KR20080073466A - 생약 혼합물을 이용하여 이루어진 조성물 및 그 제조 방법 - Google Patents

생약 혼합물을 이용하여 이루어진 조성물 및 그 제조 방법 Download PDF

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KR20080073466A
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Abstract

높은 항산화, 세포 생리 활성, 및/또는 피부 노화 방지의 효능을 갖는 생약 혼합물을 이용하여 이루어진 조성물 및 그의 제조 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함하는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함한다. 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 제조 방법은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함하는 생약 혼합물 추출물을 제공하고, 상기 생약 혼합물 추출물을 발효하여 생약 혼합물의 발효 생성물을 제조하는 것을 포함한다.
공진단, 발효 생성물, 항산화

Description

생약 혼합물을 이용하여 이루어진 조성물 및 그 제조 방법{Composition formed by using mixture of herbal medicine and method for preparing the same}
도 1은 본 발명의 몇몇 실시예들에 따른 조성물을 제조하는 방법을 설명하기 위한 순서도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 생약 혼합물 추출물을 제조하는 방법의 순서도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 생약 혼합물의 발효 생성물을 제조하는 방법의 순서도이다.
도 4a는 생약 혼합물 추출물에 대한 HPLC 분석을 나타내는 그래프이다.
도 4b는 생약 혼합물의 발효 생성물에 대한 HPLC 분석을 나타내는 그래프이다.
본 발명은 생약 혼합물을 이용하여 이루어진 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 생약 혼합물을 이용하여 이루어진 화장료용 조성물, 약제학적 조성물, 비누용 조성물, 식품용 조성물 및 이들의 제조 방법에 관한 것이다.
공진단은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향과 같은 생약을 혼합하여 이루어진 생약 혼합물로서, 경옥고, 청심원과 함께 3대 명방으로 불리우는 보약이다. 동의보감에 의하면 공진단은 태어날 때부터 허약한 체질을 타고 난 사람이라도 이를 복용하면 하늘이 내린 생명의 원천적인 기운을 굳건하게 하여, 수(水)를 오르게 하고 화(火)를 내리게 함으로써, 백병을 물리치는 것으로 설명하고 있다.
한편, 공진단의 현대적 연구 결과에 의하면, 공진단은 항산화 효과를 가짐으로써, 세포 생리 활성에 기여한다. 뿐만 아니라, 공진단은 피부 노화 현상을 완화하는 데에도 유효하여, 피부 주름을 개선하고 피부 미백 효과를 갖는 것으로 알려져 있다.
그러나, 이러한 공진단은 상기와 같은 장점에도 불구하고, 구성 생약의 가격이 매우 고가일 뿐만 아니라, 공진단만으로는 항산화 효능, 피부 주름 개선 효과, 피부 미백 효과 등이 충분하지 못하기 때문에, 아직 현대적 약재, 화장품, 비누, 또는 식품 등의 재료로 사용되기에는 부족한 점이 있다.
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 높은 항산화, 세포 생리 활성, 및/또는 피부 노화 방지의 효능을 갖는 생약 혼합물을 이용하여 이루어진 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는 상기한 바와 같은 조성물을 제조하는 방법을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명의 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제로 제한되지 않으 며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 기술적 과제를 달성하기 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함하는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함한다.
상기 다른 기술적 과제를 달성하기 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 제조 방법은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함하는 생약 혼합물 추출물을 제공하고, 상기 생약 혼합물 추출물을 발효하여 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 제조하는 것을 포함한다.
기타 실시예들의 구체적인 사항들은 상세한 설명 및 도면들에 포함되어 있다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다. 명세서 전체에 걸쳐 동일 참조 부호는 동일 구성 요소를 지칭한다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함한다. 상기 생약 혼합물은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함함다.
녹용은 예컨대, 사슴의 뿔로부터 얻어진다. 구체적으로, 녹용은 사슴의 골화되지 않은 어린 뿔로부터 얻어질 수 있다. 녹용은 구성 성분으로서, 아미노산, 지질, 글루코스 등의 당성분, 및 미량 원소 등을 포함한다. 녹용에 포함된 상기 아미노산은 필수 아미노산을 포함하여 16종 이상일 수 있다. 본 발명을 제한하지 않는 상기 녹용의 효능으로는 간장계, 면역계, 심혈관계, 노화, 스트레스, 당대사, 조혈 작용 등에 대한 유효한 효과를 들 수 있다.
당귀는 방향 성분인 정유, 데쿠신, 베타시토스테롤, 자당, 니코틴산, 엽산 등을 포함한다. 상기 당귀는 참당귀, 중국당귀, 또는 일본당귀일 수 있다. 당귀는 각종 여성 질환, 예컨대 생리불순, 생리통, 빈혈, 자궁 발육 부진, 산후 혈액 부족, 갱년기 장애 등에 유효한 효과가 있으며, 여성 호르몬 분비를 원활하게 돕는 작용을 한다.
상기 산수유로는 산수유 나무의 과실이나 또는 그 잎이 적용될 수 있다. 상기 적용되는 부위에 따라 구성 성분에 다소간 차이는 있지만, 산수유는 구성 성분으로서, 대체로 로가닌, 사포닌 등의 배당체와, 코르닌, 사과산, 포도주산, 비타민 A 등을 포함할 수 있다. 상기 구성 성분들에 의해, 산수유는 신진 대사에 활력을 향상시키며, 항당뇨 작용을 할 수 있다.
사향은 예컨대, 사향초에서 얻어지는 방향 성분일 수 있다. 다른 예로, 사향은 사향 사슴 숫컷의 사향낭으로부터 얻어질 수도 있다. 그러나, 본 명세서에서 언급되는 사향은 그 유래하는 식물이나 동물에 특별히 제한받지 않으며, 본 당업계에 서 통상 사향으로 지칭될 수 있는 어떠한 유래 및 형태의 것도 포함한다. 사향은 무스콘, 안드로스탄계 성분 등을 포함한다. 사향은 중추신경계, 특히 호흡 중추 및 심장을 흥분시켜 심장기능을 항진시키고, 혈압을 강하하는 작용을 한다.
