ES2306101T3 - Procedimiento de vacunacion contra la infeccion testicular por bvdv. - Google Patents
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Abstract
Uso de una cantidad eficaz de un antígeno seleccionado entre el grupo constituido por un virus de la diarrea vírica bovina (BVDV) tipo 1 inactivado, un BVDV tipo 2 inactivado, un BVDV tipo 1 vivo modificado y un BVDV tipo 2 vivo modificado para la fabricación de una vacuna para prevenir infección testicular por BVDV en un animal macho susceptible.
Description
Procedimiento de vacunación contra la infección
testicular por BVDV.
Los procedimientos de la invención se refieren a
procedimientos para prevenir la infección testicular por el virus
de la diarrea vírica bovina mediante la inmunización de los animales
macho susceptibles contra la infección.
El virus de la diarrea vírica bovina (BVDV) es
un patógeno económicamente significativo del ganado vacuno y otros
animales susceptibles que puede trasmitirse en el semen de los toros
y otros animales macho susceptibles infectados de forma persistente
y aguda. Este patógeno provoca enfermedad gastrointestinal,
respiratoria y reproductora en los animales susceptibles.
Aunque la enfermedad gastrointestinal y
respiratoria debida a cepas altamente patógenas de BVDV son más
dramáticas clínicamente, las pérdidas reproductoras debidas al BVDV
pueden ser mucho más significativas económicamente. La bibliografía
sobre la transmisión de BVDV ha establecido que el virus en el semen
de los toros puede infectar a las vacas susceptibles inseminadas,
provocando tasas reducidas de preñez, muerte embrionaria temprana,
abortos y nacimiento de terneros infectados persistentemente con el
BVDV.^{1-3}
Los toros infectados persistentemente, infectan
a las vacas inseminadas susceptibles de la forma más consistente,
debido a que su semen contiene una concentración elevada de virus
(10^{7,6} dosis infecciosas de cultivos celulares (50%)/ml)
(CCID_{50}/ml).^{3} Por comparación, los testículos infectados
de los toros inmunocompetentes infectados de forma aguda trasmiten
concentraciones menores de virus (5 a 75 CCID_{50}/ml) en el
semen, pero son también capaces de trasmitir BVDV.^{4} Un estudio
informó de que 25 a 50 CCID_{50}/ml de virus en semen infectaba
al 5% de las novillas inseminadas y, la subsiguiente transmisión
horizontal de BVDV de las novillas infectadas a las compañeras de
hato preñadas, provocó la infección persistente de sus
fetos.^{5}
Dos equipos de investigadores han informado
también de que la infección aguda de los toros pospúberes puede
provocar la infección persistente por BVDV que se localiza en los
testículos.^{6,7} Un caso único se produjo en un toro
seropositivo no virémico que se mantenía en una estación de
inseminación artificial de Nueva Zelanda. El toro había sido
admitido en el centro de inseminación artificial después de que los
intentos de aislar el BVDV de la sangre fueran negativos. A pesar
de la presencia de anticuerpos neutralizadores contra el BVDV, el
toro transmitió virus en el semen a niveles bajos (2 x 10^{3}
CCID_{50}/ml) de forma continua durante 11 meses hasta que se
sacrificó al animal. La fuente de la infección aguda era
desconocida. En el examen postmortem, el virus se aisló
únicamente de los testículos del toro. El virus del semen de este
toro provocó la infección y seroconversión subsiguiente de 1 de 3
novillas seronegativas inseminadas. En una segunda infección
inducida artificialmente, se detectó el BVDV mediante reacción en
cadena de la polimerasa de transcripción inversa
(RT-nPCR) en el semen de 2 de 3 toros pospúberes no
virémicos durante hasta 7 meses, pero el virus no pudo aislarse
mediante procedimientos de cultivo tisular estándar. El semen
recogido 5 meses después de la exposición inicial provocó la
infección por BVDV en una novilla seronegativa tras la
administración intravenosa. El semen recogido el día de la
exposición y 7 meses después de la exposición no provocó infección
en dos novillas seronegativas adicionales.^{7}
Dos estudios han observado que los toros
infectados de forma aguda pueden transmitir BVDV en el semen con
espermatozoides con una concentración, motilidad y morfología
aceptables.^{4,5} Otro estudio encontró un descenso en la
motilidad, un aumento en los defectos de la diadema, cabezas de
espermatozoides pequeñas y gotículas proximales en los toros
infectados de forma aguda.^{9}
Independientemente de cualquier incertidumbre
sobre los detalles en lo que se refiere a capacidad de transmisión
mediante la cría natural y el efecto sobre la fertilidad de los
toros, está claro que la infección testicular de los animales macho
susceptibles por BVDV tiene un impacto económico significativo en
virtud de las pérdidas reproductoras debidas a la transmisión de
BVDV a las vacas.
Las infecciones víricas testiculares plantean un
reto significativo para el tratamiento o prevención mediante la
inmunización porque se sabe que los testículos están
inmunológicamente secuestrados. Sorprendentemente, los inventores
han demostrado que la inmunización es un medio eficaz de controlar
la infección testicular por BVDV entre los animales
susceptibles.
\vskip1.000000\baselineskip
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Transmission of bovine virus diarrhea virus (BVDV) by artificial
insemination (AI) with semen from a
persistently-infected bull. Veterinary
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124:63-64.
Fig. 1 - Porcentaje de muestras de biopsias
testiculares positivas para BVDV tras exposición a BVDV tipo 2.
Leyenda: VI = aislamiento de virus, PCR = reacción en cadena de la
polimerasa, IHC = inmunohistoquímica, ^{a, b} Los porcentajes con
letras minúsculas en superíndice diferentes son significativamente
diferentes (P < 0,05).
La invención comprende un procedimiento para
prevenir o tratar la infección testicular por BVDV en un animal
macho susceptible que comprende la administración al animal de una
cantidad eficaz de una vacuna que se selecciona del grupo que
consiste en una vacuna con BVDV tipo 1 inactivado, una vacuna con
BVDV tipo 2 inactivado, una vacuna con BVDV tipo 1 vivo modificado
y una vacuna con BVDV tipo 2 vivo modificado.
La invención comprende también una vacuna que se
selecciona del grupo que consiste en una vacuna con BVDV tipo 1
inactivado, una vacuna con BVDV tipo 2 inactivado, una vacuna con
BVDV tipo 1 vivo modificado y una vacuna con BVDV tipo 2 vivo
modificado para usar como medicamento para prevenir la infección
testicular por BVDV en un animal macho susceptible.
La invención comprende además el uso de una
vacuna que se selecciona del grupo que consiste en una vacuna con
BVDV tipo 1 inactivado, una vacuna con BVDV tipo 2 inactivado, una
vacuna con BVDV tipo 1 vivo modificado y una vacuna con BVDV tipo 2
vivo modificado para fabricar un medicamento para prevenir la
infección testicular por BVDV en un animal macho susceptible.
La invención comprende además un procedimiento
para prevenir la infección testicular por BVDV en un animal macho
susceptible que comprende identificar un animal con un riesgo
aumentado de infección testicular por BVDV; y administrar al animal
una cantidad eficaz de una vacuna que se selecciona del grupo que
consiste en una vacuna con BVDV tipo 1 inactivado, una vacuna con
BVDV tipo 2 inactivado, una vacuna con BVDV tipo 1 vivo modificado
y una vacuna con BVDV tipo 2 vivo modificado.
