KR20090014673A - 다수 표적 유전자들을 제어하는 간섭 유도 ｒｎａ들 및그들의 제조방법 - Google Patents
다수 표적 유전자들을 제어하는 간섭 유도 ｒｎａ들 및그들의 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20090014673A KR20090014673A KR1020070078782A KR20070078782A KR20090014673A KR 20090014673 A KR20090014673 A KR 20090014673A KR 1020070078782 A KR1020070078782 A KR 1020070078782A KR 20070078782 A KR20070078782 A KR 20070078782A KR 20090014673 A KR20090014673 A KR 20090014673A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- target
- rna
- sirna
- sirnas
- interference
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
본 발명은 하나 이상의 표적 유전자들의 발현을 제어하는 다중 간섭 유도 RNA들 (small interfering RNAs; siRNAs), 그들의 제조 방법 및 그들의 용도에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있도록 조합한 다중-표적 간섭 유도 RNA들, 이중 (dual), 삼중 (triple) 및 사중 (quadruple) 이상의 나노 구조를 형성하여 상기 표적 유전자들을 제어하도록 siRNA들을 조합하는 상기 간섭 유도 RNA들의 제조방법 그리고 이들을 유효성분으로 하는 항암제 및 항바이러스제를 포함하는 유전자-제어 관련 치료제에 관한 것이다.
본 발명의 간섭 유도 RNA들은 다수의 표적 서열들을 동시에 제어하는 다중-표적 siRNA 나노 구조체 (multi-target siRNA nano structure)를 형성하여 상기 표적 유전자들의 발현을 효과적으로 조절할 뿐만 아니라 임상적 적용이 용이하고 그 생산 단가도 절감되는 장점을 가지므로, 종래의 간섭 유도 RNA를 기반으로 하는 의약품들을 대체하는 암 치료제 및 바이러스성 질환 치료제 등을 포함한 각종 유전자-제어 관련 치료제 등에 널리 사용될 수 있다.
하나 이상의 표적 유전자들을 제어하는 다중 간섭 유도 RNA들 (siRNAs), 다중 -표적 siRNA 나노 구조체 (multi-target RNA nano structure), 항암제, 항바이 러스 치료제, 유전자-제어 관련 치료제
Description
본 발명은 하나 이상의 표적 유전자들의 발현을 제어하는 다중 간섭 유도 RNA들 (small interfering RNAs; 이하, "siRNAs"라고 약칭함), 그들의 제조 방법 및 그들의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있도록 조합한 다중-표적 간섭 유도 RNA들, 이중 (dual), 삼중 (triple) 및 사중 (quadruple) 이상의 나노 구조를 형성하여 상기 표적 유전자들을 제어하도록 siRNA들을 조합하는 상기 간섭 유도 RNA들의 제조방법 그리고 이들을 유효성분으로 하는 항암제 및 항바이러스제 등을 포함하는 유전자-제어 관련 치료제에 관한 것이다.
간섭 유도 RNA (small interferencing RNA; siRNA)는 19 내지 21 bp 크기의 이중 나선 구조를 가지는 짧은 RNA 분자로서, 세포 내로 도입되어 상보적인 염기 서열을 가지는 세포 내 메신저 RNA (mRNA)를 절단하고 그 유전자의 발현을 억제하는 기능을 수행한다. 이 간섭 유도 RNA (siRNA)는 짧은 길이의 헤어핀 RNA (short hairpin RNA; shRNA)와 함께 생체 내에 존재하는 RNA 간섭 유도 경로 (RNA interference (RNAi) pathway)를 경유하여 표적 mRNA를 매우 효율적이고 선택적으로 절단하게 된다 [1]. 이러한 RNA 간섭 유도를 이용하는 유전자 제어 기술은 기존의 유전자를 이용한 다양한 조절 방법들과 비교하여 그 성공률과 효율성이 월등히 높다. 따라서, 이것은 기능 유전체학의 연구 도구로서 또한 각종 암들 및 바이러스성 질환에 대한 항암제 또는 항바이러스제 등의 후보 치료 물질로서 각광받고 있다 [2].
터슬 (Tuschl) 그룹은 2001년에 최초로 19 bp 크기의 이중체 (duplex)의 3'-부위에 2개의 염기 서열 (3'-two-nucleotide overhang)을 포함하는 19 + 2 구조의 간섭 유도 RNA를 제작하였다. 또한, 이 간섭 유도 RNA 가 포유동물 세포에서 비특이적인 유전자 발현 억제 (non-specific gene repression)를 배제하면서, 동시에 특이적인 억제 (specific gene suppression)를 유발할 수 있는 것을 확인하였다 [3]. 따라서, 이후부터는 간섭 유도 RNA에 관한 기반 실험들이 대부분 상기 19 + 2 구조를 가지는 siRNA를 이용하여 이루어져 왔다.
최근 들어서는, 이러한 19 + 2 구조의 siRNA로부터 변형된 구조를 가지는 si RNAs가 개발 시도되고 있다. 구체적으로, 27 bp 크기의 이중체와 같이 긴 길이의 siRNA 또는 29 bp 크기의 shRNA 등이 개발된 바 있었다. 또한 이 간섭 유도 RNA 들은 19 bp 크기의 이중가닥으로 된 siRNA에 의해 기존에는 유전자 발현이 저해되지 않던 표적 mRNA의 발현을 효율적으로 억제시킬 수 있는 것도 확인되었다 [4, 5].
따라서, 현재 이러한 간섭 유도 RNAi를 이용하여 각종 항바이러스 치료제들이 연구 개발되고 있는 과정에 있다. 그러나 바이러스 게놈의 한 부분만을 표적으로 하는 siRNA 또는 shRNA는 돌연변이율이 높은 바이러스의 표적 염기서열에 돌연변이를 유도하여 궁극적으로 내성을 가지는 바이러스 돌연변이체를 생성시킬 수 있다. 실제로도 이와 같이 바이러스의 돌연변이가 유발된 사례들이 보고된 바 있다 [6]. 그러므로, 이러한 돌연변이에 의한 약물 내성이 생기는 것을 낮출 수 있는 간섭 유도 RNA를 개발하는 것이 절실히 필요한 실정이다.
최근에는 상기 간섭 유도 RNA의 단점을 극복하기 위하여, 복수의 표적 유전자들을 동시에 발현 억제할 수 있는 다중-표적 간섭 유도 RNA (multi-target RNAi) 기술이 개발 시도되고 있다 [7]. 이러한 다중-표적 RNAi는 항바이러스 치료제뿐만 아니라 암과 같은 다양한 질병들에 대한 치료제의 개발에도 유용하게 사용될 수 있다. 실제로 다중-표적 RNAi는 세포 내의 다수 암화 관련 경로들을 제어하여 상호 상승적 (synergistic)으로 암세포의 성장을 조절할 수 있다. 이와 같이 RNAi를 통한 세포 내 복수 개 유전자들의 발현 제어에서 기본 개념은 "조합 RNAi (combinatorial RNAi)"라고 불리며, 이와 관련된 많은 연구들이 현재 진행 중에 있다 [7].
