KR20080036588A - 지방 조직 유래 간질 줄기세포의 누공 치료에서의 용도 - Google Patents

지방 조직 유래 간질 줄기세포의 누공 치료에서의 용도 Download PDF

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KR20080036588A
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마리아 게마 페르난데스 미구엘
마뉴엘 안젤 곤잘레스 드 라 페나
로사 아나 가르시아 카스트로
마리아노 가르시아 아란스
다미안 가르시아 올모
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셀레릭스, 에스.엘.
유니버시다드 오토노마 데 마드리드
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Abstract

누공 치료를 위한 지방 조직 유래 간질 줄기세포를 이용한 신규 방법 및 조성물들이 여기 제공된다.

Description

지방 조직 유래 간질 줄기세포의 누공 치료에서의 용도{USE OF ADIPOSE TISSUE-DERIVED STROMAL STEM CELLSS IN TREATING FISTULA}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2005년 2월 25일 출원된 미국 특허출원 제 11/065,461 호의 부분 계속 출원 및 2005년 2월 14일 출원된 미국 특허출원 제 11/056,241호의 부분 계속 출원으로, 그 출원들의 내용은 그 전체로서 여기에 특이적으로 참조로서 포함된다.
일반적으로, 누공 (루)(fistula)은, 정상적으로는 연결되지 않은 기관들 또는 혈관들 사이의 비정상적인 연결 또는 통로이다. 누공들은 신체의 여러 부분에서 생길 수 있다. 예로서, 누공이 발생하는 신체 영역에 따라 명명되는, 누공들의 유형은 다음을 포함한다: 항문직장 (anorectal)루 또는 치루 (fistula-in-ano) 또는 분변 (fecal)루 (직장 또는 기타 항문직장 영역 및 피부 표면 사이), 동정맥루 또는 A-V루 (동맥 및 정맥 사이), 담도루 (담도 사이에서 피부 표면까지, 종종 담낭 수술에 의해 초래됨), 자궁경부 (cervical)루 (자궁경부에서의 비정상적 개구), 두개골동 (craniosinus)루 (두개골 내 공간과 부비동 사이), 창자사이 (enteroenteral)루 (장의 두 부분 사이), 장피부 (enterocutaneous)루 (장과 피부 표면 사이, 즉 십이지장 또는 공장 (jejunum) 또는 회장 (ileum)으로부터), 창자질 (enterovaginal)루 (장과 질 사이), 위 (gastric)루 (위에서 피부 표면까지 사이), 자궁복막 (metroperioneal)루 (자궁과 복막강 사이), 외림프 (perilymph)루 (중이 (middle ears) 및 내이 (inner ears) 간의 막들 사이에서 찢어진 틈), 폐동정맥루 (폐의 동맥과 정맥 사이로, 혈액의 션팅 (shunting)을 초래함), 직장질루 (직장과 질 사이), 제대 (umbilical)루 (배꼽과 장 사이), 기관지식도루 (기도와 식도 사이) 및 방광질루 (방광과 질 사이). 누공들의 원인은 외상 (trauma), 의학적 처리로 인한 합병증 및 질병을 포함한다.
누공의 치료는 그 누공의 원인 및 정도에 따라 다양할 수 있으나, 일반적으로 외과적 시술을 포함한다. 각종 외과적 절차들이 흔히 사용되며, 가장 흔하게는 누공제거술 (fistulotomy), 세톤 (seton)의 (배출을 위해 개구시켜 놓기 위한 누공의 길을 통과하는 코드) 배치, 또는 내직장 (endorectal) 플랩 (flap) 절차 (여기에서 대변 또는 기타 물질이 그 경로를 재감염시키는 것으로부터 보호하기 위하여 건강한 조직을 누공의 내부면으로 끌어당겨진다)가 있다. 항문직장루에 대한 수술은, 부작용이 없지는 않으며, 이는 재발, 재감염 및 실금 (incontinence)을 포함한다.
크론병 (Crohn's disease) 및 궤양성 대장염과 같은 염증성 장 질환들은 항문직장루, 창자사이루 및 장피부루의 주요한 원인이다. 크론병에서 누공의 알려진 발병률은 17% 내지 50% 의 범위이다. 크론병을 가진 환자들에서 누공의 관리는 매우 도전적인 문제를 계속하여 제시하며, 이는 이러한 많은 누공들이 이용가능한 치료에 반응하지 않기 때문이다. 이런 누공들 및 그들의 재발은 그 병에 걸린 환자들의 삶의 질을 현저히 저하시키는 매우 괴로운 합병증이다. 의약 치료 (예로서, Infliximab®을 이용한 치료) 및 전문 수술 관리에서의 최근의 향상으로 복잡한 수술에 대한 필요가 감소되어 왔다. 그러나, 많은 환자들이 치유되지 않는다. 누공 치료의 실패는 아마도, 크론병에 걸린 조직들의 부최적(suboptimal) 성질에 기인한다. 실제로, 크론성 누공은 일부의 가능한 최악의 상태들 하에서의 상처 치료를 위한 모델 시스템을 제공한다.
누공의 또다른 주요 원인은, 예로서 강간 또는 출산 동안 지속된 상처에 의한, 질 및 방광 및/또는 직장의 조직에 대한 외상으로, 이는 직장질루 및 방광질루를 유발한다. 개발도상국에서 매년 약 100,000 명의 여성들이 폐쇄 분만 (obstructed labor) 동안 이러한 누공(산과적 누공이라고도 알려짐)을 견딘다. 폐쇄 분만 동안, 산모의 골반에 대한 아기의 머리의 압력으로 그 지역의 민감한 조직들에의 혈액 공급이 차단된다. 죽은 조직은 탈락되고, 그 여성은 방광질루를, 때때로 직장질루를 갖게 된다. 이러한 구멍은 소변 및/또는 분변의 영구적인 실금 (incontinence)을 초래한다. 유엔인구기금 (UNFPA)은 산과적 누공으로 고통받는 세계 인구가 이백만이 넘는 것으로 추산하고 있다. 이러한 계산은 실제보다 현저히 낮은 것일 수 있다. 일차 수술적 복구의 성공률은 88 내지 93 %의 범위이나, 연속된 시도에 따라 감소된다. 따라서, 현저한 비율(%)의 여성들이 수술로 복구될 수 없는 산과적 누공을 갖는다.
누공에 대한 신규 치료들이 요구된다.
발명의 개요
다른 것들 중, 신규 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들이 여기 제공된다. 여기 기재된 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 독특한 표현형을 가지며, 이전에 설명된 지방 조직 유래 간질 줄기세포 조성물들보다 더 큰 표현형 동종성을 나타내어, 이전에 설명된 조성물들보다 누공 및 상처의 치료 용도에 보다 적합하게 된다. 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 예로서 봉합사 또는 접착제와 같은 약학 또는 의학 도구들로서 제공되기 위해 용액 또는 기타 물질들과 함께 제형화될 수 있다. 또한, 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 이용한 누공 및 상처의 신규 치료방법 및 그의 실시를 위한 키트가 제공된다.
본 발명의 이들 구현예들, 기타 구현예들 및 그들의 특색 및 특징들은 하기 설명, 도면 및 청구의 범위로부터 명백할 것이다.
도 1은 실시예 1의 방법에 의해 분리된 세포들의, 면역형광 염색에 의한 특징화의 결과를 나타낸다. 면역양성 세포들의 빈도를 다음과 같이 나타내었다: -, 5% 미만; +/-, 6-15%; +, 16-50%; ++, 51-85%; 및 +++, 86-100%. P, 패시지 (passage) 번호.
도 2는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 간접적인 면역형광 특징화를 나타낸다. 환자 #001 로부터의 세포들은 6 패시지된 세포들로, 이어서 6번을 이식하였다. 푸른색은 DAPI-염색된 핵을 나타낸다. (A) CD90; (B) c-Kit; 및 (C) 바이멘틴 (vimentin).
도 3은 본 발명의 특정 방법 및 조성물을 사용하여 수득된 임상 결과들을 요 약한 것이다. F, 여성; M, 남성; NI, 이식 없음; NA, 분석되지 않음.
도 4는 FBS의 상이한 농도 (나타낸 것과 같이, 0.5, 2.5 및 10%)에서 리포아스피레이트 유래 세포들의 생장 곡선을 나타낸다. 인간 활막 섬유모세포 (synovial fibroblasts)를 5% 또는 10% FBS 중 하나의 존재 하에 배양하였다. 세포 수±표준편차 (SD)를 595nm 흡광도에 대하여 나타내었다. 데이타는 삼중의 웰들을 사용하여 대표 실험으로부터 얻었다.
도 5는 세포들을 봉합된 내부 개구에 가깝게 주입한 후, 직장 점막에서의 물집을 나타낸다.
도 6은 세포들의 주입 전 (A) 및 8 주 후 (B)의 누공의 사진을 보여준다.
도 7A는 패시지(passage) 6에서, 본 연구에 관련된 환자의 지방흡입 샘플로부터 분리된 세포들로부터 수득된 표면 마커들 (CD3, CD9, CD10, CD11b, CD13, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD28, CD29, CD31, CD34, CD36, CD38, CD44, CD45, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e 및 CD49f)의 프로파일에 대응하는 형광 면역세포분석의 막대그래프를 나타낸다.
도 7B는 패시지 6에서, 본 연구에 관련된 환자의 지방흡입 샘플로부터 분리된 세포들로부터 수득된 표면 마커들 (CD50, CD51, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD90, CD95, CD102, CD104, CD105, CD106, CD133, CD166, 글리코포리나 (glicoforina), β2 마이크로글로불린, HLA I, HLA II 및 NGFR)의 프로파일에 대응하는 형광 면역세포분석의 막대 그래프를 나타낸다.
발명의 상세한 설명
1. 정의:
여기 사용된 것과 같은, 하기 용어들 및 구들은 하기에 설명된 의미들을 갖는다. 달리 정의되지 않는 한, 여기 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
관사 ("a" 및 "an")는 그 관사의 문법적 대상의 하나 또는 하나 이상 (즉, 적어도 하나)을 의미한다. 예로서, "한 성분"은 하나의 성분 또는 하나 이상의 성분을 의미한다.
"지방 조직"이라 함은 임의의 지방 조직을 의미한다. 지방 조직은, 피하, 망막/내장, 유방, 생식선, 또는 기타 지방 조직 자리로부터 유래된 갈색 또는 백색의 조직일 수 있다. 바람직하게는, 상기 지방 조직은 백색 피하 지방 조직이다. 이러한 세포들은 일차 세포 배양 또는 불사화된 세포주를 포함할 수 있다. 지방 조직은 지방 조직을 갖는 임의의 유기체로부터의 것일 수 있다. 바람직하게는, 상기 지방 조직은 포유동물의 것이며, 가장 바람직하게는 지방 조직은 인간의 것이다. 지방 조직의 간편한 공급원은 지방흡입 수술로부터의 것이지만, 지방 조직의 공급원 또는 지방 조직의 분리 방법이 본 발명에서 중요한 것은 아니다. 간질 세포들이 어떤 대상 내로의 자가 이식이 바람직한 경우, 상기 지방 조직은 그 대상으로부터 분리될 것이다.
"지방 조직 유래 간질 줄기세포"는 지방 세포를 근원으로 하는 중배엽 줄기 세포들을 의미한다.
"접착제"라는 용어는 표면들을 함께 연합 또는 결합하는 임의의 물질, 예로서 글루(glue)를 의미한다.
"세포 조성물"이라는 용어는 세포의 제제를 의미하며, 상기 제제는 세포에 추가하여, 세포 배양 배지, 예로서 단백질, 아미노산, 핵산, 뉴클레오티드, 조효소, 항산화제, 금속 등의, 비세포성 성분들을 포함할 수 있다. 또한, 상기 세포 조성물은 세포 성분의 성장 또는 생육성에 영향을 미치지는 않지만, 세포들을 특정 형태, 예로서 캡슐화 또는 약학 제제를 위한 중합성 기질로서 제공하기 위해 사용되는 성분들을 포함할 수 있다.
"배양" 이라는 용어는 세포, 유기체, 다세포체, 또는 조직의, 배지 중 임의의 성장을 의미한다. "배양하기"라는 표현은 그러한 성장을 달성하는 임의의 방법을 의미하며, 다단계를 포함할 수 있다. "추가로 더 배양하기" 라는 표현은 세포, 유기체, 다세포체, 또는 조직을 성장의 어떤 단계로 배양하고, 그 후 다른 배양 방법을 사용하여 상기 세포, 유기체, 다세포체 또는 조직을 성장의 또다른 단계에 이르게 하는 것을 의미한다. "세포 배양"은 시험관 내에서 세포들의 성장을 의미한다. 이러한 배양에서, 세포들은 증식하지만, 이들은 그 자체로 조직 내로 유기화되지는 않는다. "조직 배양"은 그의 구조 및 기능을 보존하기 위한, 조직, 예로서 초생의 (primordial) 기관 또는 성인 기관의 시험관 내 외식체들의 유지 또는 성장을 의미한다. "단층 배양"은 적절한 배지에서 세포들이 주로 서로에게 그리고 기질에 부착되어진 채로 증식되는 배양을 의미한다. 또한, "현탁 배양"은 세포들이 적절한 배지에서 현탁된 채로 증식되는 배양을 의미한다. 유사하게, "연속 유동 배양"은 세포 성장, 예로서 생육성을 유지하기 위하여 신선한 배지의 연속적인 흐름 중에서 세포들 또는 외식체들을 배양하는 것을 의미한다. "컨디셔닝된 (conditioned) 배지"는, 배양된 세포들과 일정 시간 접촉시켜 그 배지가 그 세포들에 의해 생성되고, 배양물 내로 분비된 특정 파라크린 (paracrine) 및/또는 오토크린 (autocrine) 인자들을 포함하도록 변경된 후 얻어지는, 예로서 배양된 세포들/조직이 없는, 상등액을 의미한다. "컨플루언트 (confluent) 배양"은 모든 세포들이 접촉 상태에 있어서 배양기의 전체 표면이 덮힌 세포 배양을 의미하며, 이는 세포들이 그들의 최대 밀도에 도달하였음을 나타내는 것이지만, 컨플루언스 (confluence)가 분열의 중단 또는 개체군의 크기가 증가하지 않을 것임을 반드시 의미하는 것은 아니다.
"배양 배지" 또는 "배지"는, 살아있는 세포들의 배양에 사용되는 임의의 물질 또는 제제를 일반적으로 의미하며, 본 기술 분야에서 그렇게 인식되어지고 있다. 세포 배양과 관련하여 사용된 것과 같은 "배지"라는 용어는, 세포 주변을 둘러싼 환경의 성분들을 포함한다. 배지는 고체, 액체, 기체 또는 상 및 물질들의 혼합일 수 있다. 배지는 액체 성장 배지 뿐 아니라 세포 성장을 유지시키지 않는 액체 배지도 포함한다. 배지는 또한, 한천, 아가로스, 젤라틴 및 콜라겐 기질들과 같은 젤라틴성 배지를 포함한다. 예시적인 기체 배지는 페트리 접시 또는 기타 고체 또는 반고체 지지체 상에서 성장하는 세포들이 노출되어지는 기상을 포함한다. "배지" 라는 표현은, 비록 세포들과 접촉되지는 않지만, 세포 배양에의 용도가 의도된 물질도 의미한다. 즉, 세균 배양을 위해 제조된 영양이 풍부한 액체도 배지 이다. 유사하게, 물 또는 기타 액체와 혼합시 세포 배양에 적합하게 되는 분말 혼합물은 "분말화 배지"로 명명될 수 있다. "규정(defined) 배지"는 화학적으로 규정된 (대개 정제된) 성분들로 만들어진 배지를 의미한다. "규정 배지"는 효모 추출물 및 소 배양액과 같은 잘 특징화되지 않는 생물학적 추출물들은 함유하지 않는다. "리치(rich) 배지"는 특정 종들의 대부분 또는 모든 생육가능한 형태들의 성장을 지지하도록 고안된 배지를 포함한다. 리치 배지는 종종 복잡한 생물학적 추출물들을 포함한다. "고밀도 배양의 성장에 적합한 배지"는, 기타 조건들 (예컨대 온도 및 산소 전달 속도)이 그러한 성장을 허용하는 경우, 세포 배양이 3 이상의 OD600 에 도달하도록 하는 임의의 배지이다. "기초(basal) 배지"라는 용어는 임의의 특별한 영양 보충제들을 요구하지 않는 많은 유형의 미생물들의 성장을 촉진하는 배지를 의미한다. 대부분의 기초 배지는 일반적으로 3 개의 기본 화학군들을 포함한다: 아미노산, 탄수화물, 무기염 및 비타민. 기초 배지는 일반적으로 보다 복잡한 배지를 위한 기본으로서 제공되며, 여기에 보충물들, 예컨대 혈청, 완충제, 성장 인자, 지질 등이 첨가된다. 기초 배지의 예들은, 이에 제한되지는 않지만, 이글스 기초 배지 (Eagles Basal Medium), 최소 필수 배지 (Minimum Essential Medium), 둘베코 변경 이글 배지 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), 배지 (Medium) 199, 영양 혼합물 햄의 F-10 (Nutrient Mixtures Ham's F-10) 및 햄 F-12 (Ham's F-12), 맥코이 5A (Mc Coy's 5A), 둘베코 MEM/F-I 2, RPMI 1640, 및 이스코브 변경 둘베코 배지 (Iscove's Modified Dulbecco's Medium) (IMDM)을 포함한다.
"포함한다" 및 "포함하는" 이라는 표현들은 총괄적인, 열린 의미로 사용되 며, 추가의 성분들이 포함될 수 있음을 의미한다.
