KR20090034826A - 췌장암의 치료 및 예방을 위한 델타-토코트리에놀 - Google Patents

췌장암의 치료 및 예방을 위한 델타-토코트리에놀 Download PDF

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유니버시티 오브 사우스 플로리다
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Abstract

토코트리에놀 ; 즉, 감마-토코트리에놀 및 델타 토코트리에놀을 사용하여 췌장암과 같은 신생물성 장애를 치료하는 방법이 개시된다. 상기 화합물의 항종양원성 효과는 누드 마우스에 이종이식된 다수의 인간 췌장암 세포주 및 MIA-PAC A2 인간 췌장암 세포를 사용하여 시험관 내에서 및 생체 내 둘 다에서 나타낸다. 또한, Ki-67 및 p27 과 같은 대리 종점 생물지표에 대한 그의 효과를 측정함으로써, 잠재적인 화학예방제의 효능을 테스트하는 방법이 개시된다. 관련 화합물이 또한 개시된다.
Figure P1020087031667
토코트리에놀

Description

췌장암의 치료 및 예방을 위한 델타-토코트리에놀 {DELTA-TOCOTRIENOL TREATMENT AND PREVENTION OF PANCREATIC CANCER}
관련 출원에의 상호 참조
본 출원은 그 전체가 참조로써 본원에 삽입된 2006 년 6 월 27 일에 출원된 동시계속중인 미국 가출원 제 60/805,916 호 및 2007 년 6 월 26 일에 출원된 동시계속중인 미국 가출원 제 11/768,373 호의 정규 출원이다.
정부 권리 상태 (STATEMENT OF GOVERNMENT INTEREST)
본 발명은 국방성에 의해 부여된 관리번호 (Grant No.) DAMD 17-01-1-04 및 NCI 관리번호 3R01CA098473-03S1 하에 정부 지원으로 제조되었다. 정부는 본 발명에 있어서 확실한 권리를 가진다.
췌장은 조기 신생물-비침범성 클론 상피 증식 (early neoplasms-noninvasive clonal epitherial expansion) 의 발달을 위한 극도로 보편적인 부위이다. 소수의 사람에서, 이러한 세포의 클론은 단계적으로 유전적 변화를 획득해서 침범성 선암을 초래할 수 있다. 일단 침범성이 된 췌장암은 대체로 정형적으로 치명적이다. 상기 과정의 진행된 단계에 있는 상피 세포는 매우 공격적이어서, 이들이 관 구조 (duct structure) 를 넘어서 주변 조직에 침범한 후 얼마 있지 않아 나 타내는 전이에 대한 타고난 능력을 가지는 것으로 보인다. 상기 질환과 관련된 침울한 진단을 덜기 위해서, 췌장 발암의 과정은 침범 전에 인지 및 치료되는 것이 필수적이다. 화학예방은 발암의 진행을 늦추거나, 역행시키거나 또는 억제시킴으로써, 침범성 또는 임상적으로 유의한 질환을 발달시킬 위험을 낮추는 제제 (약물, 생물질, 및 영양분) 의 투여이다. 따라서, 침범성 췌장암의 전구 병변 (precusor lesion) 의 형태학 및 생물학을 이해하는 것은 최고로 중요한 이슈가 되었다. 지난 10 년에, 이들 전구 병변의 인지 및 적절한 분류에 있어서 상당한 진전이 있었다. 점액성 낭성 종양 (MCN), 췌관내 유두상 점액성 종양 (IPMN), 및 췌장 상피내 종양 (PanIN) 은 침범성 췌장암으로 가는 3 가지 공지된 형태학적으로 분명한 전구체를 포함한다.
많은 환자-대조군 (case-control) 연구 및 코호트 (cohort) 연구는 일부 가족에서 췌장암의 유의한 밀집 (clustering) 이 있다는 것을 보여주었다. 이들 고-위험의 유전성 췌장암은 췌장암의 약 10% 를 차지하는 것으로 평가된다. 알려진 유전자 결함이 있는 5 가지의 잘 알려진 유전적 증후군은 췌장암의 집단이 있는 가족 중 대략 20% 를 차지한다. 이러한 증후군에는 (1) BRCA2 ; (2) 가족성의 부정형 다발성 흑색종 (familial atypical multiple mole melanoma) (p16/CDKN2A) ; (3) 포이츠-예거 증후군 (Peutz-Jeghers Syndrome) ; (4) HNPCC ; 및 (5) 가족성 췌장염이 포함된다. 대부분의 췌장암은 산발성이고, 고비율의 전좌 및 결손을 포함하여 광범위한 염색체 불안정성의 증거를 가지고 있다. 거의 모든 (> 90%) 전침범성 (preinvasive) 병변은 성장 인자 신호의 전달에 관여하 는 K-Ras 단백질에서 조기 돌연변이를 갖는다. 전침범성 진행의 중간 단계에서, 90% 가 넘는 병변에서 CDKN2A (p16) 사이클린 의존성 키나아제 억제제의 불활성화가 발달한다. 후기 단계에서, 대부분의 전침범성 병변에서 또한, TGFβ 및 액티빈 (activin) 신호의 전달에 관여하는 보편적인 Smad 단백질인 MADH4 및 TP53 (p53) 의 돌연변이가 생긴다. 췌장 종양에서 화학예방제에 대한 광범위하고 분명한 이점에도 불구하고, 화학예방 지침에 대한 직접적인 약물 연구는 서서히 드러났다. 중요한 요인은 임상적인 이점을 정의하고 발표할 연구를 수행하려는 도전이다.
췌장암의 증식은 비정상적인 발암원성 Ras 신호화, 및 p27kip1 과 같은 사이클린 키나아제 억제제에 대한 그의 효과를 통해 조절된다. 선행 연구에서, ras 신호화 경로 중 하나인 Raf-MEK-ERK 경로의 약물학적 억제는 p27 의 유도된 발현을 통해 췌장암 세포 주기 억제를 이끌어낸다고 기술되어 있다 (Cancer Res 2005; 65(11):4870-80). 불포화 이소프레노이드 측쇄가 있는 비타민 E 의 화학적 형태인 토코트리에놀은 암 예방 및 치료를 위한 유망한 식이보충제로서 관심을 끌고 있다.
토코트리에놀은 야자나무, 및 쌀과 밀과 같은 곡물과 같은 대부분의 외떡잎 식물의 씨앗에 있는 비타민 E 의 1 차 형태이다. 토코트리에놀 및 토코페롤의 생합성은 광합성 개체에서만 일어나고, 호모겐티신산으로부터 발생한다. 토코트리에놀은 호모겐티신산 및 게라닐게라닐 디포스페이트의 축합으로부터 생성되는 한편, 토코페롤 합성에서의 개입 단계는 호모겐티신산 및 피틸 디포스페이트의 축합이다. 구조적으로 토코페롤 및 토코트리에놀은 C-2 위치에서 공통의 크로마놀 헤드 (chromonol head) 및 측쇄로 이루어진 일부의 유사점을 공유하나, 그의 측쇄는 토코페롤 및 토코트리에놀에서 차이가 있다.
토코페롤은 포화 피틸 꼬리를 가지는 한편, 토코트리에놀은 불포화 이소프레노이드 측쇄를 가진다. 토코페롤 및 토코트리에놀은 추가로, 크로마놀 고리 상의 메틸 치환의 수 및 위치에 따라 그리스 문자 접두사 (α,β,γ,δ) 에 의해 지정된 개별 화합물로 분리된다. 그의 구조적 유사성에서 반영된 바와 같이, 토코페롤 및 토코트리에놀은 그의 항산화 효과로 잘 알려져 있다. 그러나, 토코트리에놀은 분명하고 지속적인 항종양 활성이 있는 천연 비타민 E 화합물 군이다. 토코페롤 숙시네이트와 같은 준합성 토코페롤은 항종양 활성을 가지나, 경구 소비된 후 본래의 화합물의 생물이용가능성은 불량해져서, 상기 화합물이 화학예방적 개입을 하기에는 부적합하게 만든다. 비타민 E 화합물의 전세포자살 (proapoptotic) 효과에 대한 구조 활성 연구는 그의 항종양 생물활성에 있어서 비타민 E 화합물의 불포화 이소프레노이드 꼬리의 중요성을 분명하게 보고하였다. 더욱이, 이들 연구는, 크로마놀 고리 상의 메틸 치환의 수를 감소시키는 것이 항종양 능력을 증가시키는 것과 연관있다고 지적한다.
발명의 개요
한 구현예에서, 본 발명은 p27 과 같은 대리 종점 생물지표 (surrogate endpoint biomarker) 의 최초의 수준을 단리된 샘플에서 측정함으로써 화학예방제의 효능을 측정하는 방법을 포함한다. 다음, 테스트되는 실험적 유효량의 화학예방제와 상기 샘플을 접촉시킨다. 화학예방제를 투여한 후, 대리 종점 생물지표의 두번째 수준을 취하고, 이를 첫번째 (치료-전) 수준과 비교한다. 후보 화학예방제는 p27 의 두번째 (치료-후) 수준이 치료-전 및/또는 대조군 수준을 넘는 통계학적으로 유의한 정도까지 증가하는 유효성을 나타낸다.
또다른 구현예에서, 본 발명은 단리된 샘플에서, Ki-67 및/또는 p-MAPK 과 같은 두번째 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준을 추가로 측정함으로써, 화학예방제의 효능을 측정하는 방법을 제공한다. 화학예방제를 투여한 후, Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 두번째 수준을 얻고, 이를 첫번째 (치료-전) 수준 및/또는 대조군과 비교한다. 후보 화학예방제는 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 두번째 (치료-후) 수준이 치료-전 및/또는 대조군 수준 미만으로 통계적으로 유의한 정도로 감소되는 효능을 나타낸다.
본 발명의 또다른 구현예는 단리된 샘플에서와 같이 개체에서, 생물지표 ; 즉, p27 의 수준을 측정함으로써, 췌장관 암종 또는 췌장암의 단계를 스크리닝하는 방법을 포함한다. 다음, 생물지표의 수준을 하나 이상의 대조군 샘플에서 상응하는 대조군 수준과 비교한다. 바람직한 구현예에서, 대조군 샘플은 췌장관 암종, 또는 췌장암의 단계를 갖지 않은 것으로 결정된 개체에서 수득한다.
개체 내 생물지표의 수준 및 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 수준 간의 통계적으로 유의한 유사성의 측정은 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표이다. 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 수준과 비교해, 개체 내 p27 수준의 통계적으로 유의한 감소는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 지시한다.
대안적인 구현예에서, 두번째 생물지표, 즉 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준을 측정하고, 이를 하나 이상의 대조군 샘플 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 대조군 수준과 비교한다. 개체 및 대조군 샘플(들) 에서 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준 간의 통계적으로 유의한 증가는 개체 내 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 나타내는 지표이다. 대조군 샘플(들) 과 비교해, 개체 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 수준의 통계적으로 유의한 유사성은 개체 내 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표이다.
개체 및 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 측정 방법은 통상의 실험자에게 알려져 있다. 한 구현예에서, 예로서, 생물지표에 결합하는 항체를 사용하여 생물지표의 수준을 측정한다. 생물지표가 항체에 결합할 수 있는 조건 하에, 생물지표를 함유하는 샘플을 항체와 접촉시키고 ; 그런 다음, 생물지표의 존재를 정량화할 수 있다.
본 발명은 또한, 관련 방법을 수행하는데 유용한 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 관련 생물지표 ; 즉, Ki-67 및/또는 p-MAPK, 및 p27 의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는 조성물을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 단리된 단백질은 상보적인 이중 가닥 DNA 를 선택적으로 증폭시킨다. 조성물은 또한, 다수의 생물지표 특이적 프라이머를 포함하도록 포함되며, 여기서 각각의 생물지표 특이적 프라이머는 Ki-67, p-MAPK, 및 p27 과 같은 독특한 생물지표에 상보적인 이중 가닥 DNA 를 선택적으로 증폭시킨다. 대안적으로, 본 발명은 2 가지 이상의 생물지표의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 각각의 독특한 생물지표는 Ki-67, p-MAPK 및 p27 로 이루어진 군으로부터 선택된다.
따라서, 본 발명은 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 조성물을 개체에 투여함으로써, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계와 같은 암을 치료하는 방법을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 토코트리에놀은 감마-토코트리에놀 및/또는 델타-토코트리에놀로서, 이는 약학적 조성물로서 투여된다. 바람직한 구현예의 조성물에는 실질적으로 알파-토코트리에놀, 베타-토코트리에놀 및/또는 토코페롤이 없다. 당업자가 적절한 투여량을 결정하는 방법을 알게 될 것임에도 불구하고, 한 구현예의 조성물은 일일 2 회 투여되는, 약 100 mg 내지 300 mg 의 토코트리에놀을 포함한다.
