KR20070044385A

KR20070044385A - 피부상태 개선 또는 치주질환의 치료 효능을 가지는펩타이드

Info

Publication number: KR20070044385A
Application number: KR1020060103498A
Authority: KR
Inventors: 정용지; 김영덕; 김충렬
Original assignee: (주)케어젠
Priority date: 2005-10-24
Filing date: 2006-10-24
Publication date: 2007-04-27
Also published as: WO2007049904A1; EP1940872A4; CN101296940B; US20090124556A1; JP2009512684A; EP1940872B9; US7939495B2; CN101296940A; ATE482230T1; DE602006017094D1; EP1940872B1; EP1940872A1; KR100787910B1; JP4954215B2; KR20070111556A

Abstract

본 발명은, bFGF-유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 피부 상태의 개선 또는 치주질환의 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 펩타이드는 효능이 우수할 뿐만 아니라 안정성이 천연 bFGF와 비교하여 매우 우수하며, 피부 투과도가 매우 우수하다. 따라서 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은, 피부 상태의 개선 또는 치주질환을 치료하는 데 매우 우수한 효능을 발휘한다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 의약, 화장품, 치약, 구강청정용 조성물 또는 구강 보호용 조성물에 매우 유리하게 적용될 수 있다.

염기성 섬유아세포 성장인자, 펩타이드, 안정성

Description

피부상태 개선 또는 치주질환의 치료 효능을 가지는 펩타이드{Peptides Exhibiting Efficacies of Improvement in Skin Conditions or Treatment of Periodental Diseases}

도 1은 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드에 대한 고성능 액상 크로마토그래피 분석 결과를 나타내는 그래프이다.

도 2는 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드를 질량분석기를 이용하여 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 3은 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드의 염기성 섬유아세포 성장인자 수용체에 대한 결합도를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 4는 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드의 생리활성도를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 5는 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드의 안정성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 6은 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드를 처리한 인간 각질세포의 세포 성장 속도를 보여 주는 그래프이다.

도 7은 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드의 인간 각질 세포의 성장을 촉진하는 작용을 보여주는 현미경 사진이다.

도 8은 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드를 이용한 세포배양 시 증가된 프로콜라겐 생성량의 증가를 나타낸 그래프이다.

도 9는 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드를 이용한 세포배양 시 증가된 라미닌 및 히알론산의 생성량의 증가를 보여주는 그래프이다.

도 10은 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 아세틸 데카펩타이드를 포함하는 화장품 조성물을 적용시킨 BalbC 생쥐 피부 두께의 변화를 현미경 사진이다.

본 발명은 염기성 섬유아세포 성장인자-유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 상태의 개선 또는 치주질환의 치료용 조성물에 관한 것이다.

섬유아세포(fibroblast)와 내피세포(epithelial cell)에서 유사분열촉진 인자로서 섬유아세포 성장인자가 작용한다. 소의 뇌 또는 뇌하수체조직으로부터 유래한 섬유아세포 성장인자(FGF)는 1974년 Gospodarowicz(Nature 249: 123-127(1974))에 의해 최초로 소개되었다. 뇌로부터 분리된 유사분열촉진인자는 뇌하수체로부터 분리된 것과 다른 것임이 추후 보고 되었다. 이들은 유사한 생물학적 활성을 가지나 아미노산 서열 및 등전점이 서로 다르기 때문에, 이들 두 인자에 대해서 각각 산성(acidic) 및 염기성(basic) FGF로 명명했다. 산성 FGF(aFGF) 및 염기성 FGF(bFGF)는 내피세포, 평활근 세포, 부신피질 세포, 전립선 및 망막 상피 세포, 과돌기신경교세포, 성상세포, 연골세포(chondrocyte), 근원세포 및 조골세포를 포함하는 다수의 중배엽- 및 신경외배엽-유래 세포의 일반적인 증식 능력에 영향을 미치는 일종의 헤파린 결합 성장인자(Heparin binding growth factor) 그룹에 속하는 것으로 분류되고 있다(Burgess and Maciag, Ann. Rev. Biochem. 58:584(1989)).

FGF는 세포증식을 자극하는 유사분열촉진 반응을 유도할 뿐 아니라, 대다수의 세포 유형을 자극하여 비유사 분열촉진 방식으로 반응하기도 한다. 이들 활성은 상처부위로의 세포이동 촉진(화학 주성), 새로운 혈관 형성의 개시(맥관형성), 신경 재생의 조절(향신경성), 특정 세포 단백질 발현, 세포외 간질생성 및 치유 과정에서 중요한 세포 생존의 자극 또는 억제를 포함한다(Burgess, W.H., and Maciag, T. Ann. Rev. Biochem. 58:584-588(1989)). 세포 성장 촉진작용과 함께 이들 성질은, 상처 치유를 촉진하기 위한 치료, 혈전증, 동맥경화증 등에 대한 치료 등에서 섬유아세포 성장인자의 사용에 관한 근거를 제공한다. 따라서 FGF는 외상의 치유를 촉진하기 위해서(Davidson, J. M., et al. J. Cell Bio. 100:1219-1227(1985)), 심장 질환 및 외과수술에서 심근층 손상을 최소화하기 위해서(미국 특허 제4,378,347호), 및 신경단위 생존 및 축색 확대를 증가시키기 위해서(Walicke, P., et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 83:3012-3016(1986)) 제시되었다.

bFGF는 분자량 약 18 kDa에 달하는 염기성 단백질(pI 9.58)로서 뇌하수체에서 주로 분비되며 다양한 중배엽-유래 세포의 성장을 촉진하는 것으로 알려져 있다. 또한, 이는 혈관 내막세포 및 평활근 세포의 성장을 촉진하는 단백질로서 외상치료 및 맥관 형성에 탁월한 효능을 나타내고, 콜라겐과 엘라스틴의 합성을 증가시킴으로써 피부의 탄력을 유지하며, 정상적인 세포의 성장을 돕고 상처로부터의 회복을 촉진하고, 그 치유작용을 수행하는 것으로 알려져 있다(Pilcher BK., et al. J. Biol Chem. 272(29):18147-18154(1997)). 아울러 bFGF는 두피 내의 혈액순환과 모근세포를 활성화시켜 주는 것으로 보고되어 있다(Kristen L. Mueller. et al. J. Neurosci. 22(2):9368-9377(2002)).

그러나 이러한 혈액 및 조직에 존재하는 폴리펩타이드 성장인자들의 경우 그 체내 반감기가 수 분 정도로 아주 짧은 것으로 알려져 있으며, 특히 bFGF의 경우 그 구조상에 이황화결합을 형성하지 않는 4개의 시스테인 잔기를 가짐으로 인하여 특히 그 안정성에 많은 영향을 받는다는 문제점이 있다.

또한, bFGF는 생물학적으로 불안정하며 물리화학적으로도 불균질하여 치료효과가 감소되는 경우가 있으며, 피부 내 투과율도 매우 저조하다는 문제점도 있다.