현재까지는 대부분의 다중-표적 RNAi가 주로 짧은 길이의 헤어핀 RNA (shRNA)를 기반으로 하여 개발되고 있다. 실제로 이러한 shRNA가 하나 이상의 헤어핀 구조를 포함하는 재조합 발현 벡터를 이용하여 다중-표적 RNAi로 구현된 것이 보고되었다 [8]. 그러나 siRNA는 세포 내에 도입되어 유전자 발현 과정에서 작용 하는 shRNA와 달리, 화학적인 합성법에 따라 제작된 다음 생체 내에 도입되어야 한다. 따라서 siRNA는 특히 구조적인 변형 과정을 거쳐 다중-표적 siRNA로 개발될 것이 요구된다.
최근에 구오 (Guo) 그룹은 Phi29 RNA 라고 불리는 박테리오파지 (bacteriophage)를 기반으로 하는 RNA 나노 구조체를 이용하여 복수 개의 siRNA를 세포 내로 도입하는 방법을 제시한 바 있었다 [9]. 그러나 이 방법은 해당 RNA 구조체의 전체 크기가 너무 커서 화학적인 합성이 용이하지 않으므로, 실제 치료제로 개발되기에는 한계점을 가지고 있다. 또한, 터슬 그룹은 siRNA의 센스 가닥 (sense strand) 및 안티센스 가닥 (antisense strand)이 각각 서로 다른 표적 유전자를 억제하여 두 개의 표적 유전자들을 동시에 제어할 수 있는 일부 상보적인 siRNA (partially complementary siRNA)를 개발하여 보고한 바 있었다 [10]. 그러나 이 방법 또한 표적 유전자의 제어 효율이 낮고 siRNA 이중가닥이 구조적으로 불안정한 문제점을 가진다.
본 발명자들도 다양한 간섭 유도 RNA들을 화학적으로 합성하고 그 구조를 다양하게 변화시키는 연구를 진행하여 상기 구조 변화에 따른 간섭 유도 RNAi의 저해 활성에 관한 다양한 실험들을 이미 보고한 바 있었다 [11].
이에 본 발명자들은 상기 간섭 유도 RNA들을 이용한 효과적인 항암제 또는 항바이러스 치료제를 개발하기 위하여 노력을 계속한 결과, 한 개 이상의 siRNA들이 19 bp 이하의 염기서열로 및/또는 일부 단일가닥으로 이루어진 복수 개의 siRNA들을 포함하는 다중 간섭 유도 RNA들을 고안하고 상기 siRNA들이 이중, 삼중 및 사 중 이상의 나노 구조체를 형성하도록 조합하여 화학적 합성 과정에 따라 제조한 다음, 세포 내에서 상기 siRNA들이 표적 유전자들의 발현을 효과적으로 제어하고 상기 간섭 유도 RNA들이 종래의 제품들을 대체하는 각종 유전자-제어 관련 질환에 대한 치료제로서 널리 사용될 수 있는 점을 확인함으로써 본 발명을 성공적으로 완성하였다.
본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있는 다중 간섭 유도 RNA들 및 상기 간섭 유도 RNA (siRNA)들을 다중 구조로 조합(결합)하는 상기 다중 간섭 유도 RNA들의 제조방법 그리고 이들을 유효성분으로 하는 항암제 및 항바이러스 치료제를 포함하는 각종 유전자-제어 관련 치료제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있는, 두개 이상의 siRNA들을 조합한 다중 간섭 유도 RNA (small interfering RNA; siRNA)들을 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 상기 표적 유전자를 제어하는 두 개의 siRNA들을 조합한 이중-표적 간섭 유도 RNA (dual silencing siRNA)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 표적 유전자를 제어하는 세 개의 siRNA들을 조합한 삼중-표적 간섭 유도 RNA (triple silencing siRNA)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 표적 유전자를 제어하는 네 개의 siRNA들을 조합한 사중-표적 간섭 유도 RNA (quadruple silencing siRNA)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 표적 유전자를 제어하는 siRNA들과 동시에 특정 세포 특이 인지서열 (aptamer)을 조합한 다중 간섭 유도 RNA (dual silencing siRNA)를 제공한다.
또한, 본 발명은 표적 유전자를 제어하는 간섭 유도 RNA (siRNA)들을 각각의 5'-안티센스 가닥이 서로 반대 방향이 배치하여 두개 이상을 조합하는 과정으로 이루어진 상기 다중 간섭 유도 RNA의 제조 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 간섭 유도 RNA (siRNA)를 유효성분으로 하는 유전자-제어 관련 질환의 치료제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 간섭 유도 RNA (siRNA)를 유효성분으로 하는 항암제 및/또는 항바이러스 치료제를 제공한다.
상기와 같이, 본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있는 다중 간섭 유도 RNA들(siRNAs), 이중, 삼중 및 삼중 이상의 나노 구조를 형성하도록 조합한 상기 간섭 유도 RNA들의 제조방법 그리고 이들을 유효성분으로 하는 항암제 또는 항바이러스 치료제와 같은 유전자 치료제에 관한 것이다.
본 발명의 간섭 유도 RNA들은 다수의 siRNA 서열들을 동시에 포함하는 다중-표적 RNA 나노 구조체 (multi-target RNA nano structure)들을 형성할 수 있어, 상기 표적 유전자들의 발현을 효과적으로 조절할 뿐만 아니라 실제 임상적으로도 적 용하기가 용이하고 상기 나노 구조체를 생산하는 비용도 절감시킬 수 있는 탁월한 장점을 가지므로, 종래의 간섭 유도 RNA를 기반으로 하는 의약품들을 대체하는 각종 암 및 바이러스성 질환과 같은 유전자 질환에 대한 치료제 등을 개발하는 데 널리 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있는 다중 간섭 유도 RNA (small interfering RNA; siRNA)들을 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 두 개의 표적 유전자들을 제어하도록 조합한 이중-표적 간섭 유도 RNA (dual silencing siRNA; dsiRNA)를 제공한다.
상기 이중-표적 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 하나 이상의 siRNA들이 15개 내지 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 또한 이들 중 하나 이상의 siRNA들은 일부 또는 전부 단일가닥으로 이루어지는 것도 바람직하다.
또한, 본 발명의 다중 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 라민 (Lamin)을 표적 유전자로 하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, DBP를 표적 유전자로 하는 서열번호 5와 서열번호 6의 siDBP 및 OASIS를 표적 유전자로 하는 서열 번호 7과 서열번호 8의 siOASIS 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 상기 표적 유전자들 이외에도 항암 또는 항바이러스 작용과 연관되는 유전자라면 모두 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있고, 더 나아가 간섭 유도 RNA 제조 시 필요한 모든 유전자가 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있다.
