KR20060007871A

KR20060007871A - 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 ａ 화합물을함유하는 조성물

Info

Publication number: KR20060007871A
Application number: KR1020040057274A
Authority: KR
Inventors: 김선여; 허진영; 하상근
Original assignee: 학교법인 경희대학교
Priority date: 2004-07-22
Filing date: 2004-07-22
Publication date: 2006-01-26
Also published as: KR100630867B1

Abstract

본 발명은 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A (Spicatoside A) 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로써, 상세하게는 본 발명의 스피카토사이드 A는 PC12 세포의 신경돌기의 성장(neurite outgrowth)을 유도함과 동시에 베타-아밀로이드(β-amyloid)로 인한 세포사멸을 억제함으로써 신경세포 손상을 보호하는 효과가 있으므로, 이를 포함하는 조성물은 신경세포의 사멸에 의해 발생되는 퇴행성 뇌질환 즉, 뇌졸중, 중풍, 치매, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 피크(Pick)병 및 크로이츠펠트-야콥(Creutzfeld-Jakob)병 등의 예방 및 치료를 위한 의약품 및 건강기능식품으로 이용될 수 있다.

맥문동, 스피카토사이드 A(Spicatoside A), 신경돌기 성장, 신경세포 보호, 퇴행성 뇌질환, 치매, 약학조성물, 건강기능식품.

Description

신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 Ａ 화합물을 함유하는 조성물{Composition comprising Spicatoside A showing neuronal cell-protecting activity}

도 1a 내지 1b 는 PC12 세포의 스피카토사이드 A에 의한 신경돌기 성장(neurite outgrowth)의 변화를 관찰한 도로써, 도 1a 는 스피카토사이드 A의 농도변화에 따른 PC12 세포의 신경돌기 성장의 변화를 관찰한 사진이고, 도 1b 는 그 효과를 그래프로 나타낸 도이며,

도 2a 내지 2h 는 PC12 세포의 스피카토사이드 A에 의한 단백질 발현량을 측정하기 위해 면역블롯(Immunoblot) 분석을 실시한 도로써, 도 2a 는 티로신 키나제 저해제인 K252b 100 nM, NGF 50 ng/㎖ 및 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖을 처리한 후, Trk A의 인산화 정도를 관찰한 사진이며, 도 2b 는 시간경과에 따른 Erk 1/2의 인산화 변화를 관찰한 사진이고, 도 2c 는 시간경과에 따른 CREB의 인산화 변화를 관찰한 사진이며, 도 2d 는 도 2c 의 CREB 인산화 변화를 정량화한 그래프이고, 도 2e 는 시간경과에 따른 Akt의 인산화 변화를 관찰한 사진이며, 도 2f 는 도 2e 의 Akt의 인산화 변화를 정량화한 그래프이고, 도 2g 는 Aβ 10 uM 및 스피카토사이드 A 1, 5, 10 ㎍/㎖을 처리한 후, Bad의 인산화 변화를 관찰한 사진이며, 도 2h 는 도 2g 의 Bad의 인산화 변화를 정량화한 그래프이고,

도 3a 내지 3b 는 PC12 세포에 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖을 처리한 후, PI3 키나제 활성도를 관찰한 도로써, 도 3a 는 시간경과에 따른 PI3 키나제 활성도를 관찰한 사진이며, 도 3b 는 도 3a 의 시간경과에 따른 PI3 키나제 활성도 변화를 정량화한 그래프이고,

도 4 는 PC12 세포에 티로신 키나제(Tyrosine kinase) 저해제인 K252b, Erk 1/2 저해제인 PD98059 및 PI3 키나제 저해제인 LY294002를 처리한 후, 세포의 신경돌기 성장 변화를 관찰한 사진이고,

도 5 는 Aβ로 유도된 PC12 세포사멸에 대한 NGF 50 ng/㎖ 및 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖ 의 효과를 MTT 반응으로 관찰한 사진이며,

