 있다. 일부 실시태양에서, 조성물은 계면활성제를 실질적으로 함유하지 않으며, 즉, 조성물을 개체에 투여할 때 조성물 내의 계면활성제의 양이 개체에서 하나 이상의 부작용을 일으키기에 충분하지 않다. 일부 실시태양에서, 조성물은 계면활성제를 함유하지 않는다.
일부 실시태양에서, 담체 단백질은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체와 연합되고, 다시 말해서 조성물은 담체 단백질 연합 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함한다. 본원에서 "연합(association)" 또는 "연합된(associated)"은 일반적 의미로 사용되고, 수성 조성물에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 거동 및/또는 성질에 영향을 미치는 담체 단백질을 가리킨다. 예를 들어, 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는, 담체 단백질을 갖지 않은 조성물에 비하여, 담체 단백질이 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 수성 매질 중에서 더욱 쉽게 현탁될 수 있게 만든다면 "연합"된 것으로 간주된다. 다른 예로서, 담체 단백질이 수성 현탁액 중에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 안정화시킨다면 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 연합된 것이다. 예를 들어, 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 입자 또는 나노입자로 존재할 수 있고, 이는 본원에서 추 가로 설명된다.
콜히친 또는 티오콜히친 이량체는, 장기간 동안, 예를 들어 적어도 약 0.1, 0.2, 0.25, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, 60 또는 72 시간 동안 수성 매질 중에서 현탁된 채로 유지된다면 (예를 들어, 눈에 보이는 침전 또는 침강 없이) 수성 현탁액 중에서 담체 단백질에 의해 "안정화"되는 것이다. 현탁액은 일반적으로, 반드시 그렇지는 않지만, 개체 (예컨대 인간)에게 투여하기 위해 적절하다. 현탁액의 안정성은 일반적으로 보관 온도 (예컨대, 실온 (예컨대 20 내지 25℃) 또는 냉각 조건 (예컨대 4℃))에서 평가된다. 예를 들어, 현탁액의 제조 후 약 15분에서 육안으로 또는 1000 배율의 광학 현미경 (또는 기타 적절한 입자 특징화 기술) 하에서 관찰할 때, 응괴 또는 입자 응집을 나타내지 않는다면 현탁액은 보관 온도에서 안정하다. 또한 가속화 시험 조건 하에서, 예컨대 약 40 ℃ 초과의 온도에서 안정성을 평가할 수 있다.
조성물 내에서 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체가 다양한 방식으로 연합될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 담체 단백질을 콜히친 또는 티오콜히친 이량체와 혼합할 수 있다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질이 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 캡슐화하거나 포획한다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체에 결합된다 (예컨대 비공유 결합). 일부 실시태양에서, 조성물은 하나 이상의 상기 측면을 나타낼 수도 있다.
일부 실시태양에서, 조성물은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 및 담체 단백질 (예컨대 알부민)을 포함한 (다양한 실시태양에서 본질적으로 이들로 구성된) 입 자 (예컨대 미세입자 또는 나노입자)를 포함한다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체는 담체 단백질 (예컨대 알부민)로 코팅된다. 일부 실시태양에서, 조성물은 나노입자 (즉, 약 1000 나노미터(nm) 이하의 평균 지름을 갖는 입자), 예컨대 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 및 100 nm 이하의 평균 지름을 가진 입자를 포함한다. 일부 실시태양에서, 조성물 내 나노입자의 평균 지름은 약 200 nm 이하이다. 일부 실시태양에서, 조성물 내 나노입자의 평균 지름은 약 20 내지 약 400 nm이다. 일부 실시태양에서, 나노입자의 평균 지름은 약 40 내지 약 200 nm 이하이다. 일부 실시태양에서, 입자는 멸균-여과가능하다.
본원에 기재된 입자 (예컨대 미세입자 또는 나노입자)는 건조 제제 (예컨대 동결건조된 조성물)에 존재하거나 또는 생체적합성 매질에 현탁될 수도 있다. 적절한 생체적합성 매질은 이에 한정되지 않지만 물, 완충 수성 매질, 염수, 완충 염수, 임의로 완충된 아미노산 용액, 임의로 완충된 단백질 용액, 임의로 완충된 당 용액, 임의로 완충된 비타민 용액, 임의로 완충된 합성 중합체 용액, 지질-함유 에멀젼 등을 포함한다.
본원에 기재된 조성물 중의 담체 단백질의 양은 조성물 내의 약제 및 기타 성분에 의존하여 변할 것이다. 일부 실시태양에서, 조성물은 수성 현탁액, 예를 들어 안정한 콜로이드성 현탁액 (예컨대 미세입자 또는 나노입자의 안정한 현탁액) 중에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 안정화하기 위해 충분한 양으로 담체 단백질을 포함한다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질은 수성 매질 중에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 침강 속도를 감소시키는 양으로 존재한다. 입자-함유 조 성물을 위하여, 담체 단백질의 양은 또한 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 입자 크기 및 밀도에 의존한다.
