KR20120073161A

KR20120073161A - 화장품 제제 운반용 펩티드계 시스템

Info

Publication number: KR20120073161A
Application number: KR1020117025712A
Authority: KR
Inventors: 더글라스 로버트 안톤; 수잔 데일리; 로버트 제이. 비앙키니; 홍 왕; 피에르 이. 루비에르; 스콧 디. 커닝햄; 스테판 알. 파네스톡; 탄자 마리아 그루버
Original assignee: 존슨 앤드 존슨 컨수머 캄파니즈, 인코포레이티드; 이. 아이. 두퐁 드 느무르 앤드 컴퍼니
Priority date: 2009-03-30
Filing date: 2010-03-29
Publication date: 2012-07-04
Also published as: EP2414045A2; WO2010117709A2; BRPI1014677A2; US20100247590A1; JP2012522057A; CN102596155A; WO2010117709A3; CA2758049A1

Abstract

본 발명은 사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱에 화장품 유익제를 운반하기 위한 펩티드계 시약을 포함하는 조성물 및 시스템에 관한 것이다.

Description

화장품 제제 운반용 펩티드계 시스템{PEPTIDE-BASED SYSTEMS FOR DELIVERY OF COSMETIC AGENTS}

본 발명은 사람 헤어, 사람 스킨 및/또는 사람 손톱으로 화장품 유익제를 운반하기 위한 펩티드계 시약을 포함하는 조성물 및 시스템에 관한 것이다.

여러 화장품 케어 제품들은 하나 이상의 미립자성 유익제, 예를 들면 케라틴-함유 체표면, 예컨대 헤어, 스킨 및 손톱의 화장 특성들을 개선시키는 컬러링 제제 및 컨디셔닝 제제를 포함한다. 이러한 미립자성 유익제는 이러한 체표면에 견고하게 결합되지 않는다. 결과로서 이러한 제품들은 목적하는 효과를 유지하기 위해서는 상기 체표면에 빈번하게 재도포 해야 한다.

목적하는 표면에 유익제의 표적 운반을 위해 또는 목적하는 표면을 위한 유익제의 결합 내구성을 개선시키려는 시도로 다양한 단백질계 시약들이 개발되었다. 전체적으로 이것은 비현실적이며, 이러한 많은 "결합" 단백질들은 고가이며, 예를 들면 효과적인 결합을 위한 복합 지지체(complex support scaffold)가 필요한 면역글로불린, 면역글로불린-유도 단백질, 및 비-면역글로불린 결합 단백질을 제조 및 포함하기가 어렵다 (참조: Binz, H. et al. (2005) Nature Biotechnology 23, 1257-1268 for a review of various scaffold-assisted approaches).

단일 사슬 펩티드 및 펩티드계 시약들이 화장품 응용, 예를 들면 헤어, 스킨 및 손톱용의 전통적인 색료 및 컨디셔너(Huang et al. in U.S. Patent 7,220,405 and U.S. Patent Application Publication Nos. US2005/0226839, US2007/0053837, and US2008/0152600; Wang et al. in U.S. Patent Application Publication Nos. US2007/0196395 and US2006/0199206; O'Brien et al. in U.S. Patent Application Publication No. US2006/0073111, U.S. Patent No. 7,285264 and Published PCT Application No. WO2008/054746; Beck et al. in U.S. Patent Application Publication No. US2007/0065387; Fahnestock et al. in U.S. Patent Application Publication No. US2008/0107614; and Benson et al. in U.S. Patent Application Nos. 12/198358 and 12/198382), 탄소 나노튜브계 헤어 색료(Huang et al. in U.S. Patent Application Publication No. US2005/0229335), 피부 선스크린 제제(Buseman- Williams et al. in U.S. Patent 7,309,482 and Lowe et al. in U.S. Patent Application Publication No. US2007/0110686), 헤어 선스크린 제제(Beck et al. in U.S. Patent Application Publication No. 2008/0175798), 항비듬 제제(O'Brien et al in U.S. Patent Application No. 12/273,753) 및 항여드름 제제(O'Brien et al. in U.S. Patent Application No. 12/273,778)로 사용하기 위해 보고되었다.

헤어, 스킨 및/또는 손톱에 강한 친화력을 갖는 특정 단일 사슬 결합 펩티드들이 파지 디스플레이를 사용하여 규명되었다(Huang et al., supra; Estell et al. in Published PCT Application No. WO01/79479; Murray et al. in U.S. Patent Application Publication No. 2002/0098524; Janssen et al., U.S. Patent Application Publication No. 2003/0152976; and Janssen et al. in Published PCT Application No.WO04/048399). 또한 양전하 아미노산을 기본으로 하는 실증적-생성 헤어 및 스킨-결합 펩티드가 보고되었다(WO 2004/000257 to Rothe et al.). 이러한 접근법은 복합 지지체 및/또는 면역글로불린-유사 구조가 없는 짧은 직쇄형 펩티드는 헤어, 스킨 및/또는 손톱 표면에 강한 친화력(즉, K_d < 10^-5 M)을 가질 수 있다는 것을 설명한다.

그러나 단일의 짧은 펩티드의 결합 강도는 대부분의 화장품 응용에 요구되는 내구성을 가질 만큼 충분하지 않을 수 있다. 이러한 응용에서, 두개 이상의 규명된 표면-결합 펩티드는 함께 연결되어 타겟 표면(즉, 스킨, 헤어 또는 손톱)에 친화력이 증가한 직쇄형 결합 도메인(또한 여기서는 "핸드(hands)"라고도 함)을 제조할 수 있다. 흔히 두개 이상의 결합 도메인은 개개 타겟 표면-결합 펩티드를 분리하는 짧은 펩티드 스페이서를 경유해서 연결될 수 있다.

다중의 합리적으로 도안된 결합 도메인을 갖는 펩티드가 보고되었으며, 각 도메인은 두개 이상의 물질을 결합시키도록 도안되었으며, 하나 이상의 결합 도메인은 하나 이상의 케라틴-함유 몸체 물질(예를 들면, 헤어, 스킨 및/또는 손톱)에 친화력이 있도록 도안되었다(U.S. Published Patent Application No. US2007/0065387 to Beck et al. and U.S. Patent 7,285,264 to O'Brien et al.; and U.S. Patent Application Publication No. 2003/0185870 to Grinstaff et al.). 이러한 펩티드계 시약은 두개 이상의 결합 도메인[여기서"2-핸드형 펩티드(two-handed peptides)" 또는 "2-핸드형 펩티드계 시약(two-handed peptide-based reagents)"이라고 함]을 포함하며, 각 결합 도메인은 이들 각각의 물질에 친화력을 가지도록 도안되었다.

사람 헤어, 스킨 및/또는 손톱에 유익제로 효과적으로 결합될 수 있으며, "2-핸드형"이 아닌 선택적 직쇄형 펩티드 및 화장품 시스템이 필요하다. 또한 유익제가 온화한 조건을 사용하여 팹티드로부터 결합되지 않을 수 있는 선택적 펩티드도 필요하다.

본 발명은 약 10^-5 몰 이하의 K_d 또는 MB₅₀ 값을 갖는, 사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 적어도 하나에 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인을 포함하고, 친화짝의 첫번째 부분을 추가로 포함하는 펩티드 성분; 및 약 0.01 마이크론 내지 약 75 마이크론의 평균입자크기 및 친화짝의 두번째 부분을 갖는 미립자 유익제의 안정성 분산액을 포함하는 화장품 시스템에 관한 것으로서, 적어도 하나의 결합 도메인은 분산액의 입자들에 대하여 갖는 것보다, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더 큰 결합 친화력을 가진다. 본 발명의 화장품 시스템을 사용한 방법들도 기술되어 있으며, 이 방법은 유익제를 적용시키는 단계와 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나로부터 유익제를 제거하는 단계를 포함한다.

도 1은 헤어에 입자들을 결합한, 비오틴화 HCP5 다이머 펩티드인, 본 발명의 한 실시양태의 형광을 도시한 것이다.
도 2는 실리카-코팅된 산화철 색소를 사용하여 본 발명의 특정 실시양태의 헤어 컬러링 능력을 나타낸 히스토그램이다.
도 3의 A는 코팅된 산화철 입자들에 초기 노출후, 실시예 7에 개시된 과정들에 따라 처리된 헤어 트레스들을 도시한 것이다.
도 3의 B는 실시예 7에 개시된 과정들에 따라 처리한후, 물로 세척한 헤어 트레스들을 도시한 것이다.
도 3의 C는 실시예 7에 개시된 과정들에 따라 처리한후, 0.25% SLES 와쉬로 세척한 헤어 트레스들을 도시한 것이다.
도 4a는 (HCP5)2-비오틴 및 500nm 스트렙타비딘-코팅된 산화철 입자들에 의해 처리된 헤어의 전자현미경 사진이다.
도 4b는 (HCP5)2-비오틴 및 200nm 스트렙타비딘-코팅된 산화철 입자들에 의해 처리된 헤어의 전자현미경 사진이다.
서열 설명
하기 서열들은 37 C.F.R. 1.821 - 1.825 ("Requirements for Patent Applications Containing Nucleotide Sequences and/or Amino Acid Sequence Disclosures - the Sequence Rules")에 따르며, World Intellectual Property Organization (WIPO) Standard ST.25 (1998) 및 EPO 및 PCT의 서열목록 요건들 (Rules 5.2 and 49.5(a-bis), 및 Administrative Instructions의 섹션 208 및 Annex C)에 부합된다. 뉴클레오티드 및 아미노산 서열 데이터에 사용된 기호 및 포맷은 37 C.F.R. §1.822에 개시된 규칙들에 따른다.
서열번호 1-184 및 186-189는 케라틴-함유 체표면-결합 펩티드의 아미노산 서열들이다. 서열번호 1-134 및 184는 헤어-결합 펩티드들의 아미노산 서열들이다. 서열번호 130-134는 헤어 및 스킨에 결합하는 실증적-발생된 서열들이다. 서열번호 183-184는 손톱-결합 펩티드들에 대한 아미노산 서열들이다.
서열번호 185는 금속이온들에 결합하는 펩티드 ("HAT") 태그의 아미노산 서열이다.
서열번호 186은 C-말단 리신 잔기를 갖는 서열번호 76의 아미노산 서열이다.
서열번호 187은 C-말단 리신 잔기를 갖는 서열번호 82의 아미노산 서열이다.
서열번호 188은 C-말단 리신 잔기를 갖는 서열번호 86의 아미노산 서열이다.
서열번호 189는 C-말단 리신 잔기를 갖는 서열번호 110의 아미노산 서열이다.
서열번호 190은 서열번호 82의 랜덤화 버전을 포함하는 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 191은 서열번호 120의 랜덤화 버전을 포함하는 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 192는 서열번호 30의 랜덤화 버전을 포함하는 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 193은 색소 결합 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 194는 셀룰로스 아세테이트 결합 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 195는 셀룰로스 아세테이트 결합 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 196은 펩티드 HC263의 아미노산 서열이다.
서열번호 197은 펩티드 HC264의 아미노산 서열이다.
서열번호 198은 펩티드 HC214의 아미노산 서열이다.
서열번호 199는 펩티드 HC204의 아미노산 서열이다.
서열번호 200은 펩티드 HC205의 아미노산 서열이다.
서열번호 201은 펩티드 HC352의 아미노산 서열이다.
서열번호 202는 펩티드 HC423의 아미노산 서열이다.
서열번호 203은 펩티드 HC424의 아미노산 서열이다.
서열번호 204는 펩티드 (HCP5)2의 아미노산 서열이며, 이하 "HCP5-다이머"라고 한다.
서열번호 205는 C-말단 리신을 갖는 서열번호 204의 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 206은 스트렙타비딘-결합 펩티드 태그의 아미노산서열이다.
서열번호 207은 펩티드 HC260의 아미노산 서열이다.
서열번호 208은 펩티드 연결자 "tonB"의 아미노산 서열이다.
서열번호 209는 펩티드 브리지의 아미노산 서열이다.
서열번호 210은 펩티드 HC353의 아미노산 서열이다.
서열번호 211은 펩티드 HC634의 아미노산 서열이다.
서열번호 212는 펩티드 HC635의 아미노산 서열이다.
서열번호 213은 펩티드 HC636의 아미노산 서열이다.
서열번호 214는 펩티드 HC637의 아미노산 서열이다.
서열번호 215는 펩티드 HC638의 아미노산 서열이다.
서열번호 216은 펩티드 HC639의 아미노산 서열이다.
서열번호 217은 펩티드 HC640의 아미노산 서열이다.
서열번호 218은 펩티드 HC641의 아미노산 서열이다.
서열번호 219는 펩티드 HC642의 아미노산 서열이다.
서열번호 220은 펩티드 HC643의 아미노산 서열이다.
서열번호 221은 펩티드 HC644의 아미노산 서열이다.
서열번호 222는 펩티드 HC645의 아미노산 서열이다.
서열번호 223은-234는 색소 표면와 정전기적으로 연합하도록 디자인된 펩티드의 아미노산 서열이다.
서열번호 235는 펩티드 HHHHHH의 아미노산 서열이다.
서열번호 225는 C-말단 폴리리신 블록을 갖는 서열번호 212의 아미노산 서열이다.

