KR20070089367A - Composition comprising extract of peach blossom and deep sea water - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 함유하는 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 해양 심층수를 추출 용매로 사용하여 추출한 복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 함유하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition containing peach blossom extract and marine deep water, and more particularly, to a composition containing peach blossom extract and marine deep water extracted using marine deep water as an extraction solvent.
복숭아 나무는 장미과에 속한 떨기나무이다. 의학서인 "향약집성방" 및 "동의보감"에서는 "복숭아꽃은 약한 귀신을 내쫓고 살결을 부드럽게 한다."라고 복숭아꽃의 약성을 기재하고 있다.Peach tree is a shrub belonging to the Rosaceae family. In the medical books, "Hyang-Yak-Sang-Bang-bang" and "Agreement Bogam", "Peach blossoms cast out weak ghosts and soften their skin."
야생 돌복숭아 꽃잎을 5월 말에서 6월 초에 수확해서 잘 보관하였다가 세수할 때 일정량 혼합하여 사용하면 피부가 부드럽고 깨끗해지기 때문에 민간 요법으로 사용되어 왔다.Wild peach petals have been harvested from late May to early June and stored well, and have been used as a folk remedy because the skin softens and cleansed when used in combination.
한편, 해양 심층수는 햇빛이 도달하지 않는 수심 200m 이하에서 채수한 해수를 의미하는데 청정할 뿐 아니라 부영양성, 숙성성, 미네랄이 풍부하다.On the other hand, deep sea water means seawater collected at a depth of 200m or less without sunlight, and is not only clean but rich in eutrophication, ripening, and minerals.
청정성의 의미는 인공 물질로 오염되지 않았다는 것뿐만 아니라 분해해야 할 유기물이 적기 때문에 세균 번식이 아주 적다는 것을 의미한다.Cleanliness not only means that it is not contaminated with artificial substances, but also means very little bacterial growth because of the small amount of organic matter that needs to be broken down.
숙성성의 의미는 표층수보다 "매우 세밀"하고, "부드럽다"는 의미이다. 저온과 높은 압력 때문에 밀도가 높아져 있고, 미세한 입자상의 미네랄이 오랜 시간에 걸쳐 해수에 녹아있음을 나타낸다.Aging means "very fine" and "soft" than surface water. Due to low temperatures and high pressures, the density is high, indicating that fine particulate minerals are dissolved in sea water over time.
미네랄이 풍부하다는 것은 해양 표층수에 들어 있는 미네랄 중 특정한 성분들은 생물이 소비하여 줄어들었지만 심층수는 항상 일정하게 유지하고 있다. 해양 심층수를 음료나 식품, 화장품, 기능성 음료 등에 이용하였을 때 나타나는 효과의 일부는 바로 이 미네랄 특성과 관계가 있다.The abundance of minerals means that certain of the minerals in marine surface waters are reduced by living organisms, but deep waters are always constant. Some of the effects of using deep ocean water in beverages, food, cosmetics, and functional beverages are related to this mineral property.
피부는 생체를 외부 환경으로부터 보호하는 막 (barrier)으로서, 외부에서부터 순서대로 표피, 진피, 피하 조직의 3개 층으로 크게 구분된다. 특히, 표피는 인체 내부의 수분 증발을 방지하는 중요한 역할을 하는데, 표피층에서 분화과정을 통하여 수분을 함유하면서 얇은 각질층으로 발달하게 된다. 각질층은 외부 환경과 직접 접촉하는 피부 최외각층으로서 기계적, 화학적으로 유해한 성분의 침입을 방지하고, 생체 내보다 건조한 외부 환경에서 내부 수분이 손실되는 것을 막아주는 동시에, 각질층 자신도 적당한 수분을 보유하여 유연성을 유지하고 있다.Skin is a barrier that protects living organisms from the external environment, and is divided into three layers of epidermis, dermis, and subcutaneous tissue in order from the outside. In particular, the epidermis plays an important role in preventing the evaporation of moisture inside the human body, it develops into a thin stratum corneum while containing moisture through the differentiation process in the epidermal layer. The stratum corneum is the skin's outermost layer that is in direct contact with the external environment, preventing the invasion of mechanically and chemically harmful ingredients, preventing internal moisture from being lost in a drier external environment, and while the stratum corneum itself retains adequate moisture for flexibility. Is keeping.
피부 수분량은 진피에서는 70% 정도이나 표피로 가면서 감소하여 최외각층인 각질층에서는 약 10~30%가 된다. 각질층에 수분이 적당히 유지되어야 피부의 탄력이나 유연성을 유지할 수 있는데, 일반적으로 정상적인 피부는 약 30% 정도의 수분이나 수용성 성분을 함유하고 있다.Skin moisture level is about 70% in the dermis but decreases as it goes to the epidermis and becomes about 10-30% in the outermost stratum corneum. Proper moisture is maintained in the stratum corneum to maintain the elasticity and suppleness of the skin. Normally, normal skin contains about 30% water or water-soluble components.
또한, 건강한 사람의 각질 세포는 고농도의 자연 보습인자 (Natural Moisturing Factor, NMF)가 존재하여 피부 수분 보유를 돕는다.In addition, keratinocytes of healthy people have a high concentration of Natural Moisturing Factor (NMF) to help skin moisture retention.
