KR20070046064A

KR20070046064A - 피부 손상 방지

Info

Publication number: KR20070046064A
Application number: KR1020077000130A
Authority: KR
Inventors: 폴 응힘; 세이시로 후지이
Original assignee: 더 제너럴 하스피탈 코포레이션
Priority date: 2004-06-10
Filing date: 2005-06-10
Publication date: 2007-05-02
Also published as: CN101001606A; WO2005123010A1; EP1761233A1; US20050276765A1

Abstract

본 발명은 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법에 관한 것으로서, 이 방법은 UVB-유도 주름이 있거나 또는 생성될 위험이 있는 피험자에게, ATR-매개 신호전달을 저해하는 약제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

피부 손상 방지, UVB-유도 주름 감소, ATR-매개 신호전달

Description

피부 손상 방지{PREVENTING SKIN DAMAGE}

자외선-B(UVB)에 노출되면 피부의 주름이 생성될 수 있다.

[발명의 개요]

ATR(DNA 복제 체크포인트에 관련된 단백질 키나제) 저해 및/또는 ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응(ATR-mediated replication checkpoint cascade)의 저해에 의해, 피부 손상, 예를 들면, UV-유도 피부 손상(예, 주름)을 감소시킬 수 있다. 특히, ATR의 저해에 의해, UVB-유도 주름을 감소시킬 수 있다.

따라서, 하나의 관점에서, 본 발명은 피험자를 치료하는 방법을 특징으로 한다. 본 발명의 방법은 (a)UVB-노출로 인해 피부의 광손상(예, 주름) 등의 피부 손상 위험이 있거나 피부가 손상된 피험자를 동정(identifying)하는 단계; 및 (b)상기 피험자에게 피험자의 ATR 신호전달을 조정(modulate)하는 약제(agent)를 투여하는 단계, 예를 들면, 피험자에게 ATR의 활성, 수준 또는 발현을 감소시키는 약제(예, 본 발명에 기재한 약제)를 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들면, 상기 피험자는 인간이다. 바람직하게는, 상기 약제는 피험자의 피부에, 예를 들면, 국소적으로 투여된다. 바람직한 태양에서는, UVB-유도 피부 주름이 방지 또는 감소된다.

바람직한 태양에서는, 피험자는 만성적으로 UVB 방사선에 노출되어왔거나, 노출되고 있거나, 또는 노출될 수 있다. UVB 방사선으로는 자연 태양광 또는 인공 UVB 방사선(예를 들면, 태닝용, 또는 건선, 아토피성 피부염, 또는 백반증 치료용 등의 광치료용의 UVB 태양등(sunlamp))을 들 수 있다. 상기 노출은 바람직하게는 주름을 유발하기에 충분한 시간과 양으로 된다. 예를 들면, 만성적인 노출은 UV 지수 3∼6, 또는 그 이상의 태양(sun)에, 소정 기간 동안, 적어도 10분씩, 적어도 3회, 더 바람직하게는 적어도 5회, 또는 적어도 10회의 노출일 수 있다. 상기 소정 기간은 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 12개월 또는 24개월간일 수 있으며, 예를 들면, 태양광 또는 인공 UVB 방사선 등의 UVB 방사선에 12개월간 누적하여 5시간 노출일 수 있다. 만성적인 UV-유도 주름이 생성될 위험이 있는 피험자는 UV 지수 3∼6 또는 그 이상의 태양에 적어도 10분간, 1년에 적어도 10회 노출되어 왔거나 또는 노출될 피험자이거나, 또는 일년에 누적하여 5시간 동안 UVB 방사선에 노출되어 왔거나 노출될 피험자일 수 있다. 바람직하게는, 상기 피험자는 적어도 3년 동안 1년에 적어도 20회 적어도 30분씩 UVB 방사선에 노출된다. 바람직하게는, 상기 피험자는 오전 11시와 오후 3시 사이에 태양에 노출되거나, 또는 여름철 동안 태양에 노출되거나, 또는 UV 지수가 극도로 높은 날에 태양에 노출된다. 장기간 UVB 유도 피부 손상(예, 주름)의 위험이 있는 피험자로는, 높은 고도에 사는 사람, 예를 들면, 적어도 해발 1000 피트에 살고 있는 사람; 적도 근처에 살고 있는 사람, 예를 들면, 적도로부터 1000마일 이내에 살고 있는 사람; 실내 태닝 영업소를 이용하는 사람, 예를 들면, 일년에 적어도 1회, 5회, 10회, 15회 또는 20회 태닝 영업 소를 이용하는 사람; 실외 스포츠 등의 실외 활동을 1년에 적어도 10, 20, 50, 80 또는 100회 참여하는 사람, 예를 들면, 조깅, 테니스 게임, 등산을 하거나, 스노우 스키, 워터 스키, 쾌적한 해변의 모래에 단순히 누워있거나 수영장에서 일광욕을 하는 사람; 및 UVB 광치료를 받고 있거나 받아온 사람을 들 수 있다. 바람직한 태양에서는 상기 피험자는 적어도 5세이다. 바람직하게는, 상기 피험자는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50이거나, 또는 그 이상의 나이이다.

바람직한 태양에서, 본 발명의 약제는 담체를 사용하여, 예를 들면, 레시틴 리포솜 또는 알킬포스포리피드 리포솜 등의 리포솜 담체를 통하여 투여된다. 하나의 태양에서, 본 발명의 약제는, 예를 들면, 수분 페이스트(moist paste), 로션, 겔, 고약, 크림, 또는 연고(예, 물을 포함하지만 완전히 액상은 아닌 조성물)로 제제화(formulate)된다. 예를 들면, 상기 약제는 15,000, 12,000, 또는 10,000 cP 미만의 점도를 가진 조성물로서 제제화된다. 또한, 로션은 하나 이상의 계면활성제에 의해 유화된 약제학적으로 허용가능한 오일상(oil phase)을 포함할 수 있다. 상기 약제는 얼굴, 가슴, 목, 손, 및 기타 신체 부위에 투여될 수 있다. 상기 치료는 약제를 1회 이상 투여, 예를 들면, 적어도 2회, 3회, 또는 4회 투여할 수 있다. 어떤 경우에는, 투여 부위에 피부암 또는 피부종양(예, 악성 또는 비악성 각화증 또는 상피내암종)이 없다. 또한, 상기 치료는, 예를 들면, 피험자가 평균 이상의 이러한 투여를 필요로 하는 형편에 있거나, 또는 극심한 태양 또는 기타 UVB의 노출이 빈번한 경우에는, 약제를 매일 투여하거나, 또는 하루에 여러번 투여하는 것을 포함할 수 있다.

하나의 태양에서, 본 발명의 방법은 상기 약제를, 2차 치료제, 예를 들면, 썬스크린, 태닝제, 항생제 또는 보습제 등의 피부에 대한 2차 치료제와 병용하여 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들면, 상기 약제를 병용하여 투여하는 단계는 상기 약제와, UVB 유도 피부 손상 등에 대한 피부 치료를 제공하는 2차 약제를 동시에 포함하는 제제(예, 국소 투여용)를 투여하는 단계를 포함한다. 어떤 실시형태에서는, 상기 제제는 실질적으로 카테킨이 없고, 예를 들면, 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate:EGCG))가 없거나 또는 EGCG를 6.5몰 또는 3몰 미만 포함한다. 어떤 태양에서, 상기 약제는 패치, 생체적합성 폴리머, 마이크로 입자, 또는 메쉬(mesh) 등의 제어방출 장치와 조합하여 피험자에게 투여된다. 상기 장치는 약제의 분해를 감소시키고 약제의 방출을 제어할 수 있다.

어떤 태양에서, 본 발명의 방법은 피험자의 주름을 평가하는 단계를 포함한다. 상기 평가는 약제를 투여하기 전, 투여하는 동안, 및/또는 투여한 후에 수행할 수 있다. 예를 들면, 상기 평가는 투여 전 및/또는 후 적어도 4시간, 8시간, 12시간, 1일, 2일, 4일, 7일, 14일, 또는 그 이상의 날에 수행할 수 있다. 주름 평가는 정성적 또는 정량적으로 할 수 있다. 어느 경우이건, 상기 평가는 통상 신체의 처리 부위의 주름과 참조기준(reference)을 비교하는 단계를 포함한다. 상기 참조기준은, 예를 들면, 피험자 신체의 미처리 부위, UV 노출 전 및/또는 치료 전에 기록된 신체의 처리 부위, 상기 처리 부위와 동일한 수준의 UV에 노출되지 않은 피험자의 신체 부위, 또는 연령 대조군(age-matched control) 피험자의 피부일 수 있다.

바람직한 태양에서, 약제의 투여는, UVB 광에 노출되기 전(예, 태양에 노출되기 전); UVB 유도 피부 손상(예, 주름)이 인지되거나 진단되었을 때; 주름 치료가 시작됨과 동시에 또는 그의 영향을 미치기 시작함과 동시에; 또는 통상, 피부 건강을 유지하기 위해 필요할 때, 수행할 수 있다. 바람직한 태양에서, 상기 약제는 만성적으로 투여된다. 바람직한 태양에서, 상기 약제는 적어도 주 1회, 바람직하게는 주 2회, 3회, 4회, 5회, 또는 적어도 2주 동안 매일, 바람직하게는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6개월, 1년, 2년 이상 동안 매일 투여된다. 예를 들면, 상기 약제는 3∼12주에 걸쳐 주기적으로 투여되며, 예를 들면, 여름 내내 투여된다. 바람직한 태양에서, 상기 약제는 UVB 방사선에 노출되는 피험자의 얼굴, 목, 가슴, 귀, 손, 두피의 대머리부위, 또는 기타 피부 부위 중 하나 이상에 투여되어, 주름을 감소 또는 방지한다.

상기 약제가 투여되는 기간, 또는 피험자에 임상적으로 유효한 수준으로 유지되는 기간은 단기간(예, 1일, 2일, 1주일), 또는 장기간(예, 6개월 이상 또는 1년 이상)일 수 있다.

주름에 대한 치료를 필요로 하는 피험자의 동정은, 예를 들면, 피험자, 건강 관리자(health care provider), 주름치료 시술자, 또는 또 다른 관계자(party)에 의해 수행될 수 있다. 상기 약제는, 예를 들면, 피험자, 건강 관리자, 주름치료 시술자, 또는 또 다른 관계자에 의해 투여될 수 있다. 마찬가지로, 주름에 대한 영향의 평가는, 예를 들면, 피험자, 건강 관리자, 주름치료 시술자, 또는 또 다른 관계자에 의해 수행될 수 있다.