바람직한 구현예의 토코트리에놀은 하기 화학식을 갖는다 :
Figure 112008089489392-PCT00001
[식 중, R 은 H 및 CH3 으로 이루어진 군으로부터 선택됨].
본 발명의 특성 및 목적을 더욱 이해하도록, 하기 상세한 설명에 참조가 되어 있으며, 이는 수반하는 도면과 연관있으며, 여기서 :
도 1A 는 연질 아가 (soft agar) 중의 MIA PaCa2 세포의 이미지이고 ; 비히클과 비교해 세포의 비부착 증식 (anchorage independent growth) 의 유의한 억제는 δ-토코트리에놀을 매주 처리하였을 때 발생하였다.
도 1B 는 MIA PaCa2 췌장암 세포 (3 x 103) 를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고, 다음 날 δ-토코트리에놀로 처리한 그래프이다. 증식을 24 시간 간격으로 MTT 에 의해 평가하였다. 결과는 증식의 투여량 의존성 억제를 보여준다. 모든 3 가지 췌장암 세포주에 대한 IC50 은 24 시간째에 20 ~ 25 μM 이었다. HPDE 6C7 세포를 또한, 증가하는 농도의 δ-토코트리에놀로 24 시간 동안 처리하였다.
도 1C 는 SW1990 췌장암 세포 (3 x 103) 를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고, 다음 날 δ-토코트리에놀로 처리한 그래프이다. 증식을 24 시간 간격으로 MTT 에 의해 평가하였다. 결과는 증식의 투여량 의존성 억제를 보여준다. 모든 3 가지 췌장암 세포주에 대한 IC50 은 24 시간째에 20 ~ 25 μM 이었다. HPDE 6C7 세포를 또한, 증가하는 농도의 δ-토코트리에놀로 24 시간 동안 처리하였다.
도 1D 는 BXPC3 췌장암 세포 (3 x 103) 를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고, 다음 날 δ-토코트리에놀로 처리한 그래프이다. 증식을 24 시간 간격으로 MTT 에 의해 평가하였다. 결과는 증식의 투여량 의존성 억제를 보여준다. 모든 3 가지 췌장암 세포주에 대한 IC50 은 24 시간째에 20 ~ 25 μM 이었다. HPDE 6C7 세포를 또한, 증가하는 농도의 δ-토코트리에놀로 24 시간 동안 처리하였다.
도 1E 는 24 시간째에 δ-토코트리에놀에 의한 췌장암 세포주의 증식의 선택적인 억제를 보여주는 그래프이다. HPDE 6C7 세포는 가장 높은 농도에서조차, 토코트리에놀의 항증식 효과에 대해 상대적으로 저항성이었다.
도 2A 는 δ-토코트리에놀 (25 μM) 로 처리한 HPDE 6C7 및 SW1990 췌장암 세포주에서 유의한 G1 세포 주기 억제를 보여주는 그래프이다. 이와는 달리, δ-토코트리에놀은 불멸의 인간 췌장관 외피 세포 (HPDE 6C7) 에서 세포 주기에 아무런 영향을 미치지 못하였다.
도 2B 는 δ-토코트리에놀 (20 μM) 로 처리한 MaPaCa2 및 BXPC 3 췌장암 세포주에서 유의한 G1 세포 주기 억제를 보여주는 그래프이다. 이와는 달리, δ-토코트리에놀은 불멸의 인간 췌장관 외피 세포 (HPDE 6C7) 에서 세포 주기에 아무런 영향을 미치지 못하였다.
도 2C 는 모든 4 개의 췌장암 세포주에서의 p27kip1 의 발현에 있어서 시간 의존성 상향조절을 보여주는 일련의 블롯 (blot) 이다. 이와는 달리, δ-토코트리에놀로 처리한 HPDE 6C7 세포에서는 p27kip1 의 하향조절이 나타난다.
도 2D 는 δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa2 세포에서 루시퍼라제 활성의 증가를 보여주는 그래프이다.
도 2E 는 siRNAp27 이 췌장암 세포 성장의 토코트리에놀 억제를 벗어나는 것을 보여주는 그래프와 관련 블롯이다.
도 2F 는 siRNAp27 이 췌장암 세포에서 토코트리에놀 유도 G1-S 세포 주기 억제를 벗어나는 것을 보여주는 한 쌍의 그래프이다.
도 3A 는 발암원성 Ras p-cRaf, p-MEK, 및 p-ERK 의 하위 인산화된 표적의 δ-토코트리에놀에 의한 선택적인 억제를 보여주는 블롯 시리즈이다. HPDE 6C7 세포는 δ-토코트리에놀의 억제 효과에 대해 저항성이었다.
도 3B 는 24 시간 및 48 시간 동안 δ-토코트리에놀 (20 μM) 로 처리한 MIA PaCa2 및 SW1990 세포를 보여주는 블롯 시리즈이다. 세포 파쇄물을 SDS-PAGE 시키고, p-AKT 및 AKT (Cell Signaling) 에 대해 면역블로팅하였다. 블롯은 24 시간 및 48 시간째에 p-AKT 단백질 수준의 감소를 보여주나, AKT 에 대해서는 아니었다.
도 4A 는 시간 의존성 방식으로 캐스페이즈 8, 캐스페이즈 3, 및 Parp 의 절단에 의해 알 수 있듯이, 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 보여주는 그래프이다.
도 4B 는 시간 의존성 방식으로 캐스페이즈 8, 캐스페이즈 3, 및 Parp 의 절단에 의해 알 수 있듯이, 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 보여주는 일련의 그래프이다.
도 4C 는 시간 의존성 방식으로 캐스페이즈 8, 캐스페이즈 3, 및 Parp 의 절단에 의해 알 수 있듯이, 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 보여주는 일련의 블롯 이다.
도 4D 는 시간 의존성 방식으로 캐스페이즈 8, 캐스페이즈 3, 및 Parp 의 절단에 의해 알 수 있듯이, 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 보여주는 일련의 블롯이다.
도 5A 는 치료 전 및 10 일째에 대조군 및 δ-토코트리에놀군의 대표적인 발광 측정을 보여준다. 치료 10 일째의 성장률은 토코트리에놀 치료군에서 더 작다. MIA PaCa2 세포의 안정적 발현세포주를 루시퍼라제와 함께 누드 마우스에 동시에 주사하였다. 종양 부피를 캘리버를 사용해 2 일마다 측정하고, IVIS 100 Xenogen 시스템을 사용하여 종양 발광을 측정함으로써 성장 속도를 매주 측정하였다. 종양 부피 (100 ~ 150 mm3), 및 발광을 근거로 한 성장 속도가 유사한 종양을 무작위 선별하여, 20 일 동안의 위관 영양 (gavage) 에 의해 비히클 또는 δ-토코트리에놀 (100 mg/kg/일) 을 수여받도록 하였다.
도 5B 는 비히클과 비교해 δ-토코트리에놀로 처리한 이종이식편에서 종양 성장을 50% 만큼 유의하게 감소시킨 것을 보여주는 그래프이다.
도 5C 는 발암원성 Ras 신호화 표적에 대한 δ-토코트리에놀의 효과에 대한 일련의 면역조직화학 염색이다. 증식 억제는 대조군 종양과 비교해 δ-토코트리에놀로 처리한 마우스의 종양에서, Ki67 의 감소 및 TUNEL 에 의한 세포자살 유도에 의해 보여진다.
도 6 은 표 I ~ II 에서 나타낸, SW1990 췌장암 세포 (Panc-1), 24 시간 및 48 시간째의 MTS 분석의 그래프이다.
도 7 은 표 IV ~ V 에서 나타낸, MiaPaCa2 췌장암 세포, 24 시간 및 48 시간째의 MTS 분석의 그래프이다.
도 8A 는 비히클 또는 처리한 HPDE 6C7 세포와 비교해 δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa2 에서 자살 세포의 유의한 증가를 보여주는 일련의 이미지이다.
도 8B 는 MIA PaCa-2 췌장암 세포를 다양한 농도의 δ-토코트리에놀 또는 비히클로 24 시간 동안 처리한 그래프이다. 세포를 수합하고, Annexin V-FITC 로 염색하고, 세포자살에 대한 유세포분석에 의해 분석하였다.
도 8C 는 BXPC3 췌장암 세포를 다양한 농도의 δ-토코트리에놀 또는 비히클로 24 시간 동안 처리한 그래프이다. 세포를 수합하고, Annexin V-FITC 로 염색하고, 세포자살에 대한 유세포분석에 의해 분석하였다.
도 8D 는 SW1990 췌장암 세포를 다양한 농도의 δ-토코트리에놀 또는 비히클로 24 시간 동안 처리한 그래프이다. 세포를 수합하고, Annexin V-FITC 로 염색하고, 세포자살에 대한 유세포분석에 의해 분석하였다.
도 9A 는 캐스페이즈 8, 캐스페이즈 3, 및 PARP 의 절단에 의해 알 수 있듯이, 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 시간 의존성 방식으로 보여준다.
도 9B 는 δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa-2 세포가 시토크롬 C 방출 또는 캐스페이즈 9 의 절단의 부재에 의해 나타나듯이, 미토콘드리아의 전-세포자살 (pro-apoptotic) 단백질에 대해서는 유의한 효과를 가지지 못함을 보여준다.
도 9C 는 다수의 췌장암 세포주에서 선택적인 캐스페이즈 8 및 3 절단을 보 여주나, 불멸의 췌장관 외피 세포주인 HPDE-6C7 세포에서는 그렇지 않다. 캐스페이즈 9 는 췌장암 세포에서 절단되지 않았다.
도 10 은 췌장암 세포주에서 포스포-AKT (그러나, 총 AKT 는 아님) 의 시간-의존성 감소를 보여주나, HPDE 세포에서는 그렇지 않다.
도 11A 는 10-시간의 캐스페이즈 8/3 억제제 전처리와 함께 또는 없이, 혈청없이 비히클 또는 δ-토코트리에놀 (50 μM) 로 24 시간 처리한 MIA PaCa-2 세포 (pZWL 벡터 및 myrAKT) 의 그래프이다. 세포를 또한, 양성 대조군으로서 TRAIL 로 처리하였다. 다음, 세포를 수합하고, 고정시키고, 침투시키고, 트립판 블루로 염색하였다. 그래프는 비히클, myr-AKT, 또는 캐스페이즈 8/3 억제제 처리 세포와 비교해 벡터에서 자살 세포의 유의한 증가를 보여준다.
도 11B 는 10-시간의 캐스페이즈 8/3 억제제 전처리와 함께 또는 없이, 혈청없이 비히클 또는 δ-토코트리에놀 (40 μM) 로 24 시간 처리한 MIA PaCa-2 세포 (pZWL 벡터 및 myrAKT) 의 그래프이다. 다음, 세포를 수합하고, 고정시키고, 침투시키고, Tunel 염색시켰다. 그래프는 비히클, myr-AKT, 또는 캐스페이즈 8/3 억제제 처리 세포와 비교해 벡터에서 자살 세포의 유의한 증가를 보여준다.
도 12A 는 누드 마우스 내 MIA PaCa2 이종이식편에서 종양 성장을 매 2 일째에 측정하였다. 마우스를 1 주에 5 회씩 위관 영양을 통해 현미유 (비히클) 또는 δ-토코트리에놀 (100 mg/kg/일) 로 처리하였다. 결과는, δ-토코트리에놀로 처리한 마우스에서 췌장 종양 성장의 유의한 억제를 나타낸다.
도 12B 는 면역조직화학 염색이 TUNEL 염색에 의해 측정된 바와 같은 δ-토 코트리에놀 유도 세포자살, 및 감소된 p-AKT 발현을 나타내는 그래프이다.
도 13A 는 미리스토일화된 AKT 를 암호화하는 pWZL 레트로바이러스 벡터와 함께 Mia-PaCa2 췌장암 세포를 주사한 후, δ-토코트리에놀 억제 PI3K-AKT 신호화를 벗어나는 것을 보여주는 일련의 블롯이다.
도 13B 는 미리스토일화된 AKT 를 암호화하는 pWZL 레트로바이러스 벡터와 함께 Mia-PaCa2 췌장암 세포를 주사한 후, δ-토코트리에놀 억제 PI3K-AKT 신호화를 벗어나는 것을 보여주는 pAKT 농도측정법의 그래프이다.
도 13C 는 미리스토일화된 AKT 를 암호화하는 pWZL 레트로바이러스 벡터와 함께 Mia-PaCa2 췌장암 세포를 주사한 후, 델타-토코트리에놀이 AKT 신호화를 조정하는 것을 보여주는 일련의 블롯이다.
