KR20070033133A

KR20070033133A - 아토피 예방 및 치료용 피부외용제 조성물

Info

Publication number: KR20070033133A
Application number: KR1020050087488A
Authority: KR
Inventors: 곽의종; 조용백; 한창균; 이은주; 김주현; 윤세준; 신정주; 이순근
Original assignee: 에스케이케미칼주식회사
Priority date: 2005-09-21
Filing date: 2005-09-21
Publication date: 2007-03-26

Abstract

본 발명은 아토피 예방 및 치료용 피부외용제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 진교, 용담 및 은행잎 1종 이상의 추출물이 아토피 피부염과 같은 각종 피부질환의 증세를 치료 또는 경감시키는 활성이 탁월함을 확인하여 이들을 포함하는 아토피 피부염과 같은 각종 피부질환 예방 및 치료용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

아토피, 진교, 용담, 은행잎

Description

아토피 예방 및 치료용 피부외용제 조성물{A composition for external preparation for the protection and the treatment of atopic dermatitis}

도 1은 본 발명에 따른 생약재 추출물의 아토피 동물모델에서의 아토피 저해효과를 촬영한 사진이다.

도 2는 아토피 유발 동물모델을 이용하여 본 발명에 따른 생약재 추출물에 의한 아토피 저해 효과를 관능 평가하여 도시한 것이다.

도 3은 아토피 유발 동물모델을 이용하여 본 발명에 따른 생약재 추출물에 의한 아토피 저해 효과를 보여주는 조직검경 사진이다.

도 4는 아토피 유발 동물모델에서 본 발명에 따른 생약재 추출물이 비만세포의 침윤과 탈과립에 미치는 효과를 도시한 것이다.

도 5는 아토피 유발 동물모델을 이용하여 본 발명에 따른 생약재 추출물의 피부 도포용 제제에 의한 아토피 저해 효과를 관능 평가하여 도시한 것이다.

도 6은 본 발명에 따른 생약재 추출물 제제의 아토피 저해 효과를 보여주는 조직검경 사진이다.

도 7은 아토피 유발 동물모델에서 본 발명에 따른 생약재 추출물의 피부 도포용 제제가 비만세포의 침윤과 탈과립에 미치는 효과를 도시한 것이다.

피부질환이란 사람을 포함한 포유동물의 머리털과 손톱, 발톱을 포함하는 모든 피부에 나타나는 이상 소견을 의미하는 것으로, 아토피 알러지를 가진 사람에게서 나타나는 아토피 피부염(atopic dermatitis)이 대표적인 질환이다.

아직까지 아토피 피부염의 원인은 명확히 밝혀지지 않았지만 아토피 피부염 환자의 약 70%에서 아토피의 병력이 있었으며, 알레르기성 체질인 사람에서 호발하고, 특히 다른 알러지 질환인 알러지성 비염, 천식 등을 동반하여 유전적 요인이나 면역 질환의 하나로 이해하고 있다. 이 병의 특징으로 초기의 심한 가려움증에 의해 대부분이 피부를 긁고 이에 따른 2차 감염과 특히 환자의 정신적 안정 및 감정의 상태에 따라 더욱 악화될 수도 있다.

아토피 피부염은 상당히 많은 사람들이 앓고 있는데, 전 인구의 0.5~1%가, 어린이의 경우는 5~10%가 고통 받고 있다. 증상이 나타나는 시기는 대체로 생후 2~6개월 내이며, 특히 1세 미만의 영아에게서 가장 많이 나타나고, 85%가 만 다섯 살 안에 나타난다. 아토피성 피부염은 주로 유아기에 자주 발생하지만, 최근에는 사춘기 이후의 환자가 증가하고 있고, 그 병력도 매우 길어지고 있다. 아토피성 피부염의 치료에는, 높은 약리효과를 기대할 수 있는 부신피질 호르몬 등의 약제가 사용되고 있다. 그러나, 이와 같은 부신피질 호르몬제의 부작용이 문제가 되고 있고, 환자는 치료기간 중에 부작용의 위험에 노출되어 있다. 더욱이, 부신피질 호르몬제의 사용 중지에 의하여 리바운드(약물의 사용정지 후에 일어나는 극적인 환부의 병세악화)가 생기는 것도 잘 알려져 있다. 이와 같은 부작용의 대책으로서, 부신피질 호르몬 등의 호르몬을 포함하지 않는 비스테로이드성 항염증제 또는 항히스타민제 등이 사용되고 있으나 완치가 어려운 상태이다. 따라서, 부작용이 없는 아토피 피부염의 경감 또는 치료제 개발이 매우 절실한 실정이다.

