KR20080036160A

KR20080036160A - 고환 ｂｖｄｖ 감염에 대한 백신접종 방법

Info

Publication number: KR20080036160A
Application number: KR1020087008843A
Authority: KR
Inventors: 마이클 아론 엘스워쓰; 캐셔스 맥앨리스터 터커; 마우리스 다니엘 기벤스
Original assignee: 파마시아 앤드 업존 캄파니 엘엘씨
Priority date: 2004-03-17
Filing date: 2005-03-04
Publication date: 2008-04-24
Also published as: AU2005224179B2; RU2335298C2; PT1727562E; ZA200607132B; EP1727562A1; EP1727562B1; WO2005089793A1; DK1727562T3; UA86405C2; CA2560532A1; JP4105220B2; TWI306404B; RU2006133328A; PL1727562T3; BRPI0508941A; AR048671A1; CN1929859A; AU2005224179A1; DE602005007584D1; US20080260778A1

Abstract

본 발명의 방법은 감염되기 쉬운 수컷 동물을 감염에 대해 면역화함으로써 소의 바이러스성 설사유발 바이러스에 의한 고환 감염을 예방하는 방법에 관한 것이다.

1형 BVDV 백신, 2형 BVDV 백신, 고환 BVDV 감염

Description

고환 ＢＶＤＶ 감염에 대한 백신접종 방법{METHOD OF VACCINATION AGAINST TESTICULAR BVDV INFECTION}

소의 바이러스성 설사유발 바이러스(bovine viral diarrhea virus, BVDV)는 지속성 및 급성으로 감염된 황소 및 다른 감염되기 쉬운 수컷 동물의 정액중에 확산될 수 있는, 소 및 기타 감염되기 쉬운 동물들의 경제적으로 중요한 병원체이다. 상기 병원체는 감염되기 쉬운 동물에서 위장, 호흡 및 생식 질환을 유발한다.

BVDV의 매우 병원성인 균주로 인한 위장 및 호흡 질환이 임상적으로 보다 두드러지는 반면, BVDV로 인한 생식력 상실은 경제적으로 훨씬 더 중요할 수 있다. BVDV의 전염에 관한 문헌은, 황소의 정액중의 바이러스가, 감염되기 쉬운 수정된 소를 감염시켜, 임신율 감소, 조기 배아사, 유산, 및 BVDV로 지속성으로 감염된 송 아지 출산을 야기할 수 있음을 입증하였다[Meyling A, Jensen AM, Transmission of bovine virus diarrhea virus(BVDV) by artificial insemination(AI) with semen from a persistently-infected bull, Veterinary Microbiology, 17:97-105, 1988; Kirkland PD, Mackintosh SG, Moyle A., The outcome of widespread use of semen from a bull persistently infected with pestivirus, Veterinary Record, 135:527-529, 1994; MaGowan MR, Kirkland PD, Early reproductive loss due to bovine pestivirus infection, British Veterinary Journal, 151:263-270, 1995].

지속성으로 감염된 황소는, 그 정액이 고농도의 바이러스(10^7.6 세포 배양액 감염 용량(50%)/㎖)(CCID₅₀/㎖)를 함유하기 때문에, 가장 일관되게 감염되기 쉬운 수정된 소를 감염시킨다[MaGowan MR, Kirkland PD, Early reproductive loss due to bovine pestivirus infection, British Veterinary Journal, 151:263-270, 1995]. 대조적으로, 급성 감염된 면역적격성 황소의 감염된 고환은 정액중에 저농도의 바이러스(5 내지 75 CCID₅₀/㎖)를 확산시켰으나, 이들은 또한 BVDV를 전염시킬 수 있다[Kirkland PD, Richards SG, Rothwell JT, et al., Replication of bovine viral diarrhea virus in the bovine reproductive tract and excretion of virus in semen during acute and chronic infections, Veterinary Record, 128:587-590, 1991]. 한 연구에 의하면 정액중에 25 내지 50 CCID₅₀/㎖의 바이러스가 수정된 어린암소의 5%를 감염시켰으며, 감염된 어린암소로부터 임신한 동거우에게로 BVDV의 후속 수평 감염이 그 태아의 지속성 감염을 야기하였다고 보고되었다[Kirkland PD, McGowan MR, Mackintosh SG, et al., Insemination of cattle with semen from a bull transiently infected with pestivirus, Veterinary Record, 140: 124-127, 1997].

두 팀의 연구자들이 또한 성숙기후 황소의 급성 감염이 고환에 편재화되는 지속성 BVDV 감염을 야기할 수 있다고 보고하였다[Voges H, Horner GW, Rowe S, et al., Persistent bovine pestivirus infection localized in the testes of an immuno-competent, non-viraemic bull, Veterinary Microbiology, 61:165-175, 1998; Givens MD, Heath AM, Brock KV et al., Detection of bovine viral diarrhea virus in semen obtained from inoculation of seronegative postpubertal bulls, AJVR, 64:428-434, 2003]. 뉴질랜드의 인공 수정 센터에 유지된 혈청반응양성의 바이러스비감염 황소에서 독특한 경우가 발생하였다. 상기 황소는 혈액에서 BVDV를 분리하는 시도가 음성으로 나타난 후에 인공 수정 센터에 수용되었다. BVDV에 대한 중화시키는 항체의 존재에도 불구하고, 상기 황소는 동물을 죽였을 때 11개월동안 지속성으로 정액중에 바이러스를 낮은 수준(2 x 10³ CCID₅₀/㎖)으로 확산시켰다. 급성 감염원은 밝혀지지 않았다. 시체 해부시에, 바이러스는 황소의 고환에서만 분리되었다[Voges H, Horner GW, Rowe S, et al., Persistent bovine pestivirus infection localized in the testes of an immuno-competent, non-viraemic bull, Veterinary Microbiology, 61:165-175, 1998]. 상기 황소의 정액 중의 바이러스는 3마리의 수정된 혈청반응음성 암소 중 1마리의 감 염 및 후속 혈청전환을 야기하였다[Niskanen R, Alenius S, Belak K, et al, Insemination of susceptible heifers with semen from a nonviraemic bull with persistent bovine virus diarrhea virus infection localized in the testes, Reproduction in Domestic Animals, 37:171-175, 2002]. 두 번째 인공적으로 유도된 감염에서, BVDV는 7 개월 이하동안 3마리의 바이러스비감염 성숙기후 황소 중 2마리의 정액에서 역전사-중첩 중합효소 연쇄 반응(RT-nPCR)에 의해 검출하였으나, 바이러스는 표준 조직 배양 방법으로는 분리할 수 없었다. 정액은 정맥내 투여후 한 마리의 혈청반응음성 송아지에서 초기 노출이 BVDV 감염을 야기한지 5 개월 후에 수거하였다. 정액은 노출 당일에 수거하였으며, 노출후 7개월은 추가의 2마리 혈청반응음성 송아지에서는 감염을 야기하지 않았다[Givens MD, Heath AM, Brock KV et al., Detection of bovine viral diarrhea virus in semen obtained from inoculation of seronegative postpubertal bulls, AJVR, 64:428-434, 2003].

두 연구에서 급성 감염 황소가 허용되는 정자 농도, 운동성 및 형태를 갖는 정액에 BVDV를 확산시킬 수 있다고 보고하였다[Kirkland PD, Richards SG, Rothwell JT, et al., Replication of bovine viral diarrhea virus in the bovine reproductive tract and excretion of virus in semen during acute and chronic infections, Veterinary Record, 128:587-590, 1991; Kirkland PD, McGowan MR, Mackintosh SG, et al., Insemination of cattle with semen from a bull transiently infected with pestivirus, Veterinary Record, 140: 124-127, 1997]. 또 다른 연구에서는 급성 감염 황소에서 운동성의 감소, 다이아뎀(diadem) 결함의 증가, 작은 정자 머리 및 근위부 비말을 밝혔다[Paton DJ, Goodey R, Brockman S et al., Evaluation of the quality and virological status of semen from bulls acutely infected with BVDV, Veterinary Record, 124:63-64, 1989].