따라서 bFGF의 안정성 및 투과율을 높여서 생체 외 제형으로 활용할 수 있는 방법이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

본 발명자들은 피부상태를 개선할 수 있고, 치주질환을 치료할 수 있는 펩타 이드 물질을 개발하기 위하여, 다양한 종류의 인간 bFGF-유래 펩타이드를 제조 및 스크리닝하고, 그 중 상술한 효능이 우수할 뿐만 아니라 안정성도 우수한 펩타이드를 선별함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명의 목적은 bFGF-유래 펩타이드를 포함하는 피부 상태의 개선 또는 치주질환의 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 피부 상태의 개선 또는 치주질환을 치료하는 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 피부 상태의 개선 또는 치주질환의 치료용 조성물을 제조하기 위한 bFGF-유래 펩타이드의 용도를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 안정성이 개선된 변형된 bFGF-유래 펩타이드를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 상태의 개선 또는 치주질환의 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제1서열의 아미노산 서 열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 조성물을 대상(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 피부 상태를 개선 또는 치주질환을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 피부 상태의 개선 또는 치주질환의 치료용 조성물을 제조하기 위한 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 용도를 제공한다.

본 발명자들은 피부상태를 개선할 수 있고, 치주질환을 치료할 수 있는 펩타이드 물질을 개발하기 위하여, 다양한 종류의 인간 bFGF-유래 펩타이드를 제조 및 스크리닝하고, 그 중 상술한 효능이 우수할 뿐만 아니라 안정성도 우수한 펩타이드를 선택하였다. 더불어, 선택한 인간 bFGF-유래 펩타이드의 아미노산 서열을 변형시켜 열, 산 및 알칼리 등의 물리화학적 인자에 대한 안정성(stability)이 보다 증가된 변형-펩타이드를 개발하였다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 펩타이드는 bFGF-유래의 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에서의 펩타이드는 서열목록 제1서열의 아미노산 서열로 필수적으로 구성되어 있다. 가장 바람직하게는, 본 발명에서의 펩타이드는 서열목록 제1서열의 아미노산 서열로 구성되어 있다.

본 명세서에서 용어 "펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다.

본 발명의 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)에 따라 제조될 수 있다(Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)).

종래에 개발된 bFGF-유래 펩타이드는 bFGF의 길항제의 용도로 개발되었다(예컨대, 미국 특허 제7,009,036호). 그러나, 본 발명의 펩타이드는 생체에 적용 시 천연 bFGF와 동일한 기능 또는 작용을 한다. 즉, 종래의 bFGF-유래 펩타이드는 생체에 적용 시 항(anti)-bFGF 작용을 하는 데 반해, 본 발명의 펩타이드는 bFGF 작용을 흉내(mimicking)내어 생체 내에서 bFGF 작용을 한다는 측면에서, 본 발명의 펩타이드는 종래에 개발된 펩타이드들과 다르다.

본 발명의 조성물은 피부 상태의 개선의 효능 또는 활성을 갖는다. 특히, 본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 펩타이드는 천연 bFGF 보다 분자량이 훨씬 작기 때문에, 피부 침투율이 매우 우수하다. 따라서, 본 발명의 조성물을 국소적으로 피부에 도포하는 경우 피부 상태의 개선을 크게 달성할 수 있다. 보다 더 바람직하게는, 본 발명의 조성물에 의한 피부 상태의 개선은 주름개선, 피부탄력 개선, 피부노화 방지, 탈모 방지 또는 발모촉진, 피부보습 개선, 검버섯 제거 또는 여드름 치료이며, 가장 바람직하게는, 주름개선, 피부탄력 개선 또는 피부노화 방지이다.

예를 들어, 본 발명에서 유효성분으로 이용되는 펩타이드는 섬유아세포 또는 각질세포의 증식을 촉진하고, 이들 세포로부터 프로콜라겐, 라미닌, 히알론산 및 피브로넥틴의 합성 증가를 유도하며, 피부의 각질세포층, 상피층 및 진피층을 재생 또는 성장시킴으로써, 결국 주름개선, 피부탄력 개선, 피부노화 방지 또는 피부보습 개선의 치료 효능을 발휘한다.

또한, 본 발명에서 유효성분으로 이용되는 펩타이는, 천연 bFGF(Kristen L. Mueller. et al. J. Neurosci. 22(2):9368-9377(2002))와 같이 두피 내의 혈액순환과 모근세포를 활성화시키고, 모발주기에 있어서 아나젠 시기(anagen phase)를 유지시켜, 탈모 방지 또는 발모촉진 작용을 할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 치주질환의 치료 효능을 가지며, 상기 조성물은 치약(toothpaste), 구강청정용 조성물 또는 구강보호용 조성물이다. 본 명세서에서 용어 "치주질환 치료용 조성물"은 "구강보호용 조성물(composition for tooth and mouth care)" 또는"구강청정용 조성물(composition for tooth and mouth cleaning)"로 대체될 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 잇몸 조직의 섬유아세포의 생리활성을 촉진하고 신속한 잇몸 상처의 치유를 통하여 손상된 잇몸 조직을 재생시킴으로써, 치주질환을 치료 또는 예방할 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 그 자체로서 천연 bFGF 보다 매우 우수한 안정성을 나타내지만, 펩타이드의 아미노산 잔기를 변형시킴으로써 더욱 더 안정성을 향상시킬 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 서열목록 제1서열의 아미노산 서열에서 적어도 하나의 아미노산은 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG), 가장 바 람직하게는 아세틸기의 보호기가 결합되어 있다.

본 명세서에서 용어 "안정성"은 인 비보 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 의미한다. 상술한 보호기는 생체 내의 단백질 절단효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 작용을 한다.

보다 바람직하게는, 상기 보호기가 결합되는 아미노산은 서열목록 제1서열의 아미노산 서열에서 N-말단 또는 C-말단, 가장 바람직하게는 N-말단에 있는 Tyr 잔기이다. 또한, 바람직하게는, 서열목록 제1서열의 아미노산 서열에서 C-말단에 있는 Tyr 잔기의 -COOH는 -OH 또는 -NH₂로 변형시켜 펩타이드의 안정성을 증가시킬 수 있다.

본 발명에 의한 펩타이드, 바람직하게는 보호기가 결합된 변형 펩타이드는 N-말단 및/또는 C-말단이 보호되어 있으므로, 37℃ 온도에서 우수한 열안정성을 나타내며, 또한 산과 알칼리 등의 물리화학적 인자에 대한 안정성을 우수하다. 따라서 본 발명의 펩타이드는 장기 보존성이 뛰어나므로, 의약품, 의약외품, 화장품 및 구강용품과 같은 장기간 저장이 요구되는 제품에 유리하게 적용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적 조성물과 화장품 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다.

본 명세서에서 용어 "약제학적 유효량"은 상술한 펩타이드의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구, 바람직하게는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 국소 투여, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 한편, 본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 1일 당 0.0001-100 ㎍이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount); 및 (b) 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 화장품 조성물이다.

