KR20070024718A

KR20070024718A - 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용 및 상기 치료에사용되는 약물

Info

Publication number: KR20070024718A
Application number: KR1020077000646A
Authority: KR
Inventors: 미 안
Original assignee: 미 안
Priority date: 2004-06-10
Filing date: 2005-06-09
Publication date: 2007-03-02
Also published as: EP1774975A4; WO2005120555A1; EP1774975A1; CN1583169A; CN100469391C; JP2008501733A; US20070264247A1

Abstract

본 발명은 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용 및 상기 치료에 사용되는 약물에 관한 것으로서, 황색 포도구균, 표면 포도구균, 포로피온산 간균, 피부 진드기와 내 약물성 균으로 초래하는 여드름의 치료 약물에 분무약제와 적제 및 연고로 제조하여 응용하도록 한 것으로;

분무 약품이나 적제로 이루어져 휴먼 라이소자임 300U~300만 U/ml, 포스페이트 완충 용액10~20Mm (Ph6.5~7.5) 80％, 5~25％ 프로필렌 글리콜, 1만 분지 5의 tween80으로 구성된 것을 특징으로 하는 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용 및 상기 치료에 사용되는 약물에 관한 것이다.

용균효소, 여드름

Description

용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용 및 상기 치료에 사용되는 약물{USE OF HUMAN LYSOZYME IN PREPARATION OF MEDICINE FOR TREATING ACNE}

[발명의 목적]

[발명이 속하는 기술분야 및 그 분야의 종래기술]

항생 물질은 허다한 의학 기적을 창조하여 많은 질병인 예로 폐염, 뇌막염, 산욕열, 패혈증, 결핵 등이 없어 지게 하였다.

21세기의 오늘에 내 약물 세균은 사람들을 놀라게 할 만큼 발전하고 있다.

예로 내 페니실린 폐염 연쇄상 구균은 종전에 페니실린, 에리드로마이신, 설퍼마인 등 약품으로 치료할 수 있었으나 지금은 완전히 이러한 약물로 치료가 불 가능하다.

폐염 K pneumonia균은 cefuroxime sodium과 pentahydrate 등 16종 고급 항생 물질에 대한 내 약물성이 51.85％ - 100％에 달하고 있다.

또한 내 Meticillin의 황색 포도구균(MRSA)은 Vancomycin외에 다른 약물을 사용하여 치료할 수 없다.

세균의 내 약물성의 발전 역사에서 일종의 항생 물질의 출시 후에는 다종의 내 약물성 균류가 출시하는 것을 발견할 수 있다.

일종의 새로운 항생 물질 개발에는 약 10년 전후의 시간이 필요하지만 한 개세대의 내 약물성 균류의 생성에는 2년의 시간이 필요한 것으로 항생 물질의 연구제작 속도는 내 약물성 균류의 발전 속도에 비해 멀리 뒤 떨어지고 있다.

그러므로 현재는 일종의 부동한 내 약물성 균류에 모두 유효한 '슈퍼 항생물질'을 개발하여 임상 치료에 사용하는 것이 시급하다.

[발명이 이루고자 하는 기술적 과제]

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 개발된 것으로서, 그 목적은 일종의 용균효소를 황색 포도구균, 표면 포도구균, 포로피온산 간균, 피부 진드기와 내 약물성 세균으로 초래하는 여드름 질병 치료에 적용하도록 하는데 있다.

[발명의 구성]

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 용균효소의 황색 포도구균, 표면 포도구균, 포로피온산 간균, 피부 진드기와 내 약물성 세균으로 초래하는 여드름의 치료 약물에 응용할 수 있는 것을 특징으로 한다.

아울러, 용균효소의 여드름 치료 약품에 응용에서 상기 용균효소는 유전자공정으로 표현하는 휴먼 라이소자임{Human lysozyme}으로서 유전자공정으로 표현하는 휴먼 라이소자임의 아미노기에 (글루탄산-알라닌)2나 (글루탄산-알라닌)3 와 결합한 휴먼 라이소자임이나 유전자공정으로 표현이나 화학합성의 돌연 변의 체 휴먼 라이소자임인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 여드름 치료 약물에는 약물에 활성300U~300만 U/ml의 휴먼 라이소자임을 함유하는 것을 특징으로 한다.

아울러, 상기 여드름 치료 약물은 분무 약제, 적제, 연고나 유제로 제조하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 여드름 치료 약물에는 진드기 살멸 약품 SM-650을 함유한 것을 특징으로 한다.