도 13D 는 (p-AKT/총)/B-액틴 농도측정법을 보여주는 그래프이다.
도 13E 는 %FLIP(긴 55 kda)/B-액틴 농도측정법을 보여주는 그래프이다.
도 13F 는 %FLIP(짧은 28 kda)/B-액틴 농도측정법을 보여주는 그래프이다.
도 13G 는 델타-토코트리에놀이 췌장암 전이를 억제시키는 것을 보여주는 생체 내 결과의 포화 발광 이미지이다. 이미지는 비히클 대 (vs) 100 MPK 의 비교를 보여준다.
도 13H 는 마우스 중량 군에 의한 종양 전이의 정량화 그래프이다.
도 13I 는 PBS, 비히클, 50 MPK (T3), 100 MPK(T3) 에 대한 상대 세기 (p/s)/시간을 보여주는 그래프이다.
도 13J 는 마우스 췌장에서 토코트리에놀 축적의 포화 광발광 이미지이다.
도 13K 는 침전 및 추출 후에 블랭크 혈장 (blank plasma) 대 (versus) 델타 토코트리에놀을 사용해 스파이크된 (spiked) 혈장을 비교한 크로마토그램이다.
도 13L 은 델타-토코트리에놀의 조직 수준을 보여주는 그래프이다.
도 14A 는 종양의 침범 정도 및 등급이 증가함에 따라 증식 속도의 증가를 보여주는 그래프이다. 이는 Ki-67 에 대해 양성으로 염색된 세포의 평균 % 의 급진적인 증가에 의해 나타난다.
도 14B 는 종양 침범의 정도와 음성적으로 관련하여, TUNEL 로 염색된 자살 세포의 수의 급진적인 감소를 보여주는 그래프이다.
도 15 는 비-신생물성 췌장관 조직, 반응성 조직, 전구 병변 (PanIN 1-3), 및 저등급 및 고등급 침범성 암종의 대표적인 일련의 슬라이드이다. Ki-67, p27, p-MAPK, 및 TUNEL 에 대해, 각각의 대표 면적을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 결과는 췌장관이 비신생물성에서 PanIN 으로, 침범성 암종으로 진행함에 따라, Ki-67 및 p-MAPK 염색의 증가를 보여준다. 가장 큰 염색 정도는 고등급 종양에 있다. 이와는 달리, p27 및 TUNEL 염색은 종양 침범 및 진행과 함께 감소한다. 이는 세포 주기 억제 및 세포 자살 유도의 상실을 가리킨다.
바람직한 구현예의 상세한 설명
하기 바람직한 구현예의 상세한 설명에서, 참조의 일부를 형성하고 그 안에 본 발명이 수행될 수 있는 구체적인 구현예의 예시로써 나타난 수반하는 도면을 참조로 한다. 다른 구현예를 사용할 수 있고, 본 발명의 범주를 벗어나지 않으면서 구조적 변화를 일으킬 수 있음을 이해할 것이다.
δ-토코트리에놀은 시험관 내에서 췌장암 세포를 억제시킨다.
한 구현예에서, 본 발명은 δ-토코트리에놀이 췌장 종양 성장을 억제시키고, 악성 형질변환을 차단하고, 시험관 내에서 세포자살을 유도하는 방법을 포함한다. 본원에서, 발명자들은 시험관 내에서 δ-토코트리에놀의 항종양원성 특성을 보여준다. American type tissue culture (ATTC, Rockville, MD) 에서 인간 췌장관 암종 세포주 (MIA PaCa2, SW1990, BXPC3) 를 획득하고, 프로토콜에 따라 70% 정도 풍부해질 때까지 키우고, δ-토코트리에놀로 처리하였다. 불멸의 인간 췌장관 외피 세포인 HPDE 6C7 을 동일한 조건 하에 처리하여, 췌장암 세포에 대한 δ-토코트리에놀의 선택적인 효과를 연구하였다. 결과는, δ-토코트리에놀이 형질전환 및 증식을 선택적으로 억제시키는 것을 보여준다.
MIA PaCa2, SW1990, BXPC3, 및 HPDE 6C7 세포를 증가하는 농도의 δ-토코트리에놀로 처리하였다. 도 1A 는 비히클과 비교해, δ-토코트리에놀로 매주 처리한 경우, 연질 아가 내 MIA PaCa2 세포의 비부착성 성장의 유의한 억제를 보여준다. 권고한 매질에서만 키운 HPDE 6C7 세포는 연질 아가에서 형질전환을 일으키지 않았고, 이는 상기 전신생물성 세포주에서 기대할 만하고, 본 발명자들의 음성 대조군으로 작용하였다.
췌장암 세포 (3 x 103) 를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고, 다음 날 δ-토코트리에놀로 처리하였다. 24 시간 간격으로 MTT 에 의해 증식을 평가하였다. 결과는 증식의 투여량 의존성 억제를 보여준다 (도 1B ~ 1D). 모든 3 가지 췌 장암 세포주에 대한 IC50 은 24 시간째에 20 ~ 25 μM 이었다. HPDE 6C7 세포를 또한, 증가하는 농도의 δ-토코트리에놀로 24 시간 동안 처리하였다. 도 1E 는 24 시간째에 δ-토코트리에에 의한, 췌장암 세포주의 증식의 선택적인 억제를 보여준다. HPDE 6C7 세포는 가장 높은 농도에서조차, 토코트리에놀의 항증식 효과에 대해 상대적으로 저항성이었다.
췌장암 세포에 대한 δ-토코트리에놀의 관찰된 항증식 효과는 세포 주기 조절을 통해 일어날 수 있다. 결과는 또한, δ-토코트리에놀이 선택적인 G1 세포 주기 억제를 야기하고, 사이클린 키나아제 억제제 p27kip1 의 상향조절과 관련있다는 것을 보여준다. MIA PaCa2, SW 1990, BXPC3 및 HPDE 6C7 세포를 δ-토코트리에놀 20 μM 또는 비히클로 24 시간 동안 처리하였다. 세포를 수합하고, PBS 로 2 회 세정하고, 에탄올에서 밤새 고정시켰다. 다음 날, 펠렛을 PBS 에서 세정하고, 프로피디움 아이오다이드 (propidium iodide) 로 염색하고, 세포 주기에 대해 유세포 분석하였다.
도 2A 및 2B 는 δ-토코트리에놀로 처리한 모든 3 가지 췌장암 세포주에서 유의한 G1 세포 주기 억제를 나타낸다. 이와는 달리, δ-토코트리에놀은 불멸의 인간 췌장관 외피 세포 (HPDE 6C7) 에서 세포 주기에 대해 아무런 효과를 미치지 못하였다. G1 의 세포 주기의 중요한 조절자는 사이클린 키나아제 억제제 패밀리의 구성원을 포함한다. 이들 구성원 중 하나인 p27kip1 은 췌장암의 진행에 중요한 것으로 보인다. 도 2F 는 siRNAp27 이 췌장암 세포에서 토코트리에 놀 유도 G1-S 세포 주기 억제를 벗어나는 것을 보여준다.
δ-토코트리에놀에 의한 세포 주기 억제는 p27kip1 의 변형된 단백질 발현과관련있었다. 동일한 4 개의 세포주를 δ-토코트리에놀 (20 μM) 로 처리하고, 점진적인 시간 간격을 두고 수합하였다. 전체 세포 파쇄물을 PBS 에서 2 회 세정한 세포 펠렛으로부터 만들고, M-PER (포유류 단백질 추출 시약 (Mammalian Protein Extraction Reagent), Pierce) 에서 파쇄시켰다. 파쇄물의 단백질을 SDS-PAGE 에 의해 분리하고, p27kip1 (BD Biosciences) 에 대해 면역블로팅하였다. 도 2C 는 모든 3 가지 췌장암 세포주에서 p27kip1 발현에서 있어서 시간 의존성 상향조절을 나타낸다. 이와는 달리, p27kip1 의 하향조절은 δ-토코트리에놀로 처리한 HPDE 6C7 세포에서 나타난다.
δ-토코트리에놀이 p27kip1 단백질 발현을 상향조절하는 기작을 루시퍼라제 리포터 어세이를 사용해 연구하였다. p27kip1 루시퍼라제 리포터 (Dr. Pledger 의 선물, Moffitt Cancer Center, Tampa) 로 트랜스펙션시킨 Mia PaCa2 세포를 δ-토코트리에놀 (20 μM) 또는 비히클로 24 시간 동안 처리하였다. 다음, 루시퍼라제 활성을 발광계를 사용해 측정하였다. 도 2D 는 δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa2 세포에서 루시퍼라제 활성의 증가를 보여준다. 이는, δ-토코트리에놀이 전사 상향조절을 통해 p27kip1 단백질 발현을 증가시킴을 제안한다. 이러한 동태 (dynamic) 는 추가로, siRNAp27 에 의한, MiaPaCa-2 세포의 토코트리에놀 억제의 벗어남에 의해 설명된다 (도 2E).
δ-토코트리에놀은 또한, 발암원성 Ras 신호화의 하위 효과기를 선택적으로 억제시키는 것으로 나타났다. 80% 초과의 췌장암이 비정상적인 발암원성 Ras 신호화를 설명한다. Ras 효과기 경로인 Raf-MEK-ERK 및 PI3 키나아제-AKT 는 각각 세포 증식 및 생존에 중요하다. 데이타는 δ-토코트리에놀이 발암원성 Ras 신호화에 대해 억제 효과를 가짐을 나타낸다.
췌장암 세포주 (MIA PaCa2, SW1990, BXPC3) 및 HPDE 6C7 세포를 δ-토코트리에놀 (20 μM) 로 처리하고, 세포 파쇄물을 수합하고, 상기 기술된 점진적인 시간 간격을 두고 제조하였다. 세포 파쇄물의 단백질을 SDS PAGE 시키고, 하기 항체로 면역블로팅하였다 : Ras, p-cRaf (ser 338), p-MEK1/2, MEK1/2, pERK 44/42, ERK 44/42 (Cell Signaling) 및 c-Raf (BD Transduction Laboratories). 도 3A 는 δ-토코트리에놀에 의한, 발암원성 Ras p-cRaf, p-MEK, 및 p-ERK 의 하위 인산화된 표적의 선택적인 억제를 나타낸다.
HPDE 6C7 세포는 δ-토코트리에놀의 억제 효과에 대해 저항성이었다. 다음, MIA PaCa2 및 SW1990 세포를 δ-토코트리에놀 (20 μM) 로 24 시간 및 48 시간 동안 처리하였다. 세포 파쇄물을 SDS-PAGE 시키고, p-AKT 및 AKT (Cell Signaling) 에 대해 면역블로팅하였다. 도 3B 는 24 시간 및 48 시간째에 p-AKT 단백질 수준의 감소를 나타내나, AKT 에서는 그렇지 않다. 통합하면, Ras 단백질 수준에 대한 영향 없이, δ-토코트리에놀에 의한, 발암원성 Ras 신호화의 하위 효과기의 억제는 발암원성 Ras 의 기능에 대한 δ-토코트리에놀의 음성 조절 작용을 가리킬 수 있다.
그의 화학예방적 효과 외에도, δ-토코트리에놀은 췌장암에서 세포자살을 유도한다. MIA PaCa2 세포를 δ-토코트리에놀 또는 비히클로 24 시간 동안 처리하였다. 세포를 수합하고, Annexin V-FITC 로 염색하고, 세포자살에 대해 유세포분석하였다. 도 4A 는 δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa2 세포에서 초기 세포자살의 투여량 의존성 유도를 나타낸다. δ-토코트리에놀은 췌장암 세포에서 세포자살을 선택적으로 유도하였다.
MIA PaCa2 세포 및 HPDE 6C7 세포를 비히클 또는 δ-토코트리에놀 (20 μM) 로 24 시간 동안 처리하였다. 세포를 수합하고, TUNEL 염색하였다. 도 4B 는 TUNEL 에 대해, 비히클 또는 처리된 HPDE 6C7 세포와 비교해, δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa2 세포의 유의한 염색을 나타낸다. 이러한 발견은 췌장암 세포에서 세포 자살의 선택적인 유도를 제시한다. 다음, 상기 기술된 바와 같이 점진적인 시간 간격을 두고 δ-토코트리에놀 (20 μM) 로 처리한 MIA PaCa2 세포로부터 세포 파쇄물을 제조하였다. 파쇄물의 단백질을 SDS PAGE 시키고, 세포자살의 생물지표에 대해 면역블로팅하였다. 도 4C 는 캐스페이즈 8, 캐스페이즈 3, 및 Parp 의 절단에 의해 알 수 있듯이, 시간 의존성 방식으로 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 나타낸다. 시토크롬 C 방출 또는 캐스페이즈 9 의 절단의 부재에 의해 나타난 바와 같이, δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa2 세포는 미토콘드리아의 전-세포자살 단백질에 대해 유의한 효과를 가지지 않았다. 통합 하면, 이들 데이타는 췌장암 세포에서 δ-토코트리에놀에 의한 세포자살의 유도는 외인성 세포자살 경로의 활성화를 통해 일어난다는 것을 보여준다.
