KR20080055954A

KR20080055954A - 착색제 및 컨디셔너의 효과 증진 방법

Info

Publication number: KR20080055954A
Application number: KR1020087009960A
Authority: KR
Inventors: 윌리엄 에이. 베크; 존 피. 오'브라이언; 홍 왕
Original assignee: 이 아이 듀폰 디 네모아 앤드 캄파니
Priority date: 2005-09-28
Filing date: 2006-09-28
Publication date: 2008-06-19
Also published as: US20070067924A1; RU2436564C2; WO2007038733A1; US7964180B2; CA2620051A1; CN101282705A; EP1928397A1; EP2335780A1; BRPI0617535A2; US20080206809A1; US20100189670A1; US7795382B2; US7736633B2; US7427656B2; JP2009512639A; RU2008116680A; EP2332512A1; WO2007038704A1; US20090048428A1

Abstract

본 발명은 모발 및 피부에 대한 각종 유익제의 결합 수명을 증진시키는 방법을 제공한다. 모발 및 피부에 통상적인 및 비-통상적인 착색제 및 컨디셔너를 도포하는 것은 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드 각각의 조성물로 보완된다. 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드 조성물의 존재는 모발 및 피부에 도포된 착색제 또는 컨디셔너의 수명을 증가시키는 작용을 한다.

모발 유익제, 모발-결합 펩티드, 모발 착색제, 모발 컨디셔너, 피부 유익제, 피부-결합 펩티드, 피부 착색제, 피부 컨디셔너, 염료, 안료, 선스크린

Description

착색제 및 컨디셔너의 효과 증진 방법 {METHOD FOR ENHANCING EFFECTS OF COLORANTS AND CONDITIONERS}

본 특허 출원은 2005년 9월 28일자로 출원한 미국 특허 가출원 제60/721329호의 이점을 청구한다.

본 발명은 개인 위생 분야, 특히 모발 및 피부의 처리에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 펩티드-기재의 실란트(sealant)를 사용하여 통상적인 및 비-통상적인 착색제, 컨디셔너, 및 기타 유익제의 효과를 증진시키는 방법을 제공한다.

모발 및 피부용 컨디셔너 및 착색제는 널리 공지되어 있고, 자주 사용되는 개인 위생 제품이다. 현재의 컨디셔너 및 비-산화성 착색제에 있어서의 주요 문제점은 오래 지속되는 효과에 요구되는 내구성이 없다는 점이다. 산화성 모발 염료는 오래 지속되는 색상을 제공하지만, 이에 함유된 산화제는 모발 손상을 일으킨다. 모발 및 피부 위생 조성물의 내구성을 개선하기 위해, 펩티드-기재의 모발 컨디셔너, 모발 착색제, 및 기타 유익제가 개발되어 왔다 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의인 후앙(Huang) 등의 미국 특허 출원 공개 제2005/0050656호 및 미국 특허 출원 공개 제2005/0226839호). 펩티드-기재의 선스크린(sunscreen) 역시 개발되어 왔다 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의인 부스만-윌리암스(Buseman-Williams) 등의 미국 특허 출원 공개 제2005/0249682호, 및 본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의인 로위(Lowe) 등의 미국 특허 출원 제60/737042호). 펩티드-기재의 유익제는 모발 또는 피부에 높은 결합 친화도를 갖는 특이적 펩티드 서열을 유익제, 예컨대 컨디셔닝제 또는 착색제에 커플링하여 제조된다. 펩티드 부분이 모발 또는 피부에 결합하여, 유익제를 강력하게 부착시킨다. 이러한 펩티드-기재의 유익제는 개선된 내구성을 제공하지만, 결합 펩티드와 유익제의 커플링이 요구된다.

모발에 높은 결합 친화도를 갖는 펩티드가 파지 디스플레이 스크리닝 기술을 이용하여 동정된 바 있다 (후앙 등의 상기 문헌, 에스텔(Estell) 등의 WO 0179479, 머레이(Murray) 등의 미국 특허 출원 공개 제2002/0098524호, 얀센(Janssen) 등의 미국 특허 출원 공개 제2003/0152976호, 및 얀센 등의 WO 04048399). 추가로, 양으로 대전된 아미노산을 기재로 하는 실험적으로 생성된 모발-결합 및 피부-결합 펩티드가 보고된 바 있다 (로테(Rothe) 등의 WO 2004/000257).

콘웰(Cornwell) 등 (미국 특허 제6,551,361호)은 모발을 산화성 모발 염료로 처리하기 전이나 그 후에 모발을 유기 아미노 화합물, 예컨대 염기성 아미노산, 우레아, 구아니딘, 및 이들의 염 또는 혼합물과 접촉시키는 것을 포함하는, 산화성 모발 염료로 처리된 모발로부터의 색상 손실 감소 방법을 기재한다. 그러나, 상기 개시내용에는 착색제 및 컨디셔너를 위한 실란트로서 특이적 모발-결합 또는 피부- 결합 펩티드, 또는 유익제에 커플링된 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 포함하는 결합체를 사용하는 것에 관하여는 기재되어 있지 않다.

따라서, 해결되어야 할 문제는 실행하기가 간단하고 용이한, 모발 및 피부용 컨디셔너 및 착색제의 내구성을 증진시키기 위한 대체 방법을 제공하는 것이다.

본 출원인은 펩티드-기재의 실란트의 사용시에 통상적인 및 비-통상적인 착색제, 컨디셔너, 및 기타 유익제의 효과가 증진된다는 것을 발견하고 상기 언급한 문제를 해결하였다.

발명의 요약

본 발명은 통상적인 및 비-통상적인 모발 및 피부 착색제, 컨디셔너, 및 기타 유익제의 수명을 증진시키는데 유용한 신규한 펩티드 기재의 실란트에 관한 것이다. 본 발명의 실란트는 모발 또는 피부와의 특이적 결합력에 대해 선택된 짧은 펩티드이다. 이들 모발-결합 펩티드 (HBP, Hair-Binding Peptide) 또는 피부-결합 펩티드 (SBP, Skin-Binding Peptide)는 모발 또는 피부에 대한 착색제, 컨디셔너 또는 몇가지 기타 유익제와 함께 사용된다.

따라서, 본 발명은

(a) 모발에 대해 친화성을 갖는 모발 유익제를 제공하는 단계,

(b) 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 제공하는 단계, 및

(c) 상기 모발 유익제 및 모발-결합 펩티드가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안 상기 유익제 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 모발에 도포하는 단계

를 포함하는, 유익제를 모발에 도포하는 방법을 제공한다.

임의로는, 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 필요에 따라 재도포할 수 있다. 별법의 실시양태에서, 본 발명의 방법은 모발에 대한 유익제 결합을 더욱 증진시키기 위해 중합체 실란트를 사용할 수도 있다.

유사하게, 본 발명은

(a) 피부에 대해 친화성을 갖는 피부 유익제를 제공하는 단계,

(b) 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 제공하는 단계, 및

(c) 상기 피부 유익제 및 피부-결합 펩티드가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안 상기 유익제 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 피부에 도포하는 단계

를 포함하는, 유익제를 피부에 도포하는 방법을 제공한다.

추가로, 본 발명은 모발 착색제 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 모발 착색제 조성물 뿐만이 아니라 모발 컨디셔너 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 모발 컨디셔닝 조성물도 제공한다. 유사하게, 본 발명은 피부 컨디셔너 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 피부 컨디셔닝 조성물 뿐만이 아니라 피부 착색제 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 피부 착색제 조성물도 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 서열 16, 서열 17, 서열 18, 서열 19, 서열 20 및 서열 21로 구성된 군에서 선택된 모발-결합 펩티드를 제공한다.

서열 기재

본 발명의 여러가지 실시양태는 하기하는 발명의 상세한 설명 및 첨부하는 서열 기재로부터 보다 완벽하게 이해될 수 있으며, 이러한 설명과 기재는 본 출원서의 일부를 구성한다.

하기 서열은 37 C.F.R. 1.821 내지 1.825 ("뉴클레오티드 서열 및/또는 아미노산 서열 기재를 포함하는 특허 출원에 대한 요건- 서열 규칙")에 따르며, 세계 지적 재산권 기구 (WIPO) 기준 ST.25 (1998) 및 EPO 및 PCT의 서열 목록 요건 (규칙 5.2 및 49.5(a-bis), 및 시행세칙의 제208항 및 부록 C)에 부합한다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열 데이타에 사용된 부호 및 포맷은 37 C.F.R. §1.822에 규정된 규칙에 따른다.

서열 1 내지 서열 6 및 서열 53 내지 서열 62는 모발-결합 펩티드의 아미노산 서열이다.

서열 7 및 서열 63 내지 서열 74는 피부-결합 펩티드의 아미노산 서열이다.

서열 8 내지 서열 12는 실험적으로 생성된 모발-결합 및 피부-결합 펩티드의 아미노산 서열이다.

서열 13 내지 서열 15는 펩티드 스페이서(spacer)의 아미노산 서열이다.

서열 16 내지 서열 21은 다중 카피(multi-copy) 모발-결합 펩티드의 아미노산 서열이다.

서열 22는 무작위 펩티드의 아미노산 서열이다.

서열 23은 다중 카피의 모발-결합 펩티드 HC77607에 대한 코딩 영역의 핵산 서열이다.

서열 24는 펩티드 TBP1의 아미노산 서열이다.

서열 25 내지 서열 29는 실시예 5에 기재한 바와 같이 TBP1 유전자 제조에 사용되는 올리고뉴클레오티드의 핵산 서열이다.

서열 30은 합성 DNA 단편 TBP1의 핵산 서열이다.

서열 31 내지 서열 36은 실시예 5에 기재한 바와 같이 pINK1 발현 플라스미드의 제조에 사용되는 올리고뉴클레오티드 프라이머의 핵산 서열이다.

서열 37은 실시예 5에 기재한 TBP101 펩티드의 아미노산 서열이다.

서열 38은 INK101에 대한 코딩 서열의 핵산 서열이다.

서열 39는 실시예 5에 기재한 바와 같이 펩티드 TBP101-DP의 아미노산 서열이다.

서열 40 및 서열 41은 실시예 5에 기재한 바와 같이 플라스미드 pINK101의 부위-지정 돌연변이유발에 사용되는 올리고머의 핵산 서열이다.

서열 42는 플라스미드 pINK101-DP의 핵산 서열이다.

서열 43은 펩티드 IBT3의 아미노산 서열이다.

서열 44, 서열 45 및 서열 48 내지 서열 51은 실시예 5에 기재한 바와 같이 부위-지정 돌연변이유발에 사용되는 올리고뉴클레오티드의 핵산 서열이다.

서열 46 및 서열 47은 실시예 5에 기재한 바와 같이 효소 케토스테로이드 이소머라제의 단편을 증폭시키는데 사용되는 프라이머의 핵산 서열이다.

서열 52는 C-말단에 시스테인 잔기가 부가된 모발-결합 펩티드의 아미노산 서열이다.

본 발명은 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 실란트로 사용하여 착색제, 컨디셔너 및 기타 유익제의 효과를 증진시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명은, 상기 방법이 모발 및 피부를 착색하거나 컨디셔닝하는데 사용되어 통상적인 방법에 비해 내구성을 증진시킬 수 있기 때문에 유용하다.

본원에서는 하기 정의가 사용되며, 청구의 범위 및 명세서의 해석시에 참조해야 한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "발명" 또는 "본 발명"은 비-제한적인 용어로서, 특정 발명의 임의의 단일 실시양태를 지칭하려는 것이 아니라 본 명세서 및 청구의 범위에 기재된 바와 같이 모든 가능한 실시양태를 포함한다.

"HBP"는 모발-결합 펩티드를 의미한다.

"SBP"는 피부-결합 펩티드를 의미한다.

"HCA"는 모발 컨디셔너를 의미한다.

"SCA"는 피부 컨디셔너를 의미한다.

"BA"는 유익제를 의미한다.

용어 "펩티드"는 펩티드 결합 또는 변형된 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 지칭한다.

용어 "모발-결합 펩티드"는 모발에 높은 친화도로 결합하는 펩티드 서열을 지칭한다. 본 발명의 모발-결합 펩티드의 길이는 약 7개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 더욱 바람직하게는 약 7개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 가장 바람직하게는 약 7개 내지 약 20개 아미노산이다.

용어 "피부-결합 펩티드"는 피부에 높은 친화도로 결합하는 펩티드 서열을 지칭한다. 본 발명의 피부-결합 펩티드의 길이는 약 7개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 더욱 바람직하게는 약 7개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 가장 바람직하게는 약 7 내지 약 20개 아미노산이다.

용어 "유익제"는 피부 또는 모발에 도포될 때 미용 또는 보호 효과를 제공하는 작용제를 지칭하는 일반적인 용어이다. 전형적으로, 유익제는 컨디셔너, 착색제, 향료, 화이트닝제, 선스크린 등을 개인 위생 산업에서 통상적으로 사용되는 다른 물질과 함께 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "모발"은 인간 모발, 눈썹 및 속눈썹을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "피부"는 인간 피부, 또는 인간 피부에 대한 대체물, 예컨대 돼지 피부, 비트로-스킨(Vitro-Skin)^® 및 에피덤(EpiDerm)™을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 신체 표면으로서의 피부는 일반적으로 상피 세포층을 포함할 것이고, 추가로 내피 세포층을 포함할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "커플링" 및 "커플링된"은 임의의 화학적 회합을 지칭하고, 공유 및 비-공유 상호작용 둘다를 포함한다.

본 발명의 모발-결합 및 피부-결합 펩티드의 선택에 적용되는 바와 같이, 용어 "엄격도"는 펩티드를 모발 또는 피부로부터 용출시키는데 사용되는 용출제 (통상적으로는 세정제)의 농도를 지칭한다. 용출제의 농도가 높을 수록 보다 엄격한 조건을 제공한다.

용어 "펩티드-모발 복합체"는 펩티드상의 결합 부위를 통해 모발 섬유에 결합된 펩티드를 포함하는 구조체를 의미한다.

용어 "펩티드-피부 복합체"는 펩티드상의 결합 부위를 통해 피부에 결합된 펩티드를 포함하는 구조체를 의미한다.

용어 "펩티드-기재 복합체"는 펩티드-모발 또는 펩티드-피부 복합체를 지칭한다.

용어 "나노입자"는 본원에서 평균 입경이 1 내지 500 nm인 입자로서 정의된다. 바람직하게는, 입자의 평균 입경은 약 1 내지 200 nm이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "입도" 및 "입경"은 동일한 의미를 갖는다. 나노입자는 금속, 반도체, 중합체, 또는 다른 유기 또는 무기 입자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

용어 "아미노산"은 단백질 또는 폴리펩티드의 기초 화학 구조 단위를 지칭한다. 본원에서는 특정 아미노산을 나타내는데 하기 약어를 사용한다:

아미노산	3문자 약어	1문자 약어
알라닌	Ala	A
아르기닌	Arg	R
아스파라긴	Asn	N
아스파르트산	Asp	D
시스테인	Cys	C
글루타민	Gln	Q
글루탐산	Glu	E
글리신	Gly	G
히스티딘	His	H
이소류신	Ile	I
류신	Leu	L
리신	Lys	K
메티오닌	Met	M
페닐알라닌	Phe	F
프롤린	Pro	P
세린	Ser	S
트레오닌	Thr	T
트립토판	Trp	W
티로신	Tyr	Y
발린	Val	V

"유전자"는 코딩 서열의 앞쪽 (5' 비-코딩 서열) 및 뒷쪽 (3' 비-코딩 서열)의 조절 서열을 포함하는, 특정 단백질을 발현하는 핵산 단편을 지칭한다. "천연 유전자"는 자연계에서 그 자체의 조절 서열과 함께 존재하는 유전자를 지칭한다. "키메라 유전자"는 자연계에서는 함께 존재하지 않는 조절 서열과 코딩 서열을 포함하는, 천연 유전자가 아닌 임의의 유전자를 지칭한다. 따라서, 키메라 유전자는 상이한 공급원으로부터 유래된 조절 서열 및 코딩 서열, 또는 동일 공급원으로부터 유래되지만 자연계에 존재하는 것과는 상이한 방식으로 배열된 조절 서열 및 코딩 서열을 포함할 수 있다. "외래" 유전자는 통상적으로는 숙주 유기체에 존재하지 않지만 유전자 전달에 의해 숙주 유기체 내로 도입된 유전자를 지칭한다. 외래 유전자는 비-천연 유기체 내로 삽입된 천연 유전자, 또는 키메라 유전자를 포함할 수 있다.

"합성 유전자"는 당업자에게 공지된 절차를 사용하여 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드 빌딩 블럭(building block)으로부터 조립될 수 있다. 이들 빌딩 블럭은 라이게이션 및 어닐링되어, 이후에 효소적으로 조립되어 전체 유전자를 구성하는 유전자 절편을 형성한다. DNA의 서열과 관련된 것과 같이, "화학적으로 합성된"은 성분 뉴클레오티드가 시험관내 조립되었음을 의미한다. DNA의 수동 화학 합성은 잘 확립되어 있는 절차를 이용하여 달성할 수도 있고, 또는 상업적으로 입수가능한 수많은 기기 중 하나를 사용하여 자동화 화학 합성을 수행할 수도 있다. 따라서, 유전자는 숙주 세포의 코돈 편향(bias)을 반영한 뉴클레오티드 서열의 최적화를 기초로 하여 최적 유전자 발현이 일어나도록 맞춰질 수 있다. 당업자는 코돈 사용이 숙주가 선호하는 코돈으로 편향된 경우에는 성공적인 유전자 발현이 가능함을 이해하고 있다. 바람직한 코돈의 결정은 서열 정보가 이용가능한 숙주 세포로부터 유래된 유전자에 대한 조사 결과를 기초로 할 수 있다.

용어 "파지" 또는 "박테리오파지"는 박테리아를 감염시키는 바이러스를 지칭한다. 본 발명의 목적상, 변경된 형태가 사용될 수 있다. 바람직한 박테리오파지는 M13이라 불리는 "야생" 파지에서 유래된다. M13 시스템은 박테리아 내부에서 성장할 수 있어서 그것이 감염시킨 세포를 파괴시키지 않으면서 새로운 파지를 계속 생산한다. 이것은 단일-가닥 DNA 파지이다.

용어 "파지 디스플레이"는 박테리오파지 또는 파지미드 입자의 표면상의 기능성 외래 펩티드 또는 작은 단백질의 디스플레이를 나타낸다. 유전자 조작된 파지는 펩티드를 그의 천연 표면 단백질의 절편으로서 제시하는데 사용될 수 있다. 펩티드 라이브러리는 상이한 유전자 서열을 갖는 파지의 집단에 의해 제조될 수 있다.