ATR 신호전달을 감소시켜 UVB-유도 주름을 감소시키는 약제는, 예를 들면, ATR-결합 단백질, 예를 들면, 결합하여 ATR 활성을 저해하거나, 또는 결합 파트너(예, ATRIP)와의 ATR의 상호작용하는 능력을 저해하는 가용성 ATR-결합 단백질; ATR에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들면, 결합 파트너에 결합하는 ATR의 능력을 방해하는 항체; ATR에 결합하지만 ATR 신호전달을 방해하는 변이된 불활성 ATR 또는 그들의 단편; 세포성 ATR 핵산 서열(예, mRNA)에 결합할 수 있고, 단백질의 발현을 저해할 수 있는 ATR 핵산 분자(예, 안티센스, siRNA 분자 또는 리보자임); ATR 유전자의 발현을 감소시키는 약제, 예를 들면, ATR의 프로모터에 결합하는 소분자; 또는 미정제 또는 반정제된 추출물, 예를 들면, 식물 추출물 등의 식물성 추출물, 또는 조류(algal) 추출물일 수 있다. 또 다른 바람직한 태양에서, ATR은 내인성 ATR 유전자의 발현 수준을 감소시킴에 의해, 예를 들면, ATR 유전자의 전사를 감소시킴에 의해 저해된다. 바람직한 태양에서, ATR 유전자의 전사는, 예를 들면, 전사 억제자(repressor)에 대한 DNA 결합 부위 등의 네거티브 조절 서열의 부가에 의해, 또는 인핸서(enhancer)나 전사 활성인자의 DNA 결합 부위 등의 포지티브 조절 서열의 제거에 의해, 내인성 ATR 유전자의 조절 서열을 변경함으로써 감소시킬 수 있다. 또 다른 바람직한 태양에서, ATR에 결합하는 항체는 단일항원특이적 항체(monospecific antibody), 예를 들면, 인간화 항체, 키메라 항체 또는 인간 단일클론 항체 등의 단일클론 항체이다.

바람직한 태양에서, ATR 신호전달(예, ATR 활성, 발현, 또는 수준)을 감소시키는 약제는 카페인 또는 테오필린(theophylline) 또는 테오브롬(theobromine) 등 의 카페인 이외의 크산틴 등의 크산틴, 또는 기타 메틸크산틴 또는 디메틸크산틴이다. 카페인이 바람직한 약제이기는 하지만, 카페인 이외에 ATR 신호전달을 감소시키는 어떠한 적합한 약제(예, 크산틴 이외의 약제)도 사용할 수 있다. 바람직한 태양에서는, 카페인(또는 기타 크산틴)을 14% 미만, 바람직하게는 12% 미만, 더욱 바람직하게는 10%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1.5%, 1%, 0.5% 미만, 또는 그 사이의 범위(예, 7.5%∼12%, 7.5%∼10%, 0.5%∼7%, 0.01%∼0.5%, 또는 10%∼14%를 포함함)의 농도로 함유하는 조성물(예, 화장료)이 투여된다. 어떤 태양에서는, 카페인을 0.05∼0.5%, 0.5∼8%, 바람직하게는 0.5∼6%, 더 바람직하게는 0.5∼5%의 농도로 함유하는 화장료가 투여된다. ATR 신호전달을 감소시키는 기타 약제로는 펜톡시필린(pentoxyfylline) 등의 ATR 저해제를 들 수 있다. 상기 조성물은 UV 필터를 포함하거나 또는 배제할 수 있다. 상기 조성물은 사포게닌(sapogenin)을 포함하거나, 또는 사포게닌을 배제(예, 실질적으로 사포게닌을 미포함)할 수 있다.

본 발명의 방법은 예방적으로 (주름이 두드러지기 전에) 사용할 수 있으며, 또는 피험자의 주름이 추가로 형성되는 것을 방지하거나 주름의 출현을 감소시키기 위해서 사용할 수 있다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 UVB-유도 주름을 조정(예, 감소)하는 약제를 동정하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 ATR 및/또는 ATR-매개 신호전달을 조정(예, 감소)하는 약제(예, ATR 또는 ATR 결합 파트너(예, ARTIP(ATR-interacting protein), 또는 CHK1 등의 하류방향 ATR 작동자(downstream ATR effector)의 발현, 활성 또는 수준을 감소시키는 약제, 또는 UV에 의해 손상된 DNA 를 감소시키는 약제)를 동정하는 단계를 포함한다. 어떤 경우에, 상기 약제는 ATR과 UV에 의해 손상된 DNA의 상호작용을 조정하며, 예를 들면, UV에 의해 손상된 DNA에 대한 ATR의 친화성을 감소시킴에 의해 상기 상호작용을 저해한다. 예를 들면, 상기 약제는 적어도 약 25, 50, 75, 80, 또는 90%까지 상기 활성(또는 수준)을 감소시킨다.

본 발명의 방법은 ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분의 감소된 발현, 활성 또는 수준과, 주름을 방지 또는 감소시키는 약제의 능력을 상호관련시키는 단계, 예를 들면, 상기 약제를 주름 방지 또는 감소 약제로서 동정하는 단계(예, 상기 동정된 약제 또는 그 용도에 대한, 인쇄물 또는 컴퓨터 판독가능 매체, 예를 들면, 홍보용, 마케팅용 또는 교육용 인쇄물 또는 컴퓨터 판독가능 매체를 제공하는 단계)를 포함할 수 있다. 상호관련시키는 단계는 ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분의 발현, 활성 또는 수준을 감소시키는 시험 약제를, 주름을 방지, 감소 또는 치료할 수 있는 시험 약제로서 동정하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 상호관련시키는 단계는 기록(예를 들면, 실험실 기록이나 데이터세트 또는 이메일 등의 프린트 또는 컴퓨터 판독가능 기록)을 생성하거나 제공하는 단계, 및 ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분의 발현, 활성 또는 수준을 감소시키는 시험 약제를 주름을 방지, 감소 또는 치료할 있는 약제로서 동정하는 단계를 포함할 수 있다. 하나의 태양에서, 상기 방법은 약제의 영향에 대한 값과 피부 손상을 감소시키는 능력을 상호관련시키는 단계(예, 약제의 영향에 대한 값과 피부 손상을 감소시키는 능력을 상호관련시키는 데이터세트를 생성하는 단계)를 포함한 다. 상기 값은, 예를 들면, 바람직하게는 스튜던트 T-검정(Student's T test)을 이용하여, 통계학적으로 유의할 수 있다. 상기 기록 또는 데이터세트는 특이적 시험 약제 식별자, 날짜, 방법의 조작자, 또는 시험 약제의 소스, 구조, 정제 방법 또는 생물학적 활성에 대한 정보 등의 기타 정보를 포함할 수 있다. 상기 기록 또는 그 기록으로부터 유래한 정보는, 예를 들면, 시험 약제를 약제학적 또는 치료학적 용도의 화합물 또는 후보 약제(예, 선도(lead) 화합물)로서 동정하기 위해 사용할 수 있다. 상기 동정된 약제는 주름을 치료 또는 감소시키기 위한 약제 또는 잠재적인 약제로서 동정할 수 있다. 이러한 방법에 의해 동정된 약제(예, 화합물)는, 예를 들면, 주름 치료(또는 치료제 개발, 예, 화장품 치료제)에 사용될 수 있다.

하나의 태양에서, 본 발명의 방법은 피부에 대한 시험 약제의 영향을 평가(예, 측정)하는 단계, 예를 들면, 주름과 상호관련된 파라미터(예, 주름의 존재, 정도, 또는 종류)를 평가하는 단계; 및 피부에 대한 손상을 방지 또는 감소시키는(예, 피부의 주름을 방지 또는 감소시키는) 시험 약제를 선별하는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 피부에 대한 시험 약제의 영향을 평가하는 단계는 조직 또는 피험자에게 시험 약제를, 예를 들면 국소적으로, 투여하여, 주름과 상호관련된 파라미터(예, 조직 또는 피험자의 주름의 존재, 정도, 또는 종류)를 참고기준 값(예, 대조군 또는 기준선의 값, 예를 들면, 별도로 처리된(예, 약제가 투여되지 않은) 조직 또는 피험자의 동일 파라미터에 대한 값)과 비교하는 단계를 포함한다. 피부에 대한 약제의 영향은 주름 형성을 유발하는 약제 또는 치료 등의 피부 손상원 (예, UVB 방사선)의 부재 시 또는 존재 시에 평가될 수 있다. 어떤 태양에서는, 상기 평가는 상기 평가 값(예, 주름의 존재, 정도, 또는 종류에 대한 값)을 데이터베이스 또는 기타 기록에 입력하는 단계를 포함한다.

하나의 태양에서, 본 발명의 약제는 ATR과 상호작용(예, 결합)하는 시험 약제의 능력을 평가함에 의해 동정된다. 또 다른 태양에서, 본 발명의 약제는 ATR 조절 영역(예, 프로모터)과 상호작용하는 시험 약제의 영향을 평가함에 의해 동정된다. 또 다른 태양에서, 본 발명의 약제는 피부 세포(예, 케라티노사이트)에서의 ATR 생성에 대한 시험 약제의 영향을 평가함에 의해 동정된다. 또 다른 태양에서, 본 발명의 약제는 전체 동물 모델(예, ATR 과다발현 동물 등의 ATR 유전자도입 동물의 피부)에서의 ATR 신호전달을 조정하는 시험 약제의 능력을 평가(예, 양적으로 또는 질적으로 평가)함에 의해 동정된다.

상기 시험 약제에 제한은 없으며, 예를 들면, 핵산(예, 안티센스, 리보자임), 폴리펩티드(예, 항체 또는 그들의 항원결합 단편), 펩티드 단편, 펩티도미메틱(peptidomimetic), 또는 소분자(예, 분자량이 2000 달톤 미만인 유기 소분자)일 수 있다. 또 다른 바람직한 태양에서, 상기 시험 약제는 조합 라이브러리(combinatorial library), 예를 들면, 펩티드 또는 유기 조합 라이브러리, 또는 천연물 라이브러리의 멤버이다. 바람직한 태양에서는, 복수의 시험 약제(예, 라이브러리 멤버)가 시험된다. 바람직하게는, 복수의 라이브러리의 시험 약제는 구조적 또는 기능적 특징을 공유한다. 또한, 상기 시험 약제는 조추출물(crude extract) 또는 반정제된(semi-purified) 추출물, 예를 들면, 식물 추출물 등의 식 물성 추출물, 또는 조류 추출물일 수도 있다.