자연 양육에 의한 전염성 및 황소 수정률에 대한 영향에 관한 세부사항에 대한 임의의 불확실성에 무관하게, BVDV에 의한 감염되기 쉬운 수컷 동물의 고환 감염은 소에 BVDV 전염으로 인한 생식력 손실로 인해 상당한 경제적 영향을 갖는 것은 명백하다.

고환 바이러스 감염은 고환이 면역학적으로 격리되는 것으로 알려져 있기 때문에, 면역접종을 통한 치료 또는 예방에 대한 의미있는 목표를 제기한다. 놀랍게도, 본 출원인은 면역화가 감염되기 쉬운 동물 중에서 BVDV 고환 감염을 억제하는 효과적인 방법임을 밝혀내었다.

본 발명은 불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신, 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 백신 효과량을 감염되기 쉬운 수컷 동물에게 투여함을 포함하는, 상기 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방 또는 치료하는 방법을 포함한다.

본 발명은 또한 감염되기 쉬운 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방하기 위한 약제로 사용하기 위한, 불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신, 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 백신을 포함한다.

본 발명은 또한 감염되기 쉬운 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방하기 위한 약제의 제조를 위한, 불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신, 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 백신의 용도를 포함한다.

본 발명은 또한 BVDV 고환 감염 위험성이 증가된 동물을 확인하고; 불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신, 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 백신 효과량을 상기 동물에게 투여함을 포함하는, 감염되기 쉬운 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방하는 방법을 포함한다.

본 발명은 또한 BVDV 고환 감염의 위험성이 증가된 감염되기 쉬운 수컷 동물 에서 고환 BVDV 감염을 예방하기 위한 약제로서 사용하기 위한, 불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신, 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 백신을 포함한다.

본 발명은 또한, BVDV 고환 감염의 위험성이 증가된 감염되기 쉬운 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방하기 위한 약제의 제조를 위한, 불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신, 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 백신의 용도를 포함한다.

본 발명은 또한, 불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신, 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 BVDV 백신을 함유하는 용기 또는 용기들; 및 감염되기 쉬운 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방하기 위해 BVDV 백신 사용을 위한 설명서를 포함하는 제품을 포함한다.

감염되기 쉬운 수컷 동물로는 황소, 숫양 및 수퇘지가 포함될 수 있다. 바람직한 태양에서, 상기 동물은 황소이다.

백신 및 제품은 변형된 1형 BVDV 생 백신 및 변형된 2형 BVDV 생 백신을 둘 다 포함할 수 있다.

백신은 세포병원성 또는 비-세포병원성 바이러스로부터 유도될 수 있다.

선택적으로, 본 발명의 백신 및 제품은 다음으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추가 항원을 포함할 수 있다: 소 헤르페스 바이러스(Bovine Herpes Virus, BHV-1); 제 3형 파라인플루엔자 바이러스(Parainfluenza Virus Type 3, PIV3); 소 호흡기 세포융합 바이러스(Bovine Respiratory Syncytial Virus, BRSV); 렙토스피라 캐니콜라( Leptospira canicola), 렙토스피라 그리포티포사( Leptospira grippotyphosa), 렙토스피라 보그페터세니 하디오 -프라지트노( Leptospira borgpetersenii hardio - prajitno), 렙토스피라 익테로헤모레지아( Leptospira icterohaemmorrhagia), 렙토스피라 인테로간스 포모나( Leptospira interrogans pomona), 렙토스피라 보그페터세니 하드조 -보비스( Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis), 렙토스피라 브래티슬라바 ( Leptospira Bratislava), 캄필로박터 페투스( Campylobacter fetus), 만헤이미아 (파스튜렐라) 헤모라이티카(Mannheimia( Pasteurella ) haemolytica), 파스튜렐라 멀토시다( Pasteurella multocida), 마이코박테리움 보비스 ( Mycobacterium bovis) 및 마이코박테리움 디스파( Mycobacterium dispar).

바람직한 태양에서, 본 발명의 백신 및 제품은 소 헤르페스 바이러스(BHV-1), 제 3형 파라인플루엔자 바이러스(PIV3) 및 소 호흡기 세포융합 바이러스(BRSV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추가 항원을 포함할 수 있다.

정의 및 약어

"소의 바이러스성 설사유발 바이러스"("BVDV")는 플라비비리데(Flaviviridae)과 페스티바이러스(Pestivirus)속의 작고, 동일방향으로 꼬인 단일 가닥 RNA 바이러스이다. BVDV의 두가지 생물형, 세포변성(CP)과 비세포변성(NC)은 감염되기 쉬운 세포 단층이 감염될 때 시험관내에서 명백한 세포변성 효 과의 존재 또는 부재를 기준으로 기술되었다. 비세포변성 생물형은 대부분의 경우에 들판 감염물로부터 분리된다. 소의 바이러스성 설사유발 바이러스 균주는 또한 바이러스 RNA 내의 실질적인 차이를 기준으로, 1형 및 2형의 2가지 별개 종(즉, 유전자형)으로 분류될 수 있다.

"감염되기 쉬운 동물"이란 용어는 BVDV 감염에 민감한 임의의 동물, 예를 들면, 소, 양 및 돼지를 의미한다.

"감염되기 쉬운 수컷 동물"이란 용어는 BVDV 고환 감염에 민감한 임의의 수컷 동물, 예를 들면, 수컷 소, 양 및 돼지를 의미한다. 거세되지 않은 수컷 소는 "황소"로 지칭한다. 거세되지 않은 수컷 양은 "숫양"으로 지칭한다. 거세되지 않은 수컷 돼지는 "수퇘지"로 지칭한다.

고환 감염과 관련하여 "예방" 또는 "억제"란 용어는 감염되기 쉬운 수컷 동물의 고환의 전염성 1형 및 2형 BVDV에 의한 감염 위험성을 감소 또는 배제키거나; 감염 증상을 개선 또는 완화시키거나; 또는 감염으로부터의 회복을 가속화하는 것을 의미한다. 백신접종은 고환 생검 또는 정액중 바이러스의 존재에 의해 평가할 때 바이러스 또는 세균 수의 감소가 있는 경우 치료적인 것으로 간주한다.

"감염"이란 용어는 BVDV에 의한 급성 또는 지속성 감염을 의미할 수 있다.

BVDV에 의한 "급성" 또는 "일시적" 감염은 면역적격성의 감염되기 쉬운 동물이 BVDV의 세포변성 또는 비세포변성 균주에 노출될 때 일어난다. 무증상 감염이 대부분 보편적인 반면, 우울증, 식욕부진, 구강 미란 및 궤양, 설사 및 사망과 같은 증세가 관찰될 수도 있다. 급성 감염된 면역적격성 동물은 바이러스를 감염되 기 쉬운 동물에 전염시킬 수 있으나, 지속성 감염 동물보다는 훨씬 덜 효과적이다.

급성 고환 감염은 일시적인 전신 감염의 결과로서 감염되기 쉬운 수컷 동물의 고환의 급성 또는 일시적 감염을 말한다. 몇몇 보고서는 급성으로 감염된 황소는 정자의 허용되는 농도, 운동성 및 형태하에 정액중에 바이러스를 확산할 수 있다고 지적하고 있다. 그러나, 다른 보고서에서, 저자들은 급성 감염과 동반되는 정자의 운동성의 감소 및 다이아뎀 결함의 증가, 작은 정자 머리 및 근위부 비말을 언급하였다.

BVDV에 의한 지속성 감염은 감염되기 쉬운 동물이 약 125 일의 임신기간에 면역적격성이 나타나기 전에 BVDV의 비세포변성 균주에 의해 감염될 때 발생한다. 지속성으로 감염된 동물은 감염된 균주에 대해 면역내성을 나타내며, 병원체 보유숙주로 작용하며, 통상적으로 수명 전체에 걸쳐 뇨, 분변, 정액, 침, 눈물 및 코 점막에서 다량의 바이러스를 발산한다.

지속성인 고환 감염은 급성 또는 지속성 전신 감염의 결과로서 감염되기 쉬운 수컷 동물의 고환의 지속성 감염을 말한다.

본 발명에 사용된 백신

본 발명에 사용된 백신은 1형 및/또는 2형 BVDV 및 수의학적으로 허용되는 담체를 포함한다.

