KR20090025497A - The cosmetics composition being contained pau d'arco, tabebuia avellanedae extracts and having the effects of antiphlogistic and abirritation of skin - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 타히보(Pau d'Arco , Tabebuia avellanedae) 추출물을 유효 성분으로 함유하며, 염증 작용과 관련된 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2, PGE2)의 생합성 억제, 락틱산 등에 의한 피부자극 완화 효과 및 자외선 조사에 의한 홍반 생성 억제 효과를 통해 항염증 및 피부자극완화 효능을 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention is Tahibo ( Pau) d'Arco , Tabebuia avellanedae ) extract as an active ingredient, anti-inflammatory and skin irritation by inhibiting biosynthesis of prostaglandin E2 (PGE2) related to inflammatory effects, reducing skin irritation by lactic acid, and inhibiting erythema production by UV irradiation The present invention relates to a cosmetic composition exhibiting alleviating efficacy.
피부는 신체의 전 표면을 덮고 있고, 외부의 환경 및 자극으로부터 내부기관을 보호하는 역할을 하고 있으며, 수분증발 억제 및 외부로부터의 이물질의 침투를 차단하는 장벽으로서의 중요한 기능을 수행하고 있다. 그러나, 피부는 항상 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로써, 오존층 파괴에 따른 자외선 조사량 증가, 스트레스, 유해 화학 물질 등에 항상 노출되어 피부의 각질형성세포와 섬유아세포의 활성이 감소하게 되고, 콜라겐 합성능력 및 엘라스틴 합성능력의 감소, 수분보유능력 감소, 건조 피부 증가, 외부 감염원에 대한 방어능력 감소 등으로 인해 외부자극에 민감하게 작용하게 된다.The skin covers the entire surface of the body, serves to protect the internal organs from the external environment and irritation, and plays an important role as a barrier against moisture evaporation and blocking the ingress of foreign substances from the outside. However, the skin is a part of the body that is always directly exposed to the external environment, and the skin is constantly exposed to increased UV radiation, stress, and harmful chemicals due to the destruction of the ozone layer, thereby reducing the activity of keratinocytes and fibroblasts of the skin, and collagen synthesis. Decreased ability and elastin synthesis ability, decreased water retention capacity, increased dry skin, reduced defense ability against external infectious agents, etc. makes it sensitive to external stimuli.
최근에는 홍반, 부종, 여드름, 가려움 등의 피부 자극을 호소하는 사람들이 증가하고 있는 추세며, 이로 인해 각종 자극원에 의한 피부 자극 및 염증을 감소시키고, 특히 세정제 및 화장품에 함유된 합성 계면활성제들의 빈번한 사용으로 인한 피부 자극을 감소시키며, 이를 통하여 현대인의 피부 부작용을 줄일 수 있는 항염증 및 피부자극 완화 효능이 있는 물질을 개발하는 것이 절실히 요구되어 왔다.Recently, more and more people are complaining of skin irritation such as erythema, swelling, acne, and itching, thereby reducing skin irritation and inflammation caused by various irritants, and in particular, synthetic surfactants contained in detergents and cosmetics. To reduce the skin irritation due to frequent use, it has been urgently required to develop an anti-inflammatory and skin irritant effect that can reduce the skin side effects of modern people.
종래, 피부자극을 완화하기 위한 여러 가지 방법이 시도되어 왔으며, 예를 들면 피부자극을 유발하는 물질을 제거하는 방법 등이 시도되었다. 그러나, 기능성 원료 자체가 자극원으로 작용하는 경우가 허다하기 때문에 이와 같은 연구에는 한계가 있다. 예를 들어, 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycolic acid), 살리실산(salicylcic acid), 레티노이드(retinoid) 등은 피부 세포 재생의 촉진 또는 항주름의 효과를 위해 화장품에 함유되지만 피부자극을 유발한다. 이에 따라 최근에는 NaOH나 KOH 등의 강알칼리를 자극 유발 기능성 원료에 첨가하여 산도를 중화시켜 자극을 완화하고자하는 연구가 많이 이루어졌으나, 이와 같은 처방은 기존 원료의 효능을 저하시키는 문제점이 있다.Conventionally, various methods for alleviating skin irritation have been attempted, for example, a method for removing a substance causing skin irritation has been attempted. However, this research is limited because the functional raw material itself often acts as a stimulus source. For example, lactic acid, glycolic acid, salicylcic acid, retinoids, etc. are contained in cosmetics to promote skin cell regeneration or anti-wrinkle effects but cause skin irritation. . Accordingly, in recent years, many studies have been conducted to relieve stimulation by neutralizing acidity by adding strong alkalis such as NaOH or KOH to stimulus-inducing functional raw materials, but such a prescription has a problem of lowering the efficacy of existing raw materials.