"분화"라는 표현은 보다 특수화되고, 추가의 분열 또는 분화가 불가능한 최종적으로 분화된 세포들이 되는 것에 보다 가까운 세포들과 연합하는 것으로 알려진 마커들을 발현하는 세포들의 형성을 의미한다. 예로서, 췌장액과 관련하여, 분화는, 증가된 양의 인슐린을 제조하는 증가된 비율의 베타-상피 세포들을 함유하는 섬-유사 (islet-like) 세포 덩어리들의 생산에서 나타날 수 있다. "추가의" 또는 "보다 많은 (greater)" 분화라는 표현은 보다 특정되고, 그들이 배양되어진 세포들보다 추가의 분열 또는 분화를 할 수 없는 최종적으로 분화된 세포들이 되는 것에 보다 가까운 세포들을 의미한다. "최종 분화"라는 표현은 추가의 분열 또는 분화가 불가능한 최종적으로 분화되어진 세포들을 의미한다.
"누공 (루)" 이라는 용어는, 일반적으로 두 개의 기관들 사이에 있거나, 또는 내부 기관으로부터 신체의 표면으로 이르는, 임의의 비정상적인 통로 또는 교통 또는 연결을 의미한다. 누공의 예들은, 이에 제한되지는 않지만, 항문직장루 또는 치루 또는 분변루, 동정맥루 또는 A-V루, 담도루, 자궁경부루, 두개골동루, 창자사이루, 장피부루, 창자질루, 위루, 자궁복막루, 외림프루, 폐동정맥루, 직장질루, 제대루, 기관지식도루 및 방광질루를 포함한다.
"포함하는" 이라는 표현은, 여기에서 "이에 제한되지는 않지만 포함하는"을 의미하는 것으로 사용된다. "포함하는" 및 "이에 제한되지는 않지만 포함하는" 은 상호교환가능하게 사용된다.
"마커"는 그의 존재, 농도, 활성도, 또는 인산화 자리가 검출될 수 있고, 세 포의 표현형을 동정하는데 사용되는 생물학적 분자를 의미한다.
"패치 (patch)"는 상처 또는 기타 아픈 곳을 덮거나 또는 보호하는데 적용되는 드레싱 (dressing) 또는 덮개이다.
당해 방법에 의해 치료되는 "환자", "대상" 또는 "숙주"는 인간 또는 인간이 아닌 동물 중 하나를 의미할 수 있다.
"약학적으로 허용가능한" 이라는 표현은, 건전한 의약 판단의 범주 내에서, 인간 및 동물들의 조직과, 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응, 또는 기타 문제 또는 합병증 없이, 적당한 장점/위험율이 균형을 이룬, 접촉 용도에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태들을 의미하는데 사용된다.
여기 사용된 것과 같은 "약학적으로 허용가능한 담체"라는 표현은, 대상 화합물을 신체의 한 기관, 또는 부분으로부터 신체의 또다른 기관 또는 부분으로 전달 또는 이송하는데 관련된, 약학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제 또는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 각 담체는 제형의 기타 성분들과 상용가능하고, 환자에게 유해하지 않은 의미에서 "허용가능"하여야 한다. "표현형"이라는 용어는 세포들의 관찰가능한 특징들, 예컨대 크기, 형태학, 단백질 발현 등을 의미한다.
"전구 (progenitor) 세포"라는 용어는 그 자신보다 더욱 분화된 자손을 생성하는 능력을 갖는 세포를 의미한다. 예로서, 상기 용어는, 증식이 가능하고, 다수의 모세포들을 생성하는 능력을 가져 그 결과 분화된 또는 분화가능한 딸 세포들을 생기게 할 수 있는, 보다 많은 전구 세포들을 생성하는 것이 가능한, 최종 분화까 지는 미치지 않는 정도로 분화된 세포 또는 분화되지 않은 세포를 의미할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 전구 세포라는 용어는 그의 후손 (자손)이, 배아 세포 및 조직의 점진적인 다양화에서 일어나는 것과 같이, 분화에 의해, 예로서 완전히 개별적인 특징들을 취득함에 의해, 종종 상이한 방향으로 분화하는 일반화된 모세포를 의미한다. 세포 분화는 많은 세포 분열을 통해 전형적으로 일어나는 복잡한 과정이다. 분화된 세포는 그 자신이 다능 세포 등으로부터 유래된 다능 세포로부터 유래할 수 있다. 이들 다능 세포들 각각은 줄기 세포들로 고려될 수 있는 한편, 일어날 수 있는 각 세포 유형들의 범위는 현저히 다를 수 있다. 일부 분화된 세포들은 보다 큰 발생능을 갖는 세포를 일으킬 수 있는 능력도 갖는다. 이러한 능력은 천연적일 수 있거나 또는 각종 인자들을 이용한 처리시 인공적으로 유도될 수 있다. 이러한 정의에 의해, 줄기 세포들은 전구세포일 수 있으며, 또한 최종적으로 분화된 세포들에 보다 직접적인 전구체들일 수 있다.
"증식"은 세포 수에서의 증가를 의미한다. "증식하는" 및 "증식"은 유사분열하는 세포들을 의미한다.
여기 사용된 것과 같은, "용액"이라는 표현은, 본 발명의 세포들이 그 안에서 살아있는 채로 유지되는, 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
총 세포 개체군을 구성하는 지방 조직 유래 줄기 세포 개체군들과 관련하여, "실질적으로 순수한" 이라는 표현은, 총 세포 개체군을 구성하는 지방 조직 유래 줄기 세포에 대하여 적어도 약 75%, 바람직하게는 적어도 약 85%, 보다 바람직하게는 적어도 약 90%, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 약 95% 순수한, 지방 조직 유 래 줄기 세포들의 개체군을 의미한다. 바꿔 말하면, "실질적으로 순수한"이라는 표현은, 이후의 배양 및 증폭 전에, 원래의 증폭되지 않고 분리된 개체군 중에서 계통 구속된 (lineage committed) 세포들을, 약 20% 미만, 보다 바람직하게는 약 10% 미만, 가장 바람직하게는 약 5% 미만으로 함유하는 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 개체군을 의미한다.
여기 사용된 것과 같은 "지지체"는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 성장을 위한 기초 또는 기질로서의 역할을 할 수 있는 임의의 장치 또는 물질을 의미한다.
"봉합" 이라는 표현은, 상처를 함께 꿰매는데 사용될 수 있는 실 또는 섬유 또는 기타 조이는 (fastening) 물질을 의미한다.
여기 사용된 "치료"라는 표현은, 누공 또는 상처의 복구 및 누공 또는 상처의 악화 또는 재발의 방지를 의미한다.
"치료제" 또는 "치료의"는, 숙주에 원하는 생물학적 효과를 가질 수 있는 약제(agent)를 의미한다. 화학치료제 및 유전자독성제들은, 각각 생물학적인 것에 반하여, 그 기원이 화학적이거나, 또는 특정 메카니즘의 작용에 의해 치료 효과를 일으키는 것으로 일반적으로 알려진 치료제들의 예이다. 생물학적 기원의 치료제들의 예들은 성장 인자, 호르몬 및 시토카인을 포함한다. 각종 치료제들이 본 기술 분야에서 알려져 있으며, 그 효과에 의해 확인될 수 있다. 특정 치료제들은 세포 증식 및 분화를 조절할 수 있다. 예들은 화학치료 뉴클레오티드, 약물, 호르몬, 비-특이적(비-항체) 단백질, 올리고뉴클레오티드 (예로서, 타겟 핵산 서열에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 (예로서, mRNA 서열)), 펩티드, 및 펩티드모방체 (peptidomemetics)을 포함한다.
"상처"는, 물리적 수단에 의해 유발된, 조직의 정상적인 연속상태를 붕괴시키는, 조직에의 상해 또는 손상이다.
2. 신규 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들
한 구현예에서, 본 발명은 어떤 특징들, 예컨대 특정 표현형을 갖는 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물에 관한 것이다. 예로서, 본 발명의 세포 조성물 중의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들은 세포 표면 마커 발현, 크기, 글루코오스 소비, 락테이트 생산 및 세포 산출/생육성에 의해 특징될 수 있다. 본 발명의 또다른 측면은, 세포 성분으로서, 특정 표현형 또는 그의 자손을 갖는 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 실질적으로 순수한 제제를 포함하는 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들에 관한 것이다. 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들은 전구 세포들의 실질적으로 순수한 개체군들 뿐만 아니라, 세포 배양 성분들, 예로서 아미노산, 금속, 조효소 인자 및 예로서 그의 일부가 본 발명의 세포의 이후 분화에 의해 발생될 수 있는 기타 간질 세포들의 작은 개체군들을 포함하는 배양 매질을 포함한다. 또한, 기타 비세포 성분들은, 세포 성분을, 특정 환경, 예로서 이식, 예로서 연속 배양 하에서의, 지지에 적합하거나 또는 생체 적합 물질(biomaterial) 또는 약학 조성물로서의 용도에 적합하게 하는 것들을 포함할 수 있다.
특정 구현예들에서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들은 섹션 4 및 실시예에 기재된 배양 방법들을 통하여 제조된다.
한 구현예에서, 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물이 제공되며, 여기에서 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99% 의 줄기세포들이 CD9, CD10, CD13. CD29, CD44, CD49A. CD51, CD54, CD55, CD58, CD59, CD90 및/또는 CD105 마커들을 발현한다. 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들의 특정 구현예들에서, 약 15%, 약 10%, 약 5%, 그리고 바람직하게는 약 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 줄기 세포들이 CD34 CD11b, CD14, CD15, CD16, CD31, CD34, CD45, CD49f, CD102, CD104, CD106 및/또는 CD133 마커들을 발현한다.
또다른 구현예에서, 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물이 제공되며, 여기에서 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99%의 줄기 세포들이 c-Kit, 바이멘틴 및/또는 CD90 마커들을 발현한다. 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들의 특정 구현예들에서, 약 15%, 약 10%, 약 5% 그리고 바람직하게는 약 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 줄기 세포들이 CD34, 인자 VIII, 알파-액틴, 데스민 (desmin), S-100 및/또는 케라틴 마커들을 발현한다. 또한, c-Kit, 바이멘틴 및 CD90 마커들은 발현하고, CD34, 인자 VIII, 알파-액틴, 데스민, S-100 및 케라틴 마커들을 발현하지 않는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 개체군도 제공된다.
표면 마커들에 의한 세포 개체군의 표현형적 특징화는, 일반 방법들에 따라 수행된, 세포들의 개별적인 염색 (유동 세포분석)에 의해 또는 원 위치에서의 개체군의 조직학적 단편들을 제조함에 의해 수행될 수 있다. 항체들에 의한 표면 마커들의 발현의 프로파일의 측정인, 면역표현형 특징화는, 표지된 항체를 사용하여 직접적으로 수행될 수 있거나, 또는 세포 마커의 일차 특이적 항체들에 대해 이차적인 표지된 항체를 사용하여 간접적으로 수행될 수 있으며, 이에 따라 세포 증폭을 달성한다. 한편, 항체에 대한 결합의 존재 또는 부재는, 이에 제한되지는 않지만 면역형광 현미경 검사 및 방사선사진을 포함하는 상이한 방법들에 의해 결정될 수 있다. 유사하게, 항체의 결합 수준의 모니터링을 유동 세포 분석에 의해 실시하는 것이 가능하며, 이 기술은 형광색소의 수준이, 표지된 항체들에 특이적으로 결합된 세포 표면에 존재하는 항원들의 양에 상관되되도록 하는 기술이다. 세포 개체군 상에서 일련의 표면 마커들의 구분되는 발현은 상기 개체군의 동정 및 분리 방법을 제공한다.
특정 구현예들에서, 상기 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은, 예로서 하기에 상세히 기재되는 것과 같은, 약학 또는 생체적합물질로서의 사용을 위한, 각종 용액 또는 물질들 중의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 현탁액이다. 한 구현예에서, 세포 조성물은 링거액 및 HSA 중의 본 지방 조직 유래 간질 줄기세포의 현탁액을 포함한다. 또다른 구현예에서, 세포 조성물은 중합체, 글루, 겔 등과 같은 물질 중의 본 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 현탁액을 포함한다. 이러한 현탁액들은, 예로서 배양 배지로부터 본 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 침전시키고, 그들을 원하는 용액 또는 물질 중에 재현탁시킴에 의해 제조될 수 있다. 상기 세포들을 배양 배지로부터, 예로서 원심분리, 여과, 한외 여과 등에 의해, 침전 및/또는 변경시킬 수 있다.
본 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들 중의 본 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 농도는 적어도 약 5 x 106 세포/mL, 적어도 약 10 x 106 세포/mL, 적어도 약 20 x 106 세포/mL, 적어도 약 30 x 106 세포/mL, 또는 적어도 약 40 x 106 세포/mL일 수 있다.
따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 본 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 자손, 예로서 지방 조직 유래 간질 줄기세포들로부터 유래된 세포들에 관한 것이다. 이러한 자손은 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 이후 세대들 및 이식체로부터의 그들의 분리 후, 본 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 분화를 유도함에 의해 생성된, 예로서 시험관 내에서 유도된, 계통 구속된 세포들을 포함할 수 있다. 특정 구현예들에서, 자손 세포들은 부모 개체군으로부터 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 또는 약 10 패시지들 후에 수득된다. 그러나, 자손 세포들은 부모 개체군으로부터 임의의 수의 패시지 후에 수득될 수 있다.
특정 구현예들에서, 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 약학 제제, 예로서 원하지 않는 바이러스, 세균 및 기타 병원균들의 존재가 없는, 멸균의 약학 제제 및 발열원이 없는 제제의 일부로서 제공될 것이다. 즉, 인간 투여를 위해, 본 조성물들은 멸균성, 발열성 및 FDA의 생물학 기준에 의해 요구 되는 것과 같은 일반적인 안전 및 순도 기준을 충족하여야만 한다.
특정 구현예들에서, 이러한 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 동물, 바람직하게는 포유동물들, 더욱 바람직하게는 인간 내로의 이식에 사용될 수 있다. 상기 세포들은 바람직하게는 자가 이식이지만, 이식 숙주에 대해 동종(allogeneic) 또는 이종 (xenogeneic)일 수도 있다. 충분한 자가 줄기세포들의 수득에 있어서의 어려움들로 인하여, 동종 공여자로부터의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포가 치료 용도를 위한 줄기 세포들의 귀중한 대안적인 공급원을 구성할 것이다. 골수 간질 줄기 세포들 및 지방 조직 유래 간질 세포들이 시험관 내에서 동종성 림프구들의 반응을 일으키지 못하고, 결과적으로 공여자로부터 유래된 동종성 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들이, MHC 부적합성에 상관없이, 임의의 환자에 대해 이론적으로 사용될 수 있다는 것이 본 기술 분야에서 알려져 있다.
지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들을, 대상, 특히 인간 대상에게 투여하는 방법은, 여기에 상세히 기재되어 있으며, 세포들을 대상의 타겟 자리들 내로 주사 또는 이식하는 것을 포함하며, 상기 세포들은 주사 또는 이식에 의한 세포의 대상 내로의 도입을 촉진하는 송달 장치 내로 삽입될 수 있다. 이러한 송달 장치들은, 세포들 및 액을 수령 대상의 신체 내로 주사하기 위한 관, 예로서 카테테르(catherters)를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 상기 관은 추가적으로 바늘, 예로서 주사기를 가지며, 이를 통해 상기 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들을 대상 내의 원하는 위치로 도입시킬 수 있다. 상기 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들은 상이한 형태의, 이러한 송달 장치, 예로서 주사기 내로 삽입될 수 있다. 예로서, 상기 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들은 용액 중에 현탁되거나 또는 그러한 송달 장치에 함유된 지지체 기질 내에 끼워진 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 조성물들을 포함한다.
약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제는, 식염수, 완충 수용액, 용매 및/또는 분산 매질을 포함한다. 이러한 담체 및 희석제의 예는 본 기술 분야에서 공지이다. 상기 용액은 바람직하게는 멸균이며, 주사성이 용이한 정도로 액체이다. 바람직하게는, 상기 용액은, 제조 및 저장 조건 하에서 안정하며, 예로서, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 (thimerosal) 등을 이용하여, 세균 및 진균과 같은 미생물들의 오염 작용에 대항하여 보존된다. 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 조성물들인 용액들은, 여기 기재된 것과 같은 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제, 및 필요한 경우, 상기 열거된 기타 성분들 중에 포함시키고, 이후 여과 멸균에 의해 제조될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 담체들로서의 역할을 할 수 있는 재료들 및 용액들의 어떤 예들은 다음을 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토오스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말화 트라가칸트 (tragacanth); (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 탈크; (8) 부형제들, 예컨대 코코아 버터 및 좌약 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스테 르, 예컨대 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충화제, 예컨대 수산화 마그네슘 및 수산화 알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원 (pyrogen-free) 없는 물; (17) 등장성 식염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알코올; (20) pH 완충 용액; (21) 폴리에스테르, 폴리카르보네이트 및/또는 폴리무수물; 및 (22) 약학 제형들 중에 사용되는 기타 비독성의 적합성 물질들.