La invención comprende también una vacuna que se
selecciona del grupo que consiste en una vacuna con BVDV tipo 1
inactivado, una vacuna con BVDV tipo 2 inactivado, una vacuna con
BVDV tipo 1 vivo modificado y una vacuna con BVDV tipo 2 vivo
modificado para usar como medicamento para prevenir la infección
testicular por BVDV en un animal macho susceptible con riesgo
aumentado de infección testicular por BVDV.
La invención comprende además el uso de una
vacuna que se selecciona del grupo que consiste en una vacuna con
BVDV tipo 1 inactivado, una vacuna con BVDV tipo 2 inactivado, una
vacuna con BVDV tipo 1 vivo modificado y una vacuna con BVDV tipo 2
vivo modificado para fabricar un medicamento para prevenir la
infección testicular por BVDV en un animal macho susceptible con
riesgo aumentado de infección testicular por BVDV.
La invención comprende también un artículo
manufacturado que comprende un recipiente o recipientes que
contienen una vacuna de BVDV que se selecciona del grupo que
consiste en una vacuna con BVDV tipo 1 inactivado, una vacuna con
BVDV tipo 2 inactivado, una vacuna con BVDV tipo 1 vivo modificado y
una vacuna con BVDV tipo 2 vivo modificado; e instrucciones para el
uso de la vacuna de BVDV para prevenir la infección testicular por
BVDV en un animal macho susceptible.
Los animales macho susceptibles pueden incluir
toros, carneros y verracos. En una realización preferida el animal
es un toro.
Las vacunas y artículos de fabricación pueden
comprender tanto una vacuna con BVDV tipo 1 vivo modificado como
una vacuna con BVDV tipo 2 vivo modificado.
Las vacunas pueden derivarse de un virus
citopatógeno o no citopatógeno.
Opcionalmente las vacunas y artículos
manufacturados de la invención pueden comprender al menos un
antígeno adicional que se selecciona del grupo que consiste en
virus del herpes bovino (BHV-1); virus paragripal
tipo 3 (PIV3); virus sincitial respiratorio bovino (BRSV);
Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira
borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira
icterohaemmorrhagia, Leptospira interrogans pomona, Leptospira
borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava,
Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica,
Pasteurella multocida, Mycobacterium bovis y Mycobacterium
dispar.
En una realización preferida las vacunas y
artículos manufacturados de la invención pueden comprender al menos
un antígeno adicional que se selecciona del grupo que consiste en
virus del herpes bovino (BHV-1), virus paragripal
tipo 3 (PIV3) y virus sincitial respiratorio bovino (BRSV).
La presente invención proporciona un
procedimiento para tratar o prevenir la infección testicular por los
virus de la BVDV, y la transmisión resultante por el semen, en un
animal macho susceptible. El procedimiento de la presente invención
es efectivo para prevenir o reducir las infecciones testiculares
provocadas por infecciones provocadas por BVDV tipos 1 y 2.
El "virus de la diarrea vírica bovina"
("BVDV") es un virus de ARN monocatenario, de sentido positivo,
pequeño de la familia Flaviviridae y el género Pestivirus. Se han
descrito dos biotipos de BVDV, citopático (CP) y no citopático (NC)
basándose en la presencia o ausencia de un efecto citopático visible
in vitro cuando se infectan monocapas de células
susceptibles. El biotipo no citotápico se aísla de brotes en el
campo en una gran mayoría de los casos. Las cepas del virus de la
diarrea vírica bovina pueden clasificarse también en 2 especies
separadas (es decir, genotipos), tipo 1 y tipo 2, basándose en
diferencias sustanciales en el ARN vírico.
El término "animal susceptible" se refiere
a cualquier animal que es susceptible de padecer infecciones por
BVDV por ejemplo el ganado vacuno, ovino y porcino.
El término "animal macho susceptible"
quiere decir cualquier animal macho que es susceptible a infecciones
testiculares por BVDV, por ejemplo ganado vacuno, ovino y porcino
macho. El ganado vacuno macho sin castrar se denomina "toros".
El ganado ovino macho sin castrar se denomina "carneros". El
ganado porcino macho sin castrar se denomina "verracos".
El término "prevenir" o "controlar"
con respecto a la infección testicular quiere decir reducir o
eliminar el riesgo de infección por BVDV tipos 1 y 2 virulentos de
los testículos de un animal macho susceptible; mejorar o aliviar
los síntomas de una infección o acelerar la recuperación de una
infección. La vacunación se considera terapéutica si existe una
reducción de la carga vírica o bacteriana evaluada mediante biopsia
testicular o presencia de virus en el semen.
El término "infección" puede significar
infección aguda o persistente con BVDV.
La infección "aguda" o "transitoria"
con BVDV se produce cuando un animal susceptible inmunocompetente
está expuesto a una cepa citopática o no citopática de BVDV. Aunque
la infección subclínica es la más común, pueden observarse señales
tales como depresión, inapetencia, erosiones y ulceraciones orales,
diarrea y muerte. Un animal inmunocompetente infectado de forma
aguda puede trasmitir el virus a los animales susceptibles, pero de
una forma mucho menos eficiente que los animales infectados de forma
persistente.
Una infección testicular aguda se refiere a una
infección aguda o transitoria de los testículos de un animal macho
susceptible como resultado de una infección sistémica transitoria.
Algunos informes indican que un toro infectado de forma aguda puede
trasmitir virus en el semen con concentración, motilidad y
morfología aceptables de los espermatozoides. Sin embargo, en otros
informes, los autores han observado un descenso en la motilidad de
los espermatozoides y un aumento en los defectos de la diadema,
cabezas de espermatozoides pequeñas y gotículas proximales
coincidiendo con la infección aguda.
Una infección persistente con BVDV se produce
cuando un animal susceptible se infecta con una cepa no citopática
de BVDV antes del desarrollo de la inmunocompetencia aproximadamente
a los 125 días de la gestación. Los animales infectados de forma
persistente desarrollan inmunotolerancia a la cepa con la que han
sido infectados, actúan como reservorio del patógeno y comúnmente
transmiten grandes cantidades de virus en la orina, heces, semen,
saliva, lágrimas y moco nasal durante toda la vida.
Una infección testicular persistente se refiere
a una infección persistente de los testículos de un animal macho
susceptible como resultado de una infección sistémica aguda o
persistente.
Una vacuna usada en la invención comprende BVDV
tipos 1 y/o 2 y un vehículo veterinariamente aceptable.
Tradicionalmente, las vacunas víricas pertenecen
a dos clases:
Las vacunas que contienen patógenos vivos
contienen virus vivos que han sido tratados o cultivados de tal
forma que son menos patógenos (atenuados) y las vacunas que
contienen partículas de virus muertos (inactivados). En el contexto
del BVDV, los mismos virus pueden ser citopatógenos o no
citopatógenos. Las cepas del virus de la diarrea vírica bovina
pueden clasificarse también en 2 especies separadas (es decir,
genotipos), tipo 1 y tipo 2, basándose en diferencias sustanciales
en el ARN vírico. De este modo, en principio, podrían existir ocho
clases principales de vacuna contra el BVDV, aunque la gran mayoría
de las vacunas comerciales están basadas en virus citopatógenos.