상기한 바와 같은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향은 서로 혼합되어 생약 혼합물을 구성한다. 상기 생약 혼합물은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향이 예컨대, 8:8:8:1의 비율로 혼합되어 이루어지는 공진단일 수 있다. 그러나, 이상의 비율은 예시에 불과하며, 다른 다양한 비율로 혼합되는 것이 가능함은 물론이다. 나아가, 본 발명의 실시예들에 따른 생약 혼합물은 상기한 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향 이외에도, 인삼, 지황 등의 생약을 더 포함할 수 있다.
상기 약재들의 혼합으로 생약 혼합물, 예를 들어 공진단은 다양한 약리적 활성을 갖는다. 특히, 상기한 생약 혼합물은 항산화, 세포 활성, 피부 주름 개선, 피부 미백 등에 있어 유효한 효과를 갖는다.
생약 혼합물의 추출물은 생약 혼합물로부터 유효 성분들을 추출한 것으로서, 생약 혼합물과 동등한 수준, 또는 그 이상의 우수한 효과를 가질 수 있다.
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물을 발효시켜 얻어진 생성물이다. 생약 혼합물 추출물의 발효는 예컨대, 발효 미생물을 이용한다. 발효 미생물은 세균, 진균을 포함한다. 생약 혼합물 추출물 발효의 구체적인 예로는, 효모에 의한 알코올 발효, 젖산균에 의한 젖산 발효, 장내 세균에 의한 포름산 발효, 클로스트리듐속 세균에 의한 부티르산-부탄올-아세톤 발효, 프로피온산균에 의한 프로피온산 발효, 또는 메탄 세균에 의한 메탄 발효 등을 들 수 있다. 그러나, 이 상의 예시에 제한되지 않음은 물론이다.
본 발명의 몇몇 실시예들에 따른 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 상기 발효에 사용된 발효 미생물이 제거됨으로써 이를 포함하지 않을 수 있다. 본 발명의 다른 몇몇 실시예들은 상기한 발효 미생물을, 예컨대 미량으로 더 포함할 수 있다.
상기 발효의 영향으로 본 발명의 실시예들에 따른 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 발효되지 않은 생약 혼합물 추출물과 비교할 때, 유효 성분의 함량이 달라진다. 예컨대, 몇몇 유효 성분들은 그 함량이 증가한다. 이와 같은 유효 성분 함량의 증가로 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물보다 우수한 항산화, 세포 활성, 피부 주름 개선, 피부 미백 등의 효과를 갖는다.
이상에서 설명한 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 후술하는 실험예를 통해서도 확인되겠지만, 항산화, 세포 활성, 피부 주름 개선, 피부 미백 등에 있어 생약 혼합물 추출물보다 더욱 우수한 효능을 가지며, 안전성 측면에서도 매우 우수하다.
또한, 본 발명의 실시예들에 따른 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 조성물은 상기 발효의 영향으로 pH가 7.0보다 작다. 상기 조성물의 pH는 생약 혼합물 추출물의 발효 정도, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 함량 등에 따라 달라질 수 있지만, 예를 들어 2.0 내지 6.5의 범위를 가질 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시예들에 따른 조성물은 4.0 내지 6.0의 pH를 가질 수 있다.
이와 같은 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 본 발명의 실시예들에 따른 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%의 함량을 가질 수 있다. 바람직하게는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 상기 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 20중량%의 함량을 가질 수 있다.
본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 적용되는 적용예에 따라 담체 등과 같은 다양한 다른 물질을 더 포함할 수 있다.
더욱 구체적으로 설명하면, 본 발명의 몇몇 실시예에 따른 조성물은 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 우수한 항산화, 세포 활성, 피부 주름 개선, 피부 미백, 안정성 등의 효과를 이용하여 화장료용 조성물로 적용될 수 있다. 이 경우, 상기 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 및 분무제로 이루어진 제형군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.
상기 조성물이 화장료용 조성물로서 적용될 경우, 상기 조성물은 상술한 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 이외에, 화장료에 수용가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 화장료에 수용가능한 담체란 화장품 제재에 포함될 수 있는 것으로서, 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 정도의 독성, 안정성, 및 자극성 요건을 갖는 것을 포함한다. 화장료에 수용가능한 담체는 예컨대, 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등일 수 있으며, 이들 중에서 선택된 하나 또는 2 이상의 화장료에 수용가능한 담체가 상기 조성물에 포함될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물의 총중량에 대한 상기한 화장료에 수용가능한 담체의 함량은 예를 들어, 1 내지 99중량%일 수 있으며, 바람직하게는 90 내지 99중량%일 수 있다. 그러나, 이에 제한되는 것은 아니며, 상기한 조성물의 제형이나 상기 조성물이 적용되는 부위에 따라 상기 함량이 다르게 변형될 수 있음은 물론이다.
본 발명의 다른 몇몇 실시예에 따른 조성물은 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 우수한 항산화, 세포 활성, 피부 주름 개선, 피부 미백, 안전성 등의 효과를 이용한 약제학적 조성물로 적용될 수 있다. 상기 조성물에 포함되어 있는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 추가적으로, 여드름 개선, 아토피 피부염 개선, 피부 트러블 개선, 또는 보습 등의 약리 효과를 더 가질 수 있다.
상기 조성물이 약제학적 조성물로서 적용될 경우 용액, 현탁액, 유화액, 엘렉시르제, 엑스제, 분말제, 과립제, 정제, 경고, 도고제, 로션, 및 연고로 이루어진 제형군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있다. 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 방식으로 인체에 투여될 수 있다. 바람직하기로는 국소 투여 방식으로 피부에 직접 투여될 수 있다. 이때, 투여량은 예컨대 1일에 0.001 내지 150mg/kg일 수 있고, 1회 또는 수회로 나누어 투여될 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 하나의 예시에 불과하며, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 중증도 등에 따라 변형될 수 있음은 물론이다.
