KR102650364B1 - Composition for anti-oxidation, anti-inflammation, anti-atopy, anti-wrinkle and improvement of moisturizing comprising extract of Lycorisradiata - Google Patents

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Abstract

본 발명은 석산(꽃무릇)을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 석산(꽃무릇) 추출물을 포함하는 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습증진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 석산 추출물을 포함하는 조성물은 ABTS 자유라디칼 소거능을 통해 항산화 활성을 나타내며, 산화질소 억제, TNF-α 억제 활성 등의 항염증 활성을 나타내며, IL-8 억제 활성 등의 항아토피 활성, 히알루론산 증진 등의 보습 증진능을 나타내고, 엘라스타제 활성 억제 등 항주름 활성을 나타내는바, 화장품, 의약품, 건강기능식품등에 활용도가 높을 것으로 기대된다.The present invention relates to a composition containing aseptic acid as an active ingredient, and more specifically, to a composition for antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle and moisturizing purposes containing extract of asperic acid. The composition containing the lithic acid extract according to the present invention exhibits antioxidant activity through ABTS free radical scavenging activity, anti-inflammatory activities such as nitric oxide inhibition and TNF-α inhibition activity, anti-atopic activity such as IL-8 inhibition activity, It has moisturizing properties such as enhancing hyaluronic acid and has anti-wrinkle activity such as inhibiting elastase activity, so it is expected to be highly utilized in cosmetics, pharmaceuticals, and health functional foods.

Description

석산(꽃무릇) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진용 조성물{Composition for anti-oxidation, anti-inflammation, anti-atopy, anti-wrinkle and improvement of moisturizing comprising extract of Lycorisradiata}Composition for anti-oxidation, anti-inflammation, anti-atopy, anti-wrinkle and improvement of moisturizing comprising aseptic acid extract as an active ingredient. extract of Lycoris radiata}

본 발명은 석산(꽃무릇)을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 석산(꽃무릇) 추출물을 포함하는 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition containing aseptic acid as an active ingredient, and specifically to a composition for antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle, and moisturizing promotion containing extract of asperic acid.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 과도한 자외선이나 오염물질 등에 노출되면 홍반, 부종, 가려움 등의 피부자극 및 염증반응이 유발된다. 이러한 피부 트러블은 미관상 문제가 될 뿐만 아니라, 염증반응과정에서 생성되는 물질들이 부수적으로 색소 침착을 일으키고, 피부 탄력섬유의 붕괴를 촉진시켜 피부 주름을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 또한, 피부 손상에는 자유라디칼과 관련된 것으로 알려져 있다. 자유라디칼은 세포를 파괴하거나 피부 진피층의 결합조직을 절단하거나 교차 결합을 일으키므로 주름형성, 피부암, 세포 살상, 류마티스성 관절염, 아토피성 피부염, 여드름 등 여러 가지 문제를 발생시킨다.The skin is a part of the body that is directly exposed to the external environment, and excessive exposure to ultraviolet rays or pollutants causes skin irritation and inflammatory reactions such as erythema, swelling, and itching. These skin problems not only cause cosmetic problems, but they are also known to cause pigmentation and promote the breakdown of skin elastic fibers, resulting in increased skin wrinkles, due to substances produced during the inflammatory reaction process. Additionally, it is known that skin damage is related to free radicals. Free radicals destroy cells, cut connective tissue in the dermal layer of the skin, or cause cross-linking, causing various problems such as wrinkle formation, skin cancer, cell killing, rheumatoid arthritis, atopic dermatitis, and acne.

염증은 해로운 주위 환경, 즉 세균과 같은 외부 이물질의 침입과 기계적 손상으로부터 생체를 보호하는 생리적인 반응이다. 이 염증 현상은 여러 종류의 다핵형 백혈구(PMNs)와 면역 물질의 많은 증가를 초래하고, 이들 세포들은 염증성 세포 산물인 다양한 종류의 단백질 분해효소와 사이토카인(cytokine)을 분비함으로써 치료 및 방어를 할 수 있게 한다. Inflammation is a physiological response that protects the living body from the harmful surrounding environment, that is, invasion of foreign substances such as bacteria, and mechanical damage. This inflammatory phenomenon causes a large increase in various types of polynuclear leukocytes (PMNs) and immune substances, and these cells can provide treatment and defense by secreting various types of proteolytic enzymes and cytokines, which are inflammatory cell products. make it possible

과다 염증은 단백질 분해 효소들에 의해 세포 및 결합조직의 손상을 입히고, 결합 조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라, 세포의 재생 및 증식에도 나쁜 영향을 미치게 되어 빠른 피부노화를 초래하게 되고, 피부에 국소적인 홍반과 부어 오름이 나타나게 된다. 만일, 결합조직이 심각하게 손상되고 염증반응이 지속된다면 정상적인 조직구조와 기능을 회복시키는 일은 훨씬 어렵게 된다.Excessive inflammation causes damage to cells and connective tissue by proteolytic enzymes. Damage to connective tissue not only reduces skin elasticity and causes wrinkles, but also has a negative effect on cell regeneration and proliferation, resulting in rapid skin loss. It causes aging, and local erythema and swelling appear on the skin. If connective tissue is seriously damaged and the inflammatory response continues, restoring normal tissue structure and function becomes much more difficult.

이에, 피부손상을 개선시키기 위해 자유라디칼 소거활성 및 염증을 억제할 수 있는 물질로 홍차 발효액을 포함하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 조성물(대한민국 등록특허 제1485896호), 한약재 혼합물을 포함하는 항산화, 항염증 및 아토피 예방 또는 치료용 조성물(대한민국 등록 특허 제1654409호) 등이 연구되고 있다.Accordingly, to improve skin damage, a composition for improving antioxidant, anti-inflammatory and atopic dermatitis containing fermented black tea as a substance capable of suppressing free radical scavenging activity and inflammation (Korean Patent No. 1485896), and antioxidant containing a mixture of herbal medicines , anti-inflammatory and atopy prevention or treatment compositions (Korea registered patent no. 1654409), etc. are being studied.

한편, 석산(Lycorisradiata)은 수선화과에 따린 여러해살이 알뿌리식물로서, 꽃무릇이라도 불린다. 꽃줄기는 약 30~50cm, 잎은 약 30~40cm, 너비는 1.5cm 정도로 길쭉하며 길이는 약 1m 가량 자란다. 가을에 잎이 올라와 겨울과 봄을 견디고 초여름에 잎이 모두 떨어지고 꽃대가 올라와 9~10월 초가을에 붉은 꽃이 피는 것이 특징이다. 석산은 해독작용이 있다고 알려져 있으며, 둥근 뿌리에는 유독한 알칼로이드가 포함되어 있어 사인화, 장례화, 유령화 또는 피안화라고도 불리며 천연 항균물질을 함유하고 있어 접착제 등에 활용되었으며, 유독물질인 리코린이 포함되어 있어 피부질환 등에 영향을 주는 것으로 알려져 있다. Meanwhile, Lycoris radiata is a perennial bulbous plant belonging to the Amaryllid family and is also called a flower plant. The flower stem is about 30 to 50 cm long, the leaves are about 30 to 40 cm long, the width is about 1.5 cm long, and the length is about 1 m. The leaves come up in the fall, survive the winter and spring, and in early summer, all the leaves fall, the flower stalks rise, and red flowers bloom in early fall from September to October. Stone acid is known to have a detoxifying effect. The round root contains toxic alkaloids, so it is also called sinhwa, funerary flower, ghost flower, or piranha. It contains natural antibacterial substances and is used in adhesives, etc. It contains the toxic substance lycorine. It is known to affect skin diseases, etc.

석산은 상사화와 같이 수선화과에 속하지만, 상사화의 분양원가가 수천원대인데 반해 석산은 수백원대로 석산을 이용한 식품, 의약품 및 화장품 소재의 활용가능성이 매우 큰 상황이지만, 이를 통한 연구는 미미한 실정이다.Seoksan belongs to the Narcissus family, just like the Sargassum flower. However, while the selling price of the Sargassum flower is in the thousands of won, the cost of Seoksan is in the hundreds of won. There is a great possibility of using it as a material for food, medicine, and cosmetics, but research on it is minimal.

상기와 같은 문제점을 개선하기 위하여, 본 발명자들은 석산 추출물의 다양한 효능을 연구한 결과, 석산 추출물이 ABTS 자유라디칼 소거 활성, DPPH 라디칼 소거 활성 또는 FRAP 활성을 통해 항산화 활성을 나타내고, 산화질소, TNF-α, IL-6 또는 IL-8을 억제시킴으로써 항염증 또는 항아토피 활성을 나타내고, 히알루론산 증진을 통해 보습 증진 효능을 나타내고, 엘라스타제 활성 억제 등 항주름 활성을 나타내는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.In order to improve the above problems, the present inventors studied the various effects of lithic acid extract and found that lithic acid extract exhibits antioxidant activity through ABTS free radical scavenging activity, DPPH radical scavenging activity or FRAP activity, and nitric oxide and TNF- The present invention was completed by confirming that it exhibits anti-inflammatory or anti-atopic activity by inhibiting α, IL-6 or IL-8, exhibits moisturizing effect by enhancing hyaluronic acid, and exhibits anti-wrinkle activity such as inhibiting elastase activity. did.

이에, 본 발명은 석산 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진용 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Accordingly, the purpose of the present invention is to provide a cosmetic composition, pharmaceutical composition, or health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle, and moisturizing promotion, which contains lithic acid extract as an active ingredient.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the problems mentioned above, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the description below.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 석산 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진용 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition, pharmaceutical composition, or health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopy, anti-wrinkle, and moisturizing promotion, containing a lithic acid extract as an active ingredient.

본 발명의 일구현예로, 상기 추출물은 석산을 물, C1 내지 C4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 추출할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the extract may be extracted using stone acid, water, C1 to C4 lower alcohol, or a mixed solvent thereof.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 석산은 석산의 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 부위일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the lithic acid may be at least one part selected from the group consisting of leaves, stems, and roots of lithic acid.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 ABTS 자유라디칼 소거 활성, DPPH 라디칼 소거 활성 또는 FRAP 활성을 나타낼 수 있다.In another embodiment of the present invention, the composition may exhibit ABTS free radical scavenging activity, DPPH radical scavenging activity, or FRAP activity.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 산화질소, TNF-α, IL-6 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 억제할 수 있다.In another embodiment of the present invention, the composition may inhibit the expression of one or more selected from the group consisting of nitric oxide, TNF-α, IL-6, and IL-8.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 히알루론산 합성을 증진시킬 수 있다.In another embodiment of the present invention, the composition can enhance hyaluronic acid synthesis.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 엘라스타제(Elastase)의 활성을 억제시킬 수 있다.In another embodiment of the present invention, the composition can inhibit the activity of elastase.

본 발명에 따른 석산 추출물을 포함하는 조성물은 ABTS 자유라디칼 소거능을 통해 항산화 활성을 나타내며, 산화질소 억제, TNF-α 억제 활성 등의 항염증 활성을 나타내며, IL-8 억제활성 등의 항아토피 활성, 히알루론산 증진 등의 보습 증진능을 나타내며, 엘라스타제 활성 억제 등 항주름 활성을 나타내는바, 화장품, 의약품, 건강기능식품등에 활용도가 높을 것으로 기대된다.The composition containing the lithic acid extract according to the present invention exhibits antioxidant activity through ABTS free radical scavenging activity, anti-inflammatory activities such as nitric oxide inhibition and TNF-α inhibition activity, anti-atopic activity such as IL-8 inhibition activity, It has moisturizing properties such as enhancing hyaluronic acid and has anti-wrinkle activity such as inhibiting elastase activity, so it is expected to be highly utilized in cosmetics, pharmaceuticals, and health functional foods.

