KR20070100261A - 염증 치료법 - Google Patents

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KR20070100261A
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mtx
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inflammatory
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KR1020077014957A
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프니나 피쉬맨
사라 바-예후다
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캔-파이트 바이오파마 리미티드
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Abstract

본 발명은 메토트렉세이트와 A3 아데노신 수용체의 아고니스트를 병용 투여함으로써 염증 상태를 요법 치료하는데 관한 것이다. 본 발명은 이러한 병용 투여를 포함하는 요법 치료의 방법, 이들 중 임의의 것을 포함하여 이러한 방법에서 유용한 제약 조성물, 및 A3 아데노신 수용체의 아고니스트 또는 메토트렉세이트의 용도뿐만 아니라 이들 활성 약제 중의 어떤 것의 이러한 제약 조성물에서의 용도를 제공한다.
A3 아데노신 수용체 아고니스트, 메토트렉세이트, 병용 투여, 염증 상태, 자가면역 장애, 류마티스성 관절염

Description

염증 치료법 {TREATMENT OF INFLAMMATION}
본 발명은 요법, 특히 염증 상태의 치료법에 관한 것이다.
선행기술
이하는 본 발명의 분야에서의 기술상태를 설명하는데 적절한 문헌의 리스트이다. 본 명세서에서 이들 문헌에 대한 인지는 때때로 괄호 안에 이하의 리스트로부터의 번호를 나타냄으로써 이루어질 수 있다.
Figure 112007047722946-PCT00001
Figure 112007047722946-PCT00002
Figure 112007047722946-PCT00003
A 3 아데노신 수용체
A3 아데노신 수용체인 Gi 단백질-결합된 세포 표면 수용체는 암 및 염증과 싸우는 목표로 제안되었다. 수용체는 다양한 종양 세포 유형에서 고도로 발현되는 반면에, 인접한 정상 조직에서는 낮은 발현을 나타내었다. 특정한 합성 아고니스트에 의한 수용체의 활성화는 Wnt 및 NF-kB를 유도하는 신호 전달 경로 (signal transduction pathway)의 탈-조절 (de-regulation)을 유도하여 종양 성장 억제를 야기한다 (1-5). 생체내 시험은 A3AR 아고니스트가 대장암, 전립선암 및 췌장암뿐만 아니라 흑색종 및 간종양의 발생을 억제하는 것을 나타내었다.
A3AR 아고니스트는 또한, 류마티스성 관절염, 다발성 경화증 및 크론병과 같은 다양한 실험적 자가면역 모델에서 염증과정을 개선시킴으로써 소염제로 작용하는 것으로도 나타났다 (6-10). A2A 및 A3 수용체가 메토트렉세이트의 소염 효과를 매개한다는 것은 더 이전에 제안되었다 (11).
A3 아데노신 수용체 (A3AR) 발현 수준은 정상 세포에 비해 암세포에서 상승된다 (12, 13). 따라서, A3AR 발현 수준은 암의 진단을 위한 수단으로서 기술되었다 (14). 또한, A3AR 발현 수준은 결장직장암이 있는 환자의 말초혈액 단핵세포에서 상승되는 것으로도 기술되었다 (13).
메토트렉세이트
메토트렉세이트 (MTX)는 최초에는 악성 종양에 대한 치료 약물로 개발되었으며, 현재는 더 저용량으로 류마티스성 관절염뿐만 아니라 그 밖의 다른 자가면역 및 알러지성 질환을 치료하기 위해서 사용되는 대사성 길항제이다.
비록 MTX가 처음에는 악성 종양의 치료를 위한, 퓨린 및 피리미딘의 합성을 억제하는 항증식제로서 도입되었지만, 메토트렉세이트의 소염 효과의 대부분이 아데노신에 의해서 매개된다는 것은 현재 명백하다 (15). 이러한 작용기전의 증거로서 동물 및 환자 둘다에서의 시험은 아데노신-수용체 길항제 (이들 중에는 카페인이 있음)가 메토트렉세이트의 소염 효과를 반전시키거나 방지함을 시사하였다 (15, 16).
MTX와 추가의 약제를 포함하는 병용 요법, 예를 들어, MTX와 항체 또는 α-4-인테그린의 병용 (17, 18) 및 자가면역 질환을 포함한 TNF-매개된 장애의 치료시의 MTX와 항-TNF 항체 또는 TNF-결합 단백질의 병용 (19, 20)이 제안되었다.
발명의 요약
본 발명은 A3 아데노신 수용체 (A3AR) 아고니스트 IB-MECA 및 MTX의 병용 치료가 MTX 단독 또는 A3AR 아고니스트 단독으로 처치한 경우보다 염증성 관절염 동물 모델에서 더 큰 소염 효과를 제공한다는 발견을 기초로 한 것이다.
따라서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 MTX와 유효량의 A3AR 아고니스트의 배합물을 투여하는 것을 포함하는, 염증 상태의 대상체 치료 방법을 제공한다.
추가로, 본 발명은 대상체에게 유효량의 A3AR 아고니스트를 투여하는 것을 포함하는, MTX로 처치되는 염증 상태의 대상체 치료 방법을 제공한다.
또한 추가로, 본 발명은 대상체에게 유효량의 MTX를 투여하는 것을 포함하는, A3AR 아고니스트로 처치되는 염증 상태의 대상체 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, MTX로 처치되는 염증 상태의 대상체 치료용 제약 조성물의 제조를 위한 A3AR 아고니스트의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한, A3AR 아고니스트로 처치되는 염증 상태의 대상체 치료용 제약 조성물의 제조에 있어서의 MTX의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로, 유효량의 A3AR 아고니스트를 포함하는, MTX로 처치되는 염증 상태의 환자 치료용 제약 조성물을 또한 제공한다.
본 발명은 또한 추가로, 유효량의 MTX를 포함하는, A3AR 아고니스트로 처치되는 염증 상태의 환자 치료용 제약 조성물을 또한 제공한다.