특정 구현예들에서, 상기 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 추가로 접착제를 포함한다. 특정 구현예들에서, 상기 접착제는 피브린-기재 접착제로, 예컨대 피브린 겔 또는 피브린 글루 또는 피브린-기재 중합체 또는 접착제, 또는 기타 조직 접착제 또는 외과용 글루, 예컨대, 시아노아크릴레이트, 콜라겐, 트롬빈 및 폴리에틸렌 글리콜이다. 사용될 수 있는 기타 물질들은, 이에 제한되지는 않지만, 칼슘 알지네이트, 아가로스, 유형 I, II, IV 또는 기타 콜라겐 동종체, 폴리-락트/폴리글리콜 산, 히알루로네이트 유도체들 또는 기타 물질들을 포함한다 (Perka C. 등 (2000) J. Biomed. Mater. Res. 49:305-311; Sechriest VF. 등 (2000) J. Biomed. Mater. Res. 49:534-541; Chu CR 등 (1995) J. Biomed. Mater. Res. 29:1147-1154; Hendrickson DA 등 (1994) Orthop. Res. 12:485-497). 기타 구현예들에서, 상기 접착제는 액상 밴디지 (bandage)로, 여기에서 본 방법의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 상기 액상 밴디지 물질과 혼합된다. "액상 밴디지"는 화합물, 예로서 중합체성 화합물을 포함하는 용액으로, 이는 분무 또는 브러쉬 (brush)로 상처에 적용되며, 이후 용매의 기화에 의한 제거로, 상기 상처 위에 보호막을 제공한다.
또한, 누공 또는 상처들의 복구 용도의 화합물들 또는 물질들을 포함하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들의 제조 방법들도 여기 제공된다. 한 구현예에서, 그러한 물질들의 제조 방법은 상기 물질과 함께 본 세포 조성물의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 현탁시키는 것을 포함한다. 한 구현예에서, 상기 지방 조직 유래 간질 줄기세포들은 배양 배지로부터 침전되고 피브린 글루 또는 겔 중에서 재현탁된다. 피브린 글루 및 겔들 및 기타 피브린-기재 중합체 및 접착제들은 본 기술 분야에서 공지이며, 상업적으로 구입가능하다. 예로서, 상업적으로 구입가능한 피브린 글루 키트는 Tissucol® Duo 2.0이고, 기타 상업적으로 구입가능한 피브린 밀봉제는 Crosseal®, TISSEEL VH Fibrin Sealant® 등을 포함한다.
본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 지지체, 예로서 의약 장치를 코팅하는데 사용될 수도 있다. 예로서, 상기 지지체는 봉합사, 실, 메니스커스 (meniscus) 복구 장치, 리벳 (rivet), 압정 (tack), 스테이플 (staple), 나사, 본 플레이트 (bone plate), 본 플레이팅 시스템, 수술용 메쉬 (mesh), 패치, 예로서 복구 패치, 심장혈관 패치 또는 심막 (pericardial) 패치, 삼각건 (sling), 정형술용 핀, 접착 차단제 (barrier), 스텐트 (stent), 가이드된 (guided) 조직 복구/재생 장치, 관절 연골의 복구 장치, 신경 가이드, 건 (tendon) 복구 장치, 심박 중격 결손 복구 장치, 팽화제 또는 충전제, 정맥판, 골수 골격 (scaffold), 메니스커스 재생 장치, 인대 및 건 이식체, 안세포 이식체, 척추 융합 케이지 (cage), 피부 대체물, 경뇌막 (dural) 대체물, 뼈 이식 대체물, 뼈 다우웰 (dowel), 상처 드레싱, 글루, 중합체 또는 지혈제일 수 있다.
그 안에 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들이 포함되거나 끼워질 수 있거나, 또는 그 위에 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들이 코팅될 수 있는 지지체들은, 수령자에 적합하고, 그 수령자에게 유해하지 않은 생성물들로 분해되는 기질들을 포함한다. 천연 및/또는 합성 생분해성 기질들이 이러한 기질들의 예이다. 천연 생분해성 기질들은 예로서 포유동물 유래의, 혈장 응고물들, 및 콜라겐 기질을 포함한다. 합성 생분해성 기질은 폴리무수물, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산과 같은 합성 중합체들을 포함한다. 합성 중합체들 및 세포들을 이들 기질 내에 포함시키거나 또는 끼워넣는 방법들의 기타 예들은 본 기술 분야에서 알려져 있다. 예로서, 미국 특허 제 4,298,002 및 미국 특허 제 5,308,701 호 참조. 이들 기질들은 생체 내 약한 세포들을 지지 및 보호한다.
상기 지지체는 본 기술 분야의 기술 중 하나로 알려진 것과 같은 임의의 방법, 예로서, 침윤 (soaking), 분무, 도장, 찍기 (imprinting) 등에 의해 세포들로 코팅될 수 있다.
한 구현예에서, 상기 지지체는 봉합사, 스테이플, 흡수성 실, 비-흡수성 실, 천연 실, 합성 실, 단섬유 실 또는 다섬유 실 (노끈이라고도 함)이다. 지방 조직 유래 간질 줄기세포들로 코팅된, 상처들을 밀봉하는데 사용되는 봉합사 및 기타 지지체들을 제조하는 바람직한 방법들은 미국 특허출원 제 11/056,241 호 "Biomaterial for Suturing" (2005년 2월 14일 출원)에 개시되어 있으며, 상기 출원은 그 전체로서 참고문헌으로 포함된다. 여기 개시된 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들은 미국 특허 출원 제 11/056,241호에 개시된 방법들과 함께 사 용될 수 있는 신규 조성물들을 나타낸다.
또한, 임의의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물에서, 적어도 하나의 치료제가 그 조성물 내로 혼입될 수 있다. 예로서, 조성물은 누공 또는 상처 자리에서의 염증 또는 고통의 치료를 돕기 위하여 진통제를 함유하거나, 또는 그 조성물로 처리된 자리의 감염을 방지하기 위하여 항-감염제를 함유할 수 있다.
보다 구체적으로, 유용한 치료제들의 비제한적인 예들은 다음의 치료 카테고리들을 포함한다: 진통제, 예컨대 비스테로이드성 항-염증 약물, 진정성 아고니스트 및 살리실레이트; 항-감염제, 예컨대 구충제, 항-혐기성균제 (anti-anaerobics), 항생제, 아미노글리코시드 항생제, 항진균성 항생제, 세팔로스포린 항생제, 매크로리드 (macrolide) 항생제, 각종 β-락탐 항생제, 페니실린 항생제, 퀴놀론 항생제, 술폰아미드 항생제, 테트라사이클린 항생제, 항마이코박테리아제, 항투베르쿨로시스 항마이코박테리아제, 항원충제, 항말라리아성 항원충제, 항바이러스제, 항-레트로바이러스제, 옴벌레 살충제, 소염제, 코르티코스테로이드성 소염제, 가려움완화제/국부 마취제, 국소 항-감염제, 항진균성 국소 항-감염제, 항바이러스성 국소 항-감염제; 전해질제 및 신장제, 예컨대 산성화제, 알칼리화제, 이뇨제, 탄산 탈수소효소 억제제 이뇨제, 루프 이뇨제, 삼투성 이뇨제, 칼륨 저류성 이뇨제, 티아지드 이뇨제, 전해질 보충제, 및 요산배설촉진제 (uricosuric agents); 효소, 예컨대 췌장 효소 및 혈전용해 효소; 위장제, 예컨대 지사제, 구토억제제, 위장성 소염제, 살리실레이트 위장성 소염제, 제산성 항-궤양제, 위산-펌프 저해제 항-궤양제, 위 점막 항-궤양제, H2-차단제 항궤양제, 콜레리토리트제 (cholelitholytic agents), 소화제, 구토제, 하제 및 변 연화제, 및 위장운동 촉진제; 일반 마취제, 예컨대 흡입 마취제, 할로겐화 흡입 마취제, 정맥 마취제, 바비튜레이트 (barbiturate) 정맥 마취제, 벤조디아제핀 정맥 마취제, 및 진정성 아고니스트 정맥 마취제; 호르몬 및 호르몬 조절제들, 예컨대 인공 유산제, 아드레날제, 코르티코스테로이드 아드레날제, 안드로겐, 항-안드로겐, 면역생물학제, 예컨대 면역글로불린, 면역억제제, 톡소이드 (toxoids), 및 백신; 국부 마취제, 예컨대 아미드 국부 마취제 및 에스테르 국부 마취제; 근골격제, 예컨대 통풍예방 소염제, 코르티코스테로이드 소염제, 금 화합물 소염제, 면역억제성 소염제, 비스테로이드성 소염 약물 (NSAIDs), 살리실레이트 소염제, 무기질; 및 비타민, 예컨대 비타민 A, 비타민 B, 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E 및 비타민 K.
상기 카테고리로부터의, 바람직한 부류의 유용한 치료제들은 다음을 포함한다: 1) 일반적인 진통제, 예컨대 리도카인 또는 그의 유도체들, 및 디클로페낙 (diclofenac), 이부프로펜, 케토프로펜 및 나프록센을 포함하는 비스테로이드성 소염 약물 (NSAIDs) 진통제; (2) 진정성 아고니스트 진통제, 예컨대 코데인, 펜타닐, 하이드로모르폰 및 모르핀; (3) 살리실레이트 진통제, 예컨대 아스피린 (ASA) (장용 코팅된 ASA); (4) H1-차단제 항히스타민, 예컨대 클레마스틴 (clemastine) 및 테르페나딘 (terfenadine); (5) 항-감염제, 예컨대 무피로신 (mupirocin); (6) 항-혐기성 항-감염제, 예컨대 클로람페니콜 및 클린다마이신; (7) 항진균성 항생성 항-감염제, 예컨대 암포테리신 b, 클로트리마졸 (clotrimazole), 플루코나졸 (fluconazole), 및 케토코나졸; (8) 매크로리드 항생성 항-감염제, 예컨대 아지트로마이신 (azithromycin) 및 에리트로마이신; (9) 각종 β-락탐 항생성 항-감염제, 예컨대 아즈트레오남 (aztreonam) 및 이미페넴 (imipenem); (10) 페니실린계 항생성 항-감염제, 예컨대 나피실린 (nafcillin), 옥사실린 (oxacillin), 페니실린 G, 및 페니실린 V; (11) 퀴놀론 항생성 항-감염제, 예컨대 사이프로플록사신 (ciprofloxacin) 및 노르플록사신; (12) 테트라사이클린 항생성 항-감염제, 예컨대 독시사이클린 (doxycycline), 미노사이클린 (minocycline), 및 테트라사이클린; (13) 항결핵 항마이코박테리아성 항-감염제, 예컨대 이소니아지드 (isoniazid) (INH), 및 리팜핀 (rifampin); (14) 항원충성 항-감염제, 예컨대 아토바쿠온 (atovaquone) 및 댑손 (dapsone); (15) 항말라리아성 항원충성 항-감염제들, 예컨대 클로로퀴논 및 피리메타민 (pyrimethamine); (16) 항-레트로바이러스성 항-감염제들, 예컨대 리토나비르 (ritonavir) 및 지도부딘 (zidovudine); (17) 항바이러스성 항-감염제, 예컨대 아시클로버 (acyclovir), 간시클로버 (ganciclovir), 인터페론 알파 및 리만타딘 (riantadine); (18) 항진균성 국소 항-감염제들, 예컨대 암포테리신 B, 클로트리마졸 (clotrimazole), 마이코나졸 (miconazole), 및 나이스타틴 (nystatin); (19) 항바이러스성 국소 항-감염제, 예컨대 아시클로버; (20) 전해질 및 신장제, 예컨대 락툴로스 (lactulose); (21) 루프 이뇨제, 예컨대 푸로세미드 (furosemide); (22) 칼륨 저류 이뇨제, 예컨대 트리암테렌 (triamterene); (23) 티아지드 이뇨제, 예컨대 하이드로클로로티아지드 (hydrochlorothiazide) (HCTZ); (24) 요산배설 촉진제, 예컨대 프로베네시드 (probenecid); (25) 효소, 예컨대 RN 아제 및 DN아제; (26) 구토억제제, 예컨대 프로클로르페라진 (prochlorperazine); (27) 살리실레이트 위장 소염제, 예컨대 술파살라진 (sulfasalazine); (28) 위산 펌프 저해제 항-궤양제, 예컨대 오메프라졸 (omeprazole); (29) H2-저해제 항-궤양제, 예컨대 시메티딘 (cimetidine), 파모티딘 (famotidine), 니자티딘 (nizatidine), 및 래니티딘 (ranitidine); (30) 소화제, 예컨대 판크레리파제 (pancrelipase); (31) 위장운동 촉진제, 예컨대 에리트로마이신; (32) 에스테르 국부 마취제, 예컨대 벤조카인 및 프로카인; (33) 근골격 코르티코스테로이드 소염제, 예컨대 베클로메타손 (beclomethasone), 베타메타손, 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 및 프레드니손; (34) 근골격 소염성 면역억제제, 예컨대 아자티오프린 (azathioprine), 시클로포스파미드 및 메토트렉세이트; (35) 근골격 비스테로이드 소염성 약물 (NSAIDs), 예컨대 디클로페낙, 이부프로펜, 케토프로펜, 케토르락, 및 나프록센; (36) 무기질, 예컨대 철, 칼슘 및 마그네슘; (37) 비타민 B 화합물들, 예컨대 시아노코발라민 (비타민 B12) 및 니아신 (비타민 B3); (38) 비타민 C 화합물들, 예컨대 아스코르브산; 및 (39) 비타민 D 화합물들, 예컨대 칼시트리올.
특정 구현예들에서, 치료제는 성장인자 또는 세포 분화 및/또는 증식에 영향을 미치는 기타 분자일 수 있다. 최종 분화 상태를 유도하는 성장 인자들은 본 기술 분야에서 공지이며, 최종 분화 상태를 유도하는 것으로 알려진 임의의 그러한 인자로부터 선택될 수 있다. 여기 기재된 방법들에서의 사용을 위한 성장 인자들 은, 특정 구현예들에서, 자연적으로 존재하는 성장 인자의 변이체들 또는 절편일 수 있다. 예로서, 변이체는, 보존성 아미노산에 변화를 만들고, 결과의 변이체들을 상기 기재된 기능 분석들 중 하나 또는 본 기술 분야에서 알려진 또다른 기능성 분석 중 하나로 시험하여 생성될 수 있다. 보존성 아미노산 치환은 유사한 측쇄들을 갖는 상호교환가능한 잔기들을 의미한다. 예로서, 지방족 측쇄들을 갖는 아미노산들의 군은 글리신, 알라닌, 발린, 로이신 및 이소로이신이다; 지방족-히드록실 측쇄들을 갖는 아미노산들의 군은 세린 및 트레오닌이다; 아미드 함유 측쇄들을 갖는 아미노산들의 군은 아스파라긴 및 글루타민이다; 방향족 측쇄들을 갖는 아미노산들의 군은 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판이다; 염기성 측쇄들을 갖는 아미노산들의 군은 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘이다; 및 황 함유 측쇄들을 갖는 아미노산들의 군은 시스테인 및 메티오닌이다. 바람직한 보존성 아미노산 치환 군들은: 발린-로이신-이소로이신, 페닐알라닌-티로신, 라이신-아르기닌, 알라닌-발린, 및 아스파라긴-글루타민이다.
본 기술 분야의 숙련자들이 이해함에 따라, 폴리펩티드 성장 인자들의 변이체들 또는 절편들은 예컨대 이산성 점 돌연변이(들)의 생성을 포함하는, 돌연변이생성과 같은 통상적인 기술들을 이용하여 또는 끝 절단 (truncation)에 의해 생성될 수 있다. 예로서, 돌연변이는 그로부터 유래된 폴리펩티드 성장 인자의 생물학적 활성과 실질적으로 동일하거나 또는 단지 그의 부분집합을 보유하는 변이체들을 생기게 할 수 있다.
3. 신규 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들의 제조 방법
상기 기재된 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들을 포함하는 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 제조 방법도 제공된다. 한 구현예에서, 방법은 다음 단계들을 포함한다: (a) 대상으로부터 지방 조직을 수집하는 단계; (b) 효소 절단에 의해 세포 현탁액을 수득하는 단계; (c) 세포 현탁액을 침전시키고, 배양 배지 중에서 세포들을 재현탁하는 단계; (d) 세포들을 적어도 약 10일 동안 배양하는 단계; 그리고 (g) 적어도 두 개의 배양 패시지 동안 세포들을 확장하는 단계.
바람직하게는, 상기 지방 조직 유래 간질 줄기세포들은 최종 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들이 도입되어지는 대상의 지방 조직으로부터 분리된다. 그러나, 간질 줄기 세포들은 대상으로서 동일하거나 또는 상이한 종들의 임의의 유기체로부터 분리될 수도 있다. 지방 조직을 갖는 임의의 유기체는 가능한 후보일 수 있다. 바람직하게는, 상기 유기체는 포유동물이며, 가장 바람직하게는 상기 유기체는 인간이다.
특정 구현예들에서, 세포들은 적어도 약 15일, 적어도 약 20일, 적어도 약 25일, 또는 적어도 약 30일 동안 배양된다. 세포들은, 세포 개체군에서 세포 표현형의 동종성을 개선시키기 위하여 보다 오래 배양물 중에서 확장되는 것이 바람직하다.
특정 구현예에서, 세포들은 적어도 3 회의 배양 패시지들 동안 또는 "적어도 3 회 패시지된" 배양물 중에서 확장된다. 다른 구현예들에서, 세포들은 적어도 4 회, 적어도 5 회, 적어도 6 회, 적어도 7 회, 적어도 8 회, 적어도 9 회, 적어도 10 회 패시지된다. 세포 개체군 중에서 세포 표현형의 동종성을 향상시키기 위해 세포들을 3 회 이상 패시지하는 것이 바람직하다. 실제로, 세포들은, 그 세포 표현형의 동종성이 향상되고 분화능이 유지되는 한, 배양물에서 비제한적으로 확장될 수 있다.
세포들은 줄기 세포 배양에 대한 본 기술 분야에서 알려진 임의의 기술에 의해 배양될 수 있다. 각종 배양 기술 및 그들의 스케일 확장 (scale-up)의 논의는 Freshney, R.I., Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 4th Edition, Wiley-Liss 2000에서 찾을 수 있다. 특정 구현예들에서, 세포들은 단층 배양에 의해 배양된다. 한 구현예에서, 세포들은 하기 실시예 1 에 기재된 것과 같이 배양 및 패시지된다.