도 1은 석산 원료를 기반으로 부위와 용매에 따라 4종의 추출물을 제조한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 도 1에 개시된 4종의 추출물을 대상으로 물과 유기용매에 대한 용해도를 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 석산으로부터 조제된 추출물 4종에 대한 ABTS 라디칼 소거활성을 나타낸 것이다.
도 4는 석산으로부터 조제된 추출물 4종에 대한 DPPH 라디칼 소거활성을 나타낸 것이다.
도 5는 석산 추출물 처리 후 철이온을 이용하여 환원력을 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 석산으로부터 조제된 추출물 4종에 대한 총 폴리페놀 함량을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위로 처리하고 시료독성을 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위로 처리하고 전염증성 물질인 nitric oxide(NO) 생성 억제활성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위로 처리하고 전염증성 물질인 tumor necrosis factor-α(TNF-α) 생성 억제활성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위로 처리하고 전염증성 물질인 interleukin-6(IL-6) 생성 억제활성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위로 처리하고 시료독성을 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 12는 석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위로 처리하고 아토피 관련 물질인 IL-6 생성 억제활성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 13은 석산추출물 4종을 처리하고 아토피 관련 물질인 IL-8 생성 억제활성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 14는 석산 추출물 4종을 처리하고, HaCaT 세포에서 보습인자인 hyaluronic acid(HA) 생성 증진활성을 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 15 내지 17은 석산 추출물 4종을 10분 간 처리한 경우, 엘라스타제 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 18 내지 20은 석산 추출물 4종을 20분 간 처리한 경우, 엘라스타제 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 21 내지 23은 석산 추출물 4종을 30분 간 처리한 경우, 엘라스타제 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 24 내지 26은 석산 추출물 4종을 130분 간 처리한 경우, 엘라스타제 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
Figure 1 shows the results of preparing four types of extracts depending on the site and solvent based on quartz acid raw material.
Figure 2 shows the results of evaluating the solubility of the four extracts disclosed in Figure 1 in water and organic solvents.
Figure 3 shows the ABTS radical scavenging activity of four types of extracts prepared from seoksan.
Figure 4 shows the DPPH radical scavenging activity of four types of extracts prepared from seoksan.
Figure 5 shows the results of evaluating reducing power using iron ions after treatment with lithic acid extract.
Figure 6 shows the results of measuring the total polyphenol content of four types of extracts prepared from Seoksan.
Figure 7 shows the results of evaluating sample toxicity after treating four types of lithic acid extracts at a concentration range of 1.25 to 10 μg/mL.
Figure 8 shows the results of evaluating the activity of inhibiting the production of nitric oxide (NO), a pro-inflammatory substance, by treating four types of lithic acid extracts in a concentration range of 1.25 to 10 μg/mL.
Figure 9 shows the results of evaluating the activity of inhibiting the production of tumor necrosis factor-α (TNF-α), a pro-inflammatory substance, after treating four types of lithic acid extracts at a concentration range of 1.25 to 10 μg/mL.
Figure 10 shows the results of evaluating the activity of inhibiting the production of interleukin-6 (IL-6), a pro-inflammatory substance, after treating four types of lithic acid extracts at a concentration range of 1.25 to 10 μg/mL.
Figure 11 shows the results of evaluating sample toxicity after treating four types of lithic acid extracts in a concentration range of 1.25 to 10 μg/mL.
Figure 12 shows the results of evaluating the activity of inhibiting the production of IL-6, a substance related to atopy, after treating four types of lithic acid extracts at a concentration range of 1.25 to 10 μg/mL.
Figure 13 shows the results of evaluating the inhibition activity of IL-8 production, a substance related to atopy, after treating four types of lithic acid extracts.
Figure 14 shows the results of treating four types of lithic acid extracts and evaluating the activity of enhancing the production of hyaluronic acid (HA), a moisturizing factor, in HaCaT cells.
Figures 15 to 17 show the results of confirming the elastase inhibition effect when four types of quartz extract were treated for 10 minutes.
Figures 18 to 20 show the results of confirming the elastase inhibition effect when four types of quartz extract were treated for 20 minutes.
Figures 21 to 23 show the results of confirming the elastase inhibition effect when four types of lithic acid extract were treated for 30 minutes.
Figures 24 to 26 show the results of confirming the elastase inhibition effect when four types of quartz extract were treated for 130 minutes.

본 발명자들은 석산 추출물의 다양한 효능을 연구한 결과, 석산 추출물이 ABTS 자유라디칼 소거 활성, DPPH 라디칼 소거 활성 또는 FRAP 활성을 통해 항산화활성을 나타내고, 산화질소, TNF-α, IL-6 또는 IL-8을 억제시킴으로써 항염증 또는 항아토피 활성을 나타내고, 히알루론산 증진을 통해 보습 증진 효능을 나타내고, 엘라스타제 억제를 통해 항주름 효능을 나타내는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors studied the various effects of lithic acid extract and found that lithic acid extract exhibits antioxidant activity through ABTS free radical scavenging activity, DPPH radical scavenging activity, or FRAP activity, and nitric oxide, TNF-α, IL-6, or IL-8. The present invention was completed by confirming that it exhibits anti-inflammatory or anti-atopic activity by suppressing, exhibits moisturizing effect by enhancing hyaluronic acid, and exhibits anti-wrinkle effect by inhibiting elastase.

이에, 본 발명은 석산 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진용 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a cosmetic composition, pharmaceutical composition, or health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopy, anti-wrinkle, and moisturizing promotion, which contains lithic acid extract as an active ingredient.

본 발명에서 사용되는 용어, “석산(Lycorisradiata)”은 수선화과에 속하는 여러해살이 알뿌리식물로 꽃무릇이라도 불리우며, 본 발명에서는 잎 또는 뿌리를 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 석산 잎일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.The term “Lycoris radiata” used in the present invention refers to a perennial bulbous plant belonging to the Amaryllidaceae family. In the present invention, it may include leaves or roots, preferably Lycoris radiata, but is limited thereto. no.

본 발명에서 사용되는 용어, “추출물”은 물질의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. The term “extract” used in the present invention refers to an extract obtained by extraction treatment of a substance, a diluted or concentrated liquid of the extract, a dried product obtained by drying the extract, a crude product or purified product of the extract, or a mixture thereof, etc. This includes the extract itself and all formulations of the extract that can be formed using the extract.

본 발명의 추출물을 제조하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법, 침지 추출법, 고온 및 고압 증기 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있고, 물과 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C1 내지 C4의 저급 알코올과 이들의 혼합용매 등을 포함한 다양한 유기용매일 수 있으나, 에탄올을 이용하여 추출하는 것이 바람직하다.The method for producing the extract of the present invention is not particularly limited, and it can be extracted according to a method commonly used in the art. Non-limiting examples of the extraction method include hot water extraction, ultrasonic extraction, filtration, reflux extraction, immersion extraction, high temperature and high pressure steam extraction, etc., which can be performed alone or by combining two or more methods. there is. The type of extraction solvent used in the present invention is not particularly limited, and any solvent known in the art can be used, including water, C1 to C4 lower alcohols such as methanol, ethanol, butanol, and mixed solvents thereof, etc. It can be a variety of organic solvents, including , but it is preferable to extract using ethanol.

본 발명에서 사용되는 용어, "유효성분"은 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.As used in the present invention, the term “active ingredient” refers to an ingredient that can exhibit the desired activity alone or in combination with a carrier that is not active on its own.

본 발명에서 사용되는 용어, “항산화”는 산화의 억제를 의미하며, 체내에서 생성되는 활성산소를 제거하는 것을 의미하며, 구체적으로는 자유라디칼의 소거 활성을 통해 산화를 방지하는 것으로 이해될 수 있다.The term “antioxidant” used in the present invention refers to the inhibition of oxidation and removes oxygen radicals generated in the body. Specifically, it can be understood as preventing oxidation through free radical scavenging activity. .

본 발명에서 사용되는 용어, “항염증”은 염증의 억제를 의미하며, 본 발명에서는 구체적으로 세포에 대한 독성이 없는 농도범위에서 LPS 처리를 통한 염증을 유발하고 전염증성 물질인 nitric oxide(NO), tumor necrosis factor-α(TNF-α) 및 interleukin-6(IL-6) 생성 억제 활성을 나타내는 것으로 이해될 수 있다.The term “anti-inflammatory” used in the present invention refers to the inhibition of inflammation, and in the present invention, it specifically induces inflammation through LPS treatment in a concentration range that is not toxic to cells and removes nitric oxide (NO), a pro-inflammatory substance. , it can be understood as showing inhibitory activity on tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) production.

본 발명에서 사용되는 용어, “항아토피”는 가려움증 및 피부건조증을 주된 증상으로 하는 만성 염증성 피부질환인 아토피피부염을 억제하는 것으로, 아토피 관련 물질인 IL-6 및 IL-8 생성 억제 활성을 나타내는 것으로 이해될 수 있다.The term “anti-atopy” used in the present invention refers to the inhibition of atopic dermatitis, a chronic inflammatory skin disease whose main symptoms are itching and dry skin, and indicates the activity of suppressing the production of IL-6 and IL-8, substances related to atopy. It can be understood.

본 발명에서 사용되는 용어, “항주름”은 주름의 생성을 억제하는 것으로 진피층에 있는 콜라겐이나 히알루론산의 저감이 원인이 되는 주름 생성의 원인을 저해시키는 것으로 이해될 수 있다.The term “anti-wrinkle” used in the present invention can be understood as suppressing the formation of wrinkles, which is caused by a decrease in collagen or hyaluronic acid in the dermal layer.

본 발명에서 사용되는 용어, “보습 증진”은 피부의 수분을 유지하고 피부를 탄력있고 부드럽게 해주는 것으로써, 본 발명에서는 보습인자인 hyaluronic acid(HA) 생성 증진을 통해 피부의 수분감을 개선시켜주는 것으로 이해될 수 있다.The term “moisturizing enhancement” used in the present invention refers to maintaining moisture in the skin and making the skin elastic and soft. In the present invention, it refers to improving the moisture of the skin by enhancing the production of hyaluronic acid (HA), a moisturizing factor. It can be understood.

본 발명은 실시예를 통해 석산 추출물의 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진 용도를 규명하였다.Through examples, the present invention has investigated the antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle, and moisturizing-enhancing uses of quartz extract.

보다 구체적으로, 본 발명의 일실시예에서는 석산으로부터 조제된 추출물 4종에 대한 ABTS 및 DPPH 라디칼 소거 활성을 확인하였으며, 철이온을 이용한 환원력 평가 및 폴리페놀 함량 측정을 통해 석산 추출물의 항산화 활성을 확인하였다(실시예 3 참조).More specifically, in one embodiment of the present invention, the ABTS and DPPH radical scavenging activities of four types of extracts prepared from seoksan were confirmed, and the antioxidant activity of the seoksan extract was confirmed through evaluation of reducing power using iron ions and measurement of polyphenol content. (see Example 3).

또한, 본 발명의 다른 실시예에서는 염증성 물질인 NO, TNF-a, IL-6의 생성 억제 활성을 평가하여 석산 추출물의 항염증 활성을 확인하였으며(실시예 4 참조), 아토피 관련 물질인 IL-6, IL-8의 생성 억제 활성을 평가하여 석산 추출물의 항아토피 활성을 확인하였다(실시예 5 참조), 또한 히알루론산 생성 증진활성을 확인함으로써 석산 추출물의 보습 증진 활성을 확인하였다(실시예 6참조).In addition, in another example of the present invention, the anti-inflammatory activity of the lithic acid extract was confirmed by evaluating the activity of inhibiting the production of inflammatory substances NO, TNF-a, and IL-6 (see Example 4), and the atopy-related substances IL-6 6, the anti-atopic activity of the asperic acid extract was confirmed by evaluating the activity of suppressing the production of IL-8 (see Example 5). Additionally, the moisturizing enhancing activity of the asperic acid extract was confirmed by confirming the hyaluronic acid production enhancing activity (Example 6) reference).