δ-토코트리에놀은 또한, 생체 내에서 췌장암 성장을 억제시킨다.
췌장암 세포주의 처리는 시험관 내에서 및 생체 내에서 세포자살의 유도를 초래하였다. 델타-토코트리에놀의 세포자살 효과는 신생물성 세포에 대해 선택적이었는데, 그 이유는 불멸의 인간 췌장관 외피 세포가 델타-토코트리에놀에 대해 민감성이지 않기 때문이었다. 췌장암 세포주의 처리는 캐스페이즈 9 가 아닌 캐스페이즈 8 및 캐스페이즈 3 의 절단에 의해 나타난 바와 같이, 세포자살 유도의 외인성 경로의 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 초래하였다. 췌장암 세포의 델타-토코트리에놀 유도 세포자살에 있어서 미토콘드리아 매개 세포자살의 부재의 추가의 증거는, 시토크롬 C 방출의 결핍, 및 Bcl-2 및 Bad 와 같은 미토콘드리아 관련 단백질의 델타-토코트리에놀 조정의 부재에 의해 나타났다.
MIA PaCa2 세포의 안정적 발현세포주를 루시퍼라제와 함께 누드 마우스에 동시에 주사하였다. 종양 부피를 캘리버를 사용해 2 일마다 측정하였고, IVIS 100 Xenogen 시스템을 사용해 종양 발광을 측정함으로써 성장 속도를 매주 측정하였다. 부피 (100 ~ 150 mm3), 및 발광을 근거로 한 성장 속도가 유사한 종양을 무작위 선별하여, 위관 영양에 의해 20 일 동안 비히클 또는 δ-토코트리에놀 (100 mg/kg/일) 을 수여하였다. 도 5A 는 치료전 및 10 일째의 대조군 및 δ-토코트리에놀군의 대표적인 발광 측정을 보여준다. 치료 10 일째의 성장 속도는 토코 트리에놀 치료군에서 더 작다.
도 5B 는 비히클과 비교해, δ-토코트리에놀로 처리한 이종이식편에서 50% 만큼 종양 성장의 유의한 감소를 나타낸다. 종양을 치료 마지막 날에 추출하였고, 파라핀에 포매시키고, 면역조직화학 염색을 수행하여, 발암원성 Ras 신호화 표적에 대한 δ-토코트리에놀의 효과를 측정하였다. 도 5C 는 대조군 종양과 비교해, δ-토코트리에놀로 처리한 마우스의 종양에서, Ki67 의 감소, 및 TUNEL 에 의한 세포자살의 유도에 의해 나타난 바와 같이, 증식의 억제를 나타낸다. 더욱이, 생물지표 단백질 p-MAPK 및 p-AKT 는 감소하고, p27kip1 발현은 δ-토코트리에놀 처리군에서 증가한다. 이러한 생체 내 발견은, 상기 시험관 내에서 나타낸 세포 신호화 단백질에서의 재생가능한 변경을 나타낸다.
실시예 I
SW1990 췌장암 세포 (Panc-1) 를 10% 태아 소 혈청 (FBS) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 및 1% L-글루타민이 든 완전 DMEM 배지에서 배양하였다. BxPc-3 췌장암 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS), 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% HEPES 완충액, 1% 나트륨 피루베이트 및 1% L-글루타민이 든 완전 RPMI 배지에서 배양하였다. HPDE6-C7 세포를 혈청-없는 각질형성세포 SFM 배지에서 배양하였다. 모든 세포를 5% CO2 가 있는 가습조절된 인큐베이터 내, 37℃ 에서 유지시켰다.
표 I (24 시간), II (48 시간) 및 III (72 시간) 은 관련 결과를 보여준다. 각 표의 칼럼은 하기와 같은 단일 투여량 (50 μM) 을 포함하는 상이한 처리이다 : 대조군 (처리 안함), 비히클 (비히클만, 아마도 용매), T3 알파 (알파 토코트리에놀), T3 베타 (베타 토코트리에놀), T3 감마 (감마 토코트리에놀), T3 델타 (델타 토코트리에놀), T 알파 (알파 토코페롤), T 베타 (베타 토코페롤), TS (토코페롤 숙시네이트), GG (게라닐게라니올), SA (숙신산). 대조군 값의 평균으로 나눈 (대조군은 항상 100 임), 중복한 것의 평균을 나타내는 마지막 칼럼을 제외하고는, 각 칼럼의 세포 수는 MTS 어세이의 결과이다. 각 칼럼은 9 개의 중복을 나타낸다. 도 6 은 24 시간 및 48 시간 시도 동안의 결과를 예시한다.
Figure 112008089489392-PCT00002
Figure 112008089489392-PCT00003
Figure 112008089489392-PCT00004
실시예 II
MiaPaCa-2 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 및 1% L-글루타민이 든 완전 DMEM 배지에서 배양하였다. BxPc-3 췌장암 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS), 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% HEPES 완충액. 1% 나트륨 피루베이트 및 1% L-글루타민이 든 완전 RPMI 배지에서 배양하였다. HPDE6-C7 세포를 혈청-없는 각질형성세포 SFM 배지에서 배양하였다. 모든 세포를 5% CO2 가 있는 가습조절된 인큐베이터 내 37℃ 에서 유지시켰다.
표 IV (24 시간), V (48 시간) 및 VI (72 시간) 은 관련 결과를 보여준다. 각 표의 칼럼은 하기와 같은 단일 투여량 (50 μM) 을 포함하는 상이한 처리이다 : 대조군 (처리 안함), 비히클 (비히클만, 아마도 용매), T3 알파 (알파 토코트리에놀), T3 베타 (베타 토코트리에놀), T3 감마 (감마 토코트리에놀), T3 델타 (델타 토코트리에놀), T 알파 (알파 토코페롤), T 베타 (베타 토코페롤), TS (토코페롤 숙시네이트), GG (게라닐게라니올), SA (숙신산). 대조군 값의 평균으로 나눈 (대조군은 항상 100 임), 중복한 것의 평균을 나타내는 마지막 칼럼을 제외하고는, 각 칼럼의 세포 수는 MTS 어세이의 결과이다. 각 칼럼은 9 개의 중복을 나타낸다. 도 7 은 24 시간 및 48 시간 시도 동안의 결과를 예시한다.
Figure 112008089489392-PCT00005
Figure 112008089489392-PCT00006
실시예 III
MiaPaCa-2 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 및 1% L-글루타민이 든 완전 DMEM 배지에서 배양하였다. BxPc-3 췌장암 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS), 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% HEPES 완충액, 1% 나트륨 피루베이트 및 1% L-글루타민이 든 완전 RPMI 배지에서 배양하였다. HPDE6-C7 세포를 혈청-없는 각질형성세포 SFM 배지에서 배양하였다. 모든 세포를 5% CO2 가 있는 가습조절된 인큐베이터 내 37℃ 에서 유지시켰다.
표 VII (48 시간) 및 표 VIII (5 일) 은 관련 결과를 보여준다. 각 표의 칼럼은 하기와 같은 단일 투여량 (50 μM) 을 포함하는 상이한 처리이다 : 대조군 (처리 안함), 비히클 (비히클만, 아마도 용매), T3 알파 (알파 토코트리에놀), T3 베타 (베타 토코트리에놀), T3 감마 (감마 토코트리에놀), T3 델타 (델타 토코트리에놀), T 알파 (알파 토코페롤), T 베타 (베타 토코페롤), TS (토코페롤 숙시네이트), GG (게라닐게라니올), SA (숙신산). 각 칼럼은 1 개의 블랭크가 있는 7 개의 중복을 나타낸다. 각각이 중복의 평균, 블랭크를 포함한 중복의 평균, 및 대조군 값 (대조군은 항상 100 임) 의 평균으로 나눈 중복의 평균을 나타내는, 하위 3 줄을 제외하고는 각 칼럼의 세포 수는 MTT 어세이의 결과이다.
Figure 112008089489392-PCT00008
Figure 112008089489392-PCT00009
실시예 IV
BXPC3 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 및 1% L-글루타민이 든 완전 DMEM 배지에서 배양하였다. BxPc-3 췌장암 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS), 및 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% HEPES 완충액, 1% 나트륨 피루베이트 및 1% L-글루타민이 든 완전 RPMI 배지에서 배양하였다. HPDE6-C7 세포를 혈청-없는 각질형성세포 SFM 배지에서 배양하였다. 모든 세포를 5% CO2 가 있는 가습조절된 인큐베이터 내 37℃ 에서 유지시켰다.
표 IX (48 시간) 및 표 X (5 일) 은 관련 결과를 보여준다. 각 표의 칼럼은 하기와 같은 단일 투여량 (50 μM) 을 포함하는 상이한 처리이다 : 대조군 (처리 안함), 비히클 (비히클만, 아마도 용매), T3 알파 (알파 토코트리에놀), T3 베타 (베타 토코트리에놀), T3 감마 (감마 토코트리에놀), T3 델타 (델타 토코트리에놀), T 알파 (알파 토코페롤), T 베타 (베타 토코페롤), TS (토코페롤 숙시네이트), GG (게라닐게라니올), SA (숙신산). 각 칼럼은 1 개의 블랭크가 있는 7 개의 중복을 나타낸다. 각각이 중복의 평균, 블랭크를 포함한 중복의 평균, 및 대조군 값 (대조군은 항상 100 임) 의 평균으로 나눈 중복의 평균을 나타내는, 하위 3 줄을 제외하고는 각 칼럼의 세포 수는 MTT 어세이의 결과이다.
Figure 112008089489392-PCT00010
Figure 112008089489392-PCT00011
도 8A 는 비히클 또는 처리된 HPDE 6C7 세포와 비교해, δ-토코트리에놀로 처리된 MIAPaCa2 세포에서 자살 세포의 유의한 증가를 보여준다. 도 8B ~ 8D. MIA PaCa-2, BxPc-3, 및 SW1990 췌장암 세포를 또한, 다양한 농도의 δ-토코트리에놀 또는 비히클의 농도를 다양하게 하면서 24 시간 동안 처리하였다. 세포를 수합하고, Annexin V-FITC 로 염색하고, 세포자살에 대해 유세포 분석하였다. 도 8B, 8C 및 8D 는 비히클과 비교해, δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa-2 세포에서 세포자살의 투여량 의존성 유도를 보여준다.
도 9A 는 캐스페이즈 8, 캐스페이즈 3, 및 PARP 의 절단에 의해 알 수 있듯이, 캐스페이즈 캐스케이드의 활성화를 시간 의존성 방식으로 보여준다. 흥미롭게도, 시토크롬 C 방출 또는 캐스페이즈 9 (9B) 의 절단의 부재에 의해 나타난 바와 같이, δ-토코트리에놀로 처리한 MIA PaCa-2 세포는 미토콘드리아의 전-세포자살 단백질에 대해 유의한 효과를 가지지 않았다. 도 9C 는 불멸의 췌장관 외피 세포주인 HPDE-6C7 세포를 제외하고 여러 췌장암 세포주에서 선택적인 캐스페이즈 8 및 3 절단을 보여준다. 캐스페이즈 9 는 췌장암 세포에서 절단되지 않았다. 도 10 은 HPDE 세포를 제외하고 췌장암 세포주에서 포스포-AKT (총 AKT 제외) 의 시간-의존성 감소를 보여준다.
CA-AKT 의 기능적 과발현은 δ-토코트리에놀-유도 세포사에서 AKT 신호화 및 캐스페이즈 8 의 역할을 나타낸다 (도 11A). MIA PaCa-2 세포 (pZWL 벡터 및 myrAKT) 를 10-시간의 캐스페이즈 8 억제제 전치료와 함께 또는 없이, 혈청없이 비히클 또는 δ-토코트리에놀 (40 또는 50 μM) 로 24 시간 동안 처리하였다. 세포를 또한, 양성 대조군으로서 TRAIL 로 처리하였다. 다음, 세포를 수합하고, 고정하고, 침투시키고, 트립판 블루로 염색하였다. 도 11A 의 세포 파쇄물의 웨스턴 블롯 (도 11B) 은 항시 활성 AKT 를 과발현하는 세포와 비교해 빈 벡터로 트랜스펙션시킨 MiaPaca 2 모 (parental) 세포에서 50 μM 토코트리에놀 처리를 사용한 pAKT 의 감소를 나타낸다.
