KR20080106976A

KR20080106976A - 신경 줄기 세포 증식제 및 신경 줄기 세포 분화제의 연속 투여 방법

Info

Publication number: KR20080106976A
Application number: KR1020087025235A
Authority: KR
Inventors: 사무엘 와이스; 크리스토퍼 그렉; 알렌 다비도프; 조셉 터커
Original assignee: 스템 셀 테라퓨틱스 코포레이션
Priority date: 2006-03-17
Filing date: 2007-03-16
Publication date: 2008-12-09
Also published as: WO2007106986A8; JP2010138202A; AU2007229301A1; KR20080103108A; WO2007106986A1; AU2007229300B2; JP2009530235A; CA2643502A1; US20090081205A1; US20080039389A1; EP2004212A1; US8143220B2; US20120270779A1; EP2004211A4; EP2004212A4; CA2644116A1; IL193856A0; AU2007229301B2; US8333974B2; JP2009530234A

Abstract

본 발명은 신경 줄기 세포 증식제의 효과적인 투여 방법, 신경 줄기 세포 증식제의 효과적인 투여 방법을 함유하는 키트, 및 그의 용도에 관한 것이다. 특히, hCG, 프로락틴 및 EPO와 같은 신경 줄기 세포 증식제는, 단기간의 고용량의 전달과 대조적으로, 수일동안 연속 방식으로 저용량으로 포유동물 대상에게 전달된다.

Description

신경 줄기 세포 증식제 및 신경 줄기 세포 분화제의 연속 투여 방법{CONTINUOUS DOSING REGIMENS FOR NEURAL STEM CELL PROLIFERATING AGENTS AND NEURAL STEM CELL DIFFERENTIATING AGENTS}

본 발명은 신경 줄기 세포 증식제의 효과적인 투여 방법, 신경 줄기 세포 증식제의 효과적인 투여 방법을 함유하는 키트, 및 그의 용도에 관한 것이다.

관련 출원에 대한 전후 참조

본 출원은 2006년 3월 17일자로 출원된 미국 가출원 제 60/783,500 호; 2006년 4월 5일자로 출원된 미국 가출원 제 60/789,132 호; 및 2006년 10월 24일자로 출원된 미국 가출원 제 60/862,669 호에 대한 우선권 및 이들의 이점을 주장하며, 이들은 본원에 그대로 참고로 인용된다.

다분화능(multipotent) 신경 줄기 세포의 분리 및 시험관내 배양을 위한 기술의 발달(예를 들면, 미국 특허 제 5,750,376; 5,980,885; 5,851,832 호 참조)은 신경퇴행성 질환 및 질병의 치료 전망을 상당히 개선시켰다. 태아의 뇌를 이용하여 다분화능 신경 줄기 세포를 시험관내에서 분리하고 배양할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 또한, 성인의 뇌세포는 뇌세포를 복제하거나 재생할 수 없다는 오랫동안 유지된 믿음과 대조적으로, 신경 줄기 세포는 또한 성체 포유동물의 뇌에서 분리될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 태아의 뇌로부터든 성인의 뇌로부터든, 이들 줄기 세포는 자가-복제될 수 있다. 자손 세포는 뉴런, 성상세포(astrocyte) 및 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)를 포함하여 신경 세포계에서 임의의 세포로 증식되거나 분화될 수 있다. 그러므로, 이러한 발견은 이식에 사용될 수 있는 신경 세포의 공급원을 제공할 뿐 아니라, 성인의 뇌에서 다분화능 신경 줄기 세포의 존재 및 생체내에서 상기 줄기 세포들로부터 뉴런 또는 신경교세포를 생성할 가능성을 입증한다.

특정 분자들이 시험관내 또는 생체내에서 신경 줄기 세포의 수를 증가시키는 것으로 밝혀졌다(예를 들면, 미국 특허출원 공개 번호 제 20050245436, 20040136967, 20040092448, 20030095956, 20030054998, 20030054551, 20030049838, 20030049837 호 참조). 상기 증가 메카니즘은 신경 줄기 세포의 증식을 자극하고, 분화를 억제하고/하거나, 신경 줄기 세포의 사멸을 방지하는 것을 포함할 수 있다. 따라서, 이들 분자는 신경 줄기 세포, 따라서 뉴런 및 신경교 세포를 이들 세포를 필요로 하는 대상에서 생성하기 위해 사용될 수 있다.

발명의 요약

본원에서는 신경 줄기 세포 증식제 및 신경 줄기 세포 분화제를 위한 효과적인 투여 방법, 키트 및 그의 용도가 제공된다. 특히, 신경 줄기 세포 증식제는, 단기간에 고용량의 투여와 대조적으로, 저용량으로 연속 방식으로 포유동물 대상에게 전달된다. 상기 물질 조성물 및 방법은 급성으로(예를 들면, 신경 손상 또는 신경학적 증상의 개시후 수일 이내) 사용되거나 또는 만성으로(예를 들면, 지속적인 신경 손상 또는 진행성 신경학적 증상에) 사용될 수 있다.

따라서, 본원에서는, 키트를 사용하거나 사용하지 않고, 포유동물에게 일정 기간동안 연속적으로 신경 줄기 세포 증식제를 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 신경 줄기 세포의 수를 증가시키는데 있어 효과량의 신경 줄기 세포 증식제의 효능을 최적화하기 위한 방법 및 키트가 제공되며, 이때 상기 기간동안 투여되는 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량은 효과량과 동일하고, 상기 기간은 3 일 이상이다.

또한, 본원에서는 키트를 사용하거나 사용하지 않고, 포유동물에게 일정 기간동안 연속적으로 신경 줄기 세포 증식제를 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 신경퇴행성 질환 또는 질병을 치료 또는 개선하는데 있어 효과량의 신경 줄기 세포 증식제의 효능을 최적화하기 위한 방법 및 키트가 제공되며, 이때 상기 기간동안 투여되는 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량은 효과량과 동일하고, 상기 기간은 3 일 이상이다.

또한, 본원에서는 포유동물에서 신경퇴행성 질환 또는 질병을 치료 또는 개선하기 위한 방법 및 키트가 제공된다. 상기 방법은 키트를 사용하거나 사용하지 않고, 포유동물에게 일정 기간동안 연속적으로 효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 기간은 3 일 이상이다.

또한, 본원에서는 포유동물에서 신경퇴행성 질환 또는 질병을 치료 또는 개선하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 포유동물에게 신경 줄기 세포 증식제 및 신경 줄기 세포 분화제를 투여하는 것을 포함하는데, 이때 키트를 사용하거나 사용하지 않고, 신경 줄기 세포 증식제는 1차 치료 기간동안 3회 이상 연속적으로 전신 투여되며, 신경 줄기 세포 분화제는 2차 치료 기간동안 투여된다. 신경 줄기 세포 증식제 및 신경 줄기 세포 분화제는 연속적으로 또는 간헐적으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 신경 줄기 세포 증식제는 1차 치료 기간의 제 1, 2 및 3 일에 연속적으로 투여될 수 있고, 이어서 신경 줄기 세포 분화제는 2차 치료 기간의 제 1, 2 및 3 일에 연속적으로 투여될 수 있다.

상기 방법 및 키트에서, 기간은, 예를 들면, 3 일 이상일 수 있다. 선택적으로, 상기 방법은 포유동물에게 2차 치료 기간에 신경 줄기 세포 증식제를 연속적으로 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 이때 2차 치료 기간은 기간이 종료된 후에 1일 이상의 간격으로 시작되며, 2차 치료 기간은 3 일 이상이다. 2차 치료 기간은 1차 치료 기간과 같이, 예를 들면, 3 일 이상일 수 있다. 상기 치료 스케줄은 2차, 3차, 4차, 5차 등의 치료 기간하에 수회 또는 많은 회수로 반복될 수 있다. 상기 치료 스케줄은, 1회, 2회, 수회 또는 많은 회수로 투여되든지 아니든지, 하나 이상의 키트의 형태를 취할 수 있으며, 이때 효과량의 신경 줄기 세포 증식제 및 선택적으로 신경 줄기 세포 분화제가 특정 치료 기간동안 또는 다수의 치료 기간동 안의 치료를 위해 제공된다.

방법 및 키트의 상세한 내용은 첨부한 도면 및 하기의 설명에 나타낸다. 상기 방법 및 키트의 다른 특징, 목적 및 이점은 설명 및 도면, 및 청구의 범위로부터 명백할 것이다.

도 1은 뇌실내 주입에 사용된 농도의 10, 15 및 20배로 수컷 래트에 6 일간 프로락틴을 피하 주입한 결과를 나타낸다. 각각의 동물로부터 8개 절편들에 대한 뇌실하 영역(SVZ)에서 브로모데옥시우리딘 양성(BrdU+) 세포의 총수를 나타내었다. SVZ 증식 수준에서 최적의 증가는 15배 용량(6 일간 170 μg/일)에서 관찰되었다(10배 = 113 μg/일; 20 배 = 226 μg/일; 대조군 = 래트 혈청 알부민 단독(RSA)). 대조군에 대한 유의수준: 10x = *p<0.05; 15x = **p<0.01; 20x = p<0.05; 모든 조건에 대해 n = 3; 터키(Tukey) 사후 검증하에 일원 변량 분석(ANOVA).

도 2는 단일 일일 복강내 주사를 이용한, 수컷 래트에서 프로락틴 투여의 결과를 나타낸다. 각 투여 방법에 대해 절편 당 BrdU+ 세포의 총수를 나타내었다. (A) 3일의 고용량에서 SVZ 증식의 약간의 증가가 관찰되었다. (B) SVZ 증식 수준을 증가시키기 위한 가장 확실한 투여 조건은 6 일동안 매일 낮은 170 μg/일 용량을 사용하였다. 유의수준은 RSA 대조군에 대한 것이다. n = 3; *p<0.05; **p<0.01; 일원 변량 분석(ANOVA)후 터키 사후 검증.