또한, 본 발명의 다른 실시예에서는 엘라스틴 등을 분해하는 엘라스타제의 활성을 석산 추출물이 억제할 수 있음을 확인함으로써, 석산 추출물의 항주름 활성을 확인하였다(실시예 7 참조).In addition, in another example of the present invention, the anti-wrinkle activity of the quartz acid extract was confirmed by confirming that the quartz acid extract can inhibit the activity of elastase, which decomposes elastin, etc. (see Example 7).

상기 실시예로부터, 본 발명의 조성물이 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진 용도를 나타냄을 구체적인 실험을 통해 확인하였으며, 이에 본 발명에 따른 조성물은 다양한 용도의 화장품, 의약품 또는 건강기능식품 등에 활용될 수 있다.From the above examples, it was confirmed through specific experiments that the composition of the present invention exhibits anti-oxidation, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle, and moisturizing enhancing uses. Accordingly, the composition according to the present invention has various uses as cosmetics, medicine, or health functions. It can be used in food, etc.

본 발명에 따른 본 발명에 따른 조성물이 화장료 조성물의 형태로 이용되는 경우, 유효성분인 석산 추출물 이외에, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 효과를 상승 또는 보강시킬 수 있도록 알려진 화합물이나 천연 추출물을 더 포함할 수 있다. When the composition according to the present invention is used in the form of a cosmetic composition, in addition to the active ingredient, lithic acid extract, known compounds or natural substances can increase or reinforce the antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle and moisturizing effects. Additional extracts may be included.

한편, 본 발명의 조성물에 있어서, 그 유효성분은 다양한 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 활성을 나타낼 수 있는 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001중량 % 내지 99.99중량 % 범위 내에서 포함될 수 있다. 여기서 "유효량"이란 효과를 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될수 있다.Meanwhile, in the composition of the present invention, the active ingredient may be included in any amount (effective amount) depending on the use, formulation, purpose of formulation, etc. to exhibit various antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle and moisturizing activities. , a typical effective amount may be included within the range of 0.001% by weight to 99.99% by weight based on the total weight of the composition. Here, “effective amount” refers to the amount of active ingredient that can induce an effect. This effective amount can be determined experimentally within the scope of the ordinary ability of a person skilled in the art.

본 발명의 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 발명의 피부 국소제 혹은 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 연고, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 구체적으로, 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨 토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가질수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The cosmetic composition of the present invention can be manufactured in various forms. For example, the skin topical agent or cosmetic composition of the present invention can be manufactured in any formulation commonly prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion. It can be formulated as liquid, paste, gel, cream, ointment, lotion, powder, soap, cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, spray, etc., but is not limited thereto. Additionally, specifically, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutritional lotion, massage cream, nutritional cream, moisture cream, hand cream, essence, nutritional essence, pack, soap, shampoo, It may have a formulation selected from the group consisting of cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, emulsion, lipstick, makeup base, foundation, press powder, and loose powder, but is not limited thereto.

본 발명의 피부 국소제 혹은 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 피부 국소제제 혹은 화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서 "피부 국소제제 혹은 화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 본 발명의 피부 국소제제 혹은 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1중량 % 내지 약 99.99중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 5중량% 내지 약 99중량%로 포함될 수 있다.The skin topical agent or cosmetic composition of the present invention may contain a carrier acceptable in the skin topical agent or cosmetic formulation in addition to the active ingredient. Here, “acceptable carrier in topical skin preparations or cosmetic preparations” refers to compounds or compositions already known and used that can be included in cosmetic preparations or compounds or compositions to be developed in the future that exhibit toxicity or instability beyond what the human body can adapt to upon contact with the skin. Or it refers to something that is not irritating. The carrier may be included in the skin topical agent or cosmetic composition of the present invention in an amount of about 1% to about 99.99% by weight based on the total weight, preferably about 5% by weight to about 99% by weight of the composition.

그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 국소제제 혹은 화장료의 제조되는 전술한 바의 형태에 따라 또한 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안된다.However, since the above ratio varies depending on the form of the above-mentioned skin topical agent or cosmetic of the present invention in which it is manufactured, its specific application site (face or hands), its preferred application amount, etc., the above ratio can be adjusted in any way. It should not be construed as limiting the scope of the invention.

한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.Meanwhile, examples of the carrier include alcohol, oil, surfactant, fatty acid, silicone oil, wetting agent, moisturizing agent, viscosity modifier, emulsion, stabilizer, sunscreen, coloring agent, fragrance, etc. Alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, wetting agents, humectants, viscosity modifiers, emulsions, stabilizers, sunscreens, coloring agents, and fragrance compounds/compositions that can be used as the carrier are already known in the art. Therefore, a person skilled in the art can select and use the appropriate material/composition.

본 발명에 따른 조성물이 피부 외용제 형태로도 이용될 수 있고, "피부 외용제"는 일반적으로 피부 외용에 사용하는 물질 전반을 포함하는 포괄하는 개념으로, 피부 외용제 제형의 비제한적인 예로는 경고제(PLASTERS), 로션제(LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 연질, 경질 젤라틴 캅셀, 첩부제, 또는 서방화제제가 있다. 본 발명에 따른 피부 외용제는 상용되는 무기 또는 유기의 담체, 부형제 및 희석제를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 제제화된 비경구 투여제일 수 있다. 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 패취, 스프레이, 현탁제 및 유제로 이루어진 군에서 선택되는 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The composition according to the present invention can also be used in the form of an external skin preparation, and “external skin preparation” is an inclusive concept that generally includes all substances used for external skin application. Non-limiting examples of external skin preparation formulations include warning agents ( PLASTERS, LOTIONS, LINIMENTS, LIQUIDS AND SOLUTIONS, AEROSOLS, EXTRACTS, OINTMENTS, FLUIDEXTRACTS, EMULSIONS ), SUSPESIONS, CAPSULES, CREAMS, soft and hard gelatin capsules, patches, or sustained-release preparations. The topical skin preparation according to the present invention may be a parenteral preparation formulated in solid, semi-solid or liquid form by adding commonly used inorganic or organic carriers, excipients and diluents. The preparation for parenteral administration may be a transdermal dosage form selected from the group consisting of drops, ointments, lotions, gels, creams, patches, sprays, suspensions and emulsions, but is not limited thereto.

본 발명에 따른 조성물이 약학적 조성물의 형태로 이용되는 경우, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습을 개선하는 기능을 가질 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 개선을 위한 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸, 멸균 주사용액 등의 형태로 제형화가 가능하다.When the composition according to the present invention is used in the form of a pharmaceutical composition, it may have functions of improving antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle and moisturizing properties. The pharmaceutical composition of the present invention can be manufactured into tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, solutions for internal use, emulsions, syrups, and aerosols according to conventional methods for improving antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle, and moisturizing properties. It can be formulated in the form of sterilized injection solution, etc.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 약학적으로 유효한 양의 석산 추출물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이때, 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 폴리비닐 피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may contain a pharmaceutically effective amount of lithic acid extract alone or may contain one or more pharmaceutically acceptable carriers. At this time, pharmaceutically acceptable carriers are those commonly used in preparation, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia gum, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, and microcrystalline cellulose. , polyvinyl pyrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methyl hydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, etc., but are not limited thereto. In addition, in addition to the above ingredients, lubricants, wetting agents, sweeteners, flavoring agents, emulsifiers, suspending agents, preservatives, etc. may be additionally included.

본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여 (예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환축의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally (e.g., intravenously, subcutaneously, intraperitoneally, or topically) depending on the desired method, and the dosage is determined by the patient's condition and weight, and the severity of the disease. It varies depending on the degree, drug form, administration route and time, but can be appropriately selected by a person skilled in the art.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환축 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat the disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type of patient's disease, severity, activity of the drug, and the drug. It can be determined based on factors including sensitivity to, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, concurrently used drugs, and other factors well known in the field of medicine. The pharmaceutical composition according to the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve the maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art.

구체적으로 본 발명의 약학적 조성물의 유효량은 환축의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 kg 당 1 내지 500 mg을 매일 또는 격일 투여하거나, 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감 될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.Specifically, the effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the patient's age, gender, condition, body weight, absorption of the active ingredient in the body, inactivation rate and excretion rate, type of disease, and concomitant drug. In general, 1 to 500 mg per kg of body weight can be administered daily or every other day, or divided into 1 to 3 times per day. However, since it may increase or decrease depending on the route of administration, gender, weight, age, etc., the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.

본 발명에 따른 조성물이 건강기능식품 조성물의 형태로 이용되는 경우, 본 발명의 건강기능식품은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 활성 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.When the composition according to the present invention is used in the form of a health functional food composition, the health functional food of the present invention can be manufactured in various dosage forms, and unlike general drugs, it is made from food as a raw material and does not occur during long-term use of the drug. The health functional food of the present invention has the advantage of having no possible side effects and is highly portable, so it can be consumed as an adjuvant to enhance antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle, and moisturizing activities.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 특정보건용 식품, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학 및 의료효과가 높은 식품으로 제조될 수 있으며, 상기 식품은 경우에 따라, 기능성식품, 건강식품, 건강보조식품으로 혼용될 수 있으며, 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.The health functional food composition according to the present invention can be manufactured as food for specific health purposes and food with high medical and medical effects processed to efficiently exhibit bioregulatory functions in addition to food for nutritional purposes. The food may be, in some cases, functional food, It can be used interchangeably as health food and health supplement, and can be manufactured in various forms such as tablets, capsules, powder, granules, liquid, and pills to achieve useful effects.

본 발명의 건강기능식품은 식품 조성물에 통상적으로 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 디히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시 톨루엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.The health functional food of the present invention may contain additional ingredients that are commonly used in food compositions to improve smell, taste, vision, etc. For example, it may include vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, biotin, folate, pantothenic acid, etc. Additionally, it may contain minerals such as zinc (Zn), iron (Fe), calcium (Ca), chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn), and copper (Cu). Additionally, it may contain amino acids such as lysine, tryptophan, cysteine, and valine. In addition, preservatives (potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, sodium dihydroacetate, etc.), disinfectants (bleaching powder, high bleaching powder, sodium hypochlorite, etc.), antioxidants (butylhydroxyanisole (BHA), butylhydroxy toluene (BHT) ), etc.), colorants (tar colors, etc.), coloring agents (sodium nitrite, sodium nitrite, etc.), bleaching agents (sodium sulfite), seasonings (MSG monosodium glutamate, etc.), sweeteners (dulcine, cyclemate, saccharin, sodium, etc.), Food additives such as flavorings (vanillin, lactones, etc.), leavening agents (alum, D-potassium hydrogen tartrate, etc.), strengthening agents, emulsifiers, thickeners (grease), coating agents, gum base agents, anti-foam agents, solvents, improvers, etc. can be added. The additives can be selected depending on the type of food and used in an appropriate amount.

본 발명의 건강기능식품을 식품 첨가물로 사용할 경우, 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.When using the health functional food of the present invention as a food additive, it can be added as is or used together with other foods or food ingredients, and can be used appropriately according to conventional methods.

본 발명의 건강기능식품에 있어서, 석산 추출물의 함량은 특별히 제한되지 않으며, 투여 대상의 상태, 구체적인 병증의 종류, 진행 정도 등에 따라 다양하게 변경될 수 있다. 필요한 경우, 식품의 전체 함량으로도 포함될 수 있다.In the health functional food of the present invention, the content of lithic acid extract is not particularly limited and may vary depending on the condition of the administration subject, the type of specific disease, the degree of progression, etc. If necessary, it can also be included in the total amount of the food.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, these examples are for illustrative purposes only and the scope of the present invention is not limited to these examples.