사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 적어도 하나에 유익제를 적용하기 위한 개선된 화장품 시스템이 개발되었으며, 이하에 자세히 설명된다. 상기 시스템을 제조하고 사용하는 방법도 또한 설명된다. 본 발명의 화장품 시스템은 안정성 미립자 분산액에 제공되는 펩티드 성분 및 미립자 유익제를 포함한다.

펩티드 성분

펩티드 성분은 사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱인 적어도 하나의 인체표면에 결합하는 적어도 하나의 펩티드계 결합 도메인을 포함한다. 본 발명의 특정 펩티드계 성분은 길이가 약 500 아미노산일 것이다. 펩티드계 성분은 예를 들면, 수용액, 분말, 에멀젼, 현탁액, 분산액, 겔, 크림 또는 에어로솔로서 제공될 수 있다. 펩티드성 성분은 전체 조성물의 중량기준부, 약 0.01% 내지 약 10%, 일부 실시양태에서, 약 0.01% 내지 약 5%의 농도로 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나에 적용될 수 있다.

본 발명의 범주내에서, 용어들 "펩티드", "펩티드계" 및 "폴리펩티드"는 펩티드 결합에 의해 함께 결합된 둘 이상의 중합체를 의미하는 것으로, 상기 펩티드는 길이가 특정되어 있지 않으며, 서로 번갈아 사용될 것이다. 펩티드, 올리고펩티드 및 폴리펩티드는 본 정의내에 포함된다. 한 측면에서, 이 용어는 또한, 펩티드의 후발현 변형, 예를 들면, 글리코실화, 아세틸화, 포스포릴화 등을 포함한다. 예시적인 실시양태에서, 펩티드계 성분은 15 내지 500개, 15 내지 250개 또는 15 내지 100개의 아미노산을 포함할 것이다. 하기 약어들은 특정 아미노산들을 확인하기 위해 사용될 것이다.

아미노산 3-문자 1-문자

약어 약어

알라닌 Ala A

아르기닌 Arg R

아스파라긴 Asn N

아스파르트산 Asp D

시스테인 Cys C

글루타민 Gln Q

글루탐산 Glu E

글리신 Gly G

히스티딘 His H

이소류신 Ile I

류신 Leu L

리신 Lys K

메티오닌 Met M

페닐알라닌 Phe F

프롤린 Pro P

세린 Ser S

트레오닌 Thr T

트립토판 Trp W

티로신 Tyr Y

발린 Val V

특정 아미노산 Xaa X

(또는 이하에 정의된 아미노산)

본 명세서에 사용된 바와 같이, "결합 도메인"은 특정 표면 또는 표면들, 예를 들면 사람 헤어, 스킨 및/또는 손톱들에 대하여 친화력을 갖는 것으로 확인된 하나, 이상적으로는 둘 또는 그 이상의 짧은 펩티드들("서브도메인")을 포함하는 펩티드를 의미한다. 특정 실시양태에서, 결합 도메인은 2 내지 약 50개 또는 2 내지 약 25개의 짧은 펩티드들을 포함할 수 있다. 다른 실시양태는 2 내지 약 10개의 짧은 펩티드들을 포함하는 결합 도메인을 갖는 것을 포함한다. 다른 실시양태는 2, 3, 4 또는 5개의 짧은 펩티드들을 포함하는 결합 도메인들을 갖는 것이다.

상기 짧은 펩티드들은 서로 직접 결합하여 결합 도메인을 형성할 수 있거나, 도는 1개 이상의 짧은 펩티드 스페이서들을 경유해서 결합하여 결합 도메인을 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 스페이서들은 길이가 1 내지 100개, 또는 1 내지 50개의 아미노산이다. 다른 실시양태에서, 펩티드 스페이서들은 길이가 약 1 내지 약 25, 3 내지 약 40, 또는 3 내지 약 30개의 아미노산이다. 또다른 실시양태에서, 펩티드 스페이서들은 길이가 약 5 내지 약 20개의 아미노산이다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 결합 도메인은 사람 헤어, 스킨, 및 손톱 중 적어도 하나에 대하여, 10^-5몰(M) 이하의 결합 친화력 값으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 결합 도메인은 적어도 약 50-500mM 염의 존재하에서, 10^-5 이하의 결합 친화력값을 가질 것이다. 용어 "결합 친화력"은 각 기재, 본 발명의 경우 사람 헤어, 스킨 또는 손톱과 결합 펩티드의 상호반응세기를 의미한다. 결합 친화력은 결합 펩티드들의 해리상수("K_d") 또는 "MB₅₀"의 용어로 정의 또는 측정될 수 있다.

"K_d"는 타겟 위의 결합 부위가 절반 채워질때, 즉 펩티드 결합을 갖는 타겟(결합타겟물질)의 농도가 펩티드 결합을 갖지 않는 타겟의 농도와 같을 경우의 펩티드 농도에 해당한다. 해리상수가 작아질 수록, 펩티드는 더욱 단단히 결합된다. 예를 들면, 나노몰(nM) 해리상수를 갖는 펩티드는 마이크로몰(μM) 해리상수를 갖는 펩티드보다 더욱 단단하게 결합한다. 본 발명의 특정 실시양태는 10^-5 이하의 K_d 값을 가질 것이다.

"MB₅₀"은 ELISA-계 결합 에세이에서 얻은 최대 신호의 50%인 신호를 제공하는 결합 펩티드의 농도를 의미한다. 예를 들면, 미국특허출원공보 2005/022683의 Example 3(이후, 참고문헌으로 통합됨)을 참조한다. MB₅₀은 복합체의 성분의 결합 상호반응세기 또는 친화도를 가리킨다. MB₅₀의 값이 낮아질 수록, 펩티드와 해당 기재와의 상호반응은 더욱 강해지는데, 즉 더욱 좋아진다. 예를 들면, 나노몰(nM) MB₅₀을 갖는 펩티드는 마이크로몰(μM) MB₅₀을 갖는 펩티드보다 더욱 단단하게 결합한다. 본 발명의 특정 실시양태는 10^-5 이하의 MB₅₀ 값을 가질 것이다.

일부 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 Kd 또는 MB₅₀ 값으로 측정된, 약 10^-5M 이하, 약 10^-6M 이하, 약 10^-7M 이하, 약 10^-8M 이하, 약 10^-9M 이하 또는 약 10^-10M 이하의 결합 친화력을 가진다. 적어도 사람 헤어에 결합하는 것으로 확인된 펩티드는 또한, "헤어-결합 펩티드(HBP)"라고 한다. 적어도 사람 스킨에 결합하는 것으로 확인된 펩티드들은 "스킨-결합 펩티드(SBP)"라고 한다. 적어도 사람 손톱에 결합하는 것으로 확인된 펩티드들은 "손톱-결합 펩티드(NBP)"라고 한다.

일부 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 길이가 약 60개 이하의 아미노산인 펩티드계 결합 서브도메인으로 구성된다. 특정 실시양태는 길이가 7개 내지 약 60개 아미노산인 펩티드계 결합 서브도메인들을 가질 것이다. 다른 실시양태는 길이가 7 내지 50개 또는 7 내지 30개의 아미노산인 상기 펩티드계 결합 서브도메인들이다. 다른 실시양태는 길이가 7개 내지 27개의 아미노산인 펩티드계 결합 서브도메인이다.

단일 헤어-결합, 스킨-결합, 및/또는 손톱-결합 도메인을 포함하는 펩티드계 성분들이 본 발명의 특정 실시양태인 반면, 본 발명의 다른 실시양태에서, 펩티드계 성분은 사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 적어도 하나에 결합하는 1개 이상의 결합 도메인을 포함하는 것이 유리하다. 여러개, 즉 둘 이상의 결합 도메인들이 포함되면, 단일 결합 도메인을 포함하는 상기 펩티드계 성분들보다 화장품적으로 내구성을 갖는 펩티드계 성분을 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드계 성분은 2개 내지 약 50개 또는 2개 내지 약 25개의 펩티드계 결합 도메인들을 포함한다. 다른 실시양태는 2 내지 약 10개 또는 2 내지 5개의 펩티드계 결합 도메인들을 포함하는 상기 펩티드계 성분들을 포함한다.

여러개의 결합 도메인들은 서로 직접 결합될 수 있거나, 또는 펩티드 스페이서들을 사용하여 함께 결합될 수 있다. 특정 펩티드 스페이서들은 길이가 1 내지 100개 또는 1 내지 50개의 아미노산들이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 스페이서들은 길이가 약 1 내지 약 25개, 약 3 내지 약 40개, 또는 3 내지 약 30개의 아미노산들이다. 다른 실시양태는 길이가 약 5 내지 약 20개의 아미노산들인 스페이서들이다.

본 발명의 결합 도메인은 분산액의 입자들에 대하여 갖는 것보다 사람 헤어, 스킨, 또는 손톱에 대하여 더 큰 결합 친화력을 가질 것이다. 분산액의 입자들보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 결합 도메인이 우선적으로 친화력을 가짐으로써, 결합 도메인들이 분산액의 입자들보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더 큰 결합 친화력을 가지지 않는 시스템에 비해, 결합 도메인들의 대부분이 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나에 결합하기 위해 사용할 수 있는 화장품 시스템이 얻어진다. 일부 실시양태에서, 결합 도메인들은 분산액의 입자들에 대하여 가지는 것보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 적어도 2배 더 큰 (즉, 약 2배 이상) 결합 친화력을 가진다. 다른 실시양태에서, 결합 도메인들은 분산액의 입자들에 대하여 가지는 것보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 적어도 5배 더 큰 (즉, 약 5배 이상) 결합 친화력을 가진다. 또다른 실시양태에서, 결합 도메인은 분산액의 입자들에 대하여 가지는 것보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 적어도 10배 더 큰 (즉, 약 10배 이상) 결합 친화력을 가진다.

펩티드계 결합 도메인들 및 이들이 포함되는 짧은 펩티드들은 예를 들면, 파지 디스플레이, 박테리아 디스플레이, 효모 디스플레이, 리보솜 디스플레이, mRNA 디스플레이 및 이들의 조합과 같은 공지된 바이오팬닝 기술을 포함하는, 당 분야에 통상의 지식을 가진 자들에게 공지된 여러 방법들을 사용하여 확인될 수 있다.

펩티드들의 랜덤 라이브러리의 발생은 잘 알려져 있으며, 박테리아 디스플레이 (Kemp, D.J.; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78(7):4520-4524 (1981), 및 Helfman et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80(l):31-35, (1983)), 효모 디스플레이 (Chien et al., Proc Natl Acad Sci USA 88(21):9578-82 (1991)), 조합의 고상 펩티드 합성 (미국특허 제5,449,754호, 미국특허 제5,480,971호, 미국특허 제5,585,275호, 미국특허 제5,639,603호), 및 파지 디스플레이 기술(미국특허 제5,223,409호, 미국특허 제5,403,484호, 미국특허 제5,571,698호, 미국특허 제5,837,500호); 리보솜 디스플레이 (미국특허 제5,643,768호; 미국특허 제5,658,754호; 및 미국특허 제7,074,557호), 및 mRNA 디스플레이 기술 (PROFUSION™; 미국특허 제6,258,558호; 미국특허 제6,518,018호; 미국특허 제6,281,344호; 미국특허 제6,214,553호; 미국특허 제6,261,804호; 미국특허 제6,207,446호; 미국특허 제6,846,655호; 미국특허 제6,312,927호; 미국특허 제6,602,685호; 미국특허 제6,416,950호; 미국특허 제6,429,300호; 미국특허 제7,078,197호; 및 미국특허 제6,436,665호)를 포함하는 여러 기술들에 의해 수행될 수 있다. 상기 생물학적 펩티드 라이브러리를 발생시키는 기술들은 Dani, M., J. of Receptor & Signal Transduction Res., 21(4):447-468 (2001)에 기술되어 있다.