일부 실시태양에서, 담체 단백질은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 수성 현탁액 중에서 특정한 농도로 안정화시키기에 충분한 양으로 존재한다. 예를 들어, 조성물 내에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 농도는 예를 들어 약 0.01 내지 약 50 mg/ml, 약 0.1 내지 약 50 mg/ml, 약 1 내지 약 10 mg/ml, 약 2 내지 약 8 mg/ml, 약 4 내지 약 6 mg/ml, 및 약 5 mg/ml의 어느 것을 비롯한 약 0.01 내지 약 100 mg/ml이다. 일부 실시태양에서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 농도는 적어도 약 0.01 mg/ml, 0.03 mg/ml, 0.05 mg/ml, 0.08 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.3 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.8 mg/ml, 1 mg/ml, 1.3 mg/ml, 1.5 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml 및 50 mg/ml이다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질은 계면활성제의 사용을 피하는 양으로 존재하고, 그 결과 조성물은 실질적으로 계면활성제를 함유하지 않는다.
일부 실시태양에서, 액체 형태의 조성물은 약 0.1％ 내지 약 50％ (w/v) (예를 들어, 약 0.5％ (w/v), 약 5％ (w/v), 약 10％ (w/v), 약 15％ (w/v), 약 20％ (w/v), 약 30％ (w/v), 약 40％ (w/v) 또는 약 50％ (w/v))의 담체 단백질을 포함한다. 일부 실시태양에서, 액체 형태의 조성물은 약 0.5％ 내지 약 5％ (w/v)의 담체 단백질을 포함한다.
일부 실시태양에서, 담체 단백질, 예를 들어 알부민 대 콜히친 또는 티오콜 히친 이량체의 중량비는, 충분한 양의 콜히친 또는 티오콜히친 이량체가 세포에 결합하거나 세포에 의해 운반되는 정도이다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질, 예를 들어 알부민 대 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 중량비 (w/w)는 약 0.01:1 내지 약 100:1, 약 0.02:1 내지 약 50:1, 약 0.05:1 내지 약 20:1, 약 0.1:1 내지 약 20:1, 약 1:1 내지 약 18:1, 약 2:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 12:1, 약 4:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 9:1, 및 약 9:1이다. 일부 실시태양에서, 담체 단백질 (예컨대 알부민) 대 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 중량비는 약 18:1 이하, 약 15:1 이하, 14:1 이하, 13:1 이하, 12:1 이하, 11:1 이하, 10:1 이하, 9:1 이하, 8:1 이하, 7:1 이하, 6:1 이하, 5:1 이하, 4:1 이하 및 3:1 이하의 어느 것이다.
일부 실시태양에서, 조성물은 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404 또는 IDN5676) 및 알부민을 포함하는 (다양한 실시태양에서 본질적으로 이들로 구성된) 입자 (예컨대, 미세입자 또는 나노입자)를 포함한다. 입자 (예컨대, 미세입자 또는 나노입자)의 평균 지름은 약 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1 마이크로미터 이하이다. 일부 실시태양에서, 입자는 나노입자, 즉, 약 1000 나노미터 (nm) 미만의 입자이다. 예를 들어, 나노입자는 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 및 100 nm 중 어느 것 이하일 수 있다. 일부 실시태양에서, 나노입자의 평균 지름은 약 200 nm 이하이다. 일부 실시태양에서, 나노입자의 평균 지름은 약 20 내지 약 400 nm이다. 일부 실시태양에서, 나노입자의 평균 지름은 약 40 내지 약 200 nm이다. 일부 실시태양에서, 입자는 멸균-여과가능하다.
일부 실시태양에서, 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404 또는 IDN5676)는 알부민으로 코팅된다. 일부 실시태양에서, 알부민 대 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404 또는 IDN5676)의 중량비 (w/w)는 약 0.01:1 내지 약 100:1, 약 0.02:1 내지 약 50:1, 약 0.05:1 내지 약 20:1, 약 0.1:1 내지 약 20:1, 약 1:1 내지 약 18:1, 약 2:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 12:1, 약 4:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 9:1, 및 약 9:1이다. 일부 실시태양에서, 알부민 대 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 중량비는 약 18:1 이하, 약 15:1 이하, 14:1 이하, 13:1 이하, 12:1 이하, 11:1 이하, 10:1 이하, 9:1 이하, 8:1 이하, 7:1 이하, 6:1 이하, 5:1 이하, 4:1 이하 및 3:1 이하의 어느 것 미만이다.