도 3은 뇌졸중후(뇌졸중 = 제 0 일) 제 1, 3 및 5 일에 hCG의 단일 근육내 주사가 전뇌 SVZ에서 상당히 증가된 증식을 유발함을 나타낸다. 뇌실당 포스포-히스톤 H3 양성(pHH3+) 세포의 수의 상당한 증가가 1,000 μg 용량 조건(n = 3; *p<0.05; 터키 사후검증하 일원 변량 분석(ANOVA))에서 관찰되었다. 영상은 1,000 μg hCG를 투여한 동물에 대한 RSA 연뇌막 스트립(pial strip) 대조군 래트에서 측뇌실의 배측면 영역에서의 핵 표지 훽스트(Hoechst) 및 pHH3 발현을 나타내며, 1,000 μg 투약 동물의 SVZ에서 총 세포수 및 pHH3 발현의 증가가 주목된다.

도 4는 뇌졸중후(뇌졸중 = 제 0 일) 제 1, 3 및 5 일에 1,000 μg/일의 hCG의 단일 근육내 주사가 전뇌 SVZ에서 증가된 신경생성을 유발함을 나타낸다. 더블코르틴(doublecortin)+ 뉴런의 수를 투약 동물에서 정량화하였으며, 1,000 μg 투약 동물에서 두배가 되었다(n = 3; **p<0.01).

도 5는 뇌졸중후(뇌졸중 = 제 0 일) 24 시간후에 시작하여 7 일동안 매일 제공된 hCG의 단일 근육내 주사 결과를 나타낸다. (A) 매일 330 μg/주사 투여 방법은 모든 다른 투여 조건 및 대조군(n = 3; *p<0.01; 터키 사후검증하에 일원 ANOVA)에 비해 SVZ에서 증식 pHH3+ 세포의 수를 상당히 증가시켰다. (B) 투약 래트의 운동 피질에서 허혈성 병소의 관찰 결과, 330 μg/주사 일일 투여 방법을 적용한 동물들이 새로운 조직 성장 및 병소 부위가 조직 충전물로 채워지는 것을 보이는 것으로 나타났다.

도 6은 BrdU+ 세포의 총수로 확인된, 330 μg/주사 일일 hCG 투여 동물의 SVZ에서 증가된 증식을 나타낸다. 뇌실당 BrdU+ 세포의 수는 대조군 및 100 μg/ 주사에 비해 330 μg/주사 조건에서 상당히 증가되었다(p<0.01; n = 3; 터키 사후검증하에 일원 ANOVA). 이러한 결과는 pHH3 염색을 이용하여 관찰된 증식에서의 증가를 추가로 확인시킨다.

다양한 도면에서 유사한 참조 기호는 유사한 요소를 나타낸다.

현재, 신경학적 질환 또는 질병의 치료에 사용하기 위해 임상적으로 인가된 신경 줄기 세포 증식제 및 분화제는 없다. 이들 약제는 신경학적 질환 및 질병을 치료하는데 유용하므로, 이들 약제를 사용한 효과적인 투여 방법이 요구된다. 신경 줄기 세포 증식 및 분화제를 위한 효과적인 투여 방법, 신경 줄기 세포 증식제를 위한 효과적인 투여 방법을 포함하는 키트, 및 그의 용도가 본원에 제공된다. 특히, 신경 줄기 세포 증식제는 단기간에 고용량의 투여와 대조적으로, 연속 방식으로 저용량으로 포유동물 대상에게 전달된다. 예를 들면, 주어진 총 효과용량에 대해, 6 일간 총량의 1/6의 일일 전달을 포함하는 투여 방법이 3 일간 총량의 1/3의 전달보다 더 효과적이었다.

상기 방법 및 키트를 더 상세히 설명하기 전에, 본 출원에 사용된 용어는 달리 언급하지 않는 한, 하기와 같이 정의된다. 본원에서 표제는 구성을 위한 것 뿐이며 본원에 제공된 설명 또는 첨부된 청구의 범위를 제한하는 것을 의미하는 것이 아니다.

정의

신경 줄기 세포 또는 NSC는 신경 세포계의 줄기 세포이다. 줄기 세포는 자체로 재생될 수 있는 세포이다. 즉, 줄기 세포 분열로부터 비롯된 딸 세포가 줄기 세포를 포함한다. 신경 줄기 세포는 궁극적으로 뉴런, 성상세포 및 희소돌기아교세포(성상세포 및 희소돌기아교세포는 총칭적으로 신경교 또는 신경교 세포로 불린다)를 포함하여 신경 세포계중의 모든 세포형으로 분화될 수 있다. 따라서, 본원에 언급된 신경 줄기 세포는 다분화능 신경 줄기 세포이다.

신경 줄기 세포 증식제는, 예를 들면, 증식을 자극하거나, 분화를 억제하고/하거나, 신경 줄기 세포의 사멸을 방지함으로써 신경 줄기 세포의 수를 증가시킬 수 있는 물질이다.

신경 줄기 세포 분화제는 뉴런 생성 또는 신경교 생성을 선택적으로 증대시킬 수 있는 물질이다.

물질을 대상에게 연속적으로 전달 또는 투여하는 것은 일정 기간동안, 물질을 연속적인 날들동안 하루에 1회 이상 또는 종일까지 전달 또는 투여하는 것을 의미한다. 예를 들면, 물질은 주사(예를 들어, 근육내 또는 피하)에 의해 전신 투여되거나, 또는 하루에 1회 이상 매일 경구 섭취되거나, 또는 대상의 조직 또는 혈류중에 매일 전달되게 하는 방식으로 주입에 의해 투여될 수 있다. 선택적으로, 상기 물질은 주입에 의해 또는 주입 이외의 다른 수단에 의해 전달된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 전신적으로란 용어는 대뇌 뇌실내 주입을 포함하지 않는다. 물질이 연속적으로 전달 또는 투여되는 기간은 3 일로부터 수년까지, 심지어 대상자의 남은 수명동안 지속될 수 있다. 예를 들면, 상기 기간은 3 내지 6 일, 3 내지 14 일, 3 내지 21 일, 3 내지 28 일, 1 내지 4 개월, 1 내지 6 개월, 1 내지 9 개월, 1 내지 12 개월, 1 내지 2 년, 1 내지 3 년, 1 내지 5 년, 1 내지 10 년 등일 수 있다. 또 다른 예의 경우, 연속 전달을 위한 치료 기간은 약 3 일 이상, 약 4 일 이상, 약 5 일 이상, 약 6 일 이상, 약 7 일 이상, 또는 약 14 일 이상일 수 있다. 또한, 상기 물질은 투여 기간의 제 1, 2 및 3 일에 연속적으로 전달될 수 있다.

신경퇴행성 질환 또는 질병은 뉴런 소실 또는 기능장애와 관련된 질환 또는 의학적 상태이다. 신경퇴행성 질환 또는 질병의 예로는 신경퇴행성 질환, 중추신경계 손상 또는 기능장애가 포함된다. 신경퇴행성 질환으로는, 예를 들면, 알츠하이머병 또는 기타 치매, 다발성 경화증(MS), 정신분열증, 시력 감퇴, 녹내장, 당뇨병성 망막증, 말초신경 장애, 헌팅톤병, 근위축성 측삭 경화증, 및 파킨슨병이 포함된다. CNS 손상으로는, 예를 들면, 뇌졸중과 같은 뇌혈관 사고(예를 들면, 출혈성 뇌졸중, 국소 허혈성 뇌졸중, 또는 전뇌 허혈성 뇌졸중), 안허혈, 및 경막 정맥동 혈전증; 외상성 뇌 또는 척수 손상(예를 들면, 뇌 또는 척수 수술 또는 신체 사고에 의해 야기된 손상); 뇌진탕; 약물(예를 들면, 화학치료제, 기분전환용 약물, 및 신경이완제)에 의해 야기된 손상; 관상동맥 우회로 이식(CABG) 수술; 및 분만시 허혈이 포함된다. CNS 기능장애로는, 예를 들면, 우울증, 간질, 신경증 및 정신병이 포함된다. 신경퇴행성 질병의 예로는 노화가 포함된다. 뇌실하 영역중 신경 줄기 세포의 수는 노화된 마우스에서 상당히 감소된다. 따라서, 노화와 관련된 문제의 개선은 신경 줄기 세포 증식제, 및 선택적으로, 신경 줄기 세포 분화제를 상기 방법 및 키트에 따라 투여함으로써 달성된다.

치료 및 개선은 질환 또는 의학적 상태의 하나 이상의 증상의 경감 또는 완전한 제거를 의미한다. 상기 치료 또는 개선은 질환 또는 의학적 상태의 위험이 있는 사람에게 투여할 때 하나 이상의 증상의 개시의 지연 또는 경감을 포함할 수 있다.

천연 인자와 실질적인 서열 유사성을 공유하는 폴리펩티드는 아미노산 수준에서 천연 인자와 약 30% 이상 동일하다. 폴리펩티드는 아미노산 수준에서 천연 인자와 바람직하게는 약 40% 이상, 보다 바람직하게는 약 60% 이상, 보다 더 바람직하게는 약 70% 이상, 가장 바람직하게는 약 80% 이상 동일하다. 따라서, 실질적인 유사성은 약 30 내지 99% 동일성을 구성할 수 있다.

유사체 또는 변이체와 천연 인자와의 동일성 퍼센트 또는 동일성%란 어구는 두 서열을 정렬할 때 유사체 또는 변이체에서도 또한 발견되는, 천연 인자중 아미노산 서열의 퍼센트를 말한다. 동일성 퍼센트는 당해 분야에 확증된 임의의 방법 또는 연산, 예를 들면, LALIGN 또는 BLAST에 의해 측정할 수 있다.