펩티드들을 랜덤하게 발생시키는 한가지 방법은 파지 디스플레이이다. 1985년에 도입한 이래로, 파지 디스플레이는 약물 타겟에 대한 펩티드, 단백질 및 소분자들을 포함하는 다양한 리간드들을 발견하기 위해 널리 사용되어 왔다(Dixit, J. of Sd. & Ind. Research, 57:173-183 (1998)). 이 용도는 조직공학을 위한, 단백질 접힘, 새로운 촉매 활성, 새로운 종들과의 DNA-결합 단백질 및 새로운 펩티드계 생재료 스캐폴드와 같은 다른 영역들에도 확대된다(Hoess, Chem. Rev. 101 :3205-3218 (2001) and Holmes, Trends Biotechnol. 20: 16-21 (2002)). Whaley 등 (Nature 405:665-668 (2000))은 다른 결정학적 형태의 무기 반도체 기재에 특이적으로 결합할 수 있는 펩티드 서열들을 확인하기 위해 파지 디스플레이 스크리닝을 사용하는 것을 개시하고 있다.

펩티드 라이브러리를 안티-타겟과 접촉시켜, 안티-타겟에 결합하는 펩티드들을 제거하는 단계 및 비-결합 펩티드들을 타겟과 접촉시키는 단계들을 포함하는 변형된 스크리닝 방법이 기술되어 있다 (Estell 등 WO 01/079479, Murray 등 미국특허 출원공보 제2002/0098524호, 및 Janssen 등 미국특허 출원공보 제2003/0152976호). 상기 타겟/안티-타겟 방법을 사용하여, 헤어에 우선적으로 결합하고 스킨에 결합하지 않는 펩티드 서열 및 스킨에 우선적으로 결합하고 헤어에 결합하지 않는 펩티드 서열이 확인될 수 있다. 같은 방법을 사용하여, Janssen 등 (WO 04/048399)은 다른 케라틴-포함 체표면-결합 펩티드들(즉, 스킨-결합 및 헤어-결합 펩티드들) 뿐만 아니라 여러 다른 결합 모티프들을 확인하였다.

파지 디스플레이는 펩티드 또는 단백질이 박테리오파지의 코트 단백질에 유전적으로 융합하여, 파지 비리온 외부상에 융합 펩티드가 디스플레이되는 반면, 비리온 내에 융합 잔기들을 인코딩하는 DNA가 디스플레이되는, 선택 기술이다. 디스플레이되는 펩티드와 이를 인코딩하는 DNA 사이의 상기 물리적 연결은 펩티드들의 수많은 변이체들을 스크리닝하며, 각각은 "바이오팬닝"이라고 불리우는 간단한 인비트로(in vitro) 선택과정에 의해 대응하는 DNA 서열에 결합된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "바이오팬닝"은 특정 선택과정(파지 디스플레이, 리보솜 디스플레이, mRNA-디스플레이 등)을 설명하기 위해 사용될 수 있으며, 여기에서 디스플레이된 펩티드들의 라이브러리는 구체화 타겟 물질(예를 들면, 헤어)에 대하여 팬닝된다. 가장 간단한 형태로, 파지 디스플레이 바이오팬닝은 플레이트 또는 비드상에 고정된 관심의 타겟과 함께 파지-디스플레이된 변이체들의 풀(pool)을 배양하고, 비결합 파지를 세척제거하고, 파지와 타겟사이의 결합 상호반응을 방해함에 의해 특이결합 파지를 용리시킴으로써, 실시된다. 그후, 용리된 파지는 생체내(in vivo) 증폭되고, 과정이 반복되어, 가장 단단한 결합 서열들의 도움으로 파지 풀이 순차적으로 풍부해진다. 선택/증폭을 3회 이상 돈 후, 각 클론들은 DNA 서열화에 의해 특징화된다.

펩티드 결합 도메인은 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나에 대하여 친화력을 갖는 것으로 보고된 서열들로부터 실증적으로 발생될 수 있다. 예를 들면, 인체표면에 대하여 친화력을 갖는 펩티드들은 미국특허 제7,220,405호 및 제7,285,264호; 미국 특허출원공보 US 2005-0226839, US 2005-0249682, US 2007-0065387, US 2007-0067924, US 2007-0196305, US 2007-0110686, US 2006-0073111, 및 US 2006-0199206; 미국 특허출원 제11/877,692호; 미국 특허출원공보 제2008-0175798호; 및 PCT 특허출원공보 제WO2004048399호에 기술되어 있다. 인체 표면 펩티드들은 또한, 표1a - 1f에 개시되어 있다.

[표 1a]

[표 1b]

[표 1c]

[표 1d]

[표 1e]

[표 1f]

한 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 서열번호 1-184, 186-189, 196-200, 204-205, 및 211-222로 구성된 그룹에 개시된 적어도 하나의 펩티드를 포함한다. 다른 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 서열번호 1-134, 184, 186-189, 196-200, 및 211-222로 구성된 그룹에서 선택되는 헤어-결합 펩티드를 포함한다. 또다른 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 서열번호 130-182로 구성된 그룹에서 선택되는 스킨-결합이다. 다른 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 서열번호 196-200 또는 서열번호 210-222 중 적어도 하나를 포함한다.

또다른 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 서열번호 130-182로 구성된 그룹에서 선택되는 적어도 하나의 스킨-결합 펩티드를 포함한다. 다른 실시양태에서, 펩티드계 결합 도메인은 서열번호 183-184로 구성된 그룹에서 선택되는 손톱-결합이다.

사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 적어도 하나에 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인을 포함하는데 더해, 본 발명의 펩티드계 성분들은 친화짝의 첫번째 부분을 추가로 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "친화짝"은 서로에 대하여 알려져 있는 친화력을 갖는 한 쌍의 제제들을 의미하며, 친화짝의 첫번째 부분은 바이오팬닝으로부터 유도되지 않았다. 친화짝은 예를 들면, 이온결합계(정전기 상호반응), 수소결합계, 소수성 결합계, 킬레이트화-계, 생물학적 친화력-계, 또는 친화짝-계 또는 이들의 조합을 포함하는, 공유결합-계가 아닌 결합 연관에 기초할 것이다.

예를 들면, 본 발명의 친화짝은 이온결합짝들을 포함할 수 있다. "이온결합"은 두 성분들의 연합 복합체를 의미하며, 상기 두 성분들 중 하나는 최종양전하를 가지며, 다른 하나는 최종음전하를 가진다. 정전기 상호반응이라고도 불리우는 이온결합은 가장 강한 결합들 중에서, 세기가 공유결합과 필적하며, 50nm의 순서로 긴 범위를 가진다 (Isrealachvili, J.N., Intermolecular and Surface Forces, 2nd ed.; Academic Press: New York, NY (1992) pp. 32-34).

특정 아미노산들은 아스파르트산과 글루탐산의 측쇄내 카르복실기 및 리신, 아르기닌 및 히스티딘 잔기들에 위치된 아미노기들과 같은 이온화 측기를 함유한다. 일부 펩티드들은, 하전된 아미노산들이 펩티드 서열내에 있는 경우 최종전하(양 또는 음) 및 특정 전하분포를 포함한다. 펩티드 분자의 전체 또는 일부의 최종전하는 유익제 상에서 친화짝의 반대로 하전된 두번째 부분과의 정전인력을 유도하거나, 또는 유익제 상에서 친화짝의 유사하게 하전된 두번째 부분과의 정전반발력을 유도할 수 있다.

이온성 (정전기적) 결합짝의 예로는, 양전하 미립자 유익제에 결합된 음전하 펩티드, 양전하 코팅으로 포함되거나 또는 코팅되는 미립자 유익제에 결합된 음전하 펩티드(예를 들면, 음이온 교환수지), 음전하 미립자 유익제에 결합된 양전하 펩티드(예를 들면, 마이카, 실리카), 음전하를 제공하는 코팅을 포함하는 미립자 유익제에 결합된 양전하 펩티드(예를 들면, SO₄ ^-2와 같은 기들을 갖는 양이온 교환수지)가 포함되며, 여기에 국한되지 않는다.

미립자 유익제 상의 친화짝의 두번째 부분 상의 전하 및 전하밀도가 얻어질 수 있으며, 적당한 표면처리 및 pH 조건들에 의해 조절될 수 있다. 전하들은 1)아미노기, 카르복실기, 설폰기 및 히드록실기 등과 같은 표면 작용기들의 이온화; 2)용액으로부터 이온들의 특이 흡착(specific adsorption)에서 기원될 수 있다. 본 명세서에서, "특이 흡착"은 흡착된 이온들이 네트 표면전하들을 생성할 수 있도록 흡착이 부분적으로 비-전기 성질을 가지는 것을 의미한다. 비활성 유익제를 위해, 당 분야의 다표면 처리 접근법들은 1)표면 히드록실기 및 다른 기들을 생성하기 위해 특수가스의 플라즈마 중합 또는 표면을 산화하기 위한 산소 플라즈마를 사용하고 (C. L. Rinsch et al, Langmuir (1996), 12 (2995-3002)); 2)금속 산화물 표면상에 실록산 모노레이어를 형성하는 아미노프로필 실란과 같은 말단 작용기들을 갖는 자가조립 단분자막을 형성하고 (Xia, Y.N., and Whitesides, G.M., Angew.Chem. Int. Ed. (1998), 37:551-575); 3)원하는 전하 사인(charge sign) 및 전하 밀도를 갖는 하전된 표면을 제공하기 위해 특정 표면상에 고분자전해질 멀티플레이어(multiplayer)를 흡착하기 위해 적층 조립(layer-by-layer assembly) 방법을 사용하고 (Decher, G., Science (1997), 277: 1232-1237); 및 4)하전된 고분자 또는 졸-겔을 침전-코팅하여, 이온화 작용기들을 생성하기 위해 사용될 수 있었다. 유익제의 표면 전하들은 그의 표면 등전점(IEP), 전체 표면전하가 0인 pH 값을 특징으로 한다. IEP보다 낮은 pH에서, 유익제, 특히 미립자 유익제 상의 친화짝의 두번째 부분은 양전하를 포함하는 반면; IEP보다 높은 pH에서, 유익제는 음전하를 포함한다.

정전기적 상호반응 범위는 이온세기에 의해 추가로 조절될 수 있는데: 이온세기가 낮을 수록 상호반응 범위가 길어지는 반면, 이온세기가 높을 수록 상호반응 범위가 짧아진다. 상호반응 범위의 조절은 높은 이온세기에서 체표면으로의 유익제 운반을 개선시키기 위해서가 아닌, 낮은 이온세기에서 안정한 펩티드-유익제 부가물을 얻기 위해 적용될 수 있다.

친화짝의 첫번째 부분의 전체 전하는 시스템의 pH에 따라 음전하 또는 양전하일 수 있다. 한 실시양태에서, 친화짝의 첫번째 부분의 전체 전하는 특정 pH에서 양전하이며, 이때 pH는 3.0 내지 약 10이다. 다른 실시양태에서, 친화짝의 첫번째 부분의 전체 전하는 특정 pH에서 음전하이며, 이때 pH는 3.0 내지 약 10이다.

본 발명의 친화짝은 또한, 수소결합계 짝들을 포함한다. "수소결합" 짝들은 한 성분의 비교적 전기음성 원자의 수소원자와 다른 성분의 전기음성 원자의 연합 복합체를 의미한다.

"소수성-결합" 짝들은 두 성분들이 모두 연합 복합체를 형성할 수 있게 하는 특징들 또는 소수성 도메인들을 갖는 두 성분들의 연합 복합체를 의미한다. 미립자 유익제의 표면은 소수성이다. 이와 같이, 유효량의 소수성 아미노산 잔기들을 포함하는 친화짝의 첫번째 부분을 펩티드 성분으로 통합시킬 수 있다. 미립자 유익제의 표면은 원래 소수성이거나, 또는 다른 소수성 성분과 연합할 수 있는 소수성 표면을 가지도록 변형될 수 있다. 예를 들면, 미립자 유익제는 잘 알려진 여러 코팅 기술들을 사용하여 소수성 중합체로 코팅될 수 있다. 소수성 펩티드를 포함하는 친화짝의 첫번째 부분은 적어도 1.5의 소수성 지수를 갖는 소수성 아미노산들로 구성될 것이다 (Kyte and Doolittle, J. MoI. Biol. (1982) 157(157): 105-132). 한 실시양태에서, 소수성 아미노산은 이소류신, 발린, 류신, 페닐알라닌, 시스테인, 메티오닌 및 알라닌으로 구성된 그룹에서 선택된다.