상기한 바와 같은 약제학적 조성물은 상술한 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 이외에, 약제학적으로 허용되는 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체란 약제에 포함될 수 있는 것으로서, 인체에 투여시 인체가 적응 가능한 정도의 독성, 안정성 및 자극성 요건을 갖는 것을 포함한다. 이러한 약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들어 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니 톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸 히드록시 벤조에이트, 프로필 히드록시 벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등일 수 있으며, 이들 중에서 선택된 하나 또는 2 이상의 약제학적으로 허용되는 담체가 상기 조성물에 포함될 수 있다. 그러나, 이상의 예시에 제한되지 않음은 물론이다.
나아가, 본 실시예들에 따른 조성물은 약제학적 첨가제로서, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 조성물의 총중량에 대한 상기한 약제학적으로 허용되는 담체의 함량은 예를 들어, 1 내지 99중량%일 수 있으며, 바람직하게는 90 내지 99중량%일 수 있다. 또한, 상기 조성물의 총중량에 대한 상기한 약제학적 첨가제의 함량은 예를 들어, 0.1중량% 내지 20중량%일 수 있다. 그러나, 상기 약제학적으로 허용되는 담체 및 상기 약제학적 첨가제의 함량이 상기의 함량 범위에 제한되는 것은 아니며, 상기한 조성물의 제형이나 상기 조성물이 투여되는 방식에 따라 상기 함량이 다르게 변형될 수 있음은 물론이다.
또한, 본 발명의 다른 몇몇 실시예에 따른 조성물은 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 우수한 항산화, 세포 활성, 피부 주름 개선, 피부 미백, 안전성 등의 효과를 이용한 비누용 조성물로 적용될 수 있다. 이 경우, 상기 조성물은 상술한 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 이외에, 비누 기재 및/또는 비누용 첨가제를 더 포함할 수 있다. 비누용 첨가제는 예컨대 피부 보습제, 유화제, 및 경수연화제 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
상기 비누 기재로는 예컨대, 야자유, 팜유, 대두유, 파마자유, 올리브유, 팜핵류 등의 식물 유지나 우지, 돈지, 양지, 어유 등의 동물 유지 등이 적용될 수 있다.
상기 피부 보습제는 예를 들어, 글리세린, 에리트리톨, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 헥실글리콜, 이소프로필미리스테이트, 실리콘 유도체, 알로에베라, 솔비톨 등이 적용될 수 있다.
상기 유화제로는 예컨대, 천연오일, 왁스 지방알콜, 탄화수소류, 천연식물 추출물 등이 적용될 수 있다.
상기 경수연화제로는 테트라소듐 이디티에티 등이 예시될 수 있다.
상술한 비누용 첨가제 이외에도 본 실시예에 따른 비누용 조성물은, 추가적으로 항균제, 분산제, 거품억제제, 용매, 물때 방지제, 부식 방지제, 향료, 색소, 금속이온 봉쇄제, 산화방지제, 방부제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 조성물의 총중량에 대한 상기한 비누 기재의 함량은 예를 들어, 50 내지 99.999중량%일 수 있고, 상기 비누 첨가제의 함량은 1 내지 20중량%일 수 있지만, 이에 제한되지 않음은 물론이다.
또한, 본 발명의 다른 몇몇 실시예에 따른 조성물은 식품 조성물로 적용될 수 있다. 상기 식품 조성물은 예를 들어 껌류, 비타민 복합제, 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품 또는 기능성 음료용 식품 조성물일 수 있다. 이 경우, 상기 조성물은 상술한 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 이외에, 동충하초로 발효된 인 삼 추출물, 포도당이나 과당 등의 단당류, 말토스나 수크로스 등과 같은 이당류, 덱스트린이나 사이클로 덱스트린 등과 같은 다당류, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올, 또는 타우린, 스테비아 추출물 등과 같은 감미제 등의 식품 첨가물을 더 포함할 수 있다.
이하, 상술한 바와 같은 본 발명의 실시예들에 따른 조성물을 제조하는 방법에 대해 설명한다. 도 1은 본 발명의 실시예들에 따른 조성물을 제조하는 방법을 설명하기 위한 순서도이다.
도 1을 참조하면, 먼저 생약 혼합물 추출물을 제공한다(S1). 생약 혼합물은 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함한다. 생약 혼합물은 동의보감 등의 고서에 기재되어 있는 방법 또는 본 기술 분야에서 널리 공지되어 있는 방법에 의해 제조되어 제공될 수 있으며, 미리 제조된 생약 혼합물을 입수함으로써 제공될 수도 있다. 미리 제조된 생약 혼합물은 예컨대, 공진단일 수 있다. 생약 혼합물 추출물은 이와 같은 생약 혼합물을 용매에 담그어 추출함으로써 얻어진다.
이하, 생약 혼합물 추출물을 제공하기 위한 예시적인 방법을 설명하기 위해 도 2가 참조된다. 도 2는 생약 혼합물 추출물을 제공하는 예시적인 방법을 설명하기 위한 도면으로서, 본 발명의 일 실시예에 따른 생약 혼합물 추출물을 제조하는 방법의 순서도이다.
도 2를 참조하면, 먼저, 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 용매에 첨가한다(S11). 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향의 첨가 중량비는 일예로, 약 160g : 160g : 160g : 20g일 수 있다. 그러나, 상기 첨가 중량비가 상기 예에 제한되지 않음은 물 론이다.
상기 용매는 유기 용매일 수 있다. 구체적으로, 이에 제한되는 것은 아니지만, 부틸렌 글리콜이 사용될 수 있다. 또한, 상기 용매는 후술하는 미생물의 발효를 촉진하기 위해 미생물 배양용 배지를 더 포함할 수 있다.
상기 용매에 대한 상기 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향의 첨가 양태는 예컨대, 각각 일정한 크기의 절편으로 분쇄되어 첨가되는 것, 각각 가루 형태로 분쇄되어 첨가되는 것, 및 각각 가루 형태로 분쇄된 뒤, 환(丸) 형태로 혼합된 상태로 첨가되는 것을 포함한다.
이어서, 상기 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향과 용매의 혼합물을 일정 시간 동안 방치하여 상기 생약 혼합물로부터 유효 성분을 추출한다(S12). 방치 시간은 예를 들어 1일 내지 10일일 수 있다. 더욱 구체적인 예로는 약 4일 내지 5일일 수 있다. 상기와 같은 추출 과정을 거쳐 생약 혼합물 추출물이 제조된다.