[실시예][Example]

실시예 1. 실험방법Example 1. Experimental method

1-1. 석산 추출물 제조1-1. Preparation of lithic acid extract

영광군 농업기술센터로부터 전달받은 석산(생물) 원료는 피부 생리활성 평가를 위해 각각 잎과 뿌리를 분리한 다음 각각 아래의 방법과 같이 물과 70% 에탄올을 이용하여 각각의 추출물로 제조하였다.Seoksan (biological) raw materials delivered from Yeonggwang-gun Agricultural Technology Center were separated from leaves and roots to evaluate skin physiological activity, and then each extract was prepared using water and 70% ethanol as follows.

먼저, 석산의 열수추출은 분쇄된 석산 부위별(잎과 뿌리) 원료 50g에 각각 20배의 증류수를 첨가하여 decoction법을 통해 4시간 동안 진행하였다. 추출물은 여과용 거즈를 이용하여 잔사를 제거하였고, 감압농축기로 농축, 원심분리를 통한 잔사의 제거, 2차 여과 후 동결건조를 진행하여 수분이 모두 제거된 열수추출물(hot water extract. HW)로 조제되었다.First, the hot water extraction of lithic acid was carried out for 4 hours through the decoction method by adding 20 times the amount of distilled water to 50 g of pulverized lithic acid parts (leaves and roots). The extract was removed from residues using gauze for filtration, concentrated with a vacuum concentrator, removed from residues through centrifugation, and then freeze-dried after secondary filtration to become a hot water extract (HW) with all moisture removed. It was prepared.

다음으로, 석산의 에탄올추출은 분쇄된 석산 부위별(잎과 뿌리) 원료 50g에 각각 10배의 70% 에탄올을 첨가하여 reflux법(60℃)을 통해 4시간 동안 진행하였다. 추출물은 여과용 거즈를 이용하여 잔사를 제거하였고, 감압농축기로 농축, 원심분리를 통한 잔사의 제거, 2차 여과 후 동결건조를 진행하여 수분이 모두 제거된 에탄올추출물(ethanol extract. E)로 조제되었다.Next, ethanol extraction of silicic acid was carried out for 4 hours through the reflux method (60°C) by adding 10 times 70% ethanol to 50 g of pulverized silicic acid parts (leaves and roots). The extract was removed from residues using gauze for filtration, concentrated with a vacuum concentrator, removed from residues through centrifugation, and then subjected to secondary filtration and freeze-dried to prepare an ethanol extract (ethanol extract. E) from which all moisture was removed. It has been done.

1-2. 항산화 활성 평가 방법1-2. Antioxidant activity evaluation method

먼저, ABTS 자유라디칼 소거활성을 확인하기 위해 7.4 mM ABTS 용액과 2.6 mM potassium persulphate 용액을 12시간 이상 암실에 방치하여 청록색 라디칼을 형성시킨 다음, 734 nm에서 흡광도 값이 1.5가 되도록 희석하여 ABTS working solution으로 제조한 후 실험에 사용하였다. 이 용액에 농도별로 희석된 시료 10 μL를 가한 후 상온에서 30분간 반응시켜 반응액의 흡광도 변화를 734 nm에서 측정하였으며, 결과는 ABTS working solution에 대한 inhibitory activity(%)로 나타내었다. 한편, 농도별로 처리된 시료의 ABTS 라디칼 소거활성은 IC50 (Half maximal inhibitory concentration) 값으로 계산하였으며, 표준물질로 사용된 ascorbic acid와 IC50값을 비교함으로써 시료의 항산화 활성을 비교, 평가하였다.First, to confirm the ABTS free radical scavenging activity, 7.4mM ABTS solution and 2.6mM potassium persulphate solution were left in the dark for more than 12 hours to form blue-green radicals, and then diluted to have an absorbance value of 1.5 at 734 nm to create ABTS working solution. It was manufactured and used in experiments. 10 μL of sample diluted by concentration was added to this solution and reacted at room temperature for 30 minutes to measure the change in absorbance of the reaction solution at 734 nm. The results were expressed as inhibitory activity (%) relative to the ABTS working solution. Meanwhile, the ABTS radical scavenging activity of the samples treated at each concentration was calculated as the IC 50 (Half maximal inhibitory concentration) value, and the antioxidant activity of the samples was compared and evaluated by comparing the IC 50 value with ascorbic acid used as a standard substance.

- ABTS radical inhibitory activity (%) = (Blank O.D-Sample O.D)/(Blank O.D)Х100- ABTS radical inhibition activity (%) = (Blank O.D-Sample O.D)/(Blank O.D)Х100

- Blank O.D : 공시료액의 반응 후 흡광도- Blank O.D: Absorbance after reaction of blank sample solution

- Sample O.D : 시료액의 반응 후 흡광도- Sample O.D: Absorbance after reaction of sample solution

다음으로, DPPH 자유라디칼 소거활성을 확인하기 위해 0.2 mM DPPH 라디칼 용액에 시료 10 μL를 가한 후 상온에서 30분간 반응시켜 반응액의 흡광도 변화를 514 nm에서 측정하였다. 결과는 DPPH working solution에 대한 inhibitory activity(%)로 나타내었으며, 농도별로 처리된 시료의 DPPH 라디칼 소거활성은 IC50 (Half maximal inhibitory concentration) 값으로 계산하였다. DPPH 라디칼 소거활성은 ABTS와 마찬가지로 표준물질인 ascorbic acid와 IC50값을 비교함으로써 평가하였다.Next, to confirm the DPPH free radical scavenging activity, 10 μL of sample was added to 0.2 mM DPPH radical solution, reacted at room temperature for 30 minutes, and the change in absorbance of the reaction solution was measured at 514 nm. The results were expressed as inhibitory activity (%) relative to the DPPH working solution, and the DPPH radical scavenging activity of samples treated by concentration was calculated as the IC 50 (Half maximal inhibitory concentration) value. As with ABTS, DPPH radical scavenging activity was evaluated by comparing the IC 50 value with ascorbic acid, a standard substance.

- DPPH radical inhibitory activity (%)=(Blank O.D-Sample O.D)/(Blank O.D)Х100- DPPH radical inhibitory activity (%)=(Blank O.D-Sample O.D)/(Blank O.D)Х100

- Blank O.D : 공시료액의 반응 후 흡광도- Blank O.D: Absorbance after reaction of blank sample solution

- Sample O.D : 시료액의 반응 후 흡광도- Sample O.D: Absorbance after reaction of sample solution

다음으로, 철이온을 이용한 환원력 평가를 확인하기 위하여, Ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay는 ferrous tripyridyl triazine complex에 의해 ferric ion(Fe3+)이 ferrius ion(Fe2+)로 전환 되는 원리를 이용하여 시료 내의 금속이온 소거활성을 측정하는 방법이다. 300 mM acetate buffer와 10 mM 2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine(TPTZ), FeCl3 및 증류수를 10 : 1 : 1 : 1.2의 비율로 차례대로 섞어 FRAP reagent를 조제한 후, 이 용액 200 μL와 농도별 시료 10 μL를 상온에서 4분 동안 반응시켜 반응액의 흡광도 변화를 593 nm에서 측정하였다. 표준물질인 Iron(II) sulfate heptahydrate(FeSO4·10 H2O)를 사용하여 검량선을 작성하였으며, 시료의 FRAP 활성은 표준물질에 대한 mM ferrous sulfate equivalents (FSE)/mL로 나타내었다.Next, in order to confirm the evaluation of reducing power using iron ions, the Ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay uses the principle of converting ferric ions (Fe 3+ ) into ferrius ions (Fe 2+ ) by the ferrous tripyridyl triazine complex. This is a method of measuring the metal ion scavenging activity in a sample. FRAP reagent was prepared by sequentially mixing 300 mM acetate buffer, 10 mM 2,4,6-Tris(2-pyridyl)-s-triazine (TPTZ), FeCl 3 , and distilled water in a ratio of 10:1:1:1.2. , 200 μL of this solution and 10 μL of samples of each concentration were reacted at room temperature for 4 minutes, and the change in absorbance of the reaction solution was measured at 593 nm. A calibration curve was prepared using the standard material, Iron(II) sulfate heptahydrate (FeSO 4 ·10 H 2 O), and the FRAP activity of the sample was expressed as mM ferrous sulfate equivalents (FSE)/mL relative to the standard material.

다음으로, Folin-Ciocalteu법을 이용한 총 폴리페놀 함량 측정하기 위하여, 시료 10 μL에 알칼리 조건을 형성하기 위해 2% Na2CO3을 10 μL를 가한 후 3분간 반응시키고 50%의 Folin-Ciocalteus' reagent 200 μL를 첨가해 30분간 반응시킨 다음, 750 nm에서 측정하였다. 표준물질로 gallic acid를 사용하여 검량선을 작성하였으며, 시료의 총 폴리페놀 화합물의 함량은 농도(mg/g)로 나타내었다.Next, to measure the total polyphenol content using the Folin-Ciocalteu method, 10 μL of 2% Na 2 CO 3 was added to 10 μL of the sample to create alkaline conditions, followed by reaction for 3 minutes and 50% Folin-Ciocalteus' solution. 200 μL of reagent was added and reacted for 30 minutes, then measured at 750 nm. A calibration curve was prepared using gallic acid as a standard material, and the total polyphenol compound content of the sample was expressed in concentration (mg/g).

1-3. 항염증 활성 평가 방법1-3. Methods for assessing anti-inflammatory activity

먼저, RAW 264.7 세포에 대한 시료독성 평가를 위해 Mouse macrophage cell line인 RAW 264.7 세포는 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)에서 구입하였으며, 10% FBS와 1% P/S이 첨가된 DMEM 배지(이하 RAW 배양배지)를 사용하였으며, 37℃, 5% CO2 조건이 유지되는 배양기에서 2~3일에 한번씩 계대배양하며 실험에 사용하였다. RAW 264.7 세포는 4×104 cells/well 또는 2×105 cells/well로 96 well plate에 plating하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양하여 세포를 안정화시켰다. 세포 상등액을 모두 제거한 뒤, FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지 160 μL와 적당히 희석된 시료 20 μL를 첨가하였으며, 30분 후 염증유발 물질로 LPS(1 μg/mL)를 가한 뒤 24시간동안 재배양하였다. 이후 상등액은 다시 제거하고 0.1 mg/mL의 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide(MTT) 용액 100 μL를 첨가한 뒤, 30분동안 배양기에서 배양하였다. MTT 용액을 제거한 다음, DMSO 100 μL를 가하여 생성된 pigment를 용해시켜 550 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 시료에 의한 RAW 264.7 세포의 독성은 무처리구에 대한 세포생존율(cell viability, %)로 나타내었다.First, to evaluate sample toxicity for RAW 264.7 cells, RAW 264.7 cells, a mouse macrophage cell line, were purchased from the Korean Cell Line Bank (KCLB) and cultured in DMEM medium supplemented with 10% FBS and 1% P/S. (hereinafter referred to as RAW culture medium) was used, and subcultured once every 2 to 3 days in an incubator maintained at 37°C and 5% CO 2 and used in the experiment. RAW 264.7 cells were plated on a 96 well plate at 4×10 4 cells/well or 2×10 5 cells/well and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37°C for 24 hours to stabilize the cells. After removing all cell supernatants, 160 μL of DMEM medium without FBS and 20 μL of appropriately diluted samples were added. After 30 minutes, LPS (1 μg/mL) was added as an inflammatory substance and re-cultured for 24 hours. . Afterwards, the supernatant was removed again, 100 μL of 0.1 mg/mL 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide (MTT) solution was added, and cultured in an incubator for 30 minutes. After removing the MTT solution, 100 μL of DMSO was added to dissolve the resulting pigment and the absorbance was measured at 550 nm. The toxicity of RAW 264.7 cells by the sample was expressed as cell viability (%) relative to the untreated group.