본 발명은 상기 표적 유전자를 제어하는 각각 19개의 염기서열로 이루어지는 서열번호 9와 서열번호 10의 염기서열을 포함하는 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(19)-TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 11과 서열번호 12의 염기서열을 포함하는 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiDBP(19)-TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 13과 서열번호 14의 염기서열을 포함하는 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(19)-DBP(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 15와 서열번호 16의 염기서열을 포함하는 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiOASIS(19)-TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 서열번호 17과 서열번호 18의 염기서열을 포함하는 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(3'17)-TIG3(5'17)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 19와 서열번호 20의 염기서열을 포함하는 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(5'17)-TIG3(5'15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 21과 서열번호 22의 염기서열을 포함하는 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(3'17)-TIG3(5'15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 23과 서열번호 24의 염기서열을 포함하는 짧은 길 이의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(5'15)-TIG3(5'15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 25와 서열번호 26의 염기서열을 포함하는 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(3'15)-TIG3(5'15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 27과 서열번호 28의 염기서열을 포함하는 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(M15)-TIG3(5'15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들 중 하나 이상이 일부 단일가닥으로 이루어지는 서열번호 29와 서열번호 30의 염기서열을 포함하는 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsi0.5Lamin(19)-TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 31과 서열번호 32의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(19)-0.5TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 33과 서열번호 34의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsi0.5Lamin(3'17)-TIG3(5'15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 35와 서열번호 36의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsiDBP(19)-0.5TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 37과 서열번호 38의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA, dsi0.5DBP(19)-TIG3(19)를 제공한다.
본 발명은 세 개의 표적 유전자들을 제어하도록 조합한 삼중-표적 간섭 유도 RNA (triple silencing siRNA; tsiRNA)를 제공한다.
상기 삼중-표적 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 하나 이상의 siRNA들이 15개 내지 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 또한 이들 중 하나 이상의 siRNA들은 일부 또는 전부 단일가닥으로 이루어지는 것도 바람직하다.
또한, 본 발명의 다중 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 Lamin을 표적 유전자로 하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, DBP를 표적 유전자로 하는 서열번호 5와 서열번호 6의 siDBP 및 OASIS를 표적 유전자로 하는 서열 번호 7과 서열번호 8의 siOASIS 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 상기 표적 유전자들 이외에도 항암 또는 항바이러스 작용과 연관되는 유전자라면 모두 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있고, 더 나아가 간섭 유도 RNA 제조 시 필요한 모든 유전자가 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있다.
본 발명은 도 15 (a)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들이 각각 19개의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiLamin(19)-DBP(19)-TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 15 (b)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들이 각각 19개의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiTIG3(19)-DBP(19)-Lamin(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 17 (a)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiLamin(19)-DBP(19)-TIG3(17)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 17 (b)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiLamin(19)-DBP(19)-TIG3(15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 18 (a)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiLamin(17)-DBP(19)-TIG3(17)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 18 (b)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiLamin(17)-DBP(19)-TIG3(15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 19 (a)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 일부 또는 전부 단일가닥의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiLamin(19)-DBP(19)-0.5TIG3를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 19 (b)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 일부 또는 전부 단일가닥의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsiLamin(19)-DBP(19)-0.5TIG3(17)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 20에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지고, 일부 또는 전부 19개 미만의 단일가닥의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsi0.5Lamin(17)-DBP(19)-TIG3(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 21 (a)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지고, 일부 또는 전부 19개 미만의 단일가닥의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsi0.5Lamin(17)-DBP(19)-TIG3(17)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 21 (b)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들 중 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지고, 일부 또는 전부 19개 미만의 단일가닥의 염기서열로 이루어지는 삼중-표적 간섭 유도 RNA, tsi0.5Lamin(17)-DBP(19)-TIG3(15)를 제공한다.
또한, 본 발명은 네 개의 표적 유전자들을 제어하도록 조합한 사중-표적 간섭 유도 RNA (quadruple silencing siRNA; qsiRNA)를 제공한다.
상기 사중-표적 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 하나 이상의 siRNA들이 15개 내지 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 또한 이들 중 하나 이상의 siRNA들은 일부 또는 전부 단일가닥으로 이루어지는 것도 바람직하다.
본 발명의 다중 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 Lamin을 표적 유전자로 하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, DBP를 표적 유전자로 하는 서열번호 5와 서열번호 6의 siDBP 및 OASIS를 표적 유전자로 하는 서열 번호 7과 서열번호 8의 siOASIS 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 상기 표적 유전자들 이외에도 항암 또는 항바이러스 작용과 연관되는 유전자라면 모두 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있고, 더 나아가 간섭 유도 RNA 제조 시 필요한 모든 유전자가 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있다.
본 발명은 도 22 (a)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들이 각각 19개의 염기서열로 이루어지는 사중-표적 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-TIG3(19)-Lamin(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 22 (b)에 보는 바와 같이 상기 siRNA들이 각각 19개의 염기서열로 이루어지는 사중-표적 간섭 유도 RNA, qsiLamin(19)-TIG3(19)-OASIS(19)-DBP(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 23 (a)에서 보는 바와 같이 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-TIG3(17)-Lamin(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 23 (b)에 보는 바와 같이 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-TIG3(15)-Lamin(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 24에 보는 바와 같이 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsiLamine(17)-TIG3(15)-OASIS(19)-DBP(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 25에 보는 바와 같이 일부 또는 전부 단일 가닥의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-0.5TIG3(19)-Lamin(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 26 (a)에 보는 바와 같이 일부 또는 전부 19개 미만의 단일 가닥의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-0.5TIG3(17)-Lamin(19)을 제공한다.
또한, 본 발명은 도 26 (b)에 보는 바와 같이 일부 또는 전부 19개 미만의 단일 가닥의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsi0.5Lamin(17)-TIG3(19)-OASIS(19)-DBP(19)를 제공한다.
또한, 본 발명은 도 27 (a)에 보는 바와 같이 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지고, 일부 또는 전부 19개 미만의 단일가닥의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-TIG3(15)-0.5Lamin(17)을 제공한다.
또한, 본 발명은 도 27 (b)에 보는 바와 같이 하나 이상이 19개 미만의 염기서열로 이루어지고, 일부 또는 전부 19개 미만의 단일가닥의 염기서열로 이루어지는 다중 간섭 유도 RNA, qsiLamin(17)-0.5TIG3(15)-OASIS(19)-DBP(19)를 제공한다.
본 발명은 세포 특이적인 인지서열인 압타머 (aptamer) 서열을 포함하여 하나 이상의 siRNA들을 조합한 압타머-다중-표적 간섭 유도 RNA (Aptamer-multiple silencing siRNA)를 제공한다.
상기 압타머-다중-표적 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 하나 이상의 siRNA들이 15개 내지 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 또한 이들 중 하나 이상의 siRNA들은 일부 또는 전부 단일가닥으로 이루어지는 것도 바람직하다.
또한, 본 발명의 압타머- 다중 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 Lamin을 표적 유전자로 하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, DBP를 표적 유전자로 하는 서열번호 5와 서열번호 6의 siDBP 및 OASIS를 표적 유전자로 하는 서열 번호 7과 서열번호 8의 siOASIS 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 상기 표적 유전자들 이외에도 항암 또는 항바이러스 작용과 연관되는 유전자라면 모두 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있고, 더 나아가 간섭 유도 RNA 제조 시 필요한 모든 유전자가 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있다.