하나의 태양에서, 본 발명의 방법은 2개의 평가 단계를 포함하며, 예를 들면, 상기 방법은 제1 시스템(예, 무세포, 세포계(cell-based) 조직 시스템 또는 동물 모델)에서 시험 약제를 평가하는 제1 단계와, 제2 시스템(예, 2차 세포 또는 조직 시스템) 또는 인간이 아닌 동물에서 시험 약제를 평가하는 제2 단계를 포함한다. 세포계 시스템으로는 ATR 발현 세포, 예를 들면, ATR 또는 ATR 유사 단백질을 발현하는 효모, 포유류, 설치류, 또는 인간 세포를 들 수 있다. 예를 들면, 상기 세포는 인간 ATR 또는 그 기능적 단편을 발현하도록 조작된 인간이 아닌 세포일 수 있다. 하나의 태양에서, 상기 평가 단계 중에서 하나는 피험자의 피부 또는 피부 외식편(explant)에 대한 약제의 영향을 평가(예, 바람직하게는 UVB에 노출되기 전과 후에, 피부의 주름의 존재, 정도, 또는 종류를 평가)하는 단계를 포함한다. 상기 피험자는 실험 동물 또는 인간일 수 있다. 하나의 태양에서, 상기 제1 평가 단계는 리포터 유전자 등의 이종 서열에 결합(link)되어 있는 ATR 프로모터에 대한 시험 약제의 영향을 시험하는 단계를 포함하며, 상기 제2 평가 단계는 시험 약제를 시스템(예, 세포계 또는 동물 시스템)에 투여하여 피부 손상 및/또는 ATR 생성에 대한 약제의 영향을 평가하는 단계를 포함한다. 어떤 태양에서는, 상기 방법은 동일한 종류의 시스템에 2개의 평가 단계를 포함한다. 예를 들면, 상기 약제를, 동일 또는 상이한 인간이 아닌 동물에서의 제1 평가 단계 후에, 인간이 아닌 동물에서 재평가한다. 상기 두 평가 단계는 일(日), 주, 개월 또는 년 등의 시간의 길이에 의해 분리할 수 있다.

바람직한 태양에서, 상기 동정(identification) 단계는

(a) 그 게놈이, 리포터 폴리펩티드(예, 비색(예, LacZ), 발광측정(예, 루시퍼라제), 또는 형광 검출가능 리포터 폴리펩티드(예, GFP, EGFP, BFP, REP))를 코딩하는 핵산 서열 등의 이종 서열에 작동적으로 결합된, ATR 유전자의 조절 서열(예, 프로모터)을 포함하는 외인성(exogeneous) 핵산(참조, 예를 들면, GenBank LocusID No.545; GenBank 식별기호 NM_001184, 및 NCBI의 게놈 해석(annotation)의 build 34 version 3의 염색체 III contig NT_005612; 상기 조절 영역은 NT_005612 contig의 뉴클레오티드 48663233 또는 48792805의 500 또는 1000 염기쌍내인 영역(예, 상보서열(48663233..48792805)의 상류 또는 하류 영역)을 포함할 수 있음)을 포함하는 세포, 조직 또는 인간이 아닌 동물에게 약제를 제공하는 단계;

(b) 세포, 조직 또는 인간이 아닌 동물의 상기 리포터 폴리펩티드의 발현을 조정하는 시험 약제의 능력을 평가하는 단계; 및

(c) 상기 리포터 폴리펩티드의 발현을 조정(예, 감소)하는 시험 약제를 UVB-유도 주름을 조정(예, 감소)하는 약제로서 선별하는 단계

를 포함한다.

하나의 태양에서, 상기 동물은 실험 설치류이다. 상기 동물은 야생형 또는 유전자도입 실험 동물, 예를 들면, ATR 유전자도입 설치류(예, 본 명세서에 기재된 ATR 유전자도입 마우스)일 수 있다. 또한, 상기 피험자는 인간이 아닌 포유류 또는 인간일 수 있다.

바람직한 태양에서, 상기 평가 단계는 피험자에 약제를 투여하여 피부손상 (예, UVB에 급성 노출(acute exposure)에 의해 유발되는 피부손상)을 평가하는 단계를 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 세포 또는 조직은 피부 세포(예, 케라티노사이트); 또는 조직(예, 피부 외식편)이다. 또 다른 태양에서, 피부 세포(예를 들면, 케라티노사이트) 등의 세포, 또는 피부 외식편 등의 조직은 유전자도입 동물로부터 유래한다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 UVB-유도 주름을 감소시키기 위해 ATR의 발현, 활성, 또는 수준을 감소시키는, 본 명세서에 기재한 약제(예, 본 명세서에 기재한 스크리닝 방법에 의해 동정된 약제) 등의 약제를 함유하는 조성물을 특징으로 한다. 바람직한 태양에서, 상기 조성물은, 예를 들면, 국소 투여용으로 제제화된 화장료(cosmetic composition)이다. 바람직한 태양에서는, 상기 조성물은 향료, 방부제, 또는 보습제 또는 썬스크린(예, 옥틸 메톡시신나메이트, 아미노벤조산, 옥시벤존, 패디메이트 O, 호모살레이트, 또는 이산화티탄) 등의 기타 화장품 원료를 함유한다. 상기 조성물은 샴푸, 오일, 크림, 로션, 비누, 겔, 또는 기타 화장품 제제에 제공될 수 있다. 또한, 바람직한 태양에서, 상기 조성물은 향료 또는 보습제 등의 화장품 원료를 함유한다. 상기 조성물은 레티놀 등을 포함한 생물학적으로 활성이 있는 약제 등의 기타 활성 약제를 함유할 수 있다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 피험자의 피부 손상을 조정하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 ATR 신호전달의 구성성분의 발현, 활성 또는 수준에 영향을 미치는 약제(예, 본 명세서에 기재된 스크리닝 방법에 의해 동정된 약제 등의 본 명세서에 기재된 약제)를 함유하는 조성물을 피험자에게 공급하는 단계, 및 피험자 에게 급성 UVB-유도 주름에 대한 적용 지침서를 공급하는 단계를 포함한다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 조성물(예, ATR 신호전달의 구성성분의 발현, 활성, 또는 수준에 영향을 미치는 약제를 함유하는 조성물); 및 사용 지침서(예, 주름 등의 UVB-유도 피부 손상에 대한 치료를 필요로 하는 신체 부위에 상기 조성물을 적용하기 위한 지침서)를 포함하는, 피험자의 피부 손상을 조정하는 키트를 특징으로 한다. 바람직한 태양에서, 상기 조성물은 향료 또는 보습제 등의 화장품 원료도 함유한다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 피험자의 피부에서의 혈관신생(angiogenesis)을 조정하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 혈관신생의 조정이 필요한 부위에 본 명세서에 기재된 약제를 적용하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 피험자의 피부를 평가하여 그 부위를 혈관신생의 조정이 필요한 부위로서 동정 또는 특성화하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들면, 흑색종 또는 잠재 흑색종 부위에서, 혈관신생을 감소시키기 위해 유용할 수 있다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 조성물(예, 화장료)을 제공하는 방법을 특징으로 한다. 상기 조성물은 주름을 치료하기 위한 조성물일 수 있으며, ATR 신호전달의 구성성분의 발현, 활성, 또는 수준에 영향을 미치는 약제를 포함할 수 있다. 상기 방법은 (예, 생성 또는 질 조절 방법의 일부로서) 상기 조성물의 제제를 샘플링하는 단계, 및 시험관내(in vitro) 또는 세포계 측정법 등을 사용하여 ATR 신호전달의 구성성분의 발현, 활성, 또는 수준을 조정(예, 저해)하는 시료의 능력을 평가하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 약제의 "유효량"은 피험자에게 투여시, 피험자의 UV-유도 주름을 감소시키는 조성물의 양이다. 피험자에게 투여되는 유효량은 통상 나이, 성별, 표면적, 몸무게, 및 피부 상태를 포함한 각종 인자에 의거한다. 체표면적은 환자의 키와 몸무게로부터 대략 결정할 수 있다(참조, 예를 들면, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardley, New York, 1970, 537). 유효 투여량은, 당업자에게 인지된 바와 같이, 투여 경로, 부형제(excipient)의 사용, 및 기타 피부 손상 조정 화합물의 사용 등의 기타 치료와의 병용 가능성에 따라 달라진다.

본 명세서에 사용되는, "ATR 신호전달을 조정하는 약제"는 Casper, Nghiem, et al(2002) Cell 111(6):779-89에 기재된 바와 같은 염색체 취약부위 측정법, 또는 Nghiem, et al(2001) Proc Natl Acad Sci USA. 98(16):9092-7에 기재된 바와 같은 미성숙 염색질 응축 측정법을 사용하여, 밀리몰 이하의 농도로 세포 배양액에 존재하는 경우, ATR 신호전달 활성의 적어도 10% 변화를 일으키는 약제이다.

본 발명의 하나 이상의 태양의 상세한 설명은 하기에 첨부한 도면 및 상세한 설명에서 구체적으로 설명한다. 본 발명의 기타 특징, 목적, 및 이점은 발명의 상세한 설명 및 도면, 및 청구항으로부터 명백해질 것이다.

ATR(ATM-Rad3-related)은 포스포이노시티드 3-키나제-관련 키나제(PIK) 유전자 상과(superfamily)의 단백질 키나제이다. ATR은 세포주기 체크포인트 활성화에 관여하는 근접 DNA 손상-신호전달 키나제(proximal DNA damage-signaling kinase)로서 기능한다. 특히, ATR은 DNA 복제 체크포인트에 필요하며, 미복제 DNA 존재 시 유사분열을 지연시킨다. 또한, ATR은 DNA 복제가 일시적으로 저해되는 경우 복제 시작부(replication fork) 붕괴 및 DNA 가닥 절단을 방지하기 위해서 필요하다. 그 결정적인 합성기(S기) 기능에 따라, ATR은 필수 유전자이다.

ATR은 각종 DNA 손상제(예, UV 노출)에 의해 활성화될 수 있다. UV 손상(UV damage)을 수복하는 동안 생성되는 ssDNA 손상(lesion)은 ATR 의존적 경로를 활성화시키는데 충분하지 않다. ATR 활성화는, UV 방사선에 응답하여 ATR-매개 체크포인트 연쇄반응을 유발하기 위해 복제 스트레스가 요구됨을 나타내는 복제 세포에서만 관찰된다(Ward et al., 2004, J. Biol. Chem, 279:9677-9680).

ATR은 종양 억제자(tumor suppressor)라고 여겨져 왔으며, 어떤 인간 암에서 변이되어 발견되었다. 카페인은 ATR 활성화를 저해할 수 있다.

UVB 방사선 노출

UVB 방사선의 주요근원은 자연 태양광이다. UVB선의 강도는 하루 중 시간, 년 중 시간, 하늘에서의 태양의 위치, 고도 및 적도로부터의 거리에 따라서 다르다. 이들 방사선은, 비록 그들이 겨울철 동안에도 항상 존재한다고 해도, 여름철 정오동안 가장 강하다. 해수면 이상의 거리 및 적도로부터의 거리도 중요하게 고려된다. 고도가 높을수록 UVB선의 강도가 더 크다. 따라서, 등산가, 스키어, 및 기타 높은 고도에 살고 있는 사람들은 장기간 UVB 손상 위험에 처해 있다. 또한, 적도에 더 근접한 사람이 더 강한 UV 방사선 하에 있고 장기간 UVB 손상 위험이 더 높다.

눈, 물, 및 모래는 태양광을 반사하여, 피부에 도달하는 UVB 방사선의 양을 확대시킨다. 태양을 가리는 구름이 있을 때조차도, 장기간 노출시 UVB 수준은 주름 등의 광노화를 일으키기에 여전히 충분하게 높다.