다시 도 1을 참조하면, 제공된 생약 혼합물 추출물을 발효하여 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 제조한다(S2). 상기 S2 단계를 수행하는 예시적인 방법을 설명하기 위해 도 3이 참조된다. 도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 제조하는 방법의 순서도이다.
도 3을 참조하면, 먼저 생약 혼합물 추출물의 희석액을 제공한다(S21). 생약 혼합물 추출물의 희석액은 상술한 단계로부터 얻어진 용매에 용해된 생약 혼합물 추출물을 그대로 이용하거나, 필요에 따라 용매를 추가적으로 가감함으로써 제공될 수 있다. 또, 필요에 따라 상기 희석액에 발효 미생물을 배양할 수 있는 배지를 더 첨가할 수 있다. 생약 혼합물 추출물의 희석액에서의 생약 혼합물 추출물의 함량은 예컨대 1 내지 20%일 수 있다. 바람직한 일예는 약 5%일 수 있다.
이어서, 생약 혼합물 추출물의 희석액에 발효 미생물을 공급하여 이를 배양한다(S22). 발효 미생물로는 예를 들어, 효모, 젖산균, 장내 세균, 클로스트리듐속 세균, 프로피온산균, 메탄 세균, 진균 등과 같이 생약 혼합물 추출물을 발효할 수 있는 어떠한 미생물도 적용가능하다. 또, 발효 미생물로서 2이상의 미생물을 공급할 수도 있다. 본 명세서에서는 본 발명을 제한하지 않는 발효 미생물의 구체적인 일예로 파실로마이세스 자포니카(Paecilomyces japonica)가 개시된다.
발효 미생물이 공급된 생약 혼합물 추출물의 희석액은 발효 미생물의 배양 조건에 맞추어 배양된다. 예를 들면, 10 내지 40℃의 온도에서 2시간 내지 7일동안 배양될 수 있다. 발효 미생물로서 파실로마이세스 자포니카를 사용한 경우, 24℃의 온도에서 96시간 동안 140rpm의 속도로 교반하면서 배양할 수 있다. 상기와 같은 발효 미생물의 배양 결과, 생약 혼합물 추출물의 적어도 일부가 발효된다. 그 결과 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 생성된다. 생성된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 유효 성분의 함량이 변화되어 있으며, 2 내지 6.5의 pH를 가질 수 있다.
이어서, 선택적으로, 다음의 S23 및 S24 단계를 더 거칠 수 있다. 즉, 발효 미생물이 배양된 생약 혼합물 추출물의 희석액을 원심 분리하여 발효 미생물을 가라않히고 상등액을 취한다(S23).
이어서, 상기 상등액에 잔존할 수 있는 발효 미생물을 제거하기 위하여 상기 상등액을 여과한다(S24). 상기 여과는 예컨대, 0.1 내지 1㎛의 포어 사이즈를 갖는 필터를 이용하여 이루어질 수 있다. 그 결과, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 조성물이 제조된다. 필요에 따라, 제조된 상기 조성물을 희석함으로써, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 상기 조성물의 총중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%의 함량을 갖도록 조절할 수 있다. 나아가, 필요에 따라 상기 제조된 조성물에 각종 담체나 첨가제 등을 혼합하는 것을 더 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 제조된 조성물을 화장료용 조성물로 적용할 경우, 화장료에 수용가능한 담체를 상기 조성물에 더 혼합할 수 있다. 또, 상기 제조된 조성물을 약제학적 조성물로 적용할 경우, 상기 조성물에 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 약제학적 첨가제를 더 혼합할 수 있다. 또, 상기 제조된 조성물을 비누용 조성물로 적용할 경우, 상기 조성물에 비누 기재 및/또는 비누 첨가제를 더 혼합할 수 있다. 또, 상기 제조된 조성물을 식품용 조성물로 적용할 경우, 상기 조성물에 동충하초로 발효된 인삼 추출물, 포도당이나 과당 등의 단당류, 말토스나 수크로스 등과 같은 이당류, 덱스트린이나 사이클로 덱스트린 등과 같은 다당류, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올, 또는 타우린, 스테비아 추출물 등과 같은 감미제 등의 식품 첨가물을 더 혼합할 수 있다.
상기 혼합되는 화장료에 수용가능한 담체, 약제학적으로 허용가능한 담체, 약제학적 첨가제, 비누 기재, 비누 첨가제, 식품 첨가물은 이미 언급하였으므로, 중복 설명은 생략한다. 또한 이들의 구체적인 혼합 방법은 본 기술 분야에 공지되어 있으므로, 본 발명이 모호하게 해석되는 것을 회피하기 위하여 그 설명을 생략하기로 한다.
본 발명에 관한 보다 상세한 내용은 다음의 구체적인 제조예 및 실험예들을 통하여 설명하며, 여기에 기재되지 않은 내용은 이 기술 분야에서 숙련된 자이면 충분히 기술적으로 유추할 수 있는 것이므로 설명을 생략한다.
< 제조예 1> 액체 배지의 제조
접종 대상 균주인 파실로마이세스 자포니카의 배양 성분을 갖는 배지 조성물에 한천을 2%(w/v) 첨가하고, 121℃, 15psi에서 약 20분간 가압살균하였다. 다음, 상기 가압살균된 액체 배지를 미리 살균된 플라스크에 20ml씩 분주하여 액체 배지를 제조하였다. 상기 제조된 액체 배지는 24±1℃의 온도 및 pH 6.0 내지 7.0의 조건에서 최적의 배양 상태를 나타내었다.
< 제조예 2> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 제조
상기 제조예 1에 의해 제조된 액체 배지에 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함하는 생약 혼합물의 추출물을 5%의 농도를 갖도록 첨가하였다. 이어서, 상기 액체 배지에 미리 배양된 파실로마이세스 자포니카 균주를 접종하고, 24℃의 온도에서 140rpm의 속도로 교반하면서 96시간 동안 배양하였다. 다음, 상기 파실로마이세스 자포니카 균주가 배양된 액체 배지를 원심분리하여 상기 균주를 가라앉히고, 상등액을 취하였다. 이어서, 상등액에 잔존하는 균을 제거하기 위하여, 0.2㎛의 포어 사이즈를 갖는 필터 페이퍼를 이용하여 여과하였다. 그 결과, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 제조되었다.