아울러, 분무 약품이나 적제로 이루어져 휴먼 라이소자임 300U~300만 U/ml, 포스페이트 완충 용액10~20Mm (Ph6.5~7.5) 80％, 5~25％ 프로필렌 글리콜, 1만 분지 5의 tween80으로 구성된 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 여드름 치료 약물은 휴먼 라이소자임 300U ~ 300만 U/ml, 포스페이트 완충 용액 10(pH6.0) 80％, 20％ 프로필렌 글리콜, 6％ L-pyrrolidone Carboxylic Acid-Na, 0.9％ 수용성 Azone, 1만 분지 3의 tween80, 진드기 살멸 약품 SM-650 순도 ≥99％, ph:6~8(제품 급) 1％로 구성됨을 특징으로 한다.

아울러, 상기 여드름 치료 약물은 휴먼 라이소자임 300U ~ 300만 U/ml, 포스페이트 완충 용액 20(pH7.0) 85％, 20％ 프로필렌 글리콜, 1％ Carbomer resin, 0.3％ 에센스, 1％ 진드기 살멸 약품 SM-650 순도 ≥99％, ph:6~8(제품 급)으로 구성됨을 특징으로 한다.

이에 본 발명에 따른 용균효소의 치료제로의 활용과 그 약물에 대하여 당업자가 용이하게 이해하고 재현할 수 있도록 상세하게 설명하면 다음과 같다.

실제적으로 본 발병에 관련되는 용균효소는 황색 포도구균, 표면 포도구균, 포로피온산 간균, 피부 진드기와 내 약물성 세균으로 초래하는 여드름 질병 치료의 약물에 응용이 가능하다.

위상의 용균효소는 유전자공정으로 표현하는 휴먼 라이소자임(Human lysozyme)로서 유전자공정으로 표현하는 휴먼 라이소자임은 아미노기에 (글루탄산-알라닌)2나 (글루탄산-알라닌)3 와 결합한 휴먼 라이소자임이나 유전자공정이나 화학합성의 돌연 변의 체 휴먼 라이소자임으로 표현한다.

위상의 약물에는 300U~300만 U/ml의 휴먼 라이소자임을 함유하고 있다.

약물은 분무 약제, 적제, 연고나 유제이며 약물에는 또한 피부 진드기 살멸과 가려움 억제 약품인 SM-650을 첨가할 수 있다.

더욱 정확하게 본 발명의 본질을 이해하기 위하여 아래에서는 휴먼 라이소자임의 약리 시험과 결과로 제약 영역의 새로운 용도를 설명한다.

휴먼 라이소자임는 200ml의 배양기를 조제하는 표준으로 6ml 인산, 3g 황산 마그네슘, 4g 황산 칼륨, 1g 수산화 칼륨, 1.5g 황산 칼슘에 증류수를 첨가하여 200ml으로 되게 한 다음 고압 멸균을 진행한 후 글리세린 용해 방법으로 종자를 접종하고 오실레이터의 회전 속도는 매 분에 250r이고 배양 온도는 20-35 °C으로 항온 박스에서 36-48시간 배양한다.

먼저 종자 박스를 배양하고 마지막에 생산 박스를 배양한다.

발효를 완성한 배양액에 대하여 추출을 진행하고 추출한 휴먼 라이소자임 농축액체에 대하여 담백과 황성을 측정하고 보관한다.

순도가 95％인 휴먼 라이소자임 농축액체를 물에 용해하여 30000U/Ml 용액으로 만들고 포스페이트 완충 용액 20mM(pH7.0), 글리세롤 25％, tween80, 피부 진드기 살멸 약품 SM-650 순도≥99％, Ph6~8(제품급) 분말을 물에 용해하여 1％의 용액을 준비하여 놓는다.

1. 휴먼 라이소자임 체외 항균 작용 평가

약품 및 시제

1) 휴먼 라이소자임 농축액체의 활성 단위: 30000단위/ml으로 대련 기룡 바이오 기술연구소에서 제공하였음.

2) Contral lysozyme, CLZ: 백색 분말로 활성 단위:50000단위/mg, 미국SIGMA회사 제품, 로트 번호: L6876.

3) Clarithromycin: 함량(ABO와 Rh)948μ/mg, 중국약품 바이오 제품 검사소의 표준제품

4) Roxithromycin: 함량(ABO와 Rh)878 μ/mg, 중국약품 바이오 제품 검사소의 표준제품

5) 주사용 Amoxicillin: 하얼빈 제약공장 제품, 로트 번호: 010504.