UV 지수(미국 환경보호청에 의해 개발됨)는 소정의 날에 태양의 UV선의 강도를 나타낸다. 이것은 4개의 카테고리로 나뉜다 - 보통(UV 지수가 3 미만임), 높음(UV 지수가 3∼6임), 매우 높음(UV 지수가 6∼10임), 및 극도(UV 지수가 10보다 높음). 보통 UV 지수(moderate UV index)는 피부를 태우는데 한 시간 이상이 걸림을 의미하며; 극도의 수준은 15분 미만이 걸림을 의미한다. 상기 지수는 종종 기상 리포트에도 포함된다. 임상적으로, UVB 노출은 MED로 측정된다. 1 MED는 민감성 피부에서 선번(sunburn)을 생성하는데 필요한 UVB의 양이다. UVB 노출 효과는 축적되기 때문에, 장기간 또는 만성적인 UVB 유도 주름은, 급성 노출시, 홍반 또는 부종 또는 버닝(burning)을 일으킬 수 있는 수준 이하(예, 1 MED 이하, 0.5 MED 이하, 또는 그 이하)의 UVB 수준에 장기간 노출의 결과로서 발생할 수 있다. 예를 들면, 피험자가 만성적으로 태양에 노출되는 경우는, 심지어 피험자가 낮은 또는 보통 UV 지수의 날들에 노출되는 경우라고 해도, 장기간 UVB-유도 주름이 생길 위험에 처해진다.

주름

주름은 많은 원인에 의해 생길 수 있다. 주름은, 특히, 피부의 자연 노화 과정, 흡연, 및 UV 방사선에 노출(예, 만성적인 태양 노출)에 의해서 생길 수 있다. 주름은 조직학적 수준에서의 특이적인 구조적 변화가 없이, 피부 표면에서의 형상(configuration)의 변화이다. 통상, 주름은 Kligman et al.(1985) Br J Derm 113:37-42에 기재된 바와 같이 분류되며, 본 명세서에서는 참고로 기재한다. Kligman은 주름을 3개의 클래스로 분류하였다: 선상주름(linear wrinkle), 도형주름(glypic wrinkle), 및 잔주름(crinkle). 선상주름은 직선이며, 통상 얼굴 피부에서 발견되며, 자연 노화 또는 자외광 노출에 의해 생길 수 있다. 도형주름은 외견상 삼각형 또는 직사각형 주름으로 형성되고, 태양광에 노출되는 얼굴, 손, 및 목에서 발견되며, 자외광 노출 또는 일사성 피부염에 의해 악화된다. 잔주름은 얇고, 늘어진 피부상의 주름진 주름이며, 피부상의 어느 곳에서나 발견되지만, 통상 손등 및 눈꺼풀 주변에서 발견된다.

선상주름은 (a)일반주름(regular wrinkle)과 (b)미세주름(fine wrinkle)으로 더 분류할 수 있다. 일반주름은 길고, 깊고, 선명하며, 또한 까치발이라고도 불린다. 미세주름은 얇고 희미하다. 일반주름은 적어도 약 155 마이크론(0∼32Hz), 바람직하게는 약 160∼250 마이크론의 폭을 갖는다. 미세주름은, 2차원 푸리에 변환(2-dimensional Fourier transformation)에 의해 3차원 형상 데이터를 주파수 영역 데이터로 변환함에 의해 얻어진 파워 스펙트럼으로 계산했을 때, 약 154 마이크론 미만, 바람직하게는 약 40∼154 마이크론(32∼126Hz)의 폭을 갖는다(특히, Takasu et al.(1996) J Soc Cosmet Chem Japan 29:394-405; 및 1995년 5월 2일에 공개된 일본 특개평 07-113623호 공보에 기재된 것과 같은, the Shiseido Wrinkle Analyzer 3D Pro system 등을 사용함).

피험자의 UV-유도 주름을 방지 또는 치료 또는 감소시키기 위해 본 명세서에 개시한 방법은 ATR 및/또는 ATR-매개 체크포인트 신호전달을 저해하는 약제를 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 대표적인 치료 방법은 주름 또는 주름 잠재 부위를 찾는(locating) 단계와 본 명세서에 기재된 조성물을 적용하는 단계를 포함할 수 있다.

스크리닝 방법

약제가 ATR 유전자 발현, 활성 또는 수준 등의 ATR 신호전달을 조정할 수 있는지 여부를 평가하기 위한 다수의 방법이 존재한다. 하나의 태양에서는, ATR 유전자 프로모터로부터의 발현을, 예를 들면, 영구적으로 또는 일시적으로, 조정(예, 감소)하는 시험 약제의 능력은 일상적인 리포터 전사 측정법(예, LacZ 또는 GFP 또는 루시퍼라제)에 의해 평가할 수 있다. 예를 들면, 그 게놈이 ATR 프로모터에 작동적으로 결합된 리포터 유전자를 포함하는 세포 또는 유전자도입 동물을, 시험 약제와 접촉시킬 수 있으며, 리포터의 활성을 증가 또는 감소시키는 시험 약제의 능력은 UVB 유도 주름을 조정하는 그 약제의 능력의 지표이다. 또 다른 태양에서는, ATR 유전자 발현, ATR 활성 또는 수준을 조정하는 시험 약제의 능력은 본 명세서에 기재한 유전자도입 동물 등의 유전자도입 동물을 이용하여 평가한다.

또한, ATR 유전자 발현 또는 ATR 활성 또는 수준에 대한 시험 약제의 영향은 세포, 세포 용해물, 또는 피험자, 바람직하게는 인간이 아닌 실험 포유류, 및 더 바람직하게는 설치류(예, 래트, 마우스, 또는 토끼), 또는 그들의 외식편(예, 피부)을 이용하여 평가할 수 있다. ATR 유전자 발현을 평가하는 방법은 노던 분석, 리보뉴클레아제 보호 측정법, 역전사-중합효소연쇄반응(RT-PCR), 또는 RNA 제자리 하이브리다이제이션(RNA in situ hybridization)(참조, 예, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual(3^rd ed. 2001)). ATR 수준은 웨스턴 분석, 면역측정법, 또는 제자리 하이브리다이제이션 등에 의해 모니터링할 수 있다. 변경된 프로모터 결합 및/또는 전사 활성 등의 ATR 활성은 전기영동 이동도 시프트 측정법(electrophoretic mobility shift assay), DNA 발자국법(DNA footprinting) 또는 리포터 유전자 측정법 등에 의해 측정할 수 있다. 바람직하게는, ATR 유전자 발현 또는 ATR 활성 또는 수준에 대한 시험 약제의 영향은 피험자의 피부 손상에서의 변화로서 관찰된다. 더 바람직하게는, ATR 유전자 발현 또는 ATR 활성 또는 수준에 대한 시험 약제의 영향은, 변경된 ATR 신호전달을 가진, 유전자도입 세포 또는 인간이 아닌 동물, 또는 그들로부터 유래한 외식편 또는 세포에 대하여, 야생형 세포 또는 인간이 아닌 동물, 또는 그들로부터 유래한 외식편 또는 세포와 비교하여 평가한다.

상기 시험 약제는, LacZ에 융합된 ATR 유전자 프로모터를 포함하는 형질전환유전자(transgene)를 발현하는 세포, 세포 추출물, 외식편 또는 피험자에, 투여될 수 있다. ATR 유전자 프로모터 또는 ATR 유전자 프로모터로부터의 전사를 조절하는 인자에 대한 시험 약제의 영향의 결과로서, 형질전환유전자의 증강 또는 저해(예, LacZ 또는 GFP 등의 리포터의 전사)는 색깔의 변화로서 쉽게 관찰할 수 있다. 리포터 전사 수준, 및 그에 따른 ATR 유전자 프로모터 활성은 노던 분석, 리보뉴클레아제 보호 측정법, 역전사-중합효소연쇄반응(RT-PCR) 또는 RNA 제자리 하이브리다이제이션 등의 확립된 방법에 의해 모니터링할 수 있다(참조, 예, Cuncliffe et al.(2002) Mamm. Genome 13:245). 약제는 무세포 시스템, 예를 들면, ATR 유전자 프로모터-리포터 형질전환유전자(예, ATR 유전자 프로모터-LacZ 형질전환유전자), ATR 유전자 프로모터에 결합하는 전사 인자, 정제하지 않은(crude) 세포 추출물 또는 핵 추출물, 및 시험 약제(예, 본 명세서에 기재된 약제)를 포함하는 환경을 이용하여 평가할 수 있으며, 이때, ATR 유전자 프로모터 활성에 대해 상기 약제가 미치는 영향은 색깔의 변화로서 검출된다.

스크리닝 측정법에 사용되는 ATR 단백질 또는 그들의 단편은 그 단백질 또는 대응 단편을 코딩하는 재조합 핵산을 사용하는 등에 의해 생성할 수 있다. Cimprich et al.(1996) Proc Natl Acad Sci USA. 1996 Apr 2:93(7):2850-5에는, 발현 구조체를 생성하기 위해 사용할 수 있는 대표적인 ATR mRNA 서열이 기재되어 있다. 대표적인 단편으로는, 예를 들면, ATR의 아미노산 1640∼2185, 2612∼2644, 2321∼2567, 2321∼2633, HEAT 도메인, FAT 도메인, FATC 도메인, PI-3/PI-4 키나제 도메인, 또는 TPR형 도메인을 들 수 있다. 이러한 단편 또는 전장(full length) 단백질은 재조합 세포에서 생성하여 정제할 수 있으며, 이중-하이브리드 측정법(two-hybrid assay) 등에 의해 평가할 수 있다. Sambrook & Russell. Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 3^rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y.(2001) 및 Ausubel et al., Current protocols in Molecular Biology(Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y.(1989)는, 예를 들면, 일반적인 클로닝 및 재조합 단백질 발현 방법을 제공한다. Scopes(1994) Protein Purification: Principles and Practice, New York:Springer-Verlag, 예를 들면, 및 기타 텍스트는 다수의 일반적인 재조합(및 비재조합) 단백질의 정제 방법을 제공한다. 또한, Unsal-Kacmaz et al.(2002) Proc Natl Acad Sci USA 2002 May 14;99(10):6673-6678에는 전장 플래그-태그 ATR 단백질(full length flag-tagged ATR protein)의 정제에 대해 기재되어 있다.

시험관내에서 하나 이상의 ATR 활성을 평가할 수 있다. 예를 들면, Unsal-Kacmaz et al.(2002) Proc Natl Acad Sci USA 2002 May 14;99(10):6673-6678에는 정제된 ATR 단백질과 UV에 의해 손상된 DNA 사이의 상호작용을 평가하는 대표적인 DNA 결합 측정법, 및 ATR 키나제 측정법이 기재되어 있다. 후보 화합물은 적어도 25, 50, 75, 80, 또는 90%까지 DNA 결합을 감소시키거나, 또는 적어도 25, 50, 75, 80, 또는 90%의 키나제 활성을 감소시킬 수 있다.

또한, 조직 배양 세포 등의 세포에서의 ATR 활성을 평가할 수 있다. 대표적인 세포 측정법은 Nghiem et al.(2002) J Biol Chem 2002 Feb 8;277(6):4428-34 및 Nghiem et al(2001) Proc Natl Acad Sci USA. 2001 Jul 31;98(16):9092-7에 기재되어 있다.