도 6 은 PC12 세포에 Aβ 10 uM 및 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖을 처리한 후, DNA 단편의 변화를 관찰한 사진이고,

도 7 은 PC12 세포에 Aβ 10 uM 및 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖을 처리한 후, 세포막의 포스파티딜이노시톨(phosphatidylinositol)의 변화를 PI 와 아넥신(annexin) V 항체를 이용한 유세포 분석(Flowcytometirc)으로 관찰한 도이며,

도 8 은 PC12 세포에 Aβ 10 uM 및 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖을 처리한 후, Hoechst 33258 염색을 통해 핵의 응축을 관찰한 사진이고,

도 9 는 PC12 세포에 Aβ, NGF 50 ng/㎖ 및 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖을 처리한 후, c-jun, Bax, p53, Bcl-2 및 GAPDH의 변화를 RT-PCR를 통해 관찰한 사진이 며,

도 10 은 마우스의 수동회피반응(passive avoidance) 실험에서 수동회피시간(escape time)을 측정한 그래프이다.

본 발명은 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A(Spicatoside A) 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다.

뇌혈관질환은 크게 2가지 형태로 분류될 수 있다. 하나는 뇌출혈 등에서 볼 수 있는 출혈성 뇌질환이고, 다른 하나는 뇌혈관의 폐쇄 등에 의해 나타나는 허혈성 뇌질환이다. 출혈성 뇌질환은 교통사고 등에 의해서 주로 나타나며, 허혈성 뇌질환은 주로 노령의 사람들에서 자주 나타나는 질환이다.

대뇌에 일시적인 뇌허혈이 유발되는 경우, 산소와 포도당의 공급이 차단되어 신경세포에서는 ATP 감소, 부종(edema)이 발생되며, 결국 뇌의 광범위한 손상이 유발된다. 신경세포의 사멸은 뇌허혈이 있은 후 상당한 시간 경과 후에 나타나는데, 이를 지연성 신경세포사(delayed neuronal death)라고 한다. 지연성 신경세포사는 몽골리안 저빌(Mongolian gerbil)을 이용한 일과성 전뇌 허혈모델(transient forebrain ischemic model)을 통한 실험에서 살펴보면, 5분간 뇌허혈 유도 4일 후 해마(hippcampus)의 CA1 영역에서 신경세포사가 관찰되는 것으로 보고되고 있다 (Kirino T, Sano K. Acta Neuropathol., 62, pp201-208, 1984; Kirino T. Brain Res., 239, pp57-69, 1982).

신경세포의 성장(growth), 분화(differentiation) 및 사멸(cell death)은 각기 정산적인 발생, 조직의 고유한 기능 확립 및 항상성 유지를 조절하는 과정이다. 신경세포의 사멸은 두 가지 형태로 일어나는데 세포자멸(apoptosis)과 세포괴사(necrosis)가 있다. 신경세포괴사는 세포질과 미토콘드리아의 팽창 그리고 세포질의 용해 후 핵막의 파괴에 의해 유도되는데, 국소빈혈(ischemic), 저체온(hypotherimia), 외상(trauma)이나 뇌졸중, 물리적 또는 화학적 외상과 같은 갑작스러운 상해에 의해 세포가 죽는 급성 사멸을 말한다(Tomei LD., et al., Apoptosis:The molecular basis of cell death. Cold Spring Harbor Labolatory press New York, 1991). 또한, 신경세포괴사는 단백질 합성억제제에 의하여 영향을 받지 않으며 신경계에 일어나는 대표적인 신경세포괴사는 신경세포가 이온성 글루탐산 수용체의 활성화에 의해 손상을 입을 때 나타난다. 반면, 세포자멸은 예정화 된 사멸이라고도 하는데, 특징적 형태는 세포 크기의 축소(cell shrinkage), 세포막 팽창(membrane belbbing), 세포골격의 붕괴와 같은 막의 변화와 염색질 응축 등과 같은 핵의 변화를 수반한다.