6) BIOWEST AGAROSE

7) Tris: 성도화학시험공장 제품, 로트 번호: 010211

시험 세균:

모든 시험 세균은 2002.4~2003.9월에 사천성과 베이징 지역에서 수집한 임상 분리 병원균으로 본 시험실에서는 API방법으로 다시 감정 후 시험에 사용하였다.

품질 제어 세균: 황색 포도구균- ATCC25923

E.coli균- ATCC25922

Pseudomonos aeruginosa균-ATCC27853

배양기:

1. Tris-HCl 완충 용액: 0.1M Tris 100ml, 0.1M HCl 70ml, High Water 800ml, PH치를 측정하고 HCl용액으로 PH7.2로 조정한 다음 High Water를 첨가하여 1000ml로 되게 한다.

2. Tris-HCl 아가르: Tris-Cl 완충 용액에 겔로오스를 첨가하고 116°C에서 멸균 후 사용한다.

3. M-H 배양기: 중국 약품 바이오 제품 검사소 제품으로 M-H육류 탕 배양기: 25g을 취하여 1000ml 증류수를 첨가하고 가열 용해한 다음 고압 멸균으로 116°C에서 20분 방치한다.

M-H 고체 배양기: 36g을 취하여 1000ml 증류수를 첨가하고 가열 용해한 다음 고압 멸균으로 116°C에서 20분 방치한 후 그람 반응의 양성과 음성에 필요한 산소 균의 약물 감지 시험에 사용한다.

4. 혈 배양기: M-H배양기에 5-10％ 탈 섬유 토끼 혈을 첨가하여 제작하며 Enterococcus균과 Streptococcus균의 약물 감지 시험에 사용한다.

시험방법:

아가르 2배 희석법을 채용하여 시험약물의 시험 세균에 대한 최저 세균 억제 농도(MIC)를 측정한다.

시험약물을 멸균 증류수로 용해하고 적당하게 희석한다.

각각 1ml의 약물 용액을 취하여 9ml의 용해한 Tris-HCl 겔로오스 고체 배양기를 넣고 균일하게 혼합하고 2배로 희석한 다음 계열 약 그릇을 제조한다.

매 그릇의 약물 함유 농도는 각각 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.06, 0.03···0.001mg/ml이며 다 포인트 접종 계기(Denley A400, England)로 100000CFU/ml로 희석한 시험 균 용액을 각 약 그릇의 표면에 접종하고 37°C에서 8-10시간 배양하며 각각 6ml의 용해한 M-H배양기(50°C)를 취하여 위상의 약 그릇의 표면에 덮고 다시 37°C에서 8-10시간 배양한 후 꺼내어 결과를 관찰하며 세균 생장이 없는 약 그릇의 최저 약물 농도를 본 세균의 최저 세균 억제 농도(MIC)로 한다.

시험결과:

(1) HLZ의 임상 분리 세균에 대한 체외 항균 활성은 표1과 같다.

(2) HLZ의 379개의 임상분리 병원균에 대한 MIC50, MIC90은 표2와 같다.

위상의 시험결과에 따르면 휴먼 라이소자임은 체외에 일정한 항균 작용이 있으며 내 약물성 세균에 대한 항균 활성도 매우 좋은 작용이 있다.

휴먼 라이소자임은 일종의 작은 분자의 단백질로 유기체의 눈물, 가래, 콧물, 백 세포와 혈청에 존재하며 다 종류 그람 반응의 양성 세균과 소수 그람 반응의 음성 세균에 살균 작용이 있으며 휴먼 라이소자임은 주요하게 Peptidoglycan중의 NAG와 NAM간의 β-1, 4glyvosidic bond연결을 차단하여 peptidoglycan의 틀 파괴로 세균의 분열해제를 초래하게 한다.

표1 HLZ, 닭 lysozume, clarithromycin와 Roxithromycin 체외 항균 활성

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주: HLZ는 휴먼 라이소자임(human lysozyme)를 말하고 CLZ는 대조 Lysozyme(닭 lysozyme)을 말하며 CLA는 Clarithromycin을 말하고 ROX는 Roxithromycin을 말한다.

B. HLZ에 피부 진드기 살멸 약품 SM-650 첨가의 체외 진드기 살멸 작용 평가

1. 휴먼 라이소자임 농축액체의 활성단위: 300단위/ml시험

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약품 및 시약

1. 휴먼 라이소자임의 활성단위: 300단위/ml, 대련기룡바이오기술연구소에서 제공함.

2. 피부 진드기 살멸 약품SM-650: 백색 분말로 순도는 ≥99％, PH: 6~8, 생산업체: 베이징내특바이오기술연구소.