본 발명은 표적 유전자를 제어하는 간섭 유도 RNA (siRNA)들을 각각의 5'-안티센스 가닥이 서로 반대 방향이 배치하여 두개 이상을 조합시키는 과정으로 이루어진 상기 다중 간섭 유도 RNA의 제조 방법을 제공한다.
이때 상기 다중 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 하나 이상의 siRNA들이 15개 내지 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 또한 이들 중 하나 이상의 siRNA들은 일부 또는 전부 단일가닥으로 이루어지는 것도 바람직하다.
또한, 본 발명은 상기 다중-간섭 유도 RNA (siRNA)의 구조를 각종 유전자-제어 관련 질환을 치료하는 데 사용하는 용도를 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 상기 다중-간섭 유도 RNA (multi-silencing siRNA)의 구조를 각종 암 및 바이러스 성 질환 등을 치료하는 데 사용하는 용도를 제공한다.
본 발명의 상기 다중-간섭 유도 RNA (multi-silencing siRNA)는 항암제 또는 항바이러스제 등의 유효성분으로 사용되는 이외에도, 하나 이상의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어하는 것이 더욱 효과적인 모든 질환들을 예방하고 치료하는 데 널리 사용될 수 있다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작
본 발명자들은 이미 선행 연구를 통하여 [11], 간섭 유도 siRNA의 안티센스 가닥 (guide strand; antisense strand)의 3'-부위 쪽에 다른 염기서열을 가지는 이중체 (duplex)가 부착되는 경우에도 siRNA의 유전자 발현 억제 효율이 유지되는 것을 확인하였다. 이러한 사실을 기초로 하여, 두 개의 19 bp siRNA들을 서로 5'-안티센스 가닥 방향이 반대가 되도록 부착하고, 각 siRNA 안티센스의 5'-부위가 이중체의 바깥쪽을 향할 경우, 형성된 새로운 siRNA 구조체가 부착하기 이전의 유전자 제어 효율을 유지할 수 있을 것이라고 본 발명자들은 예상하고, 도 1에 나타낸 바와 같이, 라민 (Lamin)을 표적 유전자로 하는 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 siTIG3를 조합하여 이중 구조를 형성하는 서열번호 9와 서열번호 10의 염기서 열을 포함하는 간섭 유도 RNA dsiLamin(19)-TIG3(19) [dual silencing siRNA Lamin(19)-TIG3(19)]를 제작하였다.
구체적으로, Lamin 안티센스 (antisense) 19 mer의 3'에 TIG3 센스 (sense) 19 mer를 조합하여 38 mer의 단일가닥 (single strand)를 합성하고, 이어서 TIG3의 안티센스 19 mer 3'에 Lamin의 센스 19 mer를 조합하여 38 mer의 단일가닥을 합성한 후, 상기 2개의 38 mer 단일가닥을 어닐링 (annealing)하여 38 bp로 이루어진 이중 표적 간섭 유도 RNA, dsiLamin(19)-TIG3(19)를 제작하였다.
이하, 다중-표적 간섭 siRNA들도 상기와 유사하게 필요에 따라 2개 이상의 siRNA의 안티센스와 센스, 센스와 센스, 안티센스와 센스를 각각 조합하여 합성한 19 mer 이상의 단일가닥을 어닐링 하여 다중 구조를 형성하도록 제작하였다.
실시예 2. 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사 I
본 발명에서는 이중-표적 간섭 유도 RNA 들의 유전자 발현 저해도를 조사하기 위하여, Lamin 유전자만을 포함하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin, TIG3 유전자만을 포함하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, 상기 siLamin 과 siTIG3의 혼합물, 그리고 본 발명의 이중 표적 간섭 유도 RNA인 서열번호 9와 서열번호 10의 dsiLamin(19)-TIG3(19)를 HeLa 세포에 각각 농도 100 nM 또는 10 nM 의 농도로 리포펙타민 2000 (lipofectamine 2000)을 사용하여 형질전환 (transfection)시켰다. 또한 상기 표적 유전자 Lamin 및 TIG3의 mRNA 수준을 실시간 역전사효소 중합효소 연쇄반응 (real-time RT-PCR)을 수행하여 정량하였다. 더 나아가 상기 mRNA 양을 환산하여 각 siRNA들이 표적 유전자들을 발현 억제하는 효율을 산정, 비교하였다. 그 결과, 도 2에서 나타난 바와 같이, 본 발명의 이중-표적 간섭 유도 RNA dsiLamin(19)-TIG3(19)가 단일 표적 유전자 siLamin과 siTIG3들을 단순히 혼합한 대조군과 비교하여 세포 형질전환 후 유전자 발현의 저해도가 동등한 것을 확인하였다.
실시예 3. 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사 Ⅱ
본 발명에서는 상기 실시예 2 에서 살펴본 바와 같이, 이중-표적 siRNA 구조가 일반 표적 유전자에서도 보편적으로 발현 억제 활성을 가지는지 여부를 다음과 같이 조사하였다. 구체적으로 서열번호 11과 서열번호 12의 간섭 유도 RNA dsiDBP(19)-TIG3(19), 서열번호 13과 서열번호 14의 dsiLamin(19)-DBP(19) 및 서열번호 15와 서열번호 16의 dsiOASIS(19)-TIG3(19)를 포함하여 서로 다른 표적 유전자들을 포함하는 다양한 간섭 유도 RNA의 조합 (combination)을 제작하였다 (도 3, 도 5 및 도 7 참조).
그 결과, 도 4, 도 6 및 도 8에서 각각 나타난 바와 같이 상기 이중-표적 (dual silencing) siRNA들이 약간의 정도의 차이는 있지만 두 가지 표적 유전자들의 발현을 모두 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 19 bp 크기를 가지는 두 개의 siRNA들을 연결시킨 이중-표적 siRNA들은 두 개의 단일-표적 19 bp siRNA들을 혼합한 대조군과 비교하여 세포 형질전환 후 유전자 발현의 저해도가 동등한 것을 알 수 있었다.
실시예 4. 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작
본 발명에서는 상기 실시예 3에서 기술한 이중-표적 간섭 유도 siRNA들이 38 bp 염기서열로 구성되기 때문에 원활하게 표적 유전자들의 발현을 억제하더라도 종래의 19 bp 또는 27 bp 의 염기서열로 구성되는 siRNA에 비해 상대적으로 길이가 긴 문제점을 가지는 것으로 판단하였다. 따라서, 상기 38 bp 보다 길이가 짧은 이중-표적 siRNA도 유전자 발현을 효과적으로 억제할 수 있는지 여부를 다음과 같이 조사하였다.