전통적으로, 바이러스 백신은 다음 두 부류에 속한다: 바이러스를 덜 병원성이 되도록 만드는(약독화) 방식으로 처리하거나 성장시킨 생-바이러스를 함유하는 생 백신, 및 사독화(불활성화) 바이러스 입자를 함유하는 백신. BVDV와 관련하여, 바이러스는 자체로 세포병원성 또는 비-세포병원성일 수 있다. 소의 바이러스성 설사 바이러스 균주는 또한 바이러스 RNA 내의 실질적인 차이를 기준으로 1형 및 2형의 두 개의 별개 종(즉, 유전자형)으로 분류될 수 있다. 따라서, 원칙적으로, BVDV의 8가지 주 부류가 존재할 수 있지만, 상업적인 백신의 대부분은 세포병원성 바이러스를 기본으로 한다.

현재 상업적으로 시판되는 BVDV 백신 중에, 바이러스가 화학적으로 불활성화된 백신들이 있다[McClurkin et al., Arch. Virol., 58:119, 1978; Fernelius et al., Am. J. Vet. Res., 33:1421-1431, 1972; and Kolar et al., Am. J. Vet. Res., 33:1415-1420, 1972]. 이들 백신은 전형적으로 1차 면역화를 달성하고 단기간의 면역을 제공하고 태아 전염을 막기 위해 다회 투여를 필요로 하였다[Bolin, Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract., 11:615-625, 1995]. 양에서, 정제된 E2 단백질을 기본으로 하는 특이항원 백신(subunit vaccine)이 보고되었다[Bruschke et al., Vaccine, 15:1940-1945, 1997]. 유감스럽게도, 상기 백신 중 하나만이 감염으로부터 태아를 보호하는 것으로 생각되며 상기 보호도 상동 바이러스의 한 균주로 제한된다.

또한, 변형된 생 바이러스(MLV) 백신은 약독화한 BVD 바이러스를 이용하여, 소 또는 돼지 세포에서의 반복 계대감염에 의해[Coggins et al., Cornell Vet., 51:539, 1961; and Phillips et al., Am. J. Vet Res., 36:135, 1975], 또는 바이러스상에 온도-민감성 표현형을 제공하는 화학적으로 유도된 돌연변이에 의해[Lobmann et al., Am. J. Vet Res., 45:2498, 1984; and Lobmann et al., Am. J. Vet Res., 47:557-561, 1986] 생산되었다. 단일 용량의 MLV 백신은 면역화에 충분한 것으로 입증되었으며, 면역 기간은 백신접종한 소에서 수년간 연장될 수 있다[Coria et al, Can. J. Con. Med., 42:239, 1978]. 또한, MLV-형 백신으로 백신접종된 송아지로부터 교차-보호가 보고되었다[Martin et al., In Proceedings of the Conference Res. Workers', Anim. Dis., 75:183, 1994]. 그러나, 바이러스의 태아 전염 가능성과 같은 안전성 항목이 상기 백신들의 사용과 관련하여 주요 관심거리였다[Bolin, Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract., 11:615-625, 1995].

바람직한 태양에서, 1형 BVDV 성분은 변형된 생 세포병원성균(cpBVD-1 균주 NADL - 아이오와주 에임스의 미국 농림부의 국립 동물 질환 센터, ATCC VR-534)이다. 또 다른 바람직한 태양에서, 2형 BVDV 성분은 변형된 생 세포변성균(cpBVD-2 균주 53637, ATCC No. PTA-4859)이다. 2003년 7월 29일자로 출원된 동시계류중인 미국 특허출원 제 60/490,834 호에 기술된 바와 같이, 상기 두 분리균은 모두 NS2-3 영역에 삽입물을 함유한다. 약독화된 cp BVDV-1은 뉴클레오티드 위치 #4993(NADL 서열 번호)에서 티미딘의 보스 타우러스(Bos taurus) DnaJ1 암호화 서열 3'의 삽입물을 함유하는데, 상기 서열은 아미노산 위치 1536에서 글라이신 잔기를 암호화하는 코돈의 세 번째 뉴클레오티드이다. 약독화된 cp BVDV-2는 동일한 게놈 부위에서 보스 타우러스 DnaJ1 암호화 서열의 삽입물을 함유한다. 또 다른 바람직한 태양에서, 변형된 생 항원을 건조하거나 동결건조하거나 유리화한다.

한 태양에서, 본 발명의 백신 조성물은 효과량의 하나 이상의 전술한 BVD 바이러스, 바람직하게는 cpBVD-1 균주 NADL(cpBDV-1 균주 NADL - 아이오와주 에임스 의 미국 농림부의 국립 동물 질환 센터, ATCC VR-534); cpBVD-2 균주 53637(ATCC No. PTA-4859), IBRV 균주 C-13(커터 래버러토리즈(Cutter Laboratories)); PIV3 균주 레이징거(Reisinger, 유니버시티 네브라스카(Univ. Nebraska)); BRSV 균주 375(수의학 연구소(Veterinary Medical Research Institute), 아이오와주 에임스)를 포함한다. 정제된 BVD 바이러스는 백신 조성물에 바로 사용할 수 있거나, 또는 바람직하게는 BVD 바이러스는 시험관내에서의 연속 계대감염에 의해 더 변형될 수 있다. 전형적으로, 백신은, 0.1 내지 5 ㎖, 바람직하게는 약 2 ㎖ 부피의 수의학적으로 허용되는 담체 및 선택적으로 보조제와 함께 약 1 x 10² 내지 약 1 x 10¹⁰ 플라크 생성 또는 TCID₅₀ 단위의 바이러스를 함유한다. 보호 효과를 제공하기에 효과적인 백신 조성물 중 바이러스의 정확한 양은 숙련된 수의사에 의해 결정될 수 있다. 백신 조성물에 사용하기에 적합한 수의학적으로 허용되는 담체는 본원에서 하기에 기술하는 것들 중 어느 하나일 수 있다.

전형적으로, 백신은 0.1 내지 5 ㎖, 바람직하게는 약 2 ㎖ 부피의 수의학적으로 허용되는 담체 및 보조제와 함께 약 1 x 10² 내지 약 1 x 10¹⁰ 플라크 또는 콜로니 생성 단위의 바이러스를 함유한다. 보호 효과를 제공하기에 효과적인 백신 조성물 중 바이러스의 정확한 양은 숙련된 수의사에 의해 결정될 수 있다. 백신 조성물에 사용하기에 적합한 수의학적으로 허용되는 담체는 본원에서 하기에 기술하는 것들 중 어느 하나일 수 있다. 전형적인 투여 경로는 약 0.1 내지 약 5 ㎖의 백신을 근육내 또는 피하 주사하는 것이다. 본 발명의 백신 조성물은 또한 BVDV에 대한 다른 백신 조성물, 예를 들면, WO 95/12682 호, WO 99/55366 호, 미국 특허 제 6,060,457, 6,015,795, 6,001,613 및 5,593,873 호에 기술된 것과 같은 추가의 활성 성분을 포함할 수 있다.

백신접종은 단일 접종 또는 다회 접종을 통해 달성될 수 있다. 경우에 따라, 접종된 동물로부터 혈청을 수거하여 BVD 바이러스에 대한 항체의 존재에 대해 검사할 수 있다. 본 발명의 또 다른 바람직한 태양으로, 백신 조성물을 BVDV 고환 감염을 치료하는데 사용한다. 따라서, 본 발명은 동물에게 효과량의 본 발명의 BVDV 바이러스를 투여함으로써, 1형 또는 2형 BVD 바이러스 또는 1형과 2형의 혼합에 의해 야기된 동물 대상에서의 감염을 억제 또는 예방하는 방법을 제공한다. 또 다른 태양에서, 본 발명의 백신 조성물은 가축 출산율의 개선, 및 감염되기 쉬운 수컷 동물중 고환 감염의 위험성의 감소에 효과적이다.