시험용 진드기

사용하는 진드기 표본은 제4군의 대학의 임상 진찰소의 여드름 환자가 제공함.

시험방법:

체외 진드기 살멸 활성 측정: 그림방법을 채용하여 휴먼 라이소자임에 진드기 살멸 약품SM-650첨가의 최저 진드기 살멸 농도(MIC)를 측정하였다.

진드기 표본을 유리판에 분리하고 휴먼 라이소자임 300단위/ml와 진드기 살멸 약품SM-650 1％/ML을 유리판의 진드기 표본에 적정하여 결과를 관찰하여 최저 진드기 살멸 농도(MIC)를 확정하였다.

시험 결과는 표3과 같으며 결과는 휴먼 라이소자임에 진드기 살멸 약품SM-650을 첨가하였을 때 체외 진드기 살멸 작용이 있음을 표명한다.

표3

2. 휴먼 라이소자임 농축액체의 활성단위: 300단위/ml시험

약품 및 시약

1. 휴먼 라이소자임의 활성단위: 3000단위/ml, 대련기룡바이오기술연구소에서 제공함.

시험용 진드기: 사용하는 진드기 표본은 제4군의대학의 임상 진찰소의 여드름 환자가 제공함.

시험방법:

진드기 표본을 유리판에 분리하고 휴먼 라이소자임 3000단위/ml와 진드기 살멸 약품SM-650 1％/ML을 유리판의 진드기 표본에 적정하여 결과를 관찰하여 반수 진드기 살멸 농도(MIC)를 확정하였다.

시험 결과는 표4와 같으며 결과는 휴먼 라이소자임에 진드기 살멸 약품SM-650을 첨가하였을 때 체외 진드기 살멸 작용이 있음을 표명한다.

표4

3.휴먼 라이소자임 농축액체의 활성단위: 30000단위/ml시험

약품 및 시약

1. 휴먼 라이소자임의 활성단위: 30000단위/ml, 대련기룡바이오기술연구소에서 제공함.

시험방법:

진드기 표본을 유리판에 분리하고 휴먼 라이소자임 30000단위/ml와 진드기 살멸 약품SM-650 1％/ML을 유리판의 진드기 표본에 적정하여 결과를 관찰하여 살아 있는 것이 없는 것으로 진드기 살멸 농도(MIC)를 확정하였다.

시험 결과는 표5와 같으며 결과는 휴먼 라이소자임에 진드기 살멸 약품SM-650을 첨가하였을 때 체외 진드기 살멸 작용이 있음을 표명한다.

표5

그림방법을 채용하여 휴먼 라이소자임에 진드기 살멸 약품 SM-650 첨가하여 임상에 분리한 5인분에 대한 진드기 표본의 체외 살멸 작용을 측정하였는바 결과는 휴먼 라이소자임에 진드기 살멸 약품 SM-650 첨가는 진드기 살멸 작용이 있는 것으로 표명되었다.

진드기 살멸 약품 SM-650의 최저 살균 농도 MICRange는 0.2％~2％이다.

휴먼 라이소자임 활성 단위는 300단위/ml ~ 30000만 단위/ml이다.

대련기룡바이오기술연구소에서 연구 제조한 휴먼 라이소자임는 기타 ㄹ라랑라이소자임과 동등한 작용과 원리를 구비하여 주요하게 Peptidoglycan중의 NAG와 NAM간의 β-1, 4glyvosidic bond연결을 차단하여 peptidoglycan의 틀 파괴로 세균의 분열해제를 초래하게 한다.

진드기 살멸 약품인 SM-650은 매우 강력한 진드기 살멸 작용이 있다.

구체적인 실시 방식:

아래에서는 구체적인 실시 예를 결합하여 본 고안에 대하여 진일보로 설명한다.

실시 예1:

휴먼 라이소자임를 고온 멸균 후 글리세린 용해 방법으로 종자를 접종하고 오실레이터의 회전 속도는 매 분에 250r이고 배양 온도는 20°C로 항온 박스에서36시간 배양한다.

종자 박스 배양을 진행한 후 생산 박스 배양을 진행한다.

발효를 완성한 배양 액체를 추출 순화하고 추출 순화한 담백 농축 액체를 냉동 건조하여 담백량과 순도 및 라이소자임 활성을 측정하고 보관한다.

순도가 95％인 휴먼 라이소자임로 300U ~ 300만 U/ml로 제작하고 포스페이트 완충 용액 10~20Mm(pH6.5 ~ 7.5) 80％와 5~25％의 프로필렌 글리콜 및 1만 분지 5의 tween80을 상온에서 균일하게 혼합하여 (GMP요구에 부합되는 제약 공장에서 제약의 공정에 따라 완성한다.) 분무 약제와 적제로 제조한다.