다음으로, ELISA를 이용한 TNF-α 및 IL-6 억제활성 평가를 위해 RAW 264.7 세포는 4×104 cells/well로 96 well plate에 plating하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양하여 세포를 안정화시켰다. 세포 상등액을 모두 제거한 뒤, FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지 160 μL와 적당히 희석된 시료 20 μL를 첨가하였으며, 30분 후 염증유발 물질로 LPS(1 μg/mL)를 가한 뒤 24시간 동안 재배양하였다. 세포배양 상등액으로 유리된 염증성 사이토카인인 TNF-α 및 IL-6의 함량은 sandwich ELISA법으로 측정하여 제조사에서 제공하는 lyophilized recombinant protein을 통해 작성된 표준곡선을 통해 생성량(pg/mL)으로 계산되었다. 한편, 양성대조군(positive control, PC)으로 시료 대신 dexamethasone (20 μg/mL)을 처리하였으며, 시료와의 TNF-α 및 IL-6 억제활성 비교에 이용되었다.Next, to evaluate TNF-α and IL-6 inhibitory activity using ELISA, RAW 264.7 cells were plated on a 96 well plate at 4 × 10 4 cells/well and cultured in a 37°C, 5% CO 2 incubator for 24 hours. was stabilized. After removing all cell supernatants, 160 μL of DMEM medium without FBS and 20 μL of appropriately diluted samples were added. After 30 minutes, LPS (1 μg/mL) was added as an inflammatory substance and recultured for 24 hours. . The content of inflammatory cytokines TNF-α and IL-6 released in the cell culture supernatant was measured by sandwich ELISA method and calculated as production amount (pg/mL) through a standard curve created using lyophilized recombinant protein provided by the manufacturer. Meanwhile, as a positive control (PC), dexamethasone (20 μg/mL) was treated instead of the sample, and was used to compare the inhibitory activity of TNF-α and IL-6 with the sample.

다음으로, Griess법을 이용한 산화질소 억제활성 평가를 위해 RAW 264.7 세포는 4×104 cells/well로 96 well plate에 plating하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양하여 세포를 안정화시켰다. 세포 상등액을 모두 제거한 뒤, FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지 160 μL와 적당히 희석된 시료 20 μL를 첨가하였으며, 30분 후 염증유발 물질로 LPS(1 μg/mL)를 가한 뒤 24시간 동안 재배양하였다. 세포배양 상등액으로부터 유리된 NO의 함량은 Griess법으로 측정하였으며, sodium nitrite(NaNO2)를 통해 μM로 정량되었다. 한편, 양성대조군(positive control, PC)으로 시료 대신 L-NAME(50 μg/mL)를 처리하였으며, 시료와의 산화질소 억제활성 비교에 이용되었다.Next, to evaluate the nitric oxide inhibitory activity using the Griess method, RAW 264.7 cells were plated at 4 × 10 4 cells/well in a 96 well plate and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37°C for 24 hours to stabilize the cells. After removing all cell supernatants, 160 μL of DMEM medium without FBS and 20 μL of appropriately diluted samples were added. After 30 minutes, LPS (1 μg/mL) was added as an inflammatory substance and recultured for 24 hours. . The content of NO released from the cell culture supernatant was measured by the Griess method and quantified in μM using sodium nitrite (NaNO 2 ). Meanwhile, as a positive control (PC), L-NAME (50 μg/mL) was treated instead of the sample, and was used to compare the nitric oxide inhibitory activity with the sample.

1-4. 항아토피 활성 평가 방법1-4. Anti-atopic activity evaluation method

먼저, HaCaT 세포에 대한 시료독성 평가를 위해, 항아토피 활성 평가를 위한 HaCaT human skin keratinocyte cell은 고려대학교 기능성식품 연구실에서 분양받아 실험에 이용하였다. 세포는 10% FBS와 1% P/S가 첨가된 DMEM 배지를 사용하였으며, 37℃, 5% CO2 조건이 유지되는 배양기에서 2~3일에 한번씩 계대배양하며 실험에 사용하였다.First, to evaluate the sample toxicity of HaCaT cells, HaCaT human skin keratinocyte cells for evaluating anti-atopic activity were purchased from the Korea University Functional Food Laboratory and used in experiments. Cells used DMEM medium supplemented with 10% FBS and 1% P/S, and were subcultured once every 2 to 3 days in an incubator maintained at 37°C and 5% CO 2 and used in experiments.

HaCaT 세포는 2×104 cells/well로 96-well plate에 plating하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하여 세포를 안정화시켰으며, 24시간 후 배양 상등액은 모두 제거한 다음 FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지 200 μL를 넣고 24시간 동안 배양하였다. 이후 배양 상등액은 모두 제거하고, FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지 160 μL와 적당한 농도로 희석된 시료 20 μL를 첨가한 뒤 재배양하였으며, 30분 후 아토피 유발물질로 TNF-α 및 IFN-γ(T+I)를 각각 10 ng/mL씩 첨가한 다음 24시간동안 배양하였다. 시료에 의한 세포독성의 평가는 상기 언급한 바와 같이 MTT법으로 측정하였으며, 시료 무처리구에 대한 세포생존율(cell viability, %)로 나타내었다. 한편, 양성대조군(positive control, PC)으로 시료 대신 dexamethasone (20 μg/mL)을 처리하였으며, 시료와의 IL-6 및 IL-8 억제활성 비교에 이용되었다.HaCaT cells were plated on a 96-well plate at 2×10 4 cells/well and cultured in a 37°C, 5% CO 2 incubator to stabilize the cells. After 24 hours, all culture supernatants were removed and then cultured in DMEM without FBS. 200 μL of medium was added and cultured for 24 hours. Afterwards, all culture supernatants were removed, 160 μL of DMEM medium without FBS and 20 μL of sample diluted to an appropriate concentration were added and re-cultured. After 30 minutes, TNF-α and IFN-γ (T +I) was added at 10 ng/mL each and then cultured for 24 hours. Evaluation of cytotoxicity by the sample was measured by the MTT method as mentioned above, and was expressed as cell viability (%) relative to the untreated sample. Meanwhile, as a positive control (PC), dexamethasone (20 μg/mL) was treated instead of the sample, and was used to compare the IL-6 and IL-8 inhibitory activity with the sample.

다음으로, ELISA를 이용한 IL-6 및 IL-8 억제활성 평가를 위해 HaCaT 세포는 2×104 cells/well로 96-well plate에 plating하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하여 세포를 안정화시켰으며, 24시간 후 배양 상등액은 모두 제거한 다음 FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지 200 μL를 넣고 24시간동안 배양하였다. Next, to evaluate IL-6 and IL-8 inhibitory activity using ELISA, HaCaT cells were plated on a 96-well plate at 2×10 4 cells/well and cultured in a 37°C, 5% CO 2 incubator to stabilize the cells. After 24 hours, all culture supernatants were removed, then 200 μL of DMEM medium without FBS was added and cultured for 24 hours.

이후 배양 상등액은 모두 제거하고, FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지 160 μL와 적당한 농도로 희석된 시료 20 μL를 첨가한 뒤 재배양하였으며, 30분 후 아토피 유발물질로 TNF-α 및 IFN-γ(T+I)를 각각 10 ng/mL씩 첨가한 다음 24시간 동안 배양하였다. 배양 상등액을 회수하고 상등액으로 유리된 사이토카인인 IL-6 및 IL-8의 함량은 R&D Systems사의 ELISA set를 통해 측정하였으며, 제조사에서 제공하는 recombinant protein을 통해 작성된 표준곡선을 이용하여 생성량(pg/mL)으로 계산되었다. 한편, 양성대조군(positive control, PC)으로 시료 대신 dexamethasone (20 μg/mL)을 처리하였으며, 시료와의 IL-6 억제활성 비교에 이용되었다.Afterwards, all culture supernatants were removed, 160 μL of DMEM medium without FBS and 20 μL of sample diluted to an appropriate concentration were added and re-cultured. After 30 minutes, TNF-α and IFN-γ (T +I) was added at 10 ng/mL each and then cultured for 24 hours. The culture supernatant was recovered, and the contents of IL-6 and IL-8, which are cytokines released into the supernatant, were measured using R&D Systems' ELISA set, and the production amount (pg/ mL) was calculated. Meanwhile, as a positive control (PC), dexamethasone (20 μg/mL) was treated instead of the sample, and was used to compare the IL-6 inhibitory activity with the sample.

1-5. 보습 효능 평가 방법1-5. How to evaluate moisturizing efficacy

먼저, ELISA법을 이용한 히알루론산 생성량 평가를 위해 HaCaT 세포는 2×104 cells/well로 96-well plate에 plating하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하여 24시간 동안 세포를 안정화시켰으며, 이후 배양 상등액은 모두 제거한 다음 FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지 180 μL와 적당한 농도로 희석된 시료 20 μL를 첨가한 뒤 재배양하였다. 세포배양 상등액으로 유리된 히알루론산(HA)의 함량은 R&D Systems사의 ELISA set를 통해 측정하였으며, 제공된 standard material을 통해 작성된 표준곡선을 통해 함량(ng/mL)으로 계산되었다.First, to evaluate hyaluronic acid production using ELISA, HaCaT cells were plated on a 96-well plate at 2×10 4 cells/well and cultured in an incubator at 37°C with 5% CO 2 to stabilize the cells for 24 hours. Afterwards, all culture supernatants were removed, and then 180 μL of DMEM medium without FBS and 20 μL of samples diluted to an appropriate concentration were added and re-cultured. The content of hyaluronic acid (HA) released into the cell culture supernatant was measured using an ELISA set from R&D Systems, and the content (ng/mL) was calculated using a standard curve created using the provided standard material.

1-6. 통계 처리1-6. statistical processing

실험결과는 평균과 표준편차(standard deviation)를 산출하고 평균치±SD로 나타내었으며, 실험결과에 대한 통계분석은 SPSS 통계프로그램(Statistical Package for the Social Science, Ver. 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용한 Student's t-test로 계산하여 각각 p<0.05, p<0.01 및 p<0.001 수준에서 유의성을 검정하였다.The experimental results were calculated by calculating the mean and standard deviation and expressed as mean ± SD. Statistical analysis of the experimental results was performed using the SPSS statistical program (Statistical Package for the Social Science, Ver. 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL). , USA) and tested for significance at the p<0.05, p<0.01, and p<0.001 levels, respectively.

실시예 2. 석산 추출물의 용해도 평가Example 2. Solubility evaluation of lithic acid extract

실시예 1-1에서 조제된 석산 추출물을 도 1에 나타낸 바와 같이 ① 뿌리 열수추출물(Lycoris radiata Root Hot Water extract, LR-R-HW), ② 뿌리 70% 에탄올추출물(Lycoris radiata Root Ethanol extract, LR-R-E), ③ 잎 열수추출물(Lycoris radiata Leaf Hot Water extract, LR-L-HW) 및 ④ 잎 70% 에탄올추출물(Lycoris radiata Leaf Ethanol extract, LR-L-E)로 각각 명명하였다.As shown in Figure 1, the lithic acid extract prepared in Example 1-1 was ① Lycoris radiata Root Hot Water extract (LR-R-HW), ② 70% root ethanol extract (Lycoris radiata Root Ethanol extract, LR) -R-E), ③ leaf hot water extract (Lycoris radiata Leaf Hot Water extract, LR-L-HW), and ④ leaf 70% ethanol extract (Lycoris radiata Leaf Ethanol extract, LR-L-E).