본 발명에 따른 A3AR 아고니스트는 바람직하게는 N6-(3-요오도벤질)-아데노신-5'-N-메틸-우론아미드 (IB-MECA) 및 2-클로로-N6-(3-요오도벤질)-아데노신-5'-N-메틸-우론아미드 (Cl-IB-MECA)이지만 독점적인 것은 아니다. 그러나, 이들 현재 바람직한 A3AR 아고니스트는 배타적인 것을 의미하지는 않으며, 이하에 더 상세히 기술하는 바와 같이 그 밖의 다른 이러한 아고니스트도 사용될 수 있다.
본 발명에 따라서 치료되는 바람직하지만 배타적이지는 않은 염증 상태는 자가면역 장애, 더욱 바람직하게는 류마티스성 관절염 (RA)이다. 본 발명에 따른 병용 요법은 또한 실제로, 이하에 더 상세히 기술하는 바와 같이 MTX 또는 A3AR 아고니스트가 치료에 지시되거나 지시될 수 있는 그 밖의 다른 질환에 대해서도 적용될 수 있다.
본 발명을 이해하고, 이것을 실제로 어떻게 수행할 수 있는지를 보여주기 위해서, 이제 바람직한 구체예는 이하의 첨부된 도면을 참고로 하여 단지 비-제한적인 예로서 기술된다:
도 1A-1B는 메토트렉세이트 (MTX; 도 1에서는 0.25 ㎎/㎏이고, 도 1B에서는 0.25 또는 0.75 ㎎/㎏), IB-MECA (DF101), 또는 MTX와 IB-MECA의 배합물 또는 비히클 단독 (대조군)으로 처리된 AIA 동물에서의 관절염의 중증도에 있어서의 변화를 시간의 함수로 나타낸 실험결과를 보여주는 그래프이다.
도 2A-2B는 MTT 시험에 의해서 측정된 것으로서, 인간 섬유아세포 유사 활막세포 (FLS) (도 2A) 또는 래트 FLS (도 2B)의 증식에 대한 IB-MECA (CF101) 및 MTX의 병용처리의 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
본 발명은 이하의 상세한 설명에서 A3AR 아고니스트와 MTX의 배합물을 투여하는 것을 포함하는, 염증 상태를 치료하는 치료 방법에 관하여 기술된다. 상기의 치료 방법 이외에도, 염증 상태를 앓고 있으며, 다른 활성 약제의 사용을 포함하는 소염성 치료에 의한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위한 제약 조성물; 및 이들 활성 약제 중의 하나에 의한 치료를 필요로 하는 염증 상태의 치료를 위하여, 이들 활성 약제 중의 다른 것의 유효량 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물의 제조를 위한 활성 약제 MTX 및 A3AR 아고니스트 각각의 용도도 본 발명에 포함되는 것에 특히 주목하여야 한다.
본 명세서 및 특허청구범위에서 사용된 것으로, 어형 " a ", " an " 및 " the "는 문맥이 다른 식으로 명확하게 나타내지 않는 한은 단수 및 복수 관계 모두를 포함한다. 예를 들어, 용어 " an A 3 AR 아고니스트 "는 하나 또는 그 이상의 아고니스트를 포함한다.
추가로, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 " 포함하는 ( comprising ) "은 방법 또는 조성물이 언급된 요소들을 포함하지만 다른 것을 배제하지는 않음을 의미하고자 하는 것이다. 유사하게, " 본질적으로 ~로 구성되는 "은 언급된 요소들을 포함하지만 소염 활성에 대해 필수적인 유의성을 가질 수 있는 다른 요소들은 배제하는 방법 및 조성물을 정의하기 위해서 사용된다. 예를 들어, 본질적으로 A3AR 아고니스트로 구성되는 조성물은 소염 활성을 갖는 다른 활성 성분을 포함하지 않거나, 단지 미량 (조성물의 소염 효과에 대해서 무의미한 효과를 가질 수 있는 양)으로 함유할 수 있다. 또한, 본질적으로 본 명세서에서 정의한 바와 같은 활성 성분으로 구성된 조성물은 분리 및 정제방법으로부터 유래하는 흔적량의 오염물질, 포스페이트 완충된 식염수와 같은 제약상 허용가능한 담체, 부형제, 보존제 등을 배제하지는 않는다. " ~로 구성되는 "은 다른 요소들 중의 미량 요소 보다 많은 것은 제외하는 것을 의미하여야 한다. 이들 전이적 용어 각각에 의해서 정의되는 구체예는 본 발명의 범주 내에 포함된다.
또한, 모든 수치, 예를 들어, 농도 또는 용량 또는 그의 범위는 20％까지, 때때로는 언급된 값으로부터 그의 10％까지 (+) 또는 (-)로 변화하는 근사치이다. 항상 명백하게 언급되지 않더라도, 모든 수치 지정은 용어 " 약 "이 앞에 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 비록 항상 명백하게 언급되지는 않지만, 본 명세서에 기술된 시약은 단순히 예시적인 것이며 이러한 시약의 등가물은 본 기술분야에서 공지되어 있는 것으로 이해되어야 한다.
이하의 예시적인 구체예에 상세히 기술된 바와 같이, 본 발명은 MTX와 함께 A3AR 아고니스트인 IB-MECA에 의한 유도된 염증성 관절염 (아쥬반트 유도된 관절염, AIA)을 갖는 동물을 치료하는 것은 이들 약물 중의 어떤 것을 단독으로 사용한 경우보다 유의적으로 더 큰 조합된 소염 효과를 제공한다는 발견을 기초로 한다.