본 명세서에서 용어 "화장품학적 유효량"은 상술한 본 발명의 조성물의 피부 개선 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 펩타이드와 담체 성분 이외에, 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하며, 서열목록 제1서열의 아미노산 중에서 적어도 하나의 아미노산이 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 결합되어 있고, 천연(naturally occurring) 염기성 섬유아세포 성장인자 보다 안정성이 높은 펩타이드를 제공한다.

본 발명의 보호화-펩타이드는 상술한 본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되어 상세히 설명되었는 바, 중복 기재에 따른 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 설명을 생략한다.

본 발명에서 유효성분으로 이용되는 펩타이드는 인간 bFGF와 동일한 기능 또는 작용을 할 수 있으며, 그 생리활성도도 천연 bFGF와 거의 동일한 수준이다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 안정성이 천연 bFGF와 비교하여 매우 우수하며, 피부 투과도가 매우 우수하다. 따라서 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은, 피부상태의 개선 또는 치주질환을 치료하는 데 매우 우수한 효능을 발휘한다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 의약, 화장품, 치약, 구강청정용 조성물 또는 구강 보호용 조성물에 매우 유리하게 적용될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1: Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)- Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-Rink 아미드 레진의 합성

Fmoc-Rink 아미드 레진(Nova Biochem Cat No. 01-64-0013) 1.42 g(1 mmole)을 정확히 측량하여 반응용기에 넣고, 메틸렌 클로라이드(MC) 10 ml를 가하여 3분간 교반하였다. 용액을 제거하고, 디메틸포름아마이드(DMF)를 10 ml 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 탈보호용액(20%의 피페리딘/DMF) 10 ml를 반응용기에 넣고 10분간 상온에서 교반한 후 용액을 제거하였다. 동량의 탈보호용액을 넣고, 다시 10분간 반응을 유지한 후, 용액을 제거하고 DMF로 2회, MC로 1회, 다시 DMF로 3분씩 1회 세척하였다. 새로운 반응기에 10 ml의 DMF 용액을 넣고 이어, Fmoc-Tyr(tbu)-OH(Nava Biochem, USA) 2 mmole, HoBt 2 mmole 및 Bop 2 mmole을 넣은 후 교반하여 잘 용해시켰다. 반응기에 4 mmole의 DIEA(N,N'-Diisopropyl ethylamine)를 분획으로 2번에 걸쳐 넣고, 모든 고체가 용해될 때까지 최소한 5분간 교반하였다. 용해된 아미노산 혼합용액을 탈보호된 레진이 있는 반응용기에 넣고 1시간 동안 상온에서 교반하며 반응시켰다. 반응액을 제거하고, DMF 용액으로 3회 5분씩 교반하여 미반응 잔류물을 제거하였다. 반응 레진을 소량 취하여 카이저 테스트 (Ninhydrine test)를 이용하여 반응 정도를 점검하였다. 탈보호 용액으로 상기와 같이 동일하게 2번 탈보호 반응시켜 Tyr(tbu)-Rink 아미드 레진을 제조하였다. DMF와 MC로 충분히 세척하고, 다시 한번 카이저 테스트를 수행한 다음 상기와 동일하게 아미노산 부착 실험을 수행하였다. 도 1과 같이 선정된 아미노산 서열에 의거하여, Fmoc-Trp(Boc), Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Tyr(tBu), Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Arg(pbf), Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Arg(pbf) 및 Fmoc-Tyr(tBu) 순으로 연쇄 반응을 시켰다. 제조된 펩티딜 레진을 DMF, MC 및 메탄올로 각각 3번을 세척하고, 질소 공기를 천천히 흘려 건조한 후, P₂O₅하에서 진공으로 감압하여 완전히 건조하여 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)- Arg(pbf)-Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-Rink 아미드 레진을 제조하였다.

실시예 2: Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)- Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL-resin의 합성

클로로 트리틸 클로라이드 레진(Chloro trityl chloride resin: CTL resin, Nova Biochem Cat No. 01-64-0021) 700 mg을 반응용기에 넣고 메틸렌 클로라이 드(MC) 10 ml를 가하여 3분간 교반하였다. 용액을 제거하고 디메틸포름아마이드(DMF) 10 ml를 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 반응기에 10 ml의 디클로로메탄용액을 넣고, 이어 Fmoc-Tyr(tBu)-OH 200 mmole 및 DIEA 400 mmole을 넣은 후 교반하여 잘 용해하고, 1시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 후 세척하고 메탄올과 DIEA(2:1)를 MC에 용해하여 레진과 10분간 반응시킨 후, 과량의 DCM/DMF(1:1)로 세척하였다. 용액을 제거하고 DMF를 10 ml 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 탈보호 용액(20%의 피페리딘/DMF) 10 ml를 반응용기에 넣고 10분간 상온에서 교반한 후 용액을 제거하였다. 동량의 탈보호 용액을 넣고 다시 10분간 반응을 유지한 후 용액을 제거하고 DMF로 2회, MC로 1회, 다시 DMF로 3분씩 1회 세척하여 Tyr-(tBu)-CTL 레진을 제조하였다. 새로운 반응기에 10 ml의 DMF 용액을 넣고 Fmoc-Trp(Boc)-OH(Novabiochem, USA) 200 mmole, HoBt 200 mmole 및 Bop 200 mmole을 넣은 후 교반하여 잘 용해시켰다. 반응기에 400 mmole DIEA를 분획으로 2번에 걸쳐 넣은 후 모든 고체가 녹을 때까지 최소한 5분간 교반하였다. 용해된 아미노산 혼합용액을 탈보호된 레진이 있는 반응용기에 넣고 1시간 동안 상온에서 교반하면서 반응시켰다. 반응액을 제거하고 DMF 용액으로 3회 5분씩 교반한 후 미반응 용매를 제거하였다. 반응 레진을 소량 취하여 카이저 테스트(Ninhydrine test)를 이용하여 반응 정도를 점검하였다. 탈보호 용액으로 상기와 같이 동일하게 2번 탈보호 반응시켜 Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL 레진을 제조하였다. DMF와 MC로 충분히 세척하고 다시 한번 카이저 테스트를 수행한 다음 상기와 동일하게 아래의 아미노산 부착 실험을 수행하였다. 즉, 도 1과 같이 선정된 아미노 산 서열에 의거하여 Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Tyr(tBu), Fmoc-Lys(Boc), Fmoc-Arg(pbf), Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Arg(pbf) 및 Fmoc-Tyr(tBu) 순으로 연쇄반응을 시켰다. 제조된 펩티딜 레진은 DMF, MC 및 메탄올로 각각 3번을 세척하고, 질소 공기를 천천히 흘려 건조한 후, P₂O₅하에서 진공으로 감압하여 완전히 건조하여 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL 레진을 제조하였다.