조제한 4종의 추출물을 대상으로 물과 유기용매에 대한 용해도를 평가한 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 잎 열수추출물(LR-L-HW)은 물에 대한 용해도가 우수한 반면, 뿌리 열수추출물(LR-R-HW), 뿌리 에탄올추출물(LR-R-E), 잎 에탄올추출물(LR-L-E)은 모두 DMSO에 대한 용해도가 우수한 것을 확인할 수 있었다.As a result of evaluating the solubility in water and organic solvents of the four types of extracts prepared, as shown in Figure 2, the leaf hot water extract (LR-L-HW) had excellent water solubility, while the root hot water extract (LR -R-HW), root ethanol extract (LR-R-E), and leaf ethanol extract (LR-L-E) were all confirmed to have excellent solubility in DMSO.

실시예 3. 석산 추출물 처리에 따른 항산화 활성 확인Example 3. Confirmation of antioxidant activity according to treatment with lithic acid extract

3-1. 자유라디칼 소거 활성3-1. Free radical scavenging activity

석산으로부터 조제된 추출물 4종에 대한 라디칼 소거활성은 도 3 및 4에 나타낸 바와 같이 1.25~5 mg/mL의 농도범위에서 평가되었으며, 모든 시료들에서 농도-의존적인 경향으로 활성이 증가되는 것을 확인하였다.The radical scavenging activity of four types of extracts prepared from seoksan was evaluated in the concentration range of 1.25 to 5 mg/mL, as shown in Figures 3 and 4, and it was confirmed that the activity increased in a concentration-dependent trend in all samples. did.

이에 더하여, 항산화 활성의 상대적인 비교하기 위하여 50%의 억제활성을 나타내는 농도인 IC50(half maximal inhibitory concentration)을 계산한 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 ABTS 라디칼 소거활성은 잎 에탄올추출물(5.8 mg/mL) > 잎 열수추출물(6.6 mg/mL) > 뿌리 열수추출물(23.0 mg/mL) > 뿌리 에탄올추출물(23.3 mg/mL) 순으로 확인되었다.In addition, in order to compare the relative antioxidant activity, IC 50 (half maximal inhibitory concentration), which is the concentration showing 50% inhibitory activity, was calculated. As shown in Figure 3, ABTS radical scavenging activity was found to be higher than that of the leaf ethanol extract (5.8 mg/ mL) > leaf hot water extract (6.6 mg/mL) > root hot water extract (23.0 mg/mL) > root ethanol extract (23.3 mg/mL).

나아가, DPPH 라디칼 소거활성 결과도 ABTS와 마찬가지로 잎의 에탄올추출물(4.8 mg/mL)과 열수추출물(6.8 mg/mL)에서 우수한 활성을 나타낸 반면, 뿌리의 열수추출물(n.d.) 및 에탄올추출물(n.d.)에서는 IC50값이 도출되지 않았으며, 이는 석산 뿌리의 경우 항산화 활성이 상대적으로 미약한 것을 확인하였다.Furthermore, the results of DPPH radical scavenging activity showed excellent activity in the ethanol extract of leaves (4.8 mg/mL) and hot water extract (6.8 mg/mL), similar to ABTS, while the hot water extract of roots (nd) and ethanol extract (nd) No IC 50 value was derived, confirming that the antioxidant activity of Aspergillus root was relatively weak.

3-2. 금속이온을 이용한 환원력 평가 및 총 폴리페놀 함량 측정3-2. Evaluation of reducing power using metal ions and measurement of total polyphenol content

먼저, 철이온을 이용한 환원력 시험에서 석산 추출물 4종은 1.25~5 mg/mL의 농도범위에서 평가되었으며, 도 5에 나타낸 바와 같이 농도-의존적인 활성증가를 보여주었다. 또한, 대조물질인 ferrous sulfate (FeSO4)와 비교했을 때, FRAP 활성은 잎 에탄올추출물(156.7 mM/g) > 잎 열수추출물(110.7 mM/g) > 뿌리 에탄올추출물(16.2 mM/g) > 뿌리 열수추출물(8.8 mM/g) 순으로 확인되었다.First, in a reducing power test using iron ions, four types of lithic acid extracts were evaluated in the concentration range of 1.25 to 5 mg/mL, and showed a concentration-dependent increase in activity as shown in Figure 5. Additionally, compared to the control material ferrous sulfate (FeSO 4 ), FRAP activity was as follows: leaf ethanol extract (156.7 mM/g) > leaf hot water extract (110.7 mM/g) > root ethanol extract (16.2 mM/g) > root. It was confirmed in the order of hot water extract (8.8 mM/g).

이에 더하여, 일반적으로 항산화 활성에 우수하다고 알려진 폴리페놀의 함량을 측정한 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이 표준물질로 사용된 gallic acid와 비교했을 때, 석산추출물 4종의 총 폴리페놀 함량은 잎 에탄올추출물(31.4 mg/g; 3.1%) > 뿌리 열수추출물(27.9 mg/g; 2.8%) > 잎 열수추출물(15.6 mg/g; 1.6%) > 뿌리 에탄올추출물(6.0 mg/g; 0.6%) 순으로 높게 나타나는 것을 확인하였다.In addition, as a result of measuring the content of polyphenols, which are generally known to be excellent in antioxidant activity, compared to gallic acid used as a standard material as shown in FIG. extract (31.4 mg/g; 3.1%) > root hot water extract (27.9 mg/g; 2.8%) > leaf hot water extract (15.6 mg/g; 1.6%) > root ethanol extract (6.0 mg/g; 0.6%). It was confirmed that it appeared high.

실시예 4. 석산 추출물 처리에 따른 항염증 활성 확인Example 4. Confirmation of anti-inflammatory activity according to treatment with lithic acid extract

4-1. RAW 264.7 세포에서 시료 독성 평가 결과4-1. Sample toxicity assessment results in RAW 264.7 cells

시료 5종의 면역증진 활성을 평가하기 전에 RAW 264.7 세포주를 이용하여 세포독성을 평가하고자 하였는데, 음성대조군(negative control, NC) 대비 80% 이상의 세포생존율을 나타내는 시료에 대해서는 독성이 없을 확인하였다. 또한, 석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위에서 시료독성을 평가한 결과, 도 7a 및 7b에 나타낸 바와 같이 LPS 대조군과 비교하여 뿌리 열수추출물 104.9~110.5%, 잎 열수추출물 103.5~117.0%, 뿌리 에탄올추출물 105.6~117.8%, 잎 에탄올추출물 109.9~128.8%의 세포생존율을 나타내어 모든 시료는 시험농도 내에서 세포독성이 없는 것을 확인하였다.Before evaluating the immune-enhancing activity of the five samples, we attempted to evaluate cytotoxicity using the RAW 264.7 cell line. It was confirmed that samples showing a cell viability of more than 80% compared to the negative control (NC) were not toxic. In addition, as a result of evaluating the sample toxicity of four types of lithic acid extract in the concentration range of 1.25 to 10 μg/mL, compared to the LPS control group, as shown in Figures 7a and 7b, the root hot water extract was 104.9 to 110.5% and the leaf hot water extract was 103.5 to 103.5%. Cell viability was 117.0%, root ethanol extract 105.6~117.8%, and leaf ethanol extract 109.9~128.8%, confirming that all samples were not cytotoxic within the test concentration.

4-2. 염증성 물질 생성 억제 활성 확인4-2. Confirmation of activity to inhibit the production of inflammatory substances

세포에 대한 독성이 없는 농도범위에서 LPS 처리를 통한 염증을 유발하고 전염증성 물질인 nitric oxide(NO), tumor necrosis factor-α(TNF-α) 및 interleukin-6(IL-6) 생성 억제활성 평가 결과는 각각 도 8 내지 10에 나타내었다. Inducing inflammation through LPS treatment in a concentration range that is not toxic to cells and evaluating the activity of suppressing the production of pro-inflammatory substances such as nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-α (TNF-α), and interleukin-6 (IL-6) The results are shown in Figures 8 to 10, respectively.

먼저, 도 8a 및 8b에 나타낸 바와 같이 NO 억제활성 평가 결과에서, LPS 처리군(LPS)은 23.4 μM의 NO 생성을 나타내었으며, 이는 무처리군(negative control, NC; 2.1 μM)과 비교하여 약 11.0배의 통계적으로 유의한(p<0.001) 증가로 확인되었다. NO 억제효능이 우수한 것으로 이미 알려진 L-NAME (50 μM)를 처리한 양성대조군(positive control, PC)에서는 7.4 μM의 NO 생성을 나타내었으며, 이는 LPS 대조군 대비 약 75%의 통계적으로 유의한(p<0.001) 억제활성으로 확인되었다. 또한, 모든 석산 추출물은 1.25~10 μg/mL의 농도범위에서 통계학적으로 유의한 수준의 NO 억제효과를 나타냈는데, 잎 에탄올추출물(21.9~98.3% 억제) ≒ 잎 열수추출물(23.2~97.2% 억제) > 뿌리 에탄올추출물(11.2~94.6% 억제) > 뿌리 열수추출물(2.6~74.9% 억제) 순으로 NO 억제활성이 우수한 것을 확인함으로써, 결론적으로 4종의 석산 추출물 중에서 잎의 에탄올추출물(LR-L-E)에서 가장 우수한 NO 억제활성을 확인할 수 있었다.First, as shown in Figures 8a and 8b, the NO inhibition activity evaluation results showed that the LPS-treated group (LPS) produced 23.4 μM of NO, which was about 2.1 μM compared to the untreated group (negative control, NC; 2.1 μM). It was confirmed to be a statistically significant (p<0.001) increase of 11.0 times. The positive control (PC) treated with L-NAME (50 μM), which is already known to have excellent NO inhibition effect, showed NO production of 7.4 μM, which was statistically significant (p <0.001) was confirmed to have inhibitory activity. In addition, all lithic acid extracts showed a statistically significant NO inhibition effect in the concentration range of 1.25 to 10 μg/mL, with leaf ethanol extract (21.9 to 98.3% inhibition) ≒ leaf hot water extract (23.2 to 97.2% inhibition) ) > Root ethanol extract (11.2~94.6% inhibition) > Root hot water extract (2.6~74.9% inhibition) was confirmed to have excellent NO suppression activity in the order of ), the best NO inhibitory activity was confirmed.

이에 더하여, 도 9a 및 9b에 나타낸 바와 같이 TNF-α 억제활성 평가 결과에서, LPS 처리군은 75.4~74.8 ng/mL의 TNF-α 생성을 나타내었는데, 이는 NC 대조군(0.04 ng/mL)과 비교하여 약 1922배의 통계적으로 유의한(p<0.001) 증가로 확인되었다. 20 μg/mL의 dexamethasone을 처리한 PC 대조군에서는 42.2 ng/mL의 TNF-α 생성을 나타내어 LPS 대조군 대비 약 43.6~44.0%의 통계적으로 유의한(p<0.001) 억제활성으로 확인되었다. 또한,모든 석산 추출물은 농도-의존적인 경향으로 TNF-α 억제활성이 증가하는 것으로 나타났는데, 잎 에탄올추출물(13.5~44.1% 억제) > 잎 열수추출물(16.0~34.3% 억제) > 뿌리 에탄올추출물(7.7~30.1% 억제) > 뿌리 열수추출물(9.0~17.2% 억제) 순으로 TNF-α 억제활성이 우수한 것으로 평가되었으며, 결론적으로 4종의 석산 추출물 중에서 잎의 에탄올추출물(LR-L-E)에서 가장 우수한 TNF-α 억제활성을 확인할 수 있었다.In addition, as shown in Figures 9a and 9b, the results of evaluating the TNF-α inhibitory activity showed that the LPS-treated group produced 75.4 to 74.8 ng/mL of TNF-α, compared to the NC control group (0.04 ng/mL). This was confirmed to be a statistically significant (p<0.001) increase of approximately 1922 times. The PC control group treated with 20 μg/mL of dexamethasone produced 42.2 ng/mL of TNF-α, which was confirmed to have a statistically significant (p<0.001) inhibitory activity of about 43.6-44.0% compared to the LPS control group. In addition, all lithic acid extracts showed an increase in TNF-α inhibitory activity in a concentration-dependent manner, as follows: leaf ethanol extract (13.5-44.1% inhibition) > leaf hot water extract (16.0-34.3% inhibition) > root ethanol extract ( The TNF-α inhibitory activity was evaluated to be excellent in the order of 7.7~30.1% inhibition) > root hot water extract (9.0~17.2% inhibition), and in conclusion, among the four types of lithic acid extracts, the leaf ethanol extract (LR-L-E) was the best. TNF-α inhibitory activity was confirmed.