"PCR" 또는 "폴리머라제 연쇄 반응"은 특정 DNA 절편의 증폭에 사용되는 기술이다 (미국 특허 제4,683,195호 및 동 제4,800,159호).

본원에서 사용되는 표준 재조합 DNA 및 분자 클로닝 기술은 당업계에 공지되어 있고, 문헌 ([Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)] (이하 "Maniatis"), [Silhavy, T. J., Bennan, M. L. and Enquist, L. W., Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1984)] 및 [Ausubel, F. M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, published by Greene Publishing Assoc. and Wiley-lnterscience (1987)])에 기재되어 있다.

본 발명은 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 실란트로 사용하여 착색제, 컨디셔너 및 기타 유익제의 효과를 증진시키는 방법을 제공한다. 모발-결합 및 피부-결합 펩티드는 모발 또는 피부 각각에 대하여 결합 친화성을 가지며, 조합적인 방법, 예컨대 파지 디스플레이를 이용하여 동정될 수도 있고 실험적으로 생성될 수도 있다. 추가로, 유익제에 커플링된 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 포함하는 결합체가 실란트로 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에서, 펩티드-기재의 실란트는 유익제 도포와 동시에, 또는 유익제 도포 후에, 또는 유익제 도포 이전에 도포되어 유익제를 모발 또는 피부에 실링시킬 수 있다.

모발-결합 및 피부-결합 펩티드의 확인

본원에서 정의된 바와 같이, 모발-결합 펩티드 (HBP) 및 피부-결합 펩티드 (SBP)는 모발 또는 피부 각각에 높은 친화도로 특이적으로 결합하는 펩티드 서열이다. 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드는 유익제에는 특이적인 친화성이 없지만 몇가지 유익제, 특히 극성인 유익제에는 비특이적으로 상호작용할 수 있다. 본 발명의 모발-결합 및 피부-결합 펩티드의 길이는 약 7개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 더욱 바람직하게는 약 7개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 가장 바람직하게는 약 7개 아미노산 내지 약 20개 아미노산이다. 적합한 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드는 당업계에 공지된 방법으로 선별될 수도 있고, 또는 실험적으로 생성될 수도 있다.

본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의의 미국 특허 출원 공개 제2005/0050656호 (상기 문헌은 본원에 참고로 포함됨)에서 후앙 등이 기재한 바와 같이, 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드는 무작위로 생성된 후에 관심 기재에 대한 이들의 결합 친화도를 기초로 하여 특이적 모발 또는 피부 샘플에 대하여 선별될 수 있다. 펩티드의 무작위 라이브러리의 생성은 공지되어 있고, 박테리아 디스플레이 ([Kemp, D.J.; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78(7):4520-4524 (1981)] 및 [Helfman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80(1):31-35 (1983)]), 효모 디스플레이 [Chien et al., Proc Natl Acad Sci USA 88(21):9578-82 (1991)], 조합 고상 펩티드 합성 (미국 특허 제5,449,754호, 미국 특허 제5,480,971호, 미국 특허 제5,585,275호, 미국 특허 제5,639,603호) 및 파지 디스플레이 기술 (미국 특허 제5,223,409호, 미국 특허 제5,403,484호, 미국 특허 제5,571,698호, 미국 특허 제5,837,500호) 등을 비롯한 다양한 기술로 수행될 수 있다. 이러한 생물학적 펩티드 라이브러리를 생성시키는 기술은 당업계에 공지되어 있다. 예시적인 방법은 문헌 ([Dani, M., J. of Receptor ＆ Signal Transduction Res., 21(4):447-468 (2001)], [Sidhu et al., Methods in Enzymology 328:333-363 (2000)], [Kay et al., Combinatorial Chemistry ＆ High Throughput Screening, Vol. 8:545-551 (2005)] 및 [Phage Display of Peptides and Proteins, A Laboratory Manual, Brian K. Kay, Jill Winter, and John McCafferty, eds.; Academic Press, NY, 1996])에 기재되어 있다. 추가로, 파지 디스플레이 라이브러리는 뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs) (미국 매사추세츠주 베벌리 소재)와 같은 회사로부터 상업적으로 입수가능하다.

펩티드를 무작위로 생성하는데 바람직한 방법은 파지 디스플레이에 의한 것이다. 파지 디스플레이는 시험관내 선별 기술로서, 여기서 펩티드 또는 단백질이 박테리오파지의 외피 단백질에 유전적으로 융합되어, 파지 비리온의 외부 상에 융합된 펩티드의 디스플레이를 생성시키는 한편, 상기 융합체를 코딩하는 DNA는 비리온 내에 남는다. 디스플레이된 펩티드와 그를 코딩하는 DNA 사이의 이러한 물리적 연결은 "바이오패닝(biopanning)"이라고 불리는 단순한 시험관내 선별 절차에 의해 각각의 상응하는 DNA 서열에 연결된 막대한 수의 펩티드 변이체의 스크리닝을 가능하게 한다. 가장 간단한 형태에서, 바이오패닝은 파지-디스플레이된 변이체의 풀(pool)을 플레이트 또는 비드 상에 고정화된 관심 표적과 함께 인큐베이션하고, 미결합 파지를 세척해 내고, 파지와 표적 사이의 결합 상호작용을 파괴하여 특이적으로 결합된 파지를 용출시켜서 수행된다. 이어서, 용출된 파지를 생체내 증폭시키고 상기 과정을 반복하여, 가장 강력한 결합 서열을 갖는 파지 풀을 단계별로 풍부하게 한다. 3회 이상의 선별/증폭 후에는 개개의 클론을 DNA 서열결정하여 특징규명한다.

구체적으로, 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드는 하기 방법을 이용하여 선별할 수 있다. 상기한 방법을 이용하여 적합한 펩티드 라이브러리를 생성하거나, 또는 시판업체로부터 상기 라이브러리를 상업적으로 입수한다. 펩티드 라이브러리를 생성한 후에는 상기 라이브러리를 적절한 양의 시험 기재, 구체적으로는 모발 또는 피부 샘플과 접촉시킨다. 펩티드 라이브러리를 샘플 접촉용으로 적합한 용액 중에 용해시킨다. 시험 기재를 상기 용액 중에 현탁시키거나, 또는 플레이트 또는 비드상에 고정화시킬 수 있다. 바람직한 용액은 계면활성제를 함유하는 완충된 염수 수용액이다. 적합한 용액은 0.5％ 트윈(Tween)^® 20을 함유하는 트리스(Tris)-완충 염수 (TBS)이다. 시험 기재로의 펩티드의 물질 전달 속도(mass transfer rate)를 증가시켜서 최대 결합 달성에 소요되는 시간을 단축시키기 위해서, 상기 용액을 임의의 수단으로 추가로 교반할 수 있다.

접촉시, 무작위로 생성된 많은 펩티드는 시험 기재에 결합하여 펩티드-기재 복합체 (즉, 펩티드-모발 또는 펩티드-피부 복합체)를 형성할 것이다. 미결합 펩티드는 세척으로 제거할 수 있다. 모든 비결합 물질이 제거된 후, 시험 기재에 대한 결합 친화도가 다양한 펩티드들을 다양한 엄격도의 완충제 중에서 선별 세척하여 분획화할 수 있다. 사용되는 완충제의 엄격도를 증가시키면 펩티드-기재 복합체에서 펩티드와 시험 기재 사이의 결합에 요구되는 강도가 증가된다.

펩티드 선별시 완충액의 엄격도를 변화시키기 위해, 산성 pH (1.5 내지 3.0), 염기성 pH (10 내지 12.5), 높은 염 농도, 예컨대 MgCl₂ (3 내지 5 M) 및 LiCl (5 내지 10 M), 물, 에틸렌 글리콜 (25 내지 50％), 디옥산 (5 내지 20％), 티오시아네이트 (1 내지 5 M), 구아니딘 (2 내지 5 M), 우레아 (2 내지 8 M), 및 여러가지 농도의 각종 계면활성제, 예컨대, SDS (나트륨 도데실 술페이트), DOC (나트륨 데옥시콜레이트), 노니데트(Nonidet) P-40, 트리톤(Triton) X-100, 트윈^® 20 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 수많은 물질이 사용될 수 있고, 트윈^® 20이 바람직하다. 이들 물질은 트리스-HCl, 트리스-완충 염수, 트리스-보레이트, 트리스-아세트산, 트리에틸아민, 인산염 완충제, 및 글리신-HCl을 포함하지만 이에 제한되지 않는 완충액 중에서 제조될 수 있고, 트리스-완충 염수 용액이 바람직하다.

시험 기재에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는 펩티드는, 증가하는 엄격도를 갖는 완충제를 사용하는 선별 공정을 반복하여 용출시킬 수 있다는 것을 이해할 것이다. 용출된 펩티드는 당업계에 공지된 임의의 수단으로 확인하고 서열결정할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 발명의 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 생성하기 위해 다음 방법이 이용될 수 있다. 조합 방식으로 생성된 파지-펩티드의 라이브러리를 관심 시험 기재와 접촉시켜서 파지-펩티드-기재 복합체를 형성한다. 파지-펩티드-기재 복합체를 복합체화되지 않은 펩티드 및 미결합 기재로부터 분리하고, 결합된 파지-펩티드를 파지-펩티드-기재 복합체로부터 용출시키는데, 바람직하게는 산 처리를 통해 상기 복합체로부터 용출시킨다. 이어서, 용출된 파지-펩티드를 확인하고 서열결정한다. 어떤 기재에는 결합하지만 또다른 기재에는 결합하지 않는 펩티드, 예컨대 모발에는 결합하지만 피부에는 결합하지 않는 펩티드 또는 피부에는 결합하지만 모발에는 결합하지 않는 펩티드의 서열을 확인하기 위해, 제거(subtractive) 패닝 단계를 추가할 수 있다. 구체적으로, 조합 방식으로 생성된 파지-펩티드의 라이브러리를 먼저 비-표적과 접촉시켜서 그에 결합하는 파지-펩티드를 제거한다. 이어서, 비-결합 파지-펩티드를 원하는 기재와 접촉시킨 후에 상기 과정을 수행한다. 별법으로, 조합 방식으로 생성된 파지-펩티드의 라이브러리를 비-표적 및 원하는 기재와 동시에 접촉시킬 수 있다. 이어서, 파지-펩티드-기재 복합체를 파지-펩티드-비-표적 복합체로부터 분리한 후, 상기한 방법을 원하는 파지-펩티드-모발 또는 파지-펩티드-피부 복합체에 대하여 수행한다.

별법으로, 모발 또는 피부에 더 높은 친화도를 갖는 펩티드를 단리하기 위해서는 변형된 파지 디스플레이 스크리닝 방법을 이용할 수 있다. 이러한 변형된 방법에서, 파지-펩티드-기재 복합체를 상기한 바와 같이 형성한다. 이어서, 이들 복합체를 용출 완충제로 처리한다. 상기한 용출 완충제 중 임의의 것을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 용출 완충제는 산성 용액이다. 이어서, 잔류하는 용출-저항성 파지-펩티드-기재 복합체를 사용하여 박테리아 숙주 세포, 예컨대 이. 콜라이(E. coli) ER2738을 직접 감염시킨다. 감염된 숙주 세포를 적절한 성장 배지, 예컨대 LB (루리아-베르타니(Luria-Bertani)) 배지 중에서 성장시키고, 상기 배양액을 적합한 성장 배지, 예컨대 IPTG (이소프로필 β-D-티오갈락토피라노시드) 및 S-Gal™을 함유하는 LB 배지를 함유하는 아가에 도말한다. 성장 후, DNA 단리 및 서열결정을 위한 플라크를 골라 내어 관심 기재에 대해 높은 결합 친화도를 갖는 펩티드 서열을 확인한다. 별법으로, 얀센 등의 미국 특허 출원 공개 제2003/0152976호 (상기 문헌은 본원에 참고로 포함됨)에 기재된 바와 같이 적절한 프라이머를 사용하여 PCR을 파지-펩티드-기재 복합체 상에서 직접 수행함으로써, PCR을 사용하여 상기한 변형된 파지 디스플레이 스크리닝 방법으로부터의 용출-저항성 파지-펩티드를 확인할 수 있다.

샴푸-저항성 모발-결합 펩티드는 본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의인 오'브라이언(O'Brien) 등의 미국 특허 출원 공개 제2006/0073111호 (상기 문헌은 본원에 참고로 포함됨)에 기재된 바와 같이 변형된 바이오패닝 방법을 이용하여 선별할 수 있다. 유사하게, 모발 컨디셔너-저항성 모발-결합 펩티드 및 피부 위생 조성물-저항성 피부-결합 펩티드는 왕(Wang) 등의 방법 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의의 미국 특허 출원 제11/359163호) 및 왕 등의 방법 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의의 미국 특허 출원 제11/359162호) 각각을 이용하여 확인할 수 있다. 이러한 방법에서, 파지-펩티드의 최초 라이브러리를 기재와의 접촉을 위한 관심 매트릭스 (즉, 샴푸 매트릭스, 모발 컨디셔너 매트릭스, 또는 피부 위생 조성물 매트릭스) 중에 용해시키거나, 상기한 바와 같이 기재를 파지-펩티드의 라이브러리와 접촉하여 형성된 파지-펩티드 기재 복합체를 관심 매트릭스와 접촉시킨다. 이어서, 바이오패닝 방법을 상기한 바와 같이 수행한다. 샴푸 매트릭스, 모발 컨디셔너 매트릭스, 또는 피부 위생 조성물 매트릭스는 전강도(full strength)를 갖는 시판 제품이거나 그의 희석물일 수 있다.

적합한 모발-결합 및 피부-결합 펩티드는 본원에 기재한 방법을 이용하여 생성할 수 있다. 추가로, 임의의 공지된 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드, 예컨대 후앙 등 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의의 미국 특허 출원 공개 제2005/0050656호, 및 미국 특허 출원 공개 제2005/0226839호), 에스텔 등 (WO 0179479), 머레이 등 (미국 특허 출원 공개 제2002/0098524호), 얀센 등 (미국 특허 출원 공개 제2003/0152976호), 얀센 등 (WO 04048399), 오'브라이언 등 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의의 미국 특허 출원 공개 제2006/0073111호), 왕 등 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의의 미국 특허 출원 제11/359163호) 및 왕 등 (본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의의 미국 특허 출원 제11/359162호)이 보고한 것 (상기 문헌 모두가 본원에 참고로 포함됨)을 사용할 수 있다. 적합한 모발-결합 및 피부-결합 펩티드의 비-제한적인 예는 표 1에 기재되어 있다.

별법으로, 모발-결합 및 피부-결합 펩티드 서열은 로테 등이 기재 (WO 2004/000257)한 바와 같이 정전 상호작용을 통해 모발 및 피부에 결합할 수 있는, 양으로 대전된 아미노산을 포함하는 펩티드를 디자인함으로써 실험적으로 생성될 수 있다. 실험적으로 생성된 모발-결합 및 피부-결합 펩티드는 약 7개 아미노산 내지 약 50개 아미노산을 갖고, 양으로 대전된 아미노산, 예컨대 리신, 아르기닌 및 히스티딘을 적어도 약 40 mol％로 포함한다. 트리펩티드 모티프, 예컨대 HRK, RHK, HKR, RKH, KRH, KHR, HKX, KRX, RKX, HRX, KHX 및 RHX (여기서, X는 임의의 천연 아미노산일 수 있지만, 가장 바람직하게는 중성 측쇄 아미노산, 예컨대 글리신, 알라닌, 프롤린, 류신, 이소류신, 발린 및 페닐알라닌 중에서 선택됨)를 함유하는 펩티드 서열이 가장 바람직하다. 또한, 펩티드 서열은 최종 용도에서 다른 기능적 요건, 예컨대 제제화된 제품에서의 용해도, 점도 및 다른 성분과의 상용성에 대한 요건을 충족시켜야 하고, 따라서 이용시의 필요에 따라 달라질 것임을 이해해야 한다. 일부 경우에, 펩티드는 히스티딘, 리신 또는 아르기닌을 포함하지 않는 아미노산을 최대 60 mol％까지 함유할 수 있다. 실험적으로 생성된 적합한 모발-결합 및 피부-결합 펩티드는 서열 8 내지 서열 12 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다 (표 1 참조).

또한, 여러가지 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드들의 혼합물을 사용하는 것이 유익할 수도 있다. 이러한 혼합물 중의 펩티드는 펩티드들 사이에서 유익한 효과를 경감시키는 상호작용이 없도록 선택할 필요가 있다. 모발-결합 펩티드 또는 피부-결합 펩티드의 적합한 혼합물은 당업자가 통상의 실험을 통해 결정할 수 있다. 추가로, 펩티드와 기재의 상호작용을 증진시키기 위해서는 2종 이상의 모발-결합 펩티드 또는 피부-결합 펩티드를 직접 또는 스페이서를 통해 함께 연결시키는 것이 바람직할 수 있다. 여러가지 펩티드 조성물 및 적합한 스페이서를 제조하는 방법을 하기에 기재한다. 비-제한적인 예를 표 1에 기재한다.

모발-결합 및 피부-결합 펩티드의 생성

본 발명의 모발-결합 및 피부-결합 펩티드는 당업계에 공지된 표준 펩티드 합성 방법을 이용하여 제조할 수 있다 (예를 들어, 문헌 ([Stewart et al., Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, IL, 1984], [Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, New York, 1984] 및 [Pennington et al., Peptide Synthesis Protocols, Humana Press, Totowa, NJ, 1994] 참조). 추가로, 많은 회사가 주문형 펩티드 합성 서비스를 제공한다.

별법으로, 본 발명의 펩티드는 재조합 DNA 및 분자 클로닝 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 후앙 등이 기재 (미국 특허 출원 공개 제2005/0050656)하고, 본원의 실시예 5에서 예시된 바와 같이, 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 코딩하는 유전자는 이종 숙주 세포, 특히 미생물 숙주의 세포 내에서 생성될 수 있다. 펩티드가 재조합 DNA 및 분자 클로닝으로 제조되면, 이것은 N-말단에 프롤린 (P) 잔기를 추가로 포함할 수 있고, 임의로는 C-말단에 아스파르트산 (D) 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 추가의 잔기는, 펩티드 서열의 병렬식(tandem) 반복부 사이에서 봉입체 형성을 촉진하기 위해 사용된 펩티드 태그로부터 원하는 펩티드 서열을 분리하기 위해 DP 절단 부위를 사용한 결과이다.

모발 유익제

당업계에 공지된 임의의 적합한 모발 유익제가 본 발명의 방법에 사용될 수 있다. 모발 유익제는 모발에 대해 친화성을 갖는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "모발에 대한 친화성을 갖는"은 유익제가 모발의 표면으로 흡착되거나 모발로 흡수된다는 것을 의미한다. 적합한 모발 유익제로는 모발 착색제 및 모발 컨디셔너 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.