그리고, 최근에는 세포간의 면역유발물질들을 억제하는 방법에 관한 연구가 진행되고 있으며, 신경세포에서 분비되는 CGRP(calcitonin gene-related peptide), 물질 P(sunstance P) 등의 신경 펩티드류 (Neuropepetides), 조직이나 혈장에서 스트레스에 의해서 활성화되는 브라디키닌(bradykinin)과 같은 키닌류(kinins) 등, 피부세포와 면역세포에서 다양한 시토키닌(cytokine) 및 PGE2 등이 부종 형성과 혈관 확장에 관여하여 염증의 원인으로 작용하는 것이 알려져 있고, 물질 P를 비롯한 신경 펩타이드 길항제, 브라디키닌 길항제, COX 억제제 등이 피부염증 및 자극을 감소시킬 수 있는 물질로 제시되어 왔으나, 뚜렷한 효과를 나타내지는 못하였다.In recent years, studies have been conducted on methods for suppressing intercellular immune-inducing substances, such as neuropeptides such as calcitonin gene-related peptide (CGRP) and substance P (sunstance P), which are secreted from neurons, Various cytokines and PGE2 are involved in edema formation and vasodilation in skin cells and immune cells, such as kinins such as bradykinin, which are activated by stress in tissues or plasma. It is known to act as a neuropeptide antagonist, such as substance P, bradykinin antagonist, COX inhibitors have been suggested as a substance that can reduce the skin inflammation and irritation, but did not show a clear effect.
한편, 자극완화에 대한 화장료를 살펴보면 비타민 복합체를 이용하여 자외선으로 인한 피부자극의 완화 화장료 조성물(대한민국 공개특허 제2000-0058730호), 라스베리 잎 또는 열매추출물 함유하는 피부 외용제 조성물(대한민국 공개특허 ㅈ제03-0015654호), 피토스테롤을 함유하는 화장료 조성물(공개특허 제2002-0063987호) 등이 있으며, 타히보를 화장료에 사용된 사례를 살펴보면, 타히보 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 활용하여 주름개선에 이용된 사례가 있었다(대한민국 공개특허2004-0090255호).On the other hand, when looking at the cosmetics for stimulation alleviation of the skin irritation cosmetic composition due to ultraviolet rays using a vitamin complex (Korean Patent Publication No. 2000-0058730), an external composition for skin containing raspberry leaf or fruit extract (Korea Patent Publication No. 03 -0015654), cosmetic composition containing phytosterol (Public Patent No. 2002-0063987), etc., and look at the case of using Tahibo in cosmetics, the case was used to improve wrinkles utilizing the collagen synthesis promoting effect of Tahibo extract (Korean Patent Publication No. 2004-0090255).
그러나, 타히보 추출물을 함유하는 조성물이 항염증 작용 및 피부자극완화를 통한 피부 상태 개선 용도에 대해서는 알려진 바 없다.However, the composition containing the Tahibo extract is not known for improving the skin condition through anti-inflammatory action and skin irritation relief.
따라서, 본 발명의 목적은 피부 자극 완화용 또는 항염증용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a cosmetic composition for skin irritation relief or anti-inflammatory.
상기 목적 뿐만 아니라 용이하게 표출되는 다른 목적들을 용이하게 달성하기 위하여 본 발명자들은 항염증, 피부 자극완화를 통해 피부 상태를 개선하는 활성 성분에 대해서 연구를 거듭한 결과, 타히보 추출물이 피부 통증, 피부 자극 및 염증에 관여하는 PEG2의 억제 효과가 있으며, 화장료에 포함된 젖산(lactic acid) 등에 의한 피부 자극을 완화시키는 효과가 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.In order to easily achieve the above objects as well as other objects that are easily expressed, the present inventors have conducted studies on active ingredients that improve skin conditions through anti-inflammatory and alleviation of skin irritation. And it has been found that there is an inhibitory effect of PEG2 involved in inflammation, there is an effect of alleviating skin irritation by lactic acid (lactic acid) contained in the cosmetics and completed the present invention.