약물동태학적 특성 및 치료 활성

치료용으로 바람직한 약제의 약물동태학적 특성을 나타내는 본 명세서에 기재한 약제는 수식(modification) 될 수 있다. 예를 들면, 이러한 수식에 의해, 더 긴 순환 반감기, 세포 흡수(cellular uptake)의 증가, 표적 조직으로의 향상된 분포, 클리어런스(clearance)의 감소 및/또는 면역발생성의 감소가 일어난다. 본 명세서에 기재된 크산틴(예, 카페인) 등의 약제의 치료 활성을 최적하기에 유용한 여러 기술-인지 접근법(art-recognized approach)이 있다. 카페인 및 기타 크산틴의 생성 및 정제 방법은 잘 알려져 있다.

발현 시스템

약제가 단백질인 경우, 재조합 단백질로서 생성될 수 있다. 재조합 단백질에 대해서, 발현 시스템의 선택은 약물동태학적 특성에 영향을 미칠 수 있다. 번역후 과정에서의 발현 시스템간의 차이는 분자 크기와 전하가 다양한 재조합 단백질을 유도하며, 예를 들면, 순환 반감기, 클리어런스 속도 및 면역발생성에 영향을 미칠 수 있다. 상기 단백질의 약물동태학적 특성은, 박테리아, 바이러스, 또는 포유류 발현 시스템의 선택 등의 발현 시스템의 적당한 선택에 의해 최적화될 수 있다. 치료 단백질에 대한 발현 시스템에 유용한 대표적인 포유류 세포주는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 원숭이 COS-1 세포주 및 CV-1 세포주이다.

화학적 수식( Chemical Modification )

약제는 활성을 유지하면서 약물동태학적 특성을 증강시키기 위해서 화학적으로 변경될 수 있다. 상기 약제는 각종 모이어티(moiety)에 공유적으로 결합하여, 약제의 분자 크기와 전하 및 그에 따른 그 약물동태학적 특성을 변경할 수 있다. 상기 모이어티는 바람직하게는 비독성 및 생체적합성이다. 하나의 태양에서, 폴리에틸렌글리콜(PEG)은 단백질에 공유적으로 부착될 수 있다(PEGylation). PEG는 말단 히드록실기를 가진 에틸렌 옥사이드 서브유닛을 반복하여 구성된 중합체군이다. 다양한 PEG 분자가 알려져 있으며, 또한 상업적으로 입수가능하다(예, Sigma-Aldrich 카달로그 참조). 또 다른 대표적인 수식으로는 국소적인 전달을 촉진시키기 위한 아르기닌 올리고머의 약제로의 접합(conjugation)이 있다(Rothbard et al., 2000, Nat Med. 6(11):1253-7).

또한, 치료제는 단백질에 화학적으로 결합될 수 있다. 그 치료제는 더 긴 회전성 반감기와 개선된 세포성 흡수를 가진 더 큰 분자량의 복합체를 형성하기 위해 담체 단백질에 가교결합될 수 있다. 하나의 태양에서, 상기 담체 단백질은 알부민 등의 혈청 단백질일 수 있다. 상기 치료제는 2관능성 가교결합 시약을 거쳐서 하나 이상의 알부민 분자에 부착될 수 있다. 상기 가교결합 시약은 모노 또는 헤테로관능성일 수 있다.

제제의 변형( Modification of Formulation )

약제(예, 카페인 또는 기타 ATR 조정 크산틴)의 제제는 원하는 투여 방식에 따라 채택될 수 있다. 예를 들면, 치료제는 담체 시스템내에 제제화될 수 있다.

상기 담체는 콜로이달 시스템일 수 있다. 그 콜로이달 시스템은 리포솜, 인지질 이층 수송체(phospholipid bilayer vehicle)일 수 있다. 하나의 태양에서, 치료제는 리포솜내에 캡슐화된다. 당업자에게 공지되어 있는 바와 같이, 각종 리포솜의 제조 방법이 있다(참조, Lichtenberg, D., et al., Methods Biochem Anal, 33:337-462(1988), LIPOSOME TECHNOLOGY Anselem, S. et al., CRC Press, 1993). 리포솜은 크기가 다양한 인지질의 조합(assortment) 및 치환으로부터 제조할 수 있으며, 또한 콜레스테롤 등의 독성이 낮은 성분을 부가적으로 함유한다. 상기 리포솜은 각종 형상과 크기로 제제화되어 단리될 수 있다. 부가적으로는, 모이어티(moiety)는 담체의 약물동태학적 특성을 더 증강시키기 위해서 리포솜의 표면에 부착될 수 있다. 상기 모이어티는 인지질 또는 콜레스테롤 분자에 부착될 수 있으며, 표면에 삽입된 모이어티의 퍼센트는 최적의 리포솜 안정성 및 약물동태학적 특성을 갖도록 조정될 수 있다. 하나의 태양은 표면에 폴리에틸렌글리콜(PEG)이 부가된 리포솜을 포함한다. 리포솜 제제는 클리어런스를 지연시키고 세포성 흡수를 증가시킬 수 있다(참조, Reddy, K.R. Annals of Pharmacotherapy, 34:7/8, 915-923(2000)).

또한, 상기 담체는 중합체, 예를 들면, 생분해성, 생체적합성 중합체 매트릭스일 수 있다. 하나의 태양에서, 상기 치료제는 단백질의 완전성(protein integrity)을 유지하면서 중합체 매트릭스 중에 구체화(embody)될 수 있다. 상기 중합체는 폴리펩티드류, 단백질류 또는 다당류 등의 천연, 또는 폴리(α-히드록시) 애시드 등의 합성일 수 있다. 예로는 콜라겐, 피브로넥틴, 엘라스틴, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 니트레이트, 다당류, 피브린, 젤라틴, 및 그들의 조합물로 이루어진 담체를 들 수 있다. 하나의 태양에서, 상기 중합체는 폴리-락트산(PLA) 또는 코폴리 락트산/글리콜산(PGLA)이다. 상기 중합성 매트릭스는 미세구 (microshpere) 및 나노미립구(nanosphere)를 포함한, 다양한 형태 및 크기로 제조 및 단리할 수 있다. 중합체 제제는 치료 효과의 장기간 지속성을 유도할 수 있다(참조, Reddy, K.R. Annals of Pharmacotherapy, 34:7/8, 915-923(2000)). 인간 성장 호르몬(hGH)에 대한 중합체 제제는 임상시험에 사용되고 있다(참조, Kozarich, J.W., Rich, D.H., Chemical Biology 2:548-552(1998)).

중합체 미세구의 지효성 제제의 예는 PCT 공개공보 WO 99/15154(Tracy et al.), 미국특허번호 5,674,534 및 5,716,644(Zale et al.), PCT 공개공보 WO 96/40073((Zale et al.), 및 PCT 공개공보 WO 00/38651(Shah et al.)에 기재되어 있다. 미국특허번호 5,674,534 및 5,716,644 및 PCT 공개공보 WO 96/40073에는 염과의 응집에 대하여 안정화된 에리트로포이에틴 입자를 함유하는 중합성 매트릭스가 기재되어 있다.

하나의 태양에서, 본 발명의 조성물은 약 15,000cP 이하, 바람직하게는 약 100∼12,000, 더 바람직하게는 약 300∼10,000의 점도를 갖는다. 상기 조성물에는 원하는 점도를 얻기 위해서 중합성 재료를 첨가할 수 있다. 상기 점도는 브룩필드(Brookfield) 점도계 모델 DV-I+, 분당 12회전(rpm)의 스핀들 #27를 사용하여 실온(20∼25℃)에서 측정한다. 상기 측정된 점도가 4,000cP 미만인 경우에는, 스핀들 #27 대신에 #21이 사용되어야 한다. 약 15,000cP 이하의 점도를 유지함으로써, 향상된 흐름성 및 유출성을 통해 화장용 특성을 나타내는 이점 및 정확한 도포 용이성이 성취된다.

특히 유용할 수 있는 중합체는, 예를 들면, B.F. Goodrich 사제의 상표명 CARBOPOL^TM 등의, 가볍게 가교결합된(lightly crosslinked) 폴리아크릴산 중합체이다. 이들은 통상 카보머(carbomer)라고 불린다. 상기 CARBOPOL^TM 중합체는 폴리아크릴산 구조를 기본으로 하는 친수성 중합체이다. 가볍게 가교결합된 중합체의 예로는 CARBOPOL^TM 910, 941, 971, 및 981, 및 CARBOPOL^TM ETD 2050을 들 수 있다. CARBOPOL^TM 941 또는 981중 어느 하나가 유용하며, 이는 CARBOPOL^TM 941 또는 981을 기재로 하는 겔의 점도가 중성화된 수계에서의 그 중합체 구조내의 가교의 수준이 낮음에 기인한 그 농도에 비해 낮기 때문이다. 반면, CARBOPOL^TM 980 또는 974P 등의 높은 가교 수준을 나타내는 폴리아크릴산 중합체는 유사한 농도에서 더 높은 점도를 가진 겔을 생성한다.

pH 7.5의 CARBOPOL^TM 941 또는 981 중의 어느 하나의 0.5% 용액은 4,000∼11,000cP의 점도 측정값(20rpm에서의 Brookfield 점도)을 갖는데 비해, CARBOPOL^TM 940 또는 980 중의 어느 하나의 유사한 0.5% 용액에 대해서는 40,000∼60,000의 점도 측정값을 갖는다(참조: B.F. Goodrich Product Guide, Bulletin 2). 이러한 가볍게 가교된 중합체 중 하나로부터 제조된 겔은 높게 가교된 중합체로부터 제조된 유사한 점도의 겔보다 더 좋은 피부 느낌과 매끄러움성을 제공한다. 또한, 낮은 점도의 겔은, 엄밀히 외용제로는 제공되지 않는 진한 겔인 다른 시판 제품에 비해서, 점적기 또는 드립타입 디스펜서에 의해 매우 정확하게 투여할 수 있다.

CARBOPOL^TM 941 NF 수지 및 그 공용매 중합 대체품, CARBOPOL^TM 981 NF 수지는 저점도의 영구적인 에멀션 및 현탁액을 제공한다. 이들 수지로 제조한 겔은 뛰어난 투명도를 갖는다. 이온 시스템에서, 이들은 대부분의 다른 CARBOPOL^TM 수지보다 양호하게 작용하며, 용매계에서는 1.5% 이하의 농도에서 양호하게 작용한다. 상기 중합체들은 B.F. Goodrich Specialty Chemicals, 9911 Brecksville Road, Cleveland, Ohio 44414-3247로부터 입수할 수 있다. CARBOPOL^TM 수지는 폴리알케닐 에테르 또는 디비닐글리콜로 가교된 아크릴산의 중합체이다.