본원에서 정의한 바와 같이, 모발 착색제는 모발의 색상을 변화시키는데 사용할 수 있는 임의의 염료, 안료, 나노입자 등이다. 모발 착색제는 당업계에 공지되어 있으며 (예를 들어 그린(Green) 등의 WO 0107009 (본원에 참고로 포함됨), 문헌 [CFTA International Color Handbook, 2^nd ed., Micelle Press, England (1992)] 및 [Cosmetic Handbook, US Food and Drug Administration, FDA/IAS Booklet (1992)] 참조), 다양한 시판업체 (예를 들어 미국 펜실베니아주 피츠버그 소재의 바이엘(Bayer), 미국 뉴욕주 태리타운 소재의 시바-가이기(Ciba-Geigy)), 미국 뉴저지주 브릿지워터 소재의 아이씨아이(ICI), 오스트리아 비엔나 소재의 샌도즈(Sandoz), 미국 뉴저지주 마운트 올리브 소재의 바스프(BASF), 및 독일 프랑크푸르트 소재의 훽스트(Hoechst))로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 적합한 모발 착색제로는 염료, 예컨대 4-히드록시프로필아미노-3-니트로페놀, 4-아미노-3-니트로페놀, 2-아미노-6-클로로-4-니트로페놀, 2-니트로-파라페닐렌디아민, N,N-히드록시에틸-2-니트로-페닐렌디아민, 4-니트로-인돌, 2-니트로-5-글리세릴 메틸아닐린, 3-메틸아미노-4-니트로페녹시에탄올, 3-니트로-p-히드록시에틸아미노페놀, 히드록시안트라퀴논아미노프로필메틸 모르폴리늄 메토술페이트, 헨나(Henna), HC 블루(HC Blue) 1, HC 블루 2, HC 옐로우(HC Yellow) 4, HC 레드(HC Red) 3, HC 레드 5, HC 레드 7, HC 바이올렛(HC Violet) 1, HC 바이올렛 2, HC 블루 7, HC 블루 10, HC 블루 12, HC 옐로우 2, HC 옐로우 6, HC 옐로우 8, HC 옐로우 12, HC 오렌지(HC Orange) 2, HC 오렌지 3, HC 브라운(HC Brown) 2, D＆C 옐로우(D＆C Yellow) 1, D＆C 옐로우 3, D＆C 블루(D＆C Blue) 1, 디스퍼스 블루(Disperse Blue) 3, 디스퍼스 바이올렛(Disperse Violet) 1, 디스퍼스 오렌지(Disperse Orange), 디스퍼스 바이올렛 4, 디스퍼스 블랙(Disperse Black) 9, 베이직 오렌지(Basic Orange) 31, 베이직 옐로우(Basic Yellow) 57, 베이직 옐로우 87, HC 옐로우 9호, 베이직 블루(Basic Blue) 26, 베이직 블루 7, 베이직 블루 99, 베이직 바이올렛(Basic Violet) 14, 베이직 바이올렛 2, 베이직 브라운(Basic Brown) 16, 베이직 브라운 17, 베이직 레드(Basic Red) 2, 베이직 레드 51, 애씨드 레드(Acid Red) 33, 브릴리안트 블랙(Brilliant Black) 1, 에오신 유도체, 예컨대 D＆C 레드(D＆C Red) 호 및 할로겐화된 플루오레세인 유도체, 예컨대 D＆C 레드 27호, D＆C 레드 21호와 조합한 D＆C 레드 오렌지(D＆C Red Orange) 5호 및 D＆C 오렌지(D＆C Orange) 10호; 및 안료, 예컨대 D＆C 레드 36호, D＆C 레드 30호, D＆C 오렌지 17호, 그린 3 레이크(Green 3 Lake), 익스트. 옐로우 7 레이크(Ext. Yellow 7 Lake), 오렌지 4 레이크(Orange 4 Lake), 및 레드 28 레이크(Red 28 Lake), D＆C 레드 7호, 11호, 31호 및 34호의 칼슘 레이크, D＆C 레드 12호의 바륨 레이크, D＆C 레드 13호의 스트론튬 레이크, FD＆C 옐로우(FD＆C Yellow) 5호의 알루미늄 레이크, FD＆C 옐로우 6호의 알루미늄 레이크, FD＆C 40호의 알루미늄 레이크, D＆C 레드 21호, 22호, 27호 및 28호의 알루미늄 레이크, FD＆C 블루(FD＆C Blue) 1호의 알루미늄 레이크, D＆C 오렌지 5호의 알루미늄 레이크, D＆C 옐로우 10호의 알루미늄 레이크, D＆C 레드 33호의 지르코늄 레이크, 크로모프탈^® 옐로우(Cromophthal^®Yellow) 131AK (시바 스페셜티 케미칼스(Ciba Specialty Chemicals)), 선패스트^® 마젠타(Sunfast^® Magenta) 122 (선 케미칼(Sun Chemical)) 및 선패스트^® 블루(Sunfast^® Blue) 15:3 (선 케미칼), 산화철, 탄산칼슘, 수산화알루미늄, 황산칼슘, 카올린, 페로시안화철암모늄, 탄산마그네슘, 카르민, 황산바륨, 운모, 옥시염화비스무트, 스테아르산아연, 망간 바이올렛, 산화크롬, 이산화티탄, 이산화티탄 나노입자, 산화아연, 산화바륨, 울트라마린 블루(ultramarine blue), 시트르산비스무트, 및 화이트 미네랄(white mineral), 예컨대 히드록시아파타이트, 및 지르콘(Zircon) (규산지르콘) 및 카본 블랙 입자 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.

금속 및 반도체 나노입자도 그의 강력한 광 방출로 인해 모발 착색제로서 사용될 수 있다 (빅(Vic) 등의 미국 특허 출원 공개 제2004/0010864호). 금속 나노입자로는 금, 은, 백금, 팔라듐, 이리듐, 로듐, 오스뮴, 철, 구리, 코발트, 및 이들 금속으로 구성된 합금의 입자 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. "합금"은 본원에서 2종 이상의 금속의 균질 혼합물로서 정의된다. "반도체 나노입자"로는 셀렌화카드뮴, 황화카드뮴, 황화은, 황화카드뮴, 산화아연, 황화아연, 셀렌화아연, 황화납, 비소화갈륨, 규소, 산화주석, 산화철 및 인화인듐의 입자 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 나노입자는 적합한 유기 코팅 또는 단층을 사용하여 안정화되고 수용성으로 만들어진다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 단층-보호된 나노입자는 안정화된 나노입자의 한 유형이다. 안정화된 수용성 금속 및 반도체 나노입자의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있고, 적합한 예는 본원과 동시 계류 중이고 본원과 공동 명의인 후앙 등의 미국 특허 출원 공개 제2004/0115345호 (상기 문헌은 본원에 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. 나노입자의 색상은 입자의 크기에 따라 달라진다. 따라서, 나노입자의 크기를 제어함으로써 여러가지 색상을 얻을 수 있다.

추가로, 부착, 흡착 또는 흡수된 염료를 갖는 유기 및 무기 나노입자를 모발 착색제로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 모발 착색제는 착색된 중합체 나노입자일 수 있다. 중합체 나노입자의 예로는 폴리스티렌, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리비닐톨루엔, 스티렌/부타디엔 공중합체 및 라텍스와 같은 물질로 구성된 미소구체 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 사용하기 위해서는, 착색된 미소구체의 직경이 약 10 나노미터 내지 약 2 미크론이다. 미소구체는 임의의 적합한 염료, 예컨대 상기 기재된 것들을 미소구체와 커플링시켜 착색될 수 있다. 염료는 미소구체의 표면에 커플링될 수도 있고, 또는 다공성 미소구체의 다공성 구조 내에 흡착될 수도 있다. 공유 부착이 가능하도록 관능화된 비염색된 미소구체 및 염색된 미소구체를 비롯한 적합한 미소구체는 방 래보라토리스(Bang Laboratories) (미국 인디아나주 피셔스 소재)와 같은 회사로부터 입수가능하다.

본원에서 정의한 바와 같이, 모발 컨디셔너는 모발의 외관, 질감 및 윤기를 개선시킬 뿐만이 아니라 또한 모발의 숱(hair body) 또는 유연성(suppleness)도 증가시키는 작용제이다. 모발 컨디셔너로는 스타일링 보조제, 모발 스트레이트 보조제, 모발 강화 보조제, 및 볼륨화제(volumizing agent), 예컨대 나노입자 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 모발 컨디셔너는 예를 들어 그린 등의 상기 문헌에 기재된 바와 같이 당업계에 공지되어 있으며, 여러가지 시판업체로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 모발 컨디셔너의 적합한 예로는 양이온성 중합체, 예컨대 양이온화된 구아 검, 디알릴 4급 암모늄 염/아크릴아미드 공중합체, 4급화 폴리비닐피롤리돈 및 그의 유도체, 및 각종 폴리쿼터늄-화합물; 장쇄 알킬기 (즉, C₈ 내지 C₂₄); 양이온성 계면활성제, 예컨대 스테아르알코늄 클로라이드, 센트리모늄 클로라이드 및 사파민 히드로클로라이드; 지방 알콜, 예컨대 베헤닐 알콜; 지방 아민, 예컨대 스테아릴 아민; 왁스; 에스테르; 비-이온성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 알콜 및 폴리에틸렌 글리콜; 실리콘; 실록산, 예컨대 데카메틸시클로펜타실록산; 중합체 에멀젼, 예컨대 아모디메티콘; 및 나노입자, 예컨대 실리카 나노입자 및 중합체 나노입자 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 바람직한 모발 컨디셔너는 하기 기재된 바와 같이 모발-결합 펩티드에 대한 커플링을 용이하게 하기 위해 아민 또는 히드록실 관능기를 함유한다. 바람직한 컨디셔너의 예는 옥틸아민 (CAS 제111-86-4호), 스테아릴 아민 (CAS 제124-30-1호), 베헤닐 알콜 (CAS 제661-19-8호, 코그니스 코포레이션(Cognis Corp.) (미국 오하이오주 신신나티 소재), 비닐기 말단의 실록산, 비닐기 말단의 실리콘 (CAS 제68083-19-2호), 비닐기 말단의 메틸 비닐 실록산, 비닐기 말단의 메틸 비닐 실리콘 (CAS 제68951-99-5호), 히드록실 말단의 실록산, 히드록실 말단의 실리콘 (CAS 제80801-30-5호), 아미노-변형된 실리콘 유도체, [(아미노에틸)아미노]프로필 히드록실 디메틸 실록산, [(아미노에틸)아미노]프로필 히드록실 디메틸 실리콘 및 알파-트리데실-오메가-히드록시-폴리(옥시-1,2-에탄디일) (CAS 제24938-91-8호)이다.

피부 유익제

당업계에 공지된 임의의 적합한 피부 유익제가 본 발명의 방법에 사용될 수 있다. 피부 유익제는 피부에 대한 친화성을 갖는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "피부에 대한 친화성"을 갖는다는 것은 유익제가 피부 표면으로 흡착된다는 것을 의미한다. 적합한 피부 유익제로는 피부 착색제, 피부 컨디셔너, 및 선스크린 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.

본원에서 정의한 바와 같이, 피부 착색제는 피부의 색상을 변화시키는데 사용할 수 있는 임의의 염료, 안료, 나노입자 등이다. 상기한 염료, 안료 또는 나노입자 중 임의의 것을 피부 착색제로 사용할 수 있다. 상기 착색제는 또한 햇볕에 노출하지 않고도 피부상에 태닝한 외관을 생성하는 햇볕이 필요없는 태닝제(sunless tanning agent), 예컨대 디히드록시아세톤일 수도 있다.

본원에서 정의한 바와 같이, 피부 컨디셔너로는 피부를 당겨주는 아스트린젠트, 죽은 피부 세포를 제거하는 엑스폴리앙(exfoliant), 매끄럽고 부드럽고 유연성있는 외관 유지를 돕는 연화제, 피부 최상층의 수분 함량을 증가시키는 보습제, 피부 표면에서의 물 증발을 지연시키는 차폐제(occlusive), 및 건조하거나 손상된 피부의 외관을 향상시키거나 또는 박편화를 감소시키고 유연성을 회복시키는 잡다한 화합물 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 임의의 적합한 공지된 피부 컨디셔너가 본 발명의 방법에 사용될 수 있다. 피부 컨디셔너는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 그린 등의 상기 문헌을 참조하고, 각종 시판업체로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 피부 컨디셔너의 적합한 예로는 알파-히드록시산, 베타-히드록시산, 폴리올, 히알루론산, D,L-판테놀, 폴리살리실레이트, 비타민 A 팔미테이트, 비타민 E 아세테이트, 글리세린, 소르비톨, 실리콘, 실리콘 유도체, 라놀린, 천연 오일 및 트리글리세리드 에스테르 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 바람직한 피부 컨디셔너는 폴리살리실레이트, 프로필렌 글리콜 (CAS 제57-55-6호, 미국 미시건주 미들랜드 소재의 다우 케미칼(Dow Chemical)), 글리세린 (CAS 제56-81-5호, 미국 오하이오주 신신나티 소재의 프로크토르 앤드 캠블 컴퍼니(Proctor ＆ Gamble Co.)), 글리콜산 (CAS 제79-14-1호, 미국 델라웨어주 윌밍톤 소재의 듀폰 컴퍼니(DuPont Co.)), 락트산 (CAS 제50-21-5호, 미국 매사추세츠주 와르드 힐 소재의 알파 애사르(Alfa Aesar)), 말산 (CAS 제617-48-1호, 알파 애사르), 시트르산 (CAS 제77-92-9호, 알파 애사르), 타르타르산 (CAS 제133-37-9호, 알파 애사르), 글루카르산 (CAS 제87-73-0호), 갈락타르산 (CAS 제526-99-8호), 3-히드록시발레르산 (CAS 제10237-77-1호), 살리실산 (CAS 제69-72-7호, 알파 애사르) 및 1,3-프로판디올 (CAS 제504-63-2호, 미국 델라웨어주 윌밍톤 소재의 듀폰 컴퍼니)이다. 폴리살리실레이트는 화이트(White) 등의 미국 특허 제4,855,483호에 기재된 방법으로 제조될 수 있으며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. 글루카르산은 문헌 [Merbouh et al., Carbohydr. Res. 336:75-78 (2001)]에 기재된 방법을 이용하여 합성될 수 있다. 3-히드록시발레르산은 브라무씨(Bramucci) 등의 WO 02012530에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.

선스크린은 290 내지 400 나노미터의 파장에서 자외선 광을 흡수하거나 반사하거나 산란시키는 물질이다. 본 발명에 사용되는 선스크린은 유기 선스크린일 수도 있고 무기 선스크린일 수도 있다. 유기 선스크린은 본원에서 290 내지 400 nm 파장의 자외선 광을 흡수하는 유기 화학물질로 정의된다. 유기 선스크린은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 우딘(Woddin) 등의 미국 특허 제5,219,558호 (상기 문헌은 본원에 참고로 포함됨), 특히 컬럼 3의 제35행 내지 컬럼 4의 제23행). 적합한 예로는 파라-아미노벤조산 (PABA), 에틸 파라-아미노벤조에이트, 아밀 파라-아미노벤조에이트, 옥틸 파라-아미노벤조에이트, 에틸헥실 디메틸 파라-아미노벤조에이트 (파디메이트 오(Padimate O)), 에틸렌 글리콜 살리실레이트, 페닐 살리실레이트, 옥틸 살리실레이트, 벤질 살리실레이트, 부틸페닐 살리실레이트, 호모멘틸 살리실레이트 (호모살레이트(Homosalate)), 에틸헥실 살리실레이트 (옥티살레이트(Octisalate)), TEA-살리실레이트 (트롤아민 살리실레이트), 벤질 신나메이트, 2-에톡시에틸 파라-메톡시신나메이트 (예컨대, 기바우단-로우레 컴퍼니(Givaudan-Roure Co.)로부터 입수가능한 파르솔(Parsol)^®), 에틸헥실 메톡시신나메이트 (옥티노세이트(Octinoxate)), 옥틸 파라-메톡시신나메이트, 글리세릴 모노(2-에틸헥사노에이트)디파라-메톡시신나메이트, 이소프로필 파라-메톡시신나메이트, 유로칸산, 에틸 유로카네이트, 히드록시메톡시벤조페논 (벤조페논(Benzophenone)-3), 히드록시메톡시벤조페논술폰산 (벤조페논-4) 및 그의 염, 디히드록시메톡시벤조페논 (벤조페논-8), 나트륨 디히드록시메톡시벤조페논디술포네이트, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 (아보벤존(Avobenzone)), 페닐벤즈이미다졸 술폰산 (엔술리졸(Ensulizole)), 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 옥토크릴렌(Octocrylene), 멘틸 안트라닐레이트 (메라디메이트(Meradimate)), 및 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.

무기 UV 선스크린 물질은 전형적으로 무기 안료 및 금속 산화물이고, 예를 들어 이산화티탄 (예컨대, 코그니스 컴퍼니(Cognis Co.)로부터 입수가능한 선스마트(SunSmart)), 산화아연, 및 산화철 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 바람직한 선스크린은 이산화티탄 나노입자이다. 적합한 이산화티탄 나노입자는 미국 특허 제5,451,390호, 동 제5,672,330호 및 동 제5,762,914호에 기재되어 있다. 데구싸(Degussa) (미국 뉴저지주 파르시파니 소재)로부터 입수가능한 이산화티탄 P25가 적합한 시판 제품의 예이다. 이산화티탄 나노입자의 다른 시판업체는 케미라(Kemira) (핀란드 헬싱키 소재), 자크틀레벤(Sachtleben) (독일 두이스부르크 소재) 및 타이카(Tayca) (일본 오사카 소재)를 포함한다.

이산화티탄 나노입자는 액체 현탁액 중 입자의 입도 분포를 측정하는 동적 광 산란법으로 측정한 평균 입도 직경이 전형적으로 100 나노미터 (nm) 미만이다. 상기 입자는 전형적으로 약 3 nm 내지 약 6000 nm의 범위일 수 있는 응집물이다. 이러한 입자를 제조하기 위해서는 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있다. 상기 방법은, 이산화티탄 나노입자가 생성된다면, 할로겐화티탄의 증기상 산화 또는 가용성 티탄 복합체로부터의 용액 침전을 수반할 수 있다.

이산화티탄 나노입자를 제조하는 바람직한 방법은 산소 및 할로겐화티탄, 바람직하게는 사염화티탄을 전형적으로 400 내지 2000℃ 범위의 고온 반응 대역 내로 주입하여 수행된다. 상기 반응 대역에 존재하는 고온 조건하에서는 넓은 표면적 및 좁은 크기 분포를 갖는 이산화티탄 나노입자가 형성된다. 반응기 내의 에너지원은 임의의 가열원, 예컨대 플라즈마 토치(torch)일 수 있다.