이에, 본 발명자들은 아토피와 같은 피부질환의 치유, 경감 및 예방에 효과가 있는 피부 외용제를 개발하기 위하여 여러 천연 생약재를 스크리닝한 결과, 진교, 용담 또는 은행잎이 저자극성이며 아토피 예방 및 치료에 탁월한 효과가 있음을 알게 되어 아토피 예방 및 치유에 효과가 있는 피부 외용제 조성물을 개발함으로써 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 진교, 용담 및 은행잎 중에서 선택된 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 예방 및 치유에 효과가 있는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명은 진교, 용담 및 은행잎 중에서 선택된 1종 이상의 추출물을 함유하는 아토피 예방 및 치료용 피부 외용제 조성물을 그 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 진교, 용담 및 은행잎 중에서 선택된 1종 이상의 추출물이 아토피 피부염과 같은 각종 피부질환의 증세를 치료 또는 경감시키는 활성이 탁월함을 확인하여 이들을 포함하는 아토피 피부염과 같은 각종 피부질환 예방 및 치료용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 아토피 예방 및 치료 효과에 유용한 피부 외용제 조성물로 유효한 생약재는 다음과 같다.

진교(Gentianae Macrophyllae Radix)는 용담과(Gentianaceae)에 속하는 큰잎용담(Gentiana macrophylla Pallas)의 뿌리로, 겐티아닌(gentianine), 겐티아니딘(gentianidine) 등의 알칼로이드 성분, 겐티오피크로시드(gentiopicroside), 스웨로시드(sweroside) 등의 이리도이드 성분 등을 함유되어 있으며, 소염작용, 해열 진통작용, 혈당 및 혈압 강하작용 등의 생리활성이 알려져 있어 예로부터 관절염 등에 사용되어 왔다.

용담(초용담, Gentianae Scabrae Radix)은 용담과(Gentianaceae)에 속하는 용담(Gentiana scabra Bunge) 또는 이의 동속식물의 뿌리 및 뿌리줄기로, 우리나 라, 일본, 중국에 널리 분포한다. 주요 성분은 진교와 거의 유사한 성분이 들어 있으며, 진교와 유사하게 소염작용, 해열작용 등이 알려져 있다.

은행잎(백과엽)은 은행나무(Ginkgo biloba L.)의 잎으로 매우 다양한 성분을 포함하나 주성분은 플라보이드 및 이의 배당체, 테르펜(terpene)계 화합물 등이며 이들 성분이 다양한 생리 활성 및 약리 작용을 가지고 있음이 알려져 현재는 은행잎 플라본 글리코사이드(flavone glycoside)를 말초 혈액순환 개선제로서 제품화하여 시판되고 있다. 또한, 은행잎에 다량 함유된 이소깅제틴(isoginkgetin), 깅제틴(ginkgetin) 등의 바이플라보노이드 성분들도 항염증 작용, 항류마티스 작용, 항암 작용 및 진통작용 등의 생리 활성에 대하여 보고된 바 있다[대한민국 특허등록 제100744호, 제106308호, 제267060호].

본 발명에서는 상기 진교, 용담 및 은행잎 중에서 선택된 1종 이상의 생약재 추출물을 각각 0.001 ~ 20.0 중량%를 사용함으로써 아토피 예방 및 치료에 탁월함을 확인하였다. 이때, 0.001 중량% 미만일 경우에는 치료 효과가 미약한 문제점이 있고, 20 중량% 초과하면 제형화의 어려움과 피부 부작용의 문제가 있어 적합하지 않다. 또한, 본 발명에서 은행잎 추출물의 지표성분인 바이플라보노이드가 아토피 예방 및 치료에 유효함을 확인할 수 있었다.

한편, 황금(Scutellariae Radix)은 꿀풀과(Labiatae) 식물인 황금(Scutellaria baicalensis Georgi)의 뿌리로, 우리나라, 중국, 일본 등에 분포한다. 바이칼린(baicalin), 바이칼레인(baicalein), 워고닌(wogonin) 등인 함유되어 있으며, 해열작용, 소염작용, 항알러지 작용 등이 알려져 있어 한방에서 뿌리 를 해열, 이뇨, 지사, 이담 및 소염제로 이용한다. 특허 공개 제2002-76375호에 황금 추출물이 아토피와 같은 피부 질환에 유효함을 명시하고 있는 바, 상기 생약재 추출물 외에 황금 추출물을 0.001 ~ 20 중량% 추가로 혼합 사용할 수도 있다. 특히, 본 발명에서는 상기 황금 추출물의 유효성분인 워고닌이 아토피 예방 및 치료에 유효함을 확인할 수 있었다.