신경세포의 성장, 분화 및 사멸을 조절하는 것이 신경조절인자로써, 중추신경(central nervous system, CNS)과 말초신경(pheriperal nervous system, PNS)에서 뉴런(neuron)의 성장, 분화 및 생존에 영향을 미치는 단백질을 모두 신경성장인자(nerve growth factor, NGF)들이라 한다. 신경성장인자는 뇌유래 신경성장인자 (brain-derived neurotrophic factor, BDNF), 신경인자(neurotrophin-3, NT-3), NT-4, NT-5 등이 있다. 이러한 신경인자들은 합성하는 곳이나 분화, 발현되는 양상이 다르고 표적장소가 다르다. 신경인자는 신경세포사멸을 억제하며, 이는 신경인자의 결핍에 의한 단백질의 합성(cell death related genes)에 의존하는 세포사멸을 발생시킨다.

신경성장인자(NGF)는 레비몬탈치니(Levi-Montalcini)가 분리하였고, 병아리 교감신경절 뉴런의 뉴런축색 성장을 촉진시킨다고 보고되었다. 과거에 신경성장인자는 뉴런의 분열을 촉진하는 것으로 생각되었으나, 현재는 뉴런의 퇴화 사멸을 억제함으로써 뉴런의 감소를 방지하고 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 신경성장인자는 중추신경계에서 신경세포의 손상을 보호하는 작용을 하고(Hefti F., J. Neurosci., 6(8), pp2155-2162, 1986), 성숙한 신경원 유지에 중요한 역할을 한다(Levi-Montalcini R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 46, pp384-391, 1960).

신경계의 정상적인 발생 과정 중 발생중인 뉴런의 약 50%는 세포사멸에 의해 제거되며(Raff MC., et al., Science, 262(5134), pp695-70, 1993), 표적 세포에 의해 분비되는 신경인자들이 뉴런의 생존을 결정한다고 알려져 있다. 신경세포가 정상상태에서 생존, 성장, 분화하기 위해서는 신경성장인자와 같은 성장인자들이 필수적으로 요구된다고 할 수 있다. 그러나 이러한 신경성장인자는 분자량이 크기 때분에 뇌에서의 뇌혈관장벽(blood brain barier, BBB)를 통과하지 못한다. 그래서 퇴행성 뇌질환에 있어서 치료효과를 보기가 어렵게 되어 있다. 이에 내생하는 신경 성장인자의 합성을 유도할 수 있으며, 신경성장인자와 같은 역할을 하는 물질의 개발이 요구되는 실정인다.

맥문동(麥門冬)은 소엽맥문동(Ophiopogon japonicus)의 뿌리의 팽대부(膨大部)로써, 1968년에 카토(Kato H., et al., Yakugaku zasshi, 88(6), pp710-714, 1968)는 맥문동에서 시토스테롤(sitosterol), 스티그마스테롤(stigmasterol), 루스코제닌(ruscogenin, 5-spiro-stene-1,3-diol)을 비당부로 하는 스테로이달 사포닌인 오피오포고닌(ophiopogonin) A, B, C, D를 분리하였고, 아사노(Asano T., et al., Chem. Pharm. Bull., 41(3), pp566-567, 1993)가 비당부 사포닌인 3종의 오피오포고닌 B′, C′, D′를 분리하였다. 맥분동은 항산화 작용이 있고, 관상동맥의 혈류량 촉진과 심장 근육의 허혈증에 대한 보호작용이 현저하며, 진정작용을 나타낸다. 또한, 면역증강 작용이 있고, 혈당을 내리며 백색 포도상구균과 대장균으로부터 항균작용을 보인다. 또한, 최근 연구 보고에 따르면 맥문동이 주약으로 포함된 생맥산(生脈散: 인삼, Panax ginseng C. A. Meyer; 맥문동, Ophiophogon japonicus Ker-Gwal; 오미자, Schisandra chinensis Bail)은 신사구체 경화증 치료제, 국소빈혈 치료제 및 강심제 등으로 사용되고 있다.