도 9에서 나타낸 바와 같이, 상기 이중-표적 dsiLamin-TIG3 siRNA 구조체로부터 각 siRNA의 길이를 각각 17 bp + 17 bp, 17 bp + 15 bp 및 15 bp + 15 bp 로 줄이는 과정으로 짧은 길이를 가지는 이중-표적 siRNA (dual silencing siRNA)를 합성하였다. 구체적으로, 상기 서열번호 17과 서열번호 18의 상기 Lamin(3'17)은 안티센스 서열 중 3'쪽으로부터 17 bp 크기의 이중체를 사용한 것이고, 서열번호 19와 서열번호 20의 Lamin(5'17)은 19 bp 크기의 siLamin의 안티센스 (19 mer antisense) 서열 중 5’쪽으로부터 17 bp 크기의 이중체를 사용한 것이다. 또한, 상기 서열번호 21과 서열번호 22의 Lamin(5'15)는 19 bp 크기의 siLamin의 안티센스 서열 중에서 5'쪽으로부터 15 bp 크기의 이중체를 사용한 것이고, 서열번호 25와 서열번호 26의 상기 Lamin(3'15)는 안티센스 서열 중 3'쪽으로부터 15 bp 크기의 이중체를 사용한 것이며, 서열번호 27과 서열번호 28의 Lamin(M15)는 19 bp 크기의 siLamin의 안티센스 서열 중 가운데 부분 15 bp 크기의 이중체를 사용한 것이 다. 또한, 상기 TIG3 유전자를 억제하는 siRNA들은 모두 5'쪽 안티센스 말단 (antisense end)을 유지시키면서 길이만 17 bp 및 15 bp 가 되도록 줄였다. TIG3(5'17)은 siTIG3의 안티센스 서열 중 5'쪽으로 부터 17bp 크기의 이중체를 사용한 것이고, TIG3(5'15)는 siTIG3의 안티센스 서열 중 5'쪽으로 부터 15bp 크기의 이중체를 사용한 것이다. 상기에서 제작한 짧은 길이의 dual silencing siRNA 구조체들에 의한 세포 내 표적 유전자의 발현 저해도들을 각각 측정하여 도 10에 요약하여 나타내었다.
실시예 5. 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사
본 발명에서는 길이가 짧은 이중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도를 상기 실시예 2에서 기술한 바와 동일한 과정으로 측정하였다. 그 결과, 상기 이중-표적 siRNA 들중에서 TIG3 유전자는 19 bp 크기의 이중체보다 길이가 짧은 안티센스 가닥의 5'쪽으로부터 15 bp 또는 17 bp 이중체만으로도 TIG3 유전자의 mRNA 수준을 충분히 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, Lamin 유전자는 17 bp 크기의 이중체를 사용하는 경우에 안티센스 가닥의 3'쪽으로부터 17 bp 이중체는 Lamin 유전자의 mRNA 수준을 감소시키는 데 탁월한 활성을 보이는 반면, 5'쪽으로부터 17 bp 이중체는 거의 저해 활성을 나타내지 않는 것을 알 수 있었다 (도 10 참조). 따라서, 두 개의 siRNA 단위체를 조합(결합)한 본 발명의 이중-표적 siRNA 구조체들은 서열-의존적으로 (sequence-dependent) 종래의 19 bp 보다 길이가 짧은 siRNA 조합으로도 특정 유전자 발현을 충분히 저해할 수 있는 것을 확인하였다.
이와 같이, 길이가 짧은 이중-표적 siRNA 구조체들은 두 개의 19 bp siRNA 조합을 가지는 구조체와 비교하여 적은 염기 수, 즉 17 bp + 15 bp 이중체의 경우 64 mer 범위까지 염기 수를 감소시키더라도 표적 유전자들의 발현을 효과적으로 억제할 수 있는 장점을 가진다. 따라서, 향후 본 발명의 siRNA를 유효성분으로 하는 신약을 개발하는 경우 생산 단가를 효율적으로 절감시킬 수 있다.
실시예 6. 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작
본 발명에서는 일부 단일가닥으로 이루어진 이중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA들을 다음과 같이 제작하였다. 참고로 종래의 선행 연구를 통하여, siRNA들은 이중가닥이 아닌 단일가닥 형태로 RNAi를 유도하여 표적 유전자의 발현을 저해시킬 수 있다고 이미 알려져 있다 [12]. 본 발명에서는 도 11에서 나타낸 바와 같이, 이중-표적 siRNA 구조체로부터 한쪽 siRNA 단위체의 센스 가닥 (sense strand)을 제거하여 (도 11에서 '0.5'라고 표시함) 단일가닥으로 만들어 이중가닥 부분을 함께 포함하는 혼합 형태의 이중-표적 dsiRNA를 제작하였다. 구체적으로 도 11에서 보는 바와 같이, 일부 단일가닥의 이중-표적 siRNA들 중에서 서열번호 29와 서열번호 30의 dsi0.5Lamin(19)-TIG3(19)는 TIG3 siRNA 이중체 뒤쪽에 19 bp 크기의 단일 siLamin 안티센스 가닥을 조합시킨 것이고, 서열번호 31과 서열번호 32의 dsiLamin(19)-0.5TIG3(19)는 Lamin siRNA 이중체 뒤쪽에 19 bp 크기의 단일 siTIG3 안티센스 가닥을 결합시킨 것이다. 또한, 서열번호 33과 서열번호 34의 dsi0.5Lamin(3'17)-TIG3(5'15)는 15 bp 크기의 siTIG3 이중가닥 뒤쪽에 Lamin 유전자의 안티센스 3'방향으로 17 mer 크기의 단일가닥을 결합한 것이다.
실시예 7. 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사
본 발명에서는 일부 단일가닥으로 이루어진 이중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA 들의 유전자 발현 저해도를 상기 실시예 2에서 기술한 바와 동일한 과정으로 측정하였다.
그 결과 도 12에서 보는 바와 같이, Lamin siRNA 이중가닥의 뒤쪽에 19 mer의 단일 siTIG3 안티센스 가닥을 결합시킨 서열번호 31과 서열번호 32의 dsiLamin(19)-0.5TIG3(19)의 경우 Lamin 유전자 및 TIG3 유전자의 mRNA 발현을 모두 효과적으로 억제시키는 것을 확인할 수 있었다. 그러나 TIG3 siRNA 이중가닥 뒤쪽에 19 mer의 단일 siLamin 안티센스 가닥을 결합시킨 서열번호 29와 서열번호 30의 dsi0.5Lamin(19)-TIG3(19)의 경우에는 TIG3 유전자 발현만을 억제할 수 있는 것을 확인하였다. 그러나, 15 bp 크기의 siTIG3 이중가닥 뒤쪽에 Lamin 유전자의 안티센스 3'방향으로부터 17 mer의 단일가닥을 결합한 서열번호 33과 서열번호 34의 dsi0.5Lamin(3'17)-TIG3(5'15) 경우에는 TIG3 유전자 및 Lamin 유전자 모두의 발현이 효율적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA 들은 두 개의 19 bp siRNA (총 76 mer)와 비교 하여 훨씬 적은 염기 수, 즉 47 mer 이하로도 두 개의 표적 유전자를 동시에 억제할 수 있어 신약 제조 시 생산 단가를 획기적으로 낮출 수 있는 장점을 가진다.
실시예 8. 삼중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작 및 유전자 발현 저해도 조사
본 발명에서는 삼중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA들을 다음과 같이 제작하여 유전자 발현 저해도를 조사하였다.