일부 실시태양에서, 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404 또는 IDN5676) 및 알부민을 포함하는 입자 (예컨대, 미세입자 또는 나노입자)는 수성 매질 (예컨대, 알부민을 함유하는 수성 매질) 중에 현탁된다. 예를 들어, 조성물은 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404 또는 IDN5676) 함유 입자 (예컨대, 미세입자 또는 나노입자)의 콜로이드성 현탁액일 수 있다. 일부 실시태양에서, 조성물은 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404 또는 IDN5676) 함유 입자의 수성 현탁액으로 재구성될 수 있는 건조 조성물 (예컨대, 동결건조된 조성물)이다. 일부 실시태양에서, 조성물 중 티오콜히친 이량체 (예컨대, IDN5404 또는 IDN5676)의 농도는, 예를 들어 약 0.1 내지 약 50 mg/ml, 약 0.1 내지 약 20 mg/ml, 약 1 내지 약 10 mg/ml, 약 2 mg/ml 내지 약 8 mg/ml, 약 4 내지 약 6 mg/ml 및 약 5 mg /ml를 비롯한 약 0.1 내지 약 100 mg/ml이다. 일부 실시태양에서, IDN5404 또는 IDN5676의 농도는 약 1.3 mg/ml, 1.5 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, 5 mg/ml, 6 mg/ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml 및 50 mg/ml 중 어느 것 이상이다.
일부 실시태양에서, 조성물은 IDN5404 또는 IDN5676의 나노입자 제제를 포함한다 (이하 Nab-5404 또는 Nab-5676로도 나타냄). Nab-IDN5404 및 Nab-5676는 각각 IDN5404 및 IDN5676를 인간 혈청 알부민으로 안정화시킨 나노입자 제제이다. 이들 나노입자 제제는 미국 특허 5,916,596호 및 미국 특허 출원 공개 2005/0004002호에 기재된 방법으로 만들 수 있다. 0.9% 염화나트륨 주사 또는 5% 덱스트로스 주사와 같은 적합한 수성 매질에 현탁되면, Nab-5404 (또는 Nab-5676)가 티오콜히친 이량체의 안정한 콜로이드성 현탁액을 형성한다. 콜로이드성 현탁액 내 입자의 크기 (즉, 평균 지름)는 20 nm 내지 8 마이크로미터, 바람직하게는 약 20 내지 400 nm 범위일 수 있다. HSA는 물에 자유롭게 용해되므로, Nab-5404 (또는 Nab-5676)는 예를 들어 약 2 mg/ml 내지 약 8 mg/ml, 약 5 mg/ml를 비롯하여 묽은 농도 (0.1 mg/ml IDN5404 또는 IDN5676) 내지 농축 농도 (20 mg/ml IDN5404 또는 IDN5676)의 넓은 범위의 농도로 재구성될 수 있다. 일부 실시태양에서, IDN5404 또는 IDN5676의 농도는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20 mg/ml 중 어느 것이다.
제약 조성물, 단위 투여 및 키트
또한 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 제약 조성물은 예를 들어 전신성 또는 국소 투여를 비롯하여 본원에 기재된 다양한 투여 방식에 적합할 수 있다. 제약 조성물은 점안약, 주사가능한 용액의 형태이거나, 흡입 (입 또는 코를 통하여) 또는 경구 투여에 적합한 형태일 수 있다. 본원에 기재된 제약 조성물은 단일 단위 투여형 또는 복수 투여 형태로 포장될 수 있다. 일부 실시태양에서, 조성물은 인간에 투여하기 적합하다. 일부 실시태양에서, 조성물은 수의학적 맥락에서, 가정 애완동물 및 농업용 동물과 같은 포유동물에 투여하기 적합하다. 수많은 적합한 조성물 제제가 존재한다 (예를 들어, 미국 특허 출원 5,916,596호 및 6,096,331호 참조).
일부 실시태양에서, 제약 조성물은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체, 담체 단백질, 및 안내 주사에 적합한 제약상 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 제약 조성물은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체, 담체 단백질, 및 눈에 국소 도포하기에 적합한 제약상 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 제약 조성물은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체, 담체 단백질, 및 동맥내 주사에 적합한 제약상 허용가능한 담체를 포함한다.
제약 조성물은 일반적으로 멸균되고 실질적으로 등장성인 조성물로 제제화된다. 주사를 위해, 제약 조성물은 액체 용액, 예를 들어, 행크 용액 또는 링거 용액과 같이 생리적으로 상용성인 완충액의 형태일 수 있다. 제약 조성물은 또한 고체 형태이고 사용 직전에 재용해 또는 재현탁될 수 있다. 동결건조된 조성물이 또한 포함된다.