누드 마우스에서 MIA PaCa2 이종이식편을 종양 성장에 대해 2 일마다 측정하였다. 마우스에 현미유 (비히클) 또는 δ-토코트리에놀 (100 mg/kg/일) 을 위관 영양을 통해 매주 5 회씩 처리하였다. 결과 (도 12A) 는, δ-토코트리에놀로 처리한 마우스에서 췌장 종양 성장의 유의한 억제를 나타낸다. 면역조직화학 염색 (도 12B) 은 TUNEL 염색에 의해 측정된 바와 같이 δ-토코트리에놀 유도 세포자살, 및 감소된 p-AKT 발현을 나타낸다.
더욱이, 미리스토일화된 AKT 를 암호화하는 pWZL 레트로바이러스 벡터를 사용한 Mia-PaCa2 췌장암 세포의 감염은 PI3K-AKT 신호화의 δ-토코트리에놀 억제를 벗어남을 나타낸다. MiaPaCa-2 모 (parental) 세포주를 항시 활성 미리스토일화된 AKT 를 발현하는 레트로바이러스 pWZL 벡터 구축물을 사용해 안정하게 트랜스펙션시켜, MiaPaCa-2A≪τ 세포를 생성하였다. 도 13A 및 13B 는 p-AKT 를 하향조절하는 δ-토코트리에놀의 능력을 벗어남을 설명한다.
도 13C 내지 13F 는 AKT 및 캐스페이즈 8/3 경로가 토코트리에놀이 세포사를 유도하는 기작에 관여함을 보여준다. 토코트리에놀로의 처리는 비히클과 비교했을 때, myr-AKT 세포보다 벡터 세포에서 세포사를 더욱 유도하였다. TRAIL 유도 세포사는 비히클과 유사하였다. 마지막으로, 캐스페이즈 3, 8 및 9 억제제를 사용한 전처리는 토코트리에놀 유도 세포사를 피하였다.
델타-토코트리에놀은 도 13G ~ 13J 에서 나타낸 바와 같이 췌장암 전이를 억제시킨다. 토코트리에놀은 비히클/PBS 와 비교해, 가장 높은 투여량에서 종양 퇴화 (tumor regression) 를 야기하였다. 따라서, 토코트리에놀은 생체 내에서 췌장 종양 성장을 억제시킨다.
비타민 E 및 델타-토코트리에놀을 통한 HPLC-UV 에 의한, 혈장 및 마우스 조직에서의 추정의 암 (Putative cancer) 화학예방은 도 13K 및 13L 에서 나타난다. 토코트리에놀은 혈장에서 검출되었고, 췌장에서 유의하게 농축되었다. 놀랍게도, 토코트리에놀은 간 및 종양 수준과 비교했을 때, 10 배만큼 췌장에서 위치해 있다. 이러한 결과는 토코트리에놀 작용의 기작을 가리킨다.
통합하면, 상기의 발견은 δ-토코트리에놀이 외인성 세포자살 경로를 통해 췌장암 세포에서 세포자살을 선택적으로 유도한다는 것을 보여준다. δ-토코트리에놀은 PI3-K/AKT 경로를 선택적으로 억제시키고, 생체 내에서 세포자살을 유도하고, 이는 AKT 신호화 표적의 억제와 연관 있다. 더욱이, 췌장암 세포 내 myr AKT 의 과발현은 δ-토코트리에놀이 시험관 내에서 및 생체 내에서 세포자살을 유도하는 효과를 피한다. 또한, 췌장암 세포 성장의 토코트리에놀 억제는 항시 활성인 myrAKT 에 의해 피해질 수 있다. 이는, 토코트리에놀이 pAKT 의 수준에서, 췌장암에서 세포자살을 유도함을 제시한다.
췌장암 세포의 델타-토코트리에놀 유도 세포자살은 Akt 신호화 경로의 조정을 포함하며, 이는 Akt 생존 신호화 경로가 종종 췌장암에서 과발현되고, 비-미토콘드리아 관련 세포자살에서 연관되어 있기 때문인 것으로 볼 수 있다. 델타-토코트리에놀은 세린/트레오닌 키나아제 Akt 의 인산화 수준을 시험관 내에서 및 생체 내에서 억제시켰다. 더욱이, 항시 활성인 Akt 의 과발현은, 델타-토코트리에놀과 함께 인큐베이션시킨 후에 세포자살을 수행하는 것으로부터 췌장암 세포를 보호하였다. 종합하면, 이러한 데이타는, 델타-토코트리에놀이 캐스페이즈 8 캐스케이드의 활성화 및 Akt 생존 경로의 억제를 통해 췌장암 세포에서 세포자살을 유도하고, 이러한 미량 영양소가 생체 내에서의 췌장암 화학예방 및 치료에 유용함을 가리킨다.
췌장암에 대한 대리 종점 생물지표
역사적으로, 제제의 화학예방적 이점은 단지 감소된 암 발병률 또는 사망률에 의해서만 나타날 수 있었다. 감소된 발병률 또는 사망률의, 종점으로서의 용도는 화학예방 시도를 장기간, 광범위, 비용적으로 만들고, 따라서, 높은 발병률을 가진 암을 제외하고는 비실용적이다. 실제로, 췌장암에 대한 화학예방 시도의 유일한 보고는 다른 지표에 대해 수행된 화학예방 시도의 하위 (subset) 분석으로부터 생겼다. 이러한 접근은 σ-토코페롤, β-카로텐, 아스피린, 및 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID) 과 같은 제제의 가치의 결정적이지 않은 관찰을 초래하였다.
전통적인 암 치료법에 대한 I 기 및 II 기 연구를 위한 화학예방제에 대한 "초기 (early phase)" 임상적 시도 방법을 개발하는 것은 췌장암에서 화학예방 약물 개발보다 우선인 중요한 연구이다. 이상적으로 상기 연구들은 화학예방에 대해서 잠재성을 확신시킬 뿐만 아니라, 최적의 투여량 및 스케쥴에 대한 질문에 대해 답해주어야 할 것이다. 상기의 시도의 결과, 여러 연구자들은 장기간 암 예방보다는 표적 병변 병리학의 후보 대리 종점 생물지표 (SEB) 에 집중한 연구를 제안하고 시작하였다.
SEB 시도에서, 종양 발병의 감소는, 비정상적인 증식, 세포 생존, 또는 비정상적인 유전자 발현과 같은 신생물성 표현형 중 하나 이상의 원소의 반전에 대한 증거로 대체된다. 구체적으로는, 상기 전략들은 유의한 전암성 병변인 상피내 종양 (IEN) 에 대한 제제의 효과에 초점을 맞춘다. IEN 이 대부분의 외피 조직에서 확인된 전암 (validated precancer) 인 반면, 점액성 낭성 종양 (MCN), 췌관내 유두상 점액성 종양 신생물 (IPMN), 및 췌장 상피내 종양 (PanIN) 은 췌장 조직에서 가장 잘 특징화된 IEN 이다. 상기 병변의 침범성 암종으로의 진행은 잘 특징화되어 있고, 상기 병변들의 수술적 제거는 이미 췌장암의 예방을 위한 권고된 의학적 실행이다.
SEB 연구가 구강 점막의 백반증 또는 바렛 식도 (Barrett's esophagus) 와 같은 수술적 개입을 필요로 하지 않는 IEN 의 세팅에서 잘 확립되어 있더라도, 즉각적인 수술적 개입을 필요로 하는 전악성 (premalignant) 병변에서 그러한 연구를 수행하기는 더욱 어려운데, 그 이유는 병변 지수 (index lesion) 가 제거되고, 후속한 후처리를 받을 수 없기 때문이다. 그러나, 침범성 및 전침범성 췌장 병변을 진단하고 제거하는 후속한 과정에 대한 요구는 단기간 SEB 연구에 대한 기회를 제공한다. 2 내지 4 주 간격은 대부분의 실행에서 표준이고, 따라서, SEB 조정에 대한 화학예방제의 효과를 평가하기 위해 화학예방제가 투여될 수 있는 시기 (window) 를 제공한다. 발명자들의 실험은, 이들 병변에서 초기 유전적 변화에 의해 조정되는 단백질 발현 (하기 논의됨), 증식률 및 세포자살 지수와 같은 표준 SEB 의 값을 보여준다.
한 구현예에서, 본 발명은 침범성 췌관선암 (IPMN) 의 절제술을 받았던 환자의 수술적 표본에 만연해 있었던 대리 종점 생물지표를 포함한다. 아마토 빈 (annatto bean) 의 δ-토코트리에놀과 같은 토코트리에놀은 인간 췌장암 세포에서 선택적인 억제를 나타냈다. 상기 데이타는, δ-토코트리에놀이 세포자살의 유도 및 종양 성장의 억제를 포함하여 많은 분자적 과정에 영향을 미치고, δ-토코트리에놀이 췌장 신생물성 세포에서의 발암원성 신호 전달 경로를 억제시킨다는 것을 보여준다. 구체적으로는, δ-토코트리에놀은 인간 췌장암 세포에서 포스포-Raf, 포스포-MEK, 포스포-ERK, 및 포스포-AKT 수준을 감소시킨다. 더욱이, δ-토코트리에놀은 p27kip1 과 같은 성장 억제 매개체의 발현을 유도하고, 세포자살 매개체인 캐스페이즈 8 및 캐스페이즈 3 을 활성화시킨다.
1986 년에서 2006 년 사이의 잘라낸 췌장관 암종의 케이스를 모피트 암 종양 레지스트리 (Moffitt Cancer Center Tumor Registry) 및 병리학 정보 시스템 (Pathology information system) 으로부터 수집하였다. 관 (ductal) 전구체 병변의 조직학적 종양 유형, 등급 및 존재에 대해, 한 병리학자가 각 경우의 슬라이드를 살펴보았다. 현재의 W.H.O 명명법을 바탕으로, 조직학적 유형 및 등급을 매겼다. 췌장 상피내 종양 (PanIN) 이라고 하는 췌장암 전구체 병변을 공개된 기준 (Hruban, 2001) 에 따라 Ia, Ib, 2, 및 3 으로 등급을 매겼다. 슬라이브 리뷰를 바탕으로, 10 개의 대표적인 조직 블록을 10 개의 연속적인 수술제거 표본으로부터 선택하였다. 암종 (바람직하게는 1 등급 초과의 암종), 비신생물성 담관, 및 전구체 병변을 나타내는 섹션을 우선으로 하였다. 모든 케이스는 담관 선암, NOS, 또는 잘 분화된 것부터 불량하게 분화된 것까지였다.
도 14A 내지 15 에 나타낸 데이타는, 이들 즉각적인 생물지표를 측정할 수 있는 정확성을 나타낸다. Ki67 은 정상부터 중간체로, 그리고 침범성 암종까지 핵에서의 양성 반응의 점진적 증가가 있는 증식의 믿을만한 마커인 것으로 주목되었다. 역행은 신생물성 췌장관 세포에서 세포자살의 발암원성 억제를 가리키는 TUNEL 염색에 주목되었다. 유사한 역행이 p27 사이클린-의존성 키나아제 억제제 단백질의 발현에서 관찰되었다. 이와는 달리, 포스포-MAPK 및 포스포-AKT 와 같은 활성화된 발암원성 Ras 신호화의 하위 매개체가 증가된다. 뚜렷하게도, 췌장의 침범성 관암 및 IPMN 을 가진 모든 환자는 그의 수술 표본에 비침범성 전구체 병변을 가지고 있었다.
미분화 암종 또는 관선암종 (ductal adenocarcinoma) 변이체의 어떠한 케이스도 상기 파일럿 연구에 선택되지 않았다. 통상의 헤마톡실린 및 에오신 염색을 위해 각각의 블록에서 한 섹션을 잘라 내었다. 면역조직화학을 위해 잘라낸 섹션을 폴리-L-리신 코팅된 슬라이드 상에 놓았다. 사용된 항체에는 Ki-67, p27, 및 p-MAPK 이 포함되었다. TUNEL 어세이를 사용하여, 세포자살을 평가하였다. 표준 면역조직화학 기술을 사용해 면역조직화학 연구를 수행하였다. 다음, 정확하고, 재생가능하며 객관적인 높은 결과 분석을 위해, Applied Imaging 사의 Ariol SL-50 (version 3.0.70) 으로 슬라이드를 스캔하였다. 암종, PanIN, 반응성 관 (duct), 및 비-신생물성 관의 대표적인 영역을 위해, 한 병리학자가 이미지를 리뷰하였다. 상기 연구를 위해, 잘-분화된 및 적당하게 분화된 암종을 낮은 등급의 한 범주에 묶었다. 불량하게 분화된 암종을 고 등급 암종으로서 분류하였다. 슬라이드 상에 존재한다면, 분석을 위해, 신경주위 침범의 추가 영역을 또한 선택하였다.