본 발명은 타히보 추출물이 갖는 프로스타글란딘의 생성 억제 활성, 세포독성 완화, 항염증 효과, 자외선 조사에 의한 홍반 생성 억제의 효능 등을 활용한 항염증 및 피부자극완화 효과를 얻을 수 있었다.The present invention was able to obtain the anti-inflammatory and skin irritant effect utilizing the production inhibitory activity of the prostaglandin of Tahibo extract, cytotoxicity relief, anti-inflammatory effect, efficacy of inhibiting erythema production by ultraviolet irradiation.
본 발명을 좀 더 상세히 설명하면 다음과 같다.The present invention is described in more detail as follows.
본 발명은 타히보 추출물을 활용한 항염증 및 피부자극완화용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 타히보 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0중량% 함유하는 것을 특징으로 한다.The present invention relates to a cosmetic composition for anti-inflammatory and skin irritation relief using Tahibo extract, Tahibo extract is characterized in that it contains 0.001 to 30.0% by weight based on the total weight of the composition.
본 발명에서 이용되는 타히보(Taheebo)는 능소화과의 수목(Tabebuia Avellanedae)으로 아마존의 일부 지역에서만 자생하고, 고대 잉카제국시대에 원주민들이 “신의 은총을 받은 약목”이라는 뜻에서 타히보라고 불리어 왔으며, 고대 잉카 제국의 인디오들은 건강유지를 위해 이 수목차를 즐겨 마셨다고 한다. 타히보의 역사는 1500년전 고대 잉카제국 원주민들이 타히보 약목에 버섯과 곰팡이가 번식하지 못할 정도로 탁월한 살균력이 있어 해충이 접근을 못하는 데에서 힌트를 얻어 껍질을 벗겨 내부수피를 차로 끓여 애음하여 각종 질병의 토속치료제로 사용해왔다. 때로는 주변국가와 금으로 물물교환을 했을 정도로 귀중품으로 취급되었다고 전해지고 있다. 타베뷔아속은 남아메리카에 100 종류 이상 자생하지만, 그 중에서도 특히 남미 브라질 일부 지역에만 자생하며 빨강 보라색의 꽃이 피는 높이 30m, 줄기 직경 50cm ~ 1.5m 정도의 거대 수목인 태베부이아 아벨레인데에만 타히보의 원료가 된다. 본 명세서에서 용어 '타히보 추출물'은 타히보의 잎, 꽃, 줄기 및 뿌리 등으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 타히보의 내부 수피 부분으로부터 얻은 추출물을 의미한다.Taheebo (Taheebo) used in the present invention is a tree of Jacaranda ( Taebuia Avellanedae) , which grows only in a part of the Amazon, and has been called Tahibo in the ancient Inca empire in the sense of “god's favored medicine”, ancient Inca. Imperial Indians said they enjoyed this table of tea for their health. The history of Tahibo is 1,500 years ago, when the ancient Inca empire indigenous peoples had excellent sterilizing power that prevented the growth of mushrooms and fungi in the Tahibo medicinal plant. It has been used as a cure. Sometimes it is said to have been treated as valuable so that it was bartered for gold with neighboring countries. The Tabevia genus is native to more than 100 varieties in South America, but especially in parts of South America, Brazil. It is a tree of 30 m high with red-purple flowers and a large tree with a stem diameter of 50 cm to 1.5 m. It becomes the raw material of. As used herein, the term 'tahibo extract' refers to an extract obtained from leaves, flowers, stems, and roots of Tahibo, and preferably means an extract obtained from the inner bark portion of Tahibo.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 타히보 추출물은 다양한 추출방법에 의해 수득될 수 있으며, 예를 들어 용매추출법, 즉 추출용매로서는 정제수, 탄소수 1~4의 무수 알콜 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올), 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산, 벤젠 등을 이용하여 선택된 하나 이상의 용매를 혼합 사용하여 추출할 수 있다. 용매와 타히보 분쇄물의 비율은 1:5 내지 1:30으로 하고, 바람직하게는 1:20으로 하는것이 가장 우수하다. 이를 추출기에서 15 - 45℃로 7 - 15일 동안 침적시켜 추출하거나, 40 ℃ - 100 ℃로 5 - 20 시간동안 추출하고, 감압농축 또는 동결 건조하여 얻는다.The tahibo extract included in the cosmetic composition of the present invention can be obtained by various extraction methods, for example, solvent extraction, that is, as an extraction solvent, purified water, anhydrous alcohols having 1 to 4 carbon atoms (methanol, ethanol, propanol, butanol), Acetone, ethyl acetate, chloroform, glycerin, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane, hexane, benzene and the like can be extracted using a mixture of one or more selected. The ratio of the solvent and the tahibo pulverized product is 1: 5 to 1:30, and preferably 1:20 is best. It is extracted by immersing in an extractor at 15-45 ° C. for 7-15 days, or extracted at 40 ° C.-100 ° C. for 5-20 hours, and concentrated under reduced pressure or lyophilization.