경구 투여를 위해, 제약 조성물은 제약상 허용가능한 부형제, 예컨대 결합제 (예를 들어, 예비겔라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로스); 충전제 (예를 들어, 젖당, 미세결정 셀룰로스 또는 인산 수소 칼슘); 윤활제 (예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 활석 또는 실리카); 붕해제 (예를 들어, 감자 전분 또는 나트륨 전분 글리콜레이트); 또는 습윤제 (예를 들어, 나트륨 라우릴 술페이트)를 사용하여 통상적인 방법으로 예를 들어, 정제 또는 캡슐제 형태가 될 수 있다. 경구 투여를 위한 액체 제제는 예를 들어, 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태일 수 있거나, 또는 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클에 의해서 구성되는 건조 제품으로 존재할 수 있다. 이러한 액체 제제는 제약상 허용가능한 첨가제, 예컨대 현탁제 (예를 들어, 소르비톨 시럽, 셀룰로스 유도체 또는 수소화 식용 지방); 유화제 (예를 들어, 레시틴 또는 아카시아); 비수성 비히클 (예를 들어, 아티온드(ationd) 유, 유성 에스테르, 에틸 알콜 또는 분별된 식물성유); 및 방부제 (예를 들어, 메틸 또는 프로필-p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산)을 사용하여 통상적인 방법으로 제조될 수 있다. 제제는 또한 필요에 따라 완충염, 향미제, 착색제 및 감미제를 함유할 수 있다.
본 발명은 일부 실시태양에서 콜히친 또는 티오콜히친 이량체, 담체 단백질, 및 눈에 투여하기 적합한 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 제약상 담체는 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일, 예를 들어, 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것, 예컨대 땅콩유, 대두유, 광유 등일 수 있다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 글리세롤 용액이 또한 특히 주사가능한 용액에 대하여 액체 담체로 사용될 수 있다. 적합한 제약상 부형제는 전분, 글루코스, 젖당, 수크로스, 겔라틴, 맥아, 쌀, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 글리세롤, 프로필렌, 물 등을 포함한다. 필요하다면, 제약 조성물은 또한 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 조성물의 성분은 중합체 또는 피브린 글루 내에 포착되어 분자의 방출을 조절할 수 있다. 이러한 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 연고, 겔, 또는 다른 고체 또는 반고체 조성물 등의 형태일 수 있다. 조성물은 전형적으로 4.5 내지 8.0의 pH를 갖는다. 조성물은 또한 눈 및 안조직의 방수와 상용성인 삼투 수치를 갖도록 제제화되어야 한다. 이러한 삼투 수치는 일반적으로 약 200 내지 약 400 밀리오스몰 / 물 1 킬로그램 ("mOsm/kg") 범위이고, 바람직하게는 약 300 mOsm/kg이다.
일부 실시태양에서, 조성물은 통상적인 절차에 따라서 정맥내, 복막내, 또는 유리질내 주사에 적용되는 제약 조성물로 제제화된다. 전형적으로, 주사용 조성물은 등장성 멸균 수성 완충액의 용액이다. 필요한 경우, 조성물은 또한 주사 부위의 통증을 경감시키기 위해 리그노카인과 같은 국소 마취제 및 가용화제를 포함할 수 있다. 일반적으로, 예를 들어, 활성제의 양을 나타내는 샤셰 또는 앰풀과 같은 용접 밀폐된 용기 내에 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서, 성분들이 단위 투여 형태 내에 별개로 또는 함께 혼합되어 공급된다. 조성물이 주입되어 투여되는 경우, 멸균된 제약 등급 물 또는 염수를 함유하는 주입 병에 투약된다. 조성물이 주사로 투여되는 경우, 성분들이 투여 전에 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수 또는 염수의 앰풀이 제공될 수 있다.
조성물은 추가 성분, 예를 들어 방부제, 완충액, 삼투성 조절제, 항산화제 및 안정화제, 비이온성 습윤제 또는 청정화제, 점도 증가제 등을 추가로 포함할 수 있다.
용액 내에 사용하기 적합한 방부제는 폴리쿼터늄-1, 벤즈알코늄 클로라이드, 티메로살, 클로로부탄올, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 페닐에틸 알콜, 이디티에이 디나트륨, 소르브산, 벤즈에토늄 클로라이드 등을 포함한다. 전형적으로 (필수적이지는 않음) 이러한 방부제는 0.001 중량% 내지 1.0 중량% 수준으로 사용된다.
적합한 완충액은 붕산, 나트륨 및 칼륨 중탄산염, 나트륨 및 칼륨 붕산염, 나트륨 및 칼륨 탄산염, 아세트산나트륨, 이인산나트륨 등을, pH를 약 pH 6 내지 pH 8, 바람직하게는 약 pH 7 내지 pH 7.5로 유지하기에 충분한 양으로 포함한다.
적합한 삼투성 조절제는 덱스트란 40, 덱스트란 70, 덱스트로스, 글리세린, 칼륨 클로라이드, 프로필렌 글리콜, 염화나트륨 등이며, 안과용 용액의 염화나트륨 당량이 0.9 ± 0.2%의 범위이다.