폴리펩티드는 천연 인자에 대한 수용체에 결합할 수 있거나 또는 천연 인자에 대해 야기된 다클론성 항체에 의해 인지되는 경우, 천연 인자의 생물 활성을 갖는다. 바람직하게, 폴리펩티드는 수용체 결합 분석에서 천연 인자에 대한 수용체에 특이적으로 결합할 수 있다.

천연 인자의 기능성 작용물질은 천연 인자의 수용체에 결합하고 상기 수용체를 활성화시키는 화합물이지만, 반드시 천연 인자와 실질적인 서열 유사성을 공유할 필요는 없다.

황체형성 호르몬 또는 LH는 (1) 천연 포유동물 LH, 바람직하게는 천연 인간 LH와 실질적인 서열 유사성을 공유하는 폴리펩티드를 포함하고; (2) 천연 포유동물 LH의 생물 활성을 갖는 단백질이다. 천연 포유동물 LH는 뇌하수체 전엽에서 분비되는 성선자극호르몬이다. LH는 비-공유 결합된 알파 및 베타 아단위로 이루어진 헤테로이량체이다. 알파 아단위는 LH, FSH 및 hCG에서 공통적이며, 베타 아단위는 각 호르몬에 특이적이다. 본 발명의 방법 및 키트에 유용한 LH는 천연 알파 아단위를 가질 수 있으며, 베타 아단위는 천연 포유동물 LH와 실질적인 서열 유사성을 공유한다. 또는, LH는 천연 베타 아단위를 가질 수 있고, 알파 아단위는 천연 포유동물 LH와 실질적인 서열 유사성을 공유한다. LH는 또한 천연의 상응하는 아단위와 실질적인 서열 유사성을 공유하는 알파 및 베타 아단위를 둘 다 가질 수 있다. 따라서, 용어 LH는 천연 LH 아단위의 결실, 삽입 또는 치환 돌연변이체를 포함하는 LH 유사체를 포함한다. 또한, 용어 LH는 다른 종으로부터의 LH 및 그의 천연 변이체를 포함한다. 더욱이, LH는 또한 천연 포유동물 LH 수용체의 기능성 작용물질일 수 있다.

인간 융모성 성선자극호르몬 또는 hCG는 (1) 천연 hCG와 실질적인 서열 유사성을 공유하는 폴리펩티드를 포함하고; (2) 천연 hCG의 생물 활성을 갖는 단백질이다. 천연 hCG는 비-공유 결합된 알파 및 베타 아단위로 이루어진 헤테로이량체이다. 알파 아단위는 LH, FSH 및 hCG에서 공통적이며, 베타 아단위는 각 호르몬에 특이적이다. 그러나, hCG 및 LH의 베타 아단위는 85% 서열 유사성을 공유한다. 본 발명의 방법 및 키트에 유용한 hCG는 천연 알파 아단위를 가질 수 있으며, 베타 아단위는 천연 hCG와 실질적인 서열 유사성을 공유한다. 또는, hCG는 천연 베타 아단위를 가질 수 있으며, 알파 아단위는 천연 hCG와 실질적인 서열 유사성을 공유한다. hCG는 또한 천연의 상응하는 아단위와 실질적인 서열 유사성을 공유하는 알파 및 베타 아단위를 둘 다 가질 수 있다. 따라서, 용어 hCG는 천연 hCG 아단위의 결실, 삽입 또는 치환 돌연변이체를 포함하는 hCG 유사체를 포함한다. 또한, 용어 hCG는 다른 종으로부터의 hCG 및 그의 천연 변이체를 포함한다. 더욱이, hCG는 또한 천연 포유동물 hCG/LH 수용체의 기능성 작용물질일 수 있다.

프로락틴은 (1) 천연 포유동물 프로락틴, 바람직하게는 천연 인간 프로락틴과 실질적인 서열 유사성을 공유하고; (2) 천연 포유동물 프로락틴의 생물 활성을 갖는 폴리펩티드이다. 천연 인간 프로락틴은 주로 뇌하수체에서 합성되는 199개 아미노산 폴리펩티드이다. 따라서, 용어 프로락틴은 천연 프로락틴의 결실, 삽입 또는 치환 돌연변이체인 프로락틴 유사체를 포함한다. 또한, 용어 프로락틴은 다른 종으로부터의 프로락틴 및 그의 천연 변이체를 포함한다.

또한, 프로락틴은 또한 천연 포유동물 프로락틴 수용체의 기능성 작용물질일 수 있다. 예를 들면, 기능성 작용물질은 프로락틴 수용체에 대해 미국 특허 제 6,333,031 호에 개시된 활성화 아미노산 서열; 프로락틴 수용체에 대해 작용물질 활성을 갖는 금속 착화된 수용체 리간드(미국 특허 제 6,413,952 호); 인간 성장 호르몬의 유사체이나 프로락틴 작용물질로 작용하는 G120RhGH[Mode et al., 1996]; 또는 미국 특허 제 5,506,107 및 5,837,460 호에 기술된 바와 같은 프로락틴 수용체에 대한 리간드일 수 있다.

표피 성장 인자 또는 EGF는 천연 EGF, 또는 천연 EGF와 실질적인 아미노산 서열 유사성, 및 천연 EGF와 하나 이상의 생물 활성, 예를 들어, EGF 수용체에 대한 결합과 같은 생물 활성을 공유하는 임의의 EGF 유사체 또는 변이체를 의미한다. 임의 종의 천연 EGF, TGFα 또는 재조합 변형된 EGF가 특히 EGF로서 포함된다. 특정 예로는 2개 C-말단 아미노산의 결실 및 51번 위치에서 중성 아미노산 치환을 갖는 재조합 변형 EGF(특히, EGF51 gln51; 미국 특허출원 공개번호 20020098178 A1 호), 16번 위치에서 His 잔기가 중성 또는 산성 아미노산으로 치환된 EGF 뮤테인(EGF-X₁₆)(미국 특허 제 6,191,106 호), 천연 EGF의 아미노 말단 잔기가 결여된 EGF의 52-아미노산 결실 돌연변이체(EGF-D), N-말단 잔기 및 2개의 C-말단 잔기(Arg--Leu)가 결실된 EGF 결실 돌연변이체(EGF-B), 21번 위치에서 Met 잔기가 산화된 EGF-D(EGF-C), 21번 위치에서 Met 잔기가 산화된 EGF-B(EGF-A), 헤파린-결합 EGF-유사 성장 인자(HB-EGF), 베타셀룰린, 암피레귤린, 뉴레귤린, 또는 이들중 임의의 것을 포함하는 융합 단백질이 포함되지만, 이로 한정되지는 않는다. 다른 유용한 EGF 유사체 및 변이체는 미국 특허출원 공개번호 20020098178 A1 호 및 미국 특허 제 6,191,106 및 5,547,935 호에 기술되어 있다.

더욱이, EGF는 또한 천연 포유동물 EGF 수용체의 기능성 작용물질일 수 있다. 예를 들면, 기능성 작용물질은 EGF 수용체에 대해 미국 특허 제 6,333,031 호에 개시된 활성화 아미노산 서열, 또는 EGF 수용체에 대한 작용물질 활성을 갖는 항체일 수 있다([Fernandez-Pol, 1985] 및 미국 특허 제 5,723,115 호).

뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성화 폴리펩티드 또는 PACAP는 천연 PACAP, 또는 천연 PACAP와 실질적인 아미노산 서열 유사성, 및 PACAP 수용체에 대한 결합과 같이 천연 PACAP와 하나 이상의 생물 활성을 공유하는 임의의 PACAP 유사체 또는 변이체이다. 제한하지 않고, 유용한 PACAP 유사체 및 변이체로는 PACAP의 38 아미노산 및 27 아미노산 변이체(각각, PACAP38 및 PACAP27), 및 예를 들어, 미국 특허 제 5,128,242; 5,198,542; 5,208,320; 5,326,860; 5,623,050; 5,801,147 및 6,242,563 호에 개시된 유사체 및 변이체가 포함된다.

더욱이, PACAP는 또한 천연 포유동물 PACAP 수용체의 기능성 작용물질일 수 있다. 예를 들면, 기능성 작용물질은 PACAP 유형-1 수용체의 특이적 작용물질로서 작용하는 폴리펩티드인 막사딜란일 수 있다[Moro et al., 1997].

에리트로포이에틴 또는 EPO는 천연 EPO, 또는 천연 EPO와 실질적인 아미노산 서열 유사성, 및 EPO 수용체에 대한 결합과 같이 천연 EPO와 하나 이상의 생물 활성을 공유하는 임의의 EPO 유사체 또는 변이체를 의미한다. 에리트로포이에틴 유사체 및 변이체는, 예를 들면, 미국 특허 제 6,048,971 및 5,614,184 호에 개시되어 있다.

더욱이, EPO는 또한 천연 포유동물 EPO 수용체의 기능성 작용물질일 수 있다. 예를 들면, 기능성 작용물질은 EPO 모방 펩티드 1(EMP1; [Johnson et al., 2000]); 문헌 [Wrighton et al., 1996] 및 미국 특허 제 5,773,569 호에 기술된 바와 같은 EPO의 단 펩티드 모방체중 하나; 문헌 [Kaushansky, 2001]에 기술된 바와 같은 임의의 소분자 EPO 모방체; 미국 특허 제 5,885,574 호, WO 96/40231 호, WO 97/48729 호, 문헌 [Fernandez-Pol, 1985] 또는 미국 특허 제 5,723,115 호에 기술된 바와 같이 EPO 수용체를 활성화시키는 항체; EPO 수용체에 대해 미국 특허 제 6,333,031 호에 개시된 바와 같은 활성화 아미노산 서열; EPO 수용체에 대해 작용물질 활성을 갖는 금속 착화된 수용체 리간드(미국 특허 제 6,413,952 호); 또는 미국 특허 제 5,506,107 및 5,837,460 호에 기술된 바와 같은 EPO 수용체에 대한 리간드일 수 있다.