그러나, 본 발명의 추출방법에서 사용되는 용매는 상기의 추출 용매로 한정하는 것은 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 타히보 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.However, it will be apparent to those skilled in the art that the solvent used in the extraction method of the present invention is not limited to the above-mentioned extraction solvent, and that Tahibo extract having substantially the same effect can be obtained using other extraction solvents.
한편, 상기 타히보 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 0.1 ~ 10.0 중량%이다. 상기 타히보 추출물의 함량이 0.001중량% 미만일 경우에는 그 효과를 기대하기 어렵고, 30.0중량% 초과할 경우에는 함량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않는다.On the other hand, the Tahibo extract is characterized in that it contains 0.001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. Preferably it is 0.1-10.0 weight%. When the content of the Tahibo extract is less than 0.001% by weight, it is difficult to expect the effect, when it exceeds 30.0% by weight does not appear to increase the apparent effect of increasing the content.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 유효성분은 타히보 추출물이고, 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 함유제 등을 포함한다.The active ingredient included in the cosmetic composition of the present invention is a tahibo extract, and in addition to the ingredients commonly used in cosmetic compositions, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavorings, such as conventional ingredients such as .
본 발명의 노화방지용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정된 것은 아니다. Anti-aging cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing And the like, but are not limited thereto.
본 발명 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 클리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.In case the formulation of the composition of the present invention is a paste, cream or gel, the carrier component is animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, trakant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide or the like. This can be used.
또한, 본 발명 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글라이콜, 1,3-부틸렌 글라이콜, 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글라이콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.In addition, when the formulation of the composition of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene. Fatty acids esters of glycols, 1,3-butylene glycols, oils, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycols or sorbitan.
본 발명 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다. When the formulation of the composition of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular, in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, Propellants such as propane / butane or dimethyl ether.
본 발명 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 또는 프로필렌 글라이콜과 같은 액상의 희석제, 에톡시화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the composition of the present invention is a suspension, suspensions such as liquid diluents such as water, ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester are used as carrier components. Firstly, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.
본 발명 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방 족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the composition of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent, as a carrier component, an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltaurate, a sarcosinate, a fatty acid Amide ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
본 발명의 화장료 조성물은 항염증 및 피부자극완화 효과를 갖는다. 이는 타히보 추출물이 가지는 면역유발 물질 및 부종 억제, 피부자극완화 효과를 통해 피부 문제를 개선하는 것이다. 따라서, 본 발명은 피부 노화 방지, 주름 개선, 보습력 개선 및 피부 탄력 개선 용도를 포함하는 것으로 해석된다.The cosmetic composition of the present invention has an anti-inflammatory and skin stimulating effect. This is to improve the skin problem through the immune-inducing substance and edema inhibition, skin irritation relief effect that Tahibo extract has. Accordingly, the present invention is construed to include anti-aging, wrinkle improvement, moisturizing and skin elasticity use.
이하, 실시 예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited to these examples according to the gist of the present invention to those skilled in the art to which the present invention pertains. Will be self explanatory.
제조예Production Example 1 : One : 타히보로부터From Tahibo 추출물의 제조 Preparation of Extract
타히보(Taheebo-Japan, 일본 회사 제품) 1㎏을 깨끗한 물로 세척하고 서늘한 그늘에서 건조시킨다. 그 후 분쇄기를 이용하여 건조한 타히보를 곱게 분쇄한 후, 분쇄물 1㎏을 냉각콘덴서가 장치되어 있는 추출기에 넣고, 정제수 5ℓ를 넣어 75 ℃에서 15시간 가열하여 열수 추출한다. 상기의 추출물을 400메쉬 여과포로 여과한 후, 여액을 모아 냉각 콘덴서가 달려있는 증류 장치를 사용하여 용매를 완전히 증발시킨 후에 농축시켜 건조 중량 40.7g의 타히보 추출물을 얻었다.1 kg of Taheebo-Japan (manufactured by a Japanese company) is washed with clean water and dried in a cool shade. Thereafter, using a grinder to finely crush the dry Tahibo, 1 kg of the pulverized product is placed in an extractor equipped with a cooling capacitor, 5 liters of purified water is added and heated at 75 ° C. for 15 hours to extract hot water. The extract was filtered with a 400 mesh filter cloth, and the filtrates were collected and concentrated using a distillation apparatus equipped with a cooling condenser to completely evaporate the solvent to obtain a dry weight of 40.7 g of Tahibo extract.