따라서, 본 발명에 따라 소염성 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 MTX 및 유효량의 A3AR 아고니스트를 병용 투여하는 것을 포함하는, 염증 상태를 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명에 있어서 병용 투여하는 것은 환자에게 A3AR 아고니스트와 MTX를 동일한 치료과정 중에, 즉 몇 주일, 몇 개월 또는 몇 년 동안 지속할 수 있는 치료기간 중에 투여하는 것을 의미한다. 두가지 활성 약제는 모두 각각 그의 특정한 투여 스케줄에 따라서 환자에게 투여된다. MTX는 일반적으로, 일주일에 1회씩, 환자에게 경구 또는 비경구 투여된다. A3AR 아고니스트는 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 수회, 격일 등으로 환자에게 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 본 발명에 따른 병용 치료는 예를 들어, MTX의 주 1회 투여와 A3AR 아고니스트의 하루에 1회 또는 2회 투여하는 것을 수반할 수 있다. 본 발명에 따른 병용 치료는 상기의 병용 투여를 수반하는 치료이다.
본 발명에 따른 병용 치료는 이전에 MTX 또는 A3AR 아고니스트로 처치되지 않은 환자에 대해서, 또는 기존의 치료에 적절히 반응하지 않거나 치료 반응을 증폭시킬 목적인, MTX 또는 A3AR 아고니스트로 처치되는 환자에 대해서 지시될 수 있다.
따라서, 병용 치료와 관련하여 본 발명은 또한 염증성 질환을 가지며, MTX로 처치되는 대상체 치료용 제약 조성물의 제조에 있어서의 A3AR 아고니스트의 용도, 또는 대신으로, A3AR 아고니스트로 처치되는 염증성 질환에 걸린 대상체 치료용 제약 조성물의 제조에 있어서의 MTX의 용도에 관한 것이다.
두가지 활성 성분의 병용 치료는 소염 효과를 생성시킨다. 여기에서, 용어 " 소염성 "은 염증 상태에서 염증성 반응을 완화시키는데 있어서 병용 치료에 의해 달성되는 질환 변형효과를 나타내기 위해서 사용된다. 소염 반응은 전문가에게 공지된 다양한 파라미터를 기초로 하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 염증 상태가 관절염인 경우에, 파라미터에는 다음의 파라미터들 중의 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다: 조직학적 파라미터, 염증의 혈액 파라미터, 팽윤되고 민감한 관절의 정도, 운동성 파라미터, 통증의 감소, 다수의 다양한 전반적 성능 평점시스템 등.
따라서, 본 발명에 따른 용어 "염증 상태"는 병리학적 후유증을 갖는 지속적인 염증성 반응을 특징으로 하는, 면역 유도된 병리학을 포함하는 활성 또는 준임상적 염증 상태의 모든 상황을 의미하여야 한다. 이러한 상황은 단핵세포의 침윤, 섬유아세포 및 소혈관의 증식, 증가된 결합조직 및 조직 파괴를 특징으로 할 수 있다.
용어 "염증 상태"는 면역 시스템에 의해서 매개된 면역 유도된 병리학 (예를 들어, 자가면역 장애) 및 염증성 반응과 연관된 다양한 상태를 포함할 수 있다. 그러나, 바람직한 구체예에 따르면, 용어 "염증 상태"는 MTX에 의한 치료가 현재 지시되고 있는 이러한 상태를 의미한다. 이들로 제한됨이 없이, 본 발명과 관련하여 염증 상태에는 건선, 건선성 관절염, 크론병, 류마티스성 관절염, 및 다발성근염 및 전신성 홍반성 루푸스를 포함하는 그 밖의 다른 류마티스성 질환이 포함된다.
활성 성분, 즉 A3AR 아고니스트 및 MTX에 관하여 이들은 둘다 선행기술에서 공지되어 있다. 일반적으로, A3AR 아고니스트는 아데노신 A3 수용체 ("A 3 R")에 특이적으로 결함으로써 이 수용체를 완전히 또는 부분적으로 활성화시켜 치료 효과 (이 특정한 경우에는, 소염 효과)를 수득할 수 있는 모든 화합물이다. 따라서, A3AR 아고니스트는 그의 주된 효과가 A3AR의 결합 및 활성화를 통해서 나타나는 분자이다. 이것은 이들이 투여되는 용량에서 필수적으로 A3R에 대해서만 결합하여 A3R만을 활성화시키는 것을 의미한다. 바람직한 구체예에서, A3AR 아고니스트는 인간 A3AR에 대해서 1000 nM 미만, 바람직하게는 500 nM 미만, 유리하게는 200 nM 미만 및 더욱 100 nM 미만, 일반적으로는 50 nM 미만, 바람직하게는 20 nM 미만, 더욱 바람직하게는 10 nM 미만, 이상적으로는 5 nM 미만의 결합 친화성 (Ki)을 갖는다. Ki가 낮으면 낮을수록 A3R을 활성화시키고, 따라서 치료 효과를 달성하는데 효과적일 수 있는 (사용될 수 있는) A3AR 아고니스트의 용량은 더 작다.
일부의 A3AR 아고니스트는 또한, 낮은 친화성 (즉, 더 높은 Ki)을 가지고 다른 수용체와 상호작용하여 활성화시킬 수 있다는 것도 주목하여야 한다. 분자는 A3R에 대한 그의 친화성이 어떤 다른 아데노신 수용체에 대한 친화성보다 적어도 3 배 (즉, A3R에 대한 그의 Ki가 적어도 3 배 더 작음), 바람직하게는 10 배, 바람직하게는 20 배, 가장 바람직하게는 적어도 50 배인 경우에 본 발명과 관련한 A3AR 아고니스트 (즉, A3R에 대한 결합 및 A3R의 활성화를 통해서 그의 주된 효과를 나타내는 분자)로 간주될 수 있다.