나아가, 도 10a 및 10b에 나타낸 바와 같이 IL-6 억제활성 평가 결과에서, LPS 처리군은 1012.7~1425.1 pg/mL의 IL-6 생성을 나타냈는데, 이는 NC 대조군(23.5 pg/mL)과 비교하여 약 43.1~60.7배의 통계적으로 유의한(p<0.05 또는 p<0.01) 증가로 확인되었다. 20 μg/mL의 dexamethasone을 처리한 PC 대조군에서는 547.0 pg/mL의 IL-6 생성을 나타내어 LPS 대조군 대비 약 47.1~62.6%의 통계적으로 유의한(p<0.05 또는 p<0.001) 억제활성으로 확인되었다. 석산의 열수추출물들(뿌리와 잎)에서는 모든 농도범위에서 LPS 대조군 대비 통계적으로 유의한 IL-6 억제활성을 나타내지 않았다(p>0.05). 석산의 뿌리 에탄올추출물에서는 2.5~10 μg/mL의 농도범위에서 LPS 대조군 대비 19.7~28.3%의 유의한(p<0.05) IL-6 억제활성이 확인되었고, 잎의 에탄올추출물에서는 1.25~10 μg/mL의 범위에서 19.2~31.5%의 유의한(p<0.05 또는 p<0.01) IL-6 억제활성을 나타내어 잎의 에탄올추출물이 뿌리 에탄올추출물에 비해 상대적으로 우수한 활성을 가지는 것으로 확인되었으며, 결론적으로 4종의 석산 추출물 중에서 잎의 에탄올추출물(LR-L-E)에서 가장 우수한 IL-6 억제활성을 확인할 수 있었다.Furthermore, as shown in Figures 10a and 10b, in the results of evaluating IL-6 inhibitory activity, the LPS treatment group showed IL-6 production of 1012.7 to 1425.1 pg/mL, compared to the NC control group (23.5 pg/mL). It was confirmed to be a statistically significant (p<0.05 or p<0.01) increase of approximately 43.1 to 60.7 times. The PC control group treated with 20 μg/mL of dexamethasone showed IL-6 production of 547.0 pg/mL, which was confirmed to have a statistically significant (p<0.05 or p<0.001) inhibitory activity of about 47.1~62.6% compared to the LPS control group. . The hot water extracts (roots and leaves) of Seoksan did not show statistically significant IL-6 inhibitory activity compared to the LPS control group in all concentration ranges (p>0.05). In the ethanol extract of Seoksan root, a significant (p<0.05) IL-6 inhibitory activity of 19.7~28.3% compared to the LPS control was confirmed in the concentration range of 2.5~10 μg/mL, and in the ethanol extract of leaves, 1.25~10 μg/mL. It was confirmed that the ethanol extract of the leaf had a relatively superior activity compared to the ethanol extract of the root as it showed a significant (p<0.05 or p<0.01) IL-6 inhibitory activity in the range of mL, and in conclusion, 4 Among the lithic acid extracts of the species, the ethanol extract of the leaves (LR-L-E) was found to have the best IL-6 inhibitory activity.

실시예 5. 석산 추출물 처리에 따른 항아토피 활성 확인Example 5. Confirmation of anti-atopic activity according to treatment with lithic acid extract

5-1. HaCaT 세포에서 시료독성 평가 결과5-1. Sample toxicity evaluation results in HaCaT cells

석산추출물 4종을 1.25~10 μg/mL의 농도범위에서 시료독성을 평가한 결과, 도 11a 및 11b에 나타낸 바와 같이 TNF-α+IFN-γ (T+I) 처리군과 비교하여 뿌리 열수추출물 100.9~108.6%, 잎 열수추출물 103.2~123.8%, 뿌리 에탄올추출물 105.9~121.8%, 잎 에탄올추출물 105.3~121.8%의 세포생존율을 나타내어 모든 시료에서 독성이 없는 것으로 평가되었다.As a result of evaluating the sample toxicity of four types of lithic acid extract in the concentration range of 1.25 to 10 μg/mL, as shown in Figures 11a and 11b, compared to the TNF-α+IFN-γ (T+I) treatment group, the root hot water extract All samples were evaluated as non-toxic, with cell survival rates of 100.9~108.6%, leaf hot water extract 103.2~123.8%, root ethanol extract 105.9~121.8%, and leaf ethanol extract 105.3~121.8%.

5-2. 아토피 피부염 관련 물질의 억제 활성 확인5-2. Confirmation of inhibitory activity of atopic dermatitis-related substances

세포에 대한 독성이 없는 농도범위에서 T+I 처리를 통한 아토피를 유발하고 아토피 관련 물질인 IL-6 및 IL-8 생성 억제활성 평가 결과는 각각 도 12 및 13에 나타내었다.The results of evaluating the activity of inducing atopy and suppressing the production of IL-6 and IL-8, atopy-related substances, through T+I treatment in a concentration range that is not toxic to cells are shown in Figures 12 and 13, respectively.

먼저, 도 12 a 및 12b에 나타낸 바와 같이 IL-6 억제활성 평가 결과에서, T+I 처리군은 1779.3~1810.2 pg/mL의 IL-6 생성을 나타내어 NC 대조군(113.8 pg/mL) 대비 약 15.6~15.8배의 통계적으로 유의한(p<0.001) 증가를 보였다. 또한, 20 μg/mL의 dexamethasone을 처리한 PC 대조군에서는 1121.9 pg/mL의 IL-6 생성을 나타내어 T+I 대조군 대비 약 39.5~40.6%의 통계적으로 유의한(p<0.001) 억제활성으로 확인되었다. 석산 열수추출물의 경우, 뿌리는 모든 농도범위에서 T+I 처리군 대비 통계적으로 유의한 IL-6 억제활성을 나타내지 않았지만(p>0.05), 잎의 경우 10 μg/mL의 농도에서 10.7%의 유의한 IL-6 억제활성을 나타냈다. 석산 에탄올추출물의 경우, 뿌리는 1.25~10 μg/mL의 농도범위에서 T+I 대조군 대비 11.9~23.2%의 유의적인 IL-6 억제활성이 확인되었고, 잎은 동일 농도범위에서 16.1~28.3%의 억제활성을 나타내어 잎 에탄올추출물이 뿌리 에탄올추출물보다 IL-6 억제활성이 상대적으로 우수한 것으로 확인되었다. 결론적으로 4종의 석산 추출물 중에서 잎의 에탄올추출물(LR-L-E)에서 가장 우수한 IL-6 억제활성을 확인할 수 있었다.First, as shown in Figures 12a and 12b, in the results of evaluating IL-6 inhibitory activity, the T+I treatment group showed IL-6 production of 1779.3 to 1810.2 pg/mL, which is about 15.6 compared to the NC control group (113.8 pg/mL). It showed a statistically significant (p<0.001) increase of ~15.8 times. In addition, the PC control group treated with 20 μg/mL of dexamethasone showed IL-6 production of 1121.9 pg/mL, which was confirmed to be a statistically significant (p<0.001) inhibitory activity of about 39.5-40.6% compared to the T+I control group. . In the case of Seoksan hot water extract, the roots did not show statistically significant IL-6 inhibitory activity compared to the T+I treatment group in all concentration ranges (p>0.05), but in the case of leaves, the significance was 10.7% at a concentration of 10 μg/mL. It showed IL-6 inhibitory activity. In the case of ethanol extract of sulfate, a significant IL-6 inhibitory activity of 11.9~23.2% was confirmed in roots compared to the T+I control group in the concentration range of 1.25~10 μg/mL, and in leaves, 16.1~28.3% in the same concentration range. It was confirmed that the leaf ethanol extract had relatively better IL-6 inhibitory activity than the root ethanol extract. In conclusion, among the four types of lithic acid extracts, the ethanol extract of leaves (LR-L-E) was found to have the best IL-6 inhibitory activity.

다음으로, 도 13a 및 13b에 나타낸 바와 같이 IL-8 억제활성 평가 결과에서, T+I 처리군은 1441.8~1487.1 pg/mL의 IL-8 생성을 나타내어 NC 대조군(305.7 pg/mL) 대비 약 4.7~4.9배의 통계적으로 유의한(p<0.001) 증가로 확인되었다. 20 μg/mL의 dexamethasone을 처리한 PC 대조군에서는 537.2 pg/mL의 IL-8 생성을 나타내어 T+I 처리군 대비 약 79.6~80.4%의 통계적으로(p<0.001) 유의한 억제활성으로 확인되었다. 모든 석산 추출물에서 농도-의존적인 경향으로 IL-8 억제활성이 증가되었는데, 잎 에탄올추출물(30.2~70.8% 억제) > 뿌리 에탄올추출물(15.5~57.7% 억제) > 잎 열수추출물(-2.6~42.6% 억제) > 뿌리 열수추출물(-3.0~21.3% 억제) 순으로 IL-8 억제활성이 우수한 것으로 평가되었다. 결론적으로 4종의 석산 추출물 중에서 잎의 에탄올추출물(LR-L-E)에서 가장 우수한 IL-6 억제활성을 확인할 수 있었다.Next, as shown in Figures 13a and 13b, in the results of evaluating the IL-8 inhibitory activity, the T+I treatment group showed IL-8 production of 1441.8 to 1487.1 pg/mL, which is about 4.7 compared to the NC control group (305.7 pg/mL). It was confirmed to be a statistically significant (p<0.001) increase of ~4.9 times. The PC control group treated with 20 μg/mL of dexamethasone showed IL-8 production of 537.2 pg/mL, which was confirmed to have a statistically significant inhibitory activity of about 79.6 to 80.4% compared to the T+I treatment group (p<0.001). IL-8 inhibitory activity increased in a concentration-dependent trend in all lithic acid extracts: leaf ethanol extract (30.2~70.8% inhibition) > root ethanol extract (15.5~57.7% inhibition) > leaf hot water extract (-2.6~42.6%) Inhibition) > Root hot water extract (-3.0~21.3% inhibition) was evaluated as having excellent IL-8 inhibitory activity in the order. In conclusion, among the four types of lithic acid extracts, the ethanol extract of leaves (LR-L-E) was found to have the best IL-6 inhibitory activity.