유익제에 커플링된 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 포함하는 결합체

또다른 실시양태에서, 유익제에 커플링된 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 포함하는 결합체를 본 발명의 펩티드-기재의 실란트로 사용한다. 커플링 상호작용은 공유 결합일 수도 있고, 또는 비-공유 상호작용, 예컨대 수소 결합, 정전 상호작용, 소수성 상호작용, 또는 반 데르 발스(Van der Waals) 상호작용일 수도 있다. 비-공유 상호작용의 경우에, 펩티드-기재의 결합체는 펩티드를 유익제 및 임의의 스페이서와 혼합하고, 상호작용이 일어나기에 충분한 시간을 허용함으로써 제조할 수 있다. 미결합 물질은 생성되는 펩티드-기재의 결합체로부터 당업계에 공지된 방법, 예컨대 크로마토그래피 방법을 사용하여 분리될 수 있다.

펩티드-기재의 결합체는 또한 후앙 등의 미국 특허 출원 공개 제2005/0050656호에 기재된 바와 같이 특이적 모발-결합 펩티드 또는 피부-결합 펩티드를 유익제에 직접 또는 분자 스페이서를 통해 공유 부착시켜서 제조할 수도 있다. 무기 선스크린 및 유기 선스크린을 피부-결합 펩티드에 공유 커플링시키는 것에 대하여는 부스만-윌리암스의 상기 문헌 및 로위 등의 상기 문헌 각각에 기재되어 있다.

임의의 공지의 펩티드 또는 단백질 결합 화학법이 본 발명에 사용되는 펩티드-기재의 결합체를 형성하는데 이용될 수 있다. 결합 화학법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어 문헌 [Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, New York (1996)] 참조). 적합한 커플링제로는 카르보디이미드 커플링제, 산 염화물, 이소시아네이트, 에폭시드, 말레이미드, 및 펩티드상의 말단 아민기 및/또는 카르복실산기 및 술피드릴기에 반응성인 다른 관능성 커플링 시약 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 추가로, 펩티드-기재의 실란트에 원하는 구조를 생성하기 위해서는 펩티드 상의 반응성 아민기 또는 카르복실산기를 보호하는 것이 필요할 수 있다. 아미노산에 대한 보호기, 예컨대 t-부틸옥시카르보닐 (t-Boc)의 사용은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어 문헌 ([Stewart et al., 상기 문헌], [Bodanszky, 상기 문헌] 및 [Pennington et al., 상기 문헌]) 참조). 몇몇 경우에, 유익제를 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드에 커플링시키기 위해서 유익제상에 반응성기, 예컨대 카르복실산기, 알콜기, 아민기, 이소시아네이트기 또는 알데히드기를 도입하는 것이 필요할 수 있다. 이러한 변형은 통상의 화학법, 예컨대 산화, 환원 및 포스겐화 등을 이용하여 수행될 수 있으며, 당업계에 공지되어 있다.

또한, 모발-결합 펩티드 또는 피부-결합 펩티드를 스페이서를 통해 유익제에 커플링시키는 것이 바람직할 수도 있다. 스페이서는 유익제를 펩티드에서 분리시켜서 유익제가 모발 또는 피부에 대한 펩티드의 결합을 저해하지 않도록 하는 기능을 한다. 스페이서는 임의의 각종 분자, 예컨대 알킬 쇄, 페닐 화합물, 에틸렌 글리콜, 아미드, 에스테르 등일 수 있다. 스페이서는 상기한 커플링 화학법 중 임의의 것을 이용하여 펩티드 및 유익제에 공유 부착될 수 있다. 스페이서의 혼입을 용이하게 하기 위해서는 스페이서 및 펩티드 및 유익제에 커플링하기 위해 양쪽 말단부에 반응성기를 함유하는 이관능성 가교제를 사용할 수 있다.

추가로, 스페이서는 임의의 아미노산 및 이들의 혼합물을 포함하는 펩티드일 수 있다. 바람직한 펩티드 스페이서는 아미노산 프롤린, 리신, 글리신, 알라닌 및 세린과 이들의 혼합물로 구성된다. 또한, 펩티드 스페이서는 특이적 효소 절단 부위, 예컨대 프로테아제 카스파제 3 부위를 함유할 수 있고, 이는 모발로부터 유익제를 효소적으로 제거하는 것을 허용한다. 펩티드 스페이서는 길이가 1 내지 약 50개 아미노산, 바람직하게는 1 내지 약 20개 아미노산일 수 있다. 예시적인 펩티드 스페이서는 서열 13 내지 서열 15을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 펩티드 스페이서는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 결합 펩티드 서열에 연결될 수 있다. 예를 들어, 전체 결합 펩티드-펩티드 스페이서 이블럭(diblock)은 상기 문헌에 기재된 표준 펩티드 합성 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 또한, 결합 펩티드 및 펩티드 스페이서 블럭은 카르보디이미드 커플링제 (예를 들어 문헌 [Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, New York (1996)]), 이산 염화물, 디이소시아네이트 및 펩티드 상의 말단 아민기 및/또는 카르복실산기에 반응성인 다른 이관능성 커플링 시약을 사용하여 결합될 수 있다. 별법으로, 전체 결합 펩티드-펩티드 스페이서 이블럭은 상기 문헌에 기재된 재조합 DNA 및 분자 클로닝 기술로 제조될 수 있다. 스페이서는 또한 펩티드 스페이서 및 유기 스페이서 분자의 조합물일 수도 있고, 이는 상기한 방법을 이용하여 제조할 수 있다.

후앙 등이 기재 (미국 특허 출원 공개 제2005/0050656호)한 바와 같이, 펩티드-기재의 유익제와 모발 또는 피부 사이의 상호작용을 증진시키기 위해서 유익제에 커플링된 다수의 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드를 갖는 것이 또한 바람직할 수도 있다. 다수 카피의 동일한 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드 또는 상이한 모발-결합 또는 피부-결합 펩티드의 조합물이 사용될 수 있다. 다중 카피의 모발-결합 및 피부-결합 펩티드는 상기한 바와 같은 다양한 스페이서를 포함할 수 있다. 예시적인 다중 카피의 모발-결합 펩티드로는 서열 16 내지 서열 21 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.

모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물

모발-결합 펩티드는 각종 조성물로부터 모발에 도포될 수 있다. 예를 들어, 모발-결합 펩티드는 모발-결합 펩티드를 포함하는 수용액으로부터 모발에 도포될 수 있다. 별법으로, 모발-결합 펩티드는 모발 위생 조성물로부터 모발에 도포될 수 있다. 모발 위생 조성물은 본원에서 샴푸, 컨디셔너, 린스, 로션, 에어로졸, 겔, 무스 및 모발 염료 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 모발 처리용 조성물로 정의된다. 모발-결합 펩티드는 상기 조성물 중에 조성물 총 중량에 대해 약 0.01 중량％ 내지 약 10 중량％, 바람직하게는 약 0.01 중량％ 내지 약 5 중량％의 농도로 사용된다. 이러한 비율은 모발 위생 조성물의 유형에 관한 함수로서 달라질 수 있다. 추가로, 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 모발 유익제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 조성물이 모발 유익제를 포함하는 경우, 유익제는 상기한 바와 같이 모발-결합 펩티드에 커플링될 수 있다. 유익제 농도에 대한 펩티드 농도는 최상의 결과를 위해서 최적화될 필요가 있을 수 있다. 다중 카피의 모발-결합 펩티드를 비롯한 적합한 모발-결합 펩티드는 상기되어 있다. 추가로, 여러가지 모발-결합 펩티드들의 혼합물이 조성물에 사용될 수 있다. 혼합물 중의 모발-결합 펩티드는 펩티드들 사이에서 유익한 효과를 경감시키는 상호작용이 없도록 선택될 필요가 있다. 모발-결합 펩티드의 적합한 혼합물은 당업자가 통상의 실험을 통해 결정할 수 있다. 조성물에 모발-결합 펩티드들의 혼합물이 사용되는 경우, 펩티드들의 총 농도는 조성물 총 중량에 대해 약 0.01 중량％ 내지 약 10 중량％이다.

또다른 실시양태에서, 모발-결합 펩티드는 상기한 바와 같이 모발 유익제에 커플링된 모발-결합 펩티드를 포함하는 결합체로서 조성물 중에 존재할 수 있다. 예를 들어, 유익제는 모발 염료일 수 있고, 결합체는 모발 컨디셔너에 커플링된 모발-결합 펩티드를 포함할 수 있다. 추가로, 유익제는 모발 염료일 수 있고, 결합체는 동일한 모발 염료 또는 또다른 모발 착색제에 커플링된 모발-결합 펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 조합 및 다른 가능한 조합 모두가 본 발명의 범위에 속한다.

모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 모발 위생 조성물을 위한 미용상 허용가능한 매질을 추가로 포함할 수 있고, 이의 예는 예를 들어 필립(Philippe) 등의 미국 특허 제6,280,747호, 오무라(Omura) 등의 미국 특허 제6,139,851호 및 칸넬(Cannell) 등의 미국 특허 제6,013,250호 (상기 문헌 모두가 본원에 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. 예를 들어, 이들 모발 위생 조성물은 수용액, 알콜계 용액 또는 수성-알콜계 용액일 수 있고, 상기 알콜은 바람직하게는 수성-알콜계 용액의 경우에는 총 중량에 대해 약 1 중량％ 내지 약 75 중량％ 비율의 에탄올 또는 이소프로판올이다. 추가로, 모발 위생 조성물은 항산화제, 보존제, 충전제, 계면활성제, UVA 및/또는 UVB 선스크린, 향료, 증점제, 습윤제 및 음이온성, 비-이온성 또는 양쪽성 중합체, 및 염료 또는 안료를 포함하지만 이에 제한되지 않는 1종 이상의 통상적인 미용 또는 피부과 첨가제 또는 보조제를 함유할 수 있다.

피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물

피부-결합 펩티드는 각종 조성물로부터 피부에 도포될 수 있다. 예를 들어, 피부-결합 펩티드는 피부-결합 펩티드를 포함하는 수용액으로부터 피부에 도포될 수 있다. 별법으로, 피부-결합 펩티드는 피부 위생 조성물로부터 피부에 도포될 수 있다. 피부 위생 조성물은 본원에서 피부 위생, 피부 클린징, 메이크업, 및 주름방지 제품 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 피부 처리용 조성물로 정의된다. 피부-결합 펩티드는 상기 조성물 중에 조성물 총 중량에 대해 약 0.01 중량％ 내지 약 10 중량％, 바람직하게는 약 0.01 중량％ 내지 약 5 중량％의 농도로 사용된다. 이러한 비율은 피부 위생 조성물의 유형에 관한 함수로서 달라질 수 있다. 추가로, 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 피부 유익제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 조성물이 피부 유익제를 포함하는 경우, 유익제는 상기한 바와 같이 피부-결합 펩티드에 커플링될 수 있다. 유익제 농도에 대한 피부-결합 펩티드의 농도는 최상의 결과를 위해서 최적화될 필요가 있을 수 있다. 다중 카피의 피부-결합 펩티드를 비롯한 적합한 피부-결합 펩티드는 상기되어 있다. 추가로, 여러가지 피부-결합 펩티드들의 혼합물이 조성물에 사용될 수 있다. 혼합물 중의 피부-결합 펩티드는 펩티드들 사이에서 유익한 효과를 경감시키는 상호작용이 없도록 선택될 필요가 있다. 피부-결합 펩티드의 적합한 혼합물은 당업자가 통상의 실험을 통해 결정할 수 있다. 조성물에 피부-결합 펩티드들의 혼합물이 사용되는 경우, 펩티드들의 총 농도는 조성물 총 중량에 대해 약 0.01 중량％ 내지 약 10 중량％이다.

또다른 실시양태에서, 피부-결합 펩티드는 상기한 바와 같이 피부 유익제에 커플링된 피부-결합 펩티드를 포함하는 결합체로서 조성물 중에 존재할 수 있다. 예를 들어, 유익제는 피부 컨디셔너일 수 있고, 결합체는 동일하거나 상이한 피부 컨디셔너에 커플링된 피부-결합 펩티드를 포함할 수 있다. 유익제는 피부 착색제일 수 있고, 결합체는 피부 컨디셔너에 커플링된 피부-결합 펩티드를 포함할 수 있다. 추가로, 유익제는 피부 컨디셔너일 수 있고, 결합체는 선스크린에 커플링된 피부-결합 펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 조합 및 다른 가능한 조합 모두가 본 발명의 범위에 속한다.

피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 피부 위생 조성물을 위한 미용상 허용가능한 매질을 추가로 포함할 수 있고, 이의 예는 예를 들어 필립 등의 상기 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 미용상 허용가능한 매질은 일반적으로 조성물의 총 중량에 대해 약 10 중량％ 내지 약 90 중량％의 비율로 지방질 물질을 함유하는 무수 조성물일 수 있고, 여기서 지방질상은 1종 이상의 액체, 고체 또는 반-고체 지방질 물질을 함유한다. 지방질 물질로는 오일, 왁스, 검, 및 소위 페이스티(pasty) 지방질 물질 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 별법으로, 조성물은 안정한 분산액, 예컨대 유-중-수 또는 수-중-유 에멀젼의 형태일 수 있다. 추가로, 조성물은 항산화제, 보존제, 충전제, 계면활성제, UVA 및/또는 UVB 선스크린, 향료, 증점제, 습윤제 및 음이온성, 비-이온성 또는 양쪽성 중합체, 및 염료 또는 안료를 포함하지만 이에 제한되지 않는 1종 이상의 통상적인 미용 또는 피부과 첨가제 또는 보조제를 함유할 수 있다.

유익제를 모발에 도포하는 방법

본 발명의 펩티드-기재의 실란트는 통상의 모발 유익제, 예컨대 착색제 또는 컨디셔너의 내구성을 증진시키는데 사용된다. 모발 유익제는 임의의 적합한 조성물로부터 모발에 도포될 수 있다. 모발 유익제는 상기한 바와 같이 모발-결합 펩티드와의 결합체 형태로 조성물 중에 존재할 수 있다. 한 실시양태에서, 모발 유익제는 통상적인 모발 위생 조성물, 예컨대 일시적(temporary) 모발 염료 또는 모발 컨디셔너로부터 모발에 도포된다. 이들 모발 위생 조성물은 당업계에 공지되어 있고, 적합한 조성물은 상기되어 있다.

한 실시양태에서, 모발 유익제를 해당 모발 유익제가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 모발에 도포한다. 임의로, 모발을 세정하여 모발에 결합되지 않은 유익제를 제거할 수 있다. 이어서, 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 모발-결합 펩티드가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 모발에 도포한다. 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 모발로부터 세정될 수도 있고 또는 모발상에 남아있을 수도 있다.

또다른 실시양태에서, 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 모발-결합 펩티드가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 모발에 도포한다. 임의로, 모발을 세정하여 모발에 결합되지 않은 모발-결합 펩티드 조성물을 제거할 수 있다. 이어서, 모발 유익제를 해당 유익제가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 모발에 도포한다. 미결합 모발 유익제는 모발로부터 세정될 수도 있고 또는 모발상에 남아있을 수도 있다.

또다른 실시양태에서, 모발 유익제, 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 유익제 및 모발-결합 펩티드가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 모발에 동시에 도포한다. 임의로, 모발을 세정하여 미결합 유익제 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 모발로부터 제거할 수 있다.

또다른 실시양태에서, 모발 유익제는 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물의 일부로서 제공된다. 이러한 실시양태에서는, 모발 유익제와 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 모발 유익제 및 모발-결합 펩티드가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 모발에 도포한다. 모발 유익제와 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 모발로부터 세정될 수도 있고 또는 모발상에 남아있을 수도 있다.

상기한 방법 중 임의의 것에서, 모발 유익제, 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물의 도포 후에 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 모발에 임의로 재도포하여 유익제의 내구성을 추가로 증진시킬 수 있다.

추가로, 상기한 방법 중 임의의 것에서, 모발 유익제 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물의 도포 후에 중합체성 실란트를 포함하는 조성물을 모발에 임의로 도포하여 유익제의 내구성을 추가로 증진시킬 수 있다. 중합체성 실란트를 포함하는 조성물은 중합체성 실란트를 포함하는 수용액 또는 모발 위생 조성물일 수 있다. 전형적으로, 중합체성 실란트는 조성물 중에 조성물 총 중량을 기준으로 약 0.25 중량％ 내지 약 10 중량％의 농도로 존재한다. 중합체성 실란트는 개인 위생 제품 업계에 공지되어 있고, 폴리(알릴아민), 아크릴레이트, 아크릴레이트 공중합체, 폴리우레탄, 카르보머, 메티콘, 아모디메티콘, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍, 실록산 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 중합체성 실란트의 선택은 사용되는 특정 유익제 및 모발-결합 펩티드에 따라 달라진다. 최적의 중합체성 실란트는 당업자가 통상의 실험을 통해 쉽게 결정할 수 있다.

유익제를 피부에 도포하는 방법

본 발명의 펩티드-기재의 실란트는 통상의 피부 유익제, 예컨대 착색제, 컨디셔너, 선스크린, 향료 등의 내구성을 증진시키는데 사용된다. 피부 유익제는 임의의 적합한 조성물로부터 피부에 도포될 수 있다. 피부 유익제는 상기한 바와 같이 피부-결합 펩티드와의 결합체 형태로 조성물 중에 존재할 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 유익제는 통상적인 피부 위생 조성물, 예컨대 피부 착색제, 피부 컨디셔너, 선스크린 등으로부터 피부에 도포될 수 있으며, 이것들은 당업계에 공지되어 있다.

한 실시양태에서, 피부 유익제를 해당 피부 유익제가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 피부에 도포한다. 임의로, 피부를 세정하여 피부에 결합되지 않은 유익제를 제거할 수 있다. 이어서, 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 피부-결합 펩티드가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 피부에 도포한다. 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 피부로부터 세정될 수도 있고 또는 피부상에 남아있을 수도 있다.

또다른 실시양태에서, 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 피부-결합 펩티드가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 피부에 도포한다. 임의로, 피부를 세정하여 피부에 결합되지 않은 피부-결합 펩티드 조성물을 제거할 수 있다. 이어서, 피부 유익제를 해당 유익제가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 피부에 도포한다. 미결합 피부 유익제는 피부로부터 세정될 수도 있고 또는 피부상에 남아있을 수도 있다.

또다른 실시양태에서, 피부 유익제, 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 유익제 및 피부-결합 펩티드가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 피부에 동시에 도포한다. 임의로, 피부를 세정하여 미결합 유익제 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 피부로부터 제거할 수 있다.