즉, 세 개의 19 bp 크기의 siRNA를 조합 연결시키는 과정으로 도 15에서 나타낸 바와 같이 삼중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA (triple silencing siRNA; tsiRNA)를 화학적인 합성법으로 제작하였다.
구체적으로, Lamin의 안티센스 3' 뒤에 DBP의 센스를 조합하여 합성한 38 mer, DBP의 안티센스 3'에 TIG3의 센스를 조합하여 합성한 38 mer 및 TIG3의 안티센스 3'에 Lamin의 센스를 조합하여 합성한 38 mer를 제작한 후, 상기 세 개의 38 mer를 혼합하여 어닐링 하여 가장 안정한 트리플 (triple) 구조를 이루도록 하였다.
이하, 삼중-표적 siRNA는 상기와 동일한 방법으로 세 개의 단일가닥을 합성한 다음, 이들은 어닐링 하여 가장 안정한 구조를 형성하게 하였다.
이러한 삼중-표적 siRNA가 19 bp 크기의 siRNA 세 개를 단순히 혼합하여 세포 내로 형질전환 (transfection)시킨 경우와 유사하게 세 개의 표적 유전자의 발현을 효율적으로 억제하는 것도 확인하였다 (도 16 참조). 따라서, 하나의 RNA 구조체로 세 개 이상의 표적 유전자들의 발현을 동시에 효과적으로 저해할 수 있는 것을 알 수 있었다. 또한 본 발명의 삼중-표적 tsiRNA도 역시 상기 이중-표적 dsiRNA와 동일하게 간섭 유도 RNA 이중가닥의 길이를 줄이거나 일부를 단일가닥 형태로 변형할 수 있었고, 그 경우에도 상기 표적 유전자들을 효과적으로 발현 저해하였다.
실시예 9. 압타머 서열을 포함하는 다중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작 및 유전자 발현 저해도 조사
본 발명에서는 압타머 (aptamer) 서열을 포함하는 다중-표적 간섭 유도 RNA 들을 제작하여 표적 유전자들의 발현 저해도를 다음과 같이 조사하였다. 구체적으로, 상기 삼중-표적 tsiRNA의 한 쪽 이중체 부분을 세포 특이적인 인지가 가능한 압타머 (aptamer) 서열로 대체시키고, 두 종류 이상의 siRNA를 특정 세포 내로 선택적으로 도입할 수 있는 작은 RNA 나노 구조체를 제작하였다 (도 28 참조). 또한, 상기 실시예 1에 기술한 바와 동일한 과정으로 상기 다중-표적 간섭 유도 RNA가 표적 유전자들을 효과적으로 발현 저해하는 것을 확인하였다.
[참고문헌]
[1] G.J. Hannon, RNA interference. Nature 418 (2002) 244-51.
[2] Y. Dorsett, and T. Tuschl, siRNAs: applications in functional genomics and potential as therapeutics. Nat Rev Drug Discov 3 (2004) 318-29.
[3] S.M. Elbashir, J. Harborth, W. Lendeckel, A. Yalcin, K. Weber, and T. Tuschl, Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature 411 (2001) 494-8.
[4] D.H. Kim, M.A. Behlke, S.D. Rose, M.S. Chang, S. Choi, and J.J. Rossi, Synthetic dsRNA Dicer substrates enhance RNAi potency and efficacy. Nat Biotechnol 23 (2005) 222-6.
[5] D. Siolas, C. Lerner, J. Burchard, W. Ge, P.S. Linsley, P.J. Paddison, G.J. Hannon, and M.A. Cleary, Synthetic shRNAs as potent RNAi triggers. Nat Biotechnol 23 (2005) 227-31.
[6] A.T. Das, T.R. Brummelkamp, E.M. Westerhout, M. Vink, M. Madiredjo, R. Bernards, and B. Berkhout, Human immunodeficiency virus type 1 escapes from RNA interference-mediated inhibition. J Virol 78 (2004) 2601-5.
[7] D. Grimm, and M.A. Kay, Combinatorial RNAi: a winning strategy for the race against evolving targets? Mol Ther 15 (2007) 878-88.
[8] D. Sun, M. Melegari, S. Sridhar, C.E. Rogler, and L. Zhu, Multi-miRNA hairpin method that improves gene knockdown efficiency and provides linked multi-gene knockdown. Biotechniques 41 (2006) 59-63.
[9] A. Khaled, S. Guo, F. Li, and P. Guo, Controllable self-assembly of nanoparticles for specific delivery of multiple therapeutic molecules to cancer cells using RNA nanotechnology. Nano Lett 5 (2005) 1797-808.
[10] M. Hossbach, J. Gruber, M. Osborn, K. Weber, and T. Tuschl, Gene silencing with siRNA duplexes composed of target-mRNA-complementary and partially palindromic or partially complementary single-stranded siRNAs. RNA Biol 3 (2006) 82-9.
[11] C.I. Chang, S.W. Hong, S. Kim, and D.K. Lee, A structure-activity relationship study of siRNAs with structural variations. Biochem Biophys Res Commun 359 (2007) 997-1003.
[12] J. Martinez, A. Patkaniowska, H. Urlaub, R. Luhrmann, and T. Tuschl, Single-stranded antisense siRNAs guide target RNA cleavage in RNAi. Cell 110 (2002) 563-74.
도 1은 본 발명의 두 개의 간섭 유도 RNA (siRNA)를 조합한 이중-표적 siRNA (dual silencing siRNA), dsiLamin(19)-TIG3(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiLamin(19)-TIG3(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiDBP(19)-TIG3(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiDBP(19)-TIG3(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiLamin(19)-DBP(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 6는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiLamin(19)-DBP(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiOASIS(19)-TIG3(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiOASIS(19)-TIG3(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 9는 본 발명의 19개 미만의 염기서열로 이루어진 짧은 길이의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs의 다양한 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 10은 본 발명의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs의 상기 표 적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 11은 본 발명의 일부 단일가닥의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs (Lamin-TIG3)의 다양한 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 12는 본 발명의 일부 단일가닥의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 13은 본 발명의 일부 단일가닥의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs (DBP-TIG3)의 다양한 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 14는 본 발명의 일부 단일가닥의 이중-표적 siRNAs의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 15는 본 발명의 세 개의 간섭 유도 RNA (siRNA)들을 조합한 삼중-표적 siRNA (triple silencing siRNA)의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin-DBP-TIG3의 서열 구조이고, (b)는 tsiTIG3-DBP-Lamin의 서열 구조이다.
도 16은 본 발명의 삼중-표적 siRNAs, tsiLamin-DBP-TIG3 및 tsiTIG3-DBP-Lamin의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.
도 17은 본 발명의 하나의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin-DBP-TIG3(17)의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin-DBP-TIG3(15)의 서열 구조이다.
도 18은 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG3(17)의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG3(15)의 서열 구조이다.
도 19는 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일 가닥의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin-DBP-0.5TIG3의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin-DBP-0.5TIG3(17)의 서열 구조이다.
