KR20060071557A

KR20060071557A - 항염증 조성물

Info

Publication number: KR20060071557A
Application number: KR1020040110177A
Authority: KR
Inventors: 임창용; 정승기; 박성규; 최준용; 김홍렬
Original assignee: 김홍렬
Priority date: 2004-12-22
Filing date: 2004-12-22
Publication date: 2006-06-27
Also published as: KR100629311B1

Abstract

본 발명은 항염증 조성물에 관한 것으로서, 숙지황, 산약, 산수유, 백복령, 목단피 및 택사를 각각 5 내지 8 중량%, 오미자, 천문동, 맥문동, 패모, 과루인, 행인, 반하, 지실, 길경, 황금, 황연을 각각 4 내지 6 중량% 및 감초를 2 내지 4 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물을 제공한다.

본 발명의 비스테로이드계의 항염증 조성물은 알레르기, 염증유발의 원인이 되는 사이토카인의 분비를 억제하여, 염증을 치료한다.

비스테로이드계 항염증 조성물

Description

항염증 조성물{Anti-inflammatory compositions}

도 1은 사람의 단핵구 세포주 THP-1에서 단핵구에서 대식세포로 변화를 보여준다. PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)는 단핵구에서 대식세포로의 분화를 유도한다.

도 2는 단핵구 유래 대식세포의 활성화를 위해 PMA를 처리하고, 본 발명에 따른 항염증 조성물을 0, 10, 10², 10³, 10⁴, 10⁵, 10⁶ (단위: ng/ml) 처리한 영향을 보여준다. PMA는 단핵구에서 대식세포로의 분화를 유도한다. 이하, 본 발명에 따른 조성물을 청상보하탕이라 한다.

도 3은 RT-PCR를 이용하여서 THP-1 세포 PMA와 LPS의 TNF-α에 대한 영향을 보여준다.

도 4는 RT-PCR 분석결과, 본 발명에 따른 항염증 조성물이 시험관내 실험에서 투여량에 비례하여 사이토카인을 억제하는 것을 보여준다.

도 5는 RT-PCR 분석결과, 본 발명에 따른 항염증 조성물이 사이토카인 IL-1β 및 IL-6의 생성 억제효과를 보여준다. LPS는 대장균에서 얻어진 염증을 일으키는 물질이고, PD98059는 TNF-α 전사 억제인자이다. 대조구에 비하여 LPS를 처리하였을 때, IL-1β 및 IL-6의 사이토카인이 대량 증가한 것을 알 수 있었으며, TNF-α 전사 억제인자 PD98059를 처리하였을 때, 사이토카인의 증가가 감소되었고, 본 발명에 따른 항염증 조성물은 PD98059보다 더 현저하게 사이토카인의 감소를 가져오는 것을 보여준다.

도 6는 RT-PCR 분석결과, 본 발명에 따른 항염증 조성물이 사이토카인 IL-8 및 TNF-α의 생성을 하는 것을 보여준다. LPS는 대장균에서 얻어진 염증을 일으키는 물질이고, PD98059는 TNF-α 전사 억제인자이다. 대조구에 비하여 LPS를 처리하였을 때, IL-8 및 TNF-α의 사이토카인이 대량 증가한 것을 알 수 있었으며, TNF-α 전사 억제인자 PD98059를 처리하였을 때, 사이토카인의 증가가 감소되었고, 본 발명에 따른 항염증 조성물은 PD98059보다 더 현저하게 사이토카인의 감소를 가져오는 것을 보여준다.

도 7은 ELISA(Enzyme-Linked ImmnunoSorbent Assay)를 통해서 IL-8 및 TNF-α의 배지내 수준을 확인한 결과이다. THP-1 세포에서 배지내 사이토카인의 양은 본 발명에 따른 항염증 조성물을 처리하였을 때 현저하게 감소하는 것을 알 수 있다. LPS는 대장균에서 얻어진 염증을 일으키는 물질이고, PD98059는 TNF-α 전사 억제인자이다.

대식세포(macrophage)는 많은 박테리아(bacterial invader)를 빨아들이거나 죽이는 역할을 하는데 주된 역할을 하는 효과기 세포(effector cell)이다. 미코박테리움, 리스테리아, 레지오넬라와 살모넬라종 등과 같은 통성(faculatative)세포내 박테리아가 있지만은, 감염된 대식세포는 세포내부에 박테리아가 있을 때 면역계 시스템에서 다른 세포에 자극을 줄 수 있는 IL-1, TNF-α와 IL-6과 같은 염증유발(pro-inflammatory) 사이토카인을 분비하여, 대식세포를 활성화시키고 세포질내 박테리아를 죽인다. 또한, 이러한 사이토카인들은 염증유발에 의한 조직 손상을 가져온다. 사이토카인은 만성 염증에서 염증진행의 조정 및 지속에서 주요한 역할을 한다.