또다른 실시양태에서, 피부 유익제는 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물의 일부로서 제공된다. 이러한 실시양태에서는, 피부 유익제와 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 해당 피부 유익제 및 피부-결합 펩티드가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안, 전형적으로는 약 5초 내지 약 60분 동안 피부에 도포한다. 피부 유익제와 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물은 피부로부터 세정될 수도 있고 또는 피부상에 남아있을 수도 있다.

상기한 방법 중 임의의 것에서, 피부 유익제, 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물의 도포 후에 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 피부에 임의로 재도포하여 유익제의 내구성을 추가로 증진시킬 수 있다.

추가로, 상기한 방법 중 임의의 것에서, 피부 유익제, 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물의 도포 후에 중합체성 실란트를 포함하는 조성물을 피부에 임의로 도포하여 유익제의 내구성을 추가로 증진시킬 수 있다. 중합체성 실란트를 포함하는 조성물은 중합체성 실란트를 포함하는 수용액 또는 피부 위생 조성물일 수 있다. 전형적으로, 중합체성 실란트는 조성물 중에 조성물 총 중량을 기준으로 약 0.25 중량％ 내지 약 10 중량％의 농도로 존재한다. 중합체성 실란트는 개인 위생 제품 업계에 공지되어 있고, 폴리(알릴아민), 아크릴레이트, 아크릴레이트 공중합체, 폴리우레탄, 카르보머, 메티콘, 아모디메티콘, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍, 실록산 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 중합체성 실란트의 선택은 사용되는 특정 유익제 및 피부-결합 펩티드에 따라 달라진다. 최적의 중합체성 실란트는 당업자가 통상의 실험을 통해 쉽게 결정할 수 있다.

본 발명은 하기 실시예에서 추가로 설명된다. 이들 실시예는 본 발명의 바람직한 실시양태를 나타내는 것이긴 하지만, 단지 예시의 목적으로서 제시된 것에 불과함을 이해해야 한다. 상기 논의 및 이들 실시예로부터, 당업자는 본 발명의 본질적인 특징을 확인할 수 있으며, 여러 용도 및 조건에 이를 적용하기 위해 본 발명의 사상과 범위에서 벗어나지 않으면서도 본 발명에 여러가지 변화 및 변경을 가할 수 있다.

사용된 약어의 의미는 하기와 같다: "min"은 분(들)을 의미하고, "h"는 시간(들)을 의미하고, "sec"는 초(들)을 의미하고, "㎕"은 마이크로리터(들)을 의미하고, "mL"은 밀리리터(들)을 의미하고, "L"은 리터(들)을 의미하고, "nm"은 나노미터(들)을 의미하고, "mm"은 밀리미터(들)을 의미하고, "cm"은 센티미터(들)을 의미하고, "㎛"은 마이크로미터(들)을 의미하고, "mM"은 밀리몰 농도를 의미하고, "M" 은 몰 농도를 의미하고, "mol"은 몰(들)을 의미하고, "mmol"은 밀리몰(들)을 의미하고, "㎛ol"은 마이크로몰(들)을 의미하고, "pmol"은 피코몰(들)을 의미하고, "g"은 그램(들)을 의미하고, "㎍"은 마이크로그램(들)을 의미하고, "mg"은 밀리그램(들)을 의미하고, "wt％"는 중량 백분율을 의미하고, "vol％"는 부피 백분율을 의미하고, "MALDI"는 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화를 의미하고, "OD₆₀₀"은 600 nm 파장에서 측정한 광학 밀도를 의미하고, "rpm"은 분당 회전수를 의미하고, "atm"은 기압(들)을 의미하고, "kPa"는 킬로파스칼을 의미하고, "SLPM"은 분당 표준 리터를 의미하고, "psi"는 제곱인치당 파운드를 의미하고, "RCF"는 상대 원심력장을 의미한다.

실시예 1

조합 방식으로 생성된 모발-결합 펩티드를 실란트로서 사용한 모발 착색

본 실시예의 목적은 실란트로서의 모발-결합 펩티드와 병용하여 모발 염료를 사용한 모발 착색을 입증하는 것이었다. 본 실시예에 사용된 모발-결합 펩티드는 후앙 등 (미국 특허 출원 공개 제2005/0050656호)의 파지 디스플레이 스크리닝을 통해 동정되었다.

C-말단에 시스테인 잔기가 부가된 모발-결합 펩티드 IB5는 서열 52로 제시되며, 신펩(SynPep) (미국 캘리포니아주 듀블린 소재)으로부터 구하였다. 상기 펩티드 (25 mg)를 물 중 베이직 바이올렛 2호 (미국 위스콘신주 밀워키 소재의 알드리치(Aldrich), CAS 제3248-91-7호)의 1 wt％ 스톡(stock) 용액 10 g에 첨가하고, 상 기 용액이 밤새 교반되도록 하였다. 천연 백색 모발 견본(swatch) (미국 뉴욕주 벨레로즈 소재의 인터내셔널 헤어 임포터즈 앤드 프로덕츠 인크.(International Hair Importers ＆ Products Inc.))을 13 mm×100 mm 시험관에 넣고, 펩티드/염료 혼합물 8 mL를 상기 시험관에 주입하였다. 모발 견본을 착색제 용액과 접촉시켜서 30분 동안 자성 교반기를 사용하여 교반한 후에 꺼내어 30분 동안 공기 건조시켰다.

이어서, 모발 견본을 다량의 탈이온수로 물 세정한 후에 수일의 기간에 걸쳐 5회의 샴푸 처리를 행하였다. 샴푸 처리는 상업적으로 입수가능한 샴푸인 팬틴 프로-브이 쉬어 볼륨(Pantene Pro-V Sheer Volume) (미국 오하이오주 신신나티 소재의 프로크토르 앤드 캠블)을 모발에 다음과 같이 도포하는 것을 수반하였다. 샴푸를 25센트 크기로 덜어내어 상기 모발 견본상에 고르게 분포시킨 후에 30초 동안 모발에 적극적으로 마사지하고, 이후에는 상기 모발 견본을 물로 세정하여 샴푸를 제거하였다. 이어서, 모발 견본을 실온에서 건조시켰다.

대조군으로 기능하도록, 모발-결합 펩티드 실란트를 첨가하지 않은 채로 상기 절차를 반복하였다. 대조군과 비교하여 색상 보유를 가시적으로 관찰하고, 색상 내구성을 품질면에서 하기하는 기준에 따라 등급을 매겼다:

"동일": 대조군과 동일한 양의 색상 손실을 나타냄.

"양호": 대조군에 비해 색상 보유 면에서 약간의 개선이 있음을 나타냄.

"우수": 대조군에 비해 색상 보유 면에서 많은 개선이 있음을 나타냄.

"매우 우수": 색상 손실이 최소임을 나타냄.

샴푸 처리 후, 염료 및 모발-결합 펩티드 실란트로 처리한 모발 견본의 색상은 "매우 우수"한 것으로 평가되었고, 이는 샴푸 처리 후의 색상 손실이 최소임을 가리킨다. 모발-결합 펩티드를 사용하지 않은 대조군은 샴푸 처리 후에 유의한 색상 손실을 나타냈다. 이러한 결과는 모발 염료용 실란트로서 모발-결합 펩티드의 효과를 입증한다.

베이직 바이올렛 2호 스톡 용액을 상기한 1.0 wt％ 농도 대신에 0.75 wt％ 또는 0.50 wt％ 농도로 사용하여 본 실험을 반복하였다. 0.75 wt％ 염료 농도에서는 염료 및 모발-결합 펩티드 실란트로 처리한 모발 견본의 색상이 "양호"한 것으로 평가되었고, 이는 대조군에 비해 색상 보유 면에서 약간의 개선이 있음을 가리킨다. 0.50 wt％ 염료 농도를 사용한 경우에는 염료 및 모발-결합 펩티드 실란트로 처리한 모발 견본의 색상이 "동일"한 것으로 평가되었고, 이는 색상 손실이 대조군과 동일함을 가리킨다. 이러한 결과는, 최상의 결과를 위해서는 염료의 농도 및 염료:모발-결합 펩티드의 비율을 최적화시킬 필요가 있음을 입증한다.

실시예 2

실험적으로 생성된 모발-결합 펩티드를 실란트로서 사용한 모발 착색

본 실시예의 목적은 실란트로서의 모발-결합 펩티드와 병용하여 모발 염료를 사용한 모발 착색을 입증하는 것이었다. 본 실시예에 사용된 모발-결합 펩티드는 실험적으로 생성되었다.

실험적으로 생성된 모발-결합 펩티드는 서열 8로 제시되며, 신펩 (미국 캘리포니아주 듀블린 소재)으로부터 구하였다. 상기 펩티드 (27 mg)를 물 중 베이직 바이올렛 2호 (미국 위스콘신주 밀워키 소재의 알드리치, CAS 제3248-91-7호)의 0.5 wt％ 스톡 용액 10 g에 첨가하고, 상기 용액이 밤새 교반되도록 하였다. 천연 백색 모발 견본 (미국 뉴욕주 벨레로즈 소재의 인터내셔널 헤어 임포터즈 앤드 프로덕츠 인크.)을 13 mm×100 mm 시험관에 넣고, 펩티드/염료 혼합물 8 mL를 상기 시험관에 주입하였다. 모발 견본을 착색제 용액과 접촉시켜서 30분 동안 자성 교반기를 사용하여 교반한 후에 꺼내어 30분 동안 공기 건조시켰다.

이어서, 모발 견본을 다량의 탈이온수로 물 세정한 후에 수일의 기간에 걸쳐 8회의 샴푸 처리를 행하였다. 샴푸 처리는 상업적으로 입수가능한 샴푸인 팬틴 프로-브이 쉬어 볼륨 (미국 오하이오주 신신나티 소재의 프로크토르 앤드 캠블)을 모발에 다음과 같이 도포하는 것을 수반하였다. 샴푸를 25센트 크기로 덜어내어 상기 모발 견본상에 고르게 분포시킨 후에 30초 동안 모발에 적극적으로 마사지하고, 이후에는 상기 모발 견본을 물로 세정하여 샴푸를 제거하였다. 이어서, 모발 견본을 실온에서 건조시켰다.

대조군으로 기능하도록, 모발-결합 펩티드 실란트를 첨가하지 않은 채로 상기 절차를 반복하였다. 대조군과 비교하여 색상 보유를 가시적으로 관찰하고, 색상 내구성을 실시예 1의 기준에 따라 품질면에서 등급을 매겼다.

샴푸 처리 후, 염료 및 모발-결합 펩티드 실란트로 처리한 모발 견본의 색상은 "양호"한 것으로 평가되었고, 이는 대조군에 비해 색상 보유 면에서 약간의 개선이 있음을 가리킨다.

실시예 3

모발 컨디셔너에 커플링된 모발-결합 펩티드를

포함하는 결합체를 실란트로서 사용한 모발 착색

본 실시예의 목적은 실란트로서 모발 컨디셔너에 공유 결합된 모발-결합 펩티드를 포함하는 결합체와 병용하여 모발 염료를 사용한 모발 착색을 입증하는 것이었다.

옥타데실 -모발-결합 펩티드 결합체의 제조:

옥타데실이소시아네이트 (70 mg, 알드리치, CAS 제112-96-9호)를 N,N'-디메틸포름아미드 (DMF) 5 mL 중에 용해시키고, DMF 10 mL 중에 용해시킨, C-말단에 시스테인 잔기가 부가된 서열 52의 비보호된 IB5 펩티드 (150 mg)의 용액에 첨가하였다. 트리에틸아민 (30 mg)을 첨가하여 반응을 촉매시켰다. 상기 용액을 실온에서 120시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켜, 회백색의 결정질 분말 191 mg을 수득하였다. 생성물을 기체 크로마토그래피-MALDI 질량 분광법으로 분석하였고, 분자량 1717 및 2013 g/mol의 2종 성분을 함유함을 알아내었는데, 이것은 펩티드에 공유 부착된 옥타데실 단위 1개 및 2개 각각과 일치하는 것이었다.

모발 착색:

옥타데실-모발-결합 펩티드 결합체 (28 mg)를 물 중 베이직 바이올렛 2호 (미국 위스콘신주 밀워키 소재의 알드리치, CAS 제3248-91-7호)의 0.5 wt％ 스톡 용액 10 g에 첨가하고, 상기 용액이 밤새 교반되도록 하였다. 천연 백색 모발 견본 (미국 뉴욕주 벨레로즈 소재의 인터내셔널 헤어 임포터즈 앤드 프로덕츠 인크.)을 13 mm×100 mm 시험관에 넣고, 펩티드/염료 혼합물 8 mL를 상기 시험관에 주입하였 다. 모발 견본을 착색제 용액과 접촉시켜서 30분 동안 자성 교반기를 사용하여 교반한 후에 꺼내어 30분 동안 공기 건조시켰다.

대조군으로 기능하도록, 결합체 실란트를 첨가하지 않은 채로 상기 절차를 반복하였다. 대조군과 비교하여 색상 보유를 가시적으로 관찰하고, 색상 내구성을 실시예 1의 기준에 따라 품질면에서 등급을 매겼다.

샴푸 처리 후, 염료 및 옥타데실-모발-결합 펩티드 실란트로 처리한 모발 견본의 색상은 "우수"한 것으로 평가되었고, 이는 대조군에 비해 색상 보유 면에서 많은 개선이 있음을 가리킨다.

실시예 4

여러가지 모발-결합 펩티드들의 혼합물을 실란트로서 사용한 모발 착색

본 실시예의 목적은 실란트로서의 2종의 상이한 모발-결합 펩티드들의 혼합물과 병용하여 모발 염료를 사용한 모발 착색을 입증하는 것이었다. 2종의 상이한 단독 카피의 모발-결합 펩티드들의 혼합물을 사용하였다.

본 실시예에 사용된 모발-결합 펩티드는 C-말단에 시스테인 잔기가 부가된 서열 52의 IB5 및 서열 2의 KF11이었고, 이들 모두를 신펩에서 구하였다. 상기 펩티드 각각은 0.125 wt％의 농도로 사용되었다. 실시예 1에서 사용된 5회의 샴푸 세척 대신에 8회의 샴푸 세척을 행하였다는 점을 제외하고는, 0.50 wt％ 농도의 베이직 바이올렛 2호를 사용하여 실시예 1에 기재한 절차를 수행하였다.

샴푸 처리 후, 염료 및 모발-결합 펩티드들의 혼합물로 처리한 모발 견본의 색상은 "매우 우수"한 것으로 평가되었고, 이는 샴푸 처리 후의 색상 손실이 최소임을 가리킨다. 모발-결합 펩티드를 사용하지 않은 대조군은 샴푸 처리 후에 유의한 색상 손실을 나타냈다. 이러한 결과는 여러가지 모발-결합 펩티드들의 혼합물을 사용하여 모발 색상 보유를 개선시킬 수 있음을 나타낸다.

모발-결합 펩티드 KF11 (서열 2) 및 실시예 2에서 사용한 실험적으로 생성된 펩티드 (서열 8)의 혼합물을 사용하여 본 실험을 반복하였다. 이들 2종 펩티드의 경우에는 샴푸 처리 후에 대조군에 비교하여 색상 보유면에서 개선되지 않았다. 이러한 결과는 2종의 상이한 모발-결합 펩티드들의 혼합물을 사용하는 경우에는 펩티드들 사이에서 유익한 효과를 경감시키는 상호작용이 없도록 주의를 기울여야 함을 시사한다. 고도로 극성인 실험적으로 생성된 펩티드가 KF11 펩티드와 상호작용하여 실링 효과를 없앤다고 여겨진다.

실시예 5

다중 카피의 모발-결합 펩티드의 생물학적 생성

본 실시예의 목적은 재조합 DNA 및 분자 클로닝 기술을 이용하여 서열 16의 다중 카피 모발-결합 펩티드 HC77607을 제조하는 것이었다. 상기 다중 카피의 모발-결합 펩티드는 펩티드 스페이서인 KF11 (서열 2) 및 D21' (서열 3) 각각의 3개 카피로 분리된 6개의 모발-결합 펩티드 서열로 이루어진다. 상기 펩티드는 이. 콜라이에서 봉입체로서 발현되었다. 상기 다중 카피 모발-결합 펩티드 서열에 추가의 아미노산 서열 (즉, 펩티드 태그)을 융합시켜 봉입체 형성을 촉진시켰다.

HC77607 유전자의 구축:

서열 16에 제시된 펩티드 HC77607의 아미노산 서열을 코딩하는 DNA 서열은, 젠스크립트 코포레이션(GenScript Corp.) (미국 뉴저지주 스카치 플레인즈)이 이. 콜라이에서 높은 수준으로 발현되도록 코돈 사용을 최적화하고 반복적인 서열 및 RNA 2차 구조를 피한, 독점적인(proprietary) 역-번역 알고리즘을 이용하여 디자인하였다. 코딩 DNA 서열은 서열 23으로 제시되어 있다. 이 코딩 서열에서, 엔도뉴클레아제 BamHI에 대한 인식 부위는 N-말단에 포함되어 있고, 2개의 종결 코돈 및 엔도뉴클레아제 AscI 및 HindIII에 대한 인식 부위는 C-말단에 포함되어 있다. 젠스크립트 코포레이션은, 합성 올리고뉴클레오티드로부터 이러한 코딩 DNA 서열을 조립하고 플라스미드 벡터 pUC57에 BamHI 부위와 HindIII 부위 사이에서 클로닝하여 플라스미드 pUC57/HC77607을 제공하였다. 젠스크립트 코포레이션이 상기 DNA 서열을 확인하였다.

발현 벡터 pLX121 의 구축:

TBP101 펩티드의 유전자 클로닝:

TBP1이라고 명명하고 서열 24로 제시한 68개 아미노산의 합성 펩티드를 디자 인하였다. 펩티드 TBP1에 대한 유전자는 TBP1로 지칭하며, 이것은 표 2에 기재한 합성 올리고뉴클레오티드 (미국 텍사스주 우드랜즈에 소재하는 시그마-제노시스(Sigma-Genosys)로부터 구하였음)로부터 조립하였다:

각 올리고뉴클레오티드는 T4 폴리뉴클레오티드 키나제를 사용하여 ATP로 인산화하였다. 생성된 올리고뉴클레오티드를 혼합하여 5분 동안 끓였다가 실온으로 서서히 냉각시켰다. 마지막으로, 어닐링된 올리고뉴클레오티드를 T4 DNA 리가제로 라이게이션하여 서열 30으로 제시한 합성 DNA 단편 TBP1이 생성되었고, 이것은 TBP101 펩티드를 코딩한다.

pINK1 발현 플라스미드의 구축:

단백질 과다발현을 위해, TBP1을 게이트웨이^TM 테크놀로지(Gateway^TM Technology) 시스템에 제조업체의 지침에 따라 통합시켰다 (미국 캘리포니아주 칼스배드 소재의 인비트로젠(Invitrogen)). 제1 단계에서는 TBP1 라이게이션 혼합물을 pfu DNA 폴리머라제 (미국 캘리포니아주 라 졸라 소재의 스트라타진(Stratagene))에 의해 촉매되는 PCR 반응에서 사용한 후에 표준 PCR 프로토콜을 수행하였다. 서열 31로 제시된 프라이머 5'TBP1 (

) 및 서열 32로 제시된 프라이머 3'TBP1 (

)을 TBP1 단편의 증폭에 사용하였다. 이들 프라이머의 디자인으로 인해, CACC 및 또다른 정지 코돈 TGA의 추가의 서열이 상기 증폭된 단편의 5' 말단부 및 3' 말단부에 부가되었다.