도 20은 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일 가닥의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA, tsi0.5Lamin(17)-DBP-TIG3의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 21은 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일 가닥의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG3(17)의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG(15)의 서열 구조이다.
도 22는 본 발명의 네 개의 간섭 유도 RNA (siRNA)를 조합한 사중-표적 siRNA (quadruple silencing siRNA)의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-TIG3-Lamin의 서열 구조이고, (b)는 qsiLamin-TIG3-OASIS-DBP의 서열 구조이다.
도 23은 본 발명의 하나의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-TIG3(17)-Lamin의 서열 구조이고, (b)는 qsiDBP-OASIS-TIG3(15)-Lamin의 서열구조이다.
도 24는 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA, qsiLamin(17)-TIG3(15)-OASIS-DBP의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 25는 본 발명의 일부 단일 가닥의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA, qsiDBP-OASIS-0.5TIG3-Lamin의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 26은 본 발명의 일부 짧은 길이의 단일가닥의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-0.5TIG3(17)-Lamin의 서열 구조이고, (b)는 qsi0.5Lamin(17)-TIG3-OASIS-DBP의 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 27은 본 발명의 하나의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일가닥의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-TIG3(15)-0.5Lamin(17)의 서열 구조이고, (b)는 qsiLamin(17)-0.5TIG3(15)-OASIS-DBP의 서열 구조이다.
도 28은 본 발명의 간섭 유도 RNA (siRNA)들과 함께 세포 특이적 인지서열(aptamer)을 조합한 압타머-다중 표적 간섭 유도 RNA (siRNA)의 구조를 모식적으로 나타낸 것으로, (a)는 이중-표적 siRNA와 압타머를 조합한 압타머-tsiRNA 구조이며, (b)는 삼중-표적 siRNA와 압타머를 조합한 압타머-qsiRNA 구조이다.
<110> Postech Academy-Industry Foundation
<120> Small Interfering RNAs(siRNAs) controlling multiple target genes
and method for preparing the same
<130> P07-E302
<160> 38
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 1
uguucuucug gaaguccag 19
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 2
acaagaagac cuucagguc 19
<210> 3
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 3
uagagaacgc cugagacag 19
<210> 4
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 4
aucucuugcg gacucuguc 19
<210> 5
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 5
ugagaagcga ugucuucga 19
<210> 6
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 6
acucuucgcu acagaagcu 19
<210> 7
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 7
ucguagaaua ggaggcuuc 19
<210> 8
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> siRNA
<400> 8
agcaucuuau ccuccgaag 19
<210> 9
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 9
uguucuucug gaaguccagc ugucucaggc guucucua 38
<210> 10
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 10
acaagaagac cuucaggucg acagaguccg caagagau 38
<210> 11
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 11
ugagaagcga ugucuucgac ugucucaggc guucucua 38
<210> 12
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 12
acucuucgcu acagaagcug acagaguccg caagagau 38
<210> 13
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 13
uguucuucug gaaguccagu cgaagacauc gcuucuca 38
<210> 14
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 14
acaagaagac cuucagguca gcuucuguag cgaagagu 38
<210> 15
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 15
ucguagaaua ggaggcuucc ugucucaggc guucucua 38
<210> 16
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 16
agcaucuuau ccuccgaagg acagaguccg caagagau 38
<210> 17
<211> 34
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 17
uucuucugga aguccagguc ucaggcguuc ucua 34
<210> 18
<211> 34
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 18
aagaagaccu ucagguccag aguccgcaag agau 34
<210> 19
<211> 32
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 19
uguucuucug gaagucccuc aggcguucuc ua 32
<210> 20
<211> 32
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 20
acaagaagac cuucagggag uccgcaagag au 32
<210> 21
<211> 32
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 21
uucuucugga aguccagcuc aggcguucuc ua 32
<210> 22
<211> 32
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 22
aagaagaccu ucaggucgag uccgcaagag au 32
<210> 23
<211> 30
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 23
uguucuucug gaagucucag gcguucucua 30
<210> 24
<211> 30
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 24
acaagaagac cuucagaguc cgcaagagau 30
<210> 25
<211> 30
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 25
cuucuggaag uccagcucag gcguucucua 30
<210> 26
<211> 30
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 26
gaagaccuuc aggucgaguc cgcaagagau 30
<210> 27
<211> 30
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 27
uucuucugga agucccucag gcguucucua 30
<210> 28
<211> 30
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 28
aagaagaccu ucagggaguc cgcaagagau 30
<210> 29
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 29
uguucuucug gaaguccagc ugucucaggc guucucua 38
<210> 30
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 30
gacagagucc gcaagagau 19
<210> 31
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 31
uguucuucug gaaguccag 19
<210> 32
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 32
acaagaagac cuucaggucg acagaguccg caagagau 38
<210> 33
<211> 32
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 33
uucuucugga aguccagcuc aggcguucuc ua 32
<210> 34
<211> 15
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 34
gaguccgcaa gagau 15
<210> 35
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 35
ugagaagcga ugucuucga 19
<210> 36
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 36
acucuucgcu acagaagcug acagaguccg caagagau 38
<210> 37
<211> 38
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 37
ugagaagcga ugucuucgac ugucucaggc guucucua 38
<210> 38
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> dsiRNA
<400> 38
gacagagucc gcaagagau 19
Claims (10)
- 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있는, 복수 개의 간섭 유도 RNA (siRNA)들이 조합되어 있는 다중 간섭 유도 RNA (small interfering RNA; siRNA).
- 제 1항에 있어서,상기 표적 유전자들을 제어하는 두 개의 siRNA들이 조합된 이중-표적 간섭 유도 RNA (dual silencing siRNA)인 것을 특징으로 하는 다중 간섭 유도 RNA.
- 제 1항에 있어서,상기 간섭 유도 RNA (siRNA)들을 각각의 5'-안티센스 가닥이 서로 반대 방향이 되도록 결합시킨 것을 특징으로 하는 간섭 유도 RNA.
- 제 1항에 있어서,상기 표적 유전자를 제어하는 세 개의 siRNA들이 조합된 삼중-표적 간섭 유도 RNA (triple silencing siRNA)인 것을 특징으로 하는 다중 간섭 유도 RNA.
- 제 1항에 있어서,상기 표적 유전자들을 제어하는 네 개의 siRNA들이 조합된 사중-표적 간섭 유도 RNA (quadruple silencing siRNA)인 것을 특징으로 하는 다중 간섭 유도 RNA.
- 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서,상기 siRNA들 중 하나 이상이 15개 내지 19개의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 다중 간섭 유도 RNA.
- 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서,상기 siRNA들 중 하나 이상이 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 다중 간섭 유도 RNA.
- 제 1항에 있어서,세포 특이 인지서열 (aptamer)을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 다중 간섭 유도 RNA.
- 제 1항의 다중 간섭 유도 RNA (siRNA)를 유효성분으로 하는 유전자-제어 관련 질환의 치료제.