"킬레이트화-계" 짝들은 루이스 산과 루이스 염기의 배위 공유결합 복합체를 의미하며, 여기에서 루이스 염기는 루이스 산에 2개 이상의 고립 전자쌍들을 기부한다. 킬레이트화-계 짝들의 예는 여러 아미노산 측쇄들과 금속 이온들의 상호반응이다. 킬레이트화-계 짝들에 사용되기 위한 금속의 예로는 2가 금속들, 예를 들면 니켈, 구리, 코발트 및 아연이 포함된다.

"폴리히스티딘 태그"는 니켈, 구리, 코발트 또는 아연과 같은 고정화 금속 이온들에 결합하기 위해 종종 사용된다. 금속이온은 니트릴로아세트산(NTA)-아가로스, HisPur 코발트 수지, 이미노디아세트산(IDA) 수지, 카르복시메틸아스파테이트(CMA) 수지, TALON^？ (또는 다른 고정화 금속 친화 크로마토그래피(IMAC) 수지 IMAC)과 같은 매체에 통합된다. 금속 친화 수지들은 Thermo Fisher Scientific (Rockford, IL), EMD BioSciences (Madison, WI), 및 Clontech (Palo Alto, CA)와 같은 여러 회사들로부터 상업용으로 시판된다. 폴리히스티딘 태그는 "HAT" (KDHLIHNVHKEFHAHAHNK (서열번호 185))와 같은 합성 또는 자연-발생 히스티딘 친화 태그이다. 한 실시양태에서, 폴리히스티딘 태그는 길이가 6 내지 약 10, 6 내지 약 8, 또는 약 6개의 연속 ("HHHHHH") 히스티딘 잔기이다.

한 실시양태에서, 펩티드계 성분은 미립자 유익제의 표면상의 고정화 금속에 결합할 수 있는 적어도 하나의 폴리히스티딘 태그를 포함한다. 다른 실시양태에서, 미립자 유익제는 입자의 표면상에 유효량의 적당한 매체를 포함한다. 금속 킬레이트 수지는 미립자 유익제의 표면상에 부분적 또는 완전한 코팅으로서 도포될 수 있다. 다른 실시양태에서, 미립자 유익제의 표면상에 도포된 수지는 네자리 금속 킬레이터를 포함한다 (미국특허 제5,962,641호; 이후에 참고문헌으로 통합됨). 다른 실시양태에서, 친화짝은 폴리히스티딘-태그, 즉 마이크로몰 친화력을 갖는 수지 고정화 금속이온에 결합할 수 있는 유효량의 히스티딘 잔기들로 구성되고 미립자 유익제에 통합된 펩티드계 성분 및 금속 이온에 통합된 통합 아미노산 모티프를 포함하는 킬레이트화 짝이며, 상기 금속이온은 니켈, 구리, 코발트, 아연 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹에서 선택된다.

본 발명의 친화짝들의 다른 예로는 비오틴:아비딘, 비오틴:스트렙타비딘, 스트렙타비딘 태그:스트렙타비딘, 말토스 결합 단백질(MBP):말토스 또는 아밀라제, 글루타티온 S-트라스페라제(GST):글루타티온이 포함되며, 여기에 국한되지 않는다.

친화짝들은 또한 생물학적 친화도에 기초할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 생물학적 친화력은 항체-항원 친화력을 포함하지 않는다. 항체-항원 친화력은 본 발명의 범주에서 특이적으로 배제된다. 한 실시양태에서, 친화짝은 에피토프 태그:항체 짝을 포함하며, 상기 펩티드계 시약은 에피토프 서열을 포함하며, 미립자 유익제는 해당 항체를 포함한다. 상업용 에피토프 태그들의 예로는 HA-태그, FLAG-태그, E-태그, S-태그 및 myc-태그가 포함되며, 여기에 국한되지 않는다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 친화짝의 첫번째 부분은 폴리히스티딘 태그, 비오틴, 스트렙타비딘 태그, 말토스 결합 단백질, 글루타티온 S-트랜스퍼라제, 에피토프 태그, HA-태그, FLAG-태그, E-태그, S-태그, myc-태그 및 서열번호 185, 206 및 223-234로 구성된 그룹에서 선택된다. 다른 실시양태에서, 친화짝의 첫번째 부분은 폴리히스티딘 태그, 비오틴 및 서열번호 185, 206 및 223-234로 구성된 그룹에서 선택된다.

선택적으로, 본 발명의 결합 도메인은 다른 물질들보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나에 대하여 우선적인 결합을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 결합 도메인은 울, 캐시미어 또는 야크 털보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 더욱 우선적으로 결합한다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 결합 도메인은 목화 또는 변형된 셀룰로스 섬유보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 더욱 우선적으로 결합한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 결합 도메인은 금속, 세라믹, 자기, 유리, 실크, 목재, 폴리에스테르 또는 폴리비닐클로라이드보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 더욱 우선적으로 결합한다.

유익제

본 발명에서 사용되는 "유익제"라는 용어는, 사람 헤어, 스킨 및/또는 손톱에 부착되었을때 이득을 주는 특성들을 갖는 조성물 또는 시약을 함유하는 화장품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 유익제는 미립자 형태로 되어 있으며, 즉, 유익제는 작은 별개의 입자들로 제공된다. 본 발명의 미립자 유익제는 친화짝의 두번째 부분을 가지며, 약 0.01 마이크론(10nm) 내지 약 75 마이크론(75,000nm)의 평균입자크기를 갖는 안정한 미립자 분산액으로 통합된다. 한 실시양태에서, 평균입자크기는 0.01 마이크론 내지 75 마이크론이며, 이는 레이저 회절 및/또는 동적 광산란법과 같은 광산란법에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, 평균입자크기는 약 60 마이크론 미만, 약 40 마이크론 미만, 또는 약 10 마이크론 미만이다. 다른 실시양태에서, 평균입자크기는 약 0.2 마이크론(200nm) 내지 0.4 마이크론(400nm)이다. 다른 실시양태에서, 분산액의 입자들은 나노입자들일 것이며, 즉, 약 10nm 내지 약 100nm의 평균입자크기를 가질 것이다.

본 명세서에서 참고된 "입자크기"는 레이저 회절법 (참조 ISO 13320-1 :1996; International Organization for Standards, Geneva, Switzerland) 및/또는 동적 광산란법 (참조 ISO 13321 :1996) 방법들과 같은 광산란법들을 사용하여 얻어진 입자크기 측정치를 의미할 것이며, 상기 방법 둘다 당 분야에 공지되어 있다. 예시적인 시스템들은 Malvern Instruments Ltd. Worcestershire, United Kingdom에서 구입가능하다.

약 0.01 마이크론 내지 약 75 마이크론의 평균입자크기를 갖는 안정한 미립자 분산액내 미립자 유익제는 본 발명의 화장품 시스템의 펩티드계 성분에 유익제가 결합하는 것을 용이하게 한다는 것을 알아내었다.

본 발명의 "미립자 유익제의 안정한 분산액"은 시간이 경과함에 따라 안정한 샘플 매트릭스내에 분산된 미립자 유익제 입자들을 의미한다.

본 명세서에서 사용된, 용어 "안정한"은 시간이 경과함에 따라 샘플 매트릭스내에 분산된 입자들이 안정한 분산액을 의미할 것이다. 샘플의 평균입자크기가 시간에 따라 거의 일정한 경우 안정하게 분산된 것으로 여겨질 것이다. 한 실시양태에서, 샘플의 평균입자크기가 분산액 형성후 24시간이내에 미립자 유익제의 초기 입자크기보다 100% 이상까지 증가하지 않는다면 샘플이 안정하게 분산된다. 다른 실시양태에서, 분산액 형성후 2일 이내에 미립자 유익제의 초기 입자크기보다 50% 이상까지 샘플의 입자크기가 증가하지 않는다면, 샘플은 안정하게 분산된다. 특정 실시양태에서, 분산액 형성후 3일 이내에 평균입자크기가 50% 미만 증가한다. 다른 실시양태에서, 분산액 형성후 5일 이내에 평균입자크기가 50% 미만 증가한다. 또다른 실시양태에서, 분산액 형성후 7일 이내에 평균입자크기가 50% 미만 증가한다. 한 실시양태에서, 미립자 분산액은 50개의 1차 입자들보다 큰 덩어리들을 검출하지 않으면서 적어도 7일동안 평균입자크기가 50% 이상 증가하지 않는 경우 안정하다. 당업자는, 입자들이 최소량의 에너지로 쉽게 재분산될 수 있는한, 안정한 입자 분산액이 시간이 경과함에 따라 일부 침강을 가질 수 있음을 알 것이다 (예를 들면, 화장품 조성물 또는 화장품 시스템내 입자들의 균일한 분산을 재형성하기 위해 수동 혼합/셰이킹과 연관된 젠틀한 수동 셰이킹/교반).

안정한 입자 분산액들을 형성하기 위한 수단들은 당 문헌에 보고되어 있으며, 입체적으로 안정한 분산액, 분산제, 이온성 분산제, 비이온성 분산제 및 고분자 분산제을 사용하는 것을 포함하지만, 여기에 국한되지는 않는다.

고분자 분산제들은 페인트 및 피니시 및 잉크젯 프린팅 잉크와 같은 코팅 시스템에서 색소들을 안정화시키기 위해 널리 사용된다 (Reuter et al., Progress in Organic Coatings 37:161 167 (1999), Schmitz et al, Progress in Organic Coatings 35:191 196 (1999), and Spinelli, Adv. Mater. 10:1215 1218 (1998)). 분산제는 응집 및 응고를 막는 색소 입자, 즉 미립자 유익제 주위에 쉘(shell)을 형성시킨다. 수성 시스템에서, 색소 분산액은 일반적으로 비이온 또는 이온 기술에 의해 안정화된다. 비이온성 기술에서, 색소 입자들은 물속으로 확장하고, 엔트로피 또는 입체적 안정화를 제공하는 수용성 친수성 섹션을 가지는 중합체에 의해 안정화된다. 상기 목적을 위해 사용가능한 대표적인 중합체들로는 폴리비닐 알콜, 셀룰로스 물질 및 에틸렌 옥시드 변성 페놀들이 포함된다. 비이온성 기술이 pH 변화 또는 이온성 오염에 민감하지 않는 반면, 최종 생성물이 물에 민감하다는 점에서 많은 용도에 대하여 주요 단점을 가진다. 따라서, 잉크 용도 등에 사용되는 경우, 색소는 습기에 노출시에 희미하게 지워지는 경향이 있을 것이다.

이온 기술에서, 색소 입자들은 중화 아크릴산, 말레산 또는 비닐 설폰산과 같은 이온함유 단량체의 중합체에 의해 안정화된다. 상기 중합체는 하전된 이중층 기작을 통해 안정화를 제공하여, 이로써 이온 반발은 입자들이 응집하는 것을 막는다. 중화 성분은 도포후 증발하는 경향이 있으므로, 중합체는 감소된 수용성을 갖고, 최종 생성물이 물에 민감하지 않는다. 블록 중합체 및 그래프트 중합체와 같은 중합체 분산제들은 모두 입체이며, 이온성 안정화는 색소 분산을 가장 활발하게 한다 (Spinelli, supra).

랜덤 구조 및 블록 구조들을 모두 갖는 중합체 분산액들은 개시되어 왔다. 예를 들면, Ohta 등의 미국특허 제4,597,794호에는 색소 표면에 부착하는 이온성 친수성 세그먼트 및 방향족 소수성 세그먼트를 갖는 랜덤 중합체 분산제가 개시되어 있다. Ma 등의 미국특허 제5,085,698호에는 수성 잉크젯에 대한 분산제로서 AB 또는 BAB 블록 공중합체를 사용하는 것이 개시되어 있다. A 세그먼트는 색소 입자에 결합하는 소수성 호모폴리머 또는 공중합체이며, B 세그먼트는 수성 매질내에 색소를 분산시키는 친수성 중합체 또는 그의 염이다. Ma 등의 미국특허 제5,519,085호에는 ABC 삼중블록 중합체 분산제가 개시되어 있으며, 여기에서 A 세그먼트는 색소가 물에 분산하는 것을 용이하게 하는 친수성 중합체이며, B 세그먼트는 색소에 결합할 수 있는 중합체이며, C 세그먼트는 분산액을 안정화시키는 친수성 또는 소수성 중합체이다. Rose 등의 GB 2349153에 기술된 바와 같이, 중합체 분산제들의 조합도 또한 사용될 수 있다. 상기 랜덤 및 블록 중합체 분산제들이 분산된 색소에 대하여 양호한 안정성을 제공하는 반면, 보다 고품질의 코팅용도를 위해 더욱 개선시키는 것이 바람직하다. 예를 들면, 색소와의 강한 상호반응을 갖는 분산제들은 분산액의 안정성을 개선시킨다. 게다가, 코팅 기재와 강한 상호반응을 갖는 분산제는 보다 내구적인 코팅을 형성한다. 이는 내구성의 개선이 요구되는 경우인 직물 프린팅에 특히 중요하다.