< 실험예 1> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 함유된 성분의 물리적 성상변화
상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 성분을 분석하기 위하여 HPLC(High Performance Liquid Chromatography) 테스트를 수행하였다. 먼저 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 100mg을 10ml의 80% 메탄올에 녹이고, 이를 원심 분리하여 상등액을 취하였다. 이어서, 상등액을 0.2㎛의 포어 사이즈를 갖는 멤브레인 필터에 여과하였다. 상기 여과액을 육안으로 그 색상을 검사하고, pH를 조사하였다.
또한, 비교예로서 생약 혼합물 추출물에 대하여 상기와 동일한 조건으로 육안 검사 및 pH 조사를 수행하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
실험군 색상 pH
생약 혼합물 추출물 갈색 7.0
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 연한 갈색 4.0
상기 표 1을 참조하면, 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물에 비하여 색상이 변화되어 있음을 알 수 있다. 또한, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물보다 pH가 낮음을 확인할 수 있다.
< 실험예 2> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 함유된 성분의 HPLC 테스트
상기 실험예 1에 따른 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 및 생약 혼합물 추출물의 여과액에 대하여 HPLC(High Performance Liquid Chromatography) 테스트를 수행하였다. HPLC 테스트는 SCL-10A controller (Shimmadzu, Japan), LC-10AD pump(Shimmadzu, Japan),　SPD-10A UV detector(Shimmadzu, Japan)를 포함하는 HPLC 시스템을 이용하여 수행되었다. 이때, 컬럼은 RP-18 reverse phase (Mightysil GP 250-4.6, Kanto. Japan,)로, 컬럼 온도는 40℃로 하였으며, 용매로서 75% 아세토니트릴(acetonitril)을 사용하였다. 또한,　유속 조건은 1 ml/min, 검출 조건은 218nm에서 수행하였다. 그 결과를 도 4a 및 도 4b에 나타내었다.
도 4a는 생약 혼합물 추출물에 대한 HPLC 분석을 나타내는 그래프이다. 도 4b는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 대한 HPLC 분석을 나타내는 그래프이다. 도 4a 및 도 4b를 참조하면, 도 4b의 그래프가 도 4a의 그래프보다 몇몇 대응되는 구간에서 높은 피크를 나타냄을 알 수 있다. 따라서, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물에 비해 몇몇 유효 성분의 함량이 증가하였음을 알 수 있다.
< 실험예 3> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 항산화 효과의 측정
상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 항산화 효과를 측정하기 위하여 자유 라디칼 소거 실험(Free Radical Scavenging Activity Test)를 실시하였다. 구체적으로, 0.2mM의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl, Sigma사) 용액이 1ml씩 포함되어 있는 3개의 튜브를 준비하였다. 하나의 튜브는 대조군으로서 정제수를 첨가하였고, 다른 2개의 튜브는 실험군으로서 각각 생약 혼합물 추출물, 및 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 각각 첨가하였다. 그 다음, 상기 3개의 튜브를 각각 실온에서 10분간 방치한 후, 상기 3개의 튜브에 대하여 525nm에서 흡광도를 측정한 다음 하기 수학식 1을 이용하여 실험군의 자유 라디컬 소거율을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
자유 라디칼 소거율(%)=[100-{(실험군의 흡광도-대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도}×100]
실험군 자유 라디칼 소거율(%)
생약 혼합물 추출물이 첨가된 실험군 23.4
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가된 실험군 59.5
상기 표 2로부터 알 수 있는 바와 같이, 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물보다 약 2.5배 이상의 자유 라디칼 소거율을 나타내었다. 이로부터, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물보다 항산화 효과가 훨씬 우수함을 알 수 있다.
< 실험예 4> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 멜라닌 생성 억제 효과
먼저, DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media)에 10%의 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가된 24-웰 플레이트(well plate) 배지를 준비하였다. 상기 배지에 쥐의 색소세포(B16 melanoma cell line)를 105 세포/웰(cells/well)의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하였다. 이어서, 상기 색소세포의 부착을 확인한 뒤, 상기 배지에 실험군으로서 생약 혼합물 추출물 및 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 각각 첨가하고, 각각 3일 동안 배양하였다. 또한, 대조군으로서, 생약 혼합물 추출물 및 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가되지 않은 배지를 3일 동안 함께 배양하였다.
이어서, 상기 실험군 및 대조군으로부터 각각 배양액을 제거하고, PBS로 세척하였다. 이어서, 1N 수산화나트륨으로 상기 색소세포를 녹여 400nm에서 흡광도를 측정한 다음 하기 수학식 2에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
멜라닌 생성 억제율(%)=[100-(실험군의 흡광도/대조군의 흡광도)×100]
실험군 멜라닌 생성 억제율(%)
생약 혼합물 추출물이 첨가된 실험군 23.4
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가된 실험군 59.5
상기 표 3으로부터 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물보다 색소세포의 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 우수함을 알 수 있다.
< 실험예 5> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 인간 섬유아세포 콜라겐 생합성 증가효과
먼저, DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media)에 10%의 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가된 96-웰 플레이트를 준비하였다. 상기 플레이트에 인간 섬유아세포를 5,000 세포/웰(cells/well)의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO2 조건하에서 70% 내지 80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이어서, 상기 플레이트에 실험군으로서 생약 혼합물 추출물 및 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 각각 첨가하고, 각각 1일 동안 배양하였다. 상기 배양된 세포 배양액을 각각 채취하여 상업적으로 이용가능한 콜라겐 생합성 측정 기구(일본, Takara Shuzo Co., Ltd. Catalog #: MK101)를 이용하여 콜라겐 생성 정도를 측정하였다.
구체적으로, 1차 콜라겐 항체가 균일하게 도포된 96-웰 플레이트에 상기 채취된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항온조에서 항원-항체 반응을 실시하였다. 그 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-웰 플레이트에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 그 다음, 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시켰다. 이어서, 1M 황산을 넣어 발색을 중지시켰다. 발색이 중지된 96-웰 플레이트를 흡광계를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였고 이를 하기 수학식 3에 대입하여 콜라겐의 생성 정도를 계산하였다. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 하기 수학식 3에서 대조군의 흡광도는 생약 혼합물 추출물 및 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가되지 않은 플레이트를 이용하여 측정되었다.