본 발명의 방법을 실시하는데 있어서, 본 발명의 백신 조성물은 바람직하게는 근육내 또는 피하 경로에 의해 소에게 투여하지만, 다른 투여 경로, 예를 들면, 경구, 비강내(예를 들면, 에어로졸 또는 다른 무침 투여), 림프절내, 피내, 복강내, 직장 또는 질 투여, 또는 이들 경로의 조합과 같은 경로를 또한 이용할 수 있다. 동물의 목 부분에 근육내 투여가 바람직하다. 면역증강 섭생법이 필요할 수 있으며, 투여법은 최적의 면역화를 제공하도록 조정될 수 있다.

"면역원성"은 1형 또는 2형 BVD 바이러스에 대해, 또는 1형 및 2형 BVD 바이러스 둘 다에 대해 동물에서 면역 반응을 유발하는 BVD 바이러스의 능력을 의미한다. 면역 반응은 주로 세포독성 T-세포에 의해 매개되는 세포성 면역 반응이거나, 또는 B-세포를 활성화시켜 항체 생성을 유도하는 보조 T-세포에 의해 주로 매개되는 체액성 면역 반응일 수 있다.

본 발명에 따르면, 바이러스는 면역원 조성물에 사용하기 전에 세포 배양시 연속 계대감염에 의해 약독화되는 것이 바람직하다. 변형 방법은 당해 분야에 숙련된 자에게 공지되어 있다.

본 발명의 방법에 사용되는 백신 조성물은 또한 BVDV에 대한 다른 면역원 조성물, 예를 들면, 동시계류중인 출원 번호 제 08/107,908 호, WO 95/12682 호, WO 99/55366 호, 미국 특허 제 6,060,457, 6,015,795, 6,001,613 및 5,593,873 호에 기술된 바와 같은 추가의 활성 성분을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 목적은 1형 및/또는 2형 BVDV("혼합 백신")가 아닌 다른 항원을 투여함으로써 달성될 수 있으며, 상기 항원으로는 BRSV, BHV-1, PIV3, 렙토스피라 캐니콜라, 렙토스피라 그리포티포사, 렙토스피라 보그페터세니 하디오-프라지트노, 렙토스피라 익테로헤모레지아, 렙토스피라 인테로간스 포모나, 렙토스피라 보그페터세니 하드조-보비스, 렙토스피라 브래티슬라바, 캄필로박터 페투스, 만헤이미아(파스튜렐라) 헤모라이티카, 파스튜렐라 멀토시다, 마이코박테리움 보비스 및 마이코박테리움 디스파가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 여러 바람직한 태양에서, 혼합 백신의 공급원은 보비-쉴드(Bovi-Shield, 등록상표) 골드(등록상표) IBR-BVD, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 3, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) IBR-BVD-BRSV-LP, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) FP5 L5, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) FP 5 VL5 또는 프레가드(Preguard, 등록상표) 골드 FP 10(화이자, 인코포레이티드(Pfizer, Inc.))이다.

또한, 본 발명의 방법에 사용된 면역원 및 백신 조성물은 하나 이상의 수의학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "수의학적으로 허용되는 담체"로는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 보조제, 안정화제, 희석제, 방부제, 항균제 및 항진균제, 등장성 약제, 흡착 지연제 등이 포함된다. 희석제로는 물, 식염수, 덱스트로스, 에탄올, 글라이세롤 등이 포함될 수 있다. 등장성 약제로는 특히 염화나트륨, 덱스트로스, 만니톨, 솔비톨 및 락토스가 포함될 수 있다. 안정화제로는 특히 알부민이 포함된다. 보조제로는 많은 것들 중에서, RIBI 보조제 시스템(리비 인코포레이티드(Ribi Inc.)), 명반, 수산화알루미늄 겔, 콜레스테롤, 수중유적형 유화액, 유중수적형 유화액, 예를 들면, 프로인트(Freund) 완전 및 불완전 보조제, 블록 공중합체(CytRx, 죠지아주 아틀란타), SAF-M(카이론(Chiron), 캘리포니아주 에머리빌), 암피겐(AMPHIGEN, 등록상표) 보조제, 사포닌, 퀼(Quil) A, QS-21(캠브리지 바이오테크 인코포레이티드(Cambridge Biotech Inc.), 매사추세츠주 캠브리지), GPI-0100(갈레니카 파마슈티칼스, 인코포레이티드(Galenica Pharmaceuticals, Inc.), 알라바마주 버밍햄) 또는 다른 사포닌 분획물, 모노포스포릴 지질 A, 애브리딘(Avridine) 지질-아민 보조제, 이.콜라이(E. coli)로부터의 열-불안정성 장독소(재조합 또는 그외 다른 것), 콜레라 독소 또는 뮤라밀 다이펩타이드가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 백신 조성물은 또한 예를 들면, 인터류킨, 인터페론 또는 다른 사이토카인과 같은 하나 이상의 다 른 면역조절제를 포함할 수 있다. 본 발명의 방법에 사용된 백신 조성물은 또한 젠타마이신(Gentamicin) 및 메티올레이트(Merthiolate)를 포함할 수 있다. 본 발명과 관련하여 유용한 보조제 및 첨가제의 양 및 농도는 숙련된 전문가에 의해 용이하게 결정될 수 있지만, 본 발명은 약 50 내지 약 2000 ㎍의 보조제 및 바람직하게는 약 500 ㎍/2 ㎖ 용량의 백신 조성물을 포함하는 조성물을 고려한다. 또 다른 바람직한 태양으로, 본 발명은 약 1 내지 약 60 ㎍/㎖의 항생물질, 보다 바람직하게는 약 30 ㎍/㎖의 항생물질을 포함하는 백신 조성물을 고려한다.

본 발명의 방법에 사용된 백신 조성물은 투여 경로에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 예를 들면, 백신 조성물은 주사 용도에 적합한 멸균 수용액 또는 분산액의 형태로 제조될 수 있거나, 또는 동결-건조 기술을 이용하여 냉동건조된 형태로 제조될 수 있다. 냉동건조된 백신 조성물은 전형적으로 약 4 ℃에서 유지되며, 보조제를 함유하거나 함유하지 않은 안정화 용액, 예를 들면, 식염수 또는/및 HEPES 중에 복원될 수 있다.

본 발명의 백신 조성물은 1형 또는 2형 BVD 바이러스에 대해, 또는 1형 및 2형 BVD 바이러스 둘 다에 대해 면역 반응을 유도하기 위해 동물 대상에게 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명의 또 다른 태양은, 효과량의 전술한 본 발명의 면역원 조성물을 동물 대상에게 투여함으로써 1형 또는 2형 BVD 바이러스에 대한, 또는 1형과 2형 BVD 바이러스의 혼합에 대한 면역 반응을 자극하는 방법을 제공한다. "동물 대상"이란 BVDV 감염에 민감한 임의의 동물, 예를 들면, 소, 양 및 돼지를 의미한다.

본 발명의 방법에 따르면, 동물 대상에게 투여하기에 바람직한 면역원 조성물은 BVDV cpNADL 바이러스 및/또는 BVDV cp53637 바이러스를 포함한다. BVDV 바이러스, 바람직하게는 배양시 연속 계대감염에 의해 변형된 생 바이러스를 함유하는 면역원 조성물을 바람직하게는 근육내 또는 피하 경로에 의해 소에 투여하지만, 다른 투여 경로, 예를 들면, 경구, 비강내, 림프절내, 피내, 복강내, 직장 또는 질 투여, 또는 경로들의 조합도 또한 이용할 수 있다.

면역화 프로토콜은 당해 분야에 공지된 절차를 이용하여 최적화할 수 있다. 단일 용량을 동물에게 투여할 수 있거나, 또는, 양자택일적으로 2회 이상의 접종을 2 내지 10 주의 간격으로 행할 수 있다. 동물의 연령에 따라, 면역원 또는 백신 조성물을 재투여할 수 있다. 예를 들면, 본 발명은 6 개월되기 전의 건강한 소에 백신접종한 다음 6 개월때에 재백신접종하는 것을 고려한다. 또 다른 예로, 본 발명은 1형 및 2형 BVDV에 의해 야기된 감염에 대해 태아를 보호하기 위해 예비사육 약 5주때에(또는 소떼에 넣기 전에) 예비사육 소의 백신접종 및 선택적으로 예비사육 약 2 주때에 또는 임신중에 다시 백신접종하는 것을 고려한다. 단일 용량의 본 발명의 조성물은 또한 첫 번째 투여후 약 3 내지 4 주후에 투여할 수 있다. BVDV 태아 감염을 방지하기 위해 단일 용량의 혼합 백신으로 반년마다 재백신접종하는 것도 또한 고려된다.