한편, 최근에는 먹는 화장품이 등장하면서 "화장품은 피부에 바르는 것"이라는 일반적인 인식이 바뀌고 있다. 이와 같은 먹는 화장품이 현재 가장 역점을 두는 것은 노화 방지와 피부 미백인데, 이는 비타민이나 미네랄 등은 피부를 통한 흡수는 어렵지만 화약 등의 형태로 복용하면 혈관을 타고 피부 세포에 도달하여 피부의 상태를 개선할 수 있기 때문이다.Meanwhile, with the advent of eating cosmetics in recent years, the general perception that "cosmetic is applied to the skin" is changing. The most important focus of these eating cosmetics is anti-aging and whitening of the skin, which is difficult to absorb vitamins and minerals through the skin, but when taken in the form of gunpowder, they reach the skin cells and improve the condition of the skin. Because you can.
최근에 환경의 변화나 생활 패턴의 변화에 따른 냉/난방의 인위적인 온도 조절, 사회 생활에서 발생하는 각종 스트레스와 환경 오염, 화장 습관에 따른 잦은 세안 및 연령 증가에 따른 자연적인 피부 노화 등의 여러 가지 원인으로 인하여 신체의 항상성을 유지해 주는 미네랄과 필수 아미노산 성분들이 결핍되고 피부도 건조해지면서 피부 표면이 거칠게 되는 등의 현상이 발생하기 때문에 신체의 항상성을 유지하고 피부를 보호하고 개선할 필요성이 증가하고 있다.In recent years, various factors such as artificial temperature control of cooling / heating due to changes in the environment and life patterns, various stresses and environmental pollution in social life, frequent face washing due to makeup habits, and natural skin aging due to age increase As a result of the lack of minerals and essential amino acid components that maintain the body's homeostasis, and drying the skin, such as the rough surface of the skin, the need for maintaining the homeostasis of the body, protect and improve the skin, have.
이에, 본 발명의 목적은 피부를 보호하고 신체의 항상성을 유지시키는데 도움을 주는 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide compositions that help protect the skin and maintain the homeostasis of the body.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 복숭아꽃 추출물과 해양 심층수를 함유하는 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition containing peach blossom extract and deep sea water.
상기 복숭아 꽃 추출물은 해양 심층수를 추출 용매로 하여 추출한 것을 이용하는 것이 바람직하다.The peach flower extract is preferably used to extract the deep sea water as the extraction solvent.
상기 복숭아 꽃 추출물은 해양 심층수 100 중량부에 대하여 0.1~20 중량부 함유되는 것이 바람직하다.The peach flower extract is preferably contained 0.1 to 20 parts by weight based on 100 parts by weight of deep sea water.
또한, 상기 복숭아 꽃은 야생 돌복숭아 꽃인 것이 바람직하다.In addition, the peach blossom is preferably a wild peach blossom.
또한, 해양 심층수는 원수 (原水), 역삼투압 (reverse osmosis)법에 의한 농축수 또는 여과수, 전기 투석 (electrodialysis)법에 의한 농축수 또는 여과수, 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다.Further, the deep sea water may use raw water, concentrated or filtered water by reverse osmosis, concentrated or filtered water by electrodialysis, or a mixture thereof.
상기 조성물은 피부 화장료로서 사용할 수 있다.The composition can be used as a skin cosmetic.
본 발명에 따른 피부 화장료용 조성물은 복숭아꽃 추출물과 해양 심층수만으로 구성된 것을 화장수로서 바를 수 있으며, 기타 통상의 외용 제제, 의약부외품 또는 화장료 형태로 제형화 할 수 있다.Skin cosmetic composition according to the invention can be applied as a lotion consisting of only peach blossom extract and deep sea water, it can be formulated in other conventional external preparations, quasi-drugs or cosmetic forms.
본 발명의 피부 화장료 조성물은 화장품, 세안제 및 샴푸 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는 예를 들어, 각종 스킨, 로션, 크림 등과 같은 화장품류와 샴푸, 린스, 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트 등의 생활용품류 등이 있다.Skin cosmetic composition of the present invention can be used in a variety of cosmetics, face wash and shampoo. Products to which the composition can be added include, for example, cosmetics such as various skins, lotions and creams, and household goods such as shampoos, rinses, cleansing agents, face washes, soaps, and treatments.
또한, 본 발명에 의한 피부 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 유액, 로션, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 연고, 패치, 미용액, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 비누, 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.In addition, the skin cosmetic composition according to the present invention is not particularly limited in the formulation, but, for example, emulsion, lotion, cream, lotion, essence, pack, gel, powder, lipstick, makeup base, foundation, ointment, patch, essence Formulations such as, cleansing foams, cleansing creams, cleansing water, soaps, sprays and the like.
각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 본 발명의 복숭아꽃 추출물 및 해양 심층 수 외의 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적절하게 선정하여 배합할 수 있다.In the cosmetic composition of each formulation, other components other than the peach blossom extract and deep sea water of the present invention can be appropriately selected and blended by those skilled in the art without difficulty depending on the formulation or purpose of use of other cosmetics.