이러한 상기 생약재 1종 이상의 추출물 제조에는 물, 탄소수 1∼4 개의 저급 알코올, 더욱 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올 등의 극성 유기용매, 에틸 아세테이트, 아세톤, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 유기용매를 사용하여 추출할 수 있으며, 이들 용매는 단독 또는 혼합되어 사용 가능하다. 상기 생약을 세절하여 추출용매를 가한 후, 0 ∼ 100 ℃, 바람직하게는 50 ∼ 80 ℃의 온도에서 추출물이 충분히 추출될 수 있을 정도의 시간동안 추출한 후 여과하고 감압농축 및 진공 건조하여 건조분말을 얻는다.

이러한 추출물로부터 유효성분의 함량을 높이기 위한 정제 단계에는 추출물을 물에 녹이거나 현탁시키는 단계, 상기 추출물 수용액 또는 수현탁액을 물과 혼합되지 않는 극성 유기용매 또는 비극성 유기용매와 접촉시켜서 상기 추출물의 성분들을 분배시키는 단계, 및 상기 유기용매의 용액 또는 상기 수용액을 회수하고, 이로부터 상기 유기용매 또는 물을 제거하여 부분적으로 정제된 생약 추출물을 얻는 단계를 포함한다. 이때, 상기 유기용매 중 극성 유기용매로는 디클로로메탄, 클로로포름, 1-부탄올, 1-펜탄올, 1-헥산올, 시클로헥산올, 1-도데칸올, 디에틸에테르, 테트라하이드로퓨란, 에틸 아세테이트, 에틸 아세토아세테이트, 에틸 벤 조에이트 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 상기 비극성 유기용매로는 n-헥산, 시클로헥산, n-펜탄, n-옥탄, 석유에테르, 톨루엔 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있다. 또한, 추출물의 정제 과정에서 비극성 비유효성분을 제거하기 위하여 비극성 용매로 세척하는 과정을 추가할 수도 있다.

상기에서 설명한 방법으로 제조한 추출물들을 혼합하여 사용할 때에는 진교 0.01 ~ 10 중량%와 은행잎 0.01 ~ 10 중량% 또는 황금 0.01 ~ 10 중량%와 은행잎 0.01 ~ 10 중량%이거나 용담 0.01 ~ 10 중량%와 은행잎 0.01 ~ 10 중량%, 또는 진교 0.01 ~ 10 중량%와 황금 0.01 ~ 10 중량%이거나 용담 0.01 ~ 10 중량%와 황금 0.01 ~ 10 중량%, 또는 진교 0.01 ~ 10 중량%와 용담 0.01 ~ 10 중량%인 2종의 생약 추출물이 함유되며, 진교 0.01 ~ 10 중량%, 은행잎 0.01 ~ 10 중량% 및 황금 0.01 ~ 10 중량%이거나 용담 0.01 ~ 10 중량%, 은행잎 0.01 ~ 10 중량% 및 황금 0.01 ~ 10 중량%인 3종의 생약 추출물이 함유되고, 진교 0.01 ~ 10 중량%, 은행잎 0.01 ~ 10 중량%, 황금 0.01 ~ 10 중량% 및 용담 0.01 ~ 10 중량%인 4종의 생약재 추출물이 함유된다. 이때 상기 범위를 벗어나면 낮은 농도에서는 효능이 미약하고 높은 농도에서는 피부 부작용 및 제형화의 문제점이 있다.

한편, 본 발명에 따른 상기 추출물 이외에도 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 사용하여 연고제, 첩부제 등의 의약품과 에멀젼, 겔, 팩, 화장수, 비누 등 화장료의 피부외용제로 사용할 수 있으며 이들의 제조방법은 공지방법을 따른다.

상기 추출물로 표시되는 유효성분의 유효 도포량은 아토피 질환의 정도, 부 위, 연령 등에 따라 다양화될 수 있지만, 일반 적으로 1일 2회 또는 수회로 질환부위에 1 ~ 5 mg/cm² 범위 내에서 도포된다.

따라서, 본 발명에 따른 진교, 용담 및 은행잎 중에서 선택된 1종 이상의 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물은 아토피와 같은 피부질환의 예방, 경감 및 치료에 매우 유용하다.

이하, 본 발명은 다음 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 생약 추출물의 제조

1) 진교 추출물의 제조

건조한 진교 400 g을 세절한 후 생약 중량 대비(v/w) 3 ~ 7배수의 50% 에탄올 수용액에 넣고 2 ∼ 4회 용매 추출한 후 여과하여 감압 농축하며 다시 일정량의 증류수를 넣어 공비 농축을 하여 추출액 내의 에탄올을 완전 제거하였다. 이를 진공 건조한 후 분쇄하여 진교 추출물 120 g을 얻었다.