제조예Production Example 2 ∼ 14 : 용매별 추출물의 제조 2-14: Preparation of extract for each solvent
추출용매만 달리한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 타히보 추출물을 얻었으며, 수득량은 표 1과 같다.Except for only the extraction solvent, Tahibo extract was obtained in the same manner as in Example 1, and the yield is shown in Table 1.
실험예Experimental Example 1 : 프로스타글란딘 1: prostaglandin E2E2 ( ( PGE2PGE2 )의 생성 억제효과) Inhibitory effect
프로스타글란딘의 생합성에 타히보 추출물의 영향을 조사하기 위해, 생쥐 대식세포주인 RAW264.7 세포를 96-웰 시험 플레이트에 5×104씩 세포를 분주하여 10% 우태아 혈청이 함유된 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후 아스피린(aspirin)을 최종 농도가 500μM이 되도록 첨가하여 세포에 잔존하는 프로스타글란딘 생합성 효 (prostaglandin H2 synthetase, 또는 cyclooxygenase)의 활성을 억제시켰다. 아스피린 처리 2시간 후에 RAW264.7 세포가 들어있는 각 웰을 PBS로 2회 세척하고, 각 웰에 1㎍/ml의 LPS(lipopolysaccharide)를 함유한 10% FBS-DMEM 배지를 200㎕씩 넣었다(대조군에는 LPS가 없는 배지를 가함). 그런 다음, 상기 제조예의 타히보 추출물을 최종농도 10ppm이 되도록 처리한 후, 16시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 적당량 취하여 16시간 동안 생합성된 PGE2를 정량함으로써,타히보 추출물의 프로스타글란딘 억제 효과를 판단하였다. PGE2의 양은 ELISA 판독기 450 nm에서 측정하여 정량화하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.To investigate the effect of Tahibo extract on the biosynthesis of prostaglandins, mouse macrophage lines, RAW264.7 cells, were divided into 5 × 10 4 cells in 96-well test plates for 24 hours in medium containing 10% fetal bovine serum. Incubated. Aspirin was then added to a final concentration of 500 μM to inhibit the activity of prostaglandin biosynthetic activity (prostaglandin H2 synthetase, or cyclooxygenase) remaining in the cells. Two hours after aspirin treatment, each well containing RAW264.7 cells was washed twice with PBS, and 200 μl of 10% FBS-DMEM medium containing 1 μg / ml LPS (lipopolysaccharide) was added to each well (control). In medium without LPS). Then, the tahibo extract of the preparation was treated to a final concentration of 10 ppm, and then incubated for 16 hours. By taking an appropriate amount of the culture supernatant and quantifying biosynthesized PGE2 for 16 hours, the prostaglandin inhibitory effect of the tahibo extract was determined. The amount of PGE2 was measured and quantified by ELISA reader 450 nm and the results are shown in Table 2 below.
상기 실험 수행의 결과, 하기 표 2에서 보는 바와 같이 추출용매로 에탄올을 이용한 제조예 3의 타히보 추출물이 가장 우수한 항염증 효과를 나타내었다.As a result of the experiment, the Tahibo extract of Preparation Example 3 using ethanol as the extraction solvent showed the most excellent anti-inflammatory effect as shown in Table 2.