소에서 유도된 면역 반응의 정도 및 특성은 다양한 기술을 이용하여 평가할 수 있다. 예를 들면, 접종한 동물로부터 혈청을 수거하여 BVDV 바이러스에 특이적인 항체의 존재에 대해, 예를 들면, 통상적인 바이러스 중화 분석법으로 검사할 수 있다.

"효과량"이란 용어는 백신이 투여되는 동물에서 면역 반응을 유도하기에 충분한 혼합 백신의 양을 말한다. 면역 반응은, 제한하지 않고, 세포성 및/또는 체액성 면역의 유도를 포함할 수 있다. 치료적으로 효과적인 백신의 양은 사용되는 특정 바이러스, 소의 상태 및/또는 감염 정도에 따라 달라질 수 있으며, 수의사에 의해 결정될 수 있다.

불활성화(부분 또는 전체 세포) 및 변형된 생백신

본 발명의 방법에 사용하기 위한 불활성화 또는 변형된 생 백신은 당해 분야에 공지된 다양한 방법을 이용하여 제조할 수 있다.

예를 들면, BVDV 분리균은 공지된 기술을 이용하여 감염된 소의 자궁에서 직접 수득할 수 있다.

BVDV 분리균은 예를 들면, 연속 계대감염을 포함한 다양한 공지된 방법을 이용하여 약독화시킬 수 있다. 변형된 생 바이러스 분리균 이외에, 본 발명의 방법에 사용된 백신 제품은 또한 적절한 양의 하나 이상의 통상적으로 사용되는 보조제를 포함할 수 있다. 적절한 보조제로는 무기질 겔, 예를 들면, 수산화알루미늄; 표면활성 물질, 예를 들면, 라이소레시틴; 글라이코사이드, 예를 들면, 퀼 A 또는 GPI-0100과 같은 사포닌 유도체; 플루로닉 폴리올; 다중음이온; 비-이온성 블록 중합체, 예를 들면, 플루로닉 F-127(B.A.S.F., 미국); 펩타이드; 광유, 예를 들면, 몬타나이드 ISA-50(세픽(Seppic), 프랑스 파리), 카보폴, 암피겐, 암피겐 마크 II(하이드로닉스(Hydronics), 미국), 알하이드로겔, 유성 유화액, 예를 들면, 베이 올(Bayol)F/아르라셀(Arlacel) A와 같은 광유와 물의 유화액, 또는 식물성유, 물 및 레시틴과 같은 유화제의 유화액; 명반; 소의 사이토카인; 콜레스테롤; 및 이들 보조제 혼합물이 포함될 수 있으나, 이로 한정되지는 않는다. 바람직한 태양으로, 사포닌 함유 수중 유적형 유화액을 통상적으로 고압유화시킨다.

본 발명의 방법에 사용하기 위한, 1형 및 2형 BVDV의 특히 바람직한 공급원은 BVDV 균주 NADL(국립 동물 질환 센터(NADC, USDA, 아이오와주 에임스)에서 입수) 및 BVDV 2형 균주 cp BVDV 균주 53637(유니버시티 겔프, 온타리오주 겔프)(ATCC No. PTA-4859)을 함유하는, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 계의 백신 제품(화이자 인코포레이티드)이다.

바람직하게, 균주 NADL 및 53637은 변형된 생 균주이다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 균주는 상업적으로 시판하는 보조제, 바람직하게는 퀼 A-콜레스테롤-암피겐(하이드로닉스, 미국)으로 보조될 수 있다. 본 발명의 면역원 및 백신 조성물의 바람직한 용량은 약 2.0 ㎖이다. 본 발명의 방법에 사용된 조성물에 방부제가 포함될 수 있다. 본 발명에 고려되는 방부제로는 젠타마이신 및 메티올레이트가 포함된다. 담체, 바람직하게는 PBS도 또한 첨가될 수 있다. 예를 들면, 배양시 계대감염에 의한 전염성 균주의 약독화에 의한 변형된 생 백신의 제조는 당해 분야에 공지되어 있다.

변형된 생 BVDV 분리균은 또한 소의 1형 헤르페스바이러스(BHV-1), 소의 호흡기 세포융합 바이러스(BRSV), 파라인플루엔자 바이러스(PIV3), 렙토스피라 캐니콜라, 렙토스피라 그리포티포사, 렙토스피라 보그페터세니 하디오-프라지트노, 렙 토스피라 익테로헤모레지아, 렙토스피라 인테로간스 포모나, 렙토스피라 보그페터세니 하드조-보비스, 렙토스피라 브래티슬라바, 캄필로박터 페투스, 만헤이미아(파스튜렐라) 헤모라이티카, 파스튜렐라 멀토시다, 마이코박테리움 보비스 및 마이코박테리움 디스파를 포함하지만 이로 한정되지는 않는 세균 및 바이러스와 혼합될 수 있다.

투약 및 투여방식

본 발명에 따르면, 감염되기 쉬운 수컷 동물에 투여된 효과량의 BVDV 또는 혼합 백신은 1형 및 2형 BVDV와 관련된 고환 감염에 대해 효과적인 면역을 제공한다. 한 태양에서, 백신은 약 3 내지 4 주 간격으로 두 용량으로 소에게 투여된다. 예를 들면, 첫 번째 투여는 동물이 약 1 내지 약 3개월 될 때 수행한다. 두 번째 투여는 혼합 백신의 첫 번째 투여후 약 1 내지 4 주 후에 수행한다.

또 다른 바람직한 태양에서, 투여는 동물 사육 약 4 내지 5 주 전에, 또는 인공 수정 시설에 들어가기 전에 수행한다. 후속 백신 용량의 투여는 1년 기준으로 수행하는 것이 바람직하다. 또 다른 바람직한 태양에서, 약 6 개월 되기전에 백신접종된 동물은 6개월 된 후에 재백신접종해야 한다. 후속 백신 용량의 투여는 1년 기준으로 행하는 것이 바람직하지만, 2년마다 및 반년마다의 후속 백신 용량도 또한 본 발명에서 고려된다.

효과적인 백신의 양은 백신의 성분 및 투여 스케쥴에 따라 달라진다. 전형적으로, 변형된 생 BVDV 제제를 백신으로 사용하는 경우, BVDV 용량 당 약 10² 내지 약 10¹⁰ TCID₅₀ 단위, 바람직하게는 1형 및 2형 BVDV 용량 당 약 10⁴ 내지 약 10⁷ TCID₅₀ 단위를 함유하는 백신의 양이 감염되기 쉬운 수컷 동물에게 1회 투여시 효과적이다. 바람직하게, 효과적인 면역을 제공하는 백신은, 감염되기 쉬운 동물에게 1회 투여시 약 10⁴ 내지 10⁷ TCID₅₀ 단위/1형 및 2형 BVDV 용량, 보다 바람직하게는 약 10⁵ TCID₅₀ 단위/용량을 함유한다. 후속 백신 용량의 투여는 1년 기준으로 행하는 것이 바람직하다. 약 6개월이 되기 전에 백신접종한 동물은 6개월이 된 후에 재백신접종해야 한다. 후속 백신 용량의 투여는 1년 기준으로 하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따르면, 바람직한 제품, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5(화이자 인코포레이티드)를 투여하는 경우, 상기 제품은 약 0.1 내지 약 5.0 ㎖, 바람직하게는 약 1.5 내지 약 2.5 ㎖, 보다 바람직하게는 약 2 ㎖의 양으로, 바람직하게는 1회 투여한다. 후속 백신 용량의 투여는 1년 기준으로 행하는 것이 바람직하다. 약 6개월이 되기 전에 백신접종한 동물은 6개월이 된 후에 재백신접종해야 한다. 후속 백신 용량의 투여는 1년 기준으로 하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따라서, 투여는 경구, 비강내, 국소, 경피 및 비경구(예를 들면, 정맥내, 복강내, 피내, 피하 또는 근육내)를 포함하여, 공지된 경로에 의해 달성할 수 있다. 바람직한 투여 경로는 근육내 또는 피하 투여이다.