실시예 3: Fmoc-데카펩타이드(Fmoc-YRSRKYTSWY-NH ₂ )의 합성

상기 실시예 1에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-Rink 아미드 레진에서 Fmoc을 제거하지 않은 상태로 탈루용액[트리플로로화 초산(Trifluroacetic acid: TFA) 81.5%, 증류수 5 %, 티오아니졸(Thioanisole) 5%, 페놀 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1% 포함] 30 ml을 넣은 후 상온에서 가끔 흔들어주며 2 시간 반응을 유지하였다. 필터링을 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제 전 Fmoc-데카펩타이드(Fmoc-YRSRKYTSWY-NH₂) 1.18 g을 수득하였다(수율 70.6%). 분자량 측정기(Perseptive Pioneer DE-STR ABI, USA)를 이용하여 분자량 1631.5(이론값 1630.84)를 얻을 수 있었다.

실시예 4: Ac-데카펩타이드(Ac-YRSRKYTSWY-NH ₂₎ 의 합성 및 정제

상기 실시예 1에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-Rink 아미드 레진에서 Fmoc-보호기를 탈보호 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 제거하였다. 새로운 반응기에 무수초산 2 ml, HoBt 2 mmole 및 Bop 2 mmole을 넣고, 4 mmole의 DIEA를 분획으로 2번에 걸쳐 넣은 후, 교반을 충분히 하였다. 레진 반응기에 미리 혼합한 무수초산 용액을 투입한 후, 30분간 반응을 유지하였다. DMF, MC 및 메탄올의 순서로 세 번씩 세척한 후 완전 건조시켰다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조시킨 펩티딜 레진을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액[TFA 81.5%, 증류수 5%, 티오아니졸 5%, 페놀 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1%] 30 ml을 넣고 상온에서 가끔 흔들어주며 2시간 반응을 유지하였다. 필터링을 하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제전 아세틸 데카펩타이드(Ac-YRSRKYTSWY-NH₂) 0.93 g을 수득하였다(수율 62.3%). 대용량 고성능 액상 크로마토그래피를 이용해 정제전 펩타이드를 분취하였으며, 주 펩타이드만 모아 증류하여 아세트나이트릴을 제거 한 후 동결건조를 통해 정제된 합성 펩타이드를 얻을 수 있었다. 최종 결과물인 펩타이드는 고성능 액상 크로마토그래피를 이용하여 분석하였을 때(도 1), 92%의 순도를 보였으며 최종 수율은 48%였다. 아울러 주 피크 부위를 선정해 분자량측정기로 측정한 결과, 분자량 1451.3(이론값 1450.63)을 얻어 원하는 펩타이드인 Ac-YRSRKYTSWY-NH₂가 효과적으로 잘 합성된 것을 확인할 수 있었다(도 2).

실시예 5: 포르밀-데카펩타이드(Formyl-YRSRKYTSWY-NH ₂ )의 합성

상기 실시예 1에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-Rink 아미드 레진에서 Fmoc-보호기를 탈보호 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 제거하였다. 신규의 반응기에 포름산 2 mmol, HoBt 2 mmole 및 Bop 2 mmole을 넣고, 4 mmole의 DIEA를 분획으로 2번에 걸쳐 넣은 후, 교반을 충분히 하였다. 레진반응기에 미리 혼합한 무수초산 용액을 투입한 후, 30분간 반응을 유지하였다. DMF, MC 및 메탄올의 순서로 세번씩 펩티딜 레진을 세척한 후 완전히 건조시켰다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조시킨 펩티딜 레진을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액(TFA 81.5%, 증류수 5 %, 티오아니졸 5%, 페놀 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1%) 30 ml을 넣은 후, 상온에서 가끔 흔들어주며 2시간 반응을 유지하였다. 필터링을 하여 레진을 여과한 다음, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고, 50 ml의 차가운 에테르를 가하 여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제전 포르밀 데카펩타이드(Formyl-YRSRKYTSWY-NH₂) 1.03 g을 수득하였다(수율 69.7%). 분자량 측정기를 이용하여 측정시 1437.3(이론값 : 1436.6)을 얻을 수 있었다.

실시예 6: 팔미토일-데카펩타이드(Palmitoyl-YRSRKYTSWY-NH ₂ )의 합성

상기 실시예 1에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-Rink 아미드 레진에서 Fmoc-보호기를 탈보호 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 제거하였다. 팔미토일 클로라이드(Sigma-Aldrich) 1.5 mmol을 DMF 5 ml에 용해하고 부풀린 레진이 있는 반응용기에 넣은 후 DIPEA 1.56 ml를 넣어 35℃에서 1시간 동안 반응을 유지하였다. DMF 30 ml로 3회, DCM 30 ml로 4회 세척하고, 질소 하에서 건조시킨 후, 오산화인(P₂O₅)을 이용하여, 감압상태에서 건조하여 곁가지가 팔미토일기로 보호된 데카펩타이드를 제조하였다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조시킨 펩티딜 레진 1 g을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액(TFA 81.5%, 증류수 5 %, 티오아니졸 5%, 페놀 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1%) 10 ml을 넣고 상온에서 가끔 흔들어주며 1시간 반응을 유지하였다. 필터링을 하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고, 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전 을 모으고 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제전의 팔미토일 데카펩타이드(Palmitoyl-YRSRK YTSWY-NH₂) 1.25 g을 수득하였다(수율 73.4%). 분자량 측정기를 이용하여 측정시 분자량 1663.9(이론값 1663.01)를 얻을 수 있었다.

실시예 7-8: 미리스틸-테카펩타이드(Myristyl-YRSRKYTSWY-NH ₂ ) 및 스테아릴-데카펩타이드(Stearyl-YRSRKYTSWY-NH ₂ )의 합성

상기 실시예 1에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-Rink 아미드 레진을 두 개의 배취로 제조하고 Fmoc-보호기를 탈보호 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 제거하였다. 용기에 각각 미리스틸(Myristyl)-클로라이드(Sigma-Aldrich) 1.5 mmol(미리스틸 테카펩타이드의 경우)와 스테아릴(Stearyl)-클로라이드(Sigma-Aldrich) 1.5 mmol(스테아릴 테카펩타이드의 경우)을 DMF 5 ml에 용해한 후, 부풀린 각 배취의 레진이 있는 각 반응용기에 넣고 DIPEA 1.56 ml를 넣은 후 35℃에서 1시간 동안 반응을 유지하였다. DMF 30 ml로 3회, DCM 30 ml로 4회 세척하고, 질소 하에서 건조한 후, 오산화인(P₂O₅)을 이용하여 감압상태에서 건조하여 곁가지가 미리스틸 또는 스테아릴기로 각각 보호된 데카펩타이드를 제조하였다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조된 펩티딜 레진 1 g을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액(TFA 81.5%, 증류수 5 %, 티오아니졸 5%, 페놀 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1%) 10 ml을 넣고 상온에서 가끔 흔들어주며 1시간 반응을 유지하였다. 필터링을 하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후, 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제전의 미리스틸 테카펩타이드 (Myristyl-YRSRKYTSWY-NH₂) 1.26 g(수율 75.2%)과 스테아릴 데카펩타이드(Stearyl-YRSRKYTSWY-NH₂) 1.34 g(수율 77.4%)을 수득하였다.