실험예Experimental Example 2 : 세포독성 완화 효과 시험 2: cytotoxic effect test
섬유아세포(Human fibroblast)를 96 웰 플레이트(96-well plate)의 각 웰에5x104 세포를 분주하여 10% 우태아 혈청이 함유된 배지에서 24시간 동안 배양한다. 그 후 우태아 혈청이 없는 배지로 교체하고, 상기 제조예 1 ~ 14 에서 수득한 추출물을 배양액내에 최종농도 100ppm이 되도록 첨가한 후, 4시간 후에 .02% 소듐 도데실 설페이트(Sodium dodecyl sulfate : SDS)를 010㎕ 첨가하여 24시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 후에 5㎎/㎖의 황색 테트라졸리움염(MTT) 용액을 웰당 10㎕ 씩 가한 후, 4시간 후에 황색 테트라졸리움염 용액을 제거하고, 디메칠설폭시드(DMSO)를 웰당 100㎕씩 가한 다음, 10분간 용해하여 스펙트로포토메터(spectrophotometer : Molecular Devices, USA)를 이용하여 570nm의 흡광도를 측정 하였다. 그 결과는 하기 표3에 나타내었다.Fibroblasts (Human fibroblast) to be cultured in the medium dispensed by containing 10% fetal calf serum to 5x10 4 cells per well of a 96 well plate (96-well plate) for 24 hours. Subsequently, fetal calf serum-free medium was replaced, and the extracts obtained in Preparation Examples 1 to 14 were added to a final concentration of 100 ppm in the culture medium, followed by 4 hours of .02% sodium dodecyl sulfate (SDS). ) Was added and incubated for 24 hours. After incubation, 10 μl of a 5 mg / ml yellow tetrazolium salt (MTT) solution was added per well, and after 4 hours, the yellow tetrazolium salt solution was removed, and dimethyl sulfoxide (DMSO) was added 100 μl per well. Next, the solution was dissolved for 10 minutes and the absorbance of 570 nm was measured using a spectrophotometer (Molecular Devices, USA). The results are shown in Table 3 below.
상기 실험 수행의 결과, 하기 표 3에서 보는 바와 같이 추출용매로 에탄올을 이용한 제조예 3의 타히보 추출물이 가장 우수한 세포독성 완화 효과를 나타내었고, 제조예 14의 경우는 가장 낮은 세포 독성 완화 효과를 보여주었다.As a result of the experiment, the Tahibo extract of Preparation Example 3 using ethanol as the extraction solvent showed the best cytotoxicity mitigating effect, as shown in Table 3 below, the preparation of Example 14 shows the lowest cytotoxicity mitigating effect gave.
실험예Experimental Example 3 : 동물 실험을 통한 3: through animal experiment 타히보Tahibo 추출물의 항염증 효과 실험 Anti-inflammatory Effect Experiment of Extract
타히보 추출물에 대한 항염증 효과를 알아보기 위하여 ICR 마우스 5마리씩 총 3개군으로 나누었으며 시험군 1은 제조예 3의 추출물 1.0% + 에탄올 99%를 시료로, 제조예 3의 추출물 2.0% + 에탄올 98%를 시료로 하였으며 음성 대조군은 에탄올만을 사용하였다. In order to examine the anti-inflammatory effect on the Tahibo extract, ICR mice were divided into three groups of five mice each, and test group 1 was obtained by using 1.0% of extract of preparation 3 + 99% of ethanol as a sample, 2.0% of extract of preparation 3 + ethanol 98 % Was used as a sample and only negative ethanol was used as a negative control.
각 군의 ICR 마우스의 양쪽 귀를 시험 부위로 하여 시료를 적용하기 전 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하고 마이크로미터로 귀 두께의 평균치를 측정하였다. 각각의 시험군에 시료를 20㎕를 도포하고 1시간 후 우측 귀에 아라키돈산(Arachidonic acid)을 2㎎/ear을 도포하여 1시간 후 귀의 부종(ear edema) 정도를 마이크로미터로 양쪽 귀를 3회씩 반복 측정하였다. 왼쪽 귀는 염증 유발 여부를 알아보기 위해 이용하였으며, 항염 효과는 에탄올 만을 처리한 대조군을 기준으로 다음 수학식 1과 같이 부종 억제율을 판정하였으며, 그 결과(각 군의 평균값)를 다음 표 4에 나타내었다.Using both ears of each group of ICR mice as the test site, the ears were washed clean with ethanol before applying the sample, and the average thickness of the ears was measured by micrometer. 20 μl of the sample was applied to each test group, and after 1 hour, 2 mg / ear of arachidonic acid was applied to the right ear. After 1 hour, the ear edema was micrometered on both ears three times. Repeated measurements were taken. The left ear was used to determine whether the inflammation was induced, and the anti-inflammatory effect was determined based on the control group treated with ethanol as shown in Equation 1 below, and the result (average value of each group) is shown in Table 4 below. It was.