자기분산 색소는 별도의 분산제없이 안정하게 분산시키는, 화학적으로 부착된 분산성 부여기에 의해 표면이 변형된 색소이다. 수성 운반체 매질내에 분산시키기 위해, 표면 변형은 친수성기 및 이온성 친수성기를 첨가하는 단계를 포함한다. 자기-분산 색소는 (진공 플라즈마와 같은) 물리적 처리 또는 (예를 들면, 오존, 염산 등에 의한 산화와 같은) 화학적 처리에 의해, 색소 표면상에 작용기를 함유하는 분자 또는 작용기를 그래프트시킴으로써 제조될 수 있다. 단일종류 또는 복수종류의 친수성 작용기는 1개의 색소입자에 결합될 수 있다. 자기-분산 색소들은 예를 들면 미국특허 제5,571,311호, 미국특허 제5,609,671호, 미국특허 제5,968,243호, 미국특허 제 5,928,419호, 미국특허 제6,323,257호, 미국특허 제5,554,739호, 미국특허 제5,672,198호, 미국특허 제5,698,016호, 미국특허 제5,718,746호, 미국특허 제 5,749,950호, 미국특허 제5,803,959호, 미국특허 제5,837,045호, 미국특허 제 5,846,307호, 미국특허 제5,895,522호, 미국특허 제5,922,118호, 미국특허 제6,123,759호, 미국특허 제6,221,142호, 미국특허 제6,221,143호, 미국특허 제6,281,267호, 미국특허 제6,329,446호, 미국특허 제6,332,919호, 미국특허 제6,375,317호, 미국특허 제6,287,374호, 미국특허 제6,398,858호, 미국특허 제6,402,825호, 미국특허 제6,468,342호, 미국특허 제6,503,311호, 미국특허 제6,506,245호, 및 미국특허 제6,852,156호에 개시되어 있다. 이러한 참고문헌들의 전문은 이후에 참고문헌으로 통합된다.

제타 포텐셜은 분산액내 인접한 유사하게 하전된 입자들 사이의 반발정도를 의미한다. 높은 제타 포텐셜(음성 또는 양성)을 갖는 콜로이드는 전기적으로 안정화되는 반면, 낮은 제타 포텐셜을 갖는 콜로이드는 응고 또는 응집하는 경향이 있다 ("Zeta Potential of Colloids in Water and Waste Water", ASTM Standard D 4187-82, American Society for Testing and Materials, 1985). 한 실시양태에서, 미립자 유익제의 제타 포텐셜의 절대값은 적어도 25 mV이다. 다른 실시양태에서, 펩티드 시약-미립자 유익제의 제타 포텐셜의 절대값은 적어도 25 mV이다.

친화력 부분의 두번째 부분은 여러 방법으로 유익제에 통합될 수 있다. 예를 들면, 유익제의 물리적 특성들은 친화짝의 두번째 부분을 포함할 수 있다. 친화짝의 두번째 부분은 유익제내에 고유하게 존재하거나, 또는 유익제가 친화짝의 두번째 부분을 포함하도록 변형될 수 있다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 유익제는 하전된 컬러색소 또는 염료일 수 있으며, 전하는 이온성 친화짝의 두번째 부분을 형성한다. 친화짝의 두번째 부분은 친화짝의 첫번째 멤버(예를 들면, 폴리히스티딘 태그)에 대한 친화력을 갖는 적용된 물질 또는 코팅(예를 들면, 금속 킬레이트 수지)이다. 다른 실시양태에서, 친화짝의 두번째 부분은 유익제에 공유결합될 수 있다.

본 발명에서 사용가능한 미립자 유익제의 비제한적인 예로는 자외선 차단제, 항균제, 스파클링 입자, 악취제어제, 컨디셔닝제, 항진균제, 향수, 용해방지제, 아로마요법제, 곤충기피제 등이 포함된다.

자외선 차단제의 비제한적인 예로는 산화아연 및 이산화티탄과 같은 무기 미립자; 비스-벤조트리아졸일 테트라메틸부틸페놀과 같은 유기 미립자(Ciba Specialty Chemicals of Basel제 Bisoctrizole 사용가능, Switzerland)가 포함된다. 미립자 항균제의 비제한적인 예로는 은-계 입자들 및 활성탄소-계 입자들이 포함된다. 미립자 유익제를 함유하는 마이크로스피어의 예로는 적용하는 동안 피막형성내에 유익제를 보유하고, 케라틴-함유 표면상에 침착한후 일정 원하는 시간에 피막형성으로부터 유익제를 해제시키는 피막형성 또는 마이크로피막형성 유익제들이 포함된다. 악취 제어제의 예로는 활성탄소 입자들 및 제올라이트들이 포함된다.

본 발명의 유익제들은 마이크로입자들 또는 나노입자들 또는 이들의 조합과 같은 컬러 색소, 컬러 입자들을 포함하는, 컬러 입자들일 수 있다.

색소, 특히 금속 화합물 또는 반금속 화합물들은 이온성, 비이온성 또는 산화된 형태의 본 발명의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 색소들은 개별적으로 또는 혼합상태로, 또는 혼합된 산화물과 순수한 산화물의 혼합물을 포함한, 별도의 혼합된 산화물 또는 이들의 혼합물의 형태가 될 수 있다. 그 예로는, 산화티탄 (예를 들면 TiO₂), 산화아연 (예를 들면 ZnO), 산화알루미늄 (예를 들면 Al₂O₃), 산화철 (예를 들면 Fe₂O₃), 산화망간 (예를 들면 MnO), 산화규소 (예를 들면 SiO₂), 실리케이트, 산화세륨, 산화지르코늄 (예를 들면 ZrO₂), 황산바륨 (BaSO₄) 또는 이들의 혼합물 등이 있다. 한 예로, Merck제 Hombitec？ L5 (INCI 명칭: 이산화티탄)가 있다.

색소들의 다른 예로는 하기를 포함한다: D&C Red No. 36, D&C Red No. 30, D&C Orange No. 17, Green 3 Lake, Ext. Yellow 7 Lake, Orange 4 Lake, Red 28 Lake, D&C Red Nos. 7, 11, 31 및 34의 칼슘 레이크, D&C Red No. 12의 바륨 레이크, D&C Red No. 13의 스트론튬 레이크, FD&C Yellow No. 5 및 No. 6의 알루미늄 레이크, FD&C No. 40의 알루미늄 레이크, D&C Red Nos. 21, 22, 27, 및 28의 알루미늄 레이크, FD&C Blue No. 1의 알루미늄 레이크, D&C Orange No. 5의 알루미늄 레이크, D&C Yellow No. 10의 알루미늄 레이크; D&C Red No. 33의 지르코늄 레이크, CROMOPHTHAL？ Yellow, SUNFAST？ Magenta, SUNF AST？ Blue, 산화철, 탄산칼슘, 수산화알루미늄, 황산칼슘, 카올린, 페릭 암모늄 페로시아나이드 탄산마그네슘, 카르민, 황산바륨, 마이카, 비스무스 옥시클로라이드, 스테아르산 아연, 망간 바이올렛, 산화크롬, 이산화티탄, 이산화티탄 나노입자들, 산화아연, 산화바륨, 울트라마린 블루, 비스무스 시트레이트, 수산화인회석, 규산지르코늄, 카본블랙 입자들 등.

본 발명의 색소들 또는 입자들은 코팅되거나 비코팅될 수 있으며, 코팅된 입자들은 음이온성, 친수성 또는 소수성일 수 있다. 적당한 음이온성 코팅재로는 예를 들면, 실리카, 알루미노실리케이트, 소듐 C14-16 올레핀 설포네이트, 디소듐 스테아로일 글루타메이트, 소듐 스테아로일 글루타메이트/소듐 트리데세트-6 카르복실레이트 및 소듐 폴리아크릴레이트/수소화 레시틴/수산화알루미늄이 포함된다. 본 발명에 사용되기에 적당한 비코팅 색소들의 예들은 하기 표 2에 개시되어 있다.

[표 2]

음이온성 코팅된 색소들의 예들은 하기 표 3에 개시되어 있다.

[표 3]

친수성 코팅된 색소들의 예들은 하기 표 4에 개시되어 있다.

[표 4]

소수성 코팅된 색소들의 예들은 하기 표 5에 개시되어 있다.

[표 5]

화장품 시스템

본 발명의 화장품 시스템을 사용하는 예시적인 방법은 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나에 펩티드계 성분을 적용시키는 단계를 포함한다. 펩티드계 성분을 헤어, 스킨 또는 손톱에 결합시키기에 충분한 시간후에, 미립자 유익제의 안정한 분산액이 헤어, 스킨 또는 손톱에 결합된 펩티드계 성분에 적용된다. 안정한 분산액은 펩티드계 성분의 친화짝의 첫번째 부분을 유익제의 친화짝의 두번째 부분에 결합시키기에 충분한 시간동안 적용되어야 한다.

일단 유익제 및 펩티드계 성분이 결합되면, 친화짝이 방해될 수 있어서, 펩티드계 성분과 유익제가 결합되지 않는다. 친화짝을 방해할 수 있는 시약들은 화장품 시스템에 사용된 친화짝의 종류에 기초할 것이다. 상기 시약의 전형은 필요에 따라 높거나 낮은 pH 또는 높거나 낮은 이온세기를 갖는 버퍼를 포함하는 수용액이다.

사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 적어도 하나에 유익제를 적용시키는 특정 방법들은 약 10^-5 몰 이하의 K_d 또는 MB₅₀ 값을 갖는, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나에 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인을 갖는 펩티드 성분을 포함하고, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 결합하는 결합 도메인에 대하여 충분한 시간동안 친화짝의 첫번째 부분을 추가로 포함하는 조성물과, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱을 접촉시키는 단계; 및 그후, 약 0.01 마이크론 내지 약 75 마이크론의 평균입자크기 및 친화짝의 두번째 부분을 갖는 미립자 유익제의 안정성 분산액을 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 접촉시키는 단계를 포함하며; 결합 도메인은 분산액의 입자들에 대하여 갖는 것보다, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더 큰 결합 친화력을 갖는다.

다른 방법들은 사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 적어도 하나로부터 친화짝의 두번째 부분과 연합된 유익제를 제거하는 단계를 포함하며, 이 단계는 친화짝을 방해할 수 있는 수용액을 제공하는 단계; 및 친화짝을 방해하기에 충분한 시간동안 사람 헤어, 스킨 또는 손톱을 수용액과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 사람 헤어, 스킨 또는 손톱은 약 10^-5 몰 이하의 K_d 또는 MB₅₀ 값을 갖는, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 적어도 하나에 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인을 갖는 펩티드 성분을 포함하고, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 결합하는 결합 도메인에 대하여 충분한 시간동안 친화짝의 첫번째 부분을 추가로 포함하는 조성물과 접촉되고; 사람 헤어, 스킨 또는 손톱이 약 0.01 마이크론 내지 약 75 마이크론의 평균입자크기 및 친화짝의 두번째 부분을 갖는 미립자 유익제의 안정성 분산액과 이후에 접촉된다.

실시예

본 발명은 하기 실시예들에 추가로 정의된다. 본 발명의 바람직한 실시양태인 본 실시예들은 설명의 방법으로만 제공되는 것으로 이해되어야 한다. 상기 설명과 본 실시예들로부터, 당업자는 본 발명의 필수 특성들을 알아낼 수 있으며, 본 발명의 정신 및 범주에서 벗어나지 않으면서, 다양한 용도 및 조건으로 개조하기 위해 본 발명을 다양하게 변형 및 변화시킬 수 있다.

사용된 약어들의 의미는 하기와 같다: "min"은 분(s)을 의미하고, "h"는 시간(s)을 의미하고, "μL"은 마이크로리터(s)를 의미하고, "mL"은 밀리리터(s)를 의미하고, "L"은 리터(s)를 의미하고, "nm"은 나노미터(s)를 의미하고, "mm"는 밀리미터(s)를 의미하고, "cm"는 센티미터(s)를 의미하고, "μm"는 마이크로미터(s)를 의미하고, "mM"은 밀리몰을 의미하고, "M"은 몰을 의미하고, "mmol"은 밀리몰(s)을 의미하고, "μmole"은 마이크로몰(s)을 의미하고, "g"는 그램(s)을 의미하고, "μg"은 마이크로그램(s)을 의미하고, "mg"는 밀리그램(s)을 의미하고, "g"는 중력상수를 의미하고, "rpm"은 분당 회전수를 의미한다.