또한, 조성물은 방부제, 예를 들면, 안정한 조성물을 확보하는데 도움이 되는 성분 및/또는 박테리아의 성장을 방지하는 성분을 함유할 수 있다. 상기 방부제는 항산화제, 킬레이트제, 항균제 등 중 하나 이상일 수 있다. 적합한 방부제로는 메틸파라벤, 부틸파라벤, 프로필파라벤, 벤질알콜, 소르브산, 이미드우레아, 티머리살(thimerisal), 프로필갈레이트, BHA, BHT, 시트르산, 디소디움 에데테이트 등을 들 수 있다. 기타 첨가제로는 향료가 있다. 통상, 이것은 단지 극소량으로 존재하며 조성물의 기능에는 영향을 미치지 않는다.

안티센스 핵산 서열

ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분(예, ATR)을 코딩하는 뉴클레오티드에 대한 안티센스인 핵산 분자는, 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물 중에, UVB-유도 주름을 방지 또는 감소시키는 약제로서 사용할 수 있다. "안티센스" 핵산은 ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분(예, ATR)을 코딩하는 "센스" 핵산에 상보적인(예를 들면, 이중가닥 cDNA 분자의 코딩 가닥에 상보적인 또는 mRNA 서열에 상보적인) 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 따라서, 안티센스 핵산은 센스 헥산과 수소 결합을 형성할 수 있다. 그 안티센스 핵산은 전체 코딩 가닥, 또는 그들의 일부에 상보적일 수 있다. 예를 들면, ATR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 코딩 가닥의 "코딩 영역"에 안티센스인 안티센스 핵산 분자가 사용될 수 있다.

ATR 또는 ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응 중의 어떠한 다른 성분을 코딩하는 코딩 가닥 서열의 경우, 안티센스 핵산은 왓슨과 크릭의 염기쌍의 법칙에 따라 설계될 수 있다. 상기 안티센스 핵산 분자는 ATR mRNA의 코딩 영역 또는 비코딩 영역의 일부에 대해서만 안티센스인 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들면, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 ATR mRNA의 번역 시작 부위를 둘러싸고 있는 영역에 상보적일 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 예를 들면, 길이가 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 뉴클레오티드일 수 있다. 안티센스 핵산은 당업계에서 공지된 방법을 사용하는 화학합성 및 효소결합반응을 사용하여 제작(construct)할 수 있다. 예를 들면, 안티센스 핵산(예, 안티센스 올리고뉴클레오티드)은 자연히 생성되는 뉴클레오티드, 또는 분자의 생물학적 안정성이 증가되도록 또는 안티센스과 센스 핵산 사이에 형성된 이중가닥의 물리적 안정성이 증가되도록 디자인된 다양하게 수식된 뉴클레오티드를 사용하여 화학적으로 합성할 수 있으며, 예를 들면, 포스포로티오에이트(phosphorothioate) 유도체 및 아크리딘 치환 뉴클레오티드를 사용할 수 있다. 안티센스 핵산 생성에 사용될 수 있는 수식된 뉴클레오티드의 예로는 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 5-클로로우라실, 5-요오드우라실, 하이포크산틴, 크산틴, 4-아세틸사이토신, 5-(카르복시히드록실메틸)우라실, 5-카르복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘, 5-카르복시메틸아미노메틸우라실, 디히드록우라실, 베타-D-갈락토실큐에오신, 이노신, N6-이소펜테닐아데닌, 1-메틸구아닌, 1-메틸이노신, 2,2-디메틸구아닌, 2-메틸아데닌, 2-메틸구아닌, 3-메틸사이토신, 5-메틸사이토신, N6-아데닌, 7-메틸구아닌, 5-메틸아미노메틸우라실, 5-메톡시아미노메틸-2-티오우라실, 베타-D-만노실큐에오신, 5'-메톡시카르복시메틸우라실, 5-메톡시우라실, 2-메틸티오-N6-이소펜테닐아데닌, 우라실-5옥시아세트산(v), 와이부톡소신, 슈도우라실, 큐에오신, 2-티오사이토신, 5-메틸-2-티오우라실, 2-티오우라실, 4-티오우라실, 5-메틸우라실, 우라실-5-옥시아세트산메틸에테르, 우라실-5-옥시아세트산(v), 5-메틸-2-티오우라실, 3-(3-아미노-3-N-2-카르복시프로필)우라실, (acp3)w, 및 2,6-디아미노퓨린을 들 수 있다. 필요에 따라서, 상기 안티센스 핵산은, 핵산이 안티센스 방향(orientation)으로 서브클로닝된 발현 벡터(즉, 삽입된 핵산으로부터 전사된 RNA는 목적으로 하는 표적 핵산에 대해 안티센스 방향임)를 사용하여 생물학적으로 제조할 수 있다.

RNAi

유전자를 침묵(silence)시킬 수 있는 이중 가닥 핵산 분자는 ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분(예, ATR)의 발현을 저해하는 약제로서 사용될 수 있다. RNA 간섭(RNAi)은 목적으로 하는 유전자(또는 코딩 영역)에 대응하는 이중가닥 RNA(dsRNA)가 세포 또는 유기체에 도입되어, 그 대응하는 mRNA의 분해를 일으키는, 전사후 유전자 침묵(post-transcriptional gene silencing) 메카니즘이다. 상기 RNAi 효과는 유전자 발현이 재개되기 전에 다중 세포 분열을 위해 지속된다. 따라서, RNAi는 표적으로 하는 녹아웃 또는 "녹다운"을 RNA 수준에서 형성하는 매우 강력한 방법이다. RNAi는 인간 배아 신장 및 HeLa 세포를 포함한, 인간 세포에서 성공적임이 판명되었다(참조, 예, Elbashir et al. Nature 2001 May 24; 411(6836):494-8). 하나의 태양에서, 유전자 침묵은 포유류 세포에서 RNA 헤어핀의 내인성 발현을 강화시킴에 의해 유도될 수 있다(참조, Paddison et al., 2002, PNAS USA 99:1443-1448). 또 다른 태양에서, 소(small)(21-23nt) dsRNA의 트랜스펙션은 특히 유전자 발현을 저해한다(참조, Caplen(2002) Trends in Biotechnology 20:49-51). 이러한 소 dsRNA로는 siRNA 또는 소간섭 RNA라 불리는 RNA를 들 수 있다.

침묵되는 유전자 부분에 대응하는 dsRNA는 세포에 도입될 수 있다. 이 dsRNA는 21-23개의 뉴클레오티드의 siRNA, 또는 소간섭 RNA로 분해(digest)된다. 이 siRNA 두가닥(duplex)은 뉴클레아제 복합체에 결합하여 RNA-유도 침묵 복합체(또는 RISC)로서 알려진 것을 형성한다. 이 RISC은 siRNA 가닥 중 하나와 내인성 mRNA 사이의 염기 짝짓기 상호작용에 의해 그 상동 전사체를 표적으로 한다. 그 다음, 상기 mRNA∼siRNA의 3'말단으로부터 12개의 뉴클레오티드를 절단한다(참조, Sharp et al(2001) Genes Dev 15:485-490; 및 Hammond et al.(2001) Nature Rev Gen 2:110-119).

유전자 침묵에 있어서의 RNAi 기술은 표준 분자생물학 방법을 이용한다. 불활성화시킬 표적 유전자로부터 그 서열에 대응하는 dsRNA를, 표준 방법, 예를 들면, T7 RNA 폴리머라제를 사용하여 주형 DNA의 양 가닥을 동시에 전사시킴에 의해 제조할 수 있다. RNAi용 dsRNA의 제조 키트는 New England Biolabs, Inc.등으로부터 상업적으로 입수할 수 있다. dsRNA의 트랜스펙션 방법 또는 dsRNA를 생성하도록 조작된 플라스미드는 당업계에 일반화되어 있다.

RNAi의 효과와 유사한 유전자 침묵 효과는, 유전자 침묵에 대한 또 다른 전략을 제공하는, mRNA-cDNA 하이브리드 구조체로 트랜스펙션된 포유류 세포에서 보고되어 있다.(Lin et al., Biochem Biophys Res Commun 2001 Mar 2;281(3):639-44). ATR 신호전달을 감소시키기 위해 사용될 수 있는 약제로는 ATR 발현을 감소시키는 RNAi, 예를 들면, ATR mRNA(예, 그들의 코딩 영역, 그들의 코딩 영역의 5' 또는 3' 절반)에 상보적인 서열을 포함하는 siRNA 또는 더 큰 dsRNA을 들 수 있다. Cimprich et al.(1996) Proc Natl Acad Sci USA. 1996 Apr 2;93(7):2850-5에는 대표적인 ATR mRNA 서열이 기재되어 있다. 또한, 안티센스 RNA, 리보자임, 및 PNA 등의 기타 핵산 약제도 사용할 수 있다.

따라서, ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분(예, ATR)의 발현을 감소시키는 RNAi(dsRNA 및 siRNA 등의)를 사용할 수 있다. 예를 들면, 이러한 RNA는 상기 구성성분을 코딩하는 유전자, 예를 들면, ATR을 코딩하는 유전자에 상보적인 영역을 포함할 수 있다.

항체

ATR-매개 복제 체크포인트 연쇄반응의 구성성분(예, ATR)에 결합하는(바람직하게는 저해하는) 항체를 본 명세서에 기재한 방법 및 조성물에 사용할 수 있다. 단일항원특이적 항체 및 항체 단편을 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들면, Zola, 모노클로날 항체: 모노클로날 항체 및 조작된 항체 유도체의 제조 및 용도. Springer Verlag(December 15, 2000; 1st edition)에서 확인할 수 있다.

단일항원특이적 항체는 하이브리도마에 의해 생성된 단일클론 항체에 제한되는 것은 아니며, 예를 들면, 인간에 대한 이종항원성(heteroantigenicity)을 저하할 목적으로 인위적으로 수식된 단일항원특이적 항체를 포함한다. 그 예로는 키메라 항체(chimeric antibody), 재형상화 항체(reshaped antibody) 및 인간화 항체(humanized antibody)를 들 수 있다. 예를 들면, 키메라 항체는 마우스 또는 기타 인간이 아닌 포유류의 단일클론 항체의 가변부위와 인간 항체의 불변부위로 구성하여 제조할 수 있다. 이러한 타입의 키메라 항체는 공지의 키메라 항체 제조 방법 및 특히 유전자 재조합 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 재형상화 항체는 인간 항체의 상보성 결정 부위(complementarity determining region(CDR))를, 마우스 등의 인간이 아닌 포유류의 항체의 상보성 결정 부위로 대체한 것으로, 그 일반적인 유전자 재조합 기술이 공지되어 있다. 재형상화 인간 항체는 이러한 공지의 방법을 사용하여 얻을 수 있다. 더욱이, 항체의 가변부위의 골격부(framework (FR))의 아미노산은 재형상화 인간 항체의 상보성 결정 부위내의 적합한 항원 결합 부위를 형성하도록 치환될 수 있다(Sato et al., Cancer Res. 53:1-6, 1933). 이러한 재형상화 인간 항체의 제조는 국제특허출원번호 WO92-19759에 예시되어 있다.