증폭된 TBP1을 비트로젠의 pENTR 방향성(directional) TOPO^® 클로닝 키트를 사용하여 pENTR/D-TOPO 벡터에 직접 클로닝하여, 게이트웨이 도입(entry) 플라스미드 pENTR-TBP1을 생성하였다. 상기 도입 플라스미드를 원 샷(One Shot) TOP10 이. 콜라이 균주 (인비트로젠)에서 증식시켰다. PCR 증폭 및 클로닝의 정확성은 듀폰 시퀀싱 패실러티(DuPont Sequencing Facility)에서 DNA 서열분석으로 결정하였다.

스트라타진의 퀵체인지(QuickChange)^® II 부위-지정 돌연변이유발 키트 (미국 캘리포니아주 라 졸라 소재의 스트라타진, 카탈로그 번호 200523)를 사용한 부위-지정 돌연변이유발법으로 플라스미드 pENTR-TBP1을 추가로 변형시킨 후에 제조업체의 지침에 따라 엔도뉴클레아제 NgoMI에 대한 인식 부위 (GCCGGC) 및 KasI에 대한 인식 부위 (GGCGCC)를 생성하였다. 엔도뉴클레아제 NgoMI에 대한 인식 부위를 생성하기 위해서는 돌연변이유발에 서열 33으로 제시된 프라이머 AGG-1-F 및 서열 34로 제시된 프라이머 AGG-1-R을 사용하였다. KasI 부위를 생성하기 위해서는 돌연변이유발에 서열 35으로 제시된 프라이머 GGA-1-F 및 서열 36으로 제시된 프라이머 GGS-1-R을 사용하였다. 이러한 돌연변이유발로 플라스미드 pENTR-TBP101이 생성되었고, 이것은 TBP101로 명명되어 서열 37에 제시한 68개 아미노산 합성 펩티드를 코딩하였다.

마지막으로, 상기 도입 플라스미드를 pDEST17과 혼합하였다. LR 재조합 반응은 LR 클로나제(Clonase)^TM (인비트로젠)에 의해 촉매되었다. 목적 플라스미드인 pINK101을 구축하고 DH5알파 이. 콜라이 균주에서 증식시켰다. 재조합 반응의 정확성을 DNA 서열분석으로 결정하였다. LR 재조합 반응에서의 모든 시약은 인비트로젠의 게이트웨이^TM 테크놀로지 키트 중의 이. 콜라이 발현 시스템에서 제공된 것이었다.

생성된 플라스미드는 11.6 kDa 단백질인 재조합 단백질 INK101에 대한 코딩 영역 6H- TBP1을 함유하였다. 상기 단백질 서열은 6xHis 태그, 및 TBP101 펩티드의 서열 앞에 인자 Xa 인식 부위를 포함하는 펩티드 링커를 포함하였다. INK101에 대한 코딩 영역은 제한 부위 NdeI과 AscI 사이에 존재하며 서열 38로 제시되어 있다.

6xHis 태그 및 그 뒤의 링커 (28-aa)를 코딩하는 영역은 NdeI 및 BamHI 제한 효소에 의한 소화로 pINK101로부터 절단될 수 있다.

6H- TBP1 코딩 서열의 발현을 시험하기 위해서, 발현 플라스미드 pINK101로 BL21-AI 이. 콜라이 균주 (인비트로젠 카탈로그 번호 C6070-03)를 형질전환시켰다. 재조합 단백질을 생성하기 위해서, LB-암피실린 브로쓰 (10 g/L 박토-트립톤, 5 g/L 박토-효모 추출물, 10 g/L NaCl, 100 mg/L 암피실린, pH 7.0) 50 mL에 상기 형질전환된 박테리아 1개 콜로니를 접종하고, 상기 배양물을 OD₆₀₀이 0.6에 도달할 때까지 37℃에서 진탕시켰다. 상기 배양물에 20％ L-아라비노스 0.5 mL를 첨가하여 발현을 유도하였고, 4시간 더 계속 진탕시켰다. 폴리아크릴아미드 겔 전기영동으로 세포 단백질을 분석하여, TBP101 펩티드의 생성을 입증하였다.

TBP101 의 아미노산 서열 중 DP 절단 부위의 도입:

생성될 펩티드를 안정화 태그로부터 분리하는 산 절단 부위로서, 낮은 pH에서 특히 불안정한 DP 펩티드 결합 [M. Landon, Methods Enzymol. 47:145-9 (1977)]을 사용하였다. 따라서, 서열 37로 제시된 TBP101의 아미노산 서열이 상류 링커-코딩 영역과 TBP101 서열 사이에 산-불안정성 DP 서열을 포함하도록 변형되어 서열 39로 제시된 TBP101-DP가 생성되었다.

플라스미드 pINK101의 서열은, 6H- TBP1 유전자의 시작부에서 EG 디펩티드 서열을 코딩하는 2개의 코돈을 DP 디펩티드 서열을 코딩하는 코돈으로 변화시키는 부위-지정 돌연변이유발로 변형되었다. 스트라타진의 퀵체인지^® II 부위-지정 돌연변이유발 키트 (미국 캘리포니아주 라 졸라 소재의 스트라타진, 카탈로그 번호 200523)를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 DP 산 절단 부위를 부가하였다. 부위-지정 돌연변이유발을 수행하는데 사용한 올리고뉴클레오티드는 서열 40 (위쪽 가닥) 및 서열 41 (아래쪽 가닥)로 제시되어 있다.

생성된 플라스미드로 화학적 감응성 TOP10 세포 (인비트로젠, 카탈로그 번호 C4040-06)를 형질전환시켰다. QIAprep 스핀 미니프렙(Spin Miniprep) 키트 (미국 캘리포니아주 발렌시아 소재의 퀴아젠(QIAGEN))을 이용하여 플라스미드 DNA를 준비하였고, 서열분석으로 부위-지정 돌연변이를 확인하였다. TBP101의 위치 32 및 위치 33의 아미노산인 글루탐산 (E) 및 글리신 (G)은, 4개의 뉴클레오티드 잔기 (GAA→GAT 및 GGT→CCA)를 변화시켜서 각각 아스파르트산 (D) 및 프롤린 (P)으로 변화시켰다. 생성된 플라스미드는 pINK101-DP라 지칭되며 서열 42로 제시되어 있다.

플라스미드 pINK101-DP로부터의 펩티드 생성을 상기한 바와 같이 평가하였다. pINK101-DP는 모(parental) pINK101 플라스미드와 같이 봉입체 형태의 불용성 펩티드를 생성하였다.

태그 IBT3 의 디자인:

서열 43에 제시한 서열을 가지며 IBT3이라고 지칭되는 펩티드를 코딩하는 DNA 서열을 상보적 서열을 갖는, 서열 44 및 서열 45로 제시한 2종의 합성 올리고뉴클레오티드 (시그마 제노시스(Sigma Genosys))로부터 조립하였다. 각 올리고뉴클레오티드에 오버행(overhang)을 포함시켜서 제한 부위 NdeI 및 BamHI에 적합한 점착 말단부를 생성시켰다. 상기 2개의 올리고의 혼합물 (탈이온수 중 각각 100 pmol씩)을 99℃에서 10분 동안 가열한 후에 상기 혼합물이 서서히 실온으로 냉각되도록 하여 이들 올리고를 어닐링하였다.

플라스미드 pINK101-DP를 완충제 2 (미국 매사추세츠주 베벌리 소재의 뉴 잉글랜드 바이오랩스) 중에서 NdeI 및 BamHI 제한 효소 (미국 매사추세츠주 베벌리 소재의 뉴 잉글랜드 바이오랩스)를 사용하여 소화시켜서 모 pDEST17 플라스미드로부터의 6xHis 태그 및 링커에 상응하는, 게이트웨이 클로닝 시스템의 att 부위를 포함하는 90 bp 단편을 유리시켰다. 소화된 플라스미드로부터의 NdeI-BamHI 단편을 아가로스 겔 전기영동으로 분리하였고, 퀴아젠(Qiagen) QIAquick^® 겔 추출 키트 (퀴아젠, 카탈로그 번호 28704)를 사용하여 상기 벡터를 정제하였다. 희석된 어닐링된 올리고 (대략 0.2 pmol)를 T4 DNA 리가제 (뉴 잉글랜드 바이오랩스, 카탈로그 번호 M0202)로 겔 정제된 플라스미드 (대략 50 ng)인 NdeI-BamHI 소화물에 12℃에서 18시간 동안 라이게이션시켰다. 이. 콜라이 TOP10 형질전환체에서 단리한 플라스미드 DNA를 분석하고, 예상되는 플라스미드의 서열을 서열분석으로 확인하였다. pLX121이라 지칭되는 상기 플라스미드는 IBT3-TBP101이라고 불리는 펩티드를 코딩한다. 서열 확인이 완결된 구축물을 앞서 개략적으로 기재한 바와 같이 발현에 대하여 시험하였다.

KSI ( EP ,S) 융합 파트너의 구축:

상업적으로 입수가능한 플라스미드 벡터 pET-31b(+) (미국 위스콘신주 매디슨 소재의 노바겐(Novagen)/EMD 바이오사이언시스(Biosciences))는 효소 케토스테로이드 이소머라제 (KSI)의 단편을 코딩하는 서열을 제공한다. KSI의 상기 단편은 관심 펩티드와 융합될 때 이. 콜라이에서 불용성 봉입체를 형성하는 경향이 있다. 이러한 융합 파트너 서열을 변형시키기 위해서, 주형으로서의 플라스미드 pET-31b(+) 및 서열 46과 서열 47로 제시된 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 PCR로 상기 KSI 단편을 증폭시켰다.

생성된 PCR 생성물을 엔도뉴클레아제 NdeI 및 BamHI으로 소화시켜서, 역시 NdeI 및 BamHI으로 소화시킨 플라스미드 pLX121에 이. 콜라이 DH10B에서 클로닝하였다. 최종 구축물은 KSI-101DP라고 지칭하였고, 이것을 함유하는 플라스미드는 pINK101_DP_KSI라고 지칭하였다.

이어서, 플라스미드 pINK101_DP_KSI를 부위-지정 돌연변이유발 (퀵체인지, 스트라타진)로 변형시켜서 KSI 단백질 생성물로부터 산-불안정성 DP 서열을 제거하면서 이것을 EP로 변화시키고, KSI 서열에서 오직 C 잔기만을 제거하면서 동시에 이것을 S로 변화시켰다. 이러한 목적을 위해서, 서열 48과 서열 49 및 서열 50과 서열 51로 제시한 2쌍의 올리고를 동시에 사용하였다. 생성된 플라스미드는 pINK101_DP_KSI(EP,S)라고 지칭하였다.

KSI - HC77607 및 KSI ( EPS )- HC77607 유전자 융합체의 구축:

DNA 플라스미드 pINK101_DP_KSI 및 pINK101_DP_KSI(EP,S)를 엔도뉴클레아제 BamHI 및 AscI으로 소화시키고, TBP101을 코딩하는 단편을 플라스미드 pUC57/HC77607에서 유래한 HC77607을 코딩하는 BamHI-AscI 단편으로 대체하였다 (상기함). 생성된 플라스미드는 T7 유전자 10 프로모터에 작동가능하게 연결된 SI-HC77607 및 KSI(EP,S) 융합 단백질을 코딩한다. 이들 플라스미드를 비-발현 균주인 이. 콜라이 TOP10에서 우선 클로닝한 후에 발현 균주인 이. 콜라이 BL21-AI로 옮겼다.

발효:

상기한 재조합 이. 콜라이 균주를 6-L 발효로 성장시켰고, 이것은 처음에는 회분(batch) 방식으로 수행되다가 이후에는 유가(fed-batch) 방식으로 수행되었다. 발효 배지의 조성은 표 3에 기재되어 있다. 발효 배지의 pH는 6.7이었다. 발효 배지는 오토클레이브를 실시하여 멸균시켰고, 이후에는 하기하는 멸균된 성분을 첨가하였다: 티아민 히드로클로라이드 (4.5 mg/L), 글루코스 (22.1 g/L), 미량 원소 (표 4 참조) (10 mL/L), 암피실린 (100 mg/L) 및 접종물(inoculum, seed) (125 mL). pH는 수산화암모늄 (20 vol％) 또는 인산 (20 vol％)을 사용하여 필요한 만큼 조정하였다. 첨가된 성분은 오토클레이브를 실시하거나 여과하여 멸균시켰다.

발효 배지의 조성

성분	농도
KH₂PO₄	9 g/L
(NH₄)₂HPO₄	4 g/L
MgSO₄·7H₂O	1.2 g/L
시트르산	1.7 g/L
효모 추출물	5.0 g/L
마주(Mazu) DF 204 소포제(antifoam)	0.1 mL/L

미량 원소

성분	농도 ( mg /L)
EDTA	840
CoCl₂·H₂O	250
MnCl₂·4H₂O	1500
CuCl₂·2H₂O	150
H₃BO₃	300
Na₂MoO₄·2H₂O	250
Zn(CH₃COO)₂·H₂O	1300
시트르산철	10000

발효에 관한 작동 조건을 표 5에 요약한다. 글루코스의 초기 농도는 22.1 g/L이었다. 처음의 잔류 글루코스가 고갈되면, 미리 계획한 지수적(exponential) 글루코스 공급을 개시하여 발효 실시의 유가 기간을 시작하였다. 글루코스 공급 (표 6 및 표 7 참조)은 500 g/L 글루코스를 함유하였고, 5 g/L의 효모 추출물로 보충하였다. 공급 배지의 성분은 오토클레이브를 실시하거나 여과하여 멸균시켰다. 이러한 목적은 생산 계수 (글루코스에 대한 생물량)를 0.25 g/g라고 가정하여 0.13 h^-1의 특정 성장 속도를 지속시키고 발효 용기 내의 아세트산 수준을 매우 낮은 값 (즉, 0.2 g/L 미만)으로 유지하기 위한 것이었다. 발효 실시 종료시까지 글루코스 공급을 계속하였다. 선택된 시간 (즉, 발효 시간 15시간 경과)에서 2 g/L의 L-아라비노스의 볼루스(bolus)를 사용하여 유도를 개시하였다. 발효 브로쓰 1 리터당 효모 추출물 5 g을 전달하기 위한 볼루스를 유도 1시간 전에, 유도시에, 및 유도 1시간 후에 발효 용기에 첨가하였다. 발효 실시는 발효 시간이 19.97시간 경과된 후 및 유도 4.97시간 후에 종료하였다.

발효 작동 조건

조건	초기	최소	최대
교반	220 rpm	220 rpm	1200 rpm
공기 유동	3 SLPM	3 SLPM	30 SLPM
온도	37℃	37℃	37℃
pH	6.7	6.7	6.7
압력	0.500 atm (50.7 kPa)	0.500 atm (50.7 kPa)	0.500 atm (50.7 kPa)
용존 O₂ ^*	20％	20％	20％
^*캐스케이드 교반기, 이후에는 공기 유동

공급 배지의 조성

성분	농도
MgSO₄·7H₂O	2.0 g/L
글루코스	500 g/L
암피실린	150 mg/L
(NH₄)₂HPO₄	4 g/L
KH₂PO₄	9 g/L
효모 추출물	5.0 g/L
미량 원소 - 공급물 (표 7)	10 mL/L

미량 원소- 공급물

성분	농도 ( mg /L)
EDTA	1300
CoCl₂·H₂O	400
MnCl₂·4H₂O	2350
CuCl₂·2H₂O	250
H₃BO₃	500
Na₂MoO₄·2H₂O	400
Zn(CH₃COO)₂·H₂O	1600
시트르산철	4000

펩티드 HC77607 의 단리 및 정제:

발효 실시의 완료 후에, 전체 발효 브로쓰를 APV 모델 2000 가울린(Gaulin)형 균질화기에 12,000 psi (82,700 kPa)에서 3회 통과시켰다. 브로쓰를 각각의 균질화 이전에 5℃ 미만으로 냉각시켰다. 균질화된 브로쓰는 웨스트팔리아 위스퍼퓨지(Westfalia WhisperFuge)™ (미국 뉴저지주 노쓰베일 소재의 웨스트팔리아 세퍼레이터 인크.(Westfalia Separator Inc.)) 적층(stacked) 디스크 원심분리기를 통해 600 mL/분 및 12,000 RCF로 즉시 처리하여, 봉입체를 현탁된 세포 파쇄물 및 용해된 불순물로부터 분리하였다. 회수된 페이스트를 물 중에 15 g/L (건조 질량 기준)로 재현탁시키고, NaOH를 사용하여 pH를 10.0으로 조정하였다. 상기 현탁액을 12,000 psi (82,700 kPa)의 APV 2000 가울린형 균질화기에 1회 통과시켜 격렬하게 혼합하였다. pH 10의 균질화된 현탁액을 웨스트팔리아 위스퍼퓨지™ 적층 디스크 원심분리기를 통해 600 mL/분 및 12,000 RCF로 즉시 처리하여, 세척된 봉입체를 현탁된 세포 파쇄물 및 용해된 불순물로부터 분리하였다. 회수된 페이스트를 순수한 물 중에 15 g/L (건조 질량 기준)로 재현탁시켰다. 상기 현탁액을 12,000 psi (82,700 kPa)의 APV 2000 가울린형 균질화기에 1회 통과시켜 격렬하게 세척하였다. 균질화된 현탁액을 웨스트팔리아 위스퍼퓨지™ 적층 디스크 원심분리기를 통해 600 mL/분 및 12,000 RCF로 즉시 처리하여, 세척된 봉입체를 잔류하는 현탁된 세포 파쇄물 및 NaOH로부터 분리하였다.

회수된 페이스트를 순수한 물 중에 25 g/L (건조 질량 기준)로 재현탁시키고, 혼합물의 pH를 HCl을 사용하여 2.2로 조정하였다. 디티오트레이톨 (DTT, 10 mM)을 첨가하여 이황화 결합을 파괴하였다. 산성화된 현탁액을 70℃로 14시간 동안 가열해서 DP 부위의 절단을 완료하여, 생성물 펩티드로부터 융합 펩티드를 분리하였다. 생성물을 5℃로 냉각시켜 12시간 동안 유지시켰다. 상기 혼합물을 9000 RCF에서 30분 동안 원심분리하고, 상등액은 기울여 따라내었다. 이어서, 상등액을 0.2 ㎛ 막으로 여과하였다.