분자량 측정기를 이용하여 측정시 미리스틸 테카펩타이드의 경우 1634.9(이론값 1634.96)를, 스테아릴 데카펩타이드의 경우 1692.2(이론값 1691.1)를 얻을 수 있었다.

실시예 9: Fmoc-데카펩타이드(Fmoc-YRSRKYTSWY-OH)의 합성

상기 실시예 2에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL-resin을 TFA:TIS:물 (95:2.5:2.5)로 구성된 용액으로 1시간 반응시킨 후, 필터링하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 충분 량의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전물을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 질소 분위기 하에서 충분히 건조하여 정제 전 Fmoc-데카펩타이드(Fmoc-YRSRKYTSWY- OH) 1.3 g을 수득하였다(수율 77.7%). 분자량 측정기를 이용하여 측정 시 1632.5(이론값 1631.84)를 얻을 수 있었다.

실시예 10: 아세틸-데카펩타이드(Ac-YRSRKYTSWY-OH)의 합성

상기 실시예 2에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL-resin을 DMF로 충분히 부풀게 한 후 용액을 제거하고 20% 피페리딘/DMF 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 보호된 Fmoc을 제거하였다. 신규의 반응기에 무수초산 2 ml, HoBt 610 mg 및 Bop 1.77 g을 넣고 1.56 ml의 DIEA를 분획으로 2번에 걸쳐 넣어 충분히 교반하였다. 레진반응기에 미리 혼합한 무수초산 용액을 투입하고 30분간 반응을 유지하였다. DMF, MC 및 메탄올의 순서로 세 번씩 펩티딜 레진을 세척한 후 완전히 건조시켰다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조시킨 펩티딜 레진을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액(TFA 95%, 증류수 2.5% 및 티오아니졸 2.5%) 30 ml을 넣고, 상온에서 가끔 흔들어주며 2시간 동안 반응을 유지하였다. 필터링하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제전 아세틸 데카펩타이드(Ac-YRSRKYTSWY-OH) 0.98 g을 수득하였다(수율 65.7 %).

정제전 펩타이드를 대용량 고성능 액상 크로마토그래피를 이용해 분취하였으 며 주 펩타이드만 모아 증류하여 아세트나이트릴을 제거한 후 동결건조를 통해 정제된 합성 펩타이드 0.72 g을 얻을 수 있었다. 최종 결과물인 펩타이드는 고성능 액상 크로마토그래피를 이용하여 분석하였을 때, 96%의 순도를 보였으며 최종 수율은 70.9%로 매우 우수한 결과를 보여 주었다. 아울러 주 피크 부위를 선정해 분자량측정기로 측정하였을 때 1452.6(이론적 계산 시: 1451.63)을 얻어 원하는 펩타이드인 Ac-YRSRKYTSWY-OH가 효과적으로 잘 합성된 것을 확인할 수 있었다.

실시예 11: 포르밀-데카펩타이드(Formyl-YRSRKYTSWY-OH)의 합성

상기 실시예 2에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL-resin을 DMF로 충분히 부풀게 한 후 용액을 제거하고 20% 피페리딘/DMF 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후, 잘 세척하여 보호된 Fmoc을 제거하였다. 신규의 반응기에 무수초산 2 ml, HoBt 610 mg 및 Bop 1.77 g을 넣은 후, 1.56 ml의 DIEA를 분획으로 2번에 걸쳐 넣어 교반을 충분히 하였다. 레진반응기에 미리 혼합한 무수초산 용액을 투입하고, 30분간 반응을 유지하였다. DMF, MC 및 메탄올의 순서로 세 번씩 펩티딜 레진을 세척한 뒤 완전히 건조시켰다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조시킨 펩티딜 레진을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액(TFA 95%, 증류수 2.5% 및 티오아니졸 2.5%) 30 ml을 넣고, 상온에서 가끔 흔들어주며 2시간 동안 반응을 유지하였다. 필터링을 하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에 테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제전의 포르밀 데카펩타이드(Formyl-YRSRKYTSWY-OH) 1.28 g을 수득하였다(수율 86.6%). 분자량 측정기를 이용하여 측정시 1438.1(이론값 1437.6)을 얻을 수 있었다.

실시예 12: 팔미토일-데카펩타이드(Palmitoyl-YRSRKYTSWY-OH)의 합성

상기 실시예 2에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL-resin을 DMF로 충분히 부풀게 한 후, 용액을 제거하고 20% 피페리딘/DMF 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 보호된 Fmoc을 제거하였다. 팔미토일 클로라이드 1.5 mmol을 DMF 5 ml에 용해한 후 부풀린 레진이 있는 반응용기에 넣고 DIPEA 1.56 ml를 넣은 후 35℃에서 1시간 동안 반응을 유지하였다. DMF 30 ml로 3회, DCM 30 ml로 4회 세척하고, 질소 분위기 하에서 건조한 후, 오산화인(P₂O₅)을 이용하여, 감압상태에서 건조하여 곁가지가 팔미토일기로 보호된 데카펩타이드를 제조하였다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조시킨 펩티딜 레진 1 g을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액(TFA 95%, 증류수 2.5% 및 티오아니졸 2.5%) 30 ml을 넣고, 상온에서 가끔 흔들어주며 1시간 동안 반응을 유지하였다. 필터링하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후 원심 분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 분위기 하에서 충분히 건조하여 정제전의 팔미토일 데카펩타이드(Palmitoyl-YRSRKYTSWY-OH) 1.33 g을 수득하였다(수율 73.4%). 분자량 측정기를 이용하여 측정시 1664.7(이론값 : 1664.01)을 얻을 수 있었다.

실시예 13-14: 미리스틸 테카펩타이드(Myristyl-YRSRKYTSWY-OH) 및 스테아릴 데카펩타이드(Stearyl-YRSRKYTSWY-OH)의 합성

상기 실시예 2에서 제조된 Fmoc-Tyr(tBu)-Arg(pbf)-Ser(tBu)-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Trp(Boc)-Tyr(tBu)-CTL-resin을 두 개의 배취 반응기에 각각 넣고, DMF로 충분히 부풀게 한 후 용액을 제거하고 20% 피페리딘/DMF 용액으로 10분씩 2번 반응시킨 후 잘 세척하여 보호된 Fmoc을 제거하였다. 용기에 각각 미리스틸(Myristyl)-클로라이드 1.5 mmol(미리스틸 데카펩타이드의 경우)과 스테아릴(Stearyl)-클로라이드 1.5 mmol(스테아릴 데카펩타이드의 경우)을 DMF 5 ml에 용해한 후 부풀린 각 배취의 레진을 각 반응용기에 넣고 DIPEA 1.56 ml를 넣은 후 35℃에서 1시간 동안 반응을 유지하였다. DMF 30 ml로 3회, DCM 30 ml로 4회 세척한 뒤 질소 분위기 하에서 건조하였다. 오산화인(P₂O₅)을 이용하여, 감압상태에서 건조하여 곁가지가 각각 미리스틸기 및 스테아릴기로 보호된 데카펩타이드를 제조하였다. 둥근 바닥 플라스크에 완전히 건조시킨 펩티딜 레진 1 g을 넣었다. 미리 조제한 탈루용액(TFA 81.5%, 증류수 5%, 티오아니졸 5%, 페놀 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1%) 10 ml을 넣고, 상온에서 가끔 흔들어주며 1시간 동안 반응을 유지하였다. 필터링 하여 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고, 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제 전의 미리스틸 데카펩타이드(Myristyl-YRSRKYTSWY-OH) 1.52 g(수율 90.6%)과 스테아릴 데카펩타이드(Stearyl-YRSRKYTSWY-OH) 1.35 g(수율 77.9%)을 수득하였다. 분자량 측정기를 이용하여 측정시 미리스틸 데카펩타이드의 경우 1637.1(이론값 : 1635.96)을, 스테아릴 데카펩타이드의 경우 1692.8(이론값: 1692.07)을 얻을 수 있었다.