또한, Fab 또는 Fv 등의 항체 단편, 또는 H쇄와 L쇄가 적합한 링커에 의해 접속되어 있는 단일쇄 Fv(scFv)을 코딩하는 유전자를 구성(construct)할 수 있다. 이 유전자는 적합한 숙주 세포에서 발현되어 상기한 목적으로 사용될 수 있으며, 항원에 결합하여 항원의 활성을 저해한다(참조, 예를 들면, Bird et al., TIBTECH 9:132-137, 1991; Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988). 또한, 상기한 재형상화 항체의 V 부위는 scFv의 제조에 사용되는 H쇄와 L쇄의 Fv에 사용될 수 있다.

또한, 단일항원특이적 항체는 인간 항체일 수 있다. 이 인간 항체는, 예를 들면, 인간 항체를 생성하는 세포를 분리하거나 또는 인간 항체를 생성하는 세포로부터 분리된 인간 항체 유전자를 클로닝함에 의해, 얻을 수 있다. 예를 들면, 오리지날 면역 시스템이 인간 면역 시스템으로 대체된 유전자도입 동물(예, 마우스)은 완전한 인간 항체를 생성하도록 면역시킬 수 있다. 이에 부가하여, 인간 말초혈액 림프구를 무한증식 및 클로닝하는 기술이 당업계에 공지되어 있다. 인간 항체는, 예를 들면, Sanz et al., 2004, Trends Immunol. 25(2):85-91에 기재되어 있다.

투여( Administration )

본 명세서에 기재된 약제는 전신적으로 또는 국부적으로(locally), 예를 들면, 국소적으로(topically) 투여할 수 있다. 본 명세서에 기재된 약제의 국소적인 투여는 바람직한 투여 경로이다. 약제를 포함하는 국소용 조성물은 용액, 크림, 연고, 젤, 로션, 샴푸, 비누 또는 에어로졸 형태 등의 많은 형태로 존재할 수 있다. 알콜, 알로에 베라 젤, 알란토인, 글리세린, 비타민 A 및 E 오일, 미네랄 오일, 및 폴리에틸렌글리콜 등의 다양한 담체 재료를 채용할 수 있다. 방부제, 향료, 썬스크린, 또는 기타 화장품 원료 등의 기타 첨가제가 상기 조성물에 존재할 수 있다. 상기 조성물은 통상 수성 액체 형태는 아니다. 방부제의 예로는 페녹시에탄올, 및 메틸파라벤, 에틸파라벤, 및 프로필파라벤 등의 파라벤류, 살리실산, 클로로헥시딘 하이드로클로라이드, 페녹시에탄올, 소디움 벤조에이트, 메틸 파라-히드록시벤조에이트, 에틸 파라-히드록시벤조에이트, 프로필 파라-히드록시벤조에이트, 부틸 파라-히드록시벤조에이트, 이소티아졸론 등을 들 수 있다.

또한, 상기 약제는 국소 도포기를 사용하여 도포할 수 있다. 예를 들면, 상기 약제를 포함하는 조성물은 반창고, 테이프, 밴드, 천 제품, 패치 등의 구성성분일 수 있다. 상기 조성물은 직접 접촉 및 분무 전달(aerosolized delivery)을 포함한 다양한 방법에 의해 전달될 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 원하는 위치의 피부 등의 표면에 분사(atomize) 및 분무(spray)할 수 있다. 상기 조성물은 이온영동법에 의해 전달될 수도 있다.

국소 전달용으로 바람직한 운반체는 리포솜이다. 리포솜은 약제, 예를 들면, 본 명세서에 기재된 약제를 세포로 수송 및 전달하기 위해 사용될 수 있다. 상세한 가이드는, 예를 들면, Yarosh et al.(2001) Lancet 357:926 및 Bouwstra et al.(2002) Adv. Drug Deliv. Rev. 54 Suppl 1:S41에서 확인할 수 있다.

전신적인 투여를 위해서 상기 약제는 경구 경로, 또는 피하, 복막내, 근육내, 동맥내 또는 기타 경로를 포함한 비경구 경로를 통하여 투여할 수 있다. 국부적 투여를 위해서는, 국소적으로, 경피로, 경점막으로, 코안으로 또는 기타 경로로 투여된다. 세포는 약제와, 예를 들면, 미세주사 및 트랜스펙션에 의해, 세포외 또는 세포내에서 접촉할 수 있다. 상기 약제는 일정하게, 증가 또는 감소된 빈도로, 및/또는 증가 또는 감소된 투여량 또는 농도로, 도포하여 즉시 제거하거나, 도포하여 제거하지 않거나, 및/또는 반복해서 도포할 수 있다. 하나 이상의 투여 경로가 동시에 사용될 수 있으며, 예를 들면, 국소투여와 함께 경구투여할 수 있다. 비경구 투여 형태의 예로는 등장식염수, 5% 글루코스 또는 기타 공지된 약제학적으로 허용가능한 부형체 중에 활성 약제를 함유한 수용액을 들 수 있다. 시클로덱스티린 등의 가용화제, 또는 당업자에게 잘 공지되어 있는 기타 가용화제는 조성물을 변화시키는 색소를 전달하기 위한 약제학적 부형제로서 이용할 수 있다.

상기 조성물은 화장품, 의약품 또는 스킨케어 제품 등으로서 제공될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 종래의 방법을 이용하는 기타 투여 경로에 대한 투여 형태로 제제화할 수 있다. 약제학적 조성물은, 예를 들면, 분말 또는 과립과 같은 경구 투여용 투여 형태, 또는 운반체(예, 전분, 글루코스, 과당, 슈크로스, 젤라틴 등), 윤활제(예, 스테아르산 마그네슘), 분해제(예, 전분 및 결정성 셀룰로스) 및 바인더(예, 락토스, 만니톨, 전분 및 아라비아 검) 등의 고체 조성물의 제조에 적합한 약제학적 담체를 가진 캡슐, 타정(각각은 서방성 및 지효성 제제을 포함함), 또는 젤 씰(gel seal)과 같은 투여 형태로 제제화할 수 있다. 상기 조성물이 주사제인 경우, 예를 들면, 용제(예, 주사용 증류수), 안정화제(예, 소디움 에데테이트), 등장제(예, 염화나트륨, 글리세린 및 만니톨), pH 조정제(예, 염산, 시트르산 및 수산화나트륨), 현탁용제(예, 메틸셀룰로스) 등을 사용할 수 있다.

상기 조성물은 카페인-소디움 벤조에이트를 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 화합물은 예를 들면, C-4144(Sigma Aldrich)에서 제공되는 것과 같이, 50:50(w/w) 혼합물일 수 있으며, 다른 조합물은 10:90∼40:60(w/w) 또는 40:60∼60:40(w/w) 또는 60:40∼90:10(w/w)으로 사용될 수 있다. 상기 조성물은 검출가능한 피부암이 없는 피험체에 적용할 수 있으며, 또는 피험자의 종양 또는 기타 암이 없는, 예를 들면, 피부암이 없는 부위에 (예를 들면, 국소적으로) 적용할 수 있다.

본 발명의 약제는 2차 피부 치료제 등의 기타 약제학적 성분(예, 보습제, 썬스크린)을 포함할 수 있다. 어떤 태양에서는, 본 발명의 조성물은 실질적으로 글리세린이 없거나, 어떤 경우에는 글리세린이 사용되더라도, 28% 미만의 글리세린을 함유한다.

키트

본 명세서에 기재된 약제(예, 항ATR 항체 또는 ATR 조정 약제)는 키트에 제공될 수 있다. 본 키트는 (a)약제, 예를 들면, 약제를 포함하는 조성물, 및 (b) 정보 재료(informational material)를 포함한다. 상기 정보 재료는 본 명세서에 기재된 방법 및/또는 본 명세서에 기재된 방법에 대한 약제의 용도에 관한 설명 재료, 지시 재료, 마케팅 재료 또는 기타 재료일 수 있다. 예를 들면, 상기 정보 재료는 UVB-유도 피부 손상, 예를 들면, 주름에 관한 것이다.

하나의 태양에서, 상기 정보 재료는, 적합한 투여량, 투여형태, 또는 투여방식(예, 본 명세서에 기재된 투여량, 투여형태, 또는 투여방식)으로 본 명세서에 기재된 방법을 수행할 수 있도록, 적합한 방식으로 본 명세서에 기재된 약제를 투여하기 위한 지침서(instructions)를 포함할 수 있다. 바람직한 투여량, 투여형태, 또는 투여방식은 국소적인 화장품 제제이다. 또 다른 태양에서, 상기 정보 재료는 본 명세서에 기재된 약제를 인간(예, UVB 손상(예, 주름)이 있거나 또는 UVB 손상 위험이 있는 인간) 등의 적합한 피험자에게 투여하기 위한 지침서를 포함할 수 있다.

상기 키트의 정보 재료는 그 형태에 제한은 없다. 많은 경우에, 상기 정보 재료, 예를 들면, 지침서는 인쇄 텍스트, 도면, 및/또는 사진 등의 인쇄물(예, 라벨 또는 인쇄지)로 제공된다. 하지만, 상기 정보 재료는 점자(Braille), 컴퓨터로 판독가능한 재료, 비디오 기록, 또는 오디오 기록 등의 기타 포맷으로 제공될 수도 있다. 또 다른 태양에서, 상기 키트의 정보 재료는, 키트 사용자가 ATR 및/또는 본 명세서에 기재된 제조 방법에서의 그 용도에 관한 실질적인 정보를 얻을 수 있는, 물리적 주소(physical address), 이메일 주소, 웹사이트, 또는 전화번호 등의 접촉 정보이다. 물론, 상기 정보 재료는 포맷의 어떠한 조합으로 제공될 수도 있다.

본 명세서에 기재된 약제 외에, 상기 키트의 조성물은 용제 또는 완충액, 안정화제, 방부제, 향료 또는 기타 화장품 원료 등의 기타 성분, 및/또는 본 명세서에 기재된 병 또는 이상(장애)을 치료하기 위한 2차 약제를 포함할 수 있다. 필요에 따라, 상기 기타 성분은 키트에 포함될 수 있지만, 본 명세서에 기재된 약제 이외의 다른 조성물 또는 용기에 포함될 수 있다. 이러한 태양에서는, 상기 키트는 본 명세서에 기재된 약제와 기타 성분들을 혼합하기 위한, 또는 본 명세서에 기재된 약제를 기타 성분들과 함게 사용하기 위한 지침서를 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 약제는 액체, 건조 또는 동결건조된 형태 등의 어떠한 형태로도 제공될 수 있다. 본 명세서에 기재된 약제는 실질적으로 순수 및/또는 살균된 상태이다. 본 명세서에 기재된 약제가 액체 용액으로 제공되는 경우, 그 액체 용액은 바람직하게는 수용액이며, 바람직하게는 살균된 수용액이다. 본 명세서에 기재된 약제가 건조된 형태로 제공되는 경우, 일반적으로 재구성(reconstitution)은 적합한 용제의 첨가에 의한다. 상기 용제, 예를 들면, 살균수 또는 완충액이 필요에 따라 키트에 제공될 수 있다.