조직 배양에서 간질 세포들을 지지할 수 있는 임의의 배지가 사용될 수 있다. 섬유모세포의 성장을 지지하는 배지 제형들은, 이에 제한되지는 않지만, 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM), 알파 변형 최소 필수 배지 (alpha.MEM), 및 로즈웰 ㅍ파크 기념 연구소 배지 (Roswell Park Memorial Institute Media) 1640 (RPMI Media 1640) 등을 포함한다. 전형적으로, 간질 세포들 및/또는 연골세포들의 성장을 지지하기 위하여, 0 내지 20%의 태아 소 혈청 (FBS) 또는 1-20%의 말 혈청이 상기 배지에 첨가된다. 그러나, 간질 세포 및 연골세포에 대해 필요한 FBS 중의 필요한 성장 인자, 시토카인, 및 호르몬이 확인되고, 성장 배지 중에 적정한 농도로 제공되는 경우, 규정 배지가 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에 유용한 배지는, 이에 제한되지는 않지만, 간질 세포에 대한 항생제 분열촉진성 (mitogenic) 또는 차별적 화합물들을 포함하는, 관심 대상의 하나 이상의 화합물들을 함유할 수 있 다. 세포들은 가습된 인큐베이터 중 31℃ 내지 37℃의 온도에서 성장할 것이다. 이산화탄소 함량은 2 내지 10% 사이에서 유지될 것이며, 산소 함량은 1 내지 22% 사이에서 유지될 것이다. 세포들은 4 주에 이르는 기간 동안 이러한 환경에서 유지될 것이다.
상기 배지 내로 보충될 수 있는 항생제들은, 이에 제한되지는 않지만, 페니실린 및 스트렙토마이신을 포함한다. 화학적으로 규정된 배양 배지 중에서의 페니실린 농도는 ml 당 약 10 내지 약 200 유닛이다. 화학적으로 규정된 배양 배지 중에서의 스트렙토마이신 농도는 약 10 내지 약 200 ug/ml이다.
지방 조직 유래 간질 세포들은, 플라스미드, 바이러스성 또는 대안적인 벡터 전략을 사용하여, 관심 대상의 핵산으로 안정적으로 또는 일시적으로 형질감염되거나 또는 형질도입될 수 있다. 관심 대상의 핵산들은, 이에 제한되지는 않지만, 복구될 조직 유형, 예로서 장 벽 또는 질 벽에서 발견되는 세포외 기질 성분들의 생산을 개선시키는 유전자 산물들을 암호화하는 것들을 포함한다.
조절 유전자들을 운반하는 바이러스성 벡터의 간질 줄기 세포들 내로의 형질 도입은 염화세슘 밴딩 (banding) 또는 10:1 내지 2000:1 사이의 다중 감염 (바이러스 단위: 세포)에서의 기타 방법에 의해 정제된 바이러스성 벡터들 (아데노바이러스, 레트로바이러스, 아데노-관련 바이러스, 또는 기타 바이러스)로 수행될 수 있다. 세포들은 폴리에틸렌이민 또는 리포펙타민™과 같은 양이온성 세제의 존재 또는 부재 하의 무혈청 또는 혈청 함유 배지 중에서, 1 시간 내지 24 시간의 기간 동안 바이러스에 노출될 것이다 (Byk T. 등 (1998) Human Gene Therapy 9:2493-2502; Sommer B. 등 (1999) Calcif. Tissue Int. 64:45-49).
벡터 또는 플라스미드를 줄기 세포들 내로 이동시키기 위한 기타 적합한 방법들은 지질/DNA 복합체들을 포함하며, 예컨대, 미국 특허 제 5,578,475; 5,627,175; 5,705,308; 5,744,335; 5,976,567; 6,020,202; 및 6,051,429 호에 기재된 것들이 있다. 적합한 시약들은 리포펙타민, 다양이온성 (poly-cationic) 지질 2,3-디올레일옥시-N-[2(스페르민카르복스-아미도)에틸]-N,N-디메틸-1-프로판아미늄 트리 플루오로아세테이트 (DOSPA) (CAS (Chemical Abstracts) 등록명: N-[2-(2,5-비스[(3-아미노프로필)아미노]-1--옥시펜틸}아미노) 에틸]-N,N-디메틸-2,3-비스(9-옥타데세닐옥시)-1-프로판아미늄 트리프루오로아세테이트), 및 중성 지질 디올레일 포스파티딜에탄올아민 (DOPE)의, 막 여과수 중의 3:1 (w/w) 리포솜 제형을 포함한다. 예로서, Lipofectamine 2000™ (Gibco/Life Technologies 로부터 입수가능 # 11668019) 제형이 있다. 기타 시약들은 다음을 포함한다: FuGENETM 6 형질감염 시약 (비-리포좀 형태의 지질들 및 기타 화합물들의 80% 에탄올 중의 블랜드, Roche Diagnostics Corp.으로부터 입수가능 # 1814443); 및 LipoTAXITM 형질감염 시약 (Invitrogen Corp.의 지질 제형, #204110). 줄기 세포들의 형질감염은 엘렉트로포레이션 (electroporation)에 의해 수행될 수 있으며, 예로서 M.L. Roach 및 J.D. McNeish (2002) Methods in Mol. Biol. 185:1에서 설명된 것과 같다. 안정한 유전적 변경들을 갖는 줄기 세포들의 제조에 적합한 바이러스성 벡터 시스템들은 아데노바이러스 및 레트로바이러스를 기초로 할 수있으며, 상업적으로 구입가능한 바이러스 성분들을 사용하여 제조될 수 있다.
조절 유전자들을 운반하는 플라스미드 벡터들의 줄기 간질 세포들 내로의 형질감염은, 인산 칼슘 DNA 침전 또는 양이온성 세제 방법 (Lipofectamine™, DOTAP)의 이용에 의한 단층 배양에서, 또는 플라스미드 DNA 벡터들의 생체 적합성 중합체 내로의 직접적인 혼입에 의한 삼차원 배양에서, 세포들 내로 도입될 수 있다(Bonadio J. 등 (1999) Nat. Med. 5:753-759).
이들 유전자들에 의해 암호화된 기능성 단백질들의 추적 및 검출을 위하여, 바이러스성 또는 플라스미드 DNA 벡터들은 용이하게 검출가능한 마커 유전자를 함유할 수 있으며, 예컨대 초록 형광 단백질 또는 베타-갈락토시다제 효소가 있으며, 이들 모두 조직화학적 수단에 의해 추적될 수 있다.
4. 누공 및 상처의 치료방법
본 발명의 또다른 측면은 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 이용하여 누공 및 상처를 치료하는 신규 방법에 관한 것이다. 바람직한 구현예들에서, 상기 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들은 치료될 대상의 지방 조직으로부터 유래된다. 다른 바람직한 구현예들에서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들은 여기 기재된 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물을 포함한다. 그러나, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 기타 제제들, 예로서, 미국 특허 제 6,777,231 및 6,555,374 호 및 2005년 2월 25일 출원된, 미국 특허 출원 제 11/065,461 호 "Identification and Isolation of Multipotent Cells From Non-Osteochondral Mesenchymal Tissue"에 기재된 것들이 여기 기재된 방법들에 사용될 수 있다.
한 구현예에서, 어떤 대상에서의 누공의 치료방법은 다음 단계들을 포함한 다: (a) 봉합사로 내부 구멍을 밀봉하는 단계 및 (b) 예로서 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중의 적어도 약 10×106, 적어도 약 20×106, 적어도 약 30×106, 또는 적어도 약 40×106 의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을, 상기 밀봉 봉합된 내부 구멍으로 송달하는 단계. 특정 구현예들에서, 예로서, 세포들의 첫번째 송달이 불충분한 경우, 상기 방법은 다음 단계를 추가로 포함할 수 있다: (c) 예로서 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중의 적어도 약 20×106, 적어도 약 30×106, 또는 적어도 약 40×106 의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 두번째 투여량을 상기 밀봉 봉합된 내부 구멍으로 송달하는 단계.
또다른 구현예에서, 상기 방법에서 사용된 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물은, 그 안에서 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99% 의 줄기세포가 CD9, CD10, CD13. CD29, CD44, CD49A. CD51, CD54, CD55, CD58, CD59 CD90 및/또는 CD105 마커들을 발현하는 것이다.
다른 구현예에서, 상기 방법에서 사용된 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물은, 그 안에서 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99% 의 줄기세포가 c-Kit, 바이멘틴 및/또는 CD90 마커들을 발현하는 것이다.
본 발명의 세포들을 대상, 특히 인간 대상에게 투여하는 일반적인 방법들은, 그들 중 일부는 여기에 상세히 기재되어 있으며, 세포들을 대상의 타겟 자리 내로 주사 또는 이식하는 것을 포함하며, 본 발명의 세포들은, 세포들의 주사 또는 이식에 의해, 대상 내로의 도입을 용이하게 하는 송달 장치 내로 삽입될 수 있다. 이러한 송달 장치들은, 세포들 및 액을, 수령하는 대상의 신체 내로 주사하기 위한 관, 예로서 카테테르를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 상기 관들은 추가적으로, 본 발명의 세포들이 그를 통해 대상 내로의 원하는 장소에 도입될 수 있는 바늘, 예로서 주사기를 갖는다. 본 발명의 세포들은 상이한 형태의 이러한 송달 장치, 예로서 주사기 내로 삽입될 수 있다. 예로서, 세포들은, 이러한 송달 장치 내에 함유된 경우, 용액 중에 현탁되거나 또는 지지 기질 내에 끼워질 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체들 및 희석제들은 식염수, 완충 수용액, 용매 및/또는 분산 매질을 포함한다. 이러한 담체 및 희석제들의 이용은 본 기술 분야에서 공지이다. 상기 용액은 바람직하게는 멸균상태이며 주사성이 용이한 정도로 액체이다. 바람직하게는, 상기 용액은, 제조 및 저장 조건 하에서 안정하며, 예로서, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등을 이용하여, 세균 및 진균과 같은 미생물들의 오염 작용에 대항하여 보존된다. 본 발명의 용액들은, 여기 기재된 것과 같은 전구 세포들을 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제, 및 필요한 경우, 상기 열거된 기타 성분들 중에 혼입시키고, 이후 여과 멸균에 의해 제조될 수 있다.
기타 구현예들에서, 어떤 대상에서의 누공 치료방법은 (a) 예로서, 본 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물로부터의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포를 포함하는 봉합사로 내부 구멍을 밀봉하는 것을 포함한다. 본 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중의 세포들로 코팅된 이러한 봉합사들은 미국 특허 출원 제 11/056,241 호 (2005년 2월 14일 출원)에 기재되어 있으며, 이는 참조로서 여기 포함된다.
상기 방법들은 일부 구현예들에서 하기 단계들을 더 포함한다: (d) 적어도 하나의 누공 통로 (track)를 깊게 스크래핑(scraping)하는 단계, 및 (e) 상기 누공 통로를 어떤 물질로 충전하는 단계. 특정 구현예들에서, 본 방법은, 본 세포 조성물로부터의 적어도 약 10×106 개의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 상기 물질로 송달하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 물질은 피브린-기재 중합체 또는 접착제로, 예컨대 피브린 글루 또는 겔이다. 특정 구현예들에서, 적어도 약 10×106 의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 투여량은, 예로서 상기 물질이 지방 조직 유래 간질 세포 함유 조성물을 포함하도록, 상기 물질 내에 둘러싸인다.
추가의 구현예에서, 어떤 대상에서 누공을 치료하는 방법은 다음 단계들을 포함한다:
(i) 적어도 하나의 누공 통로를 깊게 스크래핑 단계;
(ii) 봉합사를 이용하여 상기 스크래핑된 통로의 내부 구멍을 밀봉하는 단계;
(iii) 예로서, 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중의, 적어도 약 10×106, 적어도 약 20×106, 적어도 약 30×106, 또는 적어도 약 40×106의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 밀봉 봉합된 내부 구멍에 송달하는 단계,
특정 구현예들에서, 예로서 세포들의 첫 번째 송달이 불충분한 경우, 상기 방법은 하기 단계를 더 포함할 수 있다:
(iv) 예로서, 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중의 적어도 약 20×106, 적어도 약 30×106, 또는 적어도 약 40×106의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 밀봉 봉합된 내부 구멍에 송달하는 단계.
단계 (i)은 바람직하게는 치료될 모든 누공 통로들을 깊게 스크래핑함에 의해 실시되며, 예로서 소파 생검 침 (curettage needle)을 누공 통로 내로 도입하고, 누공 통로를 채울 천연 피브린을 수득하기 위하여 누공 벽을 스크래핑함에 의해 유도된 출혈을 만들어낸다. 본 발명자들에 의한 최근의 임상 연구들은, 이러한 스크래핑 방법에 의해 생성된 천연 피브린이 인공 피브린 밀봉제의 이용에 비교시 바람직한 선택이라는 것을 제시하며, 따라서 본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서는 치료될 누공 통로는 이러한 물질로 채워지지 않는다.
단계 (iv)는 바람직하게는 세포들, 예로서 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물의, 누공 통로를 따른 누공 벽 내로의 주입에 의한, 국부 송달에 의해 실시된다. 예로서, 3 cm의 누공 통로를 따라, 천만 개의 세포들이 2 회 주입된다.
본 발명의 방법들은 이에 제한되지는 않지만, 하기를 포함하는 임의의 누공 을 치료하는데 사용될 수 있다: 항문직장루 또는 치루 또는 분변루, 동정맥루 또는 A-V루, 담도루, 자궁경부루, 두개골동루, 창자사이루, 장피부루, 창자질루, 위루, 자궁복막루, 외림프루, 폐동정맥루, 직장질루, 제대루, 기관지식도루 및 방광질루. 바람직하게는, 상기 방법은 창자루, 예로서 창자를 그 자신에게, 또는 다른 기관으로 연결하는 것들, 예컨대 직장질루, 창자사이루, 장피부루 및 창자질루를 치료하는데 사용될 수 있다. 또다른 바람직한 구현예에서, 상기 방법들은 질 또는 자궁루, 예로서 질 또는 자궁을 그 자신에게, 또는 또다른 기관으로 연결하는 것들, 예컨대 자궁경부루, 직장질루, 창자질루 및 방광질루를 치료하는데 사용될 수 있다.
누공은 본 기술 분야에 알려진 임의의 방법, 예로서 절개, 카테테르 등을 통한 수술 복구를 위해 접근될 수 있다.
또다른 구현예에서, 어떤 대상에서의 상처 치료방법은 다음 단계를 포함한다: (a) 예로서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중의, 적어도 약 10×106,적어도 약 20×106, 적어도 약 30×106, 또는 적어도 약 40×106의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 밀봉 봉합된 상처에 송달하는 단계. 특정 구현예들에서, 예로서 세포들의 첫 번째 송달이 불충분한 경우, 상기 방법은 하기 단계를 더 포함할 수 있다: (c) 예로서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중의 적어도 약 20×106, 적어도 약 30×106, 또는 적어도 약 40×106의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 이차 투여량을 밀봉 봉합된 상처에 송달하는 단계. 다른 구현예들에서, 상기 상처는 본 발명의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물로, 예로서 어떤 물질이 지방 조직 유래 간질 세포 함유 조성물을 포함하도록, 예로서 적어도 약 10×106 의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들의 투여량은 상기 물질로 둘러싸이며, 여기에서 상기 물질은, 예로서 접착제 또는 글루이다. 다른 구현예들에서, 어떤 대상에서의 상처 치료방법은 다음을 포함한다: (a) 예로서, 본 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물로부터의, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 포함하는 봉합사로 상처를 밀봉하는 단계. 본 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물들로부터의 세포들로 코팅된 이러한 봉합사들은 미국 특허 출원 제 11//056,241 호 (2005년 2월 14)에 보다 상세히 기재되어 있으며, 이는 여기에 참조로서 포함된다.
상기 기재된 방법들은 치료될 대상에, 예로서 전신적으로 또는 국부적으로, 봉합의 자리에 치료제를 투여하는 것을 더욱 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들은 상기 기재된 것과 같은, 치료제를 함유하는 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물 중에 제형화된다. 기타 구현예들에서, 상기 치료제는 개별적으로, 예로서 본 방법들과 동시에, 본 방법이 수행되기 전 또는 방법이 수행된 후에 투여될 수 있다. 어떤 구현예들에서, 치료제는 그 대상에서 상기 방법들이 수행되기 전, 수행되는 동안 및 수행된 후에 대상에게 투여된다. 예시적인 치료제들은 상기 기재되었다. 바람직한 구현예들에서, 크론 병의 치료를 위한 치료제들이 대상에게 투여된다. 예시적인 크론 병 치료약들은 소염제, 예컨대 메살라민, 면역억제제들, 예컨대 6-머캡토퓨린 및 아자티오프린 (azathioprine); 인플릭시맵 (infliximab) (Remicade®)과 같은 생물학제, 항생제, 및 디페녹실레이트, 로페라미드 및 코데인과 같은 지사제를 포함하는 제가 있다.
동종(allogeneic) 줄기 세포들이 사용된 경우의 구현예들에서, 지지 처리가 요구될 수 있다. 예로서, 면역 억제제들은, 본 기술 분야에 알려진 방법들에 따라, GVHD를 예방하기 위하여 치료 전, 치료 동안 및/또는 치료 후에 투여될 수 있다. 투여 전, 세포들은, 본 기술 분야에서 알려진 방법에 따라, 대상으로부터 세포들에 대한 또는 그 역으로 면역 반응을 억제하도록 개질될 수도 있다.