Entre las vacunas de BVDV que están disponibles
actualmente comercialmente están aquellas en las que el virus ha
sido inactivado químicamente (McClurkin y cols., Arch. Virol. 58:
119 (1978); Fernelius, y cols., Am. J. Vet. Res. 33:
1421-1431 (1972); y Kolar y cols., Am. J. Vet. Res.
33: 1415-1420 (1972)). Estas vacunas típicamente
han necesitado la administración de dosis múltiples para lograr una
inmunización primaria, proporcionan una inmunidad de corta duración
y no protegen contra la transmisión fetal (Bolin, Vet. Clin. North.
Am. Food Anim. Pract. 11: 615-625 (1995)). En las
ovejas, se ha comunicado una vacuna de subunidades basada en una
proteína E2 purificada (Bruschke y cols., Vaccine 15:
1940-1945 (1997)). Desgraciadamente, sólo una de
tales vacunas parece proteger a los fetos de la infección y esta
protección se limita a una cepa de virus homólogos.
Además, se han producido vacunas con virus vivos
modificados (MLV) usando virus de la BVD que ha sido atenuado
mediante pases repetidos en células bovinas o porcinas (Coggins y
cols., Cornell Vet. 51: 539 (1961); y Phillips y cols., Am. J. Vet
Res. 36: 135 (1975)) o mediante mutaciones inducidas químicamente
que confieren al virus un fenotipo sensible a la temperatura
(Lobmann y cols., Am. J. Vet. Res. 45: 2498 (1984); y Lobmann y
cols., Am. J. Vet. Res 47: 557-561 (1986)). Se ha
demostrado que una dosis única de vacuna de MLV es suficiente para
la inmunización y la duración de la inmunidad puede extenderse
durante años en el ganado vacuno vacunado (Coria y cols., Can. J.
Con. Med. 42: 239 (1978)). Además, se ha reseñado protección cruzada
en terneros vacunados con vacunas de tipo MLV (Martin y cols., In
Proceedings of the Conference Res. Workers' Anim. Dis., 75: 183
(1994)). Sin embargo, las consideraciones sobre seguridad, tales
como la posible transmisión fetal del virus han sido una
preocupación principal con respecto al uso de estas vacunas (Bolin,
Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. 11: 615-625
(1995)).
En una realización preferida, el componente de
BVDV tipo 1 es citopátogeno vivo modificado (cepa
cpBVD-1 NADL-National Animal
Disease Center, Estados Unidos, Dep. de Agricultura, Ames, Iowa,
ATCC VR-534). En otra realización preferida el
componente de BVDV tipo 2 es citopático vivo modificado (cepa cp
BVD-2 53637, ATCC nº PTA-4859). Tal
como se describe en la solicitud de patente de Estados Unidos nº
60/490.834 en tramitación con la presente, presentada el 29/7/03,
ambos aislamientos contienen una inserción en la región
NS2-3. El cpBVDV-1 atenuado
contiene una inserción de una secuencia codificante DnaJ1 de Bos
taurus en posición 3' de la timidina en la posición de
nucleótido nº 4993 (numeración de secuencia de NADL), que es el
tercer nucleótido del codón que codifica el resto de glicina en la
posición del aminoácido 1536. El cp BVDV-2 atenuado
contiene una inserción de una secuencia codificante DnaJ1 de Bos
taurus en el mismo sitio del genoma. En otra realización
preferida, los antígenos vivos modificados están desecados,
liofilizados o vitrificados.
En una realización, las composiciones de vacunas
de la presente invención incluyen una cantidad eficaz de uno o más
de los virus de la BVD descritos anteriormente, preferiblemente la
cepa cpBVD-1 NADL (cepa cpBVD-1
NADL-National Animal Disease Center, Estados Unidos
Departamento de Agricultura, Ames, Iowa, ATCC
VR-534); la cepa de cpBVD-2 53637
(ATCC nº PTA-4859), la cepa de IBRV
C-13 (Cutter Laboratories); la cepa de PIV3
Reisinger (Univ. Nebraska); la cepa de BRSV 375 (Veterinary Medical
Research Institute, Ames, Iowa). Los virus de la BVD purificados
pueden usarse directamente en una composición de vacuna, o
preferiblemente, los virus de la BVD pueden modificarse
adicionalmente mediante pases en serie in vitro. Típicamente
una vacuna contiene entre aproximadamente 1 x 10^{2} y
aproximadamente 1 x 10^{10} unidades formadoras de placas o
TCID_{50} de virus, con un vehículo veterinariamente aceptable y
opcionalmente un adyuvante, en un volumen entre 0,1 y 5 ml y
preferiblemente aproximadamente 2 ml. La cantidad precisa de un
virus en una composición de vacuna eficaz para proporcionar un
efecto protector puede ser determinada por un veterinario experto.
Los vehículos veterinariamente aceptables adecuados para usar en
composiciones de vacunas pueden ser cualesquiera de los que se
describen más adelante.
Típicamente, una vacuna contiene entre
aproximadamente 1 x 10^{2} y aproximadamente 1 x 10^{10}
unidades formadoras de placas o colonias de virus, con un vehículo
veterinariamente aceptable y un adyuvante, en un volumen entre 0,1
y 5 ml y preferiblemente aproximadamente 2 ml. La cantidad precisa
de un virus en una composición de vacuna eficaz para proporcionar
un efecto protector puede ser determinada por un veterinario
experto. Los vehículos veterinariamente aceptables adecuados para
usar en composiciones de vacunas pueden ser cualesquiera de los que
se describen más adelante. La vía típica de administración será la
inyección intramuscular o subcutánea de entre aproximadamente 0,1 y
aproximadamente 5 ml de vacuna. Las composiciones de vacunas de la
presente invención pueden incluir también ingredientes activos
adicionales tales como otras composiciones de vacunas contra BVDV,
por ejemplo las que se describen en los documentos WO 95/12682, WO
99/55366, la patente de Estados Unidos nº 6.060.457, la patente de
Estados Unidos nº 6.015.795, la patente de Estados Unidos nº
6.001.613 y la patente de Estados Unidos nº 5.593.873.
La vacunación se logrará mediante una única
inoculación o mediante inoculaciones múltiples. Si se desea, puede
recogerse suero de los animales inoculados y analizarlo para
determinar la presencia de anticuerpos contra el virus de la BVD.
En otra realización de la presente invención, las composiciones de
vacunas se usan para tratar infecciones testiculares de BVDV. En
consecuencia, la presente invención proporciona procedimientos para
controlar o prevenir infecciones en sujetos animales provocadas por
los virus de la BVD tipos 1 ó 2, o una combinación del tipo 1 y el
tipo 2, administrando al animal una cantidad eficaz de un virus de
la BVDV de la presente invención. En otra realización, las
composiciones de vacunas de la presente invención son eficaces para
mejorar la fertilidad del hato y para reducir el riesgo de
infecciones testiculares entre animales macho susceptibles.
En la práctica de los presentes procedimientos,
una composición de vacuna de la presente invención se administra a
ganado vacuno, preferiblemente por vía intramuscular o subcutánea,
aunque también pueden usarse otras vías de administración, tales
como por ejemplo la vía oral, intranasal (por ejemplo aerosol u
otras formas de administración sin agujas), en los nódulos
linfáticos, intradérmica, intraperitoneal, administración rectal o
vaginal o mediante una combinación de vías. Se prefiere la
administración intramuscular en la región del cuello del animal.