인간 A3R에 대한 A3AR 아고니스트의 친화성 및 다른 인간 아데노신 수용체에 대한 그의 상대적 친화성은 결합 시험과 같은 다수의 시험 방법에 의해서 결정될 수 있다. 결합 시험의 예로는 수용체를 갖는 막 또는 세포를 제공하고, 결합된 방사성 아고니스트를 치환시키는 A3AR 아고니스트의 능력을 측정하는 방법; 각각의 인간 아데노신 수용체를 나타내는 세포를 이용하고, 기능적 시험에서, 경우에 따라 cAMP 수준의 증가 또는 감소를 통해서 측정된 아데닐레이트 시클라제에 대한 효과와 같은 하류 신호화 이벤트 (downstream signaling event)를 활성화 또는 불활성화시키는 A3AR 아고니스트의 능력을 측정하는 방법 등이 포함된다. 명백하게, A3AR 아고니스트의 투여된 수준이 그의 혈중 수준이 다른 아데노신 수용체의 Ki의 수준에 근접하는 수준을 수득할 정도로 증가된다면, 이들 수용체의 활성화는 A3R의 활성화 이외에도 이러한 투여 후에 나타날 수 있다. 따라서, A3AR 아고니스트는 바람직하게는, 도달되는 혈중 수준이 필수적으로 단지 A3R 활성화만을 야기할 수 있을 정도의 용량으로 투여된다.
일부의 아데노신 A3AR 아고니스트의 특징 및 이들의 제조 방법은 특히 US 5,688,774; US 5,773,423; US 5,573,772; US 5,443,836; US 6,048,865; WO 95/02604; WO 99/20284; WO 99/06053; 및 WO 97/27173 (이들은 모두 본 명세서에 참고로 포함됨)에 상세히 기술되어 있다.
본 발명의 한가지 구체예에 따르면, A3AR 아고니스트는 하기 화학식 I의 범주 내에 포함되는 퓨린 유도체이거나, A3AR 아고니스트는 하기 화학식 V의 크산틴 7-리보시드 유도체이거나, 이들 정의된 화합물의 적합한 염이다:
Figure 112007047722946-PCT00004
Figure 112007047722946-PCT00005
상기 식에서,
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 히드록시알킬, C1-C10 카르복시알킬 또는 C1-C10 시아노알킬이거나, 또는 하기 화학식 II의 기이며,
Figure 112007047722946-PCT00006
여기에서, Y는 산소, 황 원자 또는 CH2이고;
X1은 수소, C1-C10 알킬, RaRbNC(=O)- 또는 HORc이며, 여기에서 Ra 및 Rb는 동일하거나 상이할 수 있고, 수소, C1-C10 알킬, 아미노, C1-C10 할로알킬, C1-C10 아미노알킬, C1-C10 BOC-아미노알킬, 및 C3-C10 시클로알킬로부터 선택되거나, 함께 결합하여 2 내지 5 개의 탄소 원자를 함유하는 헤테로시클릭 환을 형성하며, Rc는 C1-C10 알킬, 아미노, C1-C10 할로알킬, C1-C10 아미노알킬, C1-C10 BOC-아미노알킬, 및 C3-C10 시클로알킬로부터 선택되고;
X2는 수소, 히드록실, C1-C10 알킬아미노, C1-C10 알킬아미도 또는 C1-C10 히드록시알킬이며;
X3 및 X4는 각각 독립적으로 수소, 히드록실, 아미노, 아미도, 아지도, 할로, 알킬, 알콕시, 카르복시, 니트릴로, 니트로, 트리플루오로, 아릴, 알크아릴, 티오, 티오에스테르, 티오에테르, -OCOPh, -OC(=S)OPh이거나, X3 및 X4는 둘다 >C=S에 연결된 산소로서 5-원 환을 형성하거나, X2 및 X3는 하기 화학식 III의 환을 형성하고,
Figure 112007047722946-PCT00007
여기에서 R' 및 R"는 독립적으로 C1-C10 알킬이며;
R2는 수소, 할로, C1-C10 알킬에테르, 아미노, 히드라지노, C1-C10 알킬아미노, C1-C10 알콕시, C1-C10 티오알콕시, 피리딜티오, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 티오, 및 C1-C10 알킬티오로부터 선택되고;
R3은 -NR4R5 기이며, 여기에서 R4는 수소, 또는 알킬, 치환된 알킬 및 아릴-NH-C(Z)로부터 선택된 기이고, 여기에서 Z는 O, S 또는 NRa이며;
R4가 수소인 경우에, R5는 R- 및 S-1-페닐에틸, 벤질, 페닐에틸 및 아닐리드 기로부터 선택되고, 이들 기는 각각 비치환되거나, C1-C10 알킬, 아미노, 할로, C1-C10 할로알킬, 니트로, 히드록실, 아세토아미도, C1-C10 알콕시, 및 술폰산 또는 그의 염으로부터 선택된 치환체에 의해서 1개 이상의 위치에서 치환되거나; R5는 벤조디옥산메틸, 푸르푸릴, L-프로필알라닐-아미노벤질, β-알라닐아미노-벤질, T-BOC-β-알라닐아미노벤질, 페닐아미노, 카르바모일, 페녹시 또는 C1-C10 시클로알킬이거나; R5는 하기 화학식 IV의 기이거나,
Figure 112007047722946-PCT00008
R4가 알킬, 치환된 알킬 또는 아릴-NH-C(Z)-인 경우에, R5는 치환되거나 비치환된 헤테로아릴-NRa-C(Z)-, 헤테로아릴-C(Z)-, 알크아릴-NRa-C(Z)-, 알크아릴-C(Z)-, 아릴-NR-C(Z)- 및 아릴-C(Z)-로 구성된 군으로부터 선택되며;
X는 O 또는 S이고;
R6은 RaRbNC(=O)- 또는 HORc이며, 여기에서
Ra 및 Rb는 동일하거나 상이하고, 수소, C1-C10 알킬, 아미노, C1-C10 할로알킬, C1-C10 아미노알킬, 및 C3-C10 시클로알킬로부터 선택되거나, 함께 결합하여 2 내지 5 개의 탄소 원자를 함유하는 헤테로시클릭 환을 형성하며;
Rc는 C1-C10 알킬, 아미노, C1-C10 할로알킬, C1-C10 아미노알킬, C1-C10 BOC-아미노알킬 및 C3-C10 시클로알킬로부터 선택되고;
R7 및 R8은 동일하거나 상이할 수 있으며, C1-C10 알킬, C1-C10 시클로알킬, R- 또는 S-1-페닐에틸, 비치환된 벤질 또는 아닐리드 기, 및 1개 이상의 위치에서 C1-C10 알킬, 아미노, 할로, C1-C10 할로알킬, 니트로, 히드록실, 아세트아미도, C1-C10 알콕시, 및 술폰산으로부터 선택된 치환체에 의해서 치환된 벤질기의 페닐에테르로부터 선택되며;
R9는 할로, 벤질, 페닐, C3-C10 시클로알킬 및 C1-C10 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된다.