임의의 치료제의 투약은 환자의 증상, 연령 및 체중, 치료되거나 또는 예방될 장애의 성질 및 심각성, 투여 경로 및 약제의 형태에 따라 달라질 것이다. 임의의 본 제형들은 단일 투여 또는 분할된 투여로 투여될 수 있다. 치료제들의 투약은 본 기술 분야의 숙련자들에게 알려진 기술들에 의해 또는 여기에서 알려준 바에 따라 용이하게 결정될 수 있다. 또한, 하나 이상의 치료제의 혼합물들이 투여될 수 있거나, 또는 다수의 치료제들이 별도의 조성물들로 투여될 수 있다.
치료제들은 경구적으로, 흡입 분무에 의해, 비경구적으로, 국소적으로, 직장으로, 비강으로, 구강으로, 질에 의해, 또는 이식된 저장소 (reservoir)를 통해 투여될 수 있다. 여기 사용된 것과 같은 비경구라는 표현은 피하, 피부내, 정맥, 근육내, 관절 내, 내활액, 흉골 내 (intrasternal), 경막내, 병소내, (intralesional) 및 두개골 내 주사 또는 주입 기술들을 포함한다.
소정의 환자에서 가장 유효한 치료를 산출하는, 임의의 특정 약제의 정확한 투여 기간 및 양은, 특정 화합물의 활성, 약물동력학 및 생물학적 이용가능성, 환 자의 생리학적 상태 (연령, 성별, 질병 유형 및 단계, 일반 신체 상태, 소정 투약에 대한 반응성 및 약물 유형을 포함), 투여 경로 등에 따라 달라질 것이다. 여기 제시된 지침들은 상기 치료를 최적화하는데 사용될 수 있을 것이며, 예로서 투여의 최적 기간 및/또는 양을 결정하고, 이는 대상을 모니터링하고, 투약 및/또는 타이밍 (timing)을 조절하는 것으로 구성되는 일상적인 실험 외에는 더 이상 아무것도 필요로 하지 않을 것이다.
대상이 치료되는 동안, 환자의 건강은 24 시간 동안 예정된 시간들에서 하나 이상의 관련 지수들을 측정함에 의해 모니터링될 수 있다. 투여 및 제형의 보충, 양, 횟수를 포함하는, 치료는 이러한 모니터링의 결과에 따라 최적화될 수 있다. 환자는 동일한 변수들을 측정함에 의해 주기적으로 재평가되어 향상 정도를 결정할 수 있으며, 이러한 재평가의 첫번째는 전형적으로 치료 개시로부터 4주 말에 이루어지며, 이후의 재평가는 치료 동안 매 4 내지 8주마다 이루어지고, 그 후에는 매 3 달마다 이루어진다. 치료는 몇 달 또는 수 년 동안 지속될 수 있으며, 인간에 대한 전형적인 치료 기간은 최소 한달이다. 투여된 약제의 양 및 가능하게는 투여 기간에 대한 조절은, 이들 재평가들에 근거하여 이루어질 수 있다.
치료는 화합물의 최적 투여 미만인 보다 적은 투약량으로 개시될 수 있다. 그 후, 최적 치료 효과가 얻어질 때까지 상기 투약량을 소량씩 증가시킬 수 있다.
몇몇 치료제들의 조합된 사용은 임의의 개별적인 성분에 대해 요구되는 투약량을 감소시킬 수 있으며, 이는 상이한 성분들의 효과의 개시 및 지속이 상보적일 수 있기 때문이다. 이러한 조합된 치료에서, 상이한 활성제들은 함께 또는 따로따 로, 그리고 동시에 또는 그 날 중 다른 시간에서 전달될 수 있다.
본 화합물들의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물들에서, 예로서 LD50 및 ED50을 결정하기 위하여, 표준 약학 절차들에 의해 결정될 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 조성물들이 바람직하다. 독성 부작용들을 나타내는 화합물이 사용될 수 있지만, 부작용을 감소시키기 위하여 그 약제를 원하는 자리로 타겟하는 송달 시스템을 설계하는데 주의하여야만 한다.
세포 배양 분석 및 동물 연구들로부터 수득된 데이타는 인간에서의 이용을 위한 투약량 범위를 제형화하는데 사용될 수 있다. 임의의 치료제 또는 선택적으로는 그 안의 임의의 성분들의 투약량은, 바람직하게는 독성이 적거나 없는 ED50 을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 투약량은 사용된 투약량 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 달라지는 이러한 범위 내에서 변화할 수 있다. 본 발명의 약제의 경우, 치료적으로 유효한 투여량은 세포 배양 분석으로부터 초기에 측정될 수 있다. 투여량은 세포 배양에서 결정되는 것과 같은, IC50 (즉, 증상의 최대 절반 저해를 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 동물 모델에서 달성하도록 제형화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 혈장 중 농도는, 예로서 고속 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다.
5. 키트
다른 구현예들에서, 본 발명은 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들 및 임의로 그들의 사용에 대한 설명서를 포함하는 키트들에 관한 것이다. 본 발명의 약학 조성물들 및 생체 적응 재료들을 포함하는 키트들도 본 발명의 범주 내에 속한다. 키트 성분들은 상기 방법들의 수동 또는 부분적으로 또는 완전히 자동화된 실시를 위해 포장될 수 있다. 이러한 키트들은, 예로서 생체 적응 재료들의 치료, 복구, 제조 및 기타 적용들을 포함하는, 각종 용도를 가질 수 있다.
본 발명은 이제 일반적으로 기재되며, 이는 하기 실시예들을 참조로 하여 보다 쉽게 이해될 것이며, 이는 본 발명의 특정 측면들 및 구현예들을 예시하기 위한 목적으로만 포함된 것이지, 본 발명을 한정하고자 하는 것이 아니다.
실시예 1: 향상된 동종성을 갖는 리포아스피레이트(Lipoaspirates)로부터의 줄기 세포들의 제조
지방 조직을, 국부 마취 및 일반 진정 작용 하에서, 지방 흡입에 의해 수득하였다. 중공의 무딘 말단의 캐뉼러 (blunt-tipped cannula)를, 작은 절개 (직경 0.5 cm 미만)를 통해 피하 공간 내로 도입시켰다. 완만한 흡입을 하며, 상기 캐뉼러를 지방성 조직의 기계적 파괴를 위해 지방 조직 복부 벽 구획을 통해 이동시켰다. 식염수 및 혈관수축제 에피네프린을, 혈액 손실을 최소화하기 위하여 상기 지방 조직 내로 주입시켰다. 이러한 방식으로, 80 내지 100 ml 의 미가공 리포아스피레이트를 치료될 각 환자로부터 수득하였다.
상기 미가공 리포아스피레이트를 멸균 인산염 완충 식염수 (PBS; Gibco BRL, Paisley, Scotland, UK)로 광범위하게 세척하여 혈액 세포들, 식염수 및 국부 마취 제를 제거하였다. 세포외 기질을 균형 염 용액 (5 mg/ml; Sigma, St. Louis, USA) 중의 유형 II 콜라게나제 의 용액 (0.075%; Gibco BRL)으로 37℃ 에서 30 분동안 분해시켜 세포 분획을 유리하였다. 그 후, 상기 콜라게나제를, 10% 태아 소 혈청 (FBS; Gibco BRL)을 함유한 동량의 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM; Gibco BRL)를 첨가하여 불활성화하였다. 이 세포들의 현탁액을 250 x g 에서 10 분 동안 원심분리하였다. 세포들을 0.16 M NH4Cl 중에 재현탁하고, 적혈구들의 용해를 위하여 실온 (RT) 에서 10 분 동안 방치하였다. 이 혼합물을 250 x g 에서 원심분리하고, 세포들을 10% FBS 및 1 % 암피실린/스트렙토마이신 혼합물(Gibco, BRL)이 더해진 DMEM 중에 재현탁한 후 이들을 100 mm 조직 배양 접시에 10-30×103 세포들/cm2의 농도로 도말하였다.
세포들을 37℃ 에서 공기 중 5% CO2 의 분위기 중에서 24 시간 동안 배양하였다. 그 후, 상기 접시들을 PBS로 세척하여 비부착 세포들 및 세포 절편들을 제거하였다. 세포들을, 동일한 배지 중 동일한 조건 하에서의 배양을, 그들이 약 80% 컨플루언스에 도달할 때까지 유지하였으며, 배양 매질을 3 내지 4일마다 교환하였다. 그 후 세포들을 1:3의 희석의 트립신-EDTA(Gibco BRL)를 사용하여 패시지하였으며, 상기 희석은 약 5-6 × 103 세포들/cm2 의 세포 밀도에 대응하는 것이었다. 이식을 위해, 본 발명자들은 패시지 1 내지 3 사이의 세포들을 사용하였으며, 높은 동종성을 가진 세포 개체군을 분리하기 위해서는 2 회 이상 패시지된 세포들 이 바람직하다. 세포 특징화는, 패시지 1 내지 9에서의 세포들을 사용하여 수행하였다.
실시예 2. 향상된 동종성을 갖는 리포아스피레이트들로부터의 줄기 세포들의 특징화
면역형광 염색에 의해 세포들을 특징화하기 위하여, 세포들을, 24 웰 중의 유리 덮개 조각들 상에, 10% FBS가 더해진 DMEM 에서 저밀도로 도말하였다. 면역조직화학적 연구를 위하여, 세포들을 PBS로 세척하고 아세톤 중 -20℃ 에서 10 분 동안 고정시켰다. α-액틴의 염색을 위해, 세포들을 상온에서 10 분 동안 4% 파라포름알데히드 중에서 고정시켰다. 4% 염소 혈청 및 0.1% Triton X-100을 함유한 PBS로 차단한 후, 세포들을 4℃ 에서, 나타낸 희석으로, 하기 세포 마커들에 대한 일차 항체들과 함께 하룻밤 동안 인큐베이션하였다 [(i) α-액틴; Dako, Glostrup, Denmark; 1/50; (ii) 바이멘틴; Sigma, St. Louis, USA; 1/200; (iii) CD 90; CYMBUS, Biotechnology LTD, Chandlers Ford, Hants, UK; 1/50; (iv) 인자 VIII; Dako; 1/100; (v) CD 34; Chemicon, CA, USA; 1/100; (vi) c-Kit; Chemicon; 1/100; (vii) 데스민; Dako; 1/100; (viii) 사이토케라틴; Dako; 1/100 및 (ix) S-100; Dako; 1/50]. 그 후, 세포들을 적절한 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC)-결합된 또는 테트라메틸로다민 이소티오시아네이트 클로라이드 (TRITC)-결합된 이차 항체들 (Sigma; 1/50)과 함께 상온에서 45 분 동안 인큐베이션하였다. 음성 대조구들의 경우, 일차 항체들을 생략하였다. 핵들은 4',6-디아미디노-2-페 닐인돌 (DAPI)을 사용하여 역-염색하였다(counterstained). 세포들을 그 후 Mobiglow (MoBiTec, Gottingen, Germany)에 올려놓고, 표면형광 현미경 Eclipse TE300 (Nikon, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다. 각 경우에서, 본 발명자들은 상이한 필드들 중의 면역양성 세포들의 수를 결정하고, 그들을 염색된 핵들의 수와 비교하였다. 임의 선택된 필드들을, Spotl 카메라 (Diagnostic Instruments Inc., Tampa, FL, USA)를 통해 컴퓨터 (MacIntosh G3; Apple Computer Ink., Cupertino, Ca, USA) 로 내보냈다. 인간 대동맥 평활근 세포들, 인간 제대정맥 내피세포 (HUVEC) 및 인간 활막 섬유모세포를, 각종 항체들을 이용한 면역염색에 대한 양성 대조구로서 사용하였다.
패시지 1에서, 높은 퍼센트 (90-95%)의 지방 유래 간질 줄기 세포들이, 중배엽 세포골격 세포들의 마커인, 바이멘틴을 발현하였다 (도 1). 바이멘틴의 발현은 패시지 9를 포함하여 이에 이르기까지 동일한 수준으로 유지되었다. 그러나, 기타 마커들의 수준은 시간에 따라 저하되었다. 예로서, 패시지 1에서 17%의 LPA-유래 세포들 중에서 발견된 α-액틴은, 패시지 7에서는 더이상 검출가능하지 않았다. 내피세포들의 마커인, 폰 빌레브란트 (von Willebrandt) 인자 (인자 VIII) 및 내피세포들의 표면에서 역시 발견되는, CD34들만이 패시지 1 내지 3에서 검출되었다 (7% 및 12% 각각 면역양성 세포). 반면, 세포 증식의 마커인, c-Kit (CD 117)의 발현은 시간에 따라 증가하였으며 패시지 4 이후부터는 99%의 면역 양성 세포를 나타내었다 (도 2). 섬유모세포 마커 CD90은, 초기에 약 80%의 LPA-유래 세포들에서 발현하였으며, 패시지 6 부터 99%의 세포들에서 발견되었다 (도 3). 신경외배엽성 마커 S100 또는 외배엽 마커 케라틴의 발현은 임의의 시간에서, 어떤 LPA-유래 세포들에서도 관찰되지 않았다. 패시지 수가 증가됨에 따라 관찰된 마커들에서의 변화는 수득된 세포 제제의 동종성의 증가를 나타낸다.
세포 성장을 정량화하기 위하여, 세포들을 24 웰 플레이트들에 5 ×103 세포/cm2의 농도로 도말하였다. 세포들이 기층에 부착된 후 (3 시간), 상기 배양 배지를, 0.5%, 2%, 5% 또는 10% FBS가 부가된 1% 항생제로 보충된 DMEM으로 교환하였다. 각 회분의 혈청의 실험에 대한 양성 대조구로서, 인간 활막 섬유모세포를 배양하였으며, 그들의 성장 속도를 결정하였다. 배지를 2일 마다 교환하였다. 24시간 간격으로, 세포들을 1% 글루타르알데히드로 고정시키고, 크리스탈 바이올렛으로 핵 염색한 후, 595 nm에서 흡광도를 모니터링하여 웰 당 세포들의 수를 결정하였다. 표준 곡선을 구축하여 웰 당 세포 수와 595 nm에서의 흡광도 사이의 관계를 수립하였다 (r2=0.99).
생육성 지방 조직 유래 간질 세포들을 7 개의 리포아스피레이트들 (LPAs) 모두로부터 성공적으로 분리하여, 배양하였다. 이들 세포들을 배지 중에서 성장시키고, 7 내지 10일의 간격으로 패시지하였다. 일부 경우들에서, 세포들을 저온 보존하고, 이식 전에 해동시켰다. 지방 조직 유래 간질 줄기세포들 (ADSC)의 성장 속도는 혈청 농도에 의존하였으며, 5% 내지 10% FBS 사이에서 최대 증식을 나타내었다 (도 4). 이들 농도의 혈청에서 평균 개체군이 두 배가 되는 시간은 37.6±0.6 시간이었으며, 이는 동일한 조건 하에서 배양된 인간 활막 섬유모세포의 개체군이 두 배가 되는 시간과 현저히 다르지 않았다 (35.6±1.4 시간; p>0.05; t-검정; 세 개의 독립된 실험들로부터의 결과).
보다 표준화되고 덜 주관적인 방식으로 세포들을 분석하기 위하여, 상기 세포들을 형광 활성화 세포 선택장치 (FACS) 분석에 투입하였다. 일반적으로, 유동 세포 분석은 항체들에 의한 표면 항원들의 검출을 허용하며, 여기에서 항체들은 직접적으로 (공유결합) 또는 간접적으로 (이차적으로 형광-표지된 항체) 형광 마커에 연결된다. 한편, 상기 기재된 면역조직화학적 분석은 세포들의 투과화 및 이후의 항체를 이용한 염색을 요구하였다. 이에 따라, 후자는 타겟 단백질 및 항체에 의존하는 개별적으로 최적화된 프로토콜을 필요로 한다. 또한, 세포막의 투과화로 인하여, 내부 (막에 결합되지 않은) 및 세포 외 마커 단백질을 구분하는 것이 불가능하다. 즉, 면역조직화학적 분석으로, 단백질 마커가 발현되는지의 여부를 아는 것은 가능하지만, 그것이 세포 표면에서 발현되는지 또는 세포 내에서 발현되는지를 구분하는 것은 불가능하다.
표면 항원들의 검출을 위한 면역세포분석기에서 사용된 프로토콜은 표준화되며, 단지 적절한 음성 대조구를 필요로 한다. 또한, FACS 분석은 양성 세포들의 비율 (%) (표면 항원을 발현하는 세포들) 및 발현 수준(하나의 세포 상에서 소수 또는 다수의 표면 항원들)의 평가를 가능하게 한다. 이들 평가들은 면역조직화학 사용의 종속적인 성질일 뿐이며, FACS 분석이 일어나지 않는, 각 실험에 따라 다양할 수 있다.
세포들의 이러한 면역표현형 특징화는 신선하게 분리된 세포들 상에서 수행 될 수 있으며, 배양 기간 후, 예로서 배양 7일 째에, 4주 후 및 3 달 후에 수행될 수 있다. 상이한 시간에서 표면 마커들의 분석은 배양 동안 표현형의 동종성의 평가를 가능하게 한다. 3 명의 건강한 공여자들로부터 수득한 샘플들을 0 내지 3 달 배양하여 얻은 표현형을 나타내는 이러한 분석 및 데이타의 예들은 미국 특허출원 제 11/065,461 호 (2005년 2월 25일 출원)에 기재되어 있으며, 이는 여기에 참조로서 포함되었다.
상기 기재된 방법에 의한 분리 후, 환자들 중 하나로부터의 지방 유래 간질 줄기 세포들을 일련의 표면 마커들의 존재/부재의 함수로 특징화하였다. 이를 실시하기 위하여, 하기 표면 마커들의 발현을 유동 세포 분석에 의해 모니터링하였다:
인테그린: CD11b, CD18, CD29, CD49a, CD49b, CD49d, CD49e, CD49f, CD51, CD61, CD104.