콜라겐 생성율(%)= (실험군의 반응 흡광도/대조군의 반응 흡광도)×100
실험군 콜라겐 생성율(%)
생약 혼합물 추출물이 첨가된 실험군 19.2
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가된 실험군 62.5
상기 표 4로부터 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물보다 콜라겐 생성율이 훨씬 우수하여, 콜라겐 생합성 효과가 훨씬 우수함을 알 수 있다.
< 실험예 6> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 인간 섬유아세포 증식 효과
실험군으로서, 생약 혼합물 추출물이 첨가된 인간 섬유아세포 배양액 및 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가된 인간 섬유아세포 배양액을 준비하였다. 상기 준비된 실험군에 대하여 MTT 환원법[3(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide reduction method]를 수행하고, 포르마잔 생성물(formazan product)을 이소프로필 알코올로 추출하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 이를 하기 수학식 4에 대입하여 세포 증식능을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 하기 수학식 4에서 대조군의 흡광도는 생약 혼합물 추출물 또는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가되지 않은 인간 섬유아세포 배양액에 대하여 측정되었다.
세포 증식능(%)= (실험군의 흡광도/대조군의 흡광도)×100
실험군 세포 증식능(%)
생약 혼합물 추출물이 첨가된 실험군 19.2
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 첨가된 실험군 55.1
상기 표 5로부터 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 생약 혼합물 추출물보다 인간 섬유아세포 증식 능력이 훨씬 우수함을 알 수 있다.
< 실험예 7> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 세포 독성 실험
상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 세포 독성 여부를 검증하기 위하여, 상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 대하여 V79-4 세포(차이니스 햄스터, 폐조직 섬유아세포의 연속 세포주)를 배양하고, 참고 문헌(Mossman T. Rapid colorimetric assay for cellular growth & survival : application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods, 1983, 65, 55~63)에 개시된 방법으로 MTT 시험을 수행하였다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
시료 50%의 세포를 사멸시키는 농도[IC50(%, w/v)]
SLS 0.005
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 10
상기 표 6으로부터 알 수 있는 바와 같이 상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 IC50의 값이 SLS보다 약 2000배 이상이었다. 따라서, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 세포 독성이 매우 낮음을 알 수 있다.
< 실험예 8> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 알러지 평가
상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 알러지 유발 여부를 확인하기 위하여, LLNA(Local Lymph Node Assay) 실험법이 이용되었다[참고 문헌: OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS; DRAFT NEW GUIDELINE 429: Skin Sensitization; Local Lymph Node Assay].
구체적으로, 상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 20%, 40%, 60%의 용액으로 제조하고, 대조군으로서 에탄올 60%의 용액을 준비한 다음, 상기 준비된 농도별 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 및 에탄올 용액을 마우스(Balb/c)의 양쪽 귀에 25㎕씩 3일간 발라주었다. 그 후, 마우스로부터 이개임파절(Auricular lymph node)를 분리한 다음, 분리한 임파절을 분쇄하여 단일세포 상태로 만들었다. 이어서, 방사성 동위원소 [3H]-메칠티미딘(methyl thymidine)을 첨가하여 24시간 동안 배양한 다음 세포 증식의 증폭도(dpm)를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
시료군 임파절 세포 수(세포/mL ×107) dpm(평균) S.I.(증폭도)
에탄올(60%) 2.27 1966 운반매개물
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물(20%) 1.22 1021 0.5
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물(40%) 1.32 1154 0.6
생약 혼합물 추출물의 발효 생성물(60%) 1.57 1764 1.1
상기 표 7에서 상기 dpm(disintegration per minute)은 [3H]-메칠티미딘이 세포로 삽입되는 양을, 상기 S.I.(Stimulation Index)는 시료의 평균 dpm을 대조군의 평균 dpm으로 나눈 값을 나타낸다.
상기 표 7에서 알러지 평가 결과는 대조군에 비한 시료군의 임파구 증폭 정도로 나타나며, 한 농도에서라도 시료의 증폭 정도(S.I.)가 3 이상이고 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보일 경우 알러젠으로 간주하게 되는데, 상기 표 6에 기재된 바와 같이 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 증폭 정도(S.I.)가 농도와 무관하게 3 이하임이 확인되어, 알러지 유발 가능성이 없음을 알 수 있다.
< 제조예 3> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 화장료용 조성물의 제조
상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 조성물로서 화장료용 조성물을 제조하기 위하여 하기 표 8에 기재된 바와 같은 원료를 준비하였다. 먼저, 하기 표 8의 1~7번 원료를 혼합하고, 70℃에서 용해하여 제1 파트를 제조하였다. 또한, 하기 표 8의 8~14번 원료를 혼합하고, 70℃에서 용해하여 제2 파트를 제조하였다. 상기 제조된 제2 파트를 상기 제1 파트에 첨가하고, 호모 믹서(일본, Tokushu Kika사)를 이용하여 교반하여 1차 유화한 다음, 하기 표 8의 15번 원료를 첨가하여 점증하였다. 이어서, 상기 점증된 조성물로부터 기포를 제거한 후, 실온으로 냉각시켜 화장수 제형의 화장료용 조성물을 제조하였다.
원료 번호 성분 투입량(g)
1 정제수 100
2 글리세린 8.0
3 부틸렌글리콜 4.0
4 히아루론산 추출물 5.0
5 베타글루칸 7.0
6 카보머 0.1
7 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 3.0
8 카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드 8.0
9 스쿠알란 5.0
10 세테아릴 글루코사이드 1.5
11 소르비탄 스테아레이트 0.4
12 세테아릴 알코올 1.0
13 방부제 적량
14 향 적량
15 트리에탄올 아민 0.1
< 제조예 4> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 화장료용 조성물의 제조
상기 표 8의 7번 원료를 3g이 아닌 1.5g을 혼합한 것을 제외하고는 상기 제조예 3과 동일한 방법으로 화장료용 조성물을 제조하였다.