적합한 항산화제 및 안정화제는 중아황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 티오중아황산나트륨, 티오우레아 등을 포함한다. 적합한 습윤제 및 청정화제는 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20, 폴록사머 282 및 틸록사폴을 포함한다. 적합한 점도 증가제는 덱스트란 40, 덱스트란 70, 겔라틴, 글리세린, 히드록시에틸셀룰로스, 히드록스메틸프로필셀룰로스, 라놀린, 메틸셀룰로스, 바셀린, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐피롤리돈, 카르복시메틸셀룰로스 등을 포함한다.
단순 수용액의 점도보다 점도가 큰 국소 조성물을 제공하기 위하여 점도 증가제를 사용하는 것은 표적 조직에 의해서 활성 화합물이 안구에 흡수되는 것을 증가시키거나 눈에서의 보존 시간을 증가시키기 위해 바람직할 수 있다. 이러한 점 도 증강제는, 예를 들어, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 메틸 셀룰로스, 히드록시 프로필 메틸셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시 프로필 셀룰로스 또는 당업계에 공지된 다른 작용제를 포함한다. 이러한 작용제들은 전형적으로 0.01 중량% 내지 2 중량% 수준으로 사용된다.
본원에 기재된 조성물은 또한 조성물의 특성을 향상시키기 위해 다른 작용제, 부형제, 또는 안정화제를 포함한다. 예를 들어, 나노입자의 음성 제타 전위를 증가시킴으로써 안정성을 증가시키기 위하여, 음으로 하전된 특정 성분을 첨가할 수 있다. 상기 음으로 하전된 성분에는 글리코콜산, 콜산, 케노데옥시콜산, 타우로콜산, 글리코케노데옥시콜산, 타우로케노데옥시콜산, 리토콜산, 우르소데옥시콜산, 데히드로콜산 및 기타로 이루어진 담즙산의 담즙염; 팔미토일올레오일포스파티딜콜린, 팔미토일리놀레오일포스파티딜콜린, 스테아로일리놀레오일포스파티딜콜린, 스테아로일올레오일포스파티딜콜린, 스테아로일아라키도일포스파티딜콜린, 및 디팔미토일포스파티딜콜린을 비롯한 포스파티딜콜린 포함하는 레시틴 (난황) 기재 인지질을 포함하는 인지질이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 다른 인지질에는 L-α-디미리스토일포스파티딜콜린 (DMPC), 디올레오일포스파티딜콜린 (DOPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (DSPC), 수소화된 소이 포스파티딜콜린 (HSPC), 및 다른 관련 화합물이 포함된다. 음으로 하전된 계면활성제 또는 유화제, 예를 들어 나트륨 콜레스테릴 술페이트 등이 또한 첨가제로서 적합하다.
또한 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 조성물의 단위 투여 형태, 예를 들어, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 예를 들어 약 0.2 mg 내지 약 50 mg, 약 0.5 mg 내지 약 30 mg, 약 1 mg 내지 약 20 mg, 또는 약 15 mg을 비롯하여 약 0.1 mg 내지 약 50 mg 함유하는 단위 투여가 제공된다. 용어 "단위 투여 형태"는 개체에 1회 투여하기 적합한 물리적으로 구분되는 단위를 나타내며, 각 단위는 적합한 제약상 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 원하는 치료 효과를 얻기 위해 계산된 활성 물질의 소정량을 함유한다. 이들 단위 투여 형태는 단일 또는 복수 단위 투여 형태의 적합한 포장 내에 저장될 수 있고, 또한 추가로 멸균 및 밀봉될 수 있다. 일부 실시태양에서, 안내 주사에 적합한 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 및 담체 단백질의 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 실시태양에서, 눈에 국소 도포하기에 적합한 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 및 담체 단백질의 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 실시태양에서, 동맥내 주사에 적합한 콜히친 또는 티오콜히친 이량체 및 담체 단백질의 단위 투여 형태가 제공된다.
또한 적합한 포장 내에 본원에 기재된 조성물을 포함하는 제품이 제공된다. 본원에 기재된 조성물 (예컨대, 안과용 조성물)에 적합한 포장은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 바이알 (예컨대, 밀봉 바이알), 관, 앰풀, 병, 단지, 가요성 포장 (예를 들어, 밀봉 마일라(Mylar) 또는 비닐봉지) 등을 포함한다. 이들 제품은 추가로 멸균되고/되거나 밀봉될 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 조성물을 포함하는 키트 (또는 단위 투여 형태 및/또는 제품)를 제공하고, 조성물의 사용 방법에 관한 지시, 예컨대 본원에 기재된 용도를 추가로 포함할 수도 있다. 본원에 기재된 키트는 본원에 기재된 임의의 방법을 수행하기 위한 지시와 함께 다른 완충액 희석제, 필터, 바늘, 주사기, 및 포장 삽입물을 비롯한 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 키트는 콜히친 또는 티오콜히친 이량체, 담체 단백질, 안내 주사에 적합한 제약상 허용가능한 담체, 및 안내 주사를 수행하기 위한 지시와 함께 하나 이상의 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 주사기 및 포장 삽입물을 포함한다. 일부 실시태양에서, 제약 조성물은 콜히친 또는 티오콜히친 이량체, 담체 단백질, 동맥내 주사에 적합한 제약상 허용가능한 담체, 및 동맥내 주사를 수행하기 위한 지시와 함께 하나 이상의 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 주사기 및 포장 삽입물을 포함한다.