LH/hCG-유도제는, 동물에게 제공될 때 동물에서 LH 또는 hCG의 양을 증가시킬 수 있는 물질이다. 예를 들면, LH-방출 호르몬(LHRH)은 LH의 분비를 자극한다.

페로몬은, 통상적으로 반대 성의, 동일종의 또 다른 동물에게 신호로 작용하는 물질이다. 포유동물의 페로몬은 단백질 또는 소분자일 수 있다. 바람직하게, 페로몬은 2-2급-뷰틸-4,5-다이하이드로티아졸(SBT), 2,3-데하이드로-엑소-브레비코민(DHB), 알파 및 베타 파르네센, 6-하이드록시-6-메틸-3-헵타논, 2-헵타논, 트랜스-5-헵텐-2-온, 트랜스-4-헵텐-2-온, n-펜틸 아세테이트, 시스-2-펜텐-1-일-아세테이트, 2,5-다이메틸피라진, 도데실 프로피오네이트 및 (Z)-7-도데센-1-일 아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된다(문헌 [Dulac et al., 2003] 참조).

효과량은 의도한 목적을 달성하기에 충분한 치료제의 양이다. 예를 들면, 신경 줄기 세포의 수를 증가시키기 위한 LH 또는 hCG의 효과량은, 생체내 또는 시험관내에서, 경우에 따라, 신경 줄기 세포의 증가를 야기하기에 충분한 양이다. 신경퇴행성 질환 또는 질병을 치료 또는 개선하기 위한 LH 또는 hCG의 효과량은 신경퇴행성 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 경감시키거나 제거하기에 충분한 LH/hCG의 양이다. 주어진 치료제의 효과량은 약제의 성질, 투여 경로, 치료제를 투여받는 동물의 크기 및 종, 및 투여 목적과 같은 요인들에 따라 달라질 것이다. 각각의 개별적 경우에서 효과량은 당해 분야에 확증된 방법에 따라 숙련된 전문가에 의해 실험적으로 결정될 수 있다.

신경 줄기 세포 증식제의 동일효능량은 또 다른 신경 줄기 세포 증식제와 동일하거나 동등한 효과를 얻기 위해 필요한 신경 줄기 세포 증식제의 양이다. 동일효능량은 동일효능량의 상대적 수준 또는 결과에 의해 특정화될 수 있다. 따라서, 동일효능량 또는 용량은 또 다른, 특정 신경 줄기 세포 증식제로서 혈청 또는 뇌척수액에서 동일 수준을 수득하기 위해 필요한 신경 줄기 세포 증식제의 양 또는 용량일 수 있다.

약물 전달 장치는 효과량의 신경 줄기 세포 증식제 또는 분화제의 투여에 적합한 장치이다. 약물 전달 장치는, 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 결장내, 기관지내, 복강내, 비강내, 혈관내, 척수강내, 두개내, 골수내, 흉막강내, 피내, 피하, 근육내, 복강내, 경구, 국소 투여, 폐 투여 또는 그의 임의의 조합을 포함하여, 당해 분야에 확증된 임의의 방법에 의해 신경 줄기 세포 증식제 또는 분화제의 투여를 수행할 수 있다. 약물 전달 장치는, 예를 들면, 삼투압 펌프를 포함하여, 이식용 장치 또는 펌프일 수 있다. 선택적으로, 약물 전달 장치는 주입 장치 또는 그의 구성요소이거나, 또는 주입 이외의 다른 수단을 위한 장치이다.

연속 전달

프로락틴의 투여 방법을 개선하기 위해, 다양한 양의 프로락틴을 6 일간 매일 래트에게 투여하였으며, 신경 줄기 세포수에 대한 효과를 조사하였다(실시예 1). 결과는 170 μg/일이 본 투여 스케줄에서 최적량임을 나타내었다. 이어서, 상기 투여 방법, 즉, 6 일간 약 170 μg/일을, 투여 기간을 단축(3 일간 170 μg/일)하거나 또는 보다 높은 일일 용량과 단축된 기간을 조합하여 유사한 총 용량(3 일간 약 396 μg/일)을 달성함으로써 변형시켰다. 결과는 보다 긴 기간동안 보다 낮은 용량의 연속 전달이 보다 고용량과 보다 짧은 전달 시간의 조합보다 더 효과적임을 나타낸다.

따라서, 본원에서는 포유동물에게 일정 기간동안 연속적으로 신경 줄기 세포 증식제를 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 신경 줄기 세포의 수를 증가시키는데 있어 효과량의 신경 줄기 세포 증식제의 효능을 최적화하기 위한 방법이 제공되며, 이때 상기 기간동안 투여되는 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량은 효과량과 동일하고, 상기 기간은 3 일 이상이다.

포유동물에게 일정 기간동안 연속적으로 신경 줄기 세포 증식제를 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 신경퇴행성 질환을 치료 또는 개선하는데 있어 효과량의 신경 줄기 세포 증식제의 효능을 최적화하기 위한 방법이 제공되며, 이때 상기 기간동안 투여되는 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량은 효과량과 동일하고, 상기 기간은 3 일 이상이다.

또한, 포유동물에게 일정 기간동안 연속적으로 효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 신경퇴행성 질환을 치료 또는 개선하기 위한 방법이 제공되며, 이때 상기 기간은 3 일 이상이다.

또한, 본원에서는 포유동물에서 신경퇴행성 질환 또는 질병을 치료 또는 개선하는 또 다른 방법이 제공된다. 상기 방법은 포유동물에게 신경 줄기 세포 증식제 및 신경 줄기 세포 분화제를 투여하는 것을 포함하는데, 이때 상기 신경 줄기 세포 증식제는 1차 치료 기간동안 3회 이상 전신적으로 연속 투여되고, 상기 신경 줄기 세포 분화제는 2차 치료 기간동안 투여된다.

본원에 제공된 방법은, 예를 들면, 효과량의 증식제를 신경퇴행성 질환 또는 질병을 갖는 대상에게 투여함으로써 신경퇴행성 질환 또는 질병의 치료에 증식제인 프로락틴, hCG, LH, G-CSF, GM-CSF, 페로몬 또는 VEGF를 사용할 수 있다. 예로서, 증식제 hCG 및 LH는 동일 수용체에 결합하며, 본원에 제공된 특정 예에서 동일 용량으로 상호교환적으로 사용될 수 있다. 또 다른 예로서, 증식제 hCG는 약 120 내지 200 IU/kg/일의 용량으로 근육내(IM) 투여한 후 약 570 내지 950 IU/kg/일의 EPO를 정맥내 투여할 수 있다. 또 다른 예로, hCG를 160 IU/kg/일의 용량으로 근육내 투여한 후 765 IU/kg/일의 EPO를 정맥내 투여할 수 있다. 신경 줄기 세포 자극제의 상기와 같은 투여 후에 EPO와 같은 분화제의 수일간의 투여가 이어질 수 있다. 동일 용량의 다른 신경 줄기 세포 증식제도 또한 유사한 방법으로 사용될 수 있다.

본원에는 또한 치료 기간동안 사용하기 위한 투여량의 신경 줄기 세포 증식제, 및 키트를 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 제공하기 위한 키트가 제공되는데, 이때 상기 치료 기간동안 투여된 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량은 효과량과 동일하고, 상기 치료 기간은 3 일 이상이다.

상기 키트는 또한 치료 기간동안 사용하기 위한 투여량의 분화제를 제공할 수 있으며, 이때 상기 치료 기간동안 투여된 분화제의 총 투여량은 효과량과 동일하고, 상기 치료 기간은 3 일 이상이다.

키트중 신경 줄기 세포 증식제, 분화제 또는 다른 약제 각각의 총 투여량은 하나의 용기, 다수의 용기, 또는 그의 임의의 조합으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 신경 줄기 세포 증식제 또는 증식제들에 대한 총 투여량은, 예를 들면, 치료될 사람 또는 간병인과 같은 또 다른 사람에 의해 계량 용량을 제공하기에 적합하거나 용량 적출에 적합한 하나의 용기에 제공될 수 있다. 단일 용기 대신, 신경 줄기 세포 증식제 또는 증식제들은 매일, 매주, 매월 등의 투여에 적당한 용량을 위한 분취량을 제공하는 다수의 용기에 제공될 수 있다. 분화제 또는 다른 약제들을 위한 단일 용기 또는 다수의 용기가 유사하게 키트에 제공될 수 있다. 신경 줄기 세포 증식제의 하나의 용기 및 다수의 분화제 용기 또는 그 반대로 키트에 포함될 수 있는 조합도 또한 포함될 수 있다. 또한, 1차 치료 기간동안 신경 줄기 세포 증식 인자의 총 투여량이 단일 용기 또는 다수의 용기에 제공될 수 있고, 2차 치료 기간동안 총 투여량이 단일 용기 또는 다수의 용기에 제공될 수 있으며, 그의 임의의 조합도 가능하다.

키트는 또한 환자에서 적혈구용적(hematocrit) 수준을 모니터하기 위한 장치 또는 수단, 또는 환자로부터 일정량의 혈액을 제거하기에 적당한 장치, 또는 모니터 및 혈액 채취 장치 둘 다를 포함할 수 있다. 혈액 채취 및 모니터링은 적혈구용적 수준을 허용 수준이상으로 상승시킬 수 있으므로 바람직하다. 허용되는 적혈구용적 수준은 당해 분야에 확증된 임의의 표준에 의해 측정할 수 있다.