실시예 6. 석산 추출물 처리에 따른 보습증진 활성 확인Example 6. Confirmation of moisturizing enhancement activity according to treatment with quartz extract

HaCaT 세포에서 보습인자인 hyaluronic acid(HA) 생성 증진활성을 평가한 결과는 도 14a 및 14b에 나타낸 바와 같이, 무처리구인 NC 대조군에서는 259.9~289.1 ng/mL의 HA 생성량을 나타냈으며, 이미 잘 알려진 보습촉진 물질인 N-acetylglucosamine (5 mg/mL)을 처리한 PC 대조군에서는 469.0 ng/mL로 NC 대조군 대비 약 1.62~1.81배의 유의한(p<0.001) HA 생성 증진활성을 확인할 수 있었다. 모든 석산 추출물에서 농도-의존적인 HA 생성 증진활성이 확인되었는데, 잎 열수추출물(1.15~1.95배 증가) > 뿌리 열수추출물(0.95~1.87배 증가) > 잎 에탄올추출물(1.25~1.78배 증가) > 뿌리 에탄올추출물(0.94~1.28배 증가) 순으로 HA 생성 증진활성이 우수한 것으로 나타났다. 결론적으로 4종의 석산 추출물 중에서 잎의 열수추출물(LR-L-HW)에서 가장 우수한 HA 생성 증진활성을 확인할 수 있었다.As shown in Figures 14a and 14b, the results of evaluating the activity to enhance the production of hyaluronic acid (HA), a moisturizing factor, in HaCaT cells showed an amount of HA production of 259.9 to 289.1 ng/mL in the untreated NC control group, which is a well-known moisturizing factor. In the PC control group treated with the promoting substance N-acetylglucosamine (5 mg/mL), a significant (p<0.001) HA production enhancing activity was confirmed at 469.0 ng/mL, approximately 1.62 to 1.81 times that of the NC control group. Concentration-dependent HA production enhancing activity was confirmed in all lithic acid extracts: leaf hot-water extract (1.15-1.95-fold increase) > root hot-water extract (0.95-1.87-fold increase) > leaf ethanol extract (1.25-1.78-fold increase) > root The HA production enhancing activity was found to be excellent, followed by ethanol extract (0.94-1.28 times increase). In conclusion, among the four types of lithic acid extracts, the highest HA production enhancing activity was confirmed in the leaf hot water extract (LR-L-HW).

실시예 7. 석산 추출물 처리에 따른 항주름 활성 확인Example 7. Confirmation of anti-wrinkle activity according to treatment with lithic acid extract

최근 연구들에 따르면, 엘라스틴 등을 분해하는 엘라스타제(Elastase)의 활성 증가는 피부의 탄력섬유를 감소시킴으로써 피부 주름 형성에 기여하는 것으로 알려져 있다. 이에 따라, 석산 추출물의 항주름 활성을 확인하기 위하여, 석산 추출물의 엘라스타제의 억제 활성을 확인하였다.According to recent studies, increased activity of elastase, which breaks down elastin, is known to contribute to the formation of skin wrinkles by reducing elastic fibers in the skin. Accordingly, in order to confirm the anti-wrinkle activity of the quartz acid extract, the elastase inhibitory activity of the quartz acid extract was confirmed.

구체적으로, 석산 추출물은 상기 실시예 1-1.과 동일하게 제조하되, 석산의 뿌리는 그대로 사용하였으나, 석산의 잎은 석산의 줄기로 대체하여 사용하였고, 샘플은 대조군으로서 DIW(Distilled water: 증류수), 1% DMSO, 10% DMSO/DIW 내 우르솔산(Ursoiic acid)을 사용하였다.Specifically, the seoksan extract was prepared in the same manner as in Example 1-1, except that the roots of seoksan were used as is, but the leaves of seoksan were replaced with the stems of seoksan, and the sample was treated with distilled water (DIW) as a control. ), 1% DMSO, and ursolic acid in 10% DMSO/DIW were used.

먼저 96 웰 플레이트에서 샘플 (20 μL), 2 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0) (55 μL) 및 0.8 mM STANA solution (125 μL)을 혼합하고, 플레이트 진탕기를 이용하여 진탕하여 O.D (390 nm) 값을 확인하였다. 이 후, 플레이트를 밀봉하고, 37℃에서 15분 간 배양하고, 1 μg/Ml의 Elastase 50 μL를 첨가하였다. 이 후, 플레이트 진탕기를 이용하여 진탕하여 O.D (390 nm) 값을 확인하였다. 다시 플레이트를 밀봉하고, 37℃에서 10분, 20분, 30분 및 130분 간 배양하여 O.D (390 nm) 값을 확인하였다. 각 구체적인 실험 조건과 실험 결과는 하기 도 15 내지 도 26과 같았다. First, mix the sample (20 μL), 2 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0) (55 μL), and 0.8 mM STANA solution (125 μL) in a 96-well plate, and shake using a plate shaker to obtain O.D (390 nm). The value was confirmed. Afterwards, the plate was sealed, incubated at 37°C for 15 minutes, and 50 μL of 1 μg/Ml Elastase was added. Afterwards, the plate was shaken using a plate shaker to confirm the O.D (390 nm) value. The plate was sealed again and incubated at 37°C for 10, 20, 30, and 130 minutes to check the O.D. (390 nm) value. The specific experimental conditions and experimental results were as shown in Figures 15 to 26 below.

그 결과, 각 추출물에 농도 의존적으로 엘라스타제 억제율이 증가하였으며, 처리 시간(10, 20, 30, 130분)이 증가함에 따라 엘라스타제 억제율이 감소함을 확인할 수 있었다.As a result, it was confirmed that the elastase inhibition rate increased in a concentration-dependent manner for each extract, and that the elastase inhibition rate decreased as the treatment time (10, 20, 30, and 130 minutes) increased.

또한, 처리 시간(10, 20, 30, 130분)에 관계없이, 석산줄기(EtOH) > 석산뿌리(EtOH) > 석산뿌리 (열수) > 석산줄기 (열수) 순으로 엘라스타제 억제 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.In addition, regardless of the treatment time (10, 20, 30, 130 minutes), the elastase inhibition effect is excellent in the order of lithic acid stem (EtOH) > lithic acid root (EtOH) > lithic acid root (hot water) > lithic acid stem (hot water). was able to confirm.

제조예Manufacturing example

상기 실시예에 따른 조성물을 유연화장수, 피부외용제, 캡슐 또는 음료로 제형화하였다.The composition according to the above example was formulated into an emollient lotion, external skin preparation, capsule, or beverage.

제조예 1. 유연화장수의 제조Preparation Example 1. Preparation of flexible lotion

실시예 2-1의 조성물을 함유한 유연화장수의 제조예는 하기 [표 1]에 나타낸 바와 같다.The manufacturing example of the softening lotion containing the composition of Example 2-1 is shown in [Table 1] below.

성분ingredient 함량(중량 %)Content (% by weight) 실시예 2-1의 조성물Composition of Example 2-1 5.005.00 글리세린glycerin 5.005.00 부틸렌글리콜Butylene glycol 2.002.00 프로필렌글리콜propylene glycol 2.002.00 폴리옥시에틸렌(60)경화피마자유Polyoxyethylene (60) hydrogenated castor oil 2.002.00 에탄올ethanol 10.010.0 트라이에탄올아민Triethanolamine 3.003.00 방부제antiseptic 0.500.50 색소pigment 0.200.20 향료Spices 0.300.30 정제수Purified water 70.070.0 합계Sum 100100

제조예 2. 피부외용제의 제조Preparation Example 2. Preparation of external skin preparation

실시예 2-1의 조성물을 함유한 피부외용제의 제조예는 하기 [표 2]에 나타낸 바와 같다.Preparation examples of external skin preparations containing the composition of Example 2-1 are shown in Table 2 below.

성분ingredient 함량(중량 %)Content (% by weight) 실시예 2-1의 조성물Composition of Example 2-1 5.105.10 글리세린glycerin 5.005.00 부틸렌글리콜Butylene glycol 0.600.60 히아루론산 추출물Hyaluronic Acid Extract 0.020.02 베타글루칸beta glucan 4.004.00 카보머carbomer 0.150.15 카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드Caprylic Capric Triglyceride 0.500.50 스쿠알렌squalene 0.200.20 스테아릴 글루코사이드stearyl glucoside 5.005.00 스테아릴 알콜stearyl alcohol 4.004.00 소르비탄 스테아레이트Sorbitan Stearate 0.100.10 정제수Purified water 75.3375.33 합계Sum 100100

제조예 3. 캡슐의 제조Preparation Example 3. Preparation of capsules

실시예 2-1의 조성물을 함유한 캡슐의 제조예는 하기 [표 3]에 나타낸 바와 같다.Manufacturing examples of capsules containing the composition of Example 2-1 are shown in Table 3 below.

성분ingredient 함량(중량 %)Content (% by weight) 실시예 2-1의 조성물Composition of Example 2-1 5050 전분starch 2323 유당lactose 2323 탈크Talc 1One 스테아린마그네슘Stearin Magnesium 33 합계Sum 100100

제조예 4. 음료의 제조Preparation Example 4. Preparation of beverage

실시예 2-1의 조성물을 함유한 음료의 제조예는 하기 [표 4]에 나타낸 바와 같다.An example of the preparation of a beverage containing the composition of Example 2-1 is shown in Table 4 below.

성분ingredient 함량(중량 %)Content (% by weight) 실시예 2-1의 조성물Composition of Example 2-1 77 비타민vitamin 88 식이섬유Dietary Fiber 66 액상과당high fructose corn syrup 2020 유화제emulsifier 6060 레몬향Lemon scent 77 정제수Purified water 55 합계Sum 100100

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.The description of the present invention described above is for illustrative purposes, and those skilled in the art will understand that the present invention can be easily modified into other specific forms without changing the technical idea or essential features of the present invention. will be. Therefore, the embodiments described above should be understood in all respects as illustrative and not restrictive.

Claims (13)

석산 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진용 화장료 조성물.
A cosmetic composition for antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle, and moisturizing promotion, containing lithic acid extract as an active ingredient.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 석산을 물, C1 내지 C4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
According to paragraph 1,
A cosmetic composition, wherein the extract is obtained by extracting stone acid using water, C1 to C4 lower alcohol, or a mixed solvent thereof.
제1항에 있어서,
상기 석산은 석산의 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 부위인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
According to paragraph 1,
A cosmetic composition, wherein the stone acid is at least one part selected from the group consisting of leaves, stems, and roots of stone mountain.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 ABTS 자유라디칼 소거 활성, DPPH 라디칼 소거 활성 또는 FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching) 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
According to paragraph 1,
A cosmetic composition, characterized in that the composition exhibits ABTS free radical scavenging activity, DPPH radical scavenging activity, or FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) activity.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 산화질소, TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-6 (Interleukin-6) 및 IL-8 (Interleukin-8)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
According to paragraph 1,
The composition is characterized by inhibiting the production of one or more selected from the group consisting of nitric oxide, tumor necrosis factor-α (TNF-α), Interleukin-6 (IL-6), and Interleukin-8 (IL-8). A cosmetic composition.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 히알루론산 (hyaluronic acid, HA) 합성을 증진시키는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
According to paragraph 1,
A cosmetic composition, characterized in that the composition promotes hyaluronic acid (HA) synthesis.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 엘라스타제(Elastase)의 활성을 억제시키는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
According to paragraph 1,
A cosmetic composition characterized in that the composition inhibits the activity of elastase.
석산 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증, 항아토피 및 항주름용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition for anti-inflammatory, anti-atopic and anti-wrinkle use, comprising lithic acid extract as an active ingredient.
제8항에 있어서,
상기 추출물은 석산을 물, C1 내지 C4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to clause 8,
A pharmaceutical composition, wherein the extract is obtained by extracting stone acid using water, C1 to C4 lower alcohol, or a mixed solvent thereof.
제8항에 있어서,
상기 석산은 석산의 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 부위인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to clause 8,
A pharmaceutical composition, wherein the lithic acid is at least one part selected from the group consisting of leaves, stems and roots of lithic acid.
석산 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화, 항염증, 항아토피, 항주름 및 보습 증진용 건강기능식품 조성물.
A health functional food composition for antioxidant, anti-inflammatory, anti-atopic, anti-wrinkle and moisturizing promotion, containing lithic acid extract as an active ingredient.
제11항에 있어서,
상기 추출물은 석산을 물, C1 내지 C4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는, 건강기능식품 조성물.
According to clause 11,
The extract is a health functional food composition, characterized in that silicic acid is extracted using water, C1 to C4 lower alcohol, or a mixed solvent thereof.
제11항에 있어서,
상기 석산은 석산의 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 부위인 것을 특징으로 하는, 건강기능식품 조성물.
According to clause 11,
A health functional food composition, wherein the stone acid is at least one part selected from the group consisting of leaves, stems, and roots of stone acid.
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