2) 용담 추출물의 제조

건조한 용담 400 g을 세절한 후 생약 중량 대비(v/w) 3 ~ 7배수의 50% 에탄올 수용액에 넣고 2 ∼ 4회 용매 추출한 후 여과하여 감압 농축하며 다시 일정량의 증류수를 넣어 공비 농축을 하여 추출액 내의 에탄올을 완전 제거하였다. 이를 진공 건조한 후 분쇄하여 용담 추출물 160 g을 얻었다.

3) 은행잎 추출물의 제조

건조한 노란 은행잎 6 kg을 메탄올에 넣고 2 ~ 4 회 용매 추출한 후 여과하여 감압 농축하며 다시 일정량의 증류수를 넣어 공비 농축을 하여 추출액 내의 메탄올을 완전 제거하여 메탄올 추출물을 얻었다. 위 추출물 중량 대비 약 2 ~ 3 배량(v/w) 정도의 증류수로 추출물을 물에 완전히 현탁시켰다. 동량의 에틸 아세테이트(Ethyl acetate)를 넣어 약 20 ∼ 60 분간 30 ∼ 80 rpm 정도로 교반하고 정체시켜, 층을 분리한 뒤 에틸아세테이트 분획물을 얻었다. 에틸아세테이트로 2 ~ 3 회 재분획한 후 얻어진 에틸 아세테이트 분획물을 합하여 농축한 후 이를 동량의 0.5~2% NaCl 함유 증류수로 3회 세척하였다. 에틸아세테이트 분획물에 2 ~ 5 배량(v/v)의 노말 헥산을 교반하면서 서서히 넣어 주었다. 오버나이트(Overnight)한 후 생성된 침전 분획물을 노말 헥산으로 세척하면서 여과한 다음, 진공 건조여 분쇄하여 은행잎 추출물을 얻었으며, 이 추출물은 유효 성분인 바이플라보노이드(깅제틴 및 이소깅제틴)를 표준물질로 하여 HPLC를 이용하여 정량하였을 때 29.6%의 함량을 나타내었다.

4) 황금 추출물의 제조

건조한 황금 1.1 Kg을 세절한 후 생약 중량 대비(v/w) 3 ~ 7배수의 50% 에탄 올 수용액에 넣고 2 ~ 4회 용매 추출한 후 여과하여 감압 농축하며 다시 일정량의 증류수를 넣어 공비 농축을 하여 추출액 내의 에탄올을 완전 제거하였다. 생약 중량 대비 약 3 ~ 7배량(v/w) 정도의 증류수로 추출물을 물에 완전히 현탁시킨 다음, 동량의 디클로로메탄을 넣어 약 20 ∼ 60 분간 30 ∼ 80 rpm 정도로 교반하고 정체시켜 층을 분리한 뒤 디클로로메탄 분획물을 얻었다. 디클로로메탄으로 2~3회 재분획한 다음, 얻어진 디클로로메탄 분획물은 합하여 완전 농축한 후 진공 건조한 후 분쇄하여 황금추출물 23 g을 얻었다. 이 추출은 유효성분인 워고닌을 표준물질로 하여 HPLC를 이용하여 정량하였을 때 16.0%의 함량을 나타내었다.

실시예 2: 아토피 동물모델을 이용한 아토피 억제 효과 측정

NC/Nga 마우스는 자발적 아토피성 피부염 유발 모델로 잘 알려져 있다. 그 분자적 원인을 JAK3 키나제의 과인산화로 IgE의 생성이 항진되어 나타난 결과로 보고된 바 있다. 최근엔 IgE와 Th2 사이토카인 생성에 필수적인 STAT6 녹아웃 NC/Nga 마우스를 만들어 시험한 결과 피부염이 여전히 자발적으로 유도되어 흔히 예상한 기전 이외에 다른 기전으로 피부염이 유도되는 것으로 예상되고 있다 [J.Immunol., 1999: 162: 1056-63]. 그러나, 이러한 장점에도 불구하고 자발적인 피부염 유도 비율이 낮고, 유도된 피부염의 강도(severity)에도 차이가 심해 평가를 위해 신뢰할만한 모델 수준은 되지 못하고 있는 것이 사실이다. 이에 일본 Charles River사에선 햅텐(hapten) 형성 물질인 피크릴 클로라이드(1-클로로 2,4,4-트리니트로 벤젠)[picryl chloride(1-chloro 2,4,6-trinitro benzene)]을 이 용하여 피부염을 인위적으로 유도하여 이러한 문제를 해결하고 있다. 그러나, 피크릴 클로라이드(picryl chloride)의 경우 국내 반입이 금지되어 이용할 수 없어, 구조적으로 피크릴 클로라이드와 유사하며 같은 기전으로 작용하는 DNCB(1-chloro 2,4-dinitrobenzene, Aldrich, USA)을 이용하여 시험을 진행하여 유사한 결과를 얻을 수 있었다. 이 모델에 의하면 아토피성 피부염의 주된 증상들(가려움, IgE 증가, 피부염증)을 모두 관찰할 수 있었고, 더 나아가 아토피성 피부염의 치료제로 잘 알려진 국소 스테로이드나 경구용 사이클로스포린에 의해 증상이 완전히 치유되는 현상을 관찰할 수 있었다. 이에 아토피성 피부염 치료제의 효능을 평가하기 위한 in vivo 모델로 NC/Nga 마우스 모델을 도입하였다.