본 발명은 또한 1차 단일 용량에 이어 1년마다의 재백신접종을 고려하는데, 이렇게 함으로써 감염에 대한 면역을 생성하고/하거나 유지하기 위해 매년 재백신접종 전에 송아지에 추가 용량을 투여할 필요성이 배제된다.

본 발명에 따라 투여되는 백신은 추가의 성분, 예를 들면, 보조제(무기질 겔, 예를 들면, 수산화알루미늄; 표면활성 물질, 예를 들면, 콜레스테롤, 라이소레시틴; 글라이코사이드, 예를 들면, 퀼 A, QS-21 또는 GPI-0100과 같은 사포닌 유도체; 플루로닉 폴리올; 다중음이온; 비-이온성 블록 중합체, 예를 들면, 플루로닉 F-127; 펩타이드; 광유, 예를 들면, 몬타나이드 ISA-50, 카보폴, 암피겐(등록상표), 알하이드로겔, 유성 유화액, 예를 들면, 베이올F/아르라셀 A와 같은 광유와 물의 유화액, 또는 식물성유, 물 및 레시틴과 같은 유화제의 유화액; 명반; 소의 사이토카인; 및 이들 보조제 혼합물)를 포함할 수 있다.

본 발명에 따르면, 약 3개월된 감염되기 쉬운 수컷 동물에게 투여한 효과량의 백신 투여는 고환 감염에 대해 효과적인 면역을 제공한다.

바람직한 태양으로, 백신은 근육내로 투여한다. 또 다른 바람직한 태양에서, 백신은 피하로 투여한다. 또한, 백신 용량은 약 1 내지 약 7 ㎖, 바람직하게는 약 2 ㎖를 포함하며, 각각의 ㎖는 바이러스 용량당 약 10² 내지 약 10¹⁰ TCID₅₀ 단위를 함유한다. 혼합 백신은 동물에 2회; 곧, 약 1 내지 약 3개월째에 1회 및 약 5 내지 3주 후에 1회 투여하는 것이 바람직하다. 본 발명은 또한 단일 용량으로 매년 재백신접종하는 것을 고려한다.

증가된 BVDV 감염 위험성이 있는 동물의 확인

본 발명은 또한, (a) 증가된 BVDV 고환 감염 위험성을 갖는 동물을 확인하고; (b) 1형 BVDV 사균 백신, 2형 BVDV 사균 백신, 변형된 1형 BVDV 생 백신 및 변형된 2형 BVDV 생 백신으로 이루어진 군에서 선택된 백신 효과량을 동물에게 투여함을 포함하는, BVDV 감염에 민감한 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방하는 방법을 포함한다.

증가된 BVDV 감염 위험성이 있는 동물을 확인하기 위해, 숙련된 개업의라면 BVDV 감염이 이전에 감염되지 않은 소떼에 도입되는 경우 또는 감염되기 쉬운 동물이 BVDV 감염에 민감한 또 다른 동물과 접촉할 때 증가된 감염 위험성을 가지게 됨을 인지한다. BVDV는 분변-경구 방식으로 동물에서 동물로 전파된다. 감염 징후를 유발하는데 필요한 바이러스 수는 BVD 바이러스의 유형 및 균주와 상관되며 소떼 전체에 전파되는 속도와 상관된다. 감염된 동물은 징후학에 의해 확인할 수 있다. BVDV의 통상적인 징후로는 유산, 불임, 불규칙한 열 주기, 조기 배아사, 태아 미라변성, 면역억제, 이질, 혈소판감소증 및 뇌형성부전이 포함될 수 있다. 질환의 증상들은 통상적으로 백혈구감소증으로 전제되며, 현재까지의 시험은 상기 영향을 확인하는데 초점을 맞추어 왔다.

혈청학적 연구는 지속성 감염(PI)으로 간주되는 소를 포함하여 높은 비율의 BVDV로 감염된 소들이 임상적으로 징후가 없이 유지됨을 밝혔다. 그러므로, 감염 동물을 확인하는 바람직한 방법은 징후학에 의존하기 보다는 바이러스 자체의 존재를 검출하는 것이다. BVDV의 검출 및/또는 BVDV-감염 동물의 검출을 위해 여러 상이한 시험 방법들이 개발되었다. 상기 시험 방법들로는 역전사-중합효소 연쇄 반 응, 효소-연결된 면역분석법(ELISA), 표준 바이러스 분리 기술, 및 면역조직화학이 포함된다[Haines et al., "Monoclonal Antibody-Based Immunohistochemical Detection of Bovine Viral Diarrhea Virus in Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded Tissues", Vet. Pathol., 29:27-32, 1992].

PCR 및 바이러스 분리 기술은 둘 다 그 원래의 민감성으로 인해 각각 매우 낮은 수준의 BVDV를 검출할 수 있다. 귀표 생검 샘플과 같은 조직 샘플에 대한 면역조직화학도 또한 PI 동물을 검출하는데 효과적인 기술이다. ELISA 기술은 다소 덜 민감하긴 하지만, 저렴하기 때문에 동물에서 BVDV 감염을 검출하기 위한 광범위한 진단 도구로 잘 연구되고 있으며, 단시간에 결과를 제공하며, 고도로 훈련된 전문가 및 고도로 전문화된 실험실 설비를 필요로 하지 않는다.

BVDV 감염의 검출을 위한 ELISA 방법은 문헌에 기술되어 있으며(휴처메이어(Huchzermeier) 등의 미국 특허 제 6,174,667 호 및 WO 99/15900 호 및 미국 특허출원 공개공보 2003/0143573 호 참조) 다른 방법들과 비교되어 있다["Comparison of an Antigen Capture Enzyme-Linked Assay with Reverse Transcription-Polymerase Chain Recation and Cell Culture Immunoperoxidase Tests for the Diagnosis of Ruminant Pestivirus Infections", Vet. Microbiaol., 43:75-84, 1995].

본 발명은 감염되기 쉬운 수컷 동물에서 BVDV 바이러스에 의한 고환 감염 및 그 결과 야기되는 정액에서의 확산을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 1 형 및 2 형 BVDV에 의해 야기된 감염에 의해 유발된 고환 감염을 예방 또는 경감시키는데 효과적이다.

본 발명은 하기 실시예로 더 예시되나, 이로 제한되지는 않는다.

실시예 1

고환 보호: 연구 개관

1형 BVDV 및 2형 BVDV 둘 다와 배합된 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 백신 계통을 2형 BVDV에 대해 백신접종을 제공하는 태아 보호 수준을 최적화하기 위해 2003년 11월에 축우 산업에 도입하였다. 여기에는 위약(보비-쉴드(등록상표) IBR-PI3-BRSV) 대비 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5로 성숙기전 백신접종한 것이 심한 2형 BVDV 감염에도 불구하고 고환 감염에 효과적인지 여부를 평가하는 인가전 효과 연구의 결과를 기록하였다.