(수학식 1)(Equation 1)
염증 억제율 (%) = (A-B)/A × 100Inhibition rate of inflammation (%) = (A-B) / A × 100
A : 대조군 귀의 변화 (아라키돈산처리 후 귀의 두께- 아라키돈산처리 전 귀의 두께)A: Change of control ears (ear thickness after arachidonic acid treatment-ear thickness before arachidonic acid treatment)
B : 시료처리군의 귀의 변화 (아라키돈산처리 후 귀의 두께- 아라키돈산처리 후 귀의 두께)B: Change of Ear in Sample Treatment Group (Thickness of Ear after Arachidonic Acid Treatment-Ear Thickness after Arachidonic Acid Treatment)
상기 표 4의 결과에서 알 수 있듯이, 아리키돈산에 의해 유발되는 염증 반응을 타히보 추출물이 억제하고 있음을 보여 생체에서도 효과가 있음을 알 수 있었다.As can be seen from the results in Table 4, it was found that the Tahibo extract inhibits the inflammatory response induced by Arikidonic Acid, which is also effective in vivo.
실험예Experimental Example 4 : 피부 4: skin 첩포시험을Patch test 통한 through 타히보Tahibo 추출물의 자극완화 효과 실험 Stimulation Relaxation Effect Test of Extracts
과거력상 피부자극에 과민반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알러지 증상이 없는 20-30대 여성 20명을 대상으로 인체 피부 첩포 시험을 통하여 하기 표 5의 제형내 포함된 피부 자극 물질인 젖산(Lactic acid) 5.0%에 대한 타히보 추출물의 자극 완화 효과를 확인하였다. 우선 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시켰다. 표 5의 조성으로 제조된 시험물질을 15㎍씩 핀챔버(Finn chamber, 100x10, EPITEST, 핀란드) 내에 적하시킨 후, 시험대상자의 전박(forearm) 안쪽 부위에 밀폐 첩포하였다. 24시간 동안 첩포하고 첩포를 제거한 후 펜으로 시험부위를 표시하였다. 표시 후 각각 1시간 및 24시간 후에 확대경(8MC-150, DAZOR, 미합중국)을 이용하여 시험 부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무를 관찰하였다. 피부반응은 국제접촉피부염연구회(ICDRG, International Contact Dermaitis Research Group)의 규정에 따라 판정하고, 수학식 2에 따라 평균피부반응도(mean response rate)를 구하였다. 그 결과를 표 6에 기재하였다.Lactic acid, a skin irritant included in the formulation of Table 5, was tested through human skin patch tests on 20 women in their 20s and 30s who had no hypersensitivity to skin irritation due to past history and have no skin disease or skin allergy symptoms. Lactic acid) was confirmed to reduce the irritation effect of Tahibo extract against 5.0%. First the test site was wiped with 70% ethanol and dried. 15 μg of the test substance prepared in the composition of Table 5 was added dropwise into a Fin chamber (Finn chamber, 100 × 10, EPITEST, Finland), and then sealed in the forearm inner part of the test subject. The patch was marked for 24 hours, the patch was removed, and the test site was marked with a pen. After 1 hour and 24 hours after marking, the test site was observed using a magnifying glass (8MC-150, DAZOR, United States of America) to observe erythema and edema. Skin response was determined according to the regulations of the International Contact Dermaitis Research Group (ICDRG), and the mean skin response rate was calculated according to Equation 2. The results are shown in Table 6.
[피부반응의 평가 기준 및 점수][Evaluation Criteria and Score of Skin Response]
수학식 2Equation 2
평균피부반응도=(점수 x 반응 수 x 100 x 1/2) / [3(최대 점수) x 총피검자수(n)]Average skin reactivity = (score x responses x 100 x 1/2) / [3 (maximum score) x total subjects (n)]
상기 표 6에서 알 수 있듯이, 피부첩포실험에서 젖산을 함유한 비교예 1에서 강한 피부자극이 보였고, 실시예 1 및 실시예 2에서 모두 자극완화 효과를 나타내었으며, 농도 의존적으로 실시예 2에서 가장 우수한 자극 완화 효과를 보였다.As can be seen in Table 6, in the skin patch test, strong skin irritation was observed in Comparative Example 1 containing lactic acid, and in Example 1 and Example 2, it showed a stimulating alleviation effect, and the concentration-dependent most in Example 2 It showed an excellent stimulating effect.