상기 제제는 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.The formulation may contain a skin absorption promoting substance to increase the effect.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 또는 해초 엑기스 등을 더 포함할 수 있다.In addition, the cosmetic composition of the present invention may further include a water-soluble vitamin, oil-soluble vitamin, polymer peptide, polymer polysaccharide, sphingolipid or seaweed extract.
본 발명의 화장료 조성물에는 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.You may mix | blend with the cosmetic composition of this invention the other component normally mix | blended with cosmetics as needed.
이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로는 유지 성분, 보습제, 에몰리언트제, 계면활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알코올, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 정제수 등을 들 수 있다.Other ingredients that may be added include fats and oils, humectants, emulsifiers, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, fungicides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, flavors, blood circulation Accelerators, purified water, and the like.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01~5 중량부 정도 배합될 수 있다.Moreover, the compounding component which may be added other than this is not limited to this, Moreover, Although all the said components can be mix | blended within the range which does not impair the objective and effect of this invention, Preferably it is compounded about 0.01-5 weight part with respect to gross weight. Can be.
상기 조성물은 또한 건강 식품으로 사용할 수 있다.The composition can also be used as a health food.
상기 건강 식품으로 사용될 경우에는 음료, 겔, 분말 또는 환약과 같은 형태로 제조되거나 첨가되어 마시거나 먹을 수 있다.When used as the health food may be prepared or added in the form of beverages, gels, powders or pills to drink or eat.
또한, 상기 본 발명의 조성물은 보습, 주름 개선, 미백, 항산화, 지방 분해 및 숙취 해소 효과를 증가시키기 위한 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.In addition, the composition of the present invention may contain an absorption promoting substance for increasing the effect of moisturizing, wrinkle improvement, whitening, antioxidant, lipolysis and hangover.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다. 단 실시예는 발명을 예 시하는 것일 뿐 본 발명이 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the examples are only to illustrate the invention and the present invention is not limited by the following examples.
제조예Production Example 1. 해양 심층수 채취 및 정제 1. Deep sea water extraction and purification
대한민국 동해의 수심 500m에서 채수한 해양 심층수를 역삼투압 장치로 탈염하였다. 생성된 물은 세균과 미네랄이 제거된 상태이다. 한편, 채수한 해양 심층수를 전기 투석 장치를 이용하여 고농도의 미네랄을 추출하였다.Deep seawater collected at a depth of 500 meters in the East Sea of Korea was desalted with a reverse osmosis system. The water produced is free of bacteria and minerals. Meanwhile, the extracted deep seawater was extracted with a high concentration of minerals using an electrodialysis apparatus.
상기 역삼투압 여과수 및 전기 투석수 각각에 포함되어 있는 원소량을 하기 표 1에 나타내었다.The amount of elements contained in each of the reverse osmosis filtered water and the electrodialyzed water is shown in Table 1 below.
[표 1]TABLE 1
상기 두 개의 장치에서 생성된 물을 혼합하여 미네랄이 함유된 경도 30~1500 의 음용할 수 있는 수준으로 제조하였다.The water produced in the two devices were mixed to prepare a drinkable level of the hardness of 30 ~ 1500 containing the mineral.
실시예 1. Example 1. 돌복숭아꽃Peach blossom 추출물의 제조방법 Preparation method of extract
야생 돌복숭아꽃 10g을 취하여 상기 제조예에서 얻은 해양 심층수 100㎖를 첨가한 후 환류 장치 하에서 2시간 동안 끓이면서 추출한 후 여과지로 여과하여 그 여액을 취하고, 상기 제조예에서 얻은 해양 심층수를 첨가하여 총 100㎖가 되게 조정한 다음, 조정액을 4℃에서 6일간 방치하여 생성된 침전물들을 0.5㎛ 막 여과를 하여 돌복숭아꽃 추출물을 제조하였다.Take 10 g of wild peach blossoms, add 100 ml of deep seawater obtained in the above preparation, boil for 2 hours under reflux and extract with filtrate. After adjusting to mL, the adjustment solution was left at 4 ° C. for 6 days, and the resulting precipitates were subjected to 0.5 μm membrane filtration to prepare peach blossom extract.
실시예 2~5. 혼합 음료의 제조Examples 2-5. Preparation of Mixed Drinks
상기 실시예 1에서 제조한 돌복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 하기 표 2와 같은 조성으로 혼합하여 혼합 음료를 제조하였다.The peach peach flower extract prepared in Example 1 and the deep sea water were mixed in the composition shown in Table 2 to prepare a mixed drink.
[표 2]TABLE 2
실시예 6~7. 치약의 제조Examples 6-7. Manufacture of toothpaste
상기 실시예 1에서 제조한 돌복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 하기 표 3과 같은 조성으로 혼합하여 치약을 제조하였다.Toothpaste was prepared by mixing the peach blossom extract prepared in Example 1 and the deep sea water with the composition shown in Table 3 below.
[표 3]TABLE 3
실시예 8~9. 비누의 제조Examples 8-9. Manufacture of soap
상기 실시예 1에서 제조한 돌복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 하기 표 4와 같은 조성으로 혼합하여 비누를 제조하였다.Soap was prepared by mixing the peach blossom extract prepared in Example 1 and the deep sea water with the composition shown in Table 4 below.