조혈모세포 마커들: CD3, CD9, CD10, CD13, CD16, CD14, CD19, CD28, CD34, CD38, CD45, CD90, CD133, 글리코포린.
성장 인자 수용체들: CD105, NGFR.
세포외 기질 수용체들: CD15, CD31, CD44, CD50, CD54, CD62E, CD62L, CD62P, CD102, CD106, CD146, CD166.
기타: CD36, CD55, CD56, CD58, CD59, CD95, HLA-I, HLA-II, β2-마이크로글로불린.
특징화될 세포들을 트립신으로 적당히 분해하여 수집하고, PBS로 세척하고, 플루오레세인 (FITC) 또는 파이코에리트린 (PE) 표지된, 분석될 표면 마커들 각각에 대한 항체 마커들과 함께 4℃ 에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포 마커들을 세척하고, Epics-XL 세포분석기 (Coulter)를 사용하여 즉시 분석하였다. 대조구로서, FITC 또는 PE로 표지된 대응 아이소토프들의 비특이적 항체들로 염색된 세포들을 사용하였다.
표면 마커들의 발현 프로파일의 분석으로부터 (도 7A/7B), 어떤 마커들이 세포 개체군을 규정하고, 다른 유형들의 세포에 대하여 그 개체군이 동정 및 분화되도록 하는 것을 가능하게 하는지 결정하는데 사용된 기준은 다음과 같다:
1. 여기에 참조로 포함된, 미국 특허 출원 제 11/065,461 호 (2005년 2월 25일 출원)에서 건강한 공여자들의 지방 유래 간질 줄기 세포들을 사용하여 수행된 실험에서의 배양 동안, 하나의 샘플에서 다른 것으로 변화하거나 또는 시간에 따라 변화하는 마커들은 버린다.
2. 그들의 생물학적 관련성의 함수로서 마커들을 선발하고, 특이적 세포 유형들에 특징적인 마커들은 버린다 (예로서, CD3은 림프구에 한정적인 마커이다).
이들 기준을 적용하여, 다능 줄기 세포 개체군을 CD9+, CD10+, CD13+, CD29+, CD44+, CD49A+, CD51+, CD54+, CD55+, CD58+, CD59+, CD90+ 및 CD105+에 대한 양성인 것으로서; 및 CD11b, CD14, CD15, CD16, CD31, CD34, CD45, CD49f, CD102, CD104, CD106 및 CD133의 발현을 결여하는 것으로서 특징화한다.
실시예 3: 누공의 치료에의 사용을 위한 피브린 글루를 포함하는 줄기 세포 들의 제조
임상적 사용을 위해, 상기 제조된 세포들은 3 이하의 패시지들 후에 사용할 수 있으나 (도 3), 바람직하게는 보다 높은 동종성을 갖는 세포 제제를 제공하기 위하여 상기 기재된 것과 같이 2 회 이상의 패시지 후에 사용된다. 임상적 사용을 위한 세포 배양물들을 37℃ 에서 3 분 동안 트립신화하였다. 트립신화는 FBS 부가된 DMEM의 첨가에 의해 중단되었으며, 그 현탁액을 110 x g 에서 5 분 동안 원심분리하였다. 세포들을 PBS 중에서 세척하고, 그 현탁액을 150 x g 에서 5 분 동안 원심분리하였다. 세포들을 3 내지 30 x106 세포들/ml 로, 1 내지 2 ml의 링거 락테이트 용액 중에 재현탁하고 적당한 주사기 내에 넣었다. 인간 혈청 알부민 (HSA)을 상기 링거 락테이트 용액에 임의로 첨가할 수 있다.
특정 경우들에서, 누공의 통로들의 폐색을 개선하기 위한 시도로, 키트의 두 개의 성분들의 조합 전에, 세포들의 절반을 피브린 글루 키트 (Tissucol®Duo 2.0; Baxter, Madrid, Spain) 의 트롬빈 성분 내에 재현탁시켰다. 누공의 개구를 채우기 위한 피브린 글루의 용도는 본 기술 분야에서 공지이다; 그러나, 이는 누공에 대한 독립적인 치료로서는 효과적이지 않다. 피브린 글루의 여기 기재된 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물들에의 첨가는 세포들을 국부적으로 보유하는 역할을 하며, 본 발명자들은 세포들이 피브린 글루 및 겔들 내부에서 잘 성장한다는 것을 관찰하였다.
실시예 4: 리포아스피레이트로부터의 줄기 세포들의 제제를 사용하는, 누공의 복구를 위한 향상된 외과적 절차
본 발명자들은, 크론 누공의 치료를 위하여 상기 기재된 지방 조직 간질 줄기 세포 조성물을 사용하는 자가이식 줄기 세포 이식의 실행가능성 및 안전성을 시험하기 위해 설계된 임상 시험 제 I 상을 수행하였다. 상기 프로토콜은 2002년 4월 12일 La Paz 병원의 임상시험 및 윤리 위원회 (Clinical Trial and Ethics Committeee)에 의해 승인되었으며, 상세한 사전 동의 양식은 환자들에 의해 서명받도록 만들어졌다. 상기 윤리 위원회는 임상 시험 동안에 걸쳐, 연구의 진전에 대하여 보고를 받았다.
방법
하기 포함 기준에 따라 환자들을 선발하였다: 18 세 이상; 시험 전 적어도 5 년의 크론병 진단; 의약 치료에 반응을 보이지 않았으며 적어도 2 회의 종래 수술에 의해 성공적이지 않은 치료를 받은, 하나 이상의 복합 크론 누공의 존재 (장피부루, 상괄약근형 치루, 및/또는 직장질루); 및 사전 동의 양식의 서명이 있는, 참가에 대한 동의. 배제 기준은 다음과 같았다: 포함 기준의 충족 실패; 정신적 장애, 지나치게 야윔; 국부 마취제에 대한 알레르기; 암의 사전 진단; 및 AIDS.
5 명의 환자들 (번호. 001-005)을 본 연구에 등록시켰다. 남자 세 명 그리고 여자 세 명이었으며, 평균 연령은 35.1±2.4 년(범위: 31.2 내지 37.5년)이었다. 9 개의 세포 이식체들을 수행하였다: 직장질루에 3 개; 장피부루에 5 개 (한 환자에서 4 개의 상이한 누공; 및 상괄약근형 항문주변 치루에서 하나. 모든 장피 부루는 낮은 유동- 일일 당 50cc 미만-을 가졌으며, 복부 벽에 위치하였다 (표 1). 이 절차와 함께 총 비경구 영양, 레미캐드 (Remicaid) 또는 옥트레오트라이드 (Octreotride)로 처리된 환자는 없었다. 환자 001 및 002는, 첫 번째 지방흡입 후, 저온 저장에서 살아남은 줄기 세포들이 없었기 때문에 지방 흡입이 2 회 필요하였다.
한 환자는, 배양된 세포들의 세균 오염으로 인하여 제외되었다. 본 발명자들은 4 명의 환자들에서의 9 개의 누공을 패시지 3 또는 그 전의 자가이식 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들 (ADSC)로 접종하였다. 8 개의 접종된 누공들을 적어도 8 주 동안 매주 지켜보았다. 6 개의 누공에서, 외부 개구가 8 주 말에 내피 세포로 덮였으며, 따라서 이들 누공들은 치료된 것으로 여겨졌다 (75%). 다른 두 개의 누공에서는, 배설 흐름에서의 감소와 더불어, 외부 개구의 단지 불완전한 밀봉이 이루어졌다 (치료되지 않음: 25%). 이후 기간의 말기에서 임의의 환자에서 불리한 효과는 관찰되지 않았다 (적어도 6 개월 이상 2 년 이하).
장피부루의 경우, 모든 통로들은 깊게 스크래핑되었다. 직장질루의 경우, 본 발명자들은, 배면의 질 벽에서 떨어진, 질 접근방법을 사용하였다. 상기 갭을 완전히 분리하고, 직장 개구를 3/0 흡수성 스티치들로 밀봉하였다. 상기 직장 점막은 크론 병에 의해 손상되었었던 것으로 극히 연약하였다. 항문주변 치루의 경우, 주요 통로를 속을 도려내어 빼내고, 그 직장의 구멍을 경화성 점막을 통한 3/0 흡수성 스티치들로 밀봉하였다
바늘을 이용하여, 장피부루의 경우들에서, 본 발명자들은 통로의 벽 내로 세 포들을 주입하였다. 직장질루 및 항문주변 치루의 경우, 본 발명자들은 봉합된 내부 개구에 가까운, 직장 점막 내에 세포들을 주사하였다. 모든 경우에서, 본 발명자들은 주사 후 주사 영역에서 액체로 채워진 물집을 발견하였다 (도 5). 주사된 세포들의 수는 3 내지 30×106 이었으며, 이는 배양된 세포들의 성장에 따라 달라진다 (도 3).
접종물의 제조의 시작에서 주사의 종료까지의 시간은 모든 경우들에서 90 분 미만이었다. 장피부루의 경우에서, 통로들은 피브린 글루로 채워졌으며, 그 후 피부를 봉합하였다. 직장질루의 경우에서, 전진 플랩 (advancement flap)을 구축하였다. 부수적 통로들이 검출된 경우, 이들 역시 피브린 글루로 채웠다.
수술후 어떤 밴디지도 적용되지 않았다. 액체 섭취는 상기 절차 후 12 시간 후에 시작하였으며, 고형식은 그 후 6 시간 후에 시작되었다. 수술 후 1 내지 3일은, 환자를 퇴원시키고, 이후의 방문은 외래 환자 진찰실에서 예정되었다.
두 개의 조직병리학적 샘플들을 수득하였다. 한 표본 (환자 번호 002)은 장피부루의 영역으로부터 수득하였다 (이식 #2 후 7 달 및 이식 #3 후 10일에). 나머지 한 표본 (환자 번호 001)은 직장질 벽으로부터, 최초 이식 (이식 #1) 후 1년에, 이식 #6 과 관련된 외과 절차 동안 수득되었다. 이 표본들을 파라핀에 고정시키고, 절단하고, 헤마톡실린 (hematoxylin) 및 에오신 (eosin)으로 염색하고 평가하였다.
수술 후 8 주 동안 매주 후속 검사 일정을 잡았다. 8 주 후, 이전 관찰에 독립적으로, 외부 개구의 총 내피세포화가 명백한 경우, 환자들은 치료된 것으로 간주되었다. 8 주 후에는, 적어도 6 달 그리고 2년 이하 동안 매달 후속 검사가 있었다.
결과
5 명의 환자들을 본 연구에 포함시켰으며, 7 회의 지방 흡입을 수행하였다 (도 3). 환자 번호 003은, 배양된 리포아스피레이트된 세포들의 그람양성 세균에 의한 오염의 발견 결과로, 이식 절차 동안 시험으로부터 삭제되었다. 세균들은 오어코비아 잔티네오리티카 (Oerkovia xanthineolytica)로서 동정되었다. 환자 002에서의 장피부루는, 급성 패혈증을 초래한 새로운 장소포 (enterovesicular)루를 위한 응급 복부 수술 때문에, 본 연구에서 삭제되었다. 상기 개복술은 이식 영역의 재절개를 필요로 하였다. 따라서, 본 발명자들은 이 경우 최소 8 주의 후속 검사 계획을 고수할 수 없었다.
4 명의 환자들로부터의 9 개의 누공을, 3 이하의 패시지 후의 ADSC로 접종하였다 (도 3). 8 개의 누공이 본 연구에서의 보유에 적합한 것으로 고려되었으며, 적어도 8 주 동안 관찰되었다 (도 3). 6 개의 누공에서, 외부 개구는 8 주까지 내피세포화되었으며, 이들 누공은 치료된 것으로 간주되었다 (75%) (도 6). 나머지 2 개는, 환자에 의해 보고된 바에 따르면, 배출 흐름에서의 감소와 함께, 외부 개구의 단지 불완전한 밀봉만을 나타내었다 (25%; 치료되지 않음; 도 3). 주사된 세포들의 수 또는 배양 시간과 절차의 성공 간에는 직접적인 관련은 없었다. 또한, 환자의 성 또는 연령과 치료 간에도 직접적인 관련은 없었다. 본 발명자들이 수행 한 후속 연구들은, 20 x106 세포들의 초기 투여량이 적당하다는 것을 나타낸다. 본 발명자들은, 40 x106 세포들의 두 번째 투여량이, 첫 번째 투여가 실패한 경우 사용될 수 있음을 결정하였다. 보다 높은 세포 투여량이 바람직하며, 이는 보다 많은 세포 수가 조직 복구에서 보다 나은 치료 효과를 갖는다는 것을 본 발명자들이 관찰하였기 때문이다.
수술 및 이식 절차는 추가의 기술적 어려움 없이, 모든 9 개의 처리된 누공에서 수행되었다. 즉각적인 불리한 반응들 (예로서, 과민증, 알레르기성 반응들)은 연구된 임의의 경우들에서는 관찰되지 않았다.
두 개의 조직생리학적 샘플들을 수술 후 7 달 (장피부루) 및 1년 (직장질루)만에 수득하였다. 세포학적 형질전환은 완전한 일련의 조직생리학적 구획들에서 검출되지 않았다.
논의
이전의 보고에서, 본 발명자들은 의약 치료에 반응하지 않았던 재발성 직장질루를 가진 젊은 여성의 성공적인 세포-기재 치료를 설명하였다. 이에 따라, 본 발명자들은, 반응성이 없는 크론 누공의 치료를 위한 이러한 자가 이식 지방 조직 간질 줄기 세포 이식 (원래 프로토콜을 개선시킴)의 실행가능성 및 안전성을 평가하고, 피브린 글루와 협력된 지방 조직 간질 줄기 세포들의 이용을 시험하기 위하여 본 임상 시험 제 I 상을 설계하였다.
본 발명자들은 줄기 세포들의 공급원으로서 지방 조직을 선택하였으며, 이는 그들의 근원적 (myogenic) 분화능 및 누공이 근육 이식에 대해 잘 반응한다는 사실에 기인한다. 또한, 지방흡입 지방은 다량으로 입수가능하며, 환자에게 최소의 부작용으로 채집될 수 있다. 기타 군들은 골수 유래 줄기 세포들을 사용하였으나, 이러한 경우에서는, 일부 환자들, 예컨대 심근경색을 가진 환자들에게 위험할 수 있는 세포 고정화 과정이 요구된다. 우리의 연구에서는, 모든 지방흡입 절차들은 줄기 세포들의 특징을 갖는 임상적으로 유용한 수의 세포들을 산출하였다.
본 발명자들은, 계획된 프로그램에 따라 우리의 환자들을 지켜보았으며, 8 개의 절차들 중 6 개에서 완전한 치유를 관찰하였다. 크론 병은, 조직의 허약성 및 이들 환자들에서의 치유와 관련된 많은 문제들로 인하여, 누공에 대한 외과적 시도에 대해 최악의 조건을 제공한다는 것에 주의하는 것이 중요하다. 우리의 환자들은, 그들이 의약 치료 및 적어도 두 개의 이전의 수술 절차들에 반응하지 않았기때문에 선택되었으나, 본 발명자들의 치료는 상당히 효과적인 것으로 나타났다. 그럼에도 불구하고, 크론 병의 새로운 발발은, 임의의 소정 환자에서 새로운 누공을 여전히 생성할 수 있으며, 이는 그 환자로부터 저온 보관된 자가이식 세포들을 사용하여 다시 치료될 필요가 있을 것이다.
ADSC 이식의 치료적 성공에 깔려있는 생물학적 메커니즘은 알려지지 않았다. 줄기 세포들은 결합, 근육 또는 흉터 조직으로 분화될 수 있을 것이다. 선택적으로, 줄기 세포들에 의한 성장 인자들의 분비는 상처 치유를 촉진할 수 있을 것이다. 본 발명자들은 조직생리학적으로 시험된 누공에서 전형적인 흉터 조직을 보았으나, 국부 결합 조직 세포들과 이식된 것들을 구별하는 방법은 없다. 본 발명자 들은 우리의 처리를 사용하여 75% 의 경우에서 완전한 치유를 관찰하였다.
참고문헌
본 출원의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 본 분야의 기술에 속하는 세포 생물학, 세포 배양 분자 생물학, 유전자이식 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 및 면역학의 통상적인 기술들을 이용할 것이다. 이러한 기술들은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예로서, 하기 참조: Molecular Cloning　A Laboratory　Manual, 제 2 판, Sambrook, Fritsch 및 Maniatis 편집(Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989); DNA Cloning, I 및 II 권 (D. N. Glover 편집, 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait 편집, 1984); Mullis 등 U.S. 특허: 4,683,195; Nucleic Acid Hybridization(B. D. Hames 및 S. J. Higgins 편집. 1984); Transcription And Translation (B. D. Hames 및 S. J. Higgins 편집. 1984); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller 및 M. P. Calos 편집, 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods In Enzymology, 154 및 155권 (Wu 등, 편집), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer 및 Walker, 편집, Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, I-IV권 (D. M. Weir 및 C. C. Blackwell, 편집, 1986); Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986).
하기 열거된 것들을 포함하여, 여기 언급된 모든 간행물들 및 특허는, 각 개별적인 간행물 또는 특허가 참조에 의해 포함되어지는 것으로 특이적으로 및 개별적으로 나타내어진 것과 같이, 그 전체로 여기에 참조문헌으로 포함된다. 상충되는 경우, 여기에서의 임의의 정의를 포함하는 본 출원이 지배적일 것이다.
1. American Gastroenterological Association Medical Position Statement: Perianal Crohn's Disease. Gastroenterology (2003) 125:1503-1507.