- 제 9항에 있어서,상기 유전자-제어 관련 질환은 암 또는 바이러스성 질환을 포함하는 것을 특징으로 하는 유전자-제어 관련 질환의 치료제.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070078782A KR100929699B1 (ko) | 2007-08-06 | 2007-08-06 | 다수 표적 유전자들을 제어하는 간섭 유도 ｒｎａ들 및그들의 제조방법 |
| PCT/KR2008/004563 WO2009020344A2 (en) | 2007-08-06 | 2008-08-06 | Small interfering rnas (sirnas) controlling multiple target genes and method for preparing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070078782A KR100929699B1 (ko) | 2007-08-06 | 2007-08-06 | 다수 표적 유전자들을 제어하는 간섭 유도 ｒｎａ들 및그들의 제조방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20090014673A true KR20090014673A (ko) | 2009-02-11 |
| KR100929699B1 KR100929699B1 (ko) | 2009-12-03 |
Family
ID=40684543
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020070078782A KR100929699B1 (ko) | 2007-08-06 | 2007-08-06 | 다수 표적 유전자들을 제어하는 간섭 유도 ｒｎａ들 및그들의 제조방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100929699B1 (ko) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190009961A (ko) * | 2017-07-20 | 2019-01-30 | (주)큐리진 | Bcl2 유전자 및 bi-1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| KR20190009947A (ko) * | 2017-07-20 | 2019-01-30 | (주)큐리진 | AR 유전자 및 mTOR 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| WO2019017714A3 (ko) * | 2017-07-20 | 2019-03-07 | ㈜큐리진 | Bcl2 유전자 및 bi-1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| WO2019017713A3 (ko) * | 2017-07-20 | 2019-04-11 | ㈜큐리진 | AR 유전자 및 mTOR 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| KR20190087726A (ko) * | 2018-01-17 | 2019-07-25 | (주)큐리진 | mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| KR20200009498A (ko) * | 2018-07-19 | 2020-01-30 | (주)큐리진 | Bcl2 유전자 및 bi-1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| KR20200009286A (ko) * | 2018-07-18 | 2020-01-30 | (주)큐리진 | AR 유전자 및 mTOR 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| WO2022191661A1 (ko) * | 2021-03-12 | 2022-09-15 | ㈜큐리진 | C-met 유전자 및 pd-l1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
-
2007
- 2007-08-06 KR KR1020070078782A patent/KR100929699B1/ko active IP Right Grant
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190009961A (ko) * | 2017-07-20 | 2019-01-30 | (주)큐리진 | Bcl2 유전자 및 bi-1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| KR20190009947A (ko) * | 2017-07-20 | 2019-01-30 | (주)큐리진 | AR 유전자 및 mTOR 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| WO2019017714A3 (ko) * | 2017-07-20 | 2019-03-07 | ㈜큐리진 | Bcl2 유전자 및 bi-1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| WO2019017713A3 (ko) * | 2017-07-20 | 2019-04-11 | ㈜큐리진 | AR 유전자 및 mTOR 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| CN110945129A (zh) * | 2017-07-20 | 2020-03-31 | 株式会社库利金 | 同时抑制雄激素受体基因及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白基因的表达的核酸 |
| US10947542B2 (en) | 2017-07-20 | 2021-03-16 | Curigin Co., Ltd. | Nucleic acid simultaneously inhibiting expression of AR gene and mTOR gene |
| CN110945129B (zh) * | 2017-07-20 | 2024-02-02 | 株式会社库利金 | 同时抑制雄激素受体基因及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白基因的表达的核酸 |
| KR20190087726A (ko) * | 2018-01-17 | 2019-07-25 | (주)큐리진 | mTOR 유전자 및 STAT3 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| KR20200009286A (ko) * | 2018-07-18 | 2020-01-30 | (주)큐리진 | AR 유전자 및 mTOR 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| KR20200009498A (ko) * | 2018-07-19 | 2020-01-30 | (주)큐리진 | Bcl2 유전자 및 bi-1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
| WO2022191661A1 (ko) * | 2021-03-12 | 2022-09-15 | ㈜큐리진 | C-met 유전자 및 pd-l1 유전자의 발현을 동시에 억제하는 핵산 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100929699B1 (ko) | 2009-12-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2009020344A2 (en) | Small interfering rnas (sirnas) controlling multiple target genes and method for preparing the same | |
| KR100929699B1 (ko) | 다수 표적 유전자들을 제어하는 간섭 유도 ｒｎａ들 및그들의 제조방법 | |
| JP6865169B2 (ja) | Ｐ２１遺伝子調節のためのｒｎａ干渉剤 | |
| US9297013B2 (en) | pRNA multivalent junction domain for use in stable multivalent RNA nanoparticles | |
| AU2008250075B2 (en) | Single-chain circular RNA and method of producing the same | |
| US11091761B2 (en) | Organic compositions to treat HSF1-related diseases | |
| Aigner | Gene silencing through RNA interference (RNAi) in vivo: strategies based on the direct application of siRNAs | |
| Barik | Silence of the transcripts: RNA interference in medicine | |
| Nawrot et al. | Chemical and structural diversity of siRNA molecules | |
| JP2017079761A (ja) | 修飾を有するｄｓＲＮＡによる遺伝子発現の特異的な阻害のための組成物および方法 | |
| JP6060178B2 (ja) | 高効率のナノ粒子型二本鎖オリゴｒｎａ構造体およびその製造方法 | |
| KR20120042645A (ko) | Ｒｎａ 간섭을 유도하는 핵산 분자 및 그 용도 | |
| JP2010537640A (ja) | マイクロｒｎａ模倣剤または阻害剤としての非対称性ｒｎａ二重鎖の組成物 | |
| Zhang et al. | Antisense inhibition: oligonucleotides, ribozymes, and siRNAs | |
| CN103555722A (zh) | 利用不对称双链rna特异性抑制kras的方法和组合物 | |
| WO2008094516A2 (en) | Multi-targeting short interfering rnas | |
| TW201726920A (zh) | 具高活性及減低脫靶之siRNA構造 | |
| WO2005095613A1 (ja) | Rad51の発現抑制剤、該発現抑制剤を有効成分として含む医薬、及びその使用 | |
| AU2019346148A1 (en) | Multi-targeting nucleic acid constructs composed of multiple oligonucleotides that modulate gene expression through complimentary interactions with targets | |
| US20050203047A1 (en) | Delivery vectors for short interfering RNA, micro-RNA and antisense RNA | |
| KR100929700B1 (ko) | 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 ｒｎａ | |
| ES2216707B1 (es) | Secuencia oligoribonucleotidica homologa a una region del cdna que codifica para el receptor cd40 humano y oligoribonucleotidos duplex, vectores, composiciones farmaceuticas y usos correspondientes. | |
| KR20090014676A (ko) | 짧은 길이의 간섭 유도 ｒｎａ | |
| JP7213897B2 (ja) | 核酸ユニットとその高分子核酸及びその応用 | |
| Opalinska et al. | Nucleic Acid Therapeutics for Hematologic Malignancies—Theoretical Considerations |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| N231 | Notification of change of applicant | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20121122 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20131105 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20141126 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20151020 Year of fee payment: 7 |