일반적인 방법들

본 명세서에서 사용된 스탠다드 재조합 DNA 및 분자 클로닝 기술들은 당 분야에 잘 알려져 있으며, Sambrook, J. and Russell, D., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); and by Silhavy, T. J., Bennan, M. L. and Enquist, L. W., Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory Cold Press Spring Harbor, NY (1984); and by Ausubel, F. M. et. al., Short Protocols in Molecular Biology, 5th Ed. Current Protocols and John Wiley and Sons, Inc., N.Y., 2002에 기술되어 있다.

세균배양의 유지 및 성장에 적당한 재료들 및 방법들은 당 분야에 잘 알려져 있다. 하기 실시예들에 사용되기에 적당한 기술들은, 다르게 특정하지 않는한, Manual of Methods for General Bacteriology, Phillipp Gerhardt, R. G. E. Murray, Ralph N. Costilow, Eugene W. Nester, Willis A. Wood, Noel R. Krieg and G. Briggs Phillips, eds., American Society for Microbiology, Washington, DC, 1994, or by Thomas D. Brock in Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology, Second Edition, Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA, 1989에서 발견될 수 있다. 박테리아 세포들의 성장 및 유지에 사용되는 모든 시약들, 제한효소 및 재료들은, 다르게 특정하지 않는한, Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI), BD Diagnostic Systems (Sparks, MD), Life Technologies (Rockville, MD), 또는 Sigma Chemical Company (St. Louis, MO)제에서 얻어졌다.

실시예 1 : 펩티드계 결합 도메인의 선택을 위한 예시적인 방법들

파지-펩티드의 적당한 라이브러리는 상기 방법들을 사용하여 생성되거나, 또는 라이브러리를 시판 회사로부터 구입한다. 파지-펩티드의 라이브러리가 생성된후, 적당량의 기재와 접촉시킨다. 기재와 접촉시키기 위해, 파지-펩티드의 라이브러리를 적당한 용액내에 용해시킨다. 시험용 기재를 용액중에 현탁시키거나, 또는 플레이트 또는 비드상에 고정시킨다. 용액의 예로는 계면활성제 함유 완충 식염수용액이 있다. 적당한 용액은 0.05~0.5% TWEEN？ 20을 갖는 트리스-완충 식염수 (TBS)일 수 있다. 상기 용액은 기재에 대한 펩티드들의 질량전달속도를 증가시키기 위해 특정 수단들에 의해 추가로 교반될 수 있으며, 그럼으로써, 최대 결합을 얻는데 필요한 시간을 단축시킬 수 있다.

접촉시에, 랜덤하게 생성된 여러 파지-펩티드들은 기재에 결합하여 파지-펩티드-기재 복합체를 형성할 것이다. 비결합 파지-펩티드는 세척에 의해 제거될 수 있다. 모든 비결합 물질이 제거된후, 기재에 대한 다양한 정도의 결합 친화력을 갖는 파지-펩티드들은 다양한 엄격함을 갖는 완충액내 선택된 세척에 의해 분획될 수 있다. 사용되는 완충액의 엄격함을 증가시키면, 파지-펩티드-기재 복합체 중의 기재와 파지-펩티드 사이의 필요한 결합 강도가 증가한다.

펩티드 선택시에 완충용액의 엄격함을 다양하게 하기 위해, 산성 pH (1.5-3.0); 염기성 pH (10-12.5); MgCl₂ (3-5 M) 및 LiCl (5-10 M)와 같은 고염 농도; 물; 에틸렌 글리콜 (25-50%); 디옥산 (5-20%); 티오시아네이트 (1-5 M); 구아니딘 (2-5 M); 우레아 (2-8 M); 및 여러 농도들의 다른 계면활성제, 예를 들면 SDS (소듐 도데실 설페이트), DOC (소듐 데옥시콜레이트), Nonidet P-40, Triton X-100, TWEEN？ 20(여기에서, TWEEN？ 20은 예시적임)을 포함하는, 여러 물질들이 사용될 수 있으며, 여기에 국한되지 않는다. 상기 물질들은 트리스-HCl, 트리스-완충 식염수, 트리스-보레이트, 트리스-아세트산, 트리에틸아민, 포스페이트 완충액 및 글리신-HCl(트리스-완충 식염용액이 예시적임)을 포함하는 완충 용액에서 제조될 수 있다.

기재에 대한 결합 친화력을 증가시킨 파지-펩티드는 염격함을 증가시킴으로써 완충액을 사용한 선택과정을 반복시킴으로써 용리될 수 있다는 것을 알 것이다. 용리된 파지-펩티드들은 당 분야에 알려진 방법들에 의해 확인 및 서열화될 수 있다.

한 실시양태에서, 케라틴-함유 체표면-결합 펩티드들의 생성방법이 사용될 수 있다. 결합식으로 생성된 파지-펩티드들의 라이브러리는 기재(예를 들면, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱)와 접촉하여, 파지 펩티드-기재 복합체들을 형성한다. 파지-펩티드-기재 복합체는 비복합 펩티드 및 비결합 기재로부터 분리되며, 파지-펩티드-기재 복합체로부터의 결합된 파지-펩티드들은 예를 들어 산 처리에 의해 복합체로부터 용리된다. 그후, 용리된 파지-펩티드들은 확인 및 서열화된다. 타겟 기재에 결합하지만, 다른 기재들(예를 들면, 비-케라틴-함유 기재들)에는 결합하지 않는 펩티드 서열들을 확인하기 위해, 공제 팬닝 단계가 부가될 수 있다. 특이적으로, 결합식으로 생성된 파지-펩티드들의 라이브러리는 비-타겟과 첫번째로 접촉되어, 여기에 결합된 파지-펩티드들을 제거한다. 그후, 비-결합 파지-펩티드들은 타겟 기재와 접촉되고, 상기 방법이 진행된다. 선택적으로, 결합식으로 생성된 파지-펩티드들의 라이브러리는 비-타겟 및 타겟과 동시에 접촉될 수 있다. 그후, 파지-펩티드-기재 복합체들이 파지-펩티드-비타겟 복합체로부터 분리되고, 상기 방법이 원하는 파지-기재 복합체들에 대하여 진행된다.

선택적으로, 다른 케라틴-함유 표면(예를 들면 피부)에 대하여보다 한 케라틴-함유 체표면(예를 들면 헤어)에 대하여 더 높은 친화력을 갖는 펩티드들을 분리하기 위한 변형된 파지 디스플레이 선별방법이 사용될 수 있다. 변형된 방법에서, 파지-펩티드-기재 복합체들이 상기와 같이 형성된다. 그후, 상기 복합체들은 용리 완충액에 의해 처리된다. 상기 용리 완충액들 중 어느 것이나 사용가능하다. 일부 실시양태에서, 용리 완충액은 산성 용액이다. 그후, 남은, 내용리성 파지-펩티드-기재 복합체들은 E. coli ER2738과 같은 박테리아 숙주세포에 직접 감염/운반하기 위해 사용된다. 감염된 숙주세포들은 LB(Luria-Bertani) 배지와 같은 적당한 증식배지에서 증식되며, 상기 배양액을 IPTG (이소프로필 β-D-티오갈락토피라노시드) 및 S-Gal™를 갖는 LB 배지와 같은, 적당한 증식배지를 함유하는 아가 상에 스프레드한다. 증식후, DNA 분리 및 서열화를 위해 플라크를 채집하여, 관심의 기재에 대하여 높은 결합 친화력을 갖는 펩티드 서열들을 확인한다. 선택적으로, Janssen 등의 미국 특허출원공보 제2003/0152976호에 기술된 바와 같이, 적당한 프라이머를 사용하여 파지-펩티드-기재 복합체 상에서 PCR을 직접 실시함으로써, 상기 변형된 파지 디스플레이 선별방법으로부터 내용리성 파지-펩티드들을 확인하기 위해 PCR을 사용할 수 있다.

실시예 2: 펩티드 결합 친화력 및 특이성 측정

본 실시예의 목적은 ELISA 분석을 사용하여, MB₅₀ 값으로 측정되는, 헤어 및 색소 표면에 대한 여러 헤어-결합 펩티드들의 친화력 및 특이성을 측정하기 위한 것이었다. 짧고 직쇄형의 펩티드들 각각은 원래 파지 디스플레이를 사용하여 확인되었다. 달리 지시하지 않는한, 실시예 2에 제공된 서열들은 검출목적으로 비오틴화된 C-말단 리신 잔기를 포함한다. 다양한 케라틴-함유 물질들(예를 들면, 헤어, 스킨 및 손톱)에 대한 친화력을 갖는 체표면-결합 펩티드의 예는 상기 표 1에 제공되어 있다.

헤어-결합 펩티드들의 합성

헤어-결합 펩티드들은 스탠다드 고체 파지 합성을 사용하여 합성하고, 검출 목적으로 결합 서열의 C-말단 리신 잔기에서 비오틴화하였다. 시험한 펩티드의 아미노산 서열은 표 6에 제공된다.

[표 6]

헤어 및 적산화철 입자들에 결합하는 비오틴화 펩티드들의 MB₅₀ 측정(Unipure Red from Sensient Technologies, Milwaukee, WI)은 헤어 번들을 사용하여 이루어졌다. 헤어 샘플은 한쪽 끝에서 좁은 테이프를 사용하여 서로 묶여진 약 1cm 길이의 100개의 헤어들로 구성된 번들로 조립되었다. 실온(~22℃)에서 상기 헤어번들을 SUPERBLOCK？ 블로킹 완충액 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL)에 1시간동안 배양한후, TBST (TBS in 0.05% TWEEN？ 20)에 의해 3회 세척하였다. TBST 및 1 mg/mL BSA내 비오틴화 펩티드의 여러 농축물들로 구성된 펩티드 결합 완충액을 헤어 번들에 첨가하고, 실온에서 1시간동안 배양한후 6회 TBST 세척하였다. 그후, 스트렙타비딘-홀스래디쉬 퍼옥시다제(HRP) 콘쥬게이트(Pierce Chemical Co., Rockford, IL)를 각 웰에 첨가하고(웰당 1.0 μg), 실온에서 1시간동안 배양한후, TBST에 의해 6회 세척했다. 모든 헤어번들을 새로운 튜브로 옮기고, 스탠다드 프로토콜에 따라 색 발현 및 흡광도 측정을 수행하였다. GraphPad Prism 4.0 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)을 사용하여, A450 대 펩티드 농도로 결과들을 플로팅하였다. MB₅₀ 값들은 Scatchard 플롯들로부터 계산하였으며, 표 7에 개시되어 있다.

표 7에 개시된 결과들은 헤어결합 펩티드들이 예시된 입자 표면(적산화철 색소입자들)에 대한 것보다 헤어에 대하여 더 양호한 결합 친화력을 가졌다는 것을 입증해준다.

[표 7]

실시예 3: 헤어 케어 펩티드 263(HC263)은 그레이 헤어에 대한 Co-NTA 자성 비드들의 결합을 중재한다.

5mm 길이의 헤어 가닥 약 5g(90% 그레이, 사람)을 2-mL 미량원심분리관에 옮겼다. 대략 1mL의 TBST_0.1 완충액 (25 mM Tris, 150 mM NaCl, pH7.2, with 0.1% TWEEN？-20) 또는 다양한 농도의 HC263 펩티드를 포함하는 같은 완충액을 헤어에 첨가했다.

펩티드 시약의 헤어-결합 도메인 부분의 일반적인 디자인은 짧은 N-말단 다음으로 펩티드 링커에 의해 분리된 적어도 2개의 헤어-결합 펩티드들로 구성되었다. 그후, 헤어-결합 도메인이 펩티드 스페이서(선택적으로 "펩티드 브리지"라고도 함)를 통해, 금속 킬레이트 수지(예를 들면, 코발트-NTA 수지)에 대한 연합 친화력을 갖는 C-말단 폴리히스티딘 영역("his-태그")에 연결되었다. 펩티드계 시약을 조립하는데 사용되는 펩티드들의 서열들은 표 8에 개시되어 있다.