실험동물은 5 ~ 6 주령된 웅성 NC/Nga 마우스를 이용하였으며, 아토피 유발물질로는 DNCB를 사용하였다. NC/Nga 마우스의 등 부위를 깨끗하게 제모한 다음, 피부 미세 상처가 치유되도록 24시간 방치하였다. 1% DNCB 용액(아세톤 : 올리브오일= 3 : 1) 200 ㎕를 등 부위에 도포하여 면역화시킨 다음, 4일 후부터 1주일에 2 ~ 3번씩 0.4% DNCB 용액 150 ㎕를 등 부위에 도포하여 아토피성 피부염을 유발시켰다. 4주 동안 DNCB 처리한 다음 피부염이 충분히 유발되어 등 부위의 가피가 모두 벗겨지고, 이 부위에 새로운 피부염이 형성되면서 긁는 행동이 심화되면 DNCB 처리를 중단하고, 관능 평가를 실시한 다음 채혈하여 혈구를 침전한 뒤, 혈청만 취하여 -70 ℃에 냉동 보관하였다. 치료 효과를 시험할 시료는 실시예 1의 추출물 및 이들의 혼합물을 50% 에탄올 수용액에 각 농도로 용해시킨 용액 또는 피부도포용 제제로 제형을 만들어 사용하였다. 마지막 DNCB 처리한 후 1일 후부터, 1일 2회, 5일간 시험 용액 또는 시험 제제를 등 부위에 국소 도포하였다. 약물 처리 5일째에 관능 평가를 실시한 다음 혈액을 취하고 등 부위의 피부를 절제하여 10% 포르말린 용액에 담아 보관하였다. 채혈한 혈액은 혈구를 침전한 뒤, 혈청만 취하여 -70 ℃에 냉동 보관하였다.

아토피성 피부염에 대한 활성평가는 하기 방법에 따라 실시하였다.

1) 관능 평가

NC/Nga 마우스의 피부염은 아토피성 피부염에서 일반적으로 사용되는 임상적 육안 평가법을 이용하였다. 육안 평가 결과는 홍반(erythema), 가려움과 건조피부(Pruritus & Dry skin), 부종과 혈종(Edema & escoriation), 진무름(Erosion), 그리고 태선화(Lichenification) 등 5가지 평가항목을 각각 평가한 점수의 총합으로 나타내었다. 이 각각의 항목은 없음(0), 약함(1), 중증도(2), 심함(3)으로 채점하였으며, 일반적으로 DNCB를 이용해 피부염을 유발할 경우 약 12~13점이면 피부염이 최고조에 달했다고 판단할 수 있다.

2) 조직 염색 및 관찰

등 주변의 환부를 중심으로 생검한 마우스의 피부조직을 10% 포름알테히드 용액으로 고정하고, H&E(haematoxylin-eosin) 염색과 톨루이딘 블루(toluidine blue) 염색, 그리고 에오신 염색법을 이용하여 조직을 염색하여 광학 현미경 상에서 약 200배의 배율로 관찰하였다. 피부 조직은 피부의 전반적인 상태, 비만세포의 침윤과 탈과립화, 호산구의 침윤을 중심으로 관찰하였다.

도 2는 아토피 유발 동물모델을 이용하여 본 발명에 따른 생약재 추출물에 의한 아토피 저해 효과를 관능 평가하여 도시한 것이다[정상군 및 아토피 유발군(DNCB 군)은 50% 에탄올 수용액을 도포하였으며, 각 생약 추출물 투여군은 DNCB로 아토피를 유발한 쥐에 생약 추출물을 50% 에탄올 수용액에 녹여 도포하였다].

도 4는 아토피 유발 동물모델에서 본 발명에 따른 생약재 추출물이 비만세포의 침윤과 탈과립에 미치는 효과를 도시한 것이다[아토피 유발군(DNCB 군)은 50% 에탄올 수용액을 도포하였으며, 각 생약 추출물 투여군은 DNCB로 아토피를 유발한 쥐에 각각의 생약 추출물을 1 mg/ml의 농도로 50% 에탄올 수용액에 녹여 도포하였다. 바이플라보노이드는 은행잎의 유효성분인 깅제틴 및 이소깅제틴의 혼합물이다].