상기 키트는 본 명세서에 기재된 약제를 함유하는 조성물용 용기를 하나 이상 포함할 수 있다. 어떤 태양에서, 상기 키트는 조성물 및 정보 재료용 개별 용기, 분배기(divider) 또는 구획(compartment)을 포함한다. 예를 들면, 상기 조성물은 병, 바이알, 또는 주사기에 포함될 수 있으며, 상기 정보 재료는 플라스틱 슬리브(sleeve)나 패킷에 포함될 수 있다. 다른 태양에서는, 상기 키트의 각각의 구성요소가 단일의, 분할되지 않은 용기내에 담길 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 라벨 형태의 정보 재료가 부착된 병, 바이알, 또는 주사기에 담긴다. 어떤 태양에서, 상기 키트는 복수의 개별 용기(예, 팩(pack))를 포함하며, 각각은 본 명세서에 기재된 약제의 하나 이상의 단위 투여 형태(예, 본 명세서에 기재된 투여 형태)를 포함하고 있다. 예를 들면, 상기 키트는 복수의 주사기, 앰플, 포일 패킷, 또는 블리스터 팩을 포함하며, 각각은 본 명세서에 기재된 약제의 단일 단위 투여량을 포함하고 있다. 상기 키트의 용기는 밀봉 및/또는 방수일 수 있다.

상기 키트는 필요에 따라 상기 조성물을 투여하기에 적합한 장치, 예를 들면, 주사기, 흡인기, 피펫, 핀셋, 계량 스푼, 점적기(예, 눈 점적기), 면봉(예, 솜면봉 또는 목면봉), 또는 어떠한 전달 장치를 포함한다. 바람직한 태양에서, 상기 장치는 면봉이다.

실시예 1 : 국소용 카페인은 피부 자극을 일으키지 않음

카페인이 피부 자극을 일으키는지 여부를 결정하기 위해 하기 실시예를 수행하였다. 피부 자극제는 주름 형성을 촉진하는데 기여한다.

실험에 앞서, 마우스 귀(FVB 주(strain), 암컷, 7주, n=3-4/군)의 두께를 두 께 게이지(Mitsutoyo Corp.)로 측정하였다. 양쪽 귀의 두께를 측정한 후, 10㎕의 용매를 왼쪽 귀에 도포하고 10㎕의 카페인 용액(2% 또는 1.2%)을 오른쪽 귀에 도포하였다. 그 다음날, 양쪽 귀의 귀 두께를 측정하였다. 이 과정은 연속하여 5일 동안 계속하였다. 왼쪽 및 오른쪽 귀 두께의 결과를 하기의 표 1에 나타낸다.

<표 1>

2차 실험에서, UVB 방사선에 노출한 후, 용액을 각 귀에 도포하였다. 그 다음날, 양쪽 귀의 두께를 측정하였다. UVB 방사선은 단지 한번만 조사하였으며, 용액을 총 5회 투여하였다(연속하여 5일 동안 하루에 한번). 그 결과는 표 2에 나타낸다.

<표 2>

표 2로부터 알 수 있는 바와 같이, 귀 두께는 UVB 조사에 의해 증가하였다(표 1과 비교). 용제(DMSO 또는 아세톤)와 비교했을 때, 카페인은 귀 두께를 증가시키지 않았다. 다시 말해서, 카페인은 DMSO에 함유된 2%의 농도 또는 아세톤에 함유된 1.2%의 농도에서 일차자극을 나타내지 않았다.

3차 일차자극 실험을 수행하였다. 전기 면도기로 마우스의 등 피부의 털을 깎은 다음, 5㎕의 각 용액을 국소적으로 도포하였다. 그 다음날, 5개의 카테고리에 따라 자극을 평가하고(0: 자극 없음, 1: 약간 자극, 2: 선명한 자극, 3: 강한 자극, 4: 심한 자극), 5㎕의 각 용액을 국소적으로 도포하였다. 이 과정은 연속하여 총 5일 동안 계속하였다. 그 결과는 표 3에 나타낸다.

<표 3>

표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 카페인은 마우스 피부에서 자극을 일으키지 않았다. 다시 말해서, 카페인은 DMSO에 함유된 2%의 농도 및 아세톤에 함유된 1.2% 농도에서 일차 자극을 일으키지 않았다.

실시예 2: 국소용 카페인은 UV -유도 주름을 감소시킴

이 실험은 UVB-유도 만성 피부 손상에 대한 카페인의 효능을 시험하기 위해 수행하였다. 7주된 암컷 무모 Skh-1 마우스(n=5/군)의 4개의 그룹(그룹 1: UVB + 1.2%의 카페인을 함유한 아세톤, 그룹 2: No UVB + 1.2% 카페인을 함유한 아세톤, 그룹 3: UVB + 아세톤, 그룹 4: No UVB + No 아세톤)을 준비하였다. 그룹 1 및 3의 마우스는 형광 램프(Southern New England Ultraviolet)를 사용하여 UVB 자극에 노출시켰다. 램프의 높이는 마우스의 등쪽 피부 표면에 0.35 mW/㎠을 전달하도록 조정하였다. UVB가 조사된 마우스와 UVB가 조사되지 않은 마우스의 등쪽에 시료를 도포하였다(100㎕). 이 과정은 10주 동안 매주 3회씩 반복하였다. UVB 조사는 0.5 최소 홍반량(minimum erythema dose:MED)의 방사선량(20mJ/㎠)으로 시작하여, 점차 0.5 MED에서 최고 방사선량 4.5 MED으로 증가시켰다. UVB의 총 축적된 방사선량은 6.54 J/㎠였다.

10주 후, 피부 주름은 두개의 독립적인 개체를 5개의 카테고리(0: 주름 없음, 1: 약간 주름, 2: 선명한 주름, 5: 강한 주름, 4: 심한 주름)에 따라 평가하였다.

<표 4>

표 4에서 알 수 있는 바와 같이, 아세톤 중에 1.2%의 농도로 함유된 카페인은 UVB-유도 주름 형성을 감소시키는데 효과적이었다.

실시예 3: 국소용 카페인은 UV -유도 혈관신생을 감소시킴

마우스를 희생시켜 등 피부 시료를 액체 질소 중에 급속동결시킨다. 면역조직학적 염색은 단일클론 래트 항마우스 CD31 항체(Pharmingen)을 사용하여 수행한다. UVB-조사 마우스 및 UVB 미조사 마우스로부터 대표 절편(section)을 얻어서 Nikon E-600 현미경(Nikon)을 사용하여 분석한다. 스팟 디지털 카메라(Diagnostic Instruments)로 화상을 캡쳐하여, IP-LAB 소프트웨어를 사용하여 형태계측 분석을 수행한다. 혈관이 있는 부분은 진피에서 측정한다.

실시예 4: 복제 체크포인트가 결핍된 유전자도입 마우스는 UV -유도 노화에 대한 변경된 민감성을 나타냄

국소용 카페인이 ATR을 통한 주름 저해에 영향을 미치는지를 조사하기 위해, 우성의 네거티브 ATR 및 Chk1 단백질의 발현 구조체를, 유전자도입 동물 중에서 K14(피부) 프로모터의 조절 하에 발현시켰다.

본원에 인용된 모든 공개공보, 참조문헌, 특허, 및 특허 출원은 참조로서 기재한다. 본 발명의 다수의 태양이 기재되어 있다. 그럼에도 불구하고, 각종 변형은 본 발명의 기술적 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수 있다. 따라서, 다른 태양은 하기 청구범위의 범위내에 있다.

Claims

UVB-유도 주름이 있거나 또는 생성될 위험이 있는 피험자를 동정 (identification)하는 단계; 및

ATR-매개 신호전달을 저해하는 약제를 포함하는 조성물을 피험자에게 투여하는 단계

를 포함하는 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서,

상기 약제가 카페인인, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제2항에 있어서,

상기 조성물이 14% 미만의 농도로 카페인을 포함하는, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제2항에 있어서,

상기 조성물이 10% 미만의 농도로 카페인을 포함하는, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제2항에 있어서,

상기 조성물이 5% 미만의 농도로 카페인을 포함하는, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 약제를 1주일에 적어도 2회 투여하는, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서,

상기 약제가 ATR 수준(level), 발현 또는 활성의 저해제인, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서,

상기 약제가 화장료(cosmetic composition)로서 제제화되는, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서,

상기 약제를 UV 노출 전에 투여하는, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서,

상기 약제를 썬스크린(sunscreen), 보습제, 태닝제(tanning agent), 향료, 메이컵 파운데이션으로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 화장제(cosmetic agent)와 조합하여 투여하는, 피험자의 UVB-유도 주름을 감소시키는 방법.
ATR-매개 체크포인트 신호전달을 감소시키는 시험 약제의 능력을 평가하는 단계; 및

ATR-매개 체크포인트 신호전달을 감소시키는 시험 약제의 능력과 UVB-유도 주름을 감소시키는 시험 약제의 능력을 상호관련시키는 단계

를 포함하는 UVB-유도 주름을 감소시키는 약제를 동정하는 방법.
제11항에 있어서,

상기 시험 약제를 ATR, ATRIP 또는 CHK1을 저해하는 능력에 대해서 평가하는, UVB-유도 주름을 감소시키는 약제를 동정하는 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서,

상기 시험 약제가 폴리펩티드, 항체, 탄수화물, 지질, 핵산 또는 소분자(small molecule)인, UVB-유도 주름을 감소시키는 약제를 동정하는 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서,

상기 시험 약제가 식물성 추출물인, UVB-유도 주름을 감소시키는 약제를 동 정하는 방법.
제12항에 있어서,

상기 시험 약제를 ATR 키나제 활성을 변경시키는 능력 또는 UV에 의해 손상된 DNA에 결합하는 능력에 대해 평가하는, UVB-유도 주름을 감소시키는 약제를 동정하는 방법.
제11항에 있어서,

상기 상호관련시키는 단계는 상기 시험 약제를 무모 Skh-1 마우스(hairless Skh-1 mouse)에 접촉시켜 주름 형성을 평가하는 단계를 포함하는, UVB-유도 주름을 감소시키는 약제를 동정하는 방법.
제11항에 있어서,

상기 시험 약제를 국소 도포용 조성물로서 제제화하는 단계 및, 필요에 따라, 그 조성물을 피험자에게 투여하는 단계를 더 포함하는, UVB-유도 주름을 감소시키는 약제를 동정하는 방법.
한 부위에 국소적으로 도포 시 주름을 감소시키기에 유효한 양의 카페인을 함유하며, 그 유효량이 10% 미만인, 국소 도포용으로 적합한 조성물.
제18항에 있어서,

상기 조성물이 화장품으로서 제제화되는, 국소 도포용으로 적합한 조성물.
제18항에 있어서,

상기 조성물이 로션, 고약(salve), 겔, 또는 연고(ointment)인, 국소 도포용으로 적합한 조성물.