2. Levy C, Tremaine WJ. Inflamm Bowel Dis (2002) 8(2):106-11.
3. Pennincke F, D'Hoore A, Filez L. Acta Gastroenterol Belg (2001) 64(2):223-226.
4. Rius J, Nessim A, Nogueras JJ, Wexner SD. Eur J Surg (2000) 166(3):218-222.
5. Mizuno H, Zuk PA, Zhu M, Lorenz HP, Benhaim P, Hedrick MH. Plastic Reconstr Surg (2002) 109(1): 199-209.
6. Zuk PA, Zhu M, Mizuno H, 등 Tissue Eng (2001) 7(2): 211-228.
7. Garcia-Olmo D, Garcia-Arranz M, Gomez-Garcia L 등 Int J Colorectal Dis (2003) 18: 451-454.
8. Abkowitz JL. New Engl J Med (2002) 346(10): 770-772.
9. Matsubara H. Lancet (2004) 363:746-747.
10. Cowan CM, Shi YY, Aalami 00, 등 Nat Biotechnol . (2004) 22(5):560-7
11. Garcia-Olmo D, Garcia-Olmo MA. New Eng J Med (2003) 349: 1480-1481.
12. Osawa M., Hanada K., Hanada H. and Nakauchi H. (1996) Science 273, 242-245.
13. Morrison S.J., Uchida N. 및 Weissman I.L. (1995) Annu . Rev . Cell Dev . Biol . 11, 35-71.
14. Ivanova N.B., Dimos J.T., Schaniel C., Hackney J. A., Moore K.A., Lemischka* I.R. (2002) Science 298, 601-604.
15. Phillips RL. (2000) Curr Top Microbiol Immunol. 251, 13-19.
16. Ramalho-Santos M, Yoon S, Matsuzaki Y, Mulligan RC, Melton DA. (2002) Science 298, 597-600.
17. De Ugarte DA, Morizono K, Elbarbary, AAlfonso Z, Zuk PA, Zhu M, Dragoo JL, Ashjian P, Thomas B, Benhaim P, Chen I, Fraser J, Hedrick MH. (2003) Cells Tissues Organs 174 (3), 101-109.
18. Friedenstein AJ, Gorskaja JF, Kulagina NN, Exp Hematol . (1976) Sep;4(5):267-74.
19. Caplan AI J Orthop Res. (1991) Sep;9(5):641-50
20. Pittenger, M.F. 등 (1999) Science 284: 143-147
21. Beresford JN, Bennett JH, Devlin C, Leboy PS, Owen ME, J Cell Sci . (1992) Jun;102 ( Pt 2):341-51
22. Yoo JU, Johnstone B, Clin Orthop. (1998) Oct;(355 Suppl):S73-81
23. Wakitani S. 등 (1995) Muscle Nerve 18: 1417-1426.
24. Haynesworth SE, Goshima J, Goldberg VM, Caplan AI, Bone. 1992;13(1):81-8.
25. Sanchez-Ramos J, Song S, Cardozo-Pelaez F, Hazzi C, Stedeford T, Willing A, Freeman TB, Saporta S, Janssen W, Patel N, Cooper DR, Sanberg PR, Exp Neurol. (2000) Aug;164(2):247-56.
26. Rogers JJ, Young HE, Adkison LR, Lucas PA, Black AC Jr, Am Surg . (1995) Mar;61(3):231-6.
27. Jiang Y, Vaessen B, Lenvik T, Blackstad M, Reyes M, Verfaillie CM, Exp Hematol. (2002) Aug;30(8):896-904.
28. Caplan AI, Bruder SP, Trends Mol Med. (2001) Jun;7(6):259-64.
29. Stanford, C.M. 등 (1995) J Biol Chem 270: 9420-9428.
균등물들
본 발명은, 다른 것들 중, 누공의 치료 및 예방을 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 당해 발명의 특이적인 구현예들이 논의되었지만, 상기 명세서는 예시적인 것이지 제한적이지는 않다. 본 발명의 많은 변화들은, 본 명세서 검토에 따라 당 기술분야의 숙련자들에게 명백할 것이다. 첨부된 청구의 범위는 이러한 모든 구현예들 및 변화들을 권리 청구하고자 하는 것은 아니며, 본 발명의 완전한 범주는 그 의 전 범주의 균등물과 더불어 클레임 및 그러한 변화들과 더불어 명세서를 참조로 하여 결정되어야 한다.

Claims (55)

  1. 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물에 있어서, 상기 조성물을 구성하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 적어도 약 50%가 CD9, CD10, CD13. CD29, CD44, CD49A. CD51, CD54, CD55, CD58, CD59 CD90 및 CD105 마커들(markers)을 발현하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물을 구성하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 적어도 약 85%가 CD9, CD10, CD13. CD29, CD44, CD49A. CD51, CD54, CD55, CD58, CD59 CD90 및 CD105 마커들을 발현하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 조성물을 구성하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 적어도 약 95%가 CD9, CD10, CD13. CD29, CD44, CD49A. CD51, CD54, CD55, CD58, CD59 CD90 및 CD105 마커들을 발현하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 조성물을 구성하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 적어도 약 99%가 CD9, CD10, CD13. CD29, CD44, CD49A. CD51, CD54, CD55, CD58, CD59 CD90 및 CD105 마커들을 발현하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 조성물을 포함하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 약 5% 미만이 CD34 CD11b, CD14, CD15, CD16, CD31, CD34, CD45, CD49f, CD102, CD104, CD106 및/또는 CD133 마커들을 발현하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 링거액 (Ringer's solution) 및 HSA를 더 포함하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 조성물을 구성하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 농도가 적어도 약 10 x 106 세포/mL인 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 조성물을 포함하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 농도가 적어도 약 20 x 106 세포/mL인 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  9. 제 1 항에 있어서, 접착제를 더 포함하는 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함 유 조성물.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 접착제가 피브린 글루 (fibrin glue) 또는 겔인 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물.
  11. 제 1 항의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물을 포함하는 지지체.
  12. 제 11 항에 있어서, 지지체가 봉합사 (suture)인 지지체.
  13. 제 11 항에 있어서, 지지체가 패치 (patch)인 지지체.
  14. 하기 단계들을 포함하는 제 1 항의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물의 제조방법: (a) 대상으로부터 지방 조직을 수집하는 단계; (b) 효소 절단에 의해 세포 현탁액을 수득하는 단계; (c) 세포 현탁액을 침강시키고, 배양 배지 중에 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 재현탁하는 단계; (d) 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 적어도 10일 동안 배양하는 단계; 및 (g) 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 적어도 2 회 패시지하는(passaging) 단계.
  15. 제 14 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기세포들이 적어도 20일 동안 배양되는 제조방법.
  16. 제 14 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 적어도 3 회 패시지하는 것을 포함하는 제조방법.
  17. 제 1 항의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물을 피브린-기재 중합체와 함께 현탁하는 것을 포함하는 누공 복구용 접착제의 제조방법.
  18. 하기 단계들을 포함하는, 대상에서 누공의 치료방법: (a) 봉합사로 내부 구멍을 밀봉하는 단계 및 (b) 적어도 약 10 x 106 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 상기 밀봉 봉합된 내부 구멍으로 송달하는 단계.
  19. 제 18 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기세포들이 제 1 항의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물을 포함하는 치료방법.
  20. 제 18 항에 있어서, 하기 단계들을 더 포함하는 치료방법: (d) 적어도 하나의 누공 통로를 깊게 스크래핑(scraping)하는 단계, 및 (e) 상기 누공 통로를 접착제로 충전하는 단계.
  21. 제 20 항에 있어서, 하기 단계를 더 포함하는 치료방법: (f) 적어도 약 10 x 106 의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 접착제로 송달하는 단계.
  22. 제 20 항에 있어서, 접착제가 피브린 글루 또는 겔인 치료방법.
  23. 제 21 항에 있어서, 접착제가 제 1 항의 지방 조직 유래 간질 줄기세포 함유 조성물을 더 포함하는 치료방법.
  24. 제 18 항에 있어서, 다음 단계를 더 포함하는 치료방법: (c) 적어도 약 20 x 106 의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 이차 투여량을 송달하는 단계.
  25. 제 18 항에 있어서, 적어도 약 20 x 106 의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 송달하는 것을 포함하는 치료방법.
  26. 제 25 항에 있어서, 다음 단계를 더 포함하는 치료방법: (c) 적어도 약 40 x 106 의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 이차 투여량을 송달하는 단계.
  27. 제 18 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기세포들이 대상의 지방 조직으로부터 유래된 것인 치료방법.
  28. 제 18 항에 있어서, 누공이 항문직장루(anorectal), 창자사이루, 장피부(enterocutaneous)루, 직장질(rectovaginal)루 또는 방광질(vesicovaginal)루인 치료방법.
  29. 제 18 항에 있어서, 치료제를 대상에게 투여하는 것을 더 포함하는 치료방법.
  30. 제 29 항에 있어서, 치료제가 밀봉 봉합된 내부 구멍에 국부적으로 투여되는 치료방법.
  31. 제 30 항에 있어서, 치료제가 대상에게 전신 투여되는 치료방법.
  32. 다음 단계들을 포함하는, 대상에서의 상처 치료방법: (a) 상처를 봉합사로 밀봉하는 단계 및 (b) 적어도 약 10 x 106 의 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 밀봉 봉합된 상처로 송달하는 단계.
  33. 제 23 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기세포들이 제 1 항의 세포 조성물을 포함하는 치료방법.
  34. c-Kit, 바이멘틴 (vimentin) 및 CD90 마커들은 발현하고, CD34, 인자 VIII, 알파-액틴, 데스민 (desmin), S-100 및 케라틴 마커들은 발현하지 않는 지방 조직 유래 간질 줄기세포.
  35. CD9, CD10, CD13. CD29, CD44, CD49A. CD51, CD54, CD55, CD58, CD59 CD90 및 CD105 마커들은 발현하고, CD34 CD11b, CD14, CD15, CD16, CD31, CD34, CD45, CD49f, CD102, CD104, CD106 및/또는 CD133 마커들은 발현하지 않는 지방 조직 유래 간질 줄기세포.
  36. 대상에서 누공을 치료하기 위한 약학 조성물의 제조에서의, 지방 조직 유래 간질 줄기세포들의 용도.
  37. 제 36 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들이 치료될 대상의 지방 조직으로부터 유래된 것인 용도.
  38. 제 36 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들이 제 1 항 내지 10 항, 제 34 항 또는 제 35 항 중 어느 한 항에서 정의된 것과 같은 지방 조직 유래 간질 줄기 세포 함유 조성물을 포함하는 용도.
  39. 제 36 항에 있어서, 약학 조성물이 적어도 약 10×106 의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 포함하는 용도.
  40. 제 36 항에 있어서, 약학 조성물이, 첫 번째 투여로서, 내부 구멍을 봉합사로 밀봉한 후, 누공 통로의 밀봉된 내부 구멍으로 송달되는 용도.
  41. 제 36 항에 있어서, 약학 조성물이, 첫 번째 투여로서, 누공 통로의 내부 구멍을 봉합사로 밀봉한 후, 누공 통로의 벽들에서 하나 이상의 자리들에 송달되는 용도.
  42. 제 40 항 또는 제 41 항에 있어서, 약학 조성물이 적어도 약 10× 106의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 포함하는 용도.
  43. 제 40 항 또는 제 41 항에 있어서, 약학 조성물의 두 번째 투여가, 상기 약학 조성물의 상기 첫 번째 투여 후, 밀봉 봉합된 내부 구멍 또는 누공 통로의 벽들에서 하나 이상의 자리들에 송달되는 용도.
  44. 제 43 항에 있어서, 약학 조성물의 두 번째 투여가 적어도 약 20×106 의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 포함하는 용도.
  45. 제 36 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들이 봉합사 중에 포함된 용도.
  46. 제 36 항에 있어서, 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들이 누공 통로를 충진하기 위한 물질로 송달되는 용도.
  47. 제 46 항에 있어서, 물질이 피브린-기재 중합체 또는 접착제, 예컨대 피브린 글루 또는 겔인 용도.
  48. 제 36 항에 있어서, 누공이 항문직장루, 치루 (fistula-in-ano), 분변루 (fecal fistula), 동정맥루, 담도루, 자궁경부루 (cervical fistula), 두개골동 (craniosinus)루, 창자사이루, 장피부루, 창자질루, 위(gastric)루, 자궁복막 (metroperitoneal)루, 외림프 (perilymph)루, 폐동정맥루, 직장질루, 제대루, 기관지식도루 또는 방광질루인 용도.
  49. 제 48 항에 있어서, 누공이 항문직장루, 창자직장루, 장피부루, 직장질루 또는 방광질루인 용도.
  50. 제 36 항에 있어서, 약학 조성물이 치료제와 조합하여 치료될 대상에게 투여 되는 용도.
  51. 제 50 항에 있어서, 치료제가 봉합 자리에서 전신으로 또는 국부적으로 투여되는 용도.
  52. 제 51 항에 있어서, 약학 조성물이 치료제를 포함하는 용도.
  53. 제 50 항에 있어서, 치료제가 지방 조직 유래 간질 줄기세포들을 포함하는 약학 조성물에 대해 별도로 투여되는 용도.
  54. 제 50 항에 있어서, 치료제가 소염제, 면역억제제, 생물학적 약제 (biological agent), 항생제 또는 지사제인 용도.
  55. 하기 단계들을 포함하는, 대상에서 누공의 치료방법:
    (i) 적어도 하나의 누공 통로를 깊게 스크래핑하는 단계;
    (ii) 상기 스크래핑된 통로의 내부 구멍을 봉합사로 밀봉하는 단계;
    (iii) 적어도 약 10×106 의 지방 조직 유래 간질 줄기 세포들을 상기 밀봉 봉합된 내부 구멍으로 송달하는 단계.
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Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8455458B2 (en) * 2002-10-16 2013-06-04 Arthrodynamic Technologies, Animal Health Division, Inc. Composition and method for treating connective tissue damage
US7803787B2 (en) * 2002-10-16 2010-09-28 Arthrodynamic Technologies, Animal Health Division, Inc. Composition and method for treating connective tissue damage by transmucosal administration
US20060045872A1 (en) 2004-08-25 2006-03-02 Universidad Autonoma De Madrid Ciudad Universitaria de Cantoblanco Use of adipose tissue-derived stromal stem cells in treating fistula
WO2006121792A2 (en) 2005-05-05 2006-11-16 Archipelago Holdings, Inc. Unpriced order auction and routing
US20070027543A1 (en) * 2005-08-01 2007-02-01 Gimble Jeffrey M Use of adipose tissue-derived stromal cells in spinal fusion
LT1926813T (lt) 2005-09-23 2016-11-10 Tigenix, S.A.U. Ląstelių populiacijos, pasižyminčios imunoreguliaciniu aktyvumu, izoliavimo būdas ir panaudojimas
JP5131833B2 (ja) * 2005-10-05 2013-01-30 晃文 松山 脂肪組織由来細胞から膵内分泌細胞を得る方法
WO2007064819A2 (en) * 2005-12-02 2007-06-07 Cook Incorporated Devices, systems, and methods for occluding a defect
US20090209031A1 (en) * 2006-01-26 2009-08-20 Tyco Healthcare Group Lp Medical device package
US8592209B2 (en) * 2006-01-30 2013-11-26 University Of Virginia Patent Foundation Methods of preparing and characterizing mesenchymal stem cell aggregates and uses thereof
US20070224173A1 (en) * 2006-03-21 2007-09-27 Koullick Edouard A Nonexpansion Protocol for Autologous Cell-Based Therapies
WO2008024996A2 (en) 2006-08-24 2008-02-28 Johnstone Brian H Production of neural protective and regenerative factors from stem cells and treatment of nervous system conditions therewith
JP2010505849A (ja) * 2006-10-06 2010-02-25 ユニバーシティ オブ バージニア パテント ファウンデーション 糖尿病性創傷治癒に有用な方法および組成物
KR20080103637A (ko) * 2007-05-25 2008-11-28 주식회사 알앤엘바이오 지방유래 줄기세포를 함유하는 사지말단부 허혈성 질환의세포치료용 조성물
US9186375B2 (en) 2007-06-21 2015-11-17 Arthrodynamic Technologies, Animal Health Division, Inc. Glycosaminoglycan compositions in combination with stem cells
AU2014227541B2 (en) * 2007-09-19 2015-10-01 Pluristem Ltd. Methods of Treating Inflammatory Colon Diseases
CN102123717A (zh) * 2008-05-27 2011-07-13 普拉里斯坦有限公司 治疗炎性结肠疾病的方法
US9144584B2 (en) * 2008-06-11 2015-09-29 Cell4Vet Corporation Adipose tissue-derived stem cells for veterinary use
JP5763535B2 (ja) 2008-06-24 2015-08-12 バイオアクティブ サージカル インコーポレイテッド 幹細胞または他の生理活性材料が組み込まれた外科手術用縫合糸
US20100098739A1 (en) * 2008-10-20 2010-04-22 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for modular soft tissue repair
US20100112696A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Baxter International Inc. Apparatus And Methods For Processing Tissue To Release Cells
US8309343B2 (en) 2008-12-01 2012-11-13 Baxter International Inc. Apparatus and method for processing biological material
CN102421444B (zh) * 2009-04-28 2016-08-03 安特罗根有限公司 用于治疗瘘的自体和异体脂肪来源的基质干细胞组合物
US9352003B1 (en) 2010-05-14 2016-05-31 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US8883210B1 (en) 2010-05-14 2014-11-11 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US10130736B1 (en) 2010-05-14 2018-11-20 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US9669200B2 (en) 2010-08-06 2017-06-06 Boston Scientific Scimed, Inc. Systems and methods for the treatment of pelvic disorders including magnetic particulates
US9180172B2 (en) 2010-12-15 2015-11-10 Ams Research Corporation Treatment of Peyronies disease
US8979797B2 (en) 2010-12-16 2015-03-17 Ams Research Corporation High pressure delivery system and method for treating pelvic disorder using large molecule therapeutics
ES2479544T1 (es) 2011-01-12 2014-08-20 Tigenix, S.A.U. Células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo para administración intralinfática en enfermedades autoimmunes e inflamatorias
EP2683813A1 (en) * 2011-03-11 2014-01-15 TiGenix, S.A.U. Cell populations having immunoregulatory activity, method for isolation and uses
US8834928B1 (en) 2011-05-16 2014-09-16 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissugenic implants, and methods of fabricating and using same
CL2011001904A1 (es) * 2011-08-08 2012-03-09 Univ Pontificia Catolica Chile Formulacion farmaceutica que comprende celulas madres mesenquimales vivas suspendidas en un vehiculo farmaceuticamente aceptable, sistema de aplicacion topica en aerosol que las comprende; y su uso para tratar heridas.