LPS는 그람음성의 박테리아의 외부 세포막의 주된 요소이고, 염증에 대한 가장 주요한 미생물 개시인자 중에 하나이다. LPS는 단핵세포와 대식세포를 활성화하여 암괴사인자-α(tumor necrosis factor-α; TNF-α), 인터루킨(IL)-1β, IL-6, IL-8과 IL-12 등과 같은 염증유발 사이토카인을 생성 시킨다. 또한, 대식세포는 LPS에 반응하여 혈소판-활성화 물질, 프로스타글란딘, 효소, 및 일산화질소 같은 자유라디칼 등을 포함한 다른 다양한 생물학적 반응매개물을 분비한다.

최근, 부신피질호르몬은 염증을 치료하기 위한 가장 일반적인 약물이다. 부신피질호르몬은 스테로이드계 호르몬으로서, 이를 만성적으로 사용될 때 부작용이 있다.

그러므로, 종래의 항염제 보다 성능이 좋고, 독성이 없는 항염제의 개발이 필요하다.

종래의 스테로이드계 호르몬을 만성적으로 염증 치료에 사용하였을 때 일어나는 부작용을 피하기 위하여, 비스테로이드성의 항염증 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 숙지황, 산약, 산수유, 백복령, 목단피, 택사, 오미자, 천문동, 맥문동, 패모, 과루인, 행인, 반하, 지실, 길경, 황금, 황연, 감초를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물을 제공한다.

본 발명은 숙지황, 산약, 산수유, 백복령, 목단피 및 택사를 각각 5 내지 8 중량%, 오미자, 천문동, 맥문동, 패모, 과루인, 행인, 반하, 지실, 길경, 황금, 황연을 각각 4 내지 6 중량% 및 감초를 2 내지 4 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물을 제공한다.

상기 성분의 조성비는 반복된 실험의 결과를 토대로 얻어진 것이며 하한치 보다 낮을 경우에는 그 성분의 생리 활성 효과가 감소하며, 그 상한치 보다 높을 경우에는 타성분의 생리활성 효과가 감소될 수 있어 조성물의 상승작용 및 협동작용이 저하될 우려가 있다.

일반적으로 본 발명에 따른 항염증 조성물은 임상투여시에 경구 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항염증 조성물은 실제 임상투여시에 경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명에 따른 항염증 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제,보존제 등이 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 본 발명에 따른 항염증 조성물을 식품으로 사용할 경우, 본 발명에 따른 항염증 조성물를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다.

상기 항염증 조성물를 첨가할 수 있는 식품의 예로는 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 및 비타민 복합제 등이 있고, 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 자세히 설명한다. 그러나 본 발명의 실시예는 본 발명의 권리범위를 한정하는 것이 아니며, 본 발명의 권리범위는 청구범위에 의하여 정하여진다.

실시예 1: 본 발명에 따른 항염증 조성물의 성분비를 하기 표 1에 나타내었다.

표 1. 본 발명에 따른 항염증 조성물의 성분비

[시험예 1] 본 발명에 따른 항염증 조성물이 대식세포 세포주에 대한 영양 확인

사용되어진 PMA (phorbol 12-myristatic 13-acctate)은 단핵구에서 대식세포로의 전환을 유발하는 물질이다. 대장균에서 얻어진 LPS는 매우 강력한 면역 반응 유발 물질이다. LPS는 TNF-α와 COX-2 프로모터를 유도시킨다. 본 발명에 따른 항염증 조성물의 역가를 비교하기 위하여 기존에 알려진 TNF-α 전사 억제제인 PD98059를 이용하여 비교하였다.

단핵구 유발(monocyte-derived)대식 세포에 대하여, 세포들에게 PMA를 첨가하여 96웰 플래이트에 위치시키고, 항염증조성물을 (0, 10, 100, 1000, 10000, 100000ng/ml)의 농도로 배양된 배지에 처리하였다. 세포들은 24시간 동안 37℃의 5% CO₂하에서 배양되었다.