실시예 15: 아세틸-데카펩타이드의 염기성 섬유아세포성장인자 수용체에 대한 결합능력 분석

정제된 아세틸 데카펩타이드의 염기성 섬유아세포성장인자 수용체 결합능력을 확인하기 위하여, 베어드 등의 방법(Baird, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:2324-2328(1988))을 참조하여 유아 햄스터 신장세포(BHK, baby hamster kidney cell, 한국세포주은행)를 이용하여 동위원소(¹²⁵I)로 표지화된 bFGF(Amersham)와의 결합경쟁능력을 측정하였다. 세포를 48 조직 배양용 평판용기에 배양한 후 0.2%의 젤라틴이 함유된 냉장된 Ham's F12 배지(Sigma-Aldrich)로 세척하였다. ¹²⁵I-bFGF 200 fmol 및 1-100 nmol의 아세틸 데카펩타이드를 200 ㎕의 완충용액에 용해한 후, 세포에 첨가한 다음 2시간 동안 배양하였다. 배양 후 원심분리를 통하여 세포만을 얻은 후, 0.1% Triton X-100을 이용하여 세포막만을 분리하고 그 분획을 감마계수기(gamma scintillation counter) (Packard, U.S.A)를 사용하여 세포막 수용체에 결합되어 있는 ¹²⁵I-bFGF 방사능을 측정하였다(도 3).

도 3에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 아세틸 데카펩타이드의 경우 bFGF와 경쟁적으로 bFGF 수용체에 결합한다는 것을 알 수 있으며, bFGF 수용체에 대한 높은 결합능력을 가지고 있음을 알 수 있다.

실시예 16: 아세틸 데카펩타이드의 생리활성도 측정

정제된 아세틸 데카펩타이드의 생리 활성도는 리지노 등의 방법(Rizzino, et al. Cancer Res., 48:4266(1988))을 참조하여 3T3 섬유아세포주(한국세포주은행)를 이용한 [³H]-thymidine의 흡수율로 측정하였다. 3T3 섬유아세포주를 100% FBS(fetal bovine serum)가 함유된 EMEM(Eagle's minimal essential media, Gibco, U.S.A.)이 들어 있는 250 ㎖ 용량의 조직 배양용 플라스크를 이용하여 배양하였다. 배양된 3T3 섬유아세포주를 0.25% 트립신 용액으로 배양용기 바닥에서 떼어낸 후 원심분리하여 세포 침전물만을 모았다. 이를 FBS가 함유되지 않은 EMEM 배양액에 다시 현탁한 후, 24-웰 조직 배양용 평판에 각 웰 당 2 x 10⁴ 세포/0.3 ㎖ 배양액이 되도록 넣고 24시간 동안 37℃, 7% CO₂ 조건 하에서 배양하였다. 본 발명의 아세틸 데카펩타이드를 0.2% 소혈장알부민(bovine serum albumin)(w/v)이 함유된 EMEM 배양액으로 2 ng/㎖ 농도로부터 두배씩 연속적으로 희석하여 각 웰에 0.3 ㎖씩 첨가한 후 37℃, 7% CO₂조건하에서 6시간 더 배양하였다. 그 후, 각 웰에 0.5 μCi의 [³H]-thymidine(Amersham, TRK 686, 68Ci/mmol)을 넣고 밤새 배양하였다. 배양이 완료된 후 배양 상층액을 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)로 1회 세척하였다. 각 웰에 0.25% 트립신 용액 0.1 ㎖씩을 넣고 37℃에서 5분간 방치한 후 세포들을 배양판에서 분리하였다. 10% FBS가 함유된 EMEM 배양액 0.5 ㎖씩을 각 웰에 첨가하고, 세포 포집기(12 well cell harvester, Millipore, U.S.A.)를 사용하여 세포를 유리섬유 필터에 부착시켰다. 필터를 1 ㎖의 증류수로 1회 그리고 1 ㎖의 에탄올로 1회 세척한 후 60℃에서 30분간 방치하여 건조시켰다. 건조된 필터를 2 ㎖의 섬광칵테일(scintillation cocktail)과 함께 섬광바이알(scintillation vial)에 넣고 30분간 상온에서 방치시킨 후, 섬광계수기(Beckman, U.S.A)로 세포 내에 흡수된 방사능 양을 측정하였다.

도 4에서 볼 수 있는 바와 같이, 본 발명의 아세틸 데카펩타이드는 섬유아세페오에 티미딘이 삽입(incorporation)되는 것을 농도-의존적으로 촉진시키고 있음을 알 수 있다. 따라서 본 발명의 아세틸 데카펩타이드는 bFGF와 같이 높은 생리활성도(biological activity)를 가지고 있음을 알 수 있다.

실시예 17: 아세틸 데카펩타이드의 안정성 평가

정제된 아세틸 데카펩타이드의 안정성을 확인하기 위하여, 10 ㎍/ml이 되도록 데카펩타이드와 아세틸 데카펩타이드를 50 mM Tris-HCl(pH 8.0) 완충용액에 용해하였다. 대조군으로서 1 ㎍/ml의 농도로 대장균으로부터 생산된 재조합 bFGF(Sigma-Aldrich)를 동일 완충용액에 준비했다. 준비된 용액을 유리 바이알에 넣은 후 37℃에서 정치하였다. 37℃에 정치된 용액을 0, 1, 10, 25, 50, 75 그리고 100일째에 샘플링하여 NIH-3T3 cell(한국세포주은행)에 대한 MTT 분석(Scudiero, D. A., et al. Cancer Res. 48:4827-4833(1988))를 실시하여 남아있는 펩타이드와 bFGF의 활성을 측정하였다(도 5). 이때 0일의 샘플 활성을 100%로 기준하였다.

도 5에서 볼 수 있는 바와 같이, 재조합 bFGF의 경우 시간이 경과함에 따라 활성도가 급격히 감소됨을 알 수 있으나, 본 발명에 의한 데카펩타이드의 경우 활성도가 오랫동안 지속됨을 확인할 수 있었다. 특히, N-말단이 아세틸기로 보호된 아세틸 데카펩타이드는 매우 우수한 안정성을 나타낸다.