[표 4]TABLE 4
실시예 10~11. 보습 크림의 제조Examples 10-11. Preparation of Moisturizing Cream
상기 실시예 1에서 제조한 돌복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 하기 표 5와 같은 조성으로 혼합하여 보습 크림을 제조하였다.Moisturizing cream was prepared by mixing the peach blossom extract and deep sea water prepared in Example 1 in the composition shown in Table 5.
[표 5]TABLE 5
실시예 12~13. 보습 Examples 12-13. Moisturizing 겔의Gel 제조 Produce
상기 실시예 1에서 제조한 돌복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 하기 표 6과 같은 조성으로 혼합하여 보습 겔을 제조하였다.Moisturizing gel was prepared by mixing the peach blossom extract prepared in Example 1 and the deep sea water in the composition shown in Table 6 below.
[표 6]TABLE 6
실시예 14~16. 연고의 제조Examples 14-16. Manufacture of ointments
상기 실시예 1에서 제조한 돌복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수를 하기 표 7과 같은 조성으로 혼합하여 연고를 제조하였다.The ointment was prepared by mixing the peach blossom extract prepared in Example 1 and the deep sea water with the composition shown in Table 7 below.
[표 7]TABLE 7
실험예 1. B-16 Experimental Example 1. B-16 멜라노마Melanoma (Melanoma) 내의 멜라닌 (melanin) 억제 효과 Melanin Inhibitory Effect in (Melanoma)
세포 내의 멜라닌 생성 저해시험 (Melanogenesis inhibition assay) 방법으로 실험을 행하였으며, 이 시험방법은 세포배양시 세포내의 멜라닌 생성양을 공시료액과 비교하는 것이다.The experiment was performed by the method of melanogenesis inhibition assay, which compares the amount of melanin production in the cell with the blank sample.
본 실험은 생쥐 멜라노마 (murine melanoma (B-16)) 세포를 적량의 FBS (fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 혹은 동등 이상의 성장력을 갖는 배지로 6-웰 플레이트에 웰당 1×105 개로 접종한 후 5 % CO2 37℃ 하에서 세포가 웰 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 시료가 적당 농도로 희석된 배지로 교체한 후 5% CO2 37 ℃하에서 일정시간 배양하였다. 시료의 농도범위는 크리스탈 바이올렛 분석 (crystal violet assay)을 이용한 독성 실험을 통하여 결정하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS (phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 세포계수기 (hematocytometer)를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000~10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠렛 (pellet)을 얻었다. 이 세포 펠렛을 60℃에서 건조한 후 10% DMSO가 함유된 1M 수산화나트륨액 100 ㎕ 또는 적량의 세포 용해 완충용액 (cell lysis buffer)을 넣어 60 ℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다. 이 액을 가지고 마이크로플레이트 판독기 (microplate reader)로 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정수당 멜라닌 양 또는 일정단백질당 멜라닌 양을 구하고, 공시험하여 보정하였다.This experiment was performed by inoculating mouse melanoma (B-16) cells in 6-well plates at 1 × 10 5 per well in DMEM containing an appropriate amount of fetal bovine serum (FBS) or a medium having an equivalent growth capacity. The cells were then incubated at 37 ° C. under 5% CO 2 until at least about 80% were attached to the bottom of the well. After incubation, the medium was removed, the sample was replaced with a medium diluted to an appropriate concentration, and then incubated at a constant time under 37% for 5% CO 2 . The concentration range of the sample was determined by a toxicity test using a crystal violet assay. The cells from which the medium was removed were washed with PBS (phosphated buffer saline), which was treated with trypsin to recover the cells. The recovered cells were measured using a hematocytometer and centrifuged at 5,000 to 10,000 rpm for 10 minutes, and then the supernatant was removed to obtain pellets. The cell pellet was dried at 60 ° C., and 100 μl of 1M sodium hydroxide solution containing 10% DMSO or an appropriate amount of cell lysis buffer was added to obtain intracellular melanin in a 60 ° C. thermostat. Using this solution, the absorbance at 490 nm was measured with a microplate reader to determine the amount of melanin per cell number or melanin per constant protein, and was corrected by a blank test.
한편, 상기 크리스탈 바이올렛 분석 방법은 다음과 같다.On the other hand, the crystal violet analysis method is as follows.
일정 농도의 시료를 처리하여 세포를 배양한 후 웰에서 배지를 조심스럽게 제거하고 PBS로 세척한다. 이를 제거한 후에 크리스탈 바이올렛 용액 (0.2 % 크리스탈 바이올렛/2 ㎖ 에탄올, 98 ㎖ 정제수 첨가) 50 ㎕를 96 웰에 넣는다. 실온에서 10 분간 배양하고 세포가 떨어지지 않게 주의하면서 정제수로 세척한다. 1 % SDS (sodium dodecyl sulfate) 100 ㎕를 넣어 염색된 색소를 녹이고 570 nm에서 흡 광도를 측정한다.After culturing the cells by treating a certain concentration of sample, the medium is carefully removed from the wells and washed with PBS. After removal, 50 μl of crystal violet solution (0.2% crystal violet / 2 ml ethanol, 98 ml purified water added) is added to the 96 well. Incubate for 10 minutes at room temperature and wash with purified water, taking care not to drop the cells. 100 μl of 1% SDS (sodium dodecyl sulfate) is added to dissolve the dye, and the absorbance is measured at 570 nm.