[표 8]

상기 혼합물을 실온(~22℃)에서 1시간동안 Nutator상에서 셰이킹하였다. 헤어를 TBST_0.5 완충액 (25 mM Tris, 150 mM NaCl, pH 7.2, with 0.5% TWEEN？-20)으로 3회 세척했다. 세척후, 헤어를 900 μL Talon 완충액 (50 mM 인산나트륨, pH 8.0, 300 mM 염화나트륨, 0.01% TWEEN？-20)내에 재현탁시켰다. Nutator 상에서 실온에서 5분간 헤어/펩티드 콘쥬게이트들의 서브셋트를 1mL의 0.25% SLES (소듐 라우릴 에테르 설페이트)로 1회 더 세척한후, 1mL TBST_0.1 완충액으로 2회 세척했다. DYNAL？ MPC™ 마그넷 상에서, 약 0.2mg의 TALON™ 비드 (DYNABEADS？ TALON™, Invitrogen, Catalog# 101.01 D)를 TALON™ 완충액으로 2회 세척하고, 100 μL TALON™ 완충액에 각 반응에 첨가했다. 펩티드에 통합된 6개의 히스티딘 잔기들(C-말단 his 태그)에 특이적으로 결합하는 Co-NTA에 의해 마그넷 비드를 코팅하였다. 마그넷 상에 튜브를 두기 전에, 헤어 및 비드들을 조심스럽게 셰이킹하여 10분간 배양하였다.

헤어에 결합하는 비드들은 자석에 한번 적용한 튜브들 쪽에 동시 이동할 것으로 예상되었다. 결합 강도는 육안으로 평가하고, 0(결합이 관찰되지 않거나 거의 없음) ~ 5(최고량의 결합이 관찰됨)의 규모로 등급을 매겼다. 표 9는 0.2 μM 및 0.02 μM의 HC263 (서열번호 196)의 농도에서 최적의 결합을 나타내는, 결과를 요약하고 있다. 0.007 μM에서 결합 감소가 관찰되었다. 0.2 μM 펩티드에서의 결합은 SLES에 의해 헤어를 세척함으로써 면역반응이 없었다.

[표 9]

실시예 4: 그레이 헤어에 대한 Co-NTA 자성 비드의 펩티드-중재 결합

실시예 3에서 관찰된 효과를 얻기 위한 펩티드의 요건들을 결정하기 위해, 추가의 펩티드들을 시험하였다(표 10). 처리된 펩티드들 HC263, HC264, HC204, HC205 및 HC214(각각은 본 발명의 예시적인 실시양태임) 각각은 Co-NTA 코팅된 자성 비드들에 결합시키는 폴리히스티딘 태그들을 가진다. HC352, HC423, 및 HC424는 HC263과 같은 둘 이상의 헤어-결합 도메인들을 가지지만, 폴리히스티딘 태그를 가지지 않으며, 대조군으로서 사용되었다. 랜덤화 헤어 결합 서열을 제외하고는, HC264는 HC263과 동일한 서열 조성을 가진다.

[표 10]

표 10의 시험 펩티드들의 결합 강도를 평가하기 위해, 실시예 3의 헤어 결합 분석을 사용하였다. 그 결과들은 표 11에 요약되어 있다.

[표 11]

실시예 5: 헤어에 대한 자성 비드들의 HC263-중재 결합

펩티드 HC263(서열번호 196)을 여러 표면들: 사람 헤어, 야크 헤어, 울, 목화, SONTARA？ (부직포, 스펀레이스 텍스타일 시트 직물, E.I. duPont de Nemours and Company, Inc., Wilmington, DE), 및 셀룰로스(여과지)에 대한 자성 비드들의 펩티드-중재 결합에 대하여 시험하였다. 약 5mg의 사람 헤어(90% 그레이), 야크 헤어, 울, 목화, SONTARA？ 또는 여과지를 2-mL 미량원심분리관에 첨가했다. 0.2 μM HC263을 함유하는 대략 1mL의 TBST_0.1 완충액 (25 mM 트리스, 150 mM NaCl, pH 7.2, with 0.1% TWEEN？-20)을 첨가했다. 실온(~22℃)에서 30분간 상기 혼합물들을 Nutator (BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ)상에서 셰이킹하였다. 상기 샘플을 TBST_0.5 완충액 (25 mM 트리스, 150 mM NaCl, pH 7.2, with 0.5% TWEEN？-20)으로 3회 세척했다. 세척후, 상기 샘플을 900 μL TALON (Clontech, Mountain View, CA) 완충액 (50 mM 인산나트륨, pH 8.0, 300 mM 염화나트륨, 0.01% TWEEN？-20)내에 재현탁시켰다. 대략 0.2mg의 TALON™ 비드들 (DYNABEADS？ TALON™, Invitrogen, Carlsbad, CA; Catalog#101.01D)을 DYNAL？ MPC™ 자석(Invitrogen)상에서 TALON™ 완충액으로 2회 세척하고, 100-μL TALON™ 완충액으로 각 반응에 첨가하였다.

여러 표면들에 대한 자성 비드들의 결합 강도는 1000배 확대로 찍은 주사전자현미경(SEM) 사진들을 시각화함으로써 평가하였다. SEM 이미지에 기초한 여러 표면들에 대한 비드들의 결합 강도를 등급매기기 위해 상대 채점 시스템을 사용하였다(0=결합이 거의 없거나 없음, 5=강한 결합). 표 12는 펩티드 HC263에 의해 중재된 자성 비드들의 강한 결합이 사람 헤어에 의해서만 일어남을 보여준다.

[표 12]

실시예 6: 비오틴-펩티드 및 스트렙타비딘-폴리스티렌 입자들을 사용한 침착

본 발명의 방법 및 조성물에 따른, 헤어에 대한 비드들의 결합을 설명하기 위해, 비오틴화 펩티드 및 스트렙타비딘-코팅된 비드 시스템을 사용하였다. 순차적인 침착은 하기 방법에 의해 이루어졌다:

본 명세서에 개시된 방법들에 따라 유도된 20 mM의 HCP5 다이머 펩티드 (서열번호 204)를 함유하는 수용액에 사람 헤어 샘플을 넣었다. HCP5 다이머는 짧은 스페이서(HCP5-GGSGPGSGG - HCP5)를 사용하여 함께 결합된 파지 디스플레이 라이브러리로부터 원래 유도된 2개의 HCP5 헤어-결합 펩티드들(서열번호 112)을 포함한다. HCP5 다이머는 비오틴화 (서열번호 205) 버전 및 비-비오틴화 (서열번호 204) 버전(단일 리신 잔기를 비오틴화 버전의 C-말단에 첨가하여 비오틴 결합을 용이하게 함)으로 American Peptide Co., Inc. (Sunnyvale, CA)에서 구입하였다.

비오틴화 또는 비-비오틴화 펩티드에 헤어샘플들을 노출시킴으로써, 헤어 샘플들을 전처리하였다. 길이 3인치의 자연암갈색 헤어(International Hair Importers) 10가닥을 2% SLES에서 30초간 전세척한후, DI수에 의해 광범위하게 세정했다. 그후, 헤어 가닥을 펩티드의 5-20마이크로몰 용액 10mL에 1시간 이하동안 함침시켰다. 10개의 헤어 샘플을 비오틴화 펩티드에 노출시키고, 10개의 헤어샘플들을 비-비오틴화 펩티드에 노출시켰다. pH 7.2에서 트리스-HCl 완충액(이온세기범위 5 mM - 150 mM) 또는 DI수에서 1시간 이하동안 펩티드 용액을 제조하였다. 펩티드 처리단계는 헤어 샘플상에 펩티드를 침착시킬 것으로 기대된다. 펩티드 처리된 헤어 샘플을 펩티드 처리 완충액 용액에 30초간 함침시켜서 세정하여 과량의 펩티드를 제거하였다. 다음으로, 펩티드-처리된 헤어 샘플들을 40nm 형광표시된 스트렙타비딘-코팅된 폴리스티렌 입자들(Invitrogen, Carlsbad, CA)과 함께 배양하여, 비오틴과 스트렙타비딘 사이를 결합시켰다. 입자 분산액들을 0.1% TWEEN을 함유하는 pH 7.2의 트리스 완충된 식염완충액 (이온세기 범위 5 mM - 150 mM) 및 DI수를 포함하는 여러 배지에서 생성하였다. 실온(~22℃)의 암실에서 24시간 이하의 배양기간동안 결합이 일어나도록 했다. 배양기간동안 샘플을 연속해서 역회전시켰다.

배양기간이 끝난후, 헤어에 40nm 형광표시된 스트렙타비딘-코팅된 폴리스티렌 입자들이 결합한 것을 보기 위해, 형광 현미경검사를 사용하였다. 도 1은 관찰된 형광에 의해 입증된 바와 같이, 비오틴화 HCP5 다이머 펩티드가 헤어에 입자들을 결합시킴을 설명해준다.

실시예 7: 비오틴-펩티드 및 스트렙타비딘 산화철을 사용한 침착

헤어를 컬러링하기 위해, 비오틴화 펩티드 및 스트렙타비딘-비드 시스템을 사용하였다. 하기의 방법에 의해 순차적인 침착을 얻었다.

100% 비염색 헤어를 함유하는 약 1인치 길이의 미니어쳐 헤어 트레스를 본 명세서에 개시된 방법에 따라 유래된, 실온에서 1시간동안 20mM 펩티드(DI수 또는 트리스 완충식염수, pH 7.2, 5-150mM 이온세기)를 갖는 수용액에 넣었다. 펩티드 HC260을 E.coli에서 재조합제조하였다. E.coli 제조 숙주를 사용하여 펩티드 시약들을 재조합 제조 및 분리하는 방법은 당 분야에 잘 알려져 있다(예를 들면, 미국특허 제7,285,264호의 실시예 17-20; 이후에 참고문헌으로 통합됨). HCP5 다이머("(HCP5)2")를 형성하기 위해 사용하는 작용 펩티드 유닛의 서열들인 HC260은 표 13에 제공되어 있다. 펩티드 시약(즉, 유전자조작 펩티드)의 구조식은 표 14에 제공되어 있다. HC260은 스트렙타비딘-결합 펩티드 태그(SB33N)를 함유하도록 유전자조작되었다.

[표 13]

[표 14]

헤어를 다른 펩티드들에 노출시켜서 헤어 샘플들을 전처리하였다. 펩티드가 헤어상에 층을 형성하였다. 펩티드 층을 갖는 헤어 샘플들을 SLES 용액으로 세정하여, 과량의 펩티드를 제거하였다. 다음으로, 펩티드-처리된 헤어 샘플들을 스트렙타비딘 태그된 산화철 입자들(Bangs Laboratories, Inc., Fishers, IN; Ademtech, Inc., Pessas, France)과 함께 배양하여, 비오틴과 스트렙타비딘 또는 HC260내 스트렙타비딘-결합 도메인과 스트렙타비딘 사이를 결합시켰다. 입자들은 분산된 형태로 구입되었으며, 특정량의 DI수 또는 Ademtech제 결합 완충액(Coupling Buffer)을 첨가하여 0.025-1wt%로 희석시켰다. 실온(~22℃)의 암실에서 24시간 이하동안 배양하는 중에 결합을 일으켰다. 결합지속 배양기간동안 샘플들은 연속해서 역회전하였다.

표 15는 컬러 스트렙타비딘-코팅된 산화철 비드(500nm)가 비오틴화 펩티드 (HCP5)2를 갖는 헤어 샘플상에 침착된 반면, 컬러 스트렙타비딘-코팅된 산화철 비드(500nm)는 비-비오틴화 펩티드 (HCP5)2를 갖는 헤어 샘플상에 침착하지 않음을 보여준다. 헤어 샘플 #3은 비-비오틴화 (HCP5)2 펩티드에 의해 코팅되었지만, 헤어 샘플 #4는 비오틴화 (HCP5)2 펩티드에 의해 코팅되었다. 산화철 비드 처리된 헤어의 조합 명도(color intensity)는 (0-5)로 정의하였으며, 0은 컬러침착이 없음이고, 5는 가장 진한 색상의 색상이다. 표 15에서, 헤어 샘플 #3은 0의 관련 명도값을 가지고, 헤어 샘플 #4는 4의 관련 명도값을 가진다.

[표 15]

표 16은 순차적 처리방법을 사용하여 여러 펩티드 구조물들 및 스트렙타비딘-코팅된 산화철 비드에 의해 처리된 헤어 샘플들의 시각적 컬러 평가를 보여준다. 스트렙타비딘-결합 파트너(즉, 비오틴 또는 스트렙타비딘-결합 펩티드 모티프)를 함유하는 펩티드 구조물들로 처리된 헤어 샘플들은 컬러 스트렙타비딘-코팅된 산화철비드에 의해 처리된 경우 헤어 착색이 개선되었다.