< 비교제조예 1 및 2> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하지 않는 화장료용 조성물의 제조
상기 표 8의 7번 원료를 혼합하지 않은 것을 제외하고는 상기 제조예 3과 동일한 방법으로 비교제조예 1 및 2에 따른 화장료용 조성물을 제조하였다.
< 실험예 9> 화장료용 조성물의 인간 피부에 대한 미백 효과
건강한 12 명의 남자를 대상으로 피검자의 윗팔뚝 부위에 직경 1.5cm의 구멍 4개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose)의 1.5배에서 2배 정도의 자외선을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다. 이어서, 상기 색차계를 이용하여 흑화된 피부의 명암(L1: 피부가 어두울수록 그 값이 작아짐)을 측정하였다.
그 다음, 상기 제조예 3, 제조예 4, 및 비교제조예 1 및 2에 따른 화장료용 조성물을 상기 흑화된 피부에 아침, 저녁 2회씩 2달 동안 매일 바르도록 하였다. 그 후, 색차계를 이용하여 상기 흑화되었던 피부의 명암(L2)를 측정하였다. 상기 측정 결과를 토대로 하기 수학식 5를 이용하여 상기 명암의 차이를 계산한 다음, 각 피검자별 명암의 차이의 평균을 하기 표 9에 나타내었다.
명암의 차이(ΔL)= L1(화장료용 조성물의 도포 전 명암)-L2(마지막 화장료 조성물의 도포 후 명암)
각 피검자별 ΔL의 평균값
제조예 3 4.33
제조예 4 2.82
비교제조예 1 1.43
비교제조예 2 1.21
상기 표 9로부터 알 수 있는 바와 같이, 제조예 3 및 제조예 4에 따른 명암 차이는 비교제조예 1 및 비교제조예 2보다 약 2배 이상 훨씬 크게 나타났다. 따라서, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 화장료용 조성물의 미백 효과가 훨씬 큼을 알 수 있다. 나아가, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 3g 첨가된 제조예 3에 따른 화장료용 조성물이 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물이 1.5g 첨가된 제조예 4에 따른 화장료용 조성물보다 미백 효과가 더 큰 것으로 나타나, 상기 미백 효과는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물의 함량과 밀접한 관계가 있음을 추정할 수 있다.
< 실험예 10> 화장료용 조성물의 인간 피부에 대한 주름 개선 효과
30 내지 40대 여성 80명을 4개조로 분류한 다음, 실리콘을 이용하여 레플리카를 뜨고, 비지오메타(visiometer: SV500, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용한 화상 분석을 통하여 각 조의 피검자의 피부 주름 깊이를 측정하였다. 또, 피부 탄력을 측정할 수 있는 큐토메타(cutometer; SEM474, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 각 조의 피검자의 얼굴 부위 탄력을 측정하였다. 또한, 코네오메타(coneometer: CM820, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 각 조의 피검자의 보습력을 측정하였다.
이어서, 상기 각 조별로 피검자에게 상기 제조예 3, 제조예 4, 및 비교제조예 1 및 2에 따른 화장료용 조성물을 제공하였다. 그리고, 각 피검자에게 제공된 화장료용 조성물을 매일 1회씩 1개월간 피부에 도포하도록 하였다. 1개월이 지난 후, 상기 각 조별 피검자의 피부 주름 깊이, 얼굴 부위 탄력, 보습력을 측정하였다. 상기 측정 결과들을 이용하여 각 화장료용 조성물별로 도포 전과 후의 평균 주름 감소율, 평균 피부 탄력 개선도, 및 평균 보습력 증가율을 각각 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.
평균 주름 감소율(%) 평균 피부 탄력 개선도(%) 평균 보습력 증가율(%)
제조예 3 67 81 83
제조예 4 70 64 84
비교제조예 1 40 45 51
비교제조예 2 9 10 11
상기 표 10으로부터 알 수 있는 바와 같이, 제조예 3 및 제조예 4에 따른 방법으로 제조된 화장료용 조성물이 비교제조예 1 및 비교제조예 2에 따른 경우보다 주름 감소율, 피부 탄력 개선도, 및 보습력 증가 측면에서 모두 우수한 것으로 나타났다. 따라서, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 화장료용 조성물의 인간 피부에 대한 주름 개선 효과가 더 우수함을 알 수 있다.
< 실험예 11> 화장료용 조성물의 안전성 검사
상기 제조예 3, 제조예 4, 및 비교제조예 1 및 2에 따른 화장료용 조성물의 안전성을 확인하기 위하여 인체 피부 누적자극 시험을 실시하였다.
구체적으로, 건강한 20명의 성인을 대상으로 상기 제조예 3, 제조예 4, 및 비교제조예 1 및 2에 따른 화장료용 조성물 각각에 대해, 윗 팔뚝 부위에 격일로 총 9회의 24시간 누적 첩포를 수행하였다. 상기 첩포 방법으로는 핀 챔버(Finn chamber) 방법이 이용되었으며, 챔버당 15㎕의 화장료용 조성물을 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응도를 그 정도에 따라 ±, +, ++로 나누어 나타냈으며, 각각에 대하여 1점, 2점, 및 4점(최고점수)을 부여하였다. 또한, 하기 수학식 6에 따라 평균 반응도를 계산하였으며, 상기 반응도의 결과와 함께 하기 표 11에 나타내었다. 하기 표 11에서 평균 반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정된다.
평균 반응도=(반응자수×반응도/총피검자수×최고점수×100)/총검사횟수
시험물질 반응이 나타난 피검자 수 평균 반응도
1주 2주 3주
1차 2차 3차 4차 5차 6차 7차 8차 9차
± + ++ ± + ++ ± + ++ ± + ++ ± + ++ ± + ++ ± + ++ ± + ++ ± + ++
실시예 1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 0.00
실시예 2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 0.00
비교예 1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 0.00
비교예 2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 0.00
피검인원 20 20 20 20 20 20 20 20 20
상기 표 11에서 "-"는 해당하는 인원이 없음을 나타낸다. 상기 표 11로부터 알 수 있는 바와 같이, 제조예 3 및 제조예 4에 따른 방법으로 제조된 화장료용 조성물은 상기 비교제조예 1 및 비교제조예 2에 따른 화장료용 조성물과 마찬가지로 누적자극 양상이 전혀 나타나지 않았다. 따라서, 상기 제조예 3 및 제조예 4에 따른 화장료용 조성물은 안전성이 우수함을 알 수 있다.