상기 실험 결과를 하기 표 8에 나타내었다.The experimental results are shown in Table 8 below.
[표 8]TABLE 8
상기 해양 심층수 추출물이란 상기 실험의 시료로서, 복숭아꽃을 해양 심층수로 추출한 후 물을 증발시킨 경도 30의 해양 심층수를 각 처리 농도별로 희석한 것이며, 이하의 실험예에서 사용한 시료도 이와 같이 희석한 시료를 사용하였다.The deep sea water extract is a sample of the above experiment, which is obtained by diluting the deep sea water having a hardness of 30 with evaporation of water after extracting peach blossoms into deep sea water, for each treatment concentration. Was used.
실험예 2. 인간 피부 섬유아세포 (Human skin fibroblast) 내의 콜라겐(collagen) 생성효과Experimental Example 2. Collagen production effect in human skin fibroblast
세포내 콜라겐 생성시험 (Collagen synthesis assay) 방법을 사용하였다.Intracellular Collagen Synthesis Assay was used.
사람 섬유아세포 (primary cell line) 또는 이와 유사한 섬유아세포 (CCD-986sk, HS68, Detroit 5116 등)를 배양 접시의 바닥에 접종한 후 페니실린 (100 IU/㎖), 스트렙토마이신 (100 μg/㎖), 10% FBS (fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지 혹은 동등 이상의 성장력을 갖는 배지를 넣고 37℃를 유지하여 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 본 시험의 시료 농도는 MTT 분석 또는 크리스탈 바이올렛 분석 등을 이용한 예비실험을 통하여 세포 독성이 나타나지 않고 효력을 나타내는 농도를 포함하여 3 개 이상의 농도 범위를 결정하였다. 시험물질을 녹이거나 희석시킬 때는 혈청이 함유되지 않은 DMEM 배지를 사용하였다. 다만 시험물질이 DMEM 배지에 녹지 않는 경우에는 에탄올 등 적당한 용매를 사용하여 녹였다.Human fibroblasts (primary cell line) or similar fibroblasts (CCD-986sk, HS68, Detroit 5116, etc.) were inoculated at the bottom of the culture dish and then penicillin (100 IU / ml), streptomycin (100 μg / ml), DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) medium containing 10% FBS (fetal bovine serum) or a medium having an equal or greater growth capacity was added thereto, and the culture was carried out in an incubator containing 5% carbon dioxide at 37 ° C. Sample concentrations of this test were determined by preliminary experiments using MTT assay or crystal violet assay to determine three or more concentration ranges, including those that showed no cytotoxicity and were effective. Serum-free DMEM medium was used to dissolve or dilute the test substance. However, when the test substance was not dissolved in DMEM medium, it was dissolved using a suitable solvent such as ethanol.
농도 설정 예비시험 (MTT 분석) 방법은 다음과 같다.The concentration setting preliminary test (MTT assay) method is as follows.
일정 농도의 시료를 넣어 세포를 배양한 다음 웰에서 배지의 10 %를 제거한 다음, 제거한 양 만큼의 MTT 용액 (0.5 % 3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5 diphenyl-2H-tetrazolium bromide)을 넣고, 4시간 동안 배양한다. 배양액을 제거한 다음 디메틸설폭사이드 (dimethylsulfoxide) 용액 300 ㎕씩을 첨가하고 10분간 흔들어 준 다음 ELISA 판독기 (ELISA reader)로 570 nm에서 흡광도를 측정한다.Incubate the cells with a certain concentration of sample, remove 10% of the medium from the wells, and then remove the amount of MTT solution (0.5% 3- (4,5-dimethyl thiazol-2-yl) -2,5 diphenyl-). 2H-tetrazolium bromide) was added and incubated for 4 hours. After removing the culture solution, add 300 µl of dimethylsulfoxide solution, shake for 10 minutes, and measure the absorbance at 570 nm with an ELISA reader.
콜라겐양 측정 방법은 다음과 같다.The collagen amount measurement method is as follows.
항체-PoD 콘쥬게이트 용액 (Antibody-PoD conjugate solution) 100 ㎕를 웰에 넣은 다음 1/5로 희석한 배양액 및 표준액 20 ㎕를 넣고 37℃에서 3시간 배양한다. 웰에서 배양액을 제거한 다음 인산염완충액 (PBS) 400 ㎕로 4회 씻는다. 발색시약 100 ㎕를 넣고 상온에서 15분간 배양하고 1 N 황산 100 ㎕을 넣은 다음 450 nm에서 ELISA 판독기로 측정한다. a) 표준액조제: 콜라겐표준품에 물을 넣어 녹여 각각 0, 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640ng/㎖가 되도록 희석한다. b) 시약: Procollagen type I peptide EIA kit (Takara Biomedical Co.) 사용.100 μl of the antibody-PoD conjugate solution is added to the wells, followed by diluting 1/5 of the culture solution and 20 μl of the standard solution, and incubating at 37 ° C. for 3 hours. Remove the culture from the wells and then wash 4 times with 400 μl of phosphate buffer (PBS). Add 100 μl of the coloring reagent, incubate for 15 minutes at room temperature, add 100 μl of 1 N sulfuric acid, and measure it with an ELISA reader at 450 nm. a) Standard solution preparation: Add water to the collagen standard and dilute to 0, 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640ng / ml respectively. b) Reagent: Use Procollagen type I peptide EIA kit (Takara Biomedical Co.).