실험예Experimental Example 5 : 5: 인체시험을Human testing 통한 자외선 조사 시 홍반 생성 억제 효과 Inhibition of erythema formation upon UV irradiation
타히보 추출물의 자외선 (UVB)에 의한 피부 홍반 유발 억제 효과를 평가하기 위해 비스테로이드성 항염증제 및 기타 스테로이드 제제를 복용한 경력이 없는 건강한 남성 20명을 대상으로 피검자의 팔 위쪽 부위에 직경 1.5cm의 구멍 4개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량 (Minimum erythema dose, MED)의 2배 정도의 자외선 (UVB)를 조사하여 홍반을 유발시켰다. 하기 표 7에 따라 제조한 제형을 자외선을 조사하기 1시간 전과 자외선 조사 직후 도포하였다. 이러한 홍반지수는 6시간 후와 24시간 후의 홍반지수를 평가하였고, 홍반생성의 정도는 크로마미터(Chromameter CR 300, Minolta)를 이용하여 a* 컬러 파라미터를 측정하였으며, a*값이 클수록 홍반정도가 심한 것으로 평가하였다. 그 결과값은 평균치를 나타내었고, 그 결과는 하기 표8에 나타내었다.A hole with a diameter of 1.5 cm in the upper arm of a subject of 20 healthy males who had not taken nonsteroidal anti-inflammatory drugs and other steroid preparations to evaluate the effects of Tahibo extract on UV-induced skin erythema induction. After attaching the four opaque tapes, the erythema was induced by irradiating ultraviolet light (UVB) twice as much as the minimum erythema dose (MED) of each subject. The formulations prepared according to Table 7 were applied 1 hour before and immediately after UV irradiation. The erythema index was assessed after 6 hours and 24 hours after erythema index. The erythema formation was measured by using a chromatic chromaticity (Chromameter CR 300, Minolta) and a * color parameters. It was evaluated as severe. The result was an average value, and the results are shown in Table 8 below.
상기 표의 결과에서도 알 수 있듯이, 타히보 추출물을 함유한 제형은 자외선에 의한 홍반 생성을 억제하는 효과가 있음을 나타내었고, 억제 효과는 농도 의존적으로 나타났다. As can be seen from the results of the table, it was shown that the formulation containing the Tahibo extract has an effect of inhibiting erythema production by ultraviolet rays, and the inhibitory effect was concentration-dependent.
이하, 본 발명의 화장료 제형예로서 타히보 추출물을 함유하는 유연 화장수, 에센스, 팩, 샴푸 및 보디 클린저등을 예시하고 있으나, 본 발명의 화장료의 제형이 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, examples of the cosmetic formulation of the present invention include a flexible lotion, an essence, a pack, a shampoo, a body cleanser, and the like, which contain tahibo extract, but the formulation of the cosmetic of the present invention is not necessarily limited thereto.
제형예Formulation example 1 : 스킨로션 1: skin lotion
상기에서 수득한 제조예 3의 타히보 추출물을 함유하는 스킨로션을 하기 표 9의 조성으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.Skin lotion containing the Tahibo extract of Preparation Example 3 obtained above was prepared according to a conventional method in the composition of Table 9.
제형예Formulation example 2 : 로션 2: lotion
상기에서 수득한 제조예 3의 타히보 추출물을 함유하는 로션을 하기 표 10의 조성으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.A lotion containing the tahibo extract of Preparation Example 3 obtained above was prepared according to a conventional method with the composition of Table 10 below.
제형예Formulation example 3 : 에센스 3: essence
상기에서 수득한 제조예 3의 타히보 추출물을 함유하는 에센스를 하기 표 11의 조성으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.Essence containing the Tahibo extract of Preparation Example 3 obtained above was prepared according to a conventional method in the composition of Table 11.
제형예Formulation example 4 : 팩 4: pack
상기에서 수득한 제조예 3의 타히보 추출물을 함유하는 팩을 하기 표 12의 조성으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.The pack containing the Tahibo extract of Preparation Example 3 obtained above was prepared according to a conventional method with the composition of Table 12 below.
제형예Formulation example 5 : 5: 맛사지크림Massage cream
상기에서 수득한 제조예 3의 타히보 추출물을 함유하는 맛사지크림을 하기 표 13의 조성으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.Massage cream containing the Tahibo extract of Preparation Example 3 obtained above was prepared according to a conventional method in the composition of Table 13.
제형예Formulation example 6 : 샴푸 6: shampoo
상기에서 수득한 제조예 3의 타히보 추출물을 함유하는 샴푸를 하기 표 14의 조성으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.Shampoo containing the Tahibo extract of Preparation Example 3 obtained above was prepared according to a conventional method in the composition of Table 14.
제형예Formulation example 7 : 7: 바디클랜져Body cleanser
상기에서 수득한 제조예 3의 타히보 추출물을 함유하는 바디클랜져를 하기 표 15의 조성으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.A body cleanser containing the Tahibo extract of Preparation Example 3 obtained above was prepared according to a conventional method with the composition of Table 15 below.
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