키트는 의료 시설, 예를 들면, 입원 의료 시설 또는 응급 의료 시설에서 사용하기에 적당할 수 있다. 의료 시설은, 예를 들면, 병원을 포함한다. 상기 키트는 또한 입원 의료 시설로부터 퇴원후에 또는 입원 의료 시설에서 승인없이 사용하기에 적당하다. 키트 형태의 포장은 유리하게는, 예를 들면, 가정, 장기 의료 시설 등에서, 자가-치료, 외래환자 치료, 또는 간병인이나 보건의료인에 의한 치료에 의해, 장기 의료 시설 또는 가정에서 환자의 치료를 허용함으로써 의료 시설로부터 환자의 조기 퇴원을 조장한다.

상기 방법 및 키트에서, 기간(즉, 치료 기간)은, 예를 들면, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 21, 28 일 이상, 또는 약 3 내지 약 28 일중 임의의 날수동안일 수 있다. 선택적으로, 상기 방법 및 키트는 포유동물에게 2차 치료 기간에 신경 줄기 세포 증식제를 연속적으로 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 이때 2차 치료 기간은 기간이 종료된 후에 1일, 2일 또는 3일 이상의 간격으로 시작되며, 2차 치료 기간은 3일 이상이다. 2차 치료 기간은 1차 치료 기간과 같이, 예를 들면, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 21 또는 28 일 이상일 수 있다. 1차 치료 기간과 다음 치료 기간 사이의 간격은 또한, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 21 또는 28 일 이상일 수 있다. 상기 치료 스케줄은 수회 또는 많은 회수로 반복될 수 있다. 2차 또는 후속 치료 기간에 사용되는 신경 줄기 세포 증식제는 1차 치료 기간 또는 다른 치료 기간에 사용되는 신경 줄기 세포 증식제와 같거나 다를 수 있다. 또한, 하나보다 많은 신경 줄기 세포 증식제가 단일 치료 기간에 사용될 수 있다. 따라서, 상기 방법에 유용한 키트는 하나 이상의 치료 기간동안 하나 이상의 신경 줄기 세포 증식제를 함유할 수 있다.

신경 줄기 세포 증식제는 당해 분야에서 확증된 임의의 방법에 의해, 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 결장내, 기관지내, 복강내, 비강내, 혈관내, 척수강내, 두개내, 골수내, 흉막강내, 피내, 피하, 근육내, 경구, 국소 투여, 폐 투여 또는 그의 임의의 조합에 의해 투여할 수 있다. 선택적으로, 투여용 약물 전달 장치 또는 그의 구성요소가 신경 줄기 세포 증식제를 함유하는 키트에 포함될 수 있다.

본원에 기술된 방법은 또한 포유동물의 생물 유체중 신경 줄기 세포 증식제 신경 줄기 세포 분화제의 수준을 관찰하는 것을 포함할 수 있다. 관찰된 생물 유체는, 예를 들면, 뇌척수액 또는 혈액일 수 있다. 예를 들면, 혈청중 hCG(또는 또 다른 신경 줄기 세포 증식제 또는 신경 줄기 세포 분화제)의 수준은 치료 기간 중 또는 후에 투여한 후 측정할 수 있다. 동일 수준의 다양한 신경 줄기 세포 증식제 또는 신경 줄기 세포 분화제를 둘 다 생물 유체중에서 측정하고 관찰할 수 있다.

특정 투여 단위(즉, 치료 기간내 일련의 투여에 속하는 양 또는 단일 투여)는 본원에 개시된 방법에 의해 사용될 신경 줄기 세포 증식제 또는 분화제에 대해 특정화될 수 있다. 이들 투여 단위는 특정 투여량 및 본원에 특정화된 투여량 범위내에 속할 수 있다. 투여 단위는 대상에서 목적하는 수준의 신경 줄기 세포 증식제 또는 분화제를 달성하기 위해 투여되어야 하는 양에 대해 정의될 수 있다. 예를 들면, 신경 줄기 세포 증식제의 투여 단위는 0.03 내지 5,000,000 IU/L의 혈청내 신경 줄기 세포 증식제 또는 분화제 수준을 제공한다. 또는, 또 다른 예로서, 신경 줄기 세포 증식제 또는 분화제의 투여 단위는 약 0.003 내지 약 5,000 IU/L의 뇌척수액중 증식제 수준을 제공한다.

상기 방법에서 및 키트를 위한 설명서에서, 신경 줄기 세포 증식제는 전신적으로, 보다 바람직하게는 하루에 1회 이상 전신 투여에 의해 전달된다. 일부 태양에서는, 신경 줄기 세포 증식제가 주입에 의해서는 전달되지 않는다.

신경 줄기 세포 증식제는 시험관내 또는 생체내에서 포유동물 신경 줄기 세포의 수를 증가시킬 수 있는 임의의 물질일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 촉진제는 증식제와 동일한 의미를 갖는다. 신경 줄기 세포 수를 증가시킬 수 있는 약제로는 다음이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다:

1. 난포 자극 호르몬(FSH): 종종 LH와 함께 작용하며 LH 수용체 발현을 유도하여 LH 신호전달의 효과를 증대시킨다.

2. 성장 호르몬(GH): 신경 줄기 세포 증식을 자극할 수 있다.

3. 인슐린 성장 인자(IGF): IGF-1 포함, GH에 반응하여 많은 조직에서 방출되고 GH의 성장 증식 효과의 대부분을 매개하는 소마토메딘이며, 신경 줄기 세포 증식을 자극한다.

4. 성장 호르몬 방출 호르몬(GHRH): 시상하부에서 분비되며, 뇌하수체 전엽에서 GH 방출을 유도하여 순환 GH의 수준을 증가시킨다.

5. 프로락틴(PRL): 뇌하수체 전엽에서 분비되며 신경 줄기 세포 증식을 촉진한다.

6. 프로락틴 방출 펩티드(PRP): 프로락틴의 방출을 유발한다.

7. 섬유아세포 성장 인자(FGF): 신경 줄기 세포에 대한 분열촉진제.

8. 에스트로겐: 예를 들면, 해마에서의 증식을 포함하여, 신경 줄기 세포의 증식을 촉진한다.

9. 세로토닌: 해마에서 신경 줄기 세포의 증식을 촉진한다.

10. 표피 성장 인자(EGF): 신경 줄기 세포에 대한 분열촉진제.

11. 전환 성장 인자 알파(TFGα): 신경 줄기 세포에 대한 분열촉진제.

12. 성선자극호르몬 방출 호르몬(GnRH): LH의 방출을 유발한다.

13. 섬모 신경성장 인자(CNTF) 및 백혈병 억제 인자(LIF): 신경 줄기 세포 자가-재생을 촉진하는 신호전달 경로에 의해 gp130 아단위를 통해 신호를 전달하여, 뇌의 신경 줄기 세포군을 확장시킨다.

14. 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF).

15. 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF).

16. 혈관 내피 성장 인자(VEGF).

17. 황체형성 호르몬(LH).

18. 인간 융모성 성선자극호르몬(hCG).

19. 페로몬.

또한, 분화제를 투여하여 뉴런 형성 또는 신경교세포 형성을 선택적으로 증대시킬 수 있다. 이들 분화제는 또한 투여 방법 및 키트에 따라 전달될 수 있다. 대표적인 분화제로는 다음이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다:

1. 에리트로포이에틴(EPO): 신경 세포계에 속하는 신경 줄기 세포를 증대시키고 뇌졸중의 마우스 및 래트 모델을 치료하는데 유용하다.

2. 뇌 유래 신경성장 인자(BDNF): 신경세포계를 촉진하는 공지된 생존 인자 및 분화제.

3. 전환 성장 인자 베타 및 골형성 단백질(BMP): 신경세포계 및 특정 신경세포 표현형(예를 들면, 척수내의 감각 중간뉴런)의 발생을 촉진하는 분화제.

4. 갑상선 호르몬(TH, T3 및 T4 형태 모두 포함): 희소돌기아교세포의 성숙 및 발생을 촉진하는 분화제(예를 들면, [Rodriguez-Pena, 1999] 참조).

5. 갑상선 자극 호르몬(TSH) 및 갑상선 방출 호르몬(TRH): 뇌하수체 전엽으로부터 TH의 방출을 촉진하여 증가된 수준의 순환 TH를 야기한다. 상기 약제는 신경 줄기 세포로부터 희소돌기아교세포생성(oligodendrogliogenesis)을 촉진하기 위해 LH 또는 hCG와 함께 사용될 수 있다.

6. 소닉 헤지호그(sonic hedgehog, SHH): 발생시에 발생하는 CNS의 패턴을 결정하고, 다양한 농도에서 특정 유형의 뉴런(예를 들면, 척수내의 운동 뉴런) 및 희소돌기아교세포의 생성을 촉진하는 형태형성인자(morphogen). 상기 약제는 신경 줄기 세포로부터 신경세포발생 및/또는 희소돌기아교세포생성을 촉진하기 위해 LH 또는 hCG와 함께 사용될 수 있다.

7. 혈소판 유래 성장 인자(PDGF): 신경 줄기 세포로부터 희소돌기아교세포의 발생 및 분화를 촉진한다. 상기 약제는 신경 줄기 세포로부터 희소돌기아교세포생성을 촉진하기 위해 LH 또는 hCG와 함께 사용될 수 있다.

8. 환상 AMP, 및 cAMP 경로를 증대시키는 약제, 예를 들면, 뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성화 폴리펩티드(PACAP) 및 세로토닌: 뉴런 생성을 선택적으로 촉진한다.