스트렙타비딘 결합 도메인은 HC260이며, 이는 10^-4M의 스트렙타비딘-결합 K_d 추정값을 갖는 SB33N이었다. 표 16은 처리된 헤어 트레스를 보여준다. 컬러 규모에서, 펩티드들은 다음과 같이 등급매겨졌다: (HCP5)2 = 0, (HCP5) 2-biotin = 4, HC260 = 2.

[표 16]

표 17-19는 스트렙타비딘-코팅된 산화철 입자들을 사용하여 헤어 착색의 시각적 컬러평가를 입증한다. 샘플 #3 및 #4는 각각 500nm 입자들을 갖는 HCP5-다이머 [(HCP5)2]의 비-비오틴화 및 비오틴화 버전에 해당하고, 샘플 #1 및 #2는 각각 200nm 입자들을 갖는 펩티드 (HCP5)2 및 (HCP5)2 - 비오틴에 해당한다. 그리고, 물 세척 및 0.25% SLES 세척 단계들도 보여진다. 상기 설명된 색상 규모를 사용하여, 코팅된 펩티드에 노출시킨후, 물로 세척하기 전에, 초기 데이터에서, 컬러 측정은 하기와 같았다: 샘플 1 = 0, 샘플 2 = 0, 샘플 3 = 0, 및 샘플 4 = 4 (표 17; 도 3A). 물로 세척한 후, 색상 측정은 하기와 같았다: 샘플 1 = 0, 샘플 2 = 0, 샘플 3 = 0, 및 샘플 4 = 3 (표 18; 도 3B). 0.25% SLES (소듐 라우릴 에테르 설페이트)에서의 세척 데이터 : 샘플 1 = 0, 샘플 2 = 0, 샘플 3 = 0, 및 샘플 4 = 2 (표 19; 도 3C).

[표 17]

[표 18]

[표 19]

실시예 7은 사람이 컬러를 인식할때의 입자 크기의 효과를 입증해준다. 사람은 약 400nm 내지 700nm 범위에 있는 컬러를 인식할 수 있다. 자외선, 즉 200-400nm은 사람에게 보이지 않는다. 표 17-19에 입증된 바와 같이, 500nm 비드들로 처리된 (HCP5)2-비오틴-처리된 헤어는 인식가능한 컬러를 나타냈다. 200nm 비드들로 처리된 (HCP5)2-비오틴-처리된 헤어는, 200nm 비드들이 헤어상에 침착되어도 인식가능한 컬러를 나타내지 않았다. 도 4 A 및 4B를 참조한다.

실시예 8: 순차적으로 적용된 펩티드 및 색소들에 의한 헤어 컬러링

자연스러운 백색 헤어(0.5-1 cm 폭, 1 인치 길이)의 미니헤어 트레스를 International Hair Inc., Florence, SC에서 얻었다. 상기 헤어 트레스를 2% 소듐 라우릴 에테르 설페이트 (SLES, Rhodapex ES-2K) 용액으로 세척한후, DI수로 세정하고, 시험하기 전에 기건시켰다. 펩티드 HC634, HC635, HC636, HC637, HC638, HC639, HC640, HC641, HC642, HC643, HC644 및 HC645를 각각 중량을 재고, pH 7.5, 0.7mg/mL 농도의 25mM 트리스 완충액에 용해하였다. 헤어-결합 도메인은 tonB 링커 (서열번호 208)에 의해 결합된 헤어-결합 펩티드 HP2E (서열번호 84) 및 Gray3A (서열번호 77)를 포함한다. 결합 도메인은 색소(즉, 실리카 코팅된 적색 산화철)에 대하여 친화력을 갖는 여러 펩티드들(즉, 친화짝의 첫번째 부분)에 브리지 펩티드(서열번호 209)를 경유해서 결합되었다.

[표 20]

각 헤어 트레스를 로테이터 상에서 1.7-mL 미량원심분리 바이알에서 15분간 0.6 rnL 펩티드 용액과 함께 배양하였다. 각 펩티드 용액에 대하여 헤어 트레스들의 복제를 진행하였다. 그후, 각 헤어 트레스들을 바이알에서 꺼내서 DI수로 세정하고, 종이타월로 블롯팅하고, 색소 적용을 위해, 새로 표시된 바이알에 넣었다. 실리카-코팅된 적산화철 분산액을 이후에 참고문헌으로 통합되는 미국특허 제2,885,366호에 개시된 방법에 따라 제조하였다. 2(IEP2) 및 5(IEP5)의 등전점을 갖는 실리카-코팅된 적산화철 분산액을 제조하였다. 약 0.6mL의 1% 색소 분산액(pH 7.5, 25mM 트리스 완충액)을 각 바이알에 첨가하고, 로테이터 상에서 펩티드 처리된 헤어 트레스들과 함께 10분간 배양하였다. 그후, 헤어 트레스들을 꺼내어, 수돗물로 세정하고, 종이타월로 블롯팅하고, 기건시켰다. 헤어 샘플들의 두 면 상에서 4개의 다른 스폿들에 X-Rite 분광광도계 (X-Rite Incorporated, Grand Rapids, MI)를 사용하여 각 헤어 트레스에 대하여 L*a*b* 스코어를 매기고, 컬러흡수 델타E 계산(ΔE)을 위해 L*a*b* 스코어의 평균을 사용하였으며, 비처리 자연적 백색 헤어를 참고물로 사용하였다. 같은 과정에 의해 헤어 트레스들을 색소 분산액에 직접 적용시킴으로써 펩티드 비함유 대조군들을 시험하였다.

델타 E 값은 하기 수학식 1을 사용하여 계산될 수 있다:

(상기 수학식 1에서, L*=밝기 변수이며, a* 및 b*는 International Commission of Illumination (CIE) (Minolta, Precise Color Communication - Color Control From Feeling to Instrumentation, Minolta Camera Co., 1996)에 의해 정의된 CIELAB 색 공간의 색도좌표이다)

펩티드 중재 헤어 컬러링 결과는 도 2에 요약되어 있다. 펩티드 없이, 두 IEP2 및 IEP5 실리카-코팅된 산화철 색소는 약 5-8델타E(ΔE) 유닛 백그라운드 컬러 흡수를 생성한 반면, 펩티드 중재 색소 침착은 IEP2 색소에 의해 2~43델타E(ΔE) 유닛 컬러 흡수를 생성하고, IEP5 색소에 의해 37-42델타E 유닛 컬러 흡수를 형성했다.

실시예 9: 펩티드 성분으로부터 유익제의 제거

단계 1: 본 발명의 펩티드 성분(예를 들면 (HCP5)2-비오틴)을 함유하는 펩티드 용액과 함께 헤어 트레스들을 약 15분간 배양하고, 물로 세정하고, 블롯팅할 것이다. 그후, 상기 배양된 헤어 트레스들을 본 발명의 미립자 유익제의 안정한 분산액에 의해 약 10분간 처리할 것이다. 예를 들면, 상기 배양된 헤어 트레스들은 스트렙타비딘-코팅된 산화철 비드들을 포함하는 안정한 분산액으로 처리되고, 물로 세정한후 블롯팅할 것이다.

단계 2: 본 발명의 방법에 따라 컬러링된 헤어 트레스들을 처리하여 본 발명의 미립자 유익제를 제거할 수 있다. 예를 들면, 유익제가 착색제이면, 착색제가 제거될 수 있다. 헤어 트레스들을 단계 1에 따라 제조할 수 있다. 헤어 트레스들을 0.25% SLES와 같은 수용액으로 처리하고, 1회 또는 그 이상 세척하여, 비오틴과 스트렙타비딘의 친화력을 방해하고, 헤어 트레스들로부터 스트렙타비딘-코팅된 산화철 비드들을 해제시킬 것이다.

Claims

10^-5몰 이하의 K_d 또는 MB₅₀값을 갖는, 사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 하나 이상에 결합하는 하나 이상의 결합 도메인을 포함하고, 친화짝의 첫번째 부분을 추가로 포함하는 펩티드 성분; 및 약 0.01마이크론 내지 약 75마이크론의 평균입자크기를 갖는 미립자 유익제의 안정성 분산액을 포함하며; 하나 이상의 결합 도메인은 분산액의 입자들에 대하여 갖고 있는 것보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더 큰 결합 친화력을 가지는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
약 0.01마이크론 내지 약 75마이크론의 평균입자크기는 동적 광산란법 및 레이저 회절법으로 구성된 그룹에서 선택되는 방법에 의해 측정되는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
결합 도메인은 다수의 서브-도메인을 포함하는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
유익제와 친화짝의 두번째 부분 사이의 조합은 비공유인, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
결합 도메인은 울, 캐시미어 또는 야크 털보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더욱 우선적으로 결합하는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
결합 도메인은 목화 또는 변형된 셀룰로스 섬유보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더욱 우선적으로 결합하는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
결합 도메인은 금속, 세라믹, 자기, 유리, 실크, 목재, 폴리에스테르 또는 폴리비닐클로라이드보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더욱 우선적으로 결합하는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
미립자는 나노입자인, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
친화짝은 이온결합계, 수소결합계, 소수성 결합계, 킬레이트화계, 생물학적 친화계이거나, 또는 친화짝은 이들의 조합에 기초하는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
친화짝은 아비딘에 대한 비오틴, 스트렙타비딘에 대한 비오틴, 스트렙타비딘에 대한 스트렙타비딘 태그, 말토스에 대한 말토스 결합 단백질, 아밀라제에 대한 말토스 결합 단백질, 금속에 대한 폴리히스티딘 태그, 글루타티온에 대한 글루타티온 S-트랜스퍼라제, 항체에 대한 에피토프 태그의 친화력 또는 이들의 조합에 기초하는, 화장품 시스템.

제10항에 있어서,
금속은 2가 금속인, 화장품 시스템.

제11항에 있어서,
금속은 코발트, 구리, 니켈, 아연 또는 이들의 조합인, 화장품 시스템.

제10항에 있어서,
에피토프 태그는 HA-태그, FLAG-태그, E-태그, S-태그, 또는 myc-태그인, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
유익제는 자외선 차단제, 컨디셔닝제, 캡슐화 향수, 항균제, 비듬방지제, 항진균제, 악취제어제, 캡슐화 생리활성제, 제모제, 항여드름제 또는 착색제인, 화장품 시스템.

제14항에 있어서,
착색제는 착색 색소, 착색 입자 또는 이들의 조합인, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
결합 도메인은 분산액의 입자들에 대하여 갖는 것보다 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 2배 더 큰 결합 친화력을 갖는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
안정성 분산액은 전하 안정화되어 있는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
미립자 유익성분의 제타 포텐셜의 절대값은 25 mV 이상인, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
안정성 분산액은 입체구조적으로 안정화되어 있는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
안정성 분산액은 분산제를 포함하는, 화장품 시스템.

제20항에 있어서,
분산제는 이온성 분산제 또는 비이온성 분산제인, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
제1 결합 도메인은 바이오패닝을 사용하여 확인되는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
제1 결합 도메인은 파지 디스플레이, 박테리아 디스플레이, 효모 디스플레이, 리보솜 디스플레이, mRNA 디스플레이 또는 이들의 조합을 사용하여 확인되는, 화장품 시스템.

제1항에 있어서,
결합 도메인은 사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱에 대하여, 약 10^-5 몰 내지 약 10^-10 몰의 K_d 또는 MB₅₀ 값으로 측정되는 결합 친화력을 갖는, 화장품 시스템.

사람 헤어, 사람 스킨 또는 사람 손톱 중 하나 이상에 유익제를 적용하는 방법으로서,
사람 헤어, 스킨 또는 손톱 중 하나 이상에 10^-5 몰 이하의 K_d 또는 MB₅₀ 값으로 결합하며, 친화성 짝의 첫번째 부분을 추가로 포함하는 하나 이상의 결합 도메인을 갖는 펩티드 성분을 포함하는 조성물을, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 결합 도메인이 결합하기에 충분한 시간동안 사람 헤어, 스킨 또는 손톱과 접촉시키는 단계; 및
그후, 약 0.01 마이크론 내지 약 75 마이크론의 평균입자크기 및 친화성 짝의 두번째 부분을 갖는 미립자 유익제의 안정성 분산액을 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 적용하는 단계를 포함하며;
하나 이상의 결합 도메인은 분산액의 입자들에 대하여 갖는 것보다, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱에 대하여 더 큰 결합 친화력을 갖는, 방법.

제25항에 있어서,
사람 헤어, 스킨 또는 손톱을 안정성 미립자 분산액과 접촉시키기 전에, 사람 헤어, 스킨 또는 손톱을 수성 용액과 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.