여과된 생성물을, 10％ 아세토니트릴, 90％ 물 및 0.1 vol％ 트리플루오로아세트산 (TFA)으로 미리 조건화시켜 둔 10 ㎛ C18 배지를 함유하는 22×250 mm 역상 크로마토그래피 컬럼에 로딩하였다. 물 및 아세토니트릴의 구배를 0.1 vol％의 TFA를 함유하는 물 중 아세토니트릴 10％→25％로 하여 컬럼을 용출시켜서, 상기 생성물을 순수한 상태로 회수하였다. 생성물 펩티드를 함유하는 용출액을 수거하고, 동결건조 전에 진공 증발에 의해 2:1의 비율로 농축시켰다. 220 nm에서의 분광광도 검출을 이용하여 생성물 펩티드의 용출을 모니터링하고 추적하였다.

실시예 6

다중 카피의 모발-결합 펩티드를 실란트로서 사용한 모발 착색

본 실시예의 목적은 실란트로서의 다중 카피 모발-결합 펩티드와 병용하여 모발 염료를 사용한 모발 착색을 입증하는 것이었다. 본 실시예에 사용된 다중 카피의 모발-결합 펩티드는 실시예 5에 기재한 바와 같이 제조하였다.

모발 착색:

서열 16으로 제시된 다중 카피 모발-결합 펩티드 (28 mg) 물 중 베이직 바이올렛 2호 (미국 위스콘신주 밀워키 소재의 알드리치, CAS 제3248-91-7호)의 0.5 wt％ 스톡 용액 10 g에 첨가하고, 상기 용액이 밤새 교반되도록 하였다. 천연 백색 모발 견본 (미국 뉴욕주 벨레로즈 소재의 인터내셔널 헤어 임포터즈 앤드 프로덕츠 인크.)을 13 mm×100 mm 시험관에 넣고, 펩티드/염료 혼합물 8 mL를 상기 시험관에 주입하였다. 모발 견본을 착색제 용액과 접촉시켜서 30분 동안 자성 교반기를 사용하여 교반한 후에 꺼내어 30분 동안 공기 건조시켰다.

샴푸 처리 후, 염료 및 다중 카피 모발-결합 펩티드 실란트로 처리한 모발 견본의 색상은 "매우 우수"한 것으로 평가되었고, 이는 색상 손실이 최소임을 가리킨다.

실시예 7 내지 실시예 12

모발-결합 펩티드를 실란트로서 사용한 모발 착색

이들 실시예의 목적은 실란트로서의 각종 모발-결합 펩티드와 병용하여 모발 염료를 사용한 모발 착색을 입증하는 것이었다. 분광광도 측정 기술을 이용하여 색상 보유를 정량하였다.

레드 염료 33호 (CAS 제3567-66-6호, 미국 펜실바니아주 필라델피아 소재의 압베이 컬러(Abbey Color)로부터 구함)를 0.07 wt％의 농도로 사용하여 실시예 1에 기재한 바와 같이 모발 착색을 수행하였다. 표 8에 기재한 바와 같은 각종 모발-결합 펩티드를 사용하였다. 실시예 1에 기재한 바와 같이, 모발이 착색된 후에는 탈이온수로 일단 세정한 후에 1회의 샴푸 처리를 실시하였다.

엑스-라이트(X-Rite)^® SP78^TM 스피어 스펙트로포토미터(Sphere Spectrophotometer) (미국 미시건주 그랜드빌 소재의 엑스-라이트, 인크.(X-Rite, Inc.))를 사용하여, 착색된 모발 샘플을 광감지기에 넣어 광도계 반응을 대표하는 L^*, a^* 및 b^* 파라미터를 산출함으로써 샴푸 후의 색상 강도를 측정하였다. 초기의 기준선 L^* 값은 미착색 모발에 대하여 측정하였고, 모든 측정치는 3회의 개개의 측정의 평균이었다. 델타 E 값은 하기 수학식 1을 이용하여 산출하였다:

CIE (International Commission of Illumination) [Minolta, Precise Color Communication-Color Control From Feeling to Instrumentation, Minolta Camera Co., 1996]에 의해 정의되는 바와 같이, 여기서의 L^*는 명도 변수이고, a^* 및 b^*는 CIELAB 색공간의 색도 좌표이다. 델타 E 값이 클수록 보다 우수한 색상 보유를 나타낸다. 상기 결과를 표 8에 요약하였다.

샴푸 처리 후 색상 보유 결과

실시예	펩티드	서열번호	펩티드 농도 ( wt ％)	델타 E
7	A09	5	0.95％	34.8
8	A09	5	0.25％	25.6
9	HC77607	16	0.25％	19.8
10	IB5-Cys	52	0.25％	20.4
11 비교예	무작위	22	0.25％	10.8
12 비교예	없음	-	-	8.09

표 8의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 염료용 실란트로서 모발-결합 펩티드를 사용하면, 델타 E 값으로 측정되는 바와 같이 염료를 단독으로 사용한 경우 (실시예 12) 또는 실란트로서 무작위 펩티드를 사용한 경우 (실시예 11)보다 유의하게 더 우수한 모발 색상 보유가 제공되었다.

실시예 13

여러가지 모발-결합 펩티드들의 혼합물을 실란트로서 사용한 모발 착색

본 실시예의 목적은 실란트로서의 2종의 상이한 모발-결합 펩티드들의 혼합물과 병용하여 모발 염료를 사용한 모발 착색을 입증하는 것이었다. 단독 카피의 모발-결합 펩티드 및 다중 카피의 모발-결합 펩티드들의 혼합물을 사용하였다.

본 실시예에 사용된 모발-결합 펩티드는 C-말단에 시스테인 잔기가 부가된 서열 52로 제시된 IB5 (신펩에서 구함) 및 서열 16으로 제시된 다중 카피의 모발-결합 펩티드 HC77607 (실시예 5에 기재한 바와 같이 제조함)이었다. 상기 펩티드 각각을 0.125 wt％의 농도로 사용하였다. 0.50 wt％ 농도의 베이직 바이올렛 2호를 사용하여 실시예 4에 기재한 절차를 수행하였다.

8회의 샴푸 세척으로 이루어진 샴푸 처리 후, 염료, 및 모발-결합 펩티드들의 혼합물로 처리한 모발 견본의 색상은 "매우 우수"한 것으로 평가되었고, 이는 샴푸 처리 후의 색상 손실이 최소임을 가리킨다. 모발-결합 펩티드를 사용하지 않은 대조군은 샴푸 처리 후에 유의한 색상 손실을 나타냈다. 이러한 결과는 여러가지 모발-결합 펩티드들의 혼합물을 사용하여 모발 색상 보유를 개선시킬 수 있음을 나타낸다.

SEQUENCE LISTING <110> E.I. du Pont de Nemours and Co. <120> Method for Enhancing Effects of Colorants and Conditioners <130> CL3139 PCT <160> 74 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-binding Peptide <400> 1 Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly Asp Pro Arg Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-binding Peptide <400> 2 Asn Thr Ser Gln Leu Ser Thr 1 5 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-binding Peptide <400> 3 Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro 1 5 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-binding Peptide <400> 4 Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Ala Ala Val Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-binding Peptide <400> 5 Ile Pro Trp Trp Asn Ile Arg Ala Pro Leu Asn Ala 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-binding Peptide <400> 6 Asp Leu Thr Leu Pro Phe His 1 5 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Lys Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn 20 25 30 Ala Ala Asp His Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly 35 40 45 Asp Pro Arg Ser Lys Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His 50 55 60 Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly Asp Pro Arg Ser 65 70 75 80 Lys Cys <210> 20 <211> 82 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Multi-Copy Hair-Binding Peptide <400> 20 Pro Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys Gly Gly Gly 1 5 10 15 Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Lys Cys Gly Gly Gly Thr Pro Pro 20 25 30 Thr Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala 35 40 45 Ala Asp His Pro Lys Cys Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu 50 55 60 Met Leu Ala Thr Lys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro 65 70 75 80 Lys Cys <210> 21 <211> 82 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Multi-Copy Hair-Binding Peptide <400> 21 Pro Arg Thr Asn Ala Ala Asp His Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr 1 5 10 15 Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys Lys Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn 20 25 30 Ala Ala Asp His Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu Met 35 40 45 Leu Ala Thr Lys Lys Cys Gly Gly Gly Arg Thr Asn Ala Ala Asp His 50 55 60 Pro Gly Gly Gly Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys 65 70 75 80 Lys Cys <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Random Peptide Sequence <400> 22 Lys Ser Lys Pro Tyr Pro Tyr Pro Pro Pro Leu Pro Val Arg Pro Trp 1 5 10 15 Thr <210> 23 <211> 230 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Coding Sequence for Multi-Copy Hair-Binding Peptide HC77607 <400> 23 ggatccgatc cgaacaccag tcagctgagt accggcggcg gccgcaccaa cgccgcggat 60 catccgaaat gtggcggcgg caacaccagc cagctgagca ccggtggcgg ccgtaccaat 120 gcggcggatc atccgaaatg tggtggtggc aatacctctc agctgagcac gggcggcggc 180 cgtaccaatg ccgcggatca tccgaaatgc taataaggcg cgccaagctt 230 <210> 24 <211> 68 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TBP1 Peptide <400> 24 Gly Ser Ile Glu Gly Arg Phe His Glu Asn Trp Pro Ser Gly Gly Gly 1 5 10 15 Thr Ser Thr Ser 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taccgccggc agacggccag ttttc 35 <210> 35 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 35 ctcctctacg ggcggcgcca ctcacaagac ctc 33 <210> 36 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 36 gaggtcttgt gagtggcgcc gcccgtagag gag 33 <210> 37 <211> 68 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TBP101 Peptide <400> 37 Gly Ser Ile Glu Gly Arg Phe His Glu Asn Trp Pro Ser Ala Gly Gly 1 5 10 15 Thr Ser Thr Ser Lys Ala Ser Thr Thr Thr Thr Ser Ser Lys Thr Thr 20 25 30 Thr Thr Ser Ser Lys Thr Thr Thr Thr Thr Ser Lys Thr Ser Thr Thr 35 40 45 Ser Ser Ser Ser Thr Gly Gly Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Gln Arg 50 55 60 Leu Leu Ala Ala 65 <210> 38 <211> 312 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Coding Sequence for INK101 <400> 38 catatgtcgt actaccatca ccatcaccat cacctcgaat caacaagttt gtacaaaaaa 60 gcaggctccg cggccgcccc cttcaccgga tccatcgaag gtcgtttcca cgaaaactgg 120 ccgtctgccg gcggtacctc tacttccaaa gcttccacca ctacgacttc tagcaaaacc 180 accactacat cctctaagac taccacgact acctccaaaa cctctactac ctctagctcc 240 tctacgggcg gcgccactca caagacctct actcagcgtc tgctggctgc ataatgaaag 300 ggtgggcgcg cc 312 <210> 39 <211> 96 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TBP101-DP Peptide <400> 39 Met Ser Tyr Tyr His His His His His His Leu Glu Ser Thr Ser Leu 1 5 10 15 Tyr Lys Lys Ala Gly Ser Ala Ala Ala Pro Phe Thr Gly Ser Ile Asp 20 25 30 Pro Arg Phe His Glu Asn Trp Pro Ser Ala Gly Gly Thr Ser Thr Ser 35 40 45 Lys Ala Ser Thr Thr Thr Thr Ser Ser Lys Thr Thr Thr Thr Ser Ser 50 55 60 Lys Thr Thr Thr Thr Thr Ser Lys Thr Ser Thr Thr Ser Ser Ser Ser 65 70 75 80 Thr Gly Gly Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Gln Arg Leu Leu Ala Ala 85 90 95 <210> 40 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide used in site-directed mutagenesis <400> 40 ccccttcacc ggatccatcg atccacgttt ccacgaaaac tggcc 45 <210> 41 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide used in site-directed mutangenesis <400> 41 ggccagtttt cgtggaaacg tggatcgatg gatccggtga agggg 45 <210> 42 <211> 4945 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pINK101-DP Plasmid <400> 42 agatctcgat cccgcgaaat taatacgact cactataggg agaccacaac ggtttccctc 60 tagaaataat tttgtttaac tttaagaagg agatatacat atgtcgtact accatcacca 120 tcaccatcac ctcgaatcaa caagtttgta caaaaaagca ggctccgcgg ccgccccctt 180 caccggatcc atcgatccac gtttccacga aaactggccg tctgccggcg gtacctctac 240 ttccaaagct tccaccacta cgacttctag caaaaccacc actacatcct ctaagactac 300 cacgactacc tccaaaacct ctactacctc tagctcctct acgggcggcg ccactcacaa 360 gacctctact cagcgtctgc tggctgcata atgaaagggt gggcgcgccg acccagcttt 420 cttgtacaaa gtggttgatt cgaggctgct aacaaagccc gaaaggaagc tgagttggct 480 gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg cctctaaacg ggtcttgagg 540 ggttttttgc tgaaaggagg aactatatcc ggatatccac aggacgggtg tggtcgccat 600 gatcgcgtag tcgatagtgg ctccaagtag cgaagcgagc aggactgggc ggcggccaaa 660 gcggtcggac agtgctccga gaacgggtgc gcatagaaat tgcatcaacg catatagcgc 720 tagcagcacg ccatagtgac tggcgatgct gtcggaatgg acgatatccc gcaagaggcc 780 cggcagtacc ggcataacca agcctatgcc tacagcatcc agggtgacgg tgccgaggat 840 gacgatgagc gcattgttag atttcataca cggtgcctga ctgcgttagc aatttaactg 900 tgataaacta ccgcattaaa gcttatcgat gataagctgt caaacatgag aattcttgaa 960 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt 1020 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt 1080 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat 1140 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt 1200 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg 1260 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga 1320 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc 1380 tatgtggcgc ggtattatcc cgtgttgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac 1440 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg 1500 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca 1560 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg 1620 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg 1680 acgagcgtga caccacgatg cctgcagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg 1740 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag 1800 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg 1860 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct 1920 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac 1980 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact 2040 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga 2100 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt 2160 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct 2220 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc 2280 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc 2340 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc 2400 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg 2460 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt 2520 cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg 2580 agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg 2640 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt 2700 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag 2760 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt 2820 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta 2880 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt 2940 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg 3000 gtatttcaca ccgcatatat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt 3060 aagccagtat acactccgct atcgctacgt gactgggtca tggctgcgcc ccgacacccg 3120 ccaacacccg ctgacgcgcc ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa 3180 gctgtgaccg tctccgggag ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc 3240 gcgaggcagc tgcggtaaag ctcatcagcg tggtcgtgaa gcgattcaca gatgtctgcc 3300 tgttcatccg cgtccagctc gttgagtttc tccagaagcg ttaatgtctg gcttctgata 3360 aagcgggcca tgttaagggc ggttttttcc tgtttggtca ctgatgcctc cgtgtaaggg 3420 ggatttctgt tcatgggggt aatgataccg atgaaacgag agaggatgct cacgatacgg 3480 gttactgatg atgaacatgc ccggttactg gaacgttgtg agggtaaaca actggcggta 3540 tggatgcggc gggaccagag aaaaatcact cagggtcaat gccagcgctt cgttaataca 3600 gatgtaggtg ttccacaggg tagccagcag catcctgcga tgcagatccg gaacataatg 3660 gtgcagggcg ctgacttccg cgtttccaga ctttacgaaa cacggaaacc gaagaccatt 3720 catgttgttg ctcaggtcgc agacgttttg cagcagcagt cgcttcacgt tcgctcgcgt 3780 atcggtgatt cattctgcta accagtaagg caaccccgcc agcctagccg ggtcctcaac 3840 gacaggagca cgatcatgcg cacccgtggc caggacccaa cgctgcccga gatgcgccgc 3900 gtgcggctgc tggagatggc ggacgcgatg gatatgttct gccaagggtt ggtttgcgca 3960 ttcacagttc tccgcaagaa ttgattggct ccaattcttg gagtggtgaa tccgttagcg 4020 aggtgccgcc ggcttccatt caggtcgagg tggcccggct ccatgcaccg cgacgcaacg 4080 cggggaggca gacaaggtat agggcggcgc ctacaatcca tgccaacccg ttccatgtgc 4140 tcgccgaggc ggcataaatc gccgtgacga tcagcggtcc agtgatcgaa gttaggctgg 4200 taagagccgc gagcgatcct tgaagctgtc cctgatggtc gtcatctacc tgcctggaca 4260 gcatggcctg caacgcgggc atcccgatgc cgccggaagc gagaagaatc ataatgggga 4320 aggccatcca gcctcgcgtc gcgaacgcca gcaagacgta gcccagcgcg tcggccgcca 4380 tgccggcgat aatggcctgc ttctcgccga aacgtttggt ggcgggacca gtgacgaagg 4440 cttgagcgag ggcgtgcaag attccgaata ccgcaagcga caggccgatc atcgtcgcgc 4500 tccagcgaaa gcggtcctcg ccgaaaatga cccagagcgc tgccggcacc tgtcctacga 4560 gttgcatgat aaagaagaca gtcataagtg cggcgacgat agtcatgccc cgcgcccacc 4620 ggaaggagct gactgggttg aaggctctca agggcatcgg tcgatcgacg ctctccctta 4680 tgcgactcct gcattaggaa gcagcccagt agtaggttga ggccgttgag caccgccgcc 4740 gcaaggaatg gtgcatgcaa ggagatggcg cccaacagtc ccccggccac ggggcctgcc 4800 accataccca cgccgaaaca agcgctcatg agcccgaagt ggcgagcccg atcttcccca 4860 tcggtgatgt cggcgatata ggcgccagca accgcacctg tggcgccggt gatgccggcc 4920 acgatgcgtc cggcgtagag gatcg 4945 <210> 43 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IBT3 Peptide <400> 43 Ser Arg Arg Pro Arg Gln Leu Gln Gln Arg Gln Ser Arg Arg Pro Arg 1 5 10 15 Gln Leu Gln Gln Arg Gln 20 <210> 44 <211> 71 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide used to make IBT3 peptide <400> 44 tatgagccgt cgtccgcgtc agttgcagca gcgtcagagc cgtcgtccgc gtcagttgca 60 gcagcgtcag g 71 <210> 45 <211> 73 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide used to make IBT3 peptide <400> 45 gatccctgac gctgctgcaa ctgacgcgga cgacggctct gacgctgctg caactgacgc 60 ggacgacggc tca 73 <210> 46 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 46 ccttaaggca tgtatgatgg atccctggca tgcgtgaata ttcttctcg 49 <210> 47 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 47 gagcggataa caattcccct ctaga 25 <210> 48 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide used in site-directed mutagenesis <400> 48 gatgacgcca cggtggaaga acccgtgggt tccgagccc 39 <210> 49 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oliginucleotide used in site-directed mutagenesis <400> 49 gggctcggaa cccacgggtt cttccaccgt ggcgtcatc 39 <210> 50 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide used in site-directed mutagenesis <400> 50 ggcgagaaga atattcacgc atcccaggga tccatcgatc cac 43 <210> 51 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide used in site-directed mutagenesis <400> 51 gtggatcgat ggatccctgg gatgcgtgaa tattcttctc gcc 43 <210> 52 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-binding peptide haveing a cysteine residue added to the C-terminus <400> 52 Thr Pro Pro Glu Leu Leu His Gly Asp Pro Arg Ser Cys 1 5 10 <210> 53 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 53 Glu Gln Ile Ser Gly Ser Leu Val Ala Ala Pro Trp 1 5 10 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 54 Thr Asp Met Gln Ala Pro Thr Lys Ser Tyr Ser Asn 1 5 10 <210> 55 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 55 Ala Leu Pro Arg Ile Ala Asn Thr Trp Ser Pro Ser 1 5 10 <210> 56 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 56 Leu Asp Thr Ser Phe Pro Pro Val Pro Phe His Ala 1 5 10 <210> 57 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 57 Thr Pro Pro Thr Asn Val Leu Met Leu Ala Thr Lys 1 5 10 <210> 58 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 58 Ser Thr Leu His Lys Tyr Lys Ser Gln Asp Pro Thr Pro His His 1 5 10 15 <210> 59 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 59 Gly Met Pro Ala Met His Trp Ile His Pro Phe Ala 1 5 10 <210> 60 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 60 His Asp His Lys Asn Gln Lys Glu Thr His Gln Arg His Ala Ala 1 5 10 15 <210> 61 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 61 His Asn His Met Gln Glu Arg Tyr Thr Asp Pro Gln His Ser Pro Ser 1 5 10 15 Val Asn Gly Leu 20 <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hair-Binding Peptide <400> 62 Thr Ala Glu Ile Gln Ser Ser Lys Asn Pro Asn Pro His Pro Gln Arg 1 5 10 15 Ser Trp Thr Asn 20 <210> 63 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 63 Thr Met Gly Phe Thr Ala Pro Arg Phe Pro His Tyr 1 5 10 <210> 64 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 64 Ser Val Ser Val Gly Met Lys Pro Ser Pro Arg Pro 1 5 10 <210> 65 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 65 Asn Leu Gln His Ser Val Gly Thr Ser Pro Val Trp 1 5 10 <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 66 Gln Leu Ser Tyr His Ala Tyr Pro Gln Ala Asn His His Ala Pro 1 5 10 15 <210> 67 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 67 Ser Gly Cys His Leu Val Tyr Asp Asn Gly Phe Cys Asp His 1 5 10 <210> 68 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 68 Ala Ser Cys Pro Ser Ala Ser His Ala Asp Pro Cys Ala His 1 5 10 <210> 69 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 69 Asn Leu Cys Asp Ser Ala Arg Asp Ser Pro Arg Cys Lys Val 1 5 10 <210> 70 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 70 Asn His Ser Asn Trp Lys Thr Ala Ala Asp Phe Leu 1 5 10 <210> 71 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 71 Ser Asp Thr Ile Ser Arg Leu His Val Ser Met Thr 1 5 10 <210> 72 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 72 Ser Pro Tyr Pro Ser Trp Ser Thr Pro Ala Gly Arg 1 5 10 <210> 73 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 73 Asp Ala Cys Ser Gly Asn Gly His Pro Asn Asn Cys Asp Arg 1 5 10 <210> 74 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Skin-Binding Peptide <400> 74 Asp Trp Cys Asp Thr Ile Ile Pro Gly Arg Thr Cys His Gly 1 5 10