< 제조예 5 내지 8> 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 비누용 조성물의 제조
상기 제조예 2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 조성물로서 비누용 조성물을 제조하기 위하여 하기 표 12에 기재된 바와 같은 원료를 준비하였다. 하기 표에서 함량의 단위는 중량부이다.
성분 제조예 5 제조예 6 제조예 7 제조예 8
나트륨 비누 35 35 35 35
프로필렌글리콜 12 12 12 12
글리세린 8 8 8 8
설탕 10 10 10 10
폴리옥시에틸렌(3) 라우릴 설페이트 10 10 10 10
폴리옥시에틸렌(5) 라우릴 에테르 1 5 10 _
폴리옥시에틸렌(12) 라우릴 에테르 _ _ _ 5
폴리옥시에틸렌(20) 라우릴 에테르 _ _ _ _
테트라소듐 이디티에이 0.1 0.1 0.1 0.1
제조예2에 의해 제조된 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물 1 3 5 10
향 1 1 1 1
정제수 100 100 100 100
먼저, 상기 표 12의 각 성분을 혼합하여 75 내지 80℃의 온도에서 투명한 액상이 될 때까지 가열 교반하였다. 이어서, 투명한 액상 조성물을 60 내지 65℃의 온도로 냉각하고, 향료 1.0 중량부를 첨가 혼합하여 균일하게 교반하였다. 이어서, 일정 모양의 금형에 부어 냉각 및 고화시켰다. 그 결과, 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 투명 비누가 제조되었다.
이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
상술한 바와 같이 본 발명의 실시예들에 따른 조성물은 생약 혼합물 추출물 의 발효 생성물을 포함함으로써, 개선된 항산화, 세포 생리 활성, 및/또는 피부 노화 방지의 효능을 가질 뿐만 아니라, 안전성 측면에서도 매우 우수한 효과를 갖는다. 따라서, 고가의 원료를 사용하더라도 그 효능이 증진되기 때문에, 현대적 약재, 화장품, 비누, 또는 식품 등의 재료로 적용되는 것이 용이하다.

Claims (28)

  1. 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함하는 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 포함하는 조성물.
  2. 제1 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물은 공진단을 포함하는 조성물.
  3. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 pH가 3 내지 6.5인 조성물.
  4. 제3 항에 있어서,
    상기 조성물은 pH가 4 내지 6인 조성물.
  5. 제1 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 상기 생약 혼합물을 발효시키는 발효 미생물을 포함하는 조성물.
  6. 제1 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 상기 조성물의 총중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%의 함량을 갖는 조성물.
  7. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료용 조성물인 조성물.
  8. 제7 항에 있어서,
    알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제 및 향료로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나를 더 포함하는 조성물.
  9. 제7 항에 있어서,
    상기 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 및 분무제로 이루어진 제형군으로부터 선택된 하나의 제형으로 이루어지는 조성물.
  10. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 약제학적 조성물인 조성물.
  11. 제10 항에 있어서,
    락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에 이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 및 미네랄 오일로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 더 포함하는 조성물.
  12. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 비누용 조성물인 조성물.
  13. 제12 항에 있어서,
    비누 기재, 피부 보습제, 유화제, 및 경수연화제 중 적어도 하나를 더 포함하는 조성물.
  14. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 식품용 조성물인 조성물.
  15. 제14 항에 있어서,
    동충하초로 발효된 인삼 추출물, 포도당, 말토스, 수크로스, 덱스트린, 사이클로 덱스트린, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨, 타우린, 및 스테비아 추출물 중 적어도 하나를 더 포함하는 조성물.
  16. 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 포함하는 생약 혼합물 추출물을 제공하고,
    상기 생약 혼합물 추출물을 발효하여 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 제조하는 것을 포함하는 조성물의 제조 방법.
  17. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물은 공진단을 포함하는 조성물의 제조 방법.
  18. 제16 항에 있어서,
    상기 조성물은 pH가 3 내지 6.5인 조성물의 제조 방법.
  19. 제18 항에 있어서,
    상기 조성물은 pH가 4 내지 6인 조성물의 제조 방법.
  20. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물을 제공하는 것은,
    상기 녹용, 당귀, 산수유, 및 사향을 용매에 담그어 추출하는 것을 포함하는 조성물의 제조 방법.
  21. 제20 항에 있어서,
    상기 용매는 부틸렌 글리콜을 포함하는 조성물의 제조 방법.
  22. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물을 발효하는 것은,
    상기 생약 혼합물 추출물의 희석액에 발효 미생물을 공급하여 배양하는 것을 포함하는 조성물의 제조 방법.
  23. 제22 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물을 제조하는 것은,
    상기 발효 미생물이 배양된 상기 생약 혼합물 추출물의 희석액을 원심분리하고,
    상기 원심분리된 희석액의 상등액을 취하고,
    상기 상등액을 여과하는 것을 포함하는 조성물의 제조 방법.
  24. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물은 상기 조성물의 총중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%의 함량을 갖도록 제조되는 조성물의 제조 방법.
  25. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제 및 향료로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나를 혼합하는 것을 더 포함하는 조성물의 제조 방법.
  26. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 및 미네랄 오일로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나를 혼합하는 것을 더 포함하는 조성물의 제조 방법.
  27. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 비누 기재, 피부 보습제, 유화제, 및 경수연화제 중 적어도 하나를 혼합하는 것을 더 포함하는 조성물의 제조 방법.
  28. 제16 항에 있어서,
    상기 생약 혼합물 추출물의 발효 생성물에 동충하초로 발효된 인삼 추출물, 포도당, 말토스, 수크로스, 덱스트린, 사이클로 덱스트린, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨, 타우린, 및 스테비아 추출물 중 적어도 하나를 혼합하는 것을 더 포함하는 조성물의 제조 방법.
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