보다 광범위한 2형 BVDV 감염 연구에 참여한 모든 황소 송아지(n=17)를 보비-쉴드 골드(등록상표) 5에 의한 백신접종이 BVDV에 의한 고환 감염을 효과적으로 방지하였는지를 측정하기 위해 더 평가하였다. 초기 연구에서 모든 송아지는 3 내지 4 개월된, 초유를 주지 않은 육우 송아지(수컷 및 암컷)였다. 최소 면역화 용량[최소 면역화 용량 수준은 백신의 인가 전에 결정되며, 완제품에 존재하는 것보다 적은 부피의 항원성 바이러스를 반영한다. 최소 면역화 용량의 결정은 제품을 방출 수준으로 사용할 때 질환에 대한 적절한 보호를 일관적으로 자극시키는 것을 용이하게 한다]의 1형 및 2형 BVDV 둘 다를 함유한 제형으로 백신접종한지 28 일 후에, 모든 백신접종개체 및 위약 대조군 송아지는 비세포변성 2형 BVDV 균주 24515로 비강내 감염시켰다. 균주 24515는 캐나다에서 감염된 소떼에서 40%보다 많은 소를 죽인 심각한 BVD 발발시에 분리하였다. 감염후에, 10마리의 대조군 소 모두 지연된 바이러스감염(9 내지 14 일), 4 내지 9 일간 105.6 내지 107.2 ℉ 범위의 열, 백혈구감소증(1 내지 9 일), 혈소판감소증(<100,000/㎕), 이환율(4 내지 9 일의 범위) 및 높은 폐사율(10마리 대조군 중 7마리(70%)가 죽었다)을 특징으로 하는 심한 질환을 나타내었다. 대조적으로, 1마리의 백신접종개체만이 바이러스감염을 나타내었고, 6 마리가 1 일 또는 2 일동안 열이 났으며, 1 마리가 1 일동안 백혈구가 감소되었고, 혈소판감소된 것이 없었으며 죽은 것도 없었다. 대체적으로, 20 마리의 백신접종개체 중 18 마리가 연구 전체에 걸쳐 건강하게 유지되었고, 2 마리의 송아지만이 1 일동안 저하를 나타내었다. 이러한 두가지 관찰은 이전 또는 현재의 바이러스감염, 발열, 백혈구감소 또는 혈소판감소와 연관되지 않았다.

BVDV 고환 감염에 대한 평가는 감염후 약 2 주후에 개시하였다. 표 1에 나타낸 바와 같이, 연구 41 일째에 2개의 위약 대조군, 및 42 일째에 나머지 5 마리의 대조군 및 10 마리의 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 백신접종개체 각각으로부터의 생검 샘플로부터 검시에서 고환 샘플을 수거하였다. 두 번째 샘플은 또한 56 일째에 여전히 이용가능한 10 마리의 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 백신접종개체 중 7 마리로부터 수득하였다. 모든 샘플은 조직 배양 분리, 핵산 증폭(RP-nPCR) 및 면역조직화학 시험 방법을 이용하여 BVDV에 대해 시험하였다. 고환 샘플을 수거하고 시험하는 직원은 처리 군 지정에 대한 지식을 갖지 않았다.

바이러스 분리 및 PCR 분석은 오번(Auburn) 대학의 수의학 병리생물학 및 임상 과학 실험실에서 수행하였고, 면역조직화학 분석은 네브라스카-링컨 대학의 수의학 진단 센터에서 수행하였다. 데이터는 분류별 절차하에(SAS/STAT Software Changes and Enhancements through Release 6.12, SAS Institute, Cary, NC; or SAS/STAT User's Cuide Version 8 and SAS Procedures Guide Version 8), 대표적인 화이자 동물 건강 수의학 및 연구, 수명측정학, 기술 및 품질로 분석하였다. 피셔의 정밀 시험(Fisher's exact test)을 이용하여 각 처리군의 동물의 비율을 최소한 하나의 BVDV 양성 시험 결과와 비교하였다. 기술 통계학은 적절한 대로 계산하였다.

결과

표 2 및 도 1은 고환 생검 시편에서 BVDV 검출에 대한 처리군 퍼센트를 요약한 것이다. BVDV 핵산 또는 항원은 위약-접종하고 감염시킨 황소에서 수거한 7개 고환 시편 중 6개(85.7%)에서 검출되었다. 대조적으로, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표)로 접종한 감염된 황소 송아지에서 수거한 고환 시편 어느것에서도 의미있는(P≤0.05) 차이로 BVDV 핵산 또는 항원이 검출되지 않았다(0.0%)

결론 및 고찰

연구 결과는 황소를 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5로 백신접종한 안전성 및 효과 둘 다를 입증하였다. 최소 면역화 용량 수준의 1형 및 2형 BVDV로 제형화된 백신은 고환 감염을 유발하지 않았을 뿐 아니라, 성숙기전 황소 송아지를 2형 BVDV로 심하게 감염시킨 후 고환 감염으로부터 효과적으로 보호하였다.

성숙기전 황소에 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표)의 사용은 소-송아지 및 낙농 작업에서 BVD 억제 프로그램의 중요한 요소일 수 있다. 적시의 백신접종은 일시적 및 지속성 고환 감염 및 정액에서 감염되기 쉬운 소로 BVDV의 후속 전염과 관련된 급성 감염에 대해 황소 송아지를 보호하는 것을 도울 수 있다. 또한, 급성 성숙기후 BVDV 감염을 방지하기 위해 성숙기전 황소를 백신접종하면 정액의 질을 유지할 수 있으며, 이것은 급성 BVDV 감염 후 처음 60 일동안에 영향을 미치는 것으로(감소된 운동성 및 형태 이상) 밝혀졌다.

여기서 결과는 2형 BVDV로 감염후 성공적인 보호를 입증하지만, 1형 BVDV로 감염된 후에서 유사한 결과가 관찰될 것으로 예상된다.

실시예 2

1형 BVDV 감염에 대한 고환 보호: 연구 개관

심한 1형 BVDV 감염에도 불구하고 고환 감염을 예방하는데 있어 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표)의 효과를 평가하기 위한 연구를 착수하였다. 본 연구의 설계는 일방적 처리 구조를 갖는 일반화되고 무작위화된 블록 설계이었다. 모든 연구 실험실 직원에게 처리 정보를 숨겼다.

45 마리의 성숙기 근처의 육우 황소 송아지를 연구에 분배하였다. 송아지는 9 개월 내지 15 개월된 것들이었다. 모든 동물은 1형 및 2형 BVD 바이러스에 혈청반응음성이고, 혈청중의 BVD 바이러스 분리에 음성이며, 혈청으로부터 역전사효소-중첩 중합효소 연쇄 반응(RT-nPCR)에 의해 음성이었다. 42 일째에, 위약 군(n=23) 및 시험 군(n=22)에서 송아지의 체중의 최소 제곱 평균은 각각 625.7 ± 30.94 lb 및 613.5 ± 35.96 lb이었다. 동물들을 위약(보비-쉴드(등록상표) IBR-PI3-BRSV) 또는 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5(IBR-BVDV1-BVDV2-PI3-BRSV)로 백신접종하였다.

최소 면역화 용량을 함유하는 제형으로 백신접종한 지 28 일 후에, 모든 백신접종개체 및 위약 대조군 송아지들에 오번 유니버시티에서 분리한 비세포변성 1형 BVDV 균주 SD-1으로 비강내 감염시켰다. 비강내 감염은 플라스틱 주머니를 콧구멍위에 놓은 다음 10%(부피/부피) 말 혈청 중탄산나트륨(0.75 ㎎/㎖), L-글루타민(0.29 ㎎/㎖) 및 항생물질(100 유니트 페니실린 G, 100 ㎍ 스트렙토마이신 및 0.25 ㎍ 암포테리신 B/㎖)이 보충된 얼스(Earle's) 염이 함유된 MEM에서 성장시킨 바이러스 5 ㎖를 주입시켜 황소를 30 분간 호흡항진시킴으로써 수행하였다. 말 혈청은 바이러스 분리 및 RT-nPCR로 측정할 때 BVD 바이러스가 없었다.

BVDV 고환 감염에 대한 평가는 42 일 및 93 일째에 수행하였다. 기본 연구 설계는 하기 표 3에 개략되어 있다.

감염 후에, 두 군 모두에서 동물 혈청을 바이러스 존재에 대해 시험하였다. 혈청 바이러스 분리에 의해 시험했을 때, 위약 군에서 18 마리 송아지가 34 일째에 바이러스감염되었다. 이들 18 마리 중 9 마리도 35 일에 바이러스감염되었다. 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 군에서 5 마리의 송아지만이 34 일에 바이러스 감염되었다. 다른 바이러스 분리 시험은 임의의 연구 날짜에 어느 한 처리 군의 송아지에 대해 양성이 아니었다.

송아지가 바이러스감염되었는지 여부를 측정하기 위해 RT-nPCR 시험을 또한 이용하였다. 위약 군의 경우, 3, 9, 12 및 6 마리의 송아지가 각각 34, 35, 36 및 37에 양성 결과를 나타내었다. 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 군의 경우, 34, 35, 36 및 37 일에 각각 1, 1, 2 및 1 마리의 송아지가 양성 결과를 나타내었다. 다른 혈청 RT-nPCR 시험은 임의의 연구 날짜에 어느 한 처리 군의 송아지에 대해서도 양성이 아니었다.