상기 실험 결과를 하기 표 9에 나타내었다.The experimental results are shown in Table 9 below.
[표 9]TABLE 9
실험예 3. 3Experimental Example 3. 3 T3T3 -- L1L1 지방 세포 ( Fat cells ( adipocyteadipocyte ) 내의 지방생성 억제효과Inhibitory Effect on Adipogenesis
3T3-L1 섬유아세포 (fibroblast)는 10% FBS (fetal bovine serum), 4.5 g/ℓ 글루코오스, 2 mM 글루타민, 항생제가 들어간 DMEM 배지에서 배양을 하였다. 세포가 다 자란 다음에는 인슐린 (5 g/㎖), 75mM 덱사메타손 (dexamethasone), 0.5mM 이소부틸메틸크산틴 (isobutylmethylxanthine)이 첨가된 DMEM 배지에서 2일간 배양한 후 인슐린 (5 g/㎖)만이 첨가된 배지에서 3일간 더 배양을 하였다. 이후 실험에 이용될 때까지 3일 간격으로 DMEM/FBS 배지로 교환하였다. 분화된 세포들은 지방 방울 (lipid droplet)이 꽉 채워진 상태로 전체 세포 중 90% 이상의 지방 세포의 형태가 되었을 때 사용하였다. 각 24-웰에서 배양한 세포에 각각 1%, 0.5% 및 0.1% 농도로 희석된 시료를 처리하고 48시간 경과후 세포내 지방 방울을 10% 오일 레드 O (Oil red O)로 염색한 후 에탄올로 추출하여 540 nm에서 정량화하였다.3T3-L1 fibroblasts were cultured in DMEM medium containing 10% FBS (fetal bovine serum), 4.5 g / L glucose, 2 mM glutamine and antibiotics. After cell growth, incubate in DMEM medium containing insulin (5 g / mL), 75 mM dexamethasone (0.5 mM dexamethasone) and 0.5 mM isobutylmethylxanthine and add only insulin (5 g / mL). The culture was further incubated for 3 days. It was then exchanged with DMEM / FBS medium every three days until used for the experiment. Differentiated cells were used when the lipid droplets were in the form of more than 90% of the fat cells in the form of a tightly packed fat droplet. Cells cultured in each 24-well were treated with samples diluted at 1%, 0.5% and 0.1% concentrations, and after 48 hours, intracellular fat droplets were stained with 10% Oil red O and ethanol. Extracted and quantified at 540 nm.
상기 실험 결과를 하기 표 10에 나타내었다.The experimental results are shown in Table 10 below.
[표 10]TABLE 10
실험예 4. Experimental Example 4. RBLRBL -2-2 H3H3 mast cell내의 히스타민 억제효과 Histamine inhibitory effect in mast cell
헥소사미니다아제 (hexosaminidase) 정량 방법을 사용하였다.Hexosaminidase Quantitative methods were used.
알레르기를 일으키는 일련의 과정 중에서 탈과립 단계에 의해서 각종 화학적 전달 물질들이 유리된다. 이러한 탈과립을 측정할 수 있는 방법으로 과립에 저장되어 있다가 탈과립시 비만 세포로부터 히스타민과 함께 유리되는 헥소사미니다아제 억제 정도를 측정하는 것이다.During the series of allergic processes, various chemical delivery substances are released by the degranulation step. One way to measure this degranulation is to measure the degree of hexosaminidase inhibition stored in granules and released with histamine from mast cells during degranulation.
세포준비: EMEM-10 (minimum essential medium eagle)에 현탁시킨 RBL-2H3 비만세포 (5×105 cells/㎖)를 24 웰 플레이트에 각 웰당 400 ㎕씩 현탁하였다. 5㎕ IgE를 넣고 5% CO2 인큐베이터에서 하룻밤 방치하여 세포를 감작시켰다. 시라가니안 완충액 (Siraganian buffer: 119mM NaCl, 5mM KCl, 5.6 mM 글루코오스, 0.4mM MgCl2, 25mM PIPES, 40mM NaOH, 1mM CaCl2, 0.1% BSA, pH 7.2) 500㎕로 세정한 후 160㎕ 시라가니안 완충액을 가하여 37℃에서 10분간 프리-인큐베이션 (pre-incubation) 하였다. 시료를 넣고 37℃에서 20분간 배양 후 항원을 넣고, 37℃에서 10분간 배양하였다. 얼음 위에 10분간 방치하여 반응을 종결시키고, 상등액을 취하여 미세 원심분리기 (microcentrifuge)로 90초간 원심분리하였다. 96웰 플레이트에 37℃에서 예비 배양한 기질 (0.1M 시트르산염 완충액에 P-NAG를 녹여 1mM로 만들어 사용)을 넣은 후, 원심 분리한 세포 반응물의 상등액을 가하여 37℃에서 1시간 배양하였다. 0.1M Na2HCO3를 넣어 반응을 종결시키고 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 실험 결과를 하기 표 11에 나타내었다.Cell Preparation: RBL-2H3 mast cells (5 × 10 5 cells / ml) suspended in EMEM-10 (minimum essential medium eagle) were suspended in a 24-well plate at 400 μl per well. 5 μl IgE was added and left overnight in a 5% CO 2 incubator to sensitize the cells. 160 μl after washing with 500 μl of Shiraganian buffer (Siraganian buffer: 119 mM NaCl, 5 mM KCl, 5.6 mM glucose, 0.4 mM MgCl 2 , 25 mM PIPES, 40 mM NaOH, 1 mM CaCl 2 , 0.1% BSA, pH 7.2) Shiraganian buffer was added and pre-incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Samples were added and incubated at 37 ° C. for 20 minutes, then antigens were added and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. The reaction was terminated by standing on ice for 10 minutes, and the supernatant was taken and centrifuged for 90 seconds with a microcentrifuge. Substrate pre-incubated at 37 ° C. (dissolved P-NAG in 0.1 M citrate buffer and used to make 1 mM) was added to a 96 well plate, and the supernatant of the centrifuged cell reaction was added thereto, followed by incubation at 37 ° C. for 1 hour. 0.1 M Na 2 HCO 3 was added to terminate the reaction, and the absorbance was measured at 405 nm. The experimental results are shown in Table 11 below.