Claims

(a) 모발에 대해 친화성을 갖는 모발 유익제를 제공하는 단계,

(b) 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 제공하는 단계, 및

(c) 상기 모발 유익제 및 모발-결합 펩티드가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안 상기 유익제 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 모발에 도포하는 단계

를 포함하는, 유익제를 모발에 도포하는 방법.
제1항에 있어서, 모발 유익제가 모발 착색제 및 모발 컨디셔너로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제2항에 있어서, 모발 착색제가 염료, 안료 및 나노입자로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제3항에 있어서, 염료가 4-히드록시프로필아미노-3-니트로페놀, 4-아미노-3-니트로페놀, 2-아미노-6-클로로-4-니트로페놀, 2-니트로-파라페닐렌디아민, N,N-히드록시에틸-2-니트로-페닐렌디아민, 4-니트로-인돌, 2-니트로-5-글리세릴 메틸아닐린, 3-메틸아미노-4-니트로페녹시에탄올, 3-니트로-p-히드록시에틸아미노페놀, 히드록시안트라퀴논아미노프로필메틸 모르폴리늄 메토술페이트, 헨나(Henna), HC 블 루(HC Blue) 1, HC 블루 2, HC 옐로우(HC Yellow) 4, HC 레드(HC Red) 3, HC 레드 5, HC 레드 7, HC 바이올렛(HC Violet) 1, HC 바이올렛 2, HC 블루 7, HC 블루 10, HC 블루 12, HC 옐로우 2, HC 옐로우 6, HC 옐로우 8, HC 옐로우 12, HC 오렌지(HC Orange) 2, HC 오렌지 3, HC 브라운(HC Brown) 2, D＆C 옐로우(D＆C Yellow) 1, D＆C 옐로우 3, D＆C 블루(D＆C Blue) 1, 디스퍼스 블루(Disperse Blue) 3, 디스퍼스 바이올렛(Disperse Violet) 1, 디스퍼스 오렌지(Disperse Orange), 디스퍼스 바이올렛 4, 디스퍼스 블랙(Disperse Black) 9, 베이직 오렌지(Basic Orange) 31, 베이직 옐로우(Basic Yellow) 57, 베이직 옐로우 87, HC 옐로우 9호, 베이직 블루(Basic Blue) 26, 베이직 블루 7, 베이직 블루 99, 베이직 바이올렛(Basic Violet) 14, 베이직 바이올렛 2, 베이직 브라운(Basic Brown) 16, 베이직 브라운 17, 베이직 레드(Basic Red) 2, 베이직 레드 51, 애씨드 레드(Acid Red) 33, 브릴리안트 블랙(Brilliant Black) 1, 에오신 유도체 및 할로겐화된 플루오레세인 유도체로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제3항에 있어서, 안료가 D＆C 레드(D＆C Red) 36호, D＆C 레드 30호, D＆C 오렌지(D＆C Orange) 17호, 그린 3 레이크(Green 3 Lake), 익스트. 옐로우 7 레이크(Ext. Yellow 7 Lake), 오렌지 4 레이크(Orange 4 Lake), 레드 28 레이크(Red 28 Lake), D＆C 레드 7호, 11호, 31호 및 34호의 칼슘 레이크, D＆C 레드 12호의 바륨 레이크, D＆C 레드 13호의 스트론튬 레이크, FD＆C 옐로우(FD＆C Yellow) 5호 및 6호의 알루미늄 레이크, FD＆C 40호의 알루미늄 레이크, D＆C 레드 21호, 22호, 27 호 및 28호의 알루미늄 레이크, FD＆C 블루(FD＆C Blue) 1호의 알루미늄 레이크, D＆C 오렌지 5호의 알루미늄 레이크, D＆C 옐로우 10호의 알루미늄 레이크, D＆C 레드 33호의 지르코늄 레이크, 크로모프탈^® 옐로우(Cromophthal^®Yellow), 선패스트^® 마젠타(Sunfast^® Magenta), 선패스트^® 블루(Sunfast^® Blue), 산화철, 탄산칼슘, 수산화알루미늄, 황산칼슘, 카올린, 페로시안화철암모늄, 탄산마그네슘, 카르민, 황산바륨, 운모, 옥시염화비스무트, 스테아르산아연, 망간 바이올렛, 산화크롬, 이산화티탄, 이산화티탄 나노입자, 산화아연, 산화바륨, 울트라마린 블루(ultramarine blue), 시트르산비스무트, 히드록시아파타이트, 규산지르콘 및 카본 블랙 입자로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제3항에 있어서, 나노입자가 폴리스티렌, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리비닐톨루엔, 스티렌/부타디엔 공중합체 및 라텍스로 구성된 군에서 선택된 물질로 이루어진 착색된 중합체 나노입자인 방법.
제2항에 있어서, 모발 컨디셔너가 양이온성 중합체, 양이온성 계면활성제, 지방 알콜, 지방 아민, 비-이온성 중합체, 실리콘, 실록산, 중합체 에멀젼 및 나노입자로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제1항에 있어서, 모발 유익제, 및 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 모 발에 동시에 도포하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 도포하기 전에 모발 유익제를 모발에 도포하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 모발 유익제를 도포하기 전에 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 모발에 도포하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물이 모발 유익제에 커플링된 모발-결합 펩티드를 포함하는 결합체를 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 모발 유익제가 모발 착색제 및 모발 컨디셔너로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제11항에 있어서, 결합체의 모발-결합 펩티드가 유익제에 공유 결합된 것인 방법.
제1항에 있어서, 단계 (a)의 모발 유익제가 모발-결합 펩티드에 임의로 커플링된 것인 방법.
제1항에 있어서, 모발-결합 펩티드가 파지 디스플레이, 효모 디스플레이, 박테리아 디스플레이 및 조합 고상 펩티드 합성으로 구성된 군에서 선택된 공정에 의해 조합 방식으로 생성된 것인 방법.
제1항에 있어서, 모발-결합 펩티드가 실험적으로 생성된 것인 방법.
제16항에 있어서, 실험적으로 생성된 펩티드가 모발에 대해 친화성을 갖는 양으로 대전된 아미노산을 포함하는 것인 방법.
제1항 또는 제14항에 있어서, 모발-결합 펩티드가 서열 1, 서열 2, 서열 3, 서열 4, 서열 5, 서열 6, 서열 8, 서열 9, 서열 10, 서열 11, 서열 12, 서열 16, 서열 17, 서열 18, 서열 19, 서열 20, 서열 21 및 서열 52로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제1항에 있어서,

(d) 상기 모발-결합 펩티드가 모발에 결합하기에 충분한 시간 동안 모발-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 모발에 재도포하는 단계

를 추가로 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서,

(d) 중합체성 실란트(sealant)를 포함하는 조성물을 모발에 도포하는 단계

를 추가로 포함하는 것인 방법.
제20항에 있어서, 중합체성 실란트가 폴리(알릴아민), 폴리아크릴레이트, 아크릴레이트 공중합체, 폴리우레탄, 카르보머, 메티콘, 아모디메티콘, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍 및 실록산으로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
(a) 피부에 대해 친화성을 갖는 피부 유익제를 제공하는 단계,

(b) 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 제공하는 단계, 및

(c) 상기 피부 유익제 및 피부-결합 펩티드가 피부에 결합하기에 충분한 시간 동안 상기 유익제 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 피부에 도포하는 단계

를 포함하는, 유익제를 피부에 도포하는 방법.
제22항에 있어서, 피부 유익제가 피부 컨디셔너, 염료, 안료 및 선스크린(sunscreen)으로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제23항에 있어서, 피부 컨디셔너가 알파-히드록시산, 베타-히드록시산, 폴리올, 히알루론산, D,L-판테놀, 비타민 A 팔미테이트, 비타민 E 아세테이트, 폴리살리실레이트, 소르비톨, 실리콘, 실리콘 유도체, 라놀린, 천연 오일, 트리글리세리 드 에스테르, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 글리콜산, 락트산, 말산, 시트르산, 타르타르산, 글루카르산, 갈락타르산, 3-히드록시발레르산, 살리실산, 이산화티탄 나노입자 및 1,3-프로판디올로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제23항에 있어서, 염료가 4-히드록시프로필아미노-3-니트로페놀, 4-아미노-3-니트로페놀, 2-아미노-6-클로로-4-니트로페놀, 2-니트로-파라페닐렌디아민, N,N-히드록시에틸-2-니트로-페닐렌디아민, 4-니트로-인돌, 2-니트로-5-글리세릴 메틸아닐린, 3-메틸아미노-4-니트로페녹시에탄올, 3-니트로-p-히드록시에틸아미노페놀, 히드록시안트라퀴논아미노프로필메틸 모르폴리늄 메토술페이트, 헨나, HC 블루 1, HC 블루 2, HC 옐로우 4, HC 레드 3, HC 레드 5, HC 레드 7, HC 바이올렛 1, HC 바이올렛 2, HC 블루 7, HC 블루 10, HC 블루 12, HC 옐로우 2, HC 옐로우 6, HC 옐로우 8, HC 옐로우 12, HC 오렌지 2, HC 오렌지 3, HC 브라운 2, D＆C 옐로우 1, D＆C 옐로우 3, D＆C 블루 1, 디스퍼스 블루 3, 디스퍼스 바이올렛 1, 디스퍼스 오렌지, 디스퍼스 바이올렛 4, 디스퍼스 블랙 9, 베이직 오렌지 31, 베이직 옐로우 57, 베이직 옐로우 87, HC 옐로우 9호, 베이직 블루 26, 베이직 블루 7, 베이직 블루 99, 베이직 바이올렛 14, 베이직 바이올렛 2, 베이직 브라운 16, 베이직 브라운 17, 베이직 레드 2, 베이직 레드 51, 애씨드 레드 33, 브릴리안트 블랙 1, 에오신 유도체, 할로겐화된 플루오레세인 유도체 및 디히드록시아세톤으로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제23항에 있어서, 안료가 D＆C 레드 36호, D＆C 레드 30호, D＆C 오렌지 17호, 그린 3 레이크, 익스트. 옐로우 7 레이크, 오렌지 4 레이크, 레드 28 레이크, D＆C 레드 7호, 11호, 31호 및 34호의 칼슘 레이크, D＆C 레드 12호의 바륨 레이크, D＆C 레드 13호의 스트론튬 레이크, FD＆C 옐로우 5호의 알루미늄 레이크, FD＆C 옐로우 6호의 알루미늄 레이크, FD＆C 40호의 알루미늄 레이크, D＆C 레드 21호, 22호, 27호 및 28호의 알루미늄 레이크, FD＆C 블루 1호의 알루미늄 레이크, D＆C 오렌지 5호의 알루미늄 레이크, D＆C 옐로우 10호의 알루미늄 레이크, D＆C 레드 33호의 지르코늄 레이크, 크로모프탈^® 옐로우, 선패스트^® 마젠타, 선패스트^® 블루, 산화철, 탄산칼슘, 수산화알루미늄, 황산칼슘, 카올린, 페로시안화철암모늄, 탄산마그네슘, 카르민, 황산바륨, 운모, 옥시염화비스무트, 스테아르산아연, 망간 바이올렛, 산화크롬, 이산화티탄, 이산화티탄 나노입자, 산화아연, 산화바륨, 울트라마린 블루, 시트르산비스무트, 히드록시아파타이트, 규산지르콘 및 카본 블랙 입자로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제23항에 있어서, 선스크린이 유기 선스크린 및 무기 선스크린으로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제27항에 있어서, 유기 선스크린이 파라-아미노벤조산, 에틸 파라-아미노벤조에이트, 아밀 파라-아미노벤조에이트, 옥틸 파라-아미노벤조에이트, 에틸헥실 디 메틸 파라-아미노벤조에이트, 에틸렌 글리콜 살리실레이트, 페닐 살리실레이트, 옥틸 살리실레이트, 벤질 살리실레이트, 부틸페닐 살리실레이트, 호모멘틸 살리실레이트, 에틸헥실 살리실레이트, TEA-살리실레이트, 벤질 신나메이트, 2-에톡시에틸 파라-메톡시신나메이트, 에틸헥실 메톡시신나메이트, 옥틸 파라-메톡시신나메이트, 글리세릴 모노(2-에틸헥사노에이트)디파라-메톡시신나메이트, 이소프로필 파라-메톡시신나메이트, 유로칸산, 에틸 유로카네이트, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 나트륨 디히드록시메톡시벤조페논디술포네이트, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 페닐벤즈이미다졸 술폰산, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 옥토크릴렌(Octocrylene), 멘틸 안트라닐레이트 및 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제27항에 있어서, 무기 선스크린이 이산화티탄, 산화아연, 산화철 및 이산화티탄 나노입자로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제22항에 있어서, 피부 유익제, 및 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 피부에 동시에 도포하는 것인 방법.
제22항에 있어서, 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 도포하기 전에 피 부 유익제를 피부에 도포하는 것인 방법.
제22항에 있어서, 피부 유익제를 도포하기 전에 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 피부에 도포하는 것인 방법.
제22항에 있어서, 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물이 피부 유익제에 커플링된 피부-결합 펩티드를 포함하는 결합체를 포함하는 것인 방법.
제33항에 있어서, 피부 유익제가 피부 착색제 및 피부 컨디셔너로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제33항에 있어서, 결합체의 피부-결합 펩티드가 유익제에 공유 결합된 것인 방법.
제22항에 있어서, 단계 (a)의 피부 유익제가 피부-결합 펩티드에 임의로 커플링된 것인 방법.
제22항 또는 제36항에 있어서, 피부-결합 펩티드가 서열 7, 서열 8, 서열 9, 서열 10, 서열 11 및 서열 12로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
제22항에 있어서,

(e) 피부-결합 펩티드를 포함하는 조성물을 피부에 재도포하는 단계

를 추가로 포함하는 것인 방법.
제22항에 있어서,

(e) 중합체성 실란트를 포함하는 조성물을 피부에 도포하는 단계

를 추가로 포함하는 것인 방법.
제39항에 있어서, 중합체성 실란트가 폴리(알릴아민), 폴리아크릴레이트, 아크릴레이트 공중합체, 폴리우레탄, 카르보머, 메티콘, 아모디메티콘, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍 및 실록산으로 구성된 군에서 선택된 것인 방법.
모발 착색제 및 모발-결합 펩티드를 포함하고, 상기 착색제 및 펩티드가 서로 커플링되지 않은 모발 착색제 조성물.
모발 컨디셔너 및 모발-결합 펩티드를 포함하고, 상기 컨디셔너 및 펩티드가 서로 커플링되지 않은 모발 컨디셔닝 조성물.
피부 컨디셔너 및 피부-결합 펩티드를 포함하고, 상기 컨디셔너 및 펩티드가 서로 커플링되지 않은 피부 컨디셔닝 조성물.
피부 착색제 및 피부-결합 펩티드를 포함하고, 상기 착색제 및 펩티드가 서로 커플링되지 않은 피부 착색제 조성물.
서열 16, 서열 17, 서열 18, 서열 19, 서열 20 및 서열 21로 구성된 군에서 선택된 모발-결합 펩티드.