임의의 상기 방법 및 키트는 다수의 신경 줄기 세포 증식제 및/또는 신경 세포 분화제를 포함할 수 있다. 따라서, 하나 이상의 신경 줄기 세포 증식제가 함께 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 별도의 조성물로 또는 단일 조성물 내에 함께 투여될 수 있다. 또한, 하나 이상의 신경 줄기 세포 증식제 및 하나 이상의 신경 줄기 세포 분화제가 함께 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 별도의 조성물로 또는 단일 조성물 내에 함께 투여될 수 있다. 예를 들면, PRL 및 LH 또는 hCG는 신경 줄기 세포 증식을 최대화하기 위해 함께 사용될 수 있고; PRP는 신경 줄기 세포 증식을 최대화하기 위해 LH 또는 hCG와 함께 사용될 수 있으며; GnRH는 LH의 순환 수준을 증가시키고 줄기 신경 세포 증식을 증대시키기 위해 LH 또는 hCG와 함께 또는 그 대신에 사용될 수 있고; 신경 줄기 세포 증식을 촉진하고 CNS 내의 신경 줄기 세포군의 크기를 증가시키기 위해 CNTF 및 LIF를 LH 또는 hCG와 함께 사용할 수 있다. 또한, 예를 들면, 프로락틴을 EPO와 함께 사용할 수 있고, LH를 EPO와 함께 사용할 수 있으며, hCG를 EPO와 함께 사용할 수 있다. 명백히 나타내지 않은 다른 모든 조합도 또한 사용될 수 있다.

상기 인자들에 적절한 투여량은 당해 분야에 확증된 방법에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 프로락틴에 대한 투여량은 약 0.510 내지 약 100,000 IU/kg/일의 범위, 예를 들면, 약 0.510 내지 90,000; 0.510 내지 75,000; 0.510 내지 50,000; 0.510 내지 25,000; 0.510 내지 10,000; 100 내지 5,000; 100 내지 2,000; 500 내지 2,000; 1,000 내지 2,000; 100 내지 1,000; 200 내지 800 IU/kg/일일 수 있다. hCG에 대한 투여량은 약 0.5 내지 약 3,000,000 IU/kg/일의 범위, 예를 들면, 약 0.5 내지 2,000,000; 0.5 내지 1,000,000; 0.5 내지 500,000; 0.5 내지 250,000; 0.5 내지 100,000; 0.5 내지 50,000; 10 내지 25,000; 10 내지 10,000; 240 내지 216,000; 1,200 내지 2,000; 2,160; 또는 1,600 IU/kg/일일 수 있다. hCG는 또한 10,000 IU/일의 용량으로 제공될 수 있다. LH에 대한 투여량은 약 0.5 내지 약 500,000 IU/kg/일의 범위, 예를 들면, 약 0.5 내지 300,000; 0.5 내지 200,000; 0.5 내지 100,000; 0.5 내지 50,000; 0.5 내지 25,000; 24 내지 21,600; 1,000; 120 내지 200; 216; 또는 160 IU/kg/일일 수 있다. LH는 또한 10,000 IU/일의 용량으로 제공될 수 있다. EPO에 대한 투여량은 약 100 내지 약 2,000 IU/kg/일의 범위, 예를 들면, 약 100 내지 1500; 100 내지 1,000; 160 내지 1,000; 570 내지 950; 765; 또는 1020 IU/kg/일일 수 있다. EPO는 또한 약 30,000 IU/일의 용량으로 제공될 수 있다. 동일 용량의 다른 약제를 사용할 수 있다. 달리 명시하지 않는 한, 여기서 투여량은 매일 전달되는 평균 용량을 말한다.

치료 기간 동안 전달될 신경 줄기 세포 증식제 및 분화제의 총량이 키트에 함유되도록 신경 줄기 세포 증식제 및 분화제는 키트에 포장되거나 포장되지 않을 수 있다. 상기 키트는, 예를 들면, 혈액 채취 장치 또는 그의 구성요소를 포함하여, 다른 구성요소 또는 다른 구성요소들의 조합을 함유하거나 함유하지 않을 수 있다.

분화제는 당해 분야에서 확증된 임의의 방법에 의해, 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 결장내, 기관지내, 복강내, 비강내, 혈관내, 척수강내, 두개내, 골수내, 흉막강내, 피내, 피하, 근육내, 경구, 국소 투여, 폐 투여 또는 그의 임의의 조합에 의해 투여할 수 있다. 선택적으로, 투여용 약물 전달 장치 또는 그의 구성요소가 분화제를 함유하는 키트에 포함될 수 있다.

신경 줄기 세포 증식제는 중추 신경계(CNS) 손상, 증상의 개시, 또는 진단후 약 14 일 이내(예를 들면, 제 0 일 내지 약 14 일)에 포유동물에게 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 제 0 일은 CNS 손상, 증상의 개시 또는 진단이 있는 그 때를 말한다. 선택적으로, 신경 줄기 세포 증식제는 CNS 손상, 증상 개시 또는 진단후 약 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1 일 이내에(예를 들면, 제 0 일 내지 약 5 일) 투여될 수 있다. 선택적으로, 신경 줄기 세포 증식제는 CNS 손상, 증상 개시 또는 진단후 24 시간 이내에 포유동물에게 투여될 수 있다. 선택적으로, 신경 줄기 세포 증식제는 CNS 손상, 증상 개시 또는 진단 후 약 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 시간 이내에 포유동물에게 투여될 수 있다.

본원에 기술된 방법 및 키트를 이용하여 치료된 포유동물은 유아, 청소년 또는 성인을 포함하여 임의 연령의 대상일 수 있다.

하기의 실시예에서, 하기의 약어들은 하기의 의미들을 갖는다. 정의되지 않은 약어는 그의 일반적으로 허용되는 의미를 갖는다.

℃ = 섭씨

hr = 시간

min = 분

μM = 마이크로몰

mM = 밀리몰

M = 몰

ml = 밀리리터

μl = 마이크로리터

mg = 밀리그램

μg = 마이크로그램

FBS = 태아 소 혈청

PBS = 포스페이트 완충 식염수

DMEM = 둘베코(Dulbecco) 변형 이글(Eagle) 배지

MEM = 변형 이글 배지

EGF = 표피 성장 인자

NSC = 신경 줄기 세포

SVZ = 뇌실하 영역

PACAP = 뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성화 폴리펩티드

BMP = 골형성 단백질

RSA = 래트 혈청 알부민

실시예 1

프로락틴의 연속 투여

수컷 래트(250 내지 300 g)를 2회의 프로락틴 투여 실험에 사용하였다. 프로락틴은 피하 미니-삼투압 펌프 주입(알제트(등록상표), 미니펌프) - 하루 1회 주사에 의해 제공하였다. 원액 프로락틴을 중탄산염 완충액에 희석하고, 주사를 위해 원액을 식염수 중 1 mg/ml 래트 혈청 알부민(RSA)에 더 희석하였다. 래트는 허혈성 손상을 입지 않았다. 제 6 일에, 동물들은 10 시간에 걸쳐 6 BrdU 주사(시그마-앨드리치(Sigma-Aldrich))(60 mg/kg, 복강내)를 맞았다. 뇌를 동결절개하고, BrdU+ 세포를 동물당 8개 절편을 이용하여 SVZ에서 정량화하였다. 결과는 SVZ중 BrdU+ 세포의 총수로서 또는 도면 설명에서 지적한 바와 같이 절편당 평균으로 나타내었다.

실험 1:

래트에게 6 일동안 투여하였으며, 하기의 용량으로 RSA(대조군) 또는 래트 프로락틴(내셔날 호르몬 앤 펩티드 프로그램(National Hormone and Peptide Program), 미국 캘리포니아주 토랜스)을 피하 주입하였다(각 군당 3 마리의 래트):

*10x = 99 μl/펌프(2 mg/0.25 ml PRL) - 113 μg/일

**15x = 148.5 μl/펌프(2 mg/0.25 ml PRL) - 170 μg/일

***20x = 198 μl/펌프(2 mg/0.25 ml PRL) - 226 μg/일

상기에서,

*10x = 뇌혈관내 주입에 제공된 용량(약 11 μg/일)의 10배.

**15x = 뇌혈관내 주입에 제공된 용량의 15배.

***20x = 뇌혈관내 주입에 제공된 용량의 20배.

결과:

도 1에서 보여지듯이, 170 μg/일은 전뇌 SVZ 내에서의 증식(BrdU+ 세포의 수)에 최대 증가를 야기하였다.

실험 2:

래트에게 3 일 또는 6 일동안 투여하였으며, 하기의 용량으로 RSA 또는 래트 프로락틴(내셔날 호르몬 앤 펩티드 프로그램, 미국 캘리포니아주 토랜스)을 매일 단일 복강내 주사하였다(각 군당 3 마리의 래트):

3 일동안 170 μg/일; 3 일동안 396 μg/일; 6 일동안 170 μg/일.

결과:

도 2에서 보여지듯이, 6 일동안 전달된 170 μg/일이 전뇌 SVZ 내에서의 증식(BrdU+ 세포의 수)에 최대 증가를 야기하였다.

실시예 2

hCG의 연속 투여

본 연구의 목적은 전뇌 초기 대역에서 세포 증식, 및 운동 피질에 연뇌막-스트립 혈관제거 허혈성 손상을 입은 성체 수컷 래트의 조직 재생을 최대화하는 hCG의 용량을 측정하기 위한 것이다.

방법

동물 및 외과술

250 내지 300 g의 수컷 래트에게 전술한 바와 같이 운동 피질에 연뇌막-스트립 혈관제거 허혈성 손상을 입혔다(문헌 [Gonzalez and Kolb, A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology, Eur. J. Neurosci., 18(7):1950-1962, 2003]). 나트륨 펜토바비탈 마취하의 동물(60 mg/kg)을 사용하여, 대천문까지 +4 내지 -2 mm 전방/후방으로 및 정중선으로부터 1.5 내지 4 mm 측면으로 직선으로 전두골 및 두정골에 직사각형 구멍을 뚫었다. 경뇌막을 제거하고, 멸균 식염수-침지된 면봉을 사용하여 연뇌막을 닦아내고 피질 표면으로부터 혈관을 부착하였다.