이해를 명확히 하기 위하여 설명 및 예시를 통해 상기에서 본 발명을 어느정도 자세하게 설명하였지만, 사소한 변화 및 변경이 실행될 수 있다는 것은 당업자에게 명백하다. 따라서, 기재 및 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 이해되어서는 안된다.
실시예 1. Nab -5404 및 Nab -5676의 시험관내 세포독성 활성
MX-1 유방암종, HepG2 간암, HT-29 결장암종 세포주 및 정상 원발성 래트 간세포를 사용하여 시험관내에서 Nab-5404 및 Nab-5676의 세포독성 활성을 평가하였다. Nab-5404 및 Nab-5676에 세포를 72 시간 동안 37 ℃에서 농도를 증가시켜가며 노출시켰다. 셀 타이터 블루(Cell Titer Blue) 세포 생존율 분석기 (Promega, Madison, WI)를 사용하여 생존율을 분석하였다. 프리즘(Prism) 소프트웨어 (GraphPad, San Diego, CA)를 사용하여 1상 지수 붕괴 방정식으로 IC50을 계산하였 다.
Nab-5404는 HepG2 간암 세포 및 원발성 래트 간세포에 대하여, 각각 16 및 9 μg/ml의 IC50으로 세포독성 활성을 나타냈다. Nab-5404 및 Nab-5676은 MX-1 세포에 대하여, 각각 43 및 54 μg/ml의 IC50으로 중간 정도의 세포독성이었다. Nab-5404 및 Nab-5676은 HT-29 세포에 대하여 각각 110 및 149 μg/ml의 IC50으로, 활성이 낮았다. Nab-5676은 HepG2 세포 또는 원발성 래트 간세포에서 세포독성 활성을 거의 또는 전혀 나타내지 않았다. 결과를 표 1에 정리하였다.
세포주 Nab-5404 IC50 (μg/ml) Nab-5676 IC50 (μg/ml)
MX-1 유방암종 43 54
HepG2 간암 16 125
HT-29 결장암종 110 149
원발성 래트 간세포 9 불활성
실시예 2. Nab -5404 및 Nab -5676의 항미세소관 활성
MX-1 유방암종 세포주를 사용하여 Nab-5404 및 Nab-5676의 미세소관 해중합 활성을 시험하였다. MX-1 세포를 커버 슬립 상에 접종하고 Nab-5404 또는 Nab-5676으로 2 시간 동안 37 ℃에서 0.01 내지 100 μg/ml의 농도 범위 걸쳐 처리하였다. 인큐베이션 후, 세포를 고정시키고 튜불린 및 액틴에 대하여 염색하였다. 튜불린은 모노클로날 항-튜불린 항체로 염색하였고, 액틴은 플루오레세인-표지 팔로이딘으로 염색하였다. 이미지프로(ImagePro) 소프트웨어 (MediaCybernetics, Inc., Silver Spring MD)를 사용하여 미세소관 네트워크를 가시화시키고 분석하였다. 프리즘 소프트웨어 (GraphPad, San Diego, CA)를 사용하여 미세소관 약화에 대한 Nab-5404 및 Nab-5676 활성의 IC50을 계산하였다.
Nab-5404 및 Nab-5676은 IC50 계산치가 각각 0.06 μg/ml 및 0.12 μg/ml으로, 강력한 미세소관 해중합 활성을 나타내었다 (도 1A 및 1B). 시험된 가장 낮은 농도 0.6 μg/ml에서도, Nab-5404 또는 Nab-5676로 인큐베이션하고 2 시간 후에 미세소관 네트워크가 완전히 파괴되었다 (도 2A 내지 2C). 반대로, 액틴 다발은 모든 약물 농도에서 Nab-5404 또는 Nab-5676에 영향을 받지 않았다.
실시예 3. Nab -5404 및 Nab -5676의 항혈관형성 활성
혈관형성에 대한 Nab-5404 및 Nab-5676의 효과를 연구하기 위하여, TCS 셀워크 안지오키트 모델 (TCS CellWorks Ltd., Botolph Claydon, Buckingham UK)을 사용하여 미세혈관 형성 분석에서 화합물을 평가하였다. 안지오키트 모델은 다른 인간 세포와 공동 배양된 인간 내피 세포를 사용한다. 내피 세포는 초기에 배양 기질 내에 작은 아일랜드를 형성한 후 증식을 시작하고, 이동기로 접어들어 기질을 통해 이동하여 실 모양의 세관 구조를 형성하였다. 이들은 점진적으로 연결되어 모세혈관과 아주 유사한 세관 네트워크를 형성하였다 (9 내지 11일). 세관은 폰 윌리브랜드(von Willebrand) 인자, CD31 (PECAM-I) 및 ICAM-2에 대하여 양성으로 염색되었다.