더욱 바람직한 구체예에 따르면, A3AR 아고니스트는 하기 화학식 VII의 뉴클레오시드 유도체이다:
Figure 112007047722946-PCT00009
상기 식에서, X1, R2 및 R4는 상기 정의된 바와 같다.
A3AR 아고니스트의 특정한 군은 N6-벤질아데노신-5'-우론아미드 유도체이다. 몇가지 바람직한 N6-벤질아데노신-5'-우론아미드 유도체는 N6-2-(4-아미노페닐)에틸아데노신 (APNEA), N6-(4-아미노-3-요오도벤질)아데노신-5'-(N-메틸우론아미드) (AB-MECA) 및 1-데옥시-1-{6-[({3-요오도페닐}메틸)아미노]-9H-퓨린-9-일}-N-메틸-β-D-리보푸란우론아미드 (IB-MECA) 및 2-클로로-N6-(3-요오도벤질)아데노신-5'-N-메틸우론아미드 (Cl-IB-MECA)이다.
또다른 구체예에 따르면, A3AR 아고니스트는 N6-벤질아데노신-5'-알킬우론아미드-N1-옥시드 또는 N6-벤질아데노신-5'-N-디알릴우론아미드-N1-옥시드이다.
MTX 및 A3AR 아고니스트는 소염 효과를 수득하는데 충분한 양으로 투여된다. 각각의 활성 약제 (MTX 또는 A3AR 아고니스트)의 양은 적어도, 단독으로 투여한 경우에 원하는 소염 효과를 제공하는 양이다. 그럼에도 불구하고, 각각의 개별적인 약물을 단독으로 사용하는 경우에 필요할 수 있는 것보다 각각의 활성 약제의 총 투여량을 더 저하시킬 수 있는 치료 배합물을 제공하는 본 발명의 용도가 고려될 수 있다. 부작용의 감소가 나타날 수도 있다.
인식될 수 있는 바와 같이, 각각의 활성 약제의 양은 치료할 상태, 목적하는 치료 레지멘 및 원하는 치료 용량에 따라서 좌우될 수 있다. 예를 들어, 용량이 1 ㎎/일이고, 원하는 투여 레지멘이 1 일 1회 투여인 경우에, 이것을 함유하는 제약 조성물 내의 활성 약제의 양은 1 ㎎일 것이다. 이러한 1 일 용량을 매일 2회 투여로 분할하고자 하는 경우에, 제약 조성물 내의 활성 약제의 양은 0.5 ㎎일 수 있다.
원하는 효과를 수득하는데 효과적인 양은 기술분야에서 공지된 고려사항에 의해서 결정된다. 본 발명의 목적에 따라 " 소염성 유효 용량 "은 예를 들어, 염증과 관련된 원치 않는 증상의 개선, 이러한 증상이 나타나기 전에 그의 발현의 예방, 염증 상태의 진행의 둔화, 염증 상태와 연관된 증상의 악화의 둔화, 염증 상태의 만성적 단계에 의해서 야기된 비가역적인 손상의 둔화, 염증 상태의 중증도 감소 또는 치유, 생존율의 개선 또는 이러한 상태로부터의 더욱 빠른 회복의 제공을 포함하는 소염 효과 중의 어느 하나를 달성하는데 효과적이어야 한다.
예를 들어, 염증 상태가 류마티스성 관절염 (RA, 이것은 또한 본 발명에 의 해서 치료되는 바람직한 상태임)인 경우에, 유효량은 다음의 효과 중의 하나 또는 그 이상에 의해서 나타날 수 있다: 관절의 감소된 팽윤 및 과민성, 관절에서 감소된 통증, 개선된 운동성 및 유연성, 관절 및 주변 조직의 악화의 둔화, 질환의 급성 발작 사이의 관해기간의 증가, 급성 발작기간의 감소, 관절 악화의 예방 등.
유효량은 활성 약제의 그의 상응하는 수용체에 대한 친화성, 체내에서의 그의 분포 프로필, 체내에서의 반감기와 같은 다양한 약물학적 파라미터, 존재한다면 원치 않는 부작용, 치료할 대상체의 연령 및 성별 등을 포함하는 다양한 인자들에 따라 좌우되는 것으로 인식되어 있다. 유효량은 일반적으로 유효 용량 범위, 최대 허용용량 및 최적 용량을 찾을 목적을 갖는 임상 시험에서 시험된다. 이러한 임상 시험을 수행하는 방식은 임상적 발현의 기술분야에서 숙련된 사람에게 잘 알려져 있다.
양은 또한, 때때로 포유동물에서 효과적인 것으로 나타난 양을 기초로 하여 결정될 수도 있다. 래트에게 투여되는 X ㎎/㎏의 양을 본 기술분야에서 잘 알려진 이용가능한 전환식 중의 하나에 의해서 또다른 종 (명백하게 인간)에서의 동등한 양으로 전환시킬 수 있다는 것은 잘 알려져 있다. 전환식의 예는 다음과 같다:
전환 I:
종 체중 (㎏) 체표면적 (㎡) Km 인자
마우스 0.2 0.0066 3.0
래트 0.15 0.025 5.9
인간 소아 20.0 0.80 25
성인 70.0 1.60 37
체표면 의존적 용량 전환: 래트 (150 g) 대 인간 (70 ㎏)은 1/7 래트 용량이 다. 이것은, 이 경우에 래트에서의 0.001-0.4 ㎎/㎏가 인간에서의 약 0.14-56 ㎍/㎏에 해당하는 것을 의미하며; 70 ㎏의 평균 체중을 감안하면 이것은 약 0.01 내지 약 4 ㎎의 절대용량으로 해석될 수 있다.