또한, 맥문동 물 추출물과 알콜 추출물은 혈당을 내려가게 하고, 항암, 간 기능 증진 효과가 있음이 보고되어 있으며, 이의 활성 성분인 스피카토시드 B(Spicatoside B)는 폐암, 난소암, 악성흑색종, 중추신경계암, 결장암의 암세포에 대한 생장 억제 활성을 가진다고 보고되어 있다(중약대사전, 1990).

스피카토사이드 A(Spicatoside A)는 맥문동에 함유되어 있는 모노테르페노이 드 글리코시드(monoterpenoid glycoside) 화합물 중의 하나로써, 현재까지 스피카토사이드 A에 대한 연구는 성장호르몬 분비촉진 기능(한국특허공개번호 제2003-0070282) 등이 보고되어 있으나, 신경세포 보호 작용에 대해서는 기재되거나 교시된 바는 없다.

이에 본 발명자는 스피카토사이드 A 화합물의 신경세포의 신경돌기 성장(neurite outgrowth) 유도와 뇌허혈성 신경세포 사멸에 대한 억제 활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A(Spicatoside A) 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적에 따라, 본 발명은 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A(Spicatoside A) 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 조성물을 제공한다.

상세하게는, 본 발명은 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A 화합물을 유효성분으로 함유하고, 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 스피카토사이드 A 화합물은 (+)-5-[1-(베타-D-글루코피라노실옥시메틸))에테닐]-2-메틸-2-시클로헥산-1-원 ((+)-5-[1-(beta-D-glucopyranosyloxymethyl)ethenyl]-2-methyl-2-cyclohexen-1-one)으로써, 하기 화학식 1로 표기된다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 스피카토사이드 A 화합물은 식물 추출물, 바람직하게는 맥문동 추출물로부터 수득 분리 가능하거나, 당업계에서 잘 알려진 합성방법(Herbert O. House, Modern Synthetic Reactions, The Benjamin Cummings Publishing Company, 1972)에 의하여 수득하거나 시중구입이 가능하다.

상기의 스피카토사이드 A 화합물은 맥문동 추출물로부터 하기와 같은 분리공정을 통하여 수득가능한데,

예를 들어, 맥문동의 추출물로부터 스피카토사이드 A 화합물을 수득하기 위한 분리공정을 보다 구체적으로 설명하면,

본 발명의 맥문동 조추출물은 건조 상태의 맥문동 생약을 그 중량의 약 1 내지 20배 부피의 물, 탄소수 1내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매, 바람직하게는 50 내지 100% 메탄올 용매를 가하여, 4 내지 6℃의 온도에서 1시간 내지 24시간 동안 냉침을 한 후, 20 내지 100℃의 추출온도에서 약 1 시간 내지 2일 동안 열수 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 초음파 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회 반복하여 추출물을 수득한 후, 감압여과하고 여과한 추출물을 혼합하여 회전진공농축기로 20 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 70℃에서 감압 농축하여 용매를 제거하여 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매에 따른 가용추출물인 조추출물을 얻는 단계를 통하여 제조할 수 있으며,

맥문동의 비극성 용매 가용추출물은 상기 조추출물을 물에 현탁한 후 이들 현탁액의 약 1 내지 10배, 바람직하게는 약 1 내지 5배 부피의 n-헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올 등과 같은 비극성 용매, 바람직하게는 에틸아세테이트 용매를 가하여 1 내지 10회 분획하여 에틸아세테이드 가용성 분획부와 수가용성 분획부로 분리한 후 각각의 용매 분획부를 회전 진공 농축기로 감압농축하여 용매를 제거하여 각각의 추출물을 얻는 단계를 통하여 에틸아세테이트 가용성 분획부를 제조할 수 있으며,