Nab-5404 및 Nab-5676에 더하여, 공지된 혈관 표적화제인 콤브레타스타틴 4-포스페이트 (CA4P)를 시험관내 항혈관형성 활성에 관하여 시험하였다. TCS 셀워크 안지오키트 모델을 제조업자의 지시에 따라서 사용하였다. 위에서 설명한 바와 같이, 인간 내피 세포를 인간 섬유아세포 세포와 함께 24 웰 플레이트에서 공동 배양하고 일정 범위의 농도 (0.01 내지 100 μg/ml)에 걸쳐 Nab-5404, Nab-5676 또는 CA4P에 노출시켰다. 11일 또는 12일 인큐베이션 후, 세포를 고정시키고 속발성 항체 접합체, 착색된 기재 및 CD31에 대한 모노클로날 항체를 사용하여 염색하여 세관을 가시화시켰다. 이미지프로 소프트웨어를 사용하여 세관의 길이를 분석하고 프리즘 소프트웨어를 사용하여 각 화합물의 IC50을 계산하였다.
Nab-5404 및 Nab-5676은 모두 세관 형성을 억제하고 확립된 세관을 파괴하여 항혈관형성 활성을 나타내었다. 1차 실험에서, 세관 형성 억제를 분석하기 위하여 세포를 1일에 조성물로 처리하고 12일에 염색하였다. 2차 실험에서는 세포를 8일에 처리하고 11일에 염색하였으며, 3차 실험에서는 세포를 11일에 처리하고 12일에 염색하여 확립된 세관의 파괴를 분석하였다.
Nab-5404 및 Nab-5676는 모두 새로운 미세혈관의 형성을 억제할 수 있었다 (도 3 및 4). 2차 실험에서, Nab-5404 및 Nab-5676은 모두 세관 형성의 억제 및/또는 확립된 세관의 파괴가 가능하였다 (도 5). Nab-5404는 Nab-5676 보다 더욱 강력하게 확립된 세관을 파괴하였다 (도 6, 7 및 9). Nab-5404의 IC50 계산치는 0.002 μg/ml이었고, 이는 IC50이 0.02 μg/ml인 Nab-5676보다 10배 강력한 것이었다. Nab-5404는 확립된 세관의 파괴에 있어서 CA4P (IC50 = 0.003 μg/ml) 만큼 효과적이었다 (도 6, 8 및 9).
실시예 4. Nab -5404 및 Nab -5676의 항종양 활성
Nab-5404 및 Nab-5676의 항종양 활성을 이종이식 마우스 모델에서 평가하였다. 화합물을 생체내 확립된 HT-29 결장 세포 종양에 대하여 1차 저투여량 스케쥴 후 2차 고투여 스케쥴의 2 주기로 시험하였다. 시험에서 양성 대조군으로 이리노테칸을 사용하였다. 마우스 (n=10)를 8 개 군으로 분리하여 마우스에 정맥내 주사로 Nab-5404 및 Nab-5676 화합물을 투여하였다. 1차 주기에는 0일 내지 14일에 매 3일 마다 4회 Nab-5404 또는 Nab-5676를 투여하였고, 2차 주기에는 15일 내지 30일에 매 3일 마다 4회 Nab-5404 또는 Nab-5676를 투여하였다. 이리노테칸은 정맥내 주사를 사용하여 60 mg/kg의 투여량으로 매 3일 마다 4회 투여하였다. 개체 군들은 표 2에 나타내었고, 1차 주기는 0일 내지 14일, 1차 주기는 15일 내지 30일을 나타낸다.