최소 제곱 평균 직장 온도를 두 군 모두에 대해 측정하였다. 36 일째에만 평균(위약군 104.0 ℃, 및 보비-쉴드 골드 5 군 102.9 ℃)이 의미있게 차이났다(P≤0.05).

고환 보호 결과

93 일째 고환 생검 샘플에 수행된 시험 결과를 표 4에 나타내었다. 위약군에서 23 마리 송아지 중 6 마리(26.1%)의 샘플이 RT-nPCR 시험에서 양성이었던 반면, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 군의 22 마리 송아지의 샘플은 모두 음성이었다. 위약군 및 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 군 모두로부터의 모든 생검 샘플이 바이러스 분리에 대해 음성이었다. 위약군의 23 마리 송아지중 5 마리(21.7%) 및 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 군의 22 마리 송아지중 0 마리의 생검 샘플이 IHC 시험에서 양성이었다.

두 처리군 모두에서의 모든 송아지 혈청 샘플이 42 일째에 BVD 바이러스에 대한 RT-nPCR 시험에 대해 음성이었다(표 4). 93 일째에, 위약군의 23 마리 송아지중 10 마리(43.5%)가 RT-nPCR 시험에서 양성이었으나, 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5 군의 22 마리 송아지 모두가 음성이었다. 42 일 또는 93 일에 어느 처리 군의 임의의 혈청 샘플에서도 바이러스가 분리되지 않았다(표 4).

위약 군에서, 23 마리 송아지중 10 마리가 한가지 이상의 시험에서 양성이었다. 이들 10 마리 송아지중 4 마리는 한가지 시험에서만(93 일에 정액 RT-PCR) 양성이었다. 한 마리의 송아지는 두가지 시험(93 일에 고환 생검 RT-nPCR 및 정액 RT-nPCR)에 대해 양성이었다. 5 마리의 송아지는 3가지 시험(93 일에 고환 생검 RT-nPCR, 정액 RT-nPCR 및 생검 IHC)에 대해 양성이었다.

각 동물에 대해, 임의 시점에서 정액 또는 고환 생검에서 BVD 바이러스의 존재/부재를 측정하고, 처리군에 따라 요약하고, 실시예 1에 기술된 바와 같은 피셔의 정밀 시험을 이용하여 분석하였다.

결론

본 연구에서, 황소 송아지를 보비-쉴드(등록상표) 골드(등록상표) 5로 백신접종함으로써 1형 BVD 바이러스에 의한 지속성 고환 감염 및 이어지는 정액중 바이러스의 확산이 방지되었다. 양방적 피셔의 정밀 시험에 의한 하나 이상의 양성 시험에 대한 위약 및 백신접종 동물간의 현저한 차이는 의미있었다(P=0.0002).

상기에 인용된 모든 특허, 특허출원 및 출판물은 본원에 나타낸 개시내용과 상반되지 않는 정도로 그대로 본원에 참고로 인용한다.

본 발명은 기술된 특정 태양으로 범위가 제한되지 않으며, 기술된 특정 태양은 본 발명의 개별적 태양들의 단일 예시로 나타낸 것이다. 기능적으로 동등한 조성물 및 방법들이 본 발명의 범위내에 속한다. 사실상, 본원에 나타내고 기술한 것 이외에, 본 발명의 다양한 변형이 상기 설명으로부터 당해 분야에 숙련된 자에게 명백해질 것이다. 상기 변형은 첨부된 청구의 범위의 범주내에 속한다.

도 1은 2형 BVDV 감염후 BVDV에 양성인 고환 생검 시편의 퍼센트이다. 기호: VI = 바이러스 분리, PCR = 중합효소 연쇄 반응, IHC = 면역조직화학, a,b 상이한 소문자 상첨자가 있는 퍼센트는 의미있게(P≤0.05) 차이가 난다.

Claims

불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 약독화된 1형 BVDV 백신 및 약독화된 2형 BVDV 백신으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 백신을 효과량으로 감염되기 쉬운 인간이 아닌 수컷 동물에게 투여함을 포함하는, 인간이 아닌 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방 또는 억제하는 방법.
제 1 항에 있어서,

동물이 황소, 숫양 및 수퇘지로 이루어진 군에서 선택되는 방법.
제 2 항에 있어서,

동물이 황소인 방법.
제 1 항에 있어서,

백신이 약독화된 1형 BVDV 백신 및 약독화된 2형 BVDV 백신을 둘 다 포함하는 방법.
제 4 항에 있어서,

하나 이상의 약독화된 BVDV 백신이 세포병원성 바이러스로부터 유도된 방법.
제 4 항에 있어서,

하나 이상의 약독화된 BVDV 백신이 비-세포병원성 바이러스로부터 유도된 방법.
제 4 항에 있어서,

약독화된 BVDV 백신이 둘 다 세포병원성 바이러스로부터 유도된 방법.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,

백신이 소의 헤르페스 바이러스(BHV-1), 제 3형 파라인플루엔자 바이러스(PIV3), 소의 호흡기 세포융합 바이러스(BRSV), 렙토스피라 캐니콜라, 렙토스피라 그리포티포사, 렙토스피라 보그페터세니 하디오 - 프라지트노, 렙토스피라 익테로헤모레지아, 렙토스피라 인테로간스 포모나, 렙토스피라 보그페터세니 하드조 - 보비스, 렙토스피라 브래티슬라바, 캄필로박터 페투스 , 만헤이미아 (파스튜렐라) 헤모라이티카, 파스튜렐라 멀토시다, 마이코박테리움 보비스 및 마이코박테리움 디스파로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추가 항원을 포함하는 방법.
제 8 항에 있어서,

추가 항원이 소의 헤르페스 바이러스(BHV-1), 제 3형 파라인플루엔자 바이러스(PIV3) 및 소의 호흡기 세포융합 바이러스(BRSV)를 포함하는 방법.
불활성화 1형 BVDV 백신, 불활성화 2형 BVDV 백신, 약독화된 1형 BVDV 백신 및 약 독화된 2형 BVDV 백신으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 백신을 혼합하는 것을 포함하는, BVDV 고환 감염의 위험성이 증가된 감염되기 쉬운 인간이 아닌 수컷 동물에서 고환 BVDV 감염을 예방 또는 억제하기 위한 약제를 제조하는 방법.
제 10 항에 있어서,

동물이 황소, 숫양 및 수퇘지로 이루어진 군에서 선택되는 방법.
제 11 항에 있어서,

동물이 황소인 방법.
제 10 항에 있어서,

백신이 약독화된 1형 BVDV 백신 및 약독화된 2형 BVDV 백신을 둘 다 포함하는 방법.
제 13 항에 있어서,

하나 이상의 약독화된 BVDV 백신이 세포병원성 바이러스로부터 유도된 방법.
제 13 항에 있어서,

하나 이상의 약독화된 BVDV 백신이 비-세포병원성 바이러스로부터 유도된 방법.
제 13 항에 있어서,

약독화된 BVDV 백신이 둘 다 세포병원성 바이러스로부터 유도된 방법.
제 10 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,

백신이 소의 헤르페스 바이러스(BHV-1), 제 3형 파라인플루엔자 바이러스(PIV3), 소의 호흡기 세포융합 바이러스(BRSV), 렙토스피라 캐니콜라, 렙토스피라 그리포티포사, 렙토스피라 보그페터세니 하디오 - 프라지트노, 렙토스피라 익테로헤모레지아, 렙토스피라 인테로간스 포모나, 렙토스피라 보그페터세니 하드조 - 보비스, 렙토스피라 브래티슬라바, 캄필로박터 페투스 , 만헤이미아 (파스튜렐라) 헤모라이티카, 파스튜렐라 멀토시다, 마이코박테리움 보비스 및 마이코박테리움 디스파로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추가 항원을 포함하는 방법.
제 17 항에 있어서,

추가 항원이 소의 헤르페스 바이러스(BHV-1), 제 3형 파라인플루엔자 바이러스(PIV3) 및 소의 호흡기 세포융합 바이러스(BRSV)를 포함하는 방법.