실시예 18: 나노화 펩타이드의 제조

상기 실시예에서 얻은 아세틸 데카펩타이드 50 mg을 정확히 칭량한 뒤 증류수 500 ml로 충분히 교반하여 용해하였다. 펩타이드 용액을 레시틴 5 g, 소듐 올리에이트(sodium oleate) 0.3 ml, 에탄올 50 ml 그리고 약간의 유상과 함께 혼합한 후, 총량이 1 L가 되도록 증류수로 양을 맞춰 준 다음, 마이크로플루다이저로 고압 을 이용하여 유화시켜 사이즈 100 nm 정도의 나노좀을 제조하였다. 제조된 나노좀은 최종 농도가 약 50 ppm으로 화장품 제조용으로 사용되었다.

제형예 1: 유연화장수

상기 실시예 18에서 제조된 아세틸 데카펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 유연화장수를 일반적인 화장수 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
아세틸-데카펩타이드	0.001
1,3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
PEG 1500	1.0
소듐히알루로네이트	1.0
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	8.0
방부제, 색소	적량
벤조페논-9	0.05
향	미량
정제수	잔량
합계	100

제형예 2: 영양크림

상기 실시예 18에서 제조된 아세틸 데카펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 영양크림을 일반적인 영양크림 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
아세틸-데카펩타이드	0.001
메도우폼오일	3.0
세테아릴알콜	1.5
스테아린산	1.5
글리세릴스테아레이트	1.5
유동 파라핀	10.0
밀납	2.0
폴리솔베이트60	0.6
솔비탄 세스퀴올레이트	2.5
스쿠알란	3.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
글리세린	5.0
트리에탄올아민	0.5
토코페릴아세테이트	0.5
방부제, 색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

제형예 3: 영양화장수

상기 실시예 18에서 제조된 아세틸 데카펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 영양화장수를 일반적인 화장수 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
아세틸-데카펩타이드	0.002
1,3-부틸렌글리콜	4.0
글리세린	4.0
세테아릴알콜	0.8
글리세릴스테아레이트	1.0
트리에탄올아민	0.13
토코페릴아세테이트	0.3
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다미아너트오일	2.0
폴리솔베이트60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
카르복시비닐폴리머	1.0
방부제,색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

제형예 4: 에센스

상기 실시예 18에서 제조된 아세틸 데카펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 에센스를 일반적인 에센스 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
아세틸-데카펩타이드	0.005
글리세린	10.0
1,3-부틸렌글리콜	5.0
PEG 1500	2.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
히드록시에틸 셀룰로오스	0.1
소듐히알루로네이트	8.0
카르복시비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.18
옥틸도데세스-16	0.4
에탄올	6.0
향, 방부제, 색소	적량
정제수	잔량
합계	100

제형예 5: 구강청정제

상기 실시예에서 제조된 아세틸 데카펩타이드를 포함하는 하기 조성으로 이루어진 구강청정제를 일반적인 구강청정제 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
아세틸-데카펩타이드	0.005
에탄올	15
글리세린	10
폴리옥시에칠렌경화피마자유	2
삭카린	0.15
안식향산 나트륨	0.05
향료	적량
인산2수소나트륨	0.1
착색제	적량
정제수	72.7

제형예 6: 치약

상기 실시예에서 제조된 아세틸 데카펩타이드를 포함하는 하기 조성으로 이루어진 치약제를 일반적인 치약제 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
아세틸-데카펩타이드	0.005
제2인산칼슘2수염	45
실리카	2
글리세린	15
카르복시메칠셀룰로오스나트륨	1
카라기난	0.3
라우릴황산나트륨	1.5
삭카린나트륨	0.1
향료	적량
파라옥시안식향산나트륨	0.01
정제수	35.09

실시예 19: 본 발명의 펩타이드의 HaCaT 각질세포성장 효과 능력 분석

본 발명의 펩타이드에 대한 각질세포의 성장효과를 분석하기 위해 리지노 등의 방법(Rizzino, et al. Cancer Res., 48:4266(1988))등을 참조하여, HaCaT 각질세포주를 이용한 SRB(Sulforhodamine B)의 비색법을 이용하여 측정하였다. HaCaT 각질세포주(한국세포주은행)를 100% FBS(fetal bovine serum)가 함유된 EMEM(Eagle's minimal essential media, Gibco, U.S.A.)이 들어 있는 250 ㎖ 용량의 조직 배양용 플라스크를 이용하여 배양하였다. 배양된 HaCaT 각질세포주를 0.25% 트립신 용액으로 배양용기 바닥에서 떼어낸 후 원심 분리하여 세포 침전물만을 모았다. 이를 FBS가 함유되지 않은 EMEM 배양액에 다시 현탁한 후, 96-웰 조직 배양용 평판에 각 웰 당 4 x 10³ 세포가 되도록 넣고, 24시간 동안 37℃, 7% CO₂ 조건 하에서 배양하였다. 24시간 뒤 혈청을 완전히 제외한 동일한 배양액으로 배지를 교환한 뒤 표준을 잡기위한 공 시료와 사람의 bFGF, 그리고 아세틸-데카펩타이드를 물과 10% DMSO에 멸균상태로 용해한 다음, 10 ng과 1,000 ng의 농도로 72시간을 위와 동일 조건으로 배양하였다. 배양이 완료된 후 배양 상층액을 제거하고 PBS로 1회 세척하였다. 세척용액을 제거한 뒤 비색 SRB 용액(Sigma-Aldrich)으로 처리하고 PBS로 충분히 세척을 한 뒤 현미경으로 세포를 관찰하여 생존 세포의 상태를 관찰하였으며, 자외선 590 nm에서 흡광도를 측정하여 세포의 생존상태를 측정하였다(도 6). 또한, 도 7은 세포에 펩타이드 처리 후 72시간 뒤의 세포의 생존상태를 현미경으로 검경한 그림이다.

한편, 6일 동안 본 발명의 아세틸 테카펩타이드(1 ㎍/ml)를 HaCat 세포주에 처리하여 피부주름개선의 표지인자인 프로콜라겐의 양의 변화를 관찰하였다(도 8). 프로콜라겐의 양은 Procollagen ELISA 키트(Takara)를 이용하여 측정하였다. 또한, 72시간 동안 본 발명의 아세틸 데카펩타이드 5 μmole을 HaCat 세포주에 처리하여 피부주름개선의 또 다른 표지인자인 라미닌 및 히알론산의 농도를 측정하였다(도 9). 라미민 및 히알론산의 농도는 Laminin ELISA 키트(CHEMICON, 미국) 및 Hyaluronic acid ELISA 키트(Echelon Biosciences Inc, 미국)를 이용하여 측정하였다.

도 6 및 7에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 펩타이드는 대조군에 비해 높은 세포 생존율을 나타냄을 알 수 있다. 본 발명의 펩타이드를 HaCaT 각질세포주에 처리한 경우 세포내 프로콜라겐의 함량이 처리 시간에 의존적으로 증가함을 알 수 있다(도 8). 또한, 본 발명의 펩타이드는 라미닌과 히알론산의 양도 크게 증가시키는 작용을 한다는 것을 알 수 있다(도 9).