처리 1차 주기 투여량 1차 주기 스케쥴 2차 주기 투여량 2차 주기 스케쥴
대조군 비히클
이리노테칸 60 mg/kg q3d x 4
Nab-5404 3.4 mg/kg q3d x 4 40 mg/kg q3d x 4
Nab-5404 2.5 mg/kg q3d x 4 30 mg/kg q3d x 4
Nab-5404 1.7 mg/kg q3d x 4 20 mg/kg q3d x 4
Nab-5676 3.4 mg/kg q3d x 4 40 mg/kg q3d x 4
Nab-5676 2.5 mg/kg q3d x 4 30 mg/kg q3d x 4
Nab-5676 1.7 mg/kg q3d x 4 20 mg/kg q3d x 4
도 10 및 11에 나타낸 바와 같이, 저투여량에서 Nab-5404 및 Nab-5676은 모두 종양의 성장을 현저하게 억제하였다 (3.4, 2.5 및 1.7 mg/kg Nab-5404에 대한 p 수치는 0.02, 0.007, 0.001이고, 3.4, 2.5, 및 1.7 mg/kg Nab-5676에 대한 p 수치는 0.04, 0.003 및 0.0004이었음). 저투여량에서 Nab-5404 및 Nab-5676의 항종양 활성은 이들 화합물이 항혈관형성 활성을 갖는다는 것을 의미한다. 더 높은 투여량에서, Nab-5676과 비교하여 Nab-5404로 치료한 후 현저하게 높은 종양 퇴행이 발생하였다. 중량 손실 자료에 기초하여 이 모델에서 유의한 종양 퇴행을 나타내는 Nab-5404의 MTD는 대략 30 mg/kg이었다.
별도의 실험에서 콤브레타스타틴 4-포스페이트 (CA4P)를 또한 HT-29 종양 보유 마우스에 투여하였다. 종양이 900 mm3이 된 때에 마우스 (n=10)를 1일 1회씩 4회 스케쥴에서 MTD가 100 mg/kg로 알려진 CA4P 또는 비히클로 처리하였다. CA4P는 대조군 비히클과 차이 없이 상기 종양 모델에서 불활성인 것으로 밝혀졌다 (도 12).
이해를 명확히 하기 위하여 설명 및 예시를 통해 상기에서 본 발명을 어느정도 자세하게 설명하였지만, 사소한 변화 및 변경이 실행될 수 있다는 것은 당업자에게 명백하다. 따라서, 기재 및 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 이해되어서는 안된다.

Claims (31)

  1. 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 혈관형성을 억제하는 데 유효한 양이고, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 혈관형성의 억제 방법.
  2. 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하며, 상기 조성물은 비종양성 혈관형성 관련 질환을 치료하는 데 유효한 양인, 개체 내 비종양성 혈관형성 관련 질환의 치료 방법 .
  3. 제2항에 있어서, 비종양성 혈관형성 관련 질환이 안질환인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 안질환이 노인성 황반변성, 당뇨성 망막증 또는 신생혈관 녹내장인 방법.
  5. 제2항에 있어서, 비종양성 혈관형성 관련 질환이 심혈관계 질환인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 심혈관계 질환이 재협착증 또는 아테롬성경화증인 방법.
  7. 제2항에 있어서, 비종양성 혈관형성 관련 질환이 류마티스성 관절염 또는 건선인 방법.
  8. 제2항에 있어서, 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인 방법.
  9. 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 암을 치료하는 데 유효한 양이며, 상기 조성물의 양은 개체 내에서 유의한 세포독성을 일으키기에 불충분한 것인, 개체 내 암의 치료 방법.
  10. 제9항에 있어서, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양이 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 상응하는 MTD의 약 15% 미만인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 암이 충실성 종양인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 암이 전이성 충실성 종양인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 콜히친 또는 티오콜히친 이량체가 하기 화학식 (II)의 화합물인 방법.
    <화학식 II>
    Figure 112009018701392-PCT00007
    식 중,
    B1은 메톡시 또는 메틸티오기이고;
    B2는 메톡시 또는 메틸티오기이고;
    n은 0 내지 8의 정수이고;
    Y는 CH2 기이거나, n이 1인 경우 또한 화학식 NH인 기일 수 있다.
  14. 제13항에 있어서, Y가 CH2인 방법.
  15. 제13항에 있어서, n이 1이고 Y가 NH인 방법.
  16. 제13항에 있어서, B1 및 B2가 둘 다 메틸티오기인 방법.
  17. 제13항에 있어서, 화합물이 IDN5404인 방법.
  18. 제13항에 있어서, 화합물이 IDN5676인 방법.
  19. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 내 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 양이 약 15 mg/m2 미만인 방법.
  20. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 주 1회 투여되는 것인 방법.
  21. 제20항에 있어서, 조성물이 3 개월 이상 중단없이 투여되는 것인 방법.
  22. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 실질적으로 계면활성제를 함유하지 않는 것인 방법.
  23. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 담체 단백질이 알부민인 방법.
  24. 제23항에 있어서, 알부민 대 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 비율이 약 18:1 미만인 방법.
  25. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 담체 단백질 및 콜히친 또는 티오콜히친 이량체를 포함하는 나노입자를 포함하는 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 담체 단백질이 알부민인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 알부민 대 콜히친 또는 티오콜히친 이량체의 비율이 약 18:1 미만인 방법.
  28. 제25항에 있어서, 나노입자의 평균 지름이 200 nm 이하인 방법.
  29. 제25항에 있어서, 조성물이 실질적으로 계면활성제를 함유하지 않는 것인 방법.
  30. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 Nab-5404인 방법.
  31. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 인간인 방법.
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