도 14A 는 침범 정도로서 증식 속도의 증가를 보여주고, 종양 등급이 증가된다. 이는 Ki-67 에 대해 양성인 세포 염색의 평균 % 의 점진적인 증가로 나타난다. 이와는 달리, 도 14B 는 종양 침범의 정도와 음성적으로 관련있는, TUNEL 로 염색한 자살 세포의 수의 점진적인 감소를 보여준다.
도 15 는 비-신생물성 췌장관 조직, 반응성 조직, 전구체 병변 (PanIN 1-3), 및 저등급과 고등급의 침범성 암종의 대표적인 슬라이드를 보여준다. Ki-67, p27, p-MAPK, 및 TUNEL 에 대해, 각각의 대표 영역을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다.
결과는, 비-신생물성에서 PanIN 으로 침범성 암종으로의 췌장관 진행으로서, Ki-67 및 p-MAPK 염색의 증가를 보여준다. 가장 큰 정도의 염색은 고등급 종양에 있다. 이와는 달리 p27 및 TUNEL 염색은 종양 침범 및 진행에 따라 감소한다. 이는 세포 주기 억제 및 세포자살 유도를 가리킨다.
본 발명의 또다른 구현예는 단리된 샘플에서와 같이 개체 내에서, 생물지표 ; 즉, p27 의 수준을 측정함으로써, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 스크리닝하는 방법을 포함한다. 다음, 생물지표의 수준을 하나 이상의 대조군 샘플 내 상응하는 대조군 수준과 비교한다. 바람직한 구현예에서, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 갖고 있지 않는 것으로 결정된 개체에서 대조군 샘플을 수득한다.
개체 내 생물지표의 수준 및 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 수준 간의 통계적으로 유의한 증가의 측정은 개체 내 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표이다. 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 수준과 비교해, 개체 내 p27 의 수준의 통계적으로 유의한 감소는 개체 내 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 가리킨다.
대안적인 구현예에서, 두번째 생물지표, 즉 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준을 측정하고, 이를 하나 이상의 대조군 샘플 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 대조군 수준과 비교한다. 개체 및 대조군 샘플(들) 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준 간의 통계적으로 유의한 증가는 개체 내 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 나타내는 지표이다. 개체 및 대조군 샘플(들) 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준 간의 통계적으로 유의한 감소는 개체 내 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표이다.
개체 및 대조군 샘플(들) 에서 생물지표의 수준을 측정하는 방법은 당업자에게 알려져 있다. 한 구현예에서, 예로서, 생물지표에 결합하는 항체를 사용하여, 생물지표의 수준을 측정한다. 생물지표가 항체에 결합할 수 있는 조건 하에, 생물지표를 함유하는 샘플을 항체와 접촉시키고 ; 다음, 생물지표의 존재를 정량화할 수 있다.
본 발명은 또한, 관련 방법을 수행하는데 유용한 조성물을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 관련 생물지표 ; 즉, Ki-67 및/또는 p-MAPK, 및 p27 의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는 조성물을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 단리된 단백질은 상보적인 이중 가닥 DNA 를 선택적으로 증폭시킨다. 조성물은 또한, 다수의 생물지표 특이적 프라이머를 포함하도록 포함되고, 여기서, 각각의 생물지표 특이적 프라이머는 Ki-67, p-MAPK 및 p27 과 같은 독특한 생물지표에 상보적인 이중 가닥 DNA 를 선택적으로 증폭시킨다. 대안적으로는, 본 발명은 2 가지 이상의 독특한 생물지표의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는 조성물을 포함하고, 여기서, 각각의 독특한 생물지표는 Ki-67, p-MAPK 및 p27 로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생물지표" 는 췌장암 또는 췌장암 단계를 포함하여 암을 갖지 않은 개체와 비교해, 췌장암 또는 췌장암 단계를 포함하여 암을 가진 개체에서 별개로 발현되는 유전자를 말한다. 용어 "생물지표" 는 췌장암을 갖지 않은 개체와 비교해, 표재성 췌장암을 가진 개체에서 별개로 발현되는유전자를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생물지표 특이적 프라이머" 는 본 발명의 생물지표의 하나 이상의 RNA 생성물 중 일부에 상보적인 이중 가닥 DNA 를 생성할 수 있는 프라이머를 말한다. 예를 들어, 상기 프라이머는 확장 생성물을 생성하기 위해 본 발명의 생물지표에 상보적인 EST, RNA, 또는 cDNA 에 선택적으로 혼성화할 수 있는 서열인 제 1 프라이머, 및 본 발명의 생물지표에 상보적인 이중 가닥 DNA 를 생성하는데 사용되는 확장 생성물에 선택적으로 혼성화할 수 있는 제 2 프라이머를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "프라이머" 는 올리고뉴클레오타이드를 말하고, 이는 정제된 제한 분해에서 자연발생하거나, 또는 합성 생성되며, 프라이머는 핵산 가닥에 상보적인 프라이머 확장 생성물의 합성이 유도되는 조건 하에, 즉, 뉴클레오타이드, 및 DNA 중합효소와 같은 유도제의 존재 하, 적합한 온도 및 pH 에 놓였을 때, 합성의 개시점으로서 작용할 수 있다. 프라이머는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, 유도제의 존재 하에 원하는 확장 생성물의 합성을 프라이밍하기에 충분히 길어야 한다. 프라이머의 정확한 길이는 온도, 프라이머 공급원 및 사용된 방법을 포함하여, 많은 요소에 따라 다를 것이다. 예를 들어, 진단 적용을 위해서는, 표적 서열의 복잡성에 따라, 올리고뉴클레오타이드 프라이머는 전형적으로 15 ~ 25 개 이상의 뉴클레오타이드를 함유하고, 그렇더라도, 상기는 더 적은 수의 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다. 적절한 길이의 프라이머를 결정하는데 포함되는 요소는 이미 당업자에게 알려져 있다. 일반적으로, 본 발명에 의해 구현되는 프라이머의 디자인 및 선택은 당업계에 잘 알려지고 표준인 방법에 따른 것이며, [Dieffenbach, C. W., Lowe, T. M. J., Dveksler, G. S. (1995) General Concepts for PCR Primer Design. In: PCR Primer, A Laboratory Manual (Eds. Dieffenbach, C. W, and Dveksler, G. S.) Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 133-155; Innis, M. A., and Gelfand, D. H. (1990) Optimization of PCRs. In: PCR protocols, A Guide to Methods and Applications (Eds. Innis, M. A., Gelfand, D. H., Sninsky, J. J;, and White, T. J.) Academic Press, San Diego, 3-12; Sharrocks, A. D. (1994) The design of primers for PCR. In: PCR Technology, Current Innovations (Eds. Griffin, H. G., and Griffin, A. M, Ed.) CRC Press, London, 5-11] 를 참조한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생물지표 특이적 프로브" 는 독특한 생물지표의 RNA 생성물에 선택적으로 그리고 특이적으로 혼성화하는 프로브를 말한다. 한 구현예에서, 생물지표 특이적 프로브는 TaqMan.RTM 프로브 또는 Molecular Beacons 프로브와 같이, 형광발색단 및 소광체 (quencher) 를 가진 프로브일 수 있다. 또다른 구현예에서, 생물지표 특이적 프로브는 어레이에 부착되고, 독특한 생물지표의 하나 이상의 RNA 생성물 (또는 상기 RNA 생성물에 상응하는 cDNA, EST 또는 PCR 생성물) 에 선택적으로 그리고 특이적으로 혼성화하는 프로브이다. 생물지표 특이적 프로브는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 포함할 수 있고, 또한 더 긴 프로브 (예를 들어, 60, 80, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 개의 뉴클레오타이드 등) 를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "프로브" 는 올리고뉴클레오타이드 및 그의 유사체를 포함하고, 표적 서열의 뉴클레오타이드 염기와의 수소 결합 상호작용을 통해 폴리뉴클레오타이드 표적 서열을 인지하는 일련의 화학종을 말한다. 프로브 또는 표적 서열은 단일- 또는 이중-가닥 RNA 또는 단일- 또는 이중-가닥 DNA 또는 DNA 및 RNA 염기의 조합일 수 있다. 프로브는 길이가 8 개 이상의 뉴클레오타이드이고, 완전 유전자의 길이보다 더 적은 것이다. 프로브는 길이가 10, 20, 30, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 400, 500 및 2000 개 이하의 뉴클레오타이드이다. 프로브는 형광, 화학발광 등에 의해 검출되는 태그를 가지도록 개질된 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 프로브는 또한, Taqman.RTM. 및 Molecular Beacon. RTM. 프로브와 같이, 검출가능한 태그 및 소광체 분자를 가지도록 개질될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생물지표의 생성물" 또는 "생물지표 생성물" 은 생물지표에 상응하거나 또는 이것에 의해 암호화된 (즉, 유전자 또는 유전적 원소로부터 전사되거나, 또는 유전자 또는 유전적 원소로부터 전사된 RNA 로부터 번역된) RNA 또는 단백질을 말한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 생물지표 에서 생성된 RNA 는 하나 이상의 하기 종을 포함할 수 있다 : hnRNA, mRNA, 및/또는 mRNA 의 하나 이상의 스플라이싱된 변이체. 일부 구현예에서, 분자 마커로부터 생성된 단백질은 생물지표로부터 생성된 RNA 에 상응하는 혈액에서 발견되는 임의의 단백질을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 본 발명의 내용에서, 용어 "대조군" 또는 "대조군 샘플" 은 하나 이상의 조직 핵산 샘플 및/또는 혈액 핵산 샘플 및/또는 췌장암을 가진 것으로, 췌장암 및/또는 표재성 방광암의 하나 이상의 단계를 가진 것으로 ; 췌장암, 췌장암 및/또는 표재성 방광암의 하나 이상의 단계를 갖지 않은 것으로 분류되는 하나 이상의 개체를 말하며 ; 이는 당업자에게 알려진 기술을 사용하여 결정된다. 용어 대조군 또는 대조군 샘플은 또한, 정상 (췌장암을 갖지 않음), 췌장암을 가짐, 또는 췌장암 단계를 가짐으로 진단된 하나 이상의 개체의 샘플에서 유도한 데이타의 편집을 말할 수도 있다. 당업자가 이해한 바와 같이 - 용어 대조군은 실험의 내용에 사용되고, 원하는 비교에 따라 다를 것이다. 본원에 사용된 바와 같이, 예방 또는 치료제의 스크리닝을 위한 내용에서, 용어 "대조군" 은 다른 조건을 비교할 수 있는 어세이 또는 방법에 대한 표준 또는 기준을 말한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "유효량" 은 췌장암 또는 그의 하나 이상의 증상의 진행 및/또는 중증도를 감소 또는 완화시키고, 췌장암 또는 그의 하나 이상의 증상의 발달, 재발 또는 개시를 예방하고, 췌장암 또는 그의 하나 이상의 증상의 진전을 예방하거나, 또는 또다른 치료법의 예방 또는 치료 효과(들) 를 개선 또는 향상시키기에 충분한 화합물의 양을 말한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "화학예방제" 는 췌장암 또는 그의 하나 이상의 증상을 치료, 관리, 또는 완화시키는데 사용될 수 있는 임의의 화합물(들) 을 말한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료적 유효량" 은 췌장암 또는 그의 하나 이상의 증상의 완화를 초래하고, 방광암의 진전을 예방하고, 방광암의 퇴화를 야기하거나, 또는 또다른 치료법 (예를 들어, 화학예방제) 의 예방 또는 치료 효과(들) 를 개선 또는 향상시키기에 충분한 치료법 (예를 들어, 화학예방제) 의 양을 말한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효능" 은 약물 및/또는 제제의 효능을 말한다. "화학치료적 효능" 은 보통 약물 및/또는 제제로 치료받았던 또는 치료받고 있는 중인 환자의 임상적 반응에 의해 측정된다. 만약 약물이 원하는 임상적 결과, 예를 들어, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 췌장암, 췌장암 단계와 관련된 증상의 감소, 또는 췌장암 진행의 예방을 달성한다면, 약물은 높은 정도의 효능을 가진 것으로 간주된다. 흡수된 약물의 양은 환자의 반응을 예견하는데 사용될 수 있다. 일반적인 규칙은, 약물의 투여량을 증가함에 따라, 최대의 원하는 효과가 달성될 때까지, 더 큰 효과를 환자에서 보게 된다는 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "발현 수준" 은 당업자에게 알려진 방법에 의해 측정된 바와 같이, 유전자에 상응하는 해당 핵산 또는 단백질의 양의 측정을 말한다. 본 발명의 생물지표에 상응하는 RNA, hnRNA, mRNA 또는 mRNA 의 스플라이싱된 변이체에 관해서, 발현 수준은 혼성화뿐만 아니라, SYBR.RTM, 녹색, TaqMan.RTM. 및 Molecular Beacons 기술의 사용을 포함하는 정량적 실시간 RT PCR 과 같은 기타 측정법에 의해 측정될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 발현의 상이한 수준의 측정은 해당 핵산 또는 단백질의 양 사이의 차이에 대한 가시적인 조사, 예를 들어, 노던 블롯 또는 웨스턴 블롯을 분석하는 것을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "선택적으로 증폭된" 또는 "선택적인 증폭" 은 특정 표적 핵산 서열의 하나 이상의 복사본이 주형 핵산으로부터 선택적으로 생성되는 방법을 말한다. 선택적인 증폭 또는 선택적으로 증폭된다는 것은, 핵산 서열 (예를 들어 mRNA) 의 집단을 증폭시키기 위해 랜덤 프라이머 및 올리고dT 프라이머와 조합한 방법으로서 사용할 수 있는 일반적인 증폭과 비교된다. 선택적인 증폭은 바람직하게는 연쇄 사슬 중합반응의 방법에 의해 수행된다 (Mullis and Faloona, 1987, Methods Enzymol. 155:335).