Pueden ser necesarios refuerzos y la posología puede ajustarse para
proporcionar una inmunización óptima.
Por "inmunógeno" se quiere decir la
capacidad de un virus de la BVD de provocar una respuesta
inmunitaria en una animal contra los virus de la BVD tipo 1 o tipo
2 o contra ambos virus de la BVD tipo 1 y tipo 2. La respuesta
inmunitaria puede ser una respuesta inmunitaria celular mediada
principalmente por linfocitos T citotóxicos o una respuesta
inmunitaria humoral mediada principalmente por linfocitos T
colaboradores, que a su vez activa los linfocitos B que provocan la
producción de anticuerpos.
De acuerdo con la presente invención, los virus
están preferiblemente atenuados mediante pases en serie en el
cultivo celular antes de usar en una composición inmunógena. Los
procedimientos de modificación son notorios para los expertos en la
técnica.
Las composiciones de vacunas que se usan en los
procedimientos de la presente invención pueden incluir también
ingredientes activos adicionales tales como otras composiciones
inmunógenas contra BVDV, por ejemplo las que se describen en la
solicitud de patente con el nº de serie 08/107.908 en tramitación
con la presente, los documentos WO 95/12682, WO 99/55366, la
patente de Estados Unidos nº 6.060.457, la patente de Estados Unidos
nº 6.015.795, la patente de Estados Unidos nº 6.001.613 y la
patente de Estados Unidos nº 5.593.873.
Además, los objetivos de la presente invención
pueden lograrse administrando otros antígenos distintos a los BVDV
tipos 1 y/o 2 (una "vacuna combinada") tales antígenos
incluyen, pero sin limitación, BRSV, BHV-1, PIV3,
Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira
borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira
icterohaemmorrhagia, Leptospira interrogans pomona, Leptospira
borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira bratislava,
Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica,
Pasteurella multocida, Mycobacterium bovis y Mycobacterium
dispar. En varias realizaciones preferidas, la fuente de la
vacuna combinada es Bovi-Shield® GOLD^{TM}
IBR-BVD, Bovi-Shield® GOLD^{TM} 3,
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5,
Bovi-Shield® GOLD^{TM}
IBR-BVD-BRSV-LP,
Bovi-Shield® GOLD^{TM} FP 5 L5,
Bovi-Shield® GOLD^{TM} FP 5 VL5 o Preguard® GOLD
FP 10 (Pfizer, Inc.).
Además, las composiciones inmunógenas y de
vacunas que se emplean en los procedimientos de la presente
invención pueden incluir uno o más vehículos veterinariamente
aceptables. Tal como se usa en la presente memoria, "un vehículo
veterinariamente aceptable" incluye cualquiera y todos los
disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, adyuvantes,
agentes estabilizantes, diluyentes, conservantes, agentes
antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos, agentes
retardadores de la adsorción y similares. Los diluyentes pueden
incluir agua, solución salina, dextrosa, etanol, glicerol y
similares. Los agentes isotónicos pueden incluir cloruro sódico,
dextrosa, manitol, sorbitol y lactosa entre otros. Los
estabilizantes incluyen albúmina, entre otros. Los adyuvantes
incluyen, pero sin limitación, el sistema de adyuvantes RIBI (Ribi
Inc.), alumbre, gel de hidróxido de aluminio, colesterol,
emulsiones de aceite en agua, emulsiones de agua en aceite, tales
como, por ejemplo adyuvantes completo e incompleto de Freund,
copolímero de bloque (CytRx, Atlanta GA), SAF-M
(Chiron, Emeryville CA), adyuvante AMPHIGEN®, saponina, Quil A,
QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA),
GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc.,
Birmingham, AL) u otras fracciones de saponinas,
monofosforil-lípido A, adyuvante Avridina
lípido-amina, enterotoxina termolábil de E.
coli (recombinante o no), toxina del cólera o dipéptido
muramilo, entre muchos otros. Las composiciones de las vacunas
pueden incluir además uno o más agentes inmunomoduladores distintos
tales como, por ejemplo interleuquinas, interferones u otras
citoquinas. Las composiciones de las vacunas que se emplean en los
procedimientos de la presente invención pueden incluir también
gentamicina y mertiolato. Aunque las cantidades y concentraciones
de adyuvantes y aditivos de utilidad en el contexto de la presente
invención pueden ser determinadas fácilmente por el experto en la
técnica, la presente invención contempla composiciones que
comprenden desde aproximadamente 50 \mug a aproximadamente 2000
\mug de adyuvante y preferiblemente aproximadamente 500
\mug/dosis de 2 ml de la composición de la vacuna. En otra
realización preferida, la presente invención contempla las
composiciones de las vacunas que comprenden desde aproximadamente 1
\mug/ml a aproximadamente 60 \mug/ml de antibiótico y, más
preferiblemente, menos de aproximadamente 30 \mug/ml de
antibiótico.
Las composiciones de las vacunas que se emplean
en los procedimientos de la presente invención pueden prepararse en
formas diversas dependiendo de la vía de administración. Por
ejemplo, las composiciones de las vacunas pueden prepararse en
forma de soluciones o dispersiones acuosas estériles adecuadas para
uso inyectable o prepararse en formas liofilizadas usando técnicas
de liofilización. Las composiciones de las vacunas liofilizadas se
mantienen típicamente a aproximadamente 4ºC y pueden reconstituirse
en una disolución estabilizante, por ejemplo solución salina o/y
HEPES con o sin adyuvante.
Las composiciones de las vacunas de la presente
invención pueden administrarse a sujetos animales para inducir una
respuesta inmunitaria contra los virus de la BVD tipo 1 o tipo 2 o
contra ambos virus de la BVD tipo 1 y tipo 2. En consecuencia, otra
realización de la presente invención proporciona procedimientos para
estimular una respuesta inmunitaria contra los virus de la BVD tipo
1 o tipo 2 o contra una combinación de los virus de la BVD tipo 1 y
tipo 2 administrando a un sujeto animal una cantidad eficaz de una
composición inmunógena de la presente invención descrita
anteriormente. Por "sujeto animal" se pretende incluir a
cualquier animal que sea susceptible a las infecciones por BVDV,
tal como ganado vacuno, ovino y porcino.
De acuerdo con los procedimientos de la presente
invención, una composición inmunógena preferida para la
administración a un sujeto animal incluye el virus de la BVDV cp
NADL y/o el virus de la BVDV cp53637. Una composición inmunógena
que contiene un virus de la BVDV, preferiblemente vivo modificado
por pases en serie en cultivo, se administra a ganado vacuno
preferiblemente por las vías intramuscular o subcutánea, aunque
también pueden usarse otras vías de administración, tales como por
ejemplo por vía oral, intranasal, en los nódulos linfáticos,
intradérmica, intraperitoneal, administración rectal o vaginal o
mediante una combinación de vías.