투여

뇌졸중후 제 1 일(24 시간후)부터, 동물에게 인간 융모성 성선자극호르몬의 단일 근육내(i.m.) 주사를 투여하였다. 용량들은 표 1에 기술된 바와 같이 제공되었으며, 5 일동안 3회 주사(제 1, 3 및 5 일에 투여)로, 또는 1 주일간 매일 주사로 전달하였으며, 매일 오전 9시에 제공하였다. 대조군 래트에는 식염수중 래트 혈청 알부민(RSA; 시그마(Sigma), 1 mg/ml) 주사를 투여하였다. 최종 투여일에, 동물에게 hCG 주사후 30 분부터 10 시간동안 6회의 BrdU 주사를 투여하였다. BrdU(시그마-앨드리치)는 60 mg/kg의 용량으로 복강내 투여하였다. 동물들을 4% 파라폼알데하이드로 경심(transcardially) 관류하였다. 뇌를 절개하고, 슈크로스에 동결보존하고 동결절개하였다. 뇌를 슬라이드당 8개 절편으로 각각 8개 슬라이드의 2개 시리즈로 14 마이크로미터로 동결절개하였다. 토끼의 항-포스포히스톤 H3(항-pHH3; 1:100; 업스테이트 바이오테크놀로지(Upstate Biotechnologies)), 래 트 항-BrdU(1:100; 세라랩(Seralab)), 양의 항-더블코르틴(DCX; 1:100; 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnologies))을 사용하여 면역염색을 수행하였다. 각 동물의 측뇌실 주위의 전뇌 뇌실하 영역(SVZ)중 포스포히스톤 H3(pHH3 - 유사분열적으로 활성인 세포의 표지), BrdU 및 더블코르틴(DCX - 미성숙 뉴런의 표지) 양성 세포의 수를 8개 절편에서 정량화하고, 측뇌실당 양성 세포의 평균 수로 나타내었다.

통계

값들은 평균의 평균+ 표준 오차(SEM)이다. 유의성은 일원 ANOVA에 이어 터키 HSD 사후 검증(*p<0.05; **p<0.01)을 이용하여 측정하였다. 각 군에 3마리의 동물이 포함되었다.

결과

본 연구는 뇌졸중후 성인 전뇌 뇌실하 영역(SVZ)에 존재하는 신경 줄기 세포 및 원세포의 증식을 촉진하는 hCG의 근육내 주사의 능력을 시험한다. 동물에게 연뇌막 스트립 혈관제거 수술을 시행하여 운동 피질에 국소 허혈성 손상을 유도하고, 치료는 24 시간후에 시작하였다. 고용량 거환 방법에서, 동물들에게 표 1에 요약된 바와 같이 5 일동안 제 1 일(뇌졸중후 24 시간), 3 일 및 5 일에 3개 용량의 hCG를 투여하였다. 전뇌 SVZ중 증식 수준을 분석하기 위해 제 5 일에 동물을 죽였다. 표 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 상기 방법은 RSA 대조용 주사를 맞은 뇌졸중에 걸린 동물에 비해 증식을 증가시키는데 효과적이었다. 1,000 μg의 용량에서, 증식은 거의 2.5배 증가하였으며, 도 4에서 보여지듯이, 이들 동물들의 SVZ중 새로 생성된 더블코트린 양성(DCX+) 뉴런의 수는 유사하게 상당히 증가하였다.

또 다른 연구에서는, 뇌졸중후 24 시간부터, 7 일동안 표 1에 요약된 바와 같이 매일 hCG를 투여하였으며, 제 7 일에 동물들에게 10 시간동안 BrdU를 투여한 후 죽였다. 도 5A에서 보여지듯이, pHH3 면역반응성으로 나타나는 바와 같은, SVZ에서의 분열 세포의 수는 모든 다른 군에 비해 330 μg/주사 군에서 상당히 증가하였다. 상기 증가는 RSA 대조군에 비해 상기 동물들의 SVZ에서 BrdU+ 세포의 수를 정량화함으로써 확인하였다(도 6). 연뇌막 스트립 RSA 대조군에 비해 100 μg 치료군에서 수준 증가 추세가 있었다(도 5A 및 6). 도 5에서 미처리 동물들은 주사 및 연뇌막 스트립 뇌졸중을 당하지 않았음을 주목한다. 내부 대조군으로서, 하나의 군에 330 μg/주사군으로 동일한 총 용량을 투여하였으나(표 1 참조), hCG는 제 1, 3 및 5 일에 770 μg/주사의 3회 주사로 투여하였으며, 제 5 일에 동물을 죽였다. 상기 연구를 근거로, 매일 330 μg/주사로 투여된 hCG의 낮은 규칙적 용량이 뇌에 허혈성 손상후 전뇌 SVZ에서 증식을 증가시키는데 가장 효과적이었다.

어떤 투여 방법이 새로운 피질 조직의 성장을 야기할 수 있는지 여부를 측정하기 위해, hCG 치료된 동물의 피질내 병소 부위를 분석하였다. 조직 재성장은 낮은 규칙적인 일일 투여 방법의 330 μg/주사 투여 동물 군에서 특히 명백하였다(도 5B).

실시예 3

hCG에 이은 EPO의 연속 투여

신경퇴행성 질환 또는 질병을 앓고 있는 포유동물을 치료 제 1, 2 및 3 일에 3개의 1일 1회 IM 용량의 hCG(10,000 IU/일)에 이어, 1 일간의 세척 시간(제 4 일) 후에, 치료 제 5, 6 및 7 일에 3개의 일일 1회 IV 용량의 EPO(30,000 IU/일)로 치료할 수 있다. 1차 IM hCG 용량은 중등도 뇌졸중과 같은 신경퇴행성 질병의 개시후 24 내지 48 시간에 전달될 수 있다. 환자는 치료중 여러 시점, 및 뇌졸중 개시후 6 주 및 3 개월째에 검사받을 수 있다. 기준선 평가는 임상/안전성, 신경, 혈액 및 혈관 상태, 및 뇌의 MRI를 포함할 수 있다. 임상/안전성, 신경, 혈액 및 혈관 상태의 평가는 치료 종료후 제 1 일, 15 일 및 80 일에 반복될 수 있다. 뇌의 MRI는 비교를 위해 치료 종료후 제 80 일(신경 질환 또는 질병의 개시 또는 진단후 대략 90 일)에 반복될 수 있다.

명세서에 언급된 임의의 특허 또는 출판물은 본 발명이 관련된 분야에 숙련된 자들의 수준을 나타내는 것이다. 이들 특허 및 출판물은, 각각의 개개 출판물이 참고로 인용되는 것으로 구체적으로 개별적으로 언급된 바와 동일한 정도로 본원에 그대로 참고로 인용된다.

본 발명은, 본 발명의 몇몇 태양의 예시로 나타내는 실시예에 개시된 태양들에 의해 범위가 제한되지 않으며, 기능적으로 동등한 임의의 태양들은 본 발명의 범위에 속한다. 본원에 나타내고 기술된 것들 이외에 상기 방법 및 키트의 다양한 변형은 당해 분야에 숙련된 자에게 명백해질 것이며, 첨부된 청구의 범위의 범주에 속한다. 또한, 본원에 개시된 조성물의 특정한 대표적인 조합만을 상기 태양에서 특정하게 논의하였지만, 조성물의 다른 조합도 당해 분야에 숙련된 자에게 명백해질 것이며 또한 첨부된 청구의 범위의 범주에 속한다. 따라서, 단계들 및 조성물 의 조합이 본원에서 명백히 언급될 수 있으나; 명백히 언급되지 않더라도 단계들 또는 조성물의 다른 조합도 포함된다.

hCG 투여 방법(뇌졸중후 24 시간부터 래트에게 5 일동안 hCG를 3회 근육내(IM) 주사하거나 또는 7 일동안 매일 주사하였다. 대조군 래트에게는 RSA 만을 주사하였다)

총 용량	용량/주사	용량/주사
(IU hCG)	(IU hCG)	(μg hCG)
도 3 및 4
제 1, 3 및 5 일에 투여
RSA(뇌졸중 없음)
RSA
330	110	11
990	330	33
9900	3300	330
30000	10000	1000
도 5 및 6
7 일동안 매일 투여
미처리(뇌졸중 없음 및 주사 없음)
RSA
7000	1000	100
23100	3300	330
46200	6600	660
70000	10000	1000
제 1, 3 및 5 일에 투여
23100	7700	770

대조군에 대한 연뇌막 스트립 혈관제거 뇌졸중후 24 시간에 hCG를 투여한 동물에서 pHH3+, BrdU+ 및 DCX+ 세포의 정량화를 위한 측뇌실 당 양성 세포의 평균수로 나타낸 실제 값 ± SEM

투여 조건(μg/주사)	pHH3+ 세포	BrdU+ 세포
	뇌실당 양성 세포의 수
1 주일간 매일 투여
미처리 비-뇌졸중	8.7±2	---
RSA	9.3±0.3	374±15
10	19.3±5	459±138
330	27±3^**	874±91^*
660	12.3±2	---
1000	17±2	---
770 (제 1, 3 및 5 일에 투여)	16±1	---
DCX+ 세포
제 1, 3 및 5 일에 주사로 5 일 투여
RSA	8.7±1	280±15
11	8±2	---
33	8±0.1	---
330	13±1	---
1000	19±1^*	533±42^*

Claims

신경 줄기 세포 증식제를 포유동물에게 1차 치료 기간동안 연속적으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에게 효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 제공하는 방법으로서,

상기 1차 치료 기간에 투여되는 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 효과량과 동일하고, 1차 치료 기간이 3 일 이상인 방법.
제 1 항에 있어서,