본원에 사용된 바와 같이, 본 발명에 포함된 단백질의 내용에서 용어 "선택적으로 결합한다" 는 펩타이드, 단백질, 폴리펩타이드, 및 항체 중 임의의 2 개의 특이적 상호작용을 말하며, 여기서, 상호작용은 우선적으로는, 임의의 다른 펩타이드, 단백질, 폴리펩타이드 및 항체와 비교해, 펩타이드, 단백질, 폴리펩타이드 및 항체 중 임의의 2 개 사이에서 우선적으로 발생한다. 예를 들어, 2 개의 분자는 단백질 분자이고, 첫번째 분자 상의 구조는 다른 단백질보다 두번째 분자 상의 구조를 인지하고 이에 결합한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "선택적인 결합", "선택적으로 결합하기" 는 분자가, 이것이 비-특이적 분자에 결합하는 친화성보다, 그의 특이적인 결합 파트너에 2-배 이상의 친화성으로, 바람직하게는 10-배, 20-배, 50-배, 100-배 또는 그 이상의 친화성으로 결합한다는 것을 말한다.
따라서, 한 구현예에서, 본 발명은 단리된 샘플에서, p27 과 같은 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준을 측정함으로써, 화학예방제의 효능을 측정하는 방법을 포함한다. 다음, 샘플을 테스트되는 화학예방제의 실험적 유효량과 접촉시킨다. 화학예방제를 투여한 후에, 대리 종점 생물지표의 두번째 수준을 취하고, 이를 첫번째 (치료-전) 수준과 비교한다. 후보 화학예방제는 두번째 (치료-후) p27 수준을 치료-전 및/또는 대조군 수준을 넘어선 통계적으로 유의한 정도로까지 증가시킨 효능을 나타낸다.
또다른 구현예에서, 본 발명은 단리된 샘플에서, Ki-67 및/또는 p-MAPK 과 같은 두번째 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준을 측정함으로써, 화학예방제의 효능을 측정하는 방법을 제공한다. 화학예방제를 투여한 후에, Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 두번째 수준을 취하고, 이를 첫번째 (치료-전) 수준과 비교한다. 후보 화학예방제는 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 두번째 (치료-후) p27 수준을 치료-전 및/또는 대조군 수준을 넘어선 통계적으로 유의한 정도로까지 감소시킨 효능을 나타낸다.
본 발명의 또다른 구현예는 단리된 샘플에서와 같이, 개체에서, 생물지표 ; 즉, p27 의 수준을 측정함으로써 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 스크리닝하는 방법을 포함한다. 다음, 생물지표의 수준을 하나 이상의 대조군 샘플 내 상응하는 대조군 수준과 비교한다. 바람직한 구현예에서, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 갖지 않는 것으로 결정된 개체에서 대조군 샘플을 수득한다.
개체 내 생물지표의 수준 및 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 수준 간의 통계적으로 유의한 증가의 측정은 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표이다. 개체 내 생물지표의 수준 및 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 수준 간의 통계적으로 유의한 감소의 측정은 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표이다.
대안적인 구현예에서, 두번째 생물지표, 즉 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준을 측정하고, 이를 하나 이상의 대조군 샘플 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 대조군 수존과 비교한다. 개체 내 및 대조군 샘플(들) 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준 간의 통계적으로 유의한 증가는 개체 내에서의 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표이다. 대조군 샘플(들) 과 비교해, 개체 내 Ki-67 및/또는 p-MAPK 의 수준 간의 통계적으로 유의한 감소는 개체 내에서의 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표이다.
개체 및 대조군 샘플(들) 내 생물지표의 수준을 측정하는 방법은 당업자에게 알려져 있다. 한 구현예에서, 예로서, 생물지표에 결합하는 항체를 사용하여, 생물지표의 수준을 측정한다. 생물지표가 항체에 결합할 수 있는 조건 하에, 생물지표를 함유하는 샘플을 항체와 접촉시키고 ; 다음, 생물지표의 존재를 정량화할 수 있다.
본 발명은 또한, 관련 방법을 수행하는데 유용한 조성물을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 관련 생물지표 ; 즉, Ki-67 및/또는 p-MAPK, 및 p27 의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는 조성물을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 단리된 단백질은 상보적인 이중 가닥 DNA 를 선택적으로 증폭시킨다. 조성물은 또한, 다수의 생물지표 특이적 프라이머를 포함하도록 포함되며, 여기서, 각각의 생물지표 특이적 프라이머는 Ki-67, p-MAPK 및 p27 과 같은 독특한 생물지표에 상보적인 이중 가닥 DNA 를 선택적으로 증폭시킨다. 대안적으로, 본 발명은 2 개 이상의 독특한 생물지표의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서, 각각의 독특한 생물지표는 Ki-67, p-MAPK 및 p27 로 이루어진 군으로부터 선택된다.
생물지표의 수준을 측정하는 (예를 들어 정량화하는) 방법은 당업자에게 이미 잘 알려져 있을 것이고, 발현 수준, RNA 의 수준, RNA 의 수준 생성물, 단백질 수준, 및/또는 단백질 활성 수준을 측정하는 것에 제한되지 않는다.
상기 나타낸 이점, 및 전술한 상세한 설명으로부터 분명해진 것들은 효율적으로 달성되고, 본 발명의 범주를 벗어나지 않으면서 특정 변화가 상기 구성에 이루어질 수 있기 때문에, 전술한 상세한 설명에 포함되거나 또는 수분하는 도면에 나타내어진 모든 것들은 예시적인 것으로 해석되어야 하고 제한하려는 의미를 가진 것은 아님을 알아야 할 것이다.
또한, 하기의 청구항은 본원에 기술된 본 발명의 일반적이고 특정적인 특징 모두를 포함하고자 하는 것이고, 본 발명의 범주의 모든 상태는 그 사이에 포함되는 것으로 이해하도록 한다. 이제, 본 발명은 기술되었다.

Claims (81)

  1. 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 또는 예방 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 토코트리에놀이 감마-토코트리에놀 및 델타-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 조성물이 약학적 조성물로서 투여되는 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀 및 베타-토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀, 베타-토코트리에놀 및 감마-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  6. 제 1 항에 있어서, 조성물에 토코페롤이 실질적으로 없는 방법.
  7. 제 1 항에 있어서, 조성물이 약 10O mg 내지 300 mg 의 토코트리에놀을 포함하는 방법.
  8. 제 1 항에 있어서, 조성물이 겜시타빈 및 5-FU 로 이루어진 군으로부터 선택되는 치료적 유효량의 화학예방제를 추가로 포함하는 방법.
  9. 제 1 항에 있어서, 암이 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계인 방법.
  10. 유효량의 토코트리에놀을 추가로 포함하는 조성물과 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포 내에서 p27 의 발현을 상향조절하는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서, 토코트리에놀이 감마-토코트리에놀 및 델타-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  12. 제 10 항에 있어서, 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 조성물이 약학적 조성물로서 투여되는 방법.
  13. 제 10 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀 및 베타-토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  14. 제 10 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀 및 베타-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  15. 세포 내에서 p27 의 발현을 증가시키도록 적합화된 화학예방제와 종양을 접촉시키는 단계를 포함하는, 종양 치료 방법.
  16. 제 15 항에 있어서, 종양이 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계인 방법.
  17. 제 15 항에 있어서, 화학예방제가 작은 방해 RNA 분자 (small interfering RNA molecule) 인 방법.
  18. Ki-67 및 p-MAPK 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생물지표의 세포 내에서의 발현을 감소시키도록 적합화된 화학예방제와 종양을 접촉시키는 단계를 포함하는, 종양 치료 방법.
  19. 제 18 항에 있어서, 종양이 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계인 방법.
  20. 제 18 항에 있어서, 화학예방제가 작은 방해 RNA 분자인 방법.
  21. 하기를 포함하는, 화학예방제의 효능 측정 방법 :
    단리된 샘플에서, p27 의 첫번째 수준을 측정하고 ; 상기 샘플을 실험적 유효량의 화학예방제와 접촉시키고 ; 상기 단리된 샘플을 실험적 유효량의 화학예방제와 접촉시킨 후에, p27 의 두번째 수준을 측정하고 ; p27 의 첫번째 수준 및 대리 종점 (suggorate end point) 생물지표의 두번째 수준을 비교함 ; 여기서, p27 의 첫번째 수준과 두번째 수준 간의 통계적으로 유의한 차이의 측정은 화학예방제의 효능을 나타내는 지표인 방법.
  22. 제 21 항에 있어서, p27 의 첫번째 수준과 비교해 p27 의 두번째 수준의 통계적으로 유의한 증가가 화학예방제의 효능을 나타내는 지표인 방법.
  23. 제 21 항에 있어서, p27 의 첫번째 수준과 비교해 p27 의 두번째 수준의 통계적으로 유의한 감소가 화학예방제의 효능의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  24. 제 21 항에 있어서, 하기를 추가로 포함하는 방법 :
    단리된 샘플에서, Ki-67, p-MAPK, p-AKT 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 두번째 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준을 측정하고 ; 상기 단리된 샘플을 실험적 유효량의 화학예방제와 접촉시킨 후에, 두번째 대리 종점 생물지표의 두번째 수준을 측정하고 ; 두번째 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준을 두번째 대리 종점 생물지표의 두번째 수준과 비교함 ; 여기서, 두번째 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준과 두번째 수준 간의 통계적으로 유의한 차이의 측정은 화학예 방제의 효능을 나타내는 지표인 방법.
  25. 제 24 항에 있어서, 두번째 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준과 비교해 두번째 대리 종점 생물지표의 두번째 수준의 통계적으로 유의한 증가가 화학예방제의 효능을 나타내는 지표인 방법.
  26. 제 24 항에 있어서, 두번째 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준과 비교해 두번째 대리 종점 생물지표의 두번째 수준의 통계적으로 유의한 감소가 화학예방제의 효능의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  27. 제 21 항에 있어서, p27 의 RNA 생성물의 수준을 측정함으로써, 첫번째 수준 및 두번째 수준을 측정하는 방법.
  28. 제 21 항에 있어서, p27 에 의해 암호화되는 RNA 의 수준을 측정함으로써, 첫번째 수준 및 두번째 수준을 측정하는 방법.
  29. 제 21 항에 있어서, p27 에 결합하는 항체를 사용하여 p27 의 수준을 측정하는 방법으로서, 하기를 추가로 포함하는 방법 :
    p27 이 항체에 결합할 수 있는 조건 하에 p27 을 함유하는 샘플을 항체와 접촉시키고 ; 샘플에서 p27 의 존재를 정량화함.
  30. 제 21 항에 있어서, p27 의 수준이 유전자 발현 수준, RNA 수준, RNA 생성물 수준, 단백질 수준, 및 단백질 활성 수준으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  31. 하기를 포함하는, 화학예방제의 효능 측정 방법 :
    단리된 샘플에서, Ki-67, p-MAPK, p-AKT 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준을 측정하고 ; 샘플을 실험적 유효량의 화학예방제와 접촉시키고 ; 단리된 샘플을 실험적 유효량의 화학예방제와 접촉시킨 후에, 대리 종점 생물지표의 두번째 수준을 측정하고 ; 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준과 대리 종점 생물지표의 두번째 수준을 비교함 ; 여기서, 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준과 두번째 수준 간의 통계적으로 유의한 차이의 측정은 화학예방제의 효능을 나타내는 지표인 방법.