Los protocolos de inmunización pueden
optimizarse usando procedimientos notorios en la técnica. Puede
administrarse una dosis única a los animales o, de forma
alternativa, pueden tener lugar dos o más inoculaciones con
intervalos de dos a diez semanas. Dependiendo de la edad del
animal, puede volverse a administrar la composición inmunógena o de
la vacuna. Por ejemplo, la presente invención contempla la
vacunación de ganado vacuno sano antes de los seis meses de edad y
la revacunación a los seis meses de edad. En otro ejemplo, la
presente invención contempla la vacunación del ganado vacuno antes
de la fase de cría, aproximadamente 5 semanas antes de la fase de
cría (o antes de ser añadido a un hato) y opcionalmente de nuevo
aproximadamente 2 semanas antes de la fase de cría o durante la
gestación para proteger al feto de la infección provocada por BVDV
tipos 1 y 2. También pueden administrarse dosis únicas de las
composiciones de la presente invención aproximadamente 3 a 4
semanas después de una primera dosis. También se contempla la
revacunación semestral con una dosis única de la vacuna combinada
para prevenir la infección fetal con BVDV.
El grado y naturaleza de las respuestas
inmunitarias inducidas en el ganado vacuno pueden evaluarse usando
una variedad de técnicas. Por ejemplo, pueden recogerse los sueros
de los animales inoculados y analizarse para determinar la
presencia de anticuerpos específicos para los virus de la BVDV, por
ejemplo en un ensayo convencional de neutralización de virus.
El término "cantidad eficaz" se refiere a
una cantidad de vacuna combinada suficiente para provocar una
respuesta inmunitaria en el animal al que se administra. La
respuesta inmunitaria puede comprender, sin limitación, inducción
de inmunidad celular y/o humoral. La cantidad de una vacuna que es
terapéuticamente eficaz puede variar dependiendo del virus
particular que se use, el estado del ganado y/o el grado de
infección y puede ser determinada por un veterinario.
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Las vacunas inactivadas o con patógenos vivos
modificados para usar en el procedimiento de la presente invención
pueden prepararse usando una variedad de procedimientos que son
conocidos en la técnica.
Por ejemplo, pueden obtenerse aislamientos de
BVDV directamente del útero de vacas infectadas usando técnicas
conocidas.
Los aislamientos de BVDV pueden atenuarse usando
una variedad de procedimientos conocidos que incluyen pases en
serie, por ejemplo. Además de los aislamientos víricos vivos
modificados, un producto de vacuna empleado en los procedimientos
de la presente invención puede incluir también una cantidad
apropiada de uno o más adyuvantes usados comúnmente. Los adyuvantes
adecuados pueden incluir, pero sin limitación: geles minerales, por
ejemplo hidróxido de aluminio; sustancias tensioactivas tales como
lisolecitina; glucósidos, por ejemplo derivados de saponina tales
como Quil A o GPI-0100; polioles plurónicos;
polianiones; polímeros de bloque no iónicos, por ejemplo Pluronic
F-127 (B.A.S.F., EE. UU.); péptidos, aceites
minerales, por ejemplo Montanide ISA-50 (Seppic,
París, Francia), carbopol, Amphigen, Amphigen Mark II (Hydronics,
EE. UU.), Alhydrogel, emulsiones de aceite, por ejemplo una
emulsión de aceite mineral tal como BayolF/Arlacel A y agua o una
emulsión de aceite vegetal, agua y un emulsionante tal como
lecitina; alumbre; citoquinas bovinas; colesterol; y combinaciones
de adyuvantes. En una realización preferida, la emulsión de aceite
en agua que contiene saponina está convencionalmente
microfluidizada.
Una fuente particularmente preferida de BVDV
tipo 1 y 2, para usar en el procedimiento de la presente invención
es la línea de productos de vacunas Bovi-Shield®
GOLD^{TM} (PFIZER INC.), que contiene la cepa NADL de BVDV
(adquirida del National Animal Disease Center (NADC), USDA, Ames,
IA) y la cepa de BVDV tipo 2 cp BVDV 53637 (Univ. Guelph, Guelph,
Ont.) (ATCC nº PTA-4859).
Preferiblemente, las cepas NADL y 53637 son
cepas vivas modificadas. De acuerdo con la presente invención, las
cepas de la presente invención pueden adyuvarse con un adyuvante
disponible en el mercado, preferiblemente Quil
A-Colesterol-Amphigen (Hydronics,
EE.UU.). Una dosis preferida de las composiciones inmunógenas y de
vacunas de la presente invención es aproximadamente 2,0 ml. Pueden
incluirse conservantes en las composiciones que se emplean en los
procedimientos de la presente invención. Los conservantes
contemplados por la presente invención incluyen gentamicina y
mertiolato. También puede añadirse un vehículo, preferiblemente,
PBS. La preparación de vacunas con patógenos vivos modificados, tal
como mediante la atenuación de cepas virulentas por pases en
cultivos, es conocida en la técnica.
Los aislamientos de BVDV vivos modificados
pueden combinarse también con las siguientes bacterias y virus,
incluyendo pero sin limitación, virus del herpes bovino tipo 1
(BHV-1); virus sincitial respiratorio bovino
(BRSV); virus paragripal (PIV3); Leptospira canicola, Leptospira
grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii
hardio-prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia,
Leptospira interrogans pomona, Leptospira borgpetersenii
hardjo-bovis, Leptospira Bratislava, Campylobacter
fetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, Pasteurella multocida,
Mycobacterium bovis y Mycobacterium dispar.
De acuerdo con la presente invención, una
cantidad eficaz de una vacuna de BVDV o vacuna combinada
administrada a animales macho susceptibles proporciona una
inmunidad eficaz contra la infección testicular asociada a BVDV
tipo 1 y 2. En una realización, la vacuna se administra a terneros
en dos dosis con un intervalo de aproximadamente 3 a 4 semanas. Por
ejemplo, la primera administración se realiza cuando el animal tiene
de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 meses de edad. La segunda
administración se realiza de aproximadamente 1 a aproximadamente 4
semanas después de la primera administración de la vacuna
combinada.
En otra realización preferida, una
administración se realiza aproximadamente 4 a 5 semanas antes de la
fase de cría del animal o antes de admitirlo en una instalación de
inseminación artificial. La administración de dosis subsiguientes
de vacunas se realiza preferiblemente anualmente. En otra
realización preferida, los animales que se vacunan antes de la edad
de aproximadamente 6 meses deberían volverse a vacunar después de
los 6 meses de edad. Preferiblemente la administración de dosis de
vacunas subsiguientes se realiza anualmente, aunque la presente
invención también contempla las dosis de vacunas subsiguientes
bianuales y semestrales.
La cantidad de vacuna que es eficaz depende de
los ingredientes de la vacuna y del calendario de administración.
Típicamente, cuando se usa una preparación de BVDV vivo modificado
en una vacuna, es efectiva una cantidad de vacuna que contenga de
aproximadamente 10^{2} a aproximadamente 10^{10} unidades de
TCID_{50} por dosis de BVDV y preferiblemente aproximadamente
10^{4} a aproximadamente 10^{7} unidades de TCID_{50} por
dosis de BVDV tipos 1 y 2 cuando se administra una vez a animales
susceptibles. Preferiblemente, una vacuna que proporciona inmunidad
eficaz contiene de aproximadamente 10^{4} a 10^{7} unidades de
TCID_{50}/dosis de BVDV tipos 1 y 2 y más preferiblemente,
aproximadamente 10^{5} unidades de TCID_{50}/dosis, cuando se
administra una vez a animales macho susceptibles. Preferiblemente,
la administración de dosis de vacunas subsiguientes se realiza
anualmente. Los animales que se vacunan antes de la edad de
aproximadamente 6 meses deberían volverse a vacunar después de los
6 meses de edad. Preferiblemente, la administración de dosis de
vacunas subsiguientes se realiza anualmente.