도 1, 2 및 3에서와 같이, DNCB에 의해 유발된 아토피 증상은 본 발명에 따라 제조된 진교, 용담, 은행잎 및 황금에 의해 완화 또는 경감되었으며, 또한 바이플라보노이드(깅제틴 및 이소깅제틴) 및 워고닌의 아토피 억제 효과로부터 이들 성분이 각각 은행잎 및 황금의 유효성분임을 알 수 있었다. 이들 추출물들은 아토피 유발에 의해 피부조직에 침윤되는 비만세포와 이들 세포의 탈과립을 억제하였으며[도 4], 이들 추출물 중에서는, 특히 진교와 용담이 가장 큰 아토피 저해 활성 을 나타내었다.

추출물의 혼합물 제형의 성분 구성

구분 (중량비)	혼합물 1	혼합물 2	혼합물 3	혼합물 4	혼합물 5	혼합물 6	혼합물 7	혼합물 8	혼합물 9	혼합물 10	혼합물 12	혼합물 12
진교 추출물	1.0	0.2	0.05	-	-	0.2	0.05	0.2	0.2	-	-	-
용담 추출물	-	-	-	1.0	0.2	0.2	0.05	-	-	0.5	0.5	-
은행잎 추출물	0.5	0.15	0.05	0.5	0.15	0.15	0.05	0.15	-	0.15	-	0.15
황금 추출물	0.5	0.1	0.05	0.5	0.1	0.15	0.05	-	0.15	-	0.15	0.15
* 제제 내 추출물의 총 함량은 0.1 중량%임.

도 5는 아토피 유발 동물모델을 이용하여 본 발명에 따른 생약재 추출물의 피부 도포용 제제에 의한 아토피 저해 효과를 관능 평가하여 도시한 것이다[정상군 및 아토피 유발군(DNCB 군) DMS 추출물이 첨가되지 않은 피부 도포용 크림 기제를 도포하였다].

도 7은 아토피 유발 동물모델에서 본 발명에 따른 생약재 추출물의 피부 도포용 제제가 비만세포의 침윤과 탈과립에 미치는 효과를 도시한 것이다[아토피 유발군(DNCB 군)은 추출물이 첨가되지 않은 피부도포용 크림 기제를 도포하였다].

상기 표 1과 같이, 본 발명에 따라 제조된 추출물들과 이들을 일정 비율로 혼합한 혼합물을 피부도포용 제제로 만들어 아토피 유발 동물모델에 적용시킨 결과, 각 추출물을 혼합할 때 아토피 저해 효과는 단일 추출물 제제보다 우수하였으며, 특히 진교나 용담 추출물을 함유할 때 최대의 아토피 저해 효과를 볼 수 있었다[도 5 ~ 7].

실시예 3: 아토피 환자에 대한 아토피 억제 효과 측정

상기 실시예에 따라 제조한 추출물의 혼합물 중 아토피 동물모델에서 우수한 활성을 보인 용담 추출물 0.2%, 은행잎 추출물 0.15% 및 황금 추출물 0.1%로 구성된 상기 표 1에서 혼합물 5의 피부 도포용 에멀젼을 아토피성 피부질환을 갖고 있는 7 ~ 54세의 환자 14인에게 1일 2 ~ 5회씩 4주 동안 환부에 바르도록 하였다. 각 평가 지표를 0 (없음) ~ 7 (매우 심함) 단계로 나누어 자신이 느끼는 개선 정도를 표시하였고, 병변의 종합 평가는 총 9 단계로 구분하여 평가하여 다음 표 2로 나타내었다.

피험자	연령	가려움 개선	염증,부종 개선	모공성구진 개선	태선화 개선	소파흔 개선	색소침착 개선	불면증 개선	종합 병변
피험자1	7	3→3	3→2	3→3	2→2	2→2	2→2	1→1	3→3
피험자2	12	6→6	6→5	6→6	5→5	6→5	1→1	0	6→6
피험자3	14	5→3	5→2	5→2	5→3	5→2	4→2	4→1	4→1
피험자4	15	7→4	7→3	7→4	7→2	6→2	6→4	5→2	8→5
피험자5	16	6→2	5→3	6→4	4→2	5→3	4→2	3→2	6→4
피험자6	18	3→1	0	4→2	0	2→2	4→3	0	4→3
피험자7	21	3→1	2→1	2→1	1→1	3→2	1→1	0	3→1
피험자8	24	3→1	2→0	2→0	2→0	3→1	0	1→0	2→0
피험자9	30	3→1	0	0	0	0	0	0	4→1
피험자10	30	6→3	7→3	6→2	0	6→2	6→1	0	7→2
피험자11	34	4→2	4→2	3→2	3→2	3→2	5→4	4→2	4→2
피험자12	35	4→3	4→3	4→4	4→3	4→4	4→4	0	4→4
피험자13	38	6→2	3→1	0	0	3→1	3→1	0	5→2
피험자14	54	6→2	5→2	5→2	0	0	4→1	0	8→4