[표 11]TABLE 11
실험예 5. 항산화 효과 (Experimental Example 5. Antioxidant Effect ( DPPHDPPH , , NBTNBT ))
DPPH : 하이드록실 라디칼 (Hyroxyl radical)의 억제효과를 알아보기 위하여 1-디페닐-2-피크릴히드라질 (DPPH)용액을 80 ㎍/㎖ EtOH로 조제하고 이 용액 1㎖에 각 시료를 농도별 에탄올에 용해 시킨후 DPPH의 517nm에서 흡광도를 측정하였다.DPPH: To investigate the inhibitory effect of hydroxyl radicals, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) solution was prepared with 80 μg / ml EtOH, and each sample was concentrated in 1 ml of the solution. After dissolving in ethanol, the absorbance at 517 nm of DPPH was measured.
NBT : 수퍼옥사이드 음이온 (Superoxide anion)의 억제효과를 측정하기 위하여 300mM 인산염 완충액 (pH 7.8)에 트리톤 X-100 1.6㎖, EDTA 2.9mg, NBT (Nitro-blue-tetrazolium) 1mg, 하이포크산틴 (hypoxanthine) 5.4mg을 넣어 기질 용액을 만든 후 크산틴 옥시다아제 12㎕를 300Mm 인산염 완충액 (pH 7.8) 10㎖에 녹여 시료를 농도별로 처리하여 반응시킨 후 540nm에서 정량화하였다.NBT: 1.6ml of Triton X-100, 2.9mg of EDTA, 1mg of Nitro-blue-tetrazolium (NBT), hypoxanthine in 300mM phosphate buffer (pH 7.8) to measure the inhibitory effect of superoxide anion. After adding 5.4mg to form a substrate solution, 12µl of xanthine oxidase was dissolved in 10ml of 300Mm phosphate buffer (pH 7.8), and the samples were treated by concentration, and then quantified at 540nm.
상기 실험 결과를 하기 표 12에 나타내었다.The experimental results are shown in Table 12 below.
[표 12]TABLE 12
실험예 6. 피부 내의 수분 증가에 따른 전기전도도(Experimental Example 6. Electrical Conductivity with Increased Moisture in Skin ( TewameterTewameter ) 상승 효과Synergistic effect
경표피 수분손실 (Transepidermal Water Loss)은 증발계 (evaporimeter)인 수분 증발량 측정기 (Tewameter TM 210 (Courage + Khazaka, Koln, Germany)을 이 용하여 Pinnagoda 등 (1989)이 기술한 방법에 따라 측정하였다. 측정시의 실내 온도는 24-26℃, 상대 습도는 50-60%이었다.Transepidermal Water Loss was measured according to the method described by Pinnagoda et al. (1989) using a water evaporation meter (Tewameter TM 210 (Courage + Khazaka, Koln, Germany)) which is an evaporimeter. The room temperature was 24-26 ° C. and the relative humidity was 50-60%.
피검자는 모두 성인 10명 (여자 7명, 남자 3명) 이었으며, 결과를 하기 표 13에 나타내었다.The subjects were all 10 adults (7 women, 3 men), the results are shown in Table 13 below.