  32. 제 31 항에 있어서, 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준과 비교해 대리 종점 생물지표의 두번째 수준의 통계적으로 유의한 감소는 화학예방제의 효능을 나타내는 지표인 방법.
  33. 제 31 항에 있어서, 대리 종점 생물지표의 첫번째 수준과 비교해 대리 종점 생물지표의 두번째 수준의 통계적으로 유의한 증가는 화학예방제의 효능의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  34. 제 31 항에 있어서, 대리 종점 생물지표의 첫번째 및 두번째 수준이 대리 종점 생물지표의 RNA 생성물의 수준을 측정함으로써 측정되는 방법.
  35. 제 31 항에 있어서, 대리 종점 생물지표의 첫번째 및 두번째 수준이 대리 종점 생물지표에 의해 암호화되는 RNA 의 수준을 측정함으로써 측정되는 방법.
  36. 제 31 항에 있어서, 하기를 추가로 포함하는, 대리 종점 생물지표에 결합하는 항체를 사용하여 대리 종점 생물지표의 수준을 측정하는 방법 :
    대리 종점 생물지표를 항체에 결합시킬 수 있는 조건 하에, 대리 종점 생물지표를 함유하는 샘플과 항체를 접촉시키고 ; 상기 샘플 내에서 대리 종점 생물지표의 존재를 정량화함.
  37. 제 31 항에 있어서, 대리 종점 생물지표의 수준이 유전자 발현 수준, RNA 의 수준, RNA 의 생성물 수준, 단백질 수준, 및 단백질 활성 수준으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  38. 하기를 포함하는, 개체 내에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 개체에서 스크리닝하는 방법 :
    단리된 샘플에서, p27 의 수준을 측정하고 ; 하나 이상의 대조군 샘플에서 p27 의 수준을 p27 의 대조군 수준과 비교함 ; 여기서, 개체 내 p27 의 수준과 하나 이상의 대조군 샘플 내 p27 의 수준 간의 통계적으로 유의한 차이의 측정은 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 나타내는 지표인 방법.
  39. 제 38 항에 있어서, p27 의 수준이 유전자 발현 수준, RNA 의 수준, 단백질 수준, 및 단백질 활성 수준으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  40. 제 38 항에 있어서, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 갖지 않는 것으로 알려진 개체로부터 하나 이상의 대조군 샘플을 수득하는 방법.
  41. 제 40 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 p27 의 수준과 비교해 개체 내 p27 의 수준의 통계적으로 유의한 유사성 또는 증가는 개체 내에서의 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  42. 제 40 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 p27 의 수준과 비교해 개체 내 p27 의 수준의 통계적으로 유의한 감소는 개체 내에서의 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표인 방법.
  43. 제 38 항에 있어서, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 가진 것으로 알려진 개체로부터 하나 이상의 대조군 샘플을 수득하는 방법.
  44. 제 43 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 p27 의 수준과 비교해 개체 내 p27 의 수준의 실질적인 증가는 개체 내에서의 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  45. 제 43 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 p27 의 수준과 비교해 개체 내 p27 의 수준의 통계적으로 유의한 유사성 또는 감소는 개체 내에서의 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표인 방법.
  46. 제 38 항에 있어서, 하기를 추가로 포함하는 방법 :
    단리된 샘플에서, Ki-67, p-MAPK 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생물지표의 수준을 측정하고 ; 하나 이상의 대조군 샘플에서 생물지표의 대조군 수준과 생물지표의 수준을 비교함 ; 여기서, 개체에서 생물지표의 수준과 하나 이상의 대조군 샘플에서 생물지표의 수준 간의 통계적으로 유의한 차이의 측정은 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 나타내는 지표인 방법.
  47. 제 38 항에 있어서, 생물지표의 수준이 유전자 발현 수준, RNA 의 수준, 단백질 수준, 및 단백질 활성 수준으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  48. 제 46 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플을 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 갖지 않는 것으로 알려진 개체로부터 수득하는 방법.
  49. 제 48 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해 개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 증가는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표인 방법.
  50. 제 48 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 유사성 또는 감소는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  51. 제 46 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해 개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 유사성 또는 증가는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표인 방법.
  52. 제 46 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 감소는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  53. 하기를 포함하는, 개체 내에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 스크리닝하는 방법 :
    단리된 샘플에서, Ki-67, p-MAPK 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생물지표의 수준을 측정하고 ; 하나 이상의 대조군 샘플에서 생물지표의 대조군 수준과 생물지표의 수준을 비교함 ; 여기서, 개체 내 생물지표의 수준과 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준 간의 통계적으로 유의한 차이의 측정은 개체 내에서의 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 나타내는 지표인 방법.
  54. 제 53 항에 있어서, 생물지표의 수준이 유전자 발현 수준, RNA 의 수준, 단백질 수준, 및 단백질 활성 수준으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  55. 제 53 항에 있어서, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 갖지 않은 것으로 알려진 개체에서 하나 이상의 대조군 샘플을 수득하는 방법.
  56. 제 55 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해 개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 증가는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표인 방법.
  57. 제 55 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 유사성 또는 감소는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  58. 제 53 항에 있어서, 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계를 가진 것으로 알려진 개체에서 하나 이상의 대조군 샘플을 수득하는 방법.
  59. 제 58 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해 개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 유사성 또는 증가는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 존재를 나타내는 지표인 방법.
  60. 제 58 항에 있어서, 하나 이상의 대조군 샘플 내 생물지표의 수준과 비교해개체 내 생물지표의 수준의 통계적으로 유의한 감소는 개체에서 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계의 부재를 나타내는 지표인 방법.
  61. Ki-67, p-MAPK, p27 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생물지표의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는, 개체에서 췌장암을 스크리닝하는데 사용하기 위한 조성물.
  62. 다수의 생물지표 특이적 프라이머를 포함하는, 개체에서 췌장암을 스크리닝하는데 사용하기 위한 조성물로서, 여기서, 각각의 생물지표 특이적 프라이머가 Ki-67, p-MAPK 및 p27 로 이루어진 군으로부터 선택되는 독특한 생물지표에 상보적인 이중 가닥 DNA 를 선택적으로 증폭시키는 조성물.
  63. 2 개 이상의 독특한 생물지표의 단백질 생성물에 선택적으로 결합하는 다수의 단리된 단백질을 포함하는, 개체에서 췌장암을 스크리닝하는데 사용하기 위한 조성물로서, 여기서, 각각의 독특한 생물지표가 Ki-67, p-MAPK 및 p27 로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물.
  64. 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 화합물을 이의 치료를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 췌장암의 발달을 예방하는 방법.
  65. 제 64 항에 있어서, 토코트리에놀이 감마-토코트리에놀 및 델타-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  66. 제 64 항에 있어서, 개체가 췌장암에 대한 유전적 소인을 가진 개체, 및 전신생물성 병변을 가진 개체로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  67. 제 66 항에 있어서, 전신생물성 병변이 PanIN, IPMN 및 MCN 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  68. 췌장암 절제술을 받았던 수술후 환자에게 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 수술후 환자에서 전이를 예방 하는 방법.
  69. 제 68 항에 있어서, 토코트리에놀이 감마-토코트리에놀 및 델타-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  70. 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 조성물과 암세포를 접촉시키는 것을 포함하는, 암세포에서 세포자살을 유도하는 방법.
  71. 제 70 항에 있어서, 토코트리에놀이 감마-토코트리에놀 및 델타-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  72. 제 70 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀 및 베타-토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  73. 제 70 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀, 베타-토코트리에놀 및 감마-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  74. 제 70 항에 있어서, 조성물에 토코페롤이 실질적으로 없는 방법.
  75. 제 70 항에 있어서, 암이 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계인 방법.
  76. 치료적 유효량의 토코트리에놀을 포함하는 조성물과 암세포를 접촉시키는 것을 포함하는, 암세포 내에서 발암원성 PI3K-AKT 신호 전달 경로를 억제시키는 방법.
  77. 제 76 항에 있어서, 토코트리에놀이 감마-토코트리에놀 및 델타-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  78. 제 76 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀 및 베타-토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  79. 제 76 항에 있어서, 조성물에 알파-토코트리에놀, 베타-토코트리에놀 및 감마-토코트리에놀로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 토코트리에놀이 실질적으로 없는 방법.
  80. 제 76 항에 있어서, 조성물에 토코페롤이 실질적으로 없는 방법.
  81. 제 76 항에 있어서, 암이 췌장관 암종, 또는 췌장암 단계인 방법.
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8768629B2 (en) * 2009-02-11 2014-07-01 Caris Mpi, Inc. Molecular profiling of tumors
MX2008014608A (es) 2006-05-18 2009-03-31 Molecular Profiling Inst Inc Sistema y metodo para determinar la intervencion medica individualizada para un estado de enfermedad.
US20100113299A1 (en) * 2008-10-14 2010-05-06 Von Hoff Daniel D Gene and gene expressed protein targets depicting biomarker patterns and signature sets by tumor type
WO2010056337A2 (en) * 2008-11-12 2010-05-20 Caris Mpi, Inc. Methods and systems of using exosomes for determining phenotypes
AU2011223789A1 (en) 2010-03-01 2012-09-20 Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh Biomarkers for theranostics
CA2795776A1 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers for disease
CN102250840B (zh) * 2010-05-18 2014-06-18 上海睿智化学研究有限公司 一种人胰腺癌细胞系及其应用
AU2012253610A1 (en) * 2011-05-09 2013-12-12 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for treating cancer
KR20160045547A (ko) * 2014-10-17 2016-04-27 에스케이텔레콤 주식회사 췌장암 진단용 조성물 및 이를 이용한 췌장암 진단방법
JPWO2016084394A1 (ja) * 2014-11-27 2017-08-24 パナソニックＩｐマネジメント株式会社 撮像装置
US20210205264A1 (en) * 2018-09-04 2021-07-08 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute Inc. Use of delta-tocotrienol for treating cancer
CN114533882B (zh) * 2022-02-22 2023-09-26 朱理查德澄朗 一类治疗癌症的生育三烯酚类物质组合物

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993009777A1 (en) 1991-11-22 1993-05-27 Lipogenics, Inc. Tocotrienols and tocotrienol-like compounds and methods for their use
GB9508823D0 (en) * 1995-05-01 1995-06-21 Scotia Holdings Plc Drug Derivatives
US6133312A (en) 1997-03-04 2000-10-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of suppressing tumor growth with combinations of isoprenoids and statins
US6251400B1 (en) * 1997-09-26 2001-06-26 Kgk Synergize Inc Compositions and methods of treatment of neoplastic diseases and hypercholesterolemia with citrus limonoids and flavonoids and tocotrienols
US6239114B1 (en) 1997-09-26 2001-05-29 Kgk Synergize Compositions and methods for treatment of neoplastic diseases with combinations of limonoids, flavonoids and tocotrienols
ID28460A (id) * 1998-07-08 2001-05-24 Lipogenics Inc Komposisi dan metoda untuk perlakuan dan pencegahan penyakit tulang dengan menggunakan tocotrienol
NZ510732A (en) * 1998-09-23 2004-01-30 Res Dev Foundation Tocopherols, tocotrienols, other chroman and side chain derivatives and uses thereof
US6187811B1 (en) * 1998-10-28 2001-02-13 Lipogenics, Inc. Methods for treating benign prostatic hyperplasia using tocotrienols
CA2399802C (en) * 2000-02-11 2009-12-08 Research Development Foundation Tocopherols, tocotrienols, other chroman and side chain derivatives and uses thereof
GB0026018D0 (en) * 2000-10-24 2000-12-13 Novartis Nutrition Ag New composition
US6670392B2 (en) 2001-04-06 2003-12-30 Bioadvantex Pharma Inc. Compositions and methods for the prevention and treatment of human prostate cancer
US20030007961A1 (en) 2001-06-22 2003-01-09 Wilburn Michael D. Orthomolecular vitamin E derivatives
CN100515497C (zh) 2001-12-19 2009-07-22 研究发展基金会 脂质体输送以维生素e为基础的化合物
US20060141497A1 (en) * 2004-10-22 2006-06-29 Finkelstein Sydney D Molecular analysis of cellular fluid and liquid cytology specimens for clinical diagnosis, characterization, and integration with microscopic pathology evaluation
TW200716764A (en) 2005-05-02 2007-05-01 Genenews Inc Bladder cancer biomarkers and uses thereof
AU2006321727A1 (en) 2005-12-09 2007-06-14 Metaproteomics, Llc Protein kinase modulation by hops and Acacia products

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