그 결과를 살펴보면, 긍정적인 효과를 보인 정도는 14명 중 11명으로 78% 이상의 환자에서 증세가 매우 호전되었음을 알 수 있었으며, 이들 환자들 모두 부작용을 나타내지 않았다.

실시예 4: 인체 피부 자극시험

아토피 예방 및 치료에 효과가 있는 1종 이상의 추출물을 1,3-부틸렌글리콜 베이스에 녹여 용액으로 적용하였을 경우 피부 안전성 여부를 확인하기 위해 인체피부자극시험(인체 첩포시험)을 행하였다. 20 ~ 30대의 건강한 남녀 30명을 대상으로 핀 챔버(Finn Chamber)에 준비된 시험물질(10% Patch Base) 20 ㎕를 적하시킨 후 70% 에탄올로 세척 건조 후 시험부위인 윗팔뚝 안쪽부위에 얹어 미소공 테이프로 고정시켰다. 첩포는 24시간동안 도포하여 제거한 후 유성팬으로 시험부위를 표시하며 30분, 24시간 후에 각 시험 부위의 피부반응을 관찰하여 다음과 같이 등급별로 평가하였다.

다음 표 3에서 평균반응도는 ± 는 1점, +는 2점, ++는 3점, +++는 4점으로 정하고 판정기준은 1 등급(무자극 범위)은 1미만, 2 등급(경자극 범위)은 3미만, 3 등급(중자극 범위)은 5미만, 4 등급(강자극 범위)은 5 이상을 기준으로 하였다.

구분	24시간				48시간				평균반응도(n=30)	판정등급
구분	±	+	++	+++	±	+	++	+++	평균반응도(n=30)	판정등급
1,3-부틸렌글리콜 베이스	4	-	-	-	-	-	-	-	2.00	2
베이스 + 진교 추출물 0.2 중량%	2	-	-	-	-	-	-	-	1.00	1
베이스 + 용담 추출물 0.2 중량%	2	-	-	-	-	-	-	-	1.00	1
베이스 + 은행잎 추출물 0.2 중량%	4	-	-	-	-	-	-	-	2.00	2
베이스 + 진교 추출물 0.1 중량% + 황금 추출물 0.1 중량%	4	-	-	-	-	-	-	-	2.00	2
베이스 + 용담 추출물 0.1 중량% + 황금 추출물 0.1 중량%	4	-	-	-	-	-	-	-	2.00	2
베이스 + 은행잎 추출물 0.1 중량% + 황금 추출물 0.1 중량%	4	-	-	-	-	-	-	-	2.00	2

상기 표 3에 나타낸 것과 같이, 진교와 용담 추출물이 각각 0.2 중량% 함유된 베이스 1등급)는 안전범위의 자극값을 나타냈고 나머지 2종 이상 혼합생약을 함유한 베이스에서는 2 등급 이상의 자극을 나타내었다.

실시예 5 및 비교예 1: 에멀젼의 제조

상기 실시예 2에서 아토피 동물모델을 이용한 아토피 억제효과시험에서 효과가 좋았던 혼합물 5, 즉 용담 추출물, 은행잎 추출물 및 황금 추출물의(2.0 : 1.5 : 1.0의 중량비) 혼합물을 이용하여 다음 표 4의 조성 및 함량으로 에멀젼을 제조하였으며, 제조과정은 다음과 같다.

조성	실시예 5(중량%)	비교예 1(중량%)
1. 세테아릴알코올	5.00	5.00
2. 폴리소르베이트-60	0.80	0.80
3. 디메치콘 코폴리올	0.80	0.80
4. 사이크로메치콘	4.00	4.00
5. 호호바오일	2.00	2.00
6. 정제수	잔량	잔량
7. 용담 추출물: 은행잎 추출물: 황금 추출물 (2.0 : 1.5 : 1.0, 중량비)	0.50	제외
8. 메틸파라벤	0.20	0.20
9. 1,3-부틸렌글리콜	8.00	8.00
10. 카보머	0.15	0.15
11. 크산탄검	0.05	0.05
12. 폴리아크릴아미드/C13-14 이소파라핀/라우레스-7	1.20	1.20
13. 이미다졸리디닐우레아	0.20	0.20
14.트리에탄올아민	0.15	0.15
15. 향	0.10	0.10