전환 II :
이하의 전환 인자: 마우스 = 3, 래트 = 67. 전환 인자를 동물 체중과 곱하여 해당하는 인간 용량에 대하여 ㎎/㎏을 ㎎/㎡로 전환시킨다.
종 체중 (㎏) BSA (㎡)
인간 70.00 1.710
마우스 0.02 0.007
래트 0.15 0.025
개 8.00 0.448
이 식에 따르면, 인간의 경우에 래트에서의 0.001-0.4 ㎎/㎏에 상응하는 양은 0.16-64 ㎍/㎏이며; 체중이 약 70 ㎏인 인간에 대한 절대용량은 전환 I에서 나타낸 범위와 유사하게 약 0.011 내지 약 4.4 ㎎이다.
전환 III :
전환에 대한 또다른 대안은 용량을 동물에 대해서 투여한 후에 수득되는 것과 동일한 혈장 수준 또는 AUC를 수득하도록 설정하는 것이다.
즉, IB-MECA의 경구 투여 후에 마우스에서 행해진 측정을 기초로 하고, IB-MECA 를 건강한 남성 지원자에게 투여하는 임상 시험에서 인간에게 행해진 이러한 측정을 기초로 하여, IB-MECA가 효과적인 마우스에서의 1 ㎍/㎏-400 ㎎/㎏의 용량은 약 0.14-57 ㎍/㎏의 인간 용량, 즉 70 ㎏ 대상체에 대해서 0.01-4 ㎎의 총용량에 해당하는 것으로 결론이 내려졌다.
또한, 상기 전환방법을 기초로 하여 IB-MECA 및 Cl-IB-MECA (본 발명에 따른 바람직한 A3AR 아고니스트)에 대해 바람직한 투여량 범위는 4 ㎎ 미만, 일반적으로는 약 0.01 내지 약 2 ㎎ (각각 약 0.14-28 ㎍/㎏)의 범위, 바람직하게는 약 0.1 내지 1.5 ㎎ (각각 약 1.4-21 ㎍/㎏)의 범위 이내일 수 있다. 이 용량은 하루에 1회, 2회 또는 때때로는 수회 투여될 수 있다.
미국 특허 출원 공개 제20050101560호 및 피쉬맨 (Fishman) 등의 문헌 [Fishman et al., Tolerability, pharmacokinetics, and concentration-dependent hemodynamic effects of oral CF101, and A3 adenosine receptor agonist, in healthy young men Int J Clin Pharmacol Ther. 42 :534-542, 2004]에 기술된 바와 같은 인체시험은 IB-MECA의 수준이 마우스에서의 단지 1.5 시간인 반감기에 비해 인간 혈장에서는 약 8-10 시간의 반감기를 가지고 분해하며, 1일 수회 투여의 경우에는 축적효과에 대한 투여량의 보정이 이루어지는 것이 때때로 필요한 것을 나타내었다 (후속 용량이 이전의 투여 수준이 분해하기 전에 투여되며, 따라서 단일 용량에서 나타나는 것 이상으로 혈장 수준의 증량이 있음). 상기한 인체실험을 기초로 하여 1일 2회 투여가 바람직한 투여 레지멘인 것으로 보인다. 그러나, 이것이 다른 투여 레지멘을 제외시키는 것은 아니다.
추가로, 예를 들어, MTX의 유효량은 일반적으로 5 내지 25 ㎎의 범위로 1주 당 1회씩 경구 또는 비경구 투여된다.
바람직한 구체예에 따르면, 병용 치료는 대상체에 대하여 약 5 내지 25 ㎎ 사이의 범위의 용량으로 MTX를 주 1회 투여하고, 이와 동시에 AaAR 아고니스트를 각각의 투여용량을 약 1 내지 약 1000 ㎍/체중 ㎏, 바람직하게는 400 ㎍/㎏ 체중 미만, 더우기 200 ㎍/체중 ㎏ 미만으로 하여 매일, 1 일에 1 내지 수회, 바람직하게는 1 일에 1회 또는 2회 투여하는 것을 포함한다. 일반적으로, A3AR 아고니스트의 용량은 1 내지 100 ㎍/체중 ㎏의 범위이다.
본 발명의 문맥에서 " 조성물 "은 제약상 허용가능한 담체 및 그 밖의 다른 첨가제와 함께 또는 별도로 활성 약제(들)의 배합물을 의미한다. 담체는 때때로 표적조직에 대한 활성 성분의 송달 또는 침투를 개선시키고, 약물의 안정성을 개선시키고, 청소율을 둔화시키고, 서방출 특성을 부여하고, 원치 않는 부작용을 감소시키는 등의 효과를 가질 수 있다. 담체는 또한, 제제를 안정화시키는 물질 (예를 들어, 보존제), 제제에 식용 향료를 제공하는 물질 등일 수도 있다. 담체, 안정화제 및 보조제의 예에 대해서는 문헌 (E.W. Martin, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, MacK Pub Co (June, 1990))을 참고로 한다.
MTX 및 A3AR 아고니스트는 본 기술분야에서 공지된 바와 같은 다양한 송달모드에 의해서 대상체에게 투여될 수 있다. MTX는 경구 또는 비경구 주사에 의해서 투여될 수 있지만, A3AR 아고니스트는 경구 투여되는 것이 바람직하다. 담체는 원하는 제제의 형태에 따라서 선택될 수 있으며, A3AR 아고니스트 조성물은 환제, 캅셀제의 형태, 시럽제, 방향성 분말의 형태, 및 그 밖의 다른 다양한 형태일 수 있 다.