따라서 본 발명의 펩타이드는 매우 우수한 피부 개선 효능을 발휘한다는 것을 알 수 있다.

실시예 20: 본 발명의 펩타이드에 의한 피부 두께 변화 측정

본 발명의 펩타이드의 화장품으로서의 유용성과 생체 내 효능을 알아보기 위하여, 상기의 제형예 2에서 제조한 영양크림을 마우스 피부에 적용시켰다.

실험에 사용한 Balb C 마우스(중앙실험동물, 한국)는 6주령 수컷으로서 구입 후 일주일간의 안정기를 거친 뒤 등 부위를 티오글리콜산이 함유된 크림을 이용해 부분 제모 하였다. 제모 후 동물을 두 그룹으로 나눠서 한 그룹은 제형예 2의 아세틸 데카펩타이드를 함유한 나노좀을 포함한 크림으로 또 한 그룹은 펩타이드가 들어 있지 않은 공 크림으로 아침 8:30 과 저녁 6:00에 100 mg 씩을 제모한 부위에 도포하였다. 5일간 크림을 처리 후 동물을 경추 탈골시켜 치사시킨 뒤 피부의 조직을 잘라서 파라핀으로 고정시키고, 마이크로톰으로 8 ㎛의 두께로 박편시료를 만든 뒤 슬라이드에 고정시키고 헤마톡실린/에오신 염색을 하여 광학 현미경으로 검경을 하였다(도 10).

도 10에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 아세틸 데카펩타이드를 함유하는 나노좀 화장품은 마우스의 각질세포층 및 상피세포층을 명확하게 성장시킬 수 있음을 알 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩타이드를 화장품으로 하여 피부에 적용시키면, 우수한 피부 주름 개선 및 탄력 개선 효능이 발휘될 수 있음을 알 수 있다.

실시예 21: 발모 효능 분석

Balb C 마우스의 등 부위를 제모하고, 탈모유발 물질인 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone: DHT, TCI사)을 8일 동안 처리하여, 케라티노사이트가 증식되기 전인 성장기(anagen stage)가 되도록 유발하였다. 그런 다음, 본 발명에서 제조한 의 제형예 2를 10일 동안 하루에 1회 제모 부위에 도포하여 모발의 성장 정도를 관찰하였다.

실험동물을 제모한 후 19일이 경과한 후 관찰한 결과, 제모만 실시한 군에서는 정상적으로 털이 자라는 것을 확인하였고, DHT를 8일간 처리하고 10일이 경과한 군은 시간이 경과하여도 거의 털이 자라지 않았다. DHT를 8일간 처리하고 본 발명의 제형예 2를 처리한 군에서는 시간이 경과함에 따라 정상군과 유사하게 털이 자라는 것을 관찰하였다. 따라서, 본 발명의 펩타이드는 동물 모델 실험에서도 발모 촉진 효과가 매우 우수하다는 것을 알 수 있다.

실시예 22: 치주질환(잇몸 질환)에 대한 치료 효능 분석

본 발명의 펩타이드가 치주질환에 대하여 치료 효능이 있는 지 여부를 조사하였다. 우선, 본 발명의 아세틸 데카펩타이드를 포함하는 구강 청정제를 다음과 같은 조성비로 제조하였다: 펩타이드(0.01 wt%), 글라이세롤(12 wt%), 소비톨(10 wt%), 프로필렌 글리콜(2.8 wt%), SDS-SLS(0.4 wt%), NaF(0.06 wt%) 및 물(to 100 wt%).

이어, 평소 치주질환을 가지는 성인 20명을 2 그룹으로 나누고, 각각의 그룹에 본 발명의 펩타이드-함유 구강 청정제(실험예) 및 펩타이드-비함유 구강 청정제(비교예)를 적용하였다. 구강 청정제에 의한 구강의 세척은 하루에 3번 각각 1회씩 하도록 하였고, 총 30일 동안 적용하였다. 30일이 경과한 다음, 치주질환(잇몸 질환)의 정도를 알 수 있는, 잇몸출혈지수(sulcus bleeding index)를 결정하였다.

항목	비교예		실험예
잇몸출혈지수	0일	30일	0일	30일
	2.01± 0.33	2.42± 0.43	1.98± 0.62	1.25± 0.31

상기 표에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 구강청정제는 잇몸출혈의 정도를 보여주는 잇몸출혈지수를 크게 감소시키고 있음을 알 수 있다. 이러한 효과는 본 발명의 펩타이드에 의한 잇몸 상처의 효과적인 치료에 의해 달성되는 것으로 판단된다. 따라서 본 발명의 구강청정제는 치주질환(잇몸질환)을 가지는 사람의 구강 위생을 증진시킬 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 효능이 우수할 뿐만 아니라 안정성이 천연 bFGF와 비교하여 매우 우수하며, 피부 투과도가 매우 우수하다. 따라서 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물은, 피부 상태의 개선 또는 치주질환을 치료하는 데 매우 우 수한 효능을 발휘한다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 의약, 화장품, 치약, 구강청정용 조성물 또는 구강 보호용 조성물에 매우 유리하게 적용될 수 있다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> Caregen Co., Ltd. <120> Peptides Exhibiting Efficacies of Improvement in Skin Conditions or Treatment of Periodental Diseases <150> KR10-2005-0100391 <151> 2005-10-24 <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide having functions and actions of basic fibroblast growth factor <400> 1 Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr 1 5 10

Claims

서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부 상태의 개선 또는 치주질환의 치료용 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 (a) 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 (a) 서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount); 및 (b) 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 화장품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 피부 상태의 개선은 주름개선, 피부탄력 개선, 피부노화 방지, 탈모 방지 또는 발모촉진, 피부보습 개선, 검버섯 제거 또는 여드름 치료인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 치주질환의 치료 효능을 가지며, 상기 조성물은 치약(toothpaste), 구강청정용 조성물 또는 구강보호용 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 서열목록 제1서열의 아미노산 서열에서 적어도 하나의 아미노산은 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 6 항에 있어서, 상기 보호기가 결합되는 아미노산은 서열목록 제1서열의 아미노산 서열에서 N-말단에 있는 Tyr 잔기인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드는 천연(naturally occurring) 염기성 섬유아세포 성장인자 보다 안정성이 높은 것을 특징으로 하는 조성물.
서열목록 제1서열의 아미노산 서열을 포함하며, 서열목록 제1서열의 아미노산 중에서 적어도 하나의 아미노산이 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 결합되어 있고, 천연(naturally occurring) 염기성 섬유아세포 성장인자 보다 안정성이 높은 펩타이드.
제 9 항에 있어서, 상기 보호기가 결합되는 아미노산은 서열목록 제1서열의 아미노산 서열에서 N-말단에 있는 Tyr 잔기인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
제 9 항에 있어서, 상기 보호기는 아세틸기인 것을 특징으로 하는 펩타이드.