[표 13]TABLE 13
실험예 7. 에탄올 및 Experimental Example 7. Ethanol and 아세트알데하이드Acetaldehyde 효소활성 (쥐)과 혈중 알코올 농도억제 효과 Enzyme Activity (rat) and Blood Alcohol Concentration Effect
ADH 측정 방범: 효소원은 동결건조된 S9 랫트 간 균질액 (rat liver homogenate) (MOLTOX Co., USA)를 0.1% 소 혈청 알부민 (bovineserum albumin) 용액 8 ㎖에 녹여 0.45 ㎛ 시린지 필터 (syringe filter)로 여과한 후 사용하였다. ADH의 활성 측정은 Blandino의 방법 (Bostian. et al., 1978)을 변형하여 측정하였으며, 흡광도 340nm에서 NADH의 생성속도를 지표로 사용하였다. 반응액의 조성은 증류수 1.4 ㎖, 1.0 M 트리스-HCl 완충액 (pH 8.8) 0.75 ㎖, 20 mM NAD+ 0.3㎖, 에탄올 0.3 ㎖, 시료 0.1 ㎖의 혼합액과 효소원 0.15 ㎖를 큐벳 (cuvette)에 넣어 총 3 ㎖이 되도록 조절하여 30℃에서 5분간 프리인큐베이션 한 후, 5분간 340nm에서의 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때, 시료를 첨가하지 않은 것을 대조군으로 하였다. 시료의 ADH 활성은 대조군에 대한 상대 활성 (%)으로서 측정하였다.Security measures for ADH: The enzyme source was dissolved in 8 ml of 0.1% bovineserum albumin solution in lyophilized S9 rat liver homogenate (MOLTOX Co., USA) and a 0.45 µm syringe filter. It was used after filtration with. The activity of ADH was measured by modifying Blandino's method (Bostian. Et al., 1978), and the rate of NADH production at an absorbance of 340 nm was used as an index. The reaction mixture was mixed with 1.4 ml of distilled water, 0.75 ml of 1.0 M Tris-HCl buffer (pH 8.8), 0.3 ml of 20 mM NAD +, 0.3 ml of ethanol, 0.1 ml of sample and 0.15 ml of enzyme source in a cuvette. After adjusting to 3 ml and preincubating at 30 ° C. for 5 minutes, the change in absorbance at 340 nm was measured for 5 minutes. At this time, the sample was not added as a control. ADH activity of the samples was determined as relative activity (%) relative to the control.
ALDH의 활성 측정은 Bostian의 방법 (Bostian. et al., 1978)을 변형하여 측정하였으며, 흡광도 340 nm에서 NADH의 생성속도를 지표로 사용하였다. 반응액의 조성은 증류수 2.1 ㎖, 1.0 M 트리스-HCl 완추액 (pH 8.0) 0.3 ㎖, 20 mM NAD+ 0.1㎖, 1.0 M 아세트알데히드 0.1 ㎖, 3.0 M KCl 0.1 ㎖, 0.33 M 2-메르캅토에탄올 0.1 ㎖, 시료 0.1 ㎖의 혼합액과 효소원 0.1 ㎖를 큐벳에 넣어 총 3 ㎖이 되도록 조절하여 30℃에서 5분간 프리인큐베이션 한 후, 5분간 340 nm에서의 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때, 시료를 첨가하지 않은 것을 대조군으로 하였다. 시료의 ALDH 활성은 대조군 상대활성 (%)으로서 측정하였다.The activity of ALDH was measured by modifying Bostian's method (Bostian. Et al., 1978), and the rate of NADH production at the absorbance of 340 nm was used as an index. The composition of the reaction solution was 2.1 ml of distilled water, 0.3 ml of 1.0 M Tris-HCl extract (pH 8.0), 20 mM NAD + 0.1 ml, 0.1 ml of 1.0 M acetaldehyde, 0.1 ml of 3.0 M KCl, 0.33 M 2-mercaptoethanol 0.1 ㎖, 0.1 ml of the sample and 0.1 ml of enzyme source were put in a cuvette, adjusted to 3 ml in total, and preincubated at 30 ° C. for 5 minutes, and then the change in absorbance at 340 nm was measured for 5 minutes. At this time, the sample was not added as a control. The ALDH activity of the sample was measured as the control relative activity (%).
혈중 알코올 농도측정: 남녀 피검자 10명 (남자 8명, 여자 2명)에게 소주 3잔을 섭취시킨 후 각 농도별로 제조한 경도 30의 혼합 음료 100㎖를 마시고 2시간 이후에 혈중 알코올 측정기를 이용하여 혈중 알코올 농도를 측정하였다. ㅍ혈중 알코올 분해효과는 1-(실험군의 혈중알코올농도/대조군(혼합음료를 먹지 않은 경우) 혈중알코올농도) x 100이라는 식으로부터 산출하였다. Blood alcohol concentration measurement: 10 male and female subjects (8 males, 2 females) were ingested 3 glasses of soju, and then after drinking 100 ml of a mixed beverage of 30 hardness, each blood concentration was measured. Blood alcohol concentration was measured. The blood alcohol degrading effect was calculated from the formula 1- (experimental blood alcohol concentration / control group (when not mixed drink) blood alcohol concentration) x 100.
실험 결과를 하기 표 14에 나타내었다.The experimental results are shown in Table 14 below.
[표 14]TABLE 14
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의한 조성물은 돌복숭아꽃 추출물과 함께 해양 심층수를 함유하고 있어, 돌복숭아꽃 추출물 및 해양 심층수에 존재하는 풍부한 미네랄 성분들이 도포 및 섭취를 통하여 신체에 영양을 공급할 뿐 아니라 피부 상태도 향상시킬 수 있다.As described above, the composition according to the present invention contains deep sea water with peach blossom extract, and the plentiful peach flower extract and the rich mineral components present in the deep sea water provide nutrition to the body through application and intake. It can also improve skin condition.
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