본 발명은 설명적인 방식으로 기술되어 있으며, 사용된 용어는 제한적인 것이 아니라 단어의 성질을 설명하고자 하는 것이다. 명백하게, 본 발명의 다수의 변형 및 변화가 상기한 지침의 관점에서 이루어질 수 있다. 따라서, 첨부된 특허청구범위의 범주 내에서 본 발명은 이하에 구체적으로 기술된 것과는 다르게 실시될 수 있는 것으로 이해될 수 있다.
예시적 구체예의 상세한 설명
실시예 1: 생체내 시험
재료
일반적으로 1-데옥시-1-[6-[[(3-요오도페닐)메틸]아미노]-9H-퓨린-9-일]-N-메틸-D-리보푸란우론아미드 (IB-MECA)로 공지되어 있는 GMP 등급의 화합물인 A3AR 아고니스트 CF101은 알바니 몰레큘라 리서치 인코포레이티드 (Albany Molecular Research Inc., Albany, NY, USA)에 의해서 합성되었다.
메토트렉세이트는 아빅 (Abic, Israel)으로부터 구입하였다.
방법
8-12 주령의 암컷 루이스 래트를 할란 래보래토리즈 (Harlan Laboratories, Jerusalem, Israel)로부터 수득하였다. 래트를 표준화된 펠릿화 먹이로 유지시키고, 수돗물을 공급하였다. 실험은 캔-파이트 바이오파마 (Can-Fite BioPharma, Petah Tikva, Israel)의 인스티투쇼날 애니멀 케어 앤드 유즈 커미티 (Institutional Animal Care and Use Committee)에 의해서 제정된 가이드라인 (guidelines)에 따라서 수행되었다. 래트에게 10 ㎎/㎖ 열사멸된 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis; Mt) H37Ra (Difco, Detroit, USA)를 함유하는 불완전 프로인트 보조액 (IFA)으로 구성된 100 ㎕의 현탁액을 꼬리 기부 (tail base)에 피하로 주사하였다. 각각의 군은 10 마리의 동물을 함유하였다.
CF101 (10 ㎍/㎏)에 의한 처리는 백신접종한 후 14 일째에 개시하였으며, 가바즈 (gavage)에 의해서 하루에 2회 경구 투여하였다. 또다른 군은 메토트렉세이트 (MTX) (0.25, 0.75 ㎎/㎏)에 의해서 백신접종한 후 14 일째에 출발하여 매 3 일마다 복강내로 처리하였다. 각각의 실험에서 대조군에는 비히클 (약물의 경우에 상응하는 희석액 중의 DMSO) 만을 투여하였다.
임상적 질환 활성도 스코어는 다음과 같이 평가하였다: 동물들은 임상적 관절염에 대해서 매 2일마다 검사하였다. 스코어링 (scoring) 시스템은 각각의 사지에서 0-4의 범위였으며; 0은 관절염이 없는 것이고, 1은 하나의 발가락/손가락 관절의 발적 또는 팽윤을 나타내고, 2는 하나보다 많은 발가락/손가락 관절의 발적 및 팽윤을 나타내며, 3은 발목 및 족근골-중족골 관절 침습을 나타내고, 4는 전체 발의 발적 또는 팽윤을 나타낸다. 임상적 스코어는 4 개의 개별적인 다리의 스코어를 더하여 줌으로써 계산되었다. 염증 강도는 또한, 캘리퍼 (caliper; Mitotoyo, Tokyo, Japan)에 의해서 측정된 래트 뒷발의 직경의 증가에 따라서 측정되었다.
결과
면역화시킨 지 약 21 일 후에, 대부분의 비히클 처리된 동물은 진행적으로 관절염을 발현시켰다. CF101 처리 (10 ㎍/㎏, 면역시킨 후 14 일째에 출발하여 1 일 2회, 경구 투여함) 및 메토트렉세이트 (MTX) 처리는 관절염 임상 스코어에 의해서 평가되는 바와 같이, 두가지 약물에 대해서 매우 유사하게 질환 중증도를 상당히 감소시켰다. 질환은 21-25 일째에 최고에 달하였으며, CF101 또는 MTX의 최대 효과는 이들 시기에 나타났다 (도 1A 및 도 1B). CF101 및 MTX에 의한 병용처리는 CF101 단독 또는 MTX 단독으로 처리하여 수득한 상가적 효과보다 더 큰 억제 효과를 제공하였다 (도 1A 및 도 1B).
실시예 2: 시험관내 시험
인간 섬유아세포 유사 활막세포 ( FLS ) 배양
인간 활액 샘플은 천자술을 시행한 골관절염 (OA) 환자로부터 수집하였다. 활액을 원심분리하고, 상등액을 제거하였다. 세포를 제I형 콜라게나제 (4 ㎎/㎖)를 함유하는 DMEM 내에 2 시간 동안 재현탁시키고, 37℃에서 격렬하게 진탕하였다. 상등액 내에 방출된 세포를 원심분리에 의해서 수확하고, 37℃, 5％ CO2 배양기 내의 10％ FBS, 2 mM 글루타민, 100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신, 1％ 비필수 아미노산, 1％ 나트륨 피루베이트 및 20 nM HEPES 완충액을 함유하는 DMEM 중에서 배양하였다. 밤새 배양한 후에, 부착되지 않은 세포를 제거하였다. 부착된 세포 (FLS)를 1:2 비로 계대 배양하고, 계대 4에서 10까지의 세포를 실험에서 사용하였다.
FLS의 증식에 대한 메토트렉세이트 (MTX)와 배합한 CF101의 효과는 MTT 시험을 이용하여 시험하였다. 세포 (5×104/㎖ 세포)를 96-웰 마이크로타이터 (microtiter) 플레이트 내의 성장배지 내에서 MTX (1 μM)의 존재 하에 72 시간 동안 배양하였다. 마지막 24 시간째에 CF101 (10 nM)을 배양물에 첨가하였다.