US20130072903A1 (en) * 2011-09-20 2013-03-21 John Chapman Adipose Tissue Graft for Wound Healing
GB201202319D0 (en) * 2012-02-10 2012-03-28 Orbsen Therapeutics Ltd Stromal stem cells
US20140024011A1 (en) * 2012-07-23 2014-01-23 AdiCyte, Inc. Method for Preparing Adipose Tissue
US20150258249A1 (en) * 2012-10-18 2015-09-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research Techniques for treatment of abscesses
WO2014186854A1 (pt) * 2013-05-24 2014-11-27 Universidade Estadual De Campinas - Unicamp Processo de obtenção de fio de sutura enriquecido com celulas-tronco, fios obtidos, kit de sutura e seus usos
US20150037436A1 (en) 2013-07-30 2015-02-05 Musculoskeletal Transplant Foundation Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same
US20170327584A1 (en) 2014-11-26 2017-11-16 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Vedolizumab for the Treatment of Fistulizing Crohn's Disease
RU2588835C1 (ru) * 2014-11-27 2016-07-10 Олег Германович Макеев Способ терапии повреждений кожи и биотрансплантат для его осуществления
US10531957B2 (en) 2015-05-21 2020-01-14 Musculoskeletal Transplant Foundation Modified demineralized cortical bone fibers
US10912864B2 (en) 2015-07-24 2021-02-09 Musculoskeletal Transplant Foundation Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same
US11052175B2 (en) 2015-08-19 2021-07-06 Musculoskeletal Transplant Foundation Cartilage-derived implants and methods of making and using same
GB201604304D0 (en) 2016-03-14 2016-04-27 Tigenix S A U Adipose tissue-derived stromal stem cells for use in treating refractory complex perianal fistulas in crohn's disease
CA3030466A1 (en) * 2016-07-12 2018-01-18 Centre National De La Recherche Scientifique Compositions useful for mucosal healing
IT201700043316A1 (it) * 2017-04-20 2018-10-20 Lipogems Int S P A Drug delivery system
JP6999918B2 (ja) * 2017-08-21 2022-02-04 学校法人慶應義塾 血小板表面抗原と間葉系細胞表面抗原を共発現する血小板様細胞を含む創傷治癒促進剤
US11116737B1 (en) 2020-04-10 2021-09-14 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods of using probenecid for treatment of coronavirus infections
CN111840645B (zh) * 2020-07-29 2022-04-01 沈阳细胞治疗工程技术研发中心有限公司 一种瘘洞修补制剂及其制备方法
CN114949361A (zh) * 2021-12-31 2022-08-30 浙江金时代生物技术有限公司 一种用于子宫内膜修复的聚乳酸-羟基乙酸共聚物支架与人脐带间充质干细胞复合物的制备方法

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4298002A (en) 1979-09-10 1981-11-03 National Patent Development Corporation Porous hydrophilic materials, chambers therefrom, and devices comprising such chambers and biologically active tissue and methods of preparation
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5143842A (en) 1988-11-01 1992-09-01 The University Of Colorado Foundation, Inc. Media for normal human muscle satellite cells
US5145770A (en) * 1990-06-04 1992-09-08 Biosurface Technology, Inc. Cryopreservation of cultured epithelial sheets
US5149543A (en) 1990-10-05 1992-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Ionically cross-linked polymeric microcapsules
US6010696A (en) * 1990-11-16 2000-01-04 Osiris Therapeutics, Inc. Enhancing hematopoietic progenitor cell engraftment using mesenchymal stem cells
US5486359A (en) 1990-11-16 1996-01-23 Osiris Therapeutics, Inc. Human mesenchymal stem cells
US5733542A (en) 1990-11-16 1998-03-31 Haynesworth; Stephen E. Enhancing bone marrow engraftment using MSCS
EP0662882B1 (de) 1992-10-10 1998-01-07 HEMSCHEIDT FAHRWERKTECHNIK GmbH & Co. Hydropneumatisches federungssystem
EP0672033B1 (en) 1992-12-02 1998-03-11 Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. Azoxycyanobenzene derivatives
US5709854A (en) * 1993-04-30 1998-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Tissue formation by injecting a cell-polymeric solution that gels in vivo
US5578475A (en) 1993-07-12 1996-11-26 Life Technologies, Inc. Composition and methods for transfecting eukaryotic cells
US6174333B1 (en) * 1994-06-06 2001-01-16 Osiris Therapeutics, Inc. Biomatrix for soft tissue regeneration using mesenchymal stem cells
DE69531638T2 (de) * 1994-06-06 2004-06-17 Osiris Therapeutics, Inc. Biomatrix für geweberegenaration
ATE285477T1 (de) 1995-06-07 2005-01-15 Inex Pharmaceutical Corp Herstellung von lipid-nukleinsäure partikeln duch ein hydrophobische lipid-nukleinsäuree komplexe zwischenprodukt und zur verwendung in der gentransfer
US6051429A (en) 1995-06-07 2000-04-18 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
WO1997006241A1 (en) 1995-08-04 1997-02-20 The General Hospital Corporation Transgenic swine and swine cells having human hla genes
US5744335A (en) 1995-09-19 1998-04-28 Mirus Corporation Process of transfecting a cell with a polynucleotide mixed with an amphipathic compound and a DNA-binding protein
US5705308A (en) 1996-09-30 1998-01-06 Eastman Kodak Company Infrared-sensitive, negative-working diazonaphthoquinone imaging composition and element
AU6242298A (en) * 1997-01-17 1998-08-07 Celadon Science, Llc Methods for promoting healing of corneal resurfacing wounds
AU1615599A (en) 1997-12-02 1999-06-16 Zen Bio, Inc. Differentiation of adipose stromal cells into osteoblasts and uses thereof
EP1058555B1 (en) 1998-02-04 2004-04-28 The General Hospital Corporation Costimulatory blockade and mixed chimerism in allotransplantation
US6368636B1 (en) 1998-03-18 2002-04-09 Osiris Therapeutics, Inc. Mesenchymal stem cells for prevention and treatment of immune responses in transplantation
US9585916B2 (en) 1999-03-26 2017-03-07 Northern Therapeutics Inc. Cell based therapy for the pulmonary system
JP2002510655A (ja) 1998-04-03 2002-04-09 オシリス セラピューティクス，インコーポレイテッド 免疫抑制剤としての間葉幹細胞によるｔ細胞応答を阻害する方法とその利用
US6546105B1 (en) 1998-10-30 2003-04-08 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Sound image localization device and sound image localization method
KR100870508B1 (ko) 1999-03-10 2008-11-25 유니버시티 오브 피츠버그 오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션 지방 유래 간세포 및 격자
US6777231B1 (en) 1999-03-10 2004-08-17 The Regents Of The University Of California Adipose-derived stem cells and lattices
US20030082152A1 (en) 1999-03-10 2003-05-01 Hedrick Marc H. Adipose-derived stem cells and lattices
US20050153442A1 (en) * 1999-03-10 2005-07-14 Adam Katz Adipose-derived stem cells and lattices
AU5301100A (en) * 1999-05-28 2000-12-18 Pacgen Technologies Llc A method of using autologous fibroblasts to promote healing of wounds and fistulas
US7670628B2 (en) 1999-07-07 2010-03-02 Angioblast Systems, Inc. Mesenchymal precursor cell
US6555374B1 (en) 1999-08-19 2003-04-29 Artecel Sciences, Inc. Multiple mesodermal lineage differentiation potentials for adipose tissue-derived stromal cells and uses thereof
US7078232B2 (en) * 1999-08-19 2006-07-18 Artecel, Inc. Adipose tissue-derived adult stem or stromal cells for the repair of articular cartilage fractures and uses thereof
US20010046489A1 (en) 1999-12-06 2001-11-29 Habener Joel E. Stem cells of the islets of langerhans and their use in treating diabetes mellitus
WO2002067867A2 (en) 2001-02-23 2002-09-06 The University Of Pittsburgh Rapid preparation of stem cell matrices for use in tissue and organ treatment and repair
US20030054331A1 (en) 2001-09-14 2003-03-20 Stemsource, Inc. Preservation of non embryonic cells from non hematopoietic tissues
EP1451300A4 (en) 2001-11-09 2007-01-10 Artecel Sciences Inc METHODS AND COMPOSITIONS IN WHICH STROMAL CELLS ARE USED TO SUPPORT EMBRYONIC AND ADULT STEM CELLS
AU2002346648A1 (en) * 2001-12-04 2003-06-17 Christopher J Woolverton Storage-stable fibrin sealant
US7771716B2 (en) 2001-12-07 2010-08-10 Cytori Therapeutics, Inc. Methods of using regenerative cells in the treatment of musculoskeletal disorders
CN1281739C (zh) * 2002-02-19 2006-10-25 美迪宝斯特有限公司 从脐带血中分离并扩大培养间充质干细胞/祖细胞及将脐带血来源的间充质干细胞/祖细胞分化成各种间充质组织的方法
AU2003225791A1 (en) 2002-03-15 2003-09-29 Department Of Veterans Affairs, Rehabilitation R And D Service Methods and compositions for directing cells to target organs
US20040009534A1 (en) * 2002-06-14 2004-01-15 Dyax Corporation Protein analysis
CA2489212C (en) 2002-06-14 2012-08-14 Cartela Ab Marker for stem cells and its use
US20040101959A1 (en) * 2002-11-21 2004-05-27 Olga Marko Treatment of tissue with undifferentiated mesenchymal cells
JP2004190976A (ja) * 2002-12-12 2004-07-08 Sony Corp 熱輸送装置及び電子デバイス
WO2004071283A2 (en) * 2003-02-13 2004-08-26 Anthrogenesis Corporation Use of umbilical cord blood to treat individuals having a disease, disorder or condition
CA2784829C (en) 2003-04-01 2015-10-06 United States Of America Department Of Veteran's Affairs Stem-cell, precursor cell, or target cell-based treatment of multi-organ failure and renal dysfunction
ES2265199B1 (es) 2003-06-12 2008-02-01 Cellerix, S.L. Celulas madre adultas multipotentes procedentes de condrocitos desdiferenciados y sus aplicaciones.
JP4950660B2 (ja) 2003-06-27 2012-06-13 エチコン、インコーポレイテッド 分娩後由来細胞を使用する眼組織の修復および再生
US7645229B2 (en) * 2003-09-26 2010-01-12 Armstrong David N Instrument and method for endoscopic visualization and treatment of anorectal fistula
JP4749331B2 (ja) 2003-10-07 2011-08-17 株式会社バイオマスター 脂肪由来前駆細胞の細胞分化
US9631176B2 (en) 2003-11-04 2017-04-25 Biomaster, Inc. Method for preparing stem cells from fat tissue
US7968126B2 (en) 2003-12-24 2011-06-28 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Creation of a biological atrioventricular bypass to compensate for atrioventricular block
US20080095749A1 (en) 2004-03-22 2008-04-24 Sudeepta Aggarwal Mesenchymal stem cells and uses therefor
EP2298862B1 (en) 2004-03-22 2017-08-30 Mesoblast International Sàrl Mesenchymal stem cells and uses therefor
RU2252252C1 (ru) 2004-04-09 2005-05-20 Тепляшин Александр Сергеевич Способ выделения мезенхимальных стволовых клеток
ES2313805B1 (es) * 2004-10-04 2009-12-23 Cellerix, S.L. Identificacion y aislamiento de celulas multipotentes de tejido mesenquimal no osteocondral.
ES2264862B8 (es) 2004-08-25 2017-01-20 Cellerix, S.L. Biomaterial para sutura.
US20060045872A1 (en) * 2004-08-25 2006-03-02 Universidad Autonoma De Madrid Ciudad Universitaria de Cantoblanco Use of adipose tissue-derived stromal stem cells in treating fistula
WO2006029347A2 (en) 2004-09-03 2006-03-16 University Of Maryland, Baltimore Integrin cd18 is a novel stromal stem cell marker and functions to promote osteogenesis
US20060286089A1 (en) 2005-04-08 2006-12-21 Xcyte Therapies, Inc. Compositions and methods for the treatment of burns and sepsis
LT1926813T (lt) 2005-09-23 2016-11-10 Tigenix, S.A.U. Ląstelių populiacijos, pasižyminčios imunoreguliaciniu aktyvumu, izoliavimo būdas ir panaudojimas
EP1795588A1 (en) 2005-12-07 2007-06-13 Cellerix, S.L. Use of adipose tissue derived mesenchymal stem cells for the treatment of graft versus host disease
US20120269774A1 (en) 2006-09-21 2012-10-25 Medistem Laboratories, Inc Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients
US20110262402A1 (en) 2007-09-07 2011-10-27 Masahiko Kuroda Therapeutic and prophylactic agents for arthritis
SI2200622T2 (sl) 2007-09-19 2015-09-30 Pluristem Ltd. Adherentne celice iz adipoznih ali placentnih tkiv in njihova uporaba pri terapiji
JP5539886B2 (ja) 2007-10-17 2014-07-02 ティクセル Ｔｒ１細胞、間葉系幹細胞およびその使用
GB0814249D0 (en) 2008-08-04 2008-09-10 Cellerix Sa Uses of mesenchymal stem cells
ES2345867B1 (es) 2009-04-03 2011-07-28 Fundacion Instituto Mediterraneo Para La Biotecnologia Y La Investigacion Sanitaria (Imabis) Celulas madre multipotentes derivadas de estroma de mesenterio.
CN102421444B (zh) 2009-04-28 2016-08-03 安特罗根有限公司 用于治疗瘘的自体和异体脂肪来源的基质干细胞组合物
US8679834B2 (en) 2009-07-09 2014-03-25 TiGenix S.A.U Methods and compositions for use in cellular therapies
ES2479544T1 (es) 2011-01-12 2014-08-20 Tigenix, S.A.U. Células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo para administración intralinfática en enfermedades autoimmunes e inflamatorias
EP2683813A1 (en) 2011-03-11 2014-01-15 TiGenix, S.A.U. Cell populations having immunoregulatory activity, method for isolation and uses
US20140134140A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Case Western Reserve University Mesenchymal stem cell compositions for the treatment of microbial infections
EP2972368B1 (en) 2013-03-15 2019-07-24 TiGenix, S.A.U. Lymphocyte biomarkers for determining the clinical response to cell therapy
JP6412933B2 (ja) 2013-06-25 2018-10-24 ティジェニクス エス．エー．ユー． 免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法および使用
GB201604304D0 (en) * 2016-03-14 2016-04-27 Tigenix S A U Adipose tissue-derived stromal stem cells for use in treating refractory complex perianal fistulas in crohn's disease

Also Published As

Publication number Publication date
AU2006261383A1 (en) 2006-12-28
WO2006136244A3 (en) 2007-03-15
EP3176257B1 (en) 2018-08-22
US20170189452A1 (en) 2017-07-06
BRPI0613811B8 (pt) 2021-07-27
DK3176254T3 (da) 2021-07-12
LT2944688T (lt) 2018-02-26
US20150065948A1 (en) 2015-03-05
PT2944688T (pt) 2018-01-19
RU2016152229A3 (ko) 2020-04-29
CY1116764T1 (el) 2017-03-15
EP3176255A1 (en) 2017-06-07
EP2292737B2 (en) 2018-07-04
IL188378A (en) 2013-03-24
US20170209496A1 (en) 2017-07-27
US11660318B2 (en) 2023-05-30
EP3176256A1 (en) 2017-06-07
PT3176255T (pt) 2018-11-28
NL300953I1 (ko) 2018-10-03
LUC00085I2 (ko) 2018-11-26
ES2880349T3 (es) 2021-11-24
EP2292737A1 (en) 2011-03-09
HUS1800039I1 (hu) 2018-10-29
RU2008102643A (ru) 2009-07-27
JP2014054550A (ja) 2014-03-27
ES2538657T3 (es) 2015-06-23
EP2944688B1 (en) 2017-10-25
NZ565246A (en) 2011-09-30
US10780132B2 (en) 2020-09-22
SG166770A1 (en) 2010-12-29
EP1899458A2 (en) 2008-03-19
US20060045872A1 (en) 2006-03-02
JP2020141692A (ja) 2020-09-10
JP7027484B2 (ja) 2022-03-01
PL2944688T3 (pl) 2018-05-30
US20170189451A1 (en) 2017-07-06
CN101263224A (zh) 2008-09-10
PL2292737T5 (pl) 2019-05-31
US20100098669A1 (en) 2010-04-22
JP2019088310A (ja) 2019-06-13
BRPI0613811B1 (pt) 2021-03-02
EP3176257A1 (en) 2017-06-07
DK2944688T3 (en) 2018-01-02
HUE036590T2 (hu) 2018-07-30
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