1차 치료 기간이 4 일 이상, 5 일 이상, 6 일 이상, 7 일 이상 및 14 일 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 1 항에 있어서,

포유동물에게 신경 줄기 세포 증식제를 2차 치료 기간에 연속적으로 투여하는 것을 추가로 포함하되, 상기 2차 치료 기간이 1차 치료 기간 종료후에 시작되고, 2차 치료 기간이 3 일 이상인 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 하루에 1회 이상 전신 주사에 의해 투여되는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 주입에 의해 투여되지 않는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴, 인간 융모성 성선자극호르몬(hCG), 성장 호르몬, 인슐린 성장 인자(IGF)-1, 황체형성 호르몬(LH), 콜로니 자극 인자(CSF), 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 및 페로몬으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 1 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 hCG인 방법.
제 7 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 hCG의 양이 0.5 내지 약 3,000,000 IU/kg/일인 방법.
제 7 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 hCG의 양이 약 10,000 IU/일인 방법.
제 1 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴인 방법.
제 10 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 프로락틴의 양이 0.510 내지 약 100,000 IU/kg/일인 방법.
제 1 항에 있어서,

포유동물에게 신경 줄기 세포 분화제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제 12 항에 있어서,

신경 줄기 세포 분화제가 에리트로포이에틴(EPO), 뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성화 폴리펩티드(PACAP), 갑상선 호르몬(TH), 갑상선 자극 호르몬(TSH) 및 혈소판 유래 성장 인자(PDGF)로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 1 항에 있어서,

포유동물이 성인인 방법.
신경 줄기 세포 증식제를 포유동물에게 1차 치료 기간동안 연속적으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 신경퇴행성 질환 또는 질병을 치료 또는 개선하기 위해 효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 제공하는 방법으로서,

상기 1차 치료 기간에 투여되는 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 효과량과 동일하고, 1차 치료 기간이 3 일 이상인 방법.
제 15 항에 있어서,

1차 치료 기간이 4 일 이상, 5 일 이상, 6 일 이상, 7 일 이상 및 14 일 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 15 항에 있어서,

포유동물에게 신경 줄기 세포 증식제를 2차 치료 기간에 연속적으로 투여하는 것을 추가로 포함하되, 상기 2차 치료 기간이 1차 치료 기간 종료후에 시작되고, 2차 치료 기간이 3 일 이상인 방법.
제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 하루에 1회 이상 전신 주사에 의해 투여되는 방법.
제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 주입에 의해 투여되지 않는 방법.
제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴, hCG, 성장 호르몬, IGF-1, LH, 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), GM-CSF, VEGF 및 페로몬으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 15 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴인 방법.
제 21 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 프로락틴의 양이 1 내지 약 300,000 μg/kg/일인 방법.
제 15 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 hCG인 방법.
제 23 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 hCG의 양이 1 내지 약 300,000 μg/kg/일인 방법.
제 23 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 hCG의 양이 약 1,000 μg/일인 방법.
제 15 항에 있어서,

포유동물에게 신경 줄기 세포 분화제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제 26 항에 있어서,

신경 줄기 세포 분화제가 EPO, PACAP, TH, TSH 및 PDGF로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

포유동물이 성인인 방법.
제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경퇴행성 질환이 알츠하이머병, 헌팅톤병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, CNS 손상, 다발성 경화증 및 정신분열증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

1차 용량의 신경 줄기 세포 증식제를 신경퇴행성 질환 또는 질병의 증상의 개시 또는 진단후 14 일 이내에 포유동물에게 투여하는 방법.
제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

1차 용량의 신경 줄기 세포 증식제를 신경퇴행성 질환 또는 질병의 증상의 개시 또는 진단후 5 일 이내에 포유동물에게 투여하는 방법.
효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 포유동물에게 1차 치료 기간동안 연속적으로 투여하는 것을 포함하되, 상기 1차 치료 기간이 3 일 이상인, 포유동물에서 신경퇴행성 질환 또는 질병을 치료 또는 개선하기 위한 방법.
제 32 항에 있어서,

1차 치료 기간이 4 일 이상, 5 일 이상, 6 일 이상, 7 일 이상 및 14 일 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 32 항에 있어서,

포유동물에게 신경 줄기 세포 증식제를 2차 치료 기간에 연속적으로 투여하는 것을 추가로 포함하되, 상기 2차 치료 기간이 1차 치료 기간 종료후에 시작되고, 2차 치료 기간이 3 일 이상인 방법.
제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 하루에 1회 이상 전신 주사에 의해 투여되는 방법.
제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 주입에 의해 투여되지 않는 방법.
제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴, hCG, 성장 호르몬, IGF-1, LH, G-CSF, GM-CSF, VEGF 및 페로몬으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 32 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 hCG인 방법.
제 38 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 hCG의 양이 1 내지 약 300,000 μg/kg/일인 방법.
제 38 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 hCG의 양이 약 1,000 μg/일인 방법.
제 32 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴인 방법.
제 41 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 프로락틴의 양이 1 내지 약 300,000 μg/kg/일인 방 법.
제 32 항에 있어서,

포유동물에게 신경 줄기 세포 분화제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
제 43 항에 있어서,

신경 줄기 세포 분화제가 EPO, PACAP, TH, TSH 및 PDGF로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,

포유동물이 성인인 방법.
제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경퇴행성 질환이 알츠하이머병, 헌팅톤병, 근위축성 측삭 경화증, 파킨슨병, CNS 손상, 다발성 경화증 및 정신분열증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,

1차 용량의 신경 줄기 세포 증식제를 신경퇴행성 질환 또는 질병의 증상의 개시 또는 진단후 14 일 이내에 포유동물에게 투여하는 방법.
제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,

1차 용량의 신경 줄기 세포 증식제를 신경퇴행성 질환 또는 질병의 증상의 개시 또는 진단후 5 일 이내에 포유동물에게 투여하는 방법.
제 43 항에 있어서,

신경 줄기 세포 분화제가 EPO인 방법.
제 49 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 EPO의 양이 약 100 내지 2,000 IU/kg/일인 방법.
제 49 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 EPO의 양이 약 570 내지 950 IU/kg/일인 방법.
제 49 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 EPO의 양이 765 IU/kg/일인 방법.
제 49 항에 있어서,

포유동물에게 투여되는 EPO의 양이 약 30,000 IU/일인 방법.
(a) 1차 치료 기간동안 연속 투여하기 위한 투여량의 신경 줄기 세포 증식제로서, 상기 1차 치료 기간에 투여될 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 포유동물에서 신경퇴행성 질환을 치료 또는 개선하기 위한 효과량과 동일하고, 1차 치료 기간이 3 일 이상인 신경 줄기 세포 증식제; 및

(b) 키트의 사용을 위한 설명서

를 포함하는, 효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 제공하기 위한 키트.
제 54 항에 있어서,

1차 치료 기간이 7 일 이상 및 28 일 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 키트.
제 54 항에 있어서,

2차 치료 기간동안 연속 투여하기 위한 2차 투여량의 신경 줄기 세포 증식제를 추가로 포함하되, 상기 2차 치료 기간에 투여될 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 효과량과 동일하고, 2차 치료 기간이 3 일 이상인 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

하나 이상의 약물 전달 장치를 추가로 포함하는 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴, hCG, 성장 호르몬, IGF-1, LH, G-CSF, GM-CSF, VEGF 및 페로몬으로 이루어진 군으로부터 선택되는 키트.
제 54 항에 있어서,

효과량의 분화제를 추가로 포함하는 키트.
제 59 항에 있어서,

분화제가 EPO, PACAP, TH, TSH 및 PDGF로 이루어진 군으로부터 선택되는 키트.
제 59 항에 있어서,

분화제가 EPO인 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

적혈구용적 수준을 관찰하기 위한 장치를 추가로 포함하는 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

대상으로부터 혈액 샘플을 취하기 위한 장치를 추가로 포함하는 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

의료 시설에서 사용하기 위한 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

의료 시설에서 퇴원후에 사용하기 위한 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 단일 용기에 함유되는 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 다수의 용기에 함유되는 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

분화제의 총 투여량이 단일 용기에 함유되는 키트.
제 54 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,

분화제의 총 투여량이 다수의 용기에 함유되는 키트.
(a) 1차 치료 기간동안 연속 투여하기 위한 투여량의 신경 줄기 세포 증식제로서, 상기 1차 치료 기간에 투여될 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 포유동 물에서 신경 줄기 세포의 수를 증가시키기 위한 효과량과 동일하고, 1차 치료 기간이 3 일 이상인 신경 줄기 세포 증식제; 및

(b) 키트의 사용을 위한 설명서

를 포함하는, 효과량의 신경 줄기 세포 증식제를 제공하기 위한 키트.
제 70 항에 있어서,

1차 치료 기간이 7 일 이상 및 28 일 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 키트.
제 70 항에 있어서,

2차 치료 기간동안 연속 투여하기 위한 2차 투여량의 신경 줄기 세포 증식제를 추가로 포함하되, 상기 2차 치료 기간에 투여될 신경 줄기 세포 증식제의 총 투여량이 효과량과 동일하고, 2차 치료 기간이 3 일 이상인 키트.
제 70 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서,

하나 이상의 약물 전달 장치를 추가로 포함하는 키트.
제 70 항에 있어서,

신경 줄기 세포 증식제가 프로락틴, hCG, 성장 호르몬, IGF-1, LH, G-CSF, GM-CSF, VEGF 및 페로몬으로 이루어진 군으로부터 선택되는 키트.
제 69 항에 있어서,

효과량의 분화제를 추가로 포함하는 키트.
제 75 항에 있어서,

분화제가 EPO, PACAP, TH, TSH 및 PDGF로 이루어진 군으로부터 선택되는 키트.
제 75 항에 있어서,

분화제가 EPO인 키트.