생산되어지는 사이토카인의 발현양을 비교하기 위하여 RT-PCR를 이용하였고, 사용되어진 프라이머쌍을 표 2에 나타내었다.

표 1. 사용되어진 프라이머쌍

결과

본 발명에 따른 항염증 조성물은 투여 용도에 따라서 대식세포의 성장에는 큰 영향이 없었다. 도 2는 단핵구 유래 대식세포의 활성화를 위해 PMA를 처리하고, 본 발명에 따른 항염증 조성물을 0, 10, 10², 10³, 10⁴, 10⁵, 10⁶ (단위: ng/ml) 처리한 영향을 보여준다. 투여량이 10⁵ 까지는 대조군과 비교하여서 대식세포의 생존율에 큰 영향이 없었다.

도 3은 RT-PCR를 이용하여서 THP-1 세포 PMA와 LPS의 TNF-α에 대한 영향을 보여준다. LPS 단독으로는 TNF-α의 생산에는 영향이 없어서 대조군과 큰 차이가 없었다. PMA는 TNF-α 생산에 큰 영향을 미쳤다. LPS와 PMA를 둘다 처리하였을 경우에는 TNF-α의 생산량이 각각 처리한 효과의 합보다 많아서 협동적으로 작용함을 알 수 있다.

[시험예 2] RT-PCR를 이용한 본 발명에 따른 항염증 조성물의 염증유발 사이토카인의 억제 효과 확인

총 RNA는 사용자 매뉴얼의 방법대로 트리졸 시약을 이용하여 추출되었다. RNA 샘플은 M-MLV 역전사 효소에 의해 역전사되었으며, 사이토카인 프라이머는 공지되어진 서열을 사용하여 선택된 사이토카인을 각각 증대시키기 위하여 사용되었다. 각각의 cDNA 생성물에 대하여, 최적의 PCR 증폭에 대한 최적 싸이클 수는 실험적으로 결정되었다. 상대적으로 IL-1b, IL-6, IL-8, IL-10, TNA-α mRNA에 집중시켜 결정되었다.

결과

[시험예 3] ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)에 의한 본 발명에 따른 항염증 조성물의 사이토카인 억제 효과 확인

배지에 있는 IN-8과 TNF-α의 수준은 사용자 지침에 따라 ELISA에 의하여 측정되었다. ELISA 실험은 두 번 실시되었다.

결과

도 7은 ELISA(Enzyme-Linked ImmnunoSorbent Assay)를 통해서 IL-8 및 TNF-α의 배지내 수준을 확인한 결과이다. THP-1 세포에서 배지내 사이토카인의 양은 본 발명에 따른 항염증 조성물을 처리하였을 때 현저하게 감소하는 것을 알 수 있다.

본 발명에 따른 항염증 조성물은 농도에 따른 세포 생존율에 영향을 주지 않았다. 따라서 대식세포에 의한 면역시스템의 손상을 가져오지 않아 대식세포에 의한 면역활성을 유지하는 염증 유발 면역반응의 억제 조성물이다.

본 발명에 따른 항염증 조성물은 시험관내에서 그 농도에 따라 사이토카인을 억제하는 효과가 있었다. 또한, 본 발명에 따른 항염증 조성물은 다양한 염증 관련 사이토카인에 대한 억제력을 보였다. 시험관내 실험에서 사이토카인(IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α)을 억제하는 것을 보였고, 따라서 알레르기 및 면역반응에 영향을 주며, 염증유발을 억제한다.

또한, 본 발명에 따른 항염증 조성물은 만성적 염증치료에 있어서 많은 부작용을 가져오는 스테로이드계 호르몬에 대한 대안으로서, 스테로드계 호르몬에 의한 부작용이 없이 안정하고 효과적인 항염증 조성물이다.

결론적으로, 본 발명에 따른 항염증 조성물은 염증관련 사이토카인의 분비를 억제하여 염증관련 사이토카인 유발 알레르기 반응 및 염증의 치유에 효과적이다.

Claims

숙지황, 산약, 산수유, 백복령, 목단피 및 택사를 각각 5 내지 8 중량%, 오미자, 천문동, 맥문동, 패모, 과루인, 행인, 반하, 지실, 길경, 황금, 황연을 각각 4 내지 6 중량% 및 감초를 2 내지 4 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 조성물.
제 1 항에 따른 항염증 조성물을 유효성분을 함유하는 식품 조성물.
제 1 항에 따른 항염증 조성물을 유효성분을 함유하는 약품 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물을 유효성분으로 함유하는 캡슐제제.