유상(Oil Phase) 원료(조성 1 ∼ 5)를 정확히 칭량하여 유상보조 탱크에 넣고 75 ℃로 가열 용해하였다. 수상(Water Phase)의 조성 6 ∼ 9의 원료를 칭량하여 유화탱크에 주입한 후 조성 10 ∼ 11의 원료를 칭량하여 정제수에 교반 습윤시킨 후 유화탱크에 주입하고 75 ℃로 가열 용해하였다. 유화탱크에 유상원료를 진공감압 하에 주입한 후 유화기(Homogenizer) 3500 rpm. 페달믹서(Pedal Mixer) 25 rpm, 온도 75 ℃, 시간 5분 동안 유화한 후 조성 12를 넣고 3분간 분산하고 조성 13, 14를 소량의 정제수에 용해 분산하여 유화탱크에 주입하여 중화하였다. 진공 탈포한 후 냉각하여 50 ℃에 도달하면 15의 향을 첨가하고 분산한 후 30 ℃로 냉각하여 작업종료하고 숙성시켜 에멀젼을 제조하였다.

실시예 6 및 비교예 2: 첩부제의 제조

조 성	실시예 6(중량%)	비교예 2(중량%)
1. 글리세린	15.00	15.00
2. 폴리아릴산	2.00	2.00
3. 아크릴레이트 코폴리머	2.00	2.00
4. 수산화암모늄	0.40	0.10
5. 디소듐-EDTA	0.05	0.05
6. 주석산	0.20	0.20
7. 메틸파라벤	0.20	0.20
8. 에탄올	1.00	1.00
9. 글리시리진산 디칼륨	0.10	0.10
10. 향	0.05	0.05
11. 진교 추출물: 은행잎 추출물: 황금 추출물 (2.0 : 1.5 : 1.0의 중량비)	0.50	제외
12. 프로필렌 글리콜	5.00	5.00
13. 정제수	잔량	잔량

조성 1 ∼ 6의 원료를 칭량하여 용해탱크에 넣고 실온에서 균질 교반하여 점성액을 만들고 조성 7 ∼ 10을 실온 용해하여 용해탱크에 주입한 후 균질 교반하였다. 조성 11 ∼ 13의 원료를 60 ℃로 가온, 용해한 후 용해탱크에 소량씩 주입하여 첩부용 겔을 만들었다. 상기 처방으로 구성된 첩부용 겔을 어플리케이터 갭을 가진 적절한 피복기계를 사용하여 접착 조성물층을 실리콘화된 폴리에스테르 필름상에 가로 1m × 세로 1m에 700 g/m²으로 일정하게 피복하여 비공극성 폴리에틸렌 필름으로 적층하였다. 다층의 적층체 크기를 직경 1.5 cm²의 원형패취 형태로 자르고 최종적으로 종이, 저밀도 폴리에틸렌, 알루미늄으로 구성된 파우치 적층필름에 넣어 임상용 첩부제를 제조하였다.

실시예 4: 랫트에 대한 경구투여 급성 독성실험

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성 독성실험을 다음과 같이 실시하였다. 군당 2 마리씩의 동물에 실시예 1에 의해 제조된 진교, 용담, 은행잎 및 황금 추출물을 각각 용해시켜 1 g/kg/㎖의 용량으로 단회 경구 투여하였다. 시험물질을 각각 투여 후 동물의 폐사 여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상 여부를 관찰하였다. 그 결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 따라서, 진교, 용담, 은행잎 및 황금 추출물 각각은 모든 랫트에서 2,000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않으며 경구 투여 최소 치사량(LD₅₀)은 2,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

이상에서 상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 진교, 용담 및 은행잎 중에서 선택된 1종 이상의 추출물은 아토피 피부염과 같은 피부질환에 있어서 그 증세를 현저히 경감시키는 효과를 가짐으로써 피부질환 치료제 또는 치료 보조제로서 의약품, 화장품, 의약부외품 등에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

진교, 용담 및 은행잎 중에서 선택된 1종 이상의 생약재 추출물이 함유됨을 특징으로 하는 아토피 예방 및 치료용 피부 외용제 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 추출물에 황금 추출물을 추가하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 생약재 추출물이 각각 0.001 내지 20.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 은행잎 추출물에는 바이플라보노이드가 함유된 것을 특징으로 하는 조성물.
제 2 항에 있어서, 상기 황금 추출물에는 워고닌이 함유된 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물이 에멀젼, 겔, 팩, 화장수 및 비누 중에서 선택된 제형인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물이 연고제 또는 첩부제의 제형인 것을 특징으로 하는 조성물.