De acuerdo con la presente invención, cuando se
administra el producto preferido, Bovi-Shield®
GOLD^{TM} 5 (Pfizer, Inc.), el producto se administra
preferiblemente una vez, en una cantidad de aproximadamente 0,1 ml
a aproximadamente 5,0 ml, preferiblemente de aproximadamente 1,5 ml
a aproximadamente 2,5 ml, y más preferiblemente, aproximadamente 2
ml. Preferiblemente, la administración de dosis de vacunas
subsiguientes se realiza anualmente. Los animales que se vacunan
antes de la edad de aproximadamente 6 meses deberían volverse a
vacunar después de los 6 meses de edad. Preferiblemente, la
administración de dosis de vacunas subsiguientes se realiza
anualmente.
De acuerdo con la presente invención, la
administración puede lograrse por vías conocidas que incluyen la
oral, intranasal, tópica, transdérmica y parenteral (por ejemplo,
intravenosa, intraperitoneal, intradérmica, subcutánea o
intramuscular). Una vía de administración preferida es la
administración intramuscular o subcutánea.
La presente invención contempla también una
única dosis primaria seguida de revacunación anual, lo que elimina
la necesidad de administrar dosis adicionales a los terneros antes
de la revacunación anual para generar y/o mantener la inmunidad
contra la infección.
Las vacunas que se administran de acuerdo con la
presente invención pueden incluir componentes adicionales, tales
como un adyuvante (por ejemplo geles minerales, por ejemplo
hidróxido de aluminio; sustancias tensioactivas tales como
colesterol, lisolecitina; glucósidos, por ejemplo derivados de
saponina tales como Quil A, QS-21 o
GPI-0100; polioles plurónicos; polianiones;
polímeros de bloque no iónicos, por ejemplo Pluronic
F-127; péptidos, aceites minerales, por ejemplo
Montanide ISA-50, carbopol, Amphigen®, Alhydrogel,
emulsiones de aceite, por ejemplo una emulsión de aceite mineral
tal como BayolF/Arlacel A y agua o una emulsión de aceite vegetal,
agua y un emulsionante tal como lecitina; alumbre; citoquinas
bovinas; y combinaciones de adyuvantes).
De acuerdo con la presente invención, la
administración de una cantidad eficaz de una vacuna administrada a
animales macho susceptibles aproximadamente a los 3 meses de edad
proporciona una inmunidad eficaz contra la infección testicular.
En una realización preferida, la vacuna se
administra por vía intramuscular. En otra realización preferida, la
vacuna se administra por vía subcutánea. Además, se prefiere que la
dosis de la vacuna comprenda de aproximadamente 1 ml a
aproximadamente 7 ml, y preferiblemente aproximadamente 2 ml,
conteniendo cada ml de aproximadamente 10^{2} a aproximadamente
10^{10} unidades de TCID_{50}/dosis de virus. De forma deseable,
la vacuna combinada se administra dos veces al animal; una vez con
aproximadamente 1 a aproximadamente 3 meses de edad y una vez
aproximadamente de 5 a 3 semanas después. La presente invención
contempla también las revacunaciones anuales con una dosis
única.
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La invención comprende además un procedimiento
para prevenir la infección testicular por BVDV en un animal macho
susceptible a la infección por BVDV que comprende:
a) identificar un animal con riesgo aumentado de
infección testicular por BVDV; y
b) administrar al animal una cantidad eficaz de
una vacuna que se selecciona del grupo que consiste en una vacuna
con BVDV tipo 1 inactivado, una vacuna con BVDV tipo 2 inactivado,
una vacuna con BVDV tipo 1 vivo modificado y una vacuna con BVDV
tipo 2 vivo modificado.
Para identificar al animal que padece un riesgo
aumentado de infección por BVDV, el experto reconoce que un animal
padece un riesgo elevado de infección cuando se introduce una
infección por BVDV en un hato que previamente no estaba infectado o
en el que un animal susceptible está en contacto con otro animal
susceptible con una infección por BVDV. BVDV se trasmite de un
animal a otro de una forma fecal-oral. La carga
vírica necesaria para provocar la infección sintomática se
correlaciona con el tipo y cepa de virus de la BVD y esto se
correlaciona con la rapidez de la extensión por el hato. Los
animales infectados pueden identificarse por la sintomatología. Las
manifestaciones comunes de infección por BVDV pueden incluir: rachas
de abortos, infertilidad, ciclos de celo irregulares, muertes
embrionarias tempranas, momificación fetal, inmunosupresión,
disentería, trombocitopenia e hipoplasia cerebral. Los síntomas de
la enfermedad están habitualmente precedidos por leucopenia y los
intentos experimentales hasta la fecha se han centrado en la
identificación de este efecto.
Los estudios serológicos han demostrado que un
elevado porcentaje del ganado vacuno infectado por BVDV, incluido
el que se considera que está infectado de forma persistente (PI), no
muestra síntomas clínicos. Por lo tanto, un procedimiento preferido
para identificar a los animales infectados es detectar la presencia
del virus mismo en lugar de basarse en la sintomatología. Se han
desarrollado varios procedimientos de análisis diferentes para la
detección de BVDV y/o la detección de animales infectados por BVDV.
Estos procedimientos de análisis incluyen: transcripción inversa -
reacción en cadena de la polimerasa, inmunoensayo ligado a enzimas
(ELISA), técnicas estándar de aislamiento de virus e
inmunohistoquímica (Haines y cols., "Monoclonal
Antibody-Based Immunohistochemical Detection of
Bovine Viral Diarrhea Virus in Formalin-Fixed,
Paraffin-Embedded Tissues", Vet. Pathol., 29:
27-32 (1992)).
Tanto la técnica de PCR como la de aislamiento
de virus, debido a su inherente sensibilidad, son capaces cada una
de detectar niveles muy bajos de BVDV. La inmunohistoquímica en las
muestras de tejidos, tales como las muestras de biopsias de muescas
de la oreja, es una técnica eficaz para detectar los animales PI,
así como la tecnología ELISA, aunque algo menos sensible, está bien
adaptada como herramienta de diagnóstico de base amplia para
detectar la infección por BVDV en animales, porque es barata,
proporciona resultados en un periodo de tiempo corto y no necesita
de técnicos muy preparados ni de unas instalaciones de laboratorio
muy especializadas.
Los procedimientos de ELISA para la detección de
la infección por BVDV se describen en la bibliografía. Véase la
patente de Estados Unidos nº 6.174.667 y el documento WO 99/15900 de
Huchzermeier y cols. y la publicación de solicitud de patente de
Estados Unidos 20030143573 y se han comparado con otros
procedimientos, "Comparison of an Antigen Capture
Enzyme-Linked Assay with Reverse
Transcription-Polymerase Chain Reaction and Cell
Culture Immunoperoxidase Tests for the Diagnosis of Ruminant
Pestivirus Infections", Vet. Microbiol., 43:
75-84 (1995)).
La presente invención se ilustra adicionalmente,
pero no se limita a los siguientes ejemplos.