래트 섬유아세포 유사 활막세포 ( FLS ) 배양
아쥬반트 유도된 관절염 래트로부터 활액 조직을 수집하였다. 조직을 잘게 썰고, DMEM 중의 4 ㎎/㎖ 제I형 콜라게나제 및 0.25 w/v 트립신 중에서 분해시켰다. 혼합물을 37℃에서 4 시간 동안 격렬하게 진탕하였다. 방출된 세포를 원심분리에 의해서 상등액으로부터 분리시키고, 37℃, 5％ CO2 배양기 내의 15％ FCS, 2 mM 글루타민, 100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 함유하는 DMEM 중에서 배양하였다. 밤새 배양한 후에, 부착되지 않은 세포를 제거하였다. 부착된 세포 (FLS)를 1:2 비로 계대 배양하고, 계대 4에서 10까지의 세포를 실험에서 사용하였다.
FLS의 증식에 대한 MTX와 배합한 CF101의 효과는 MTT 시험을 이용하여 시험하였다. 세포 (5×104/㎖ 세포)를 96-웰 마이크로타이터 (microtiter) 플레이트 내의 성장배지 내에서 MTX (1 μM)의 존재 하에 72 시간 동안 배양하였다. 마지막 24 시간째에 CF101 (10 nM)을 배양물에 첨가하였다.
결과
도 2A 및 2B는 각각, MTT 시험에 의해서 평가된 것으로, 인간 및 래트 FLS의 증식에 대한 MTX 단독, CF101 단독, 또는 MTX와 CF101의 병용처리의 효과를 나타낸 것이다. 나타낸 바와 같이, 병용 치료의 억제 효과는 각각의 단독 처리에 의해서 달성된 효과보다 더 컸다.

Claims (36)

  1. 대상체에게 유효량의 메토트렉세이트 (MTX) 및 유효량의 A3 아데노신 수용체 아고니스트 (A3AR 아고니스트)의 배합물을 투여하는 것을 포함하는, 염증 상태의 대상체 치료 방법.
  2. 제1항에 있어서, 대상체에게 MTX를 1주 당 1회 투여하는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 대상체에게 A3AR 아고니스트를 1일 1회 내지 수회 투여하는 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 A3AR 아고니스트를 경구 투여하는 것인 방법
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, A3AR 아고니스트가 N6-(3-요오도벤질)-아데노신-5'-N-메틸-우론아미드 (IB-MECA) 또는 2-클로로-N6-(3-요오도벤질)-아데노신-5'-N-메틸-우론아미드 (Cl-IB-MECA)인 방법.
  6. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, A3AR 아고니스트의 1일 투여량이 4 ㎎ 미만인 방법.
  7. 제6항에 있어서, A3AR 아고니스트의 1일 투여량이 약 0.01 내지 약 2 ㎎의 범위 이내인 방법.
  8. 제7항에 있어서, A3AR 아고니스트의 1일 투여량이 약 0.1 내지 약 1.5 ㎎의 범위 이내인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 염증 상태가 자가면역 장애인 방법.
  10. 제10항에 있어서, 자가면역 장애가 류마티스성 관절염인 방법.
  11. 제10항에 있어서, A3AR 아고니스트가 IB-MECA인 방법.
  12. 대상체에게 유효량의 A3AR 아고니스트를 투여하는 것을 포함하는, MTX로 처치되는 염증 상태의 대상체 치료 방법.
  13. 대상체에게 유효량의 MTX를 투여하는 것을 포함하는, A3AR 아고니스트 처치가 지시된 염증 상태의 대상체 치료 방법.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 대상체에게 A3AR 아고니스트를 1일 1회 내지 수회 투여하는 것인 방법
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 A3AR 아고니스트를 경구 투여하는 것인 방법
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, A3AR 아고니스트가 IB-MECA 또는 Cl-IB-MECA인 방법.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, A3AR 아고니스트의 1일 투여량이 4 ㎎ 미만인 방법.
  18. 제17항에 있어서, A3AR 아고니스트의 1일 투여량이 약 0.01 내지 약 2 ㎎의 범위 이내인 방법.
  19. 제18항에 있어서, A3AR 아고니스트의 1일 투여량이 약 0.1 내지 약 1.5 ㎎의 범위 이내인 방법.
  20. 제12항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 염증 상태가 자가면역 장애인 방법.
  21. 제20항에 있어서, 자가면역 장애가 류마티스성 관절염인 방법.
  22. MTX로 처치되는 염증 상태의 대상체 치료용 제약 조성물의 제조에 있어서의 A3AR 아고니스트의 용도.
  23. A3AR 아고니스트로 처치되는 염증 상태의 대상체 치료용 제약 조성물의 제조에 있어서의 MTX의 용도.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 염증 상태가 자가면역 장애인 용도.
  25. 제14항에 있어서, 자가면역 장애가 류마티스성 관절염인 용도.
  26. 유효량의 A3AR 아고니스트를 포함하는, MTX로 처치되는 염증 상태의 치료용 제약 조성물.
  27. 제26항에 있어서, A3AR 아고니스트의 경구 전달을 위한 생리적으로 허용가능한 담체를 포함하는 것인 제약 조성물.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, A3AR 아고니스트가 IB-MECA 또는 Cl-IB-MECA인 제약 조성물.
  29. 제28항에 있어서, A3AR 아고니스트를 4 ㎎ 미만으로 포함하는 제약 조성물.
  30. 제28항에 있어서, A3AR 아고니스트를 4 ㎎ 미만으로 포함하는 제약 조성물.
  31. 제28항에 있어서, A3AR 아고니스트를 약 0.01 내지 약 2 ㎎ 포함하는 제약 조성물.
  32. 제28항에 있어서, A3AR 아고니스트를 약 0.1 내지 약 1.5 ㎎ 포함하는 제약 조성물.
  33. 유효량의 A3AR 아고니스트를 포함하는, MTX로 처치되는 염증 상태의 환자 치료용 제약 조성물.
  34. 제26항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 염증 상태가 자가면역 장애인 제약 조성물.
  35. 제34항에 있어서, 자가면역 장애가 류마티스성 관절염인 제약 조성물.
  36. 제35항에 있어서, A3AR 아고니스트가 IB-MECA인 제약 조성물.
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