실시 예2:

순도 95％의 휴먼 라이소자임을 300U ~ 300만 U/Ml로 제작하고 포스페이트 완충 용액 10(pH6.0) 80％와 20％ 프로필렌 글리콜 및 6％의 L-pyrrolidone Carboxylic Acid-Na, 0.9％ 수용성 Azone, 1만 분지 3의 tween80, 진드기 살멸 약품 SM-650 순도 ≥99％, ph:6~8(제품 급) 1％을 상온에서 균일하게 혼합하여 분무제와 적제로 제조한다.

실시 예3:

순도 95％의 휴먼 라이소자임을 300U ~ 300만 U/Ml로 제작하고 포스페이트 완충 용액 20(pH6.0) 85％와 20％ 프로필렌 글리콜 및 1％의 Carbomer resin, 0.3％의 에센스, 진드기 살멸 약품SM-650 순도 ≥99％, ph:6~8(제품 급) 1％을 70°C에서 균일하게 혼합하고 휴먼 라이소자임을 상온에서 기타 원료와 균일하게 혼합하여 크림과 유제로 제조한다.

[발명의 효과]

상술한 바와 같이 본 발명은 휴먼 라이소자임에 대하여 새로운 의료 용도를 발굴하여 한 개의 새로운 응용 영역을 개척하는 효과가 있다.

또한, 휴먼 라이소자임는 안전하고 독과 부작용이 없는 것으로 양호한 약용 전망을 밝혀낸 효과가 있다.

또, 휴먼 라이소자임은 제조 공법이 간단하며 분무 약제, 적제, 크림, 유제, 연고 등 제품으로 제조가 가능하며 사용이 편리한 효과가 있다.

Claims

용균효소의 황색 포도구균, 표면 포도구균, 포로피온산 간균, 피부 진드기와 내 약물성 세균으로 초래하는 여드름의 치료 약물에 응용할 수 있는 것을 특징으로 하는 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용.
제 1항에 있어서, 용균효소의 여드름 치료 약품에 응용에서 상기 용균효소는 유전자공정으로 표현하는 휴먼 라이소자임{Human lysozyme}으로서 유전자공정으로 표현하는 휴먼 라이소자임의 아미노기에 (글루탄산-알라닌)2나 (글루탄산-알라닌)3 와 결합한 휴먼 라이소자임이나 유전자공정으로 표현이나 화학합성의 돌연 변의 체 휴먼 라이소자임인 것을 특징으로 하는 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용.
제 1항에 있어서, 상기 여드름 치료 약물에는 약물에 활성300U~300만 U/ml의 휴먼 라이소자임을 함유하는 것을 특징으로 하는 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용.
제 1항에 있어서, 상기 여드름 치료 약물은 분무 약제, 적제, 연고나 유제로 제조하는 것을 특징으로 하는 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 여드름 치료 약물에는 진 드기 살멸 약품 SM-650을 함유한 것을 특징으로 하는 용균효소의 여드름 치료 약물으로의 활용.
분무 약품이나 적제로 이루어져 휴먼 라이소자임 300U~300만 U/ml, 포스페이트 완충 용액10~20Mm (Ph6.5~7.5) 80％, 5~25％ 프로필렌 글리콜, 1만 분지 5의 tween80으로 구성된 것을 특징으로 하는 용균효소를 이용한 여드름 치료 약물.
제 6항에 있어서, 상기 여드름 치료 약물은 휴먼 라이소자임 300U ~ 300만 U/ml, 포스페이트 완충 용액 10(pH6.0) 80％, 20％ 프로필렌 글리콜, 6％ L-pyrrolidone Carboxylic Acid-Na, 0.9％ 수용성 Azone, 1만 분지 3의 tween80, 진드기 살멸 약품 SM-650 순도 ≥99％, ph:6~8(제품 급) 1％로 구성됨을 특징으로 하는 용균효소를 이용한 여드름 치료 약물.
제 6항에 있어서, 상기 여드름 치료 약물은 휴먼 라이소자임 300U ~ 300만 U/ml, 포스페이트 완충 용액 20(pH7.0) 85％, 20％ 프로필렌 글리콜, 1％ Carbomer resin, 0.3％ 에센스, 1％ 진드기 살멸 약품 SM-650 순도 ≥99％, ph:6~8(제품 급)으로 구성됨을 특징으로 하는 용균효소를 이용한 여드름 치료 약물.