La línea de vacunas Bovi-Shield®
GOLD^{TM} 5, formulada con BVDV tipo 1 y BVDV tipo 2, se introdujo
en la industria del ganado vacuno en noviembre de 2003 para
optimizar el nivel de protección fetal que la vacunación
proporciona contra BVDV tipo 2. Aquí se reseñan los resultados de un
estudio de eficacia previo a la obtención del permiso que evalúa si
la vacunación prepúber con Bovi-Shield® GOLD^{TM}
5 fue eficaz en la prevención de la infección testicular ante la
exposición grave a BVDV tipo 2, ^{10} comparado con un placebo
(Bovi-Shield®
IBR-PI3-BRSV).
Todos los becerros (n = 17) asignadas a un
estudio de exposición a BVDV tipo 2 más extenso, se evaluaron además
para determinar si la vacunación con Bovi-Shield®
GOLD^{TM} 5 prevenía de forma eficaz la infección testicular con
BVDV. Todas las crías del estudio inicial eran terneros para carne
(machos y hembras) de 3 a 4 meses de edad privados de calostro. A
los 28 días de la vacunación con una formulación que contenía dosis
mínimas de inmunización (los niveles de las dosis mínimas de
inmunización se establecen antes de obtener el permiso de la vacuna
y reflejan un volumen menor de virus antígeno del que está presente
en el producto final. La determinación de la dosis mínima de
inmunización ayuda a asegurar que cuando un producto se usa a los
niveles de liberación estimulará una protección adecuada contra la
enfermedad de forma consistente.) de BVDV tipo 1 y BVDV tipo 2,
todos los terneros vacunados y los controles con placebo se
expusieron por vía intranasal a la cepa no citopatógena de BVDV
tipo 2 24515. La cepa 24515 se aisló en Canadá en un brote grave de
BVD que mató a más del 40% del ganado vacuno en los hatos
afectados. Después de la exposición, los 10 terneros de control
desarrollaron una enfermedad grave caracterizada por una viremia
prolongada (9 a 14 días), fiebre que variaba en el intervalo de
105,6ºF (40,9ºC) a 107,2ºF (41,8ºC) durante 4 a 9 días, leucopenia
(1 a 9 días), trombocitopenia (< 100.000 por \mul), morbilidad
(que variaba de 4 a 9 días) y elevada mortalidad (7 de 10 (70%) de
los controles murieron). Por el contrario, sólo 1 ternero vacunado
desarrolló viremia, 6 tuvieron fiebre durante 1 ó 2 días, 1 padeció
leucopenia durante 1 día, ninguno padeció trombocitopenia y ninguno
murió. En conjunto, 18 de los 20 vacunados permanecieron sanos
durante todo el estudio y únicamente 2 terneros mostraron depresión
durante 1 día. Estas dos observaciones no se asociaron a viremia,
fiebre, leucopenia o trombocitopenia previa o
concurrente.^{11}
Las evaluaciones para determinar la infección
testicular por BVDV se iniciaron aproximadamente 2 semanas después
de la exposición. Tal como se muestra en la Tabla 1, las muestras de
testículo se recogieron en la necropsia de 2 controles con placebo
el día 41 del estudio y las muestras de biopsias de cada uno de los
5 controles restantes y 10 vacunados con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 el día 42. También se
obtuvo una segunda muestra a partir de 7 de los 10 vacunados con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 que estaban todavía
disponibles el día 56. Todas las muestras se analizaron para
determinar la presencia de BVDV usando procedimientos de análisis de
aislamiento del cultivo tisular, amplificación de ácidos nucleicos
(RT-nPCR) y análisis inmunohistoquímico. El
personal que recogía y analizaba las muestras testiculares no tenía
conocimiento de las asignaciones de los grupos de tratamiento.
El aislamiento de los virus y los ensayos por
PCR se realizaron en el Auburn University Veterinary Pathobiology
and Clinical Sciences Laboratory y el análisis inmunohistoquímico en
la Universidad de Nebraska-Lincoln Veterinary
Diagnostic Center. Los datos fueron analizados por un representante
de Pfizer Animal Health, Veterinary Medicine and Research,
Biometrics, Technology and Quality, con un procedimiento categórico
(SAS/STAT software cambios y mejoras de la versión 6.12, SAS
Institute, Cary, NC o SAS/STAT Guía del usuario Versión 8 y Guía de
procedimientos de SAS Versión 8). Se usó el análisis exacto de
Fisher para comparar la proporción de animales en cada grupo de
tratamiento con al menos un resultado positivo para BVDV. Las
estadísticas descriptivas se calcularon según se consideraba
apropiado.
La Tabla 2 y la Figura 1 resumen los porcentajes
de los grupos de tratamiento para la detección de BVDV en las
muestras de biopsia testicular. Se detectaron ácidos nucleicos o
antígenos de BVDV en 6 de 7 (85,7%) de las muestras testiculares
recogidas en los toros vacunados con placebo y expuestos. Por el
contrario no se encontraron ácidos nucleicos o antígenos de BVDV en
ninguna (0,0%) de las muestras testiculares recogidas en las crías
de toro expuestas vacunadas con Bovi-Shield®
GOLD^{TM}, una diferencia significativa (P \leq 0,05).
Los resultados del estudio demostraron tanto la
seguridad como la eficacia de la vacunación de los toros con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5. La vacuna formulada con
niveles de dosis mínimas de inmunización de BVDV tipo 1 y 2 no sólo
no provocaron infección testicular sino que también protegieron de
forma eficaz a las crías de toro prepuber contra la infección
testicular tras una exposición grave a BVDV tipo 2.
El uso de Bovi-Shield®
GOLD^{TM} 5 en toros prepúberes puede ser un componente importante
de los programas de control de la BVD en la producción de terneros
y de leche. La vacunación oportuna puede ayudar a proteger a las
crías de toro contra infecciones agudas que han sido asociadas a la
infección testicular transitoria y persistente y a la transmisión
subsiguiente de BVDV a través del semen a las vacas susceptibles.
Además, la vacunación de los toros prepúberes para evitar la
infección aguda pospúber por BVDV puede ayudar a mantener la
calidad del semen, que se ha demostrado que se ve afectada
(motilidad disminuida y anormalidades morfológicas) durante los 60
primeros días después de la infección aguda por BVDV.^{9}
Aunque los presentes resultados demuestran una
protección exitosa tras la exposición al BVDV tipo 2, sería de
esperar que se observaran resultados similares tras la exposición a
BVDV tipo 1.
Se realizó un estudio para evaluar la eficacia
de Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 en la prevención de la
infección testicular ante la exposición grave a BVDV tipo 1. El
diseño de este estudio fue un diseño aleatorio generalizado en
bloques con una estructura de tratamiento unidireccional. La
información del tratamiento se ocultó a todo el personal del
laboratorio del estudio.
Se asignaron al estudio cuarenta y cinco (45)
becerros de raza cárnica enteros peripúberes. Los terneros tenían
entre 9 y 15 meses de edad. Todos los animales eran seronegativos
para los virus de la BVD tipos 1 y 2, negativos para el aislamiento
del virus de la BVD en el suero y negativos según el análisis del
suero por reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa
inversa (RT-nPCR). El día 42, las medias de los
mínimos cuadrados de los pesos corporales de los terneros en el
grupo con placebo (n = 23) y el grupo de experimentación (n = 22)
eran de 625,7 \pm 30,94 libras (283,8 \pm 14,0 kg) y 613,5 \pm
35,96 libras (278,3 \pm 16,3 kg), respectivamente. Se vacunó a
los animales con placebo (Bovi-Shield®
IBR-PI3-BRSV) o con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5
(IBR-BVDV1-BVDV2-PI3-BRSV).
A los 28 días de la vacunación con una
formulación que contenía dosis mínimas de inmunización, todos los
terneros vacunados y los controles con placebo se expusieron por
vía intranasal a la cepa de BVDV tipo 1a no citopática
SD-1 aislada en la Auburn University. La exposición
intranasal se realizó hiperventilando a los toros durante 30
segundos colocando una bolsa de plástico sobre los orificios nasales
y después instilando 5 ml de virus cultivado en MEM con sales de
Earle suplementado con suero equino a 10% (vol/vol), bicarbonato
sódico (0,75 mg/ml), L-glutamina (0,29 mg/ml) y
antibióticos (100 unidades de penicilina G, 100 \mug de
estreptomicina y 0,25 \mug de anfotericina B/ml). El suero equino
estaba libre de virus de la BVD tal como se determinó mediante
aislamiento de virus y RT-nPCR.
Las evaluaciones de la infección testicular por
BVDV se realizaron el día 42 y 93. El diseño básico del estudio se
describe en la Tabla 3 a continuación.
Tras la exposición, se analizó el suero de los
animales de ambos grupos para determinar la presencia de virus.
Según se analizó mediante el aislamiento del virus en suero, 18
terneros en el grupo con placebo sufrían viremia el día 34. Nueve
de estos 18 sufrían viremia también el día 35. Cinco terneros en el
grupo con Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 sufrieron
viremia sólo el día 34. Ningún otro análisis de aislamiento de virus
dio positivo en los terneros de ninguno de los grupos de
tratamiento en ningún día de estudio.
También se usaron análisis por
RT-nPCR para determinar si los terneros padecían
viremia. Para el grupo con placebo, había 3, 9, 12 y 6 terneros con
resultados positivos los días 34, 35, 36 y 37 respectivamente. En
el grupo con Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5, había 1, 1,
2 y 1 terneros con resultados positivos los días 34, 35, 36 y 37,
respectivamente. Ningún otro análisis por RT-nPCR de
los sueros dio positivo en los terneros de ninguno de los grupos de
tratamiento en ningún día del estudio.
Se midieron las temperaturas rectales medias por
mínimos cuadrados de ambos grupos. Solamente el día 36 fueron las
medias significativamente diferentes (104,0ºF (40ºC) para el placebo
y 102,9ºF (39ºC) para el grupo con Bovi-Shield GOLD
5) (P \leq 0,05).
Los resultados de los análisis realizados el día
93 de las muestras de biopsia testicular se muestran en la Tabla 4.
Las muestras de 6 de 23 terneros (26,1%) en el grupo con placebo
dieron positivo en el análisis de RT-nPCR, mientras
que todas las muestras de los 22 terneros en el grupo con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 dieron negativo. Todas
las muestras de las biopsias de los grupos con placebo y con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 dieron negativo en el
aislamiento de virus. Las muestras de las biopsias de 5 de 23
terneros (21,7%) del grupo con placebo y 0 de los 22 terneros del
grupo con Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 dieron positivo
en el análisis por IHC.
Todas las muestras de semen de los terneros en
ambos grupos de tratamiento dieron negativo en el análisis por
RT-nPCR para determinar la presencia de virus de la
BVD el día 42 (Tabla 4). El día 93, 10 de 23 (43,5%) de los
terneros en el grupo con placebo dieron positivo en el análisis por
RT-nPCR y los 22 terneros del grupo con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 dieron negativo. No se
aisló ningún virus de ninguna de las muestras de semen de ninguno
de los grupos de tratamiento el día 42 o el día 93 (Tabla 4).
En el grupo con placebo 10 de 23 terneros dieron
positivo al menos en un análisis. Cuatro de estos diez terneros
dieron positivo sólo en un análisis (RT-PCR del
semen el día 93). Un ternero dio positivo en dos análisis
(RT-nPCR de biopsia testicular y
RT-nPCR de semen el día 93). Cinco terneros dieron
positivo en tres análisis (RT-nPCR de biopsia
testicular, RT-nPCR de semen e IHC de biopsia el día
93).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En cada animal, se determinó la
presencia/ausencia de virus de la BVD en semen o en biopsias
testiculares en cualquier punto de tiempo, se resumieron por grupos
de tratamiento y se analizaron usando el test exacto de Fisher tal
como se describe en el Ejemplo 1.
En este estudio, la vacunación de becerros con
Bovi-Shield® GOLD^{TM} 5 evitó la infección
testicular persistente con virus de la BVD tipo 1 y la subsiguiente
transmisión de virus en el semen. El contraste entre los animales
con placebo y los vacunados con al menos un análisis positivo por el
test exacto de Fisher bimodal fue significativo
(P = 0,0002).
(P = 0,0002).
La presente invención no está limitada en su
alcance por las realizaciones específicas que se describen, que se
pretende que sean ilustraciones de aspectos individuales de la
invención. Las composiciones y procedimientos funcionalmente
equivalentes están dentro del alcance de la invención. De hecho,
diversas modificaciones de la invención, además de las que se
muestran y se describen en la presente memoria, serán evidentes para
los expertos en la técnica a partir de la descripción anterior. Se
pretende que tales modificaciones queden dentro del alcance de los
anexos.
Claims (9)
1. Uso de una cantidad eficaz de un antígeno
seleccionado entre el grupo constituido por un virus de la diarrea
vírica bovina (BVDV) tipo 1 inactivado, un BVDV tipo 2 inactivado,
un BVDV tipo 1 vivo modificado y un BVDV tipo 2 vivo modificado
para la fabricación de una vacuna para prevenir infección
testicular por BVDV en un animal macho susceptible.
2. El uso de la reivindicación 1, en el que el
animal se selecciona del grupo que consiste en un toro, un carnero
y un verraco.
3. El uso de la reivindicación 2, en el que el
animal es un toro.
4. El uso de la reivindicación 1, en el que la
vacuna comprende tanto un BVDV tipo 1 vivo modificado como un BVDV
tipo 2 vivo modificado.
5. El uso de la reivindicación 4, en el que al
menos un BVDV vivo modificado deriva de un virus citopatógeno.
6. El uso de la reivindicación 4, en el que al
menos uno de BVDV vivo modificado deriva de un virus no
citopatógeno.
7. El uso de la reivindicación 4, en el que
ambos BVDV vivos modificados derivan de un virus citopatógeno.
8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
1-7, en el que la vacuna comprende al menos uno o
más antígenos adicionales que se selecciona del grupo que consiste
en virus del herpes bovino (BHV-1); virus paragripal
tipo 3 (PIV3); virus sincitial respiratorio bovino (BRSV);
Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira
borgpetersenii hardjo-prajitno, Leptospira
icterohaemmorrhagia, Leptospira interrogans pomona, Leptospira
borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava,
Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica,
Pasteurella multocida, Mycobacterium bovis y Mycobacterium
dispar.
9. El uso de la reivindicación 8, en el que
dichos antígenos adicionales comprenden virus del herpes bovino
(BHV-1); virus paragripal tipo 3 (PIV3) y virus
sincitial respiratorio bovino (BRSV).
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