또한, 비극성 용매 가용성분 추출과정을 거친 수가용성 분획부에 약 1 내지 10배, 바람직하게는 약 1 내지 5배 부피의 n-헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올 등과 같은 비극성 용매, 바람직하게는 부탄올을 가하여 1 내지 10회 분획하여 부탄올 가용성 분획부와 수가용성 분획부를 수득할 수 있으며, 용매 분획부를 회전 진공 농축기로 감압농축하여 용매를 제거하여 각각의 추출물을 얻는 단계를 통하여 부탄올 가용성 분획부를 제조할 수 있다.

상기의 분획물로부터 플래쉬 크로마토그래피(Flash Chromatography)법, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Silica gel Column Chromatography)법, 세파덱스(Sephadex) LH20 컬럼 크로마토그래피법 및 프렙(prep) 고성능 액체 크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)법의 분리공정을 연속 수행하여 본 발명의 스피카토사이드 A 화합물이 수득 될 수 있다.

본 발명에서는 상기 화합물이 신경세포의 신경돌기 성장(neurite outgrowth)을 유도하고 뇌허혈성 신경세포 사멸에 대한 억제 활성이 있어, 신경세포 손상을 보호하는 효과가 있음을 보여준다.

따라서 본 발명에서는 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A 화합물이 신경세포사에 의하여 유발되는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 의약품 및 건강기능식품으로 이용될 수 있음을 보여준다.

또한, 상기 화합물은 오랫동안 생약으로 사용되어 오던 천연물로부터 분리해낸 성분으로써, 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

상기 퇴행성 뇌질환은 신경세포사에 의하여 유발되는 것을 특징으로 하며, 신경세포사에 의하여 유발되는 퇴행성 뇌질환으로는 뇌졸중, 중풍, 치매, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 피크(Pick)병 또는 크로이츠펠트-야콥(Creutzfeld-Jakob)병이 포함될 수 있다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명에 따른 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화 하여 사용될 수 있다.

상세하게는, 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼 슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose), 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 0.01 내지 500 mg/㎏의 양, 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 또한 그 스피카토사이드 A의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 화합물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 개선을 위한 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 퇴행성 뇌질환의 예방 및 개선을 위한 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다.

본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 예를 들어, 캔디, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

이때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은, 일반적으로 본 발명의 건강 기능 식품 조성물의 경우 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 20 중량%로 가할 수 있으며, 건강 기능 음료 조성물의 경우 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

이 외 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물: 예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그다지 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기의 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 맥문동 추출물로부터 스피카토사이드 A 화합물의 분리

경남 밀양지역에서 구입한 맥문동(Liriope Tuber)을 건조하고 세절하여 10 kg을 85% 메탄올을 가하여 18시간동안 냉침한 후에 1시간동안 3회에 걸쳐 초음파로 추출한 후에 여과하여 여액을 감압농축기(R124, Buchi사)에서 농축하고 동결건조하여 조추출물 1200g을 얻었다.

상기에서 얻은 조추출물을 증류수에 현탁한 후에 에틸아세테이트를 첨가하고 5회에 걸쳐 분획을 하였다. 남은 물층을 다시 부탄올로 5회에 걸쳐 분획하였다. 에틸아세테이트층과 부탄올 층에서 각각 90 g 과 140 g의 분획물을 얻었다. 부탄올 분획물에서 PC12세포의 신경돌기 성장 효과를 확인하여 부탄올 분획물을 대상으로 이후 분리작업을 하였다. 140 g의 분획물을 플래쉬 크로마토그래피 (flash chromatography)에서 물 100%, 물:메탄올 (2:1의 비율로부터 1:2의 비율로 이동), 그리고 메탄올 100% 조건으로 용출하여 7개(Ⅰ~ Ⅶ)의 분획물을 얻었다. 이 분획물 중 7번(Ⅶ) 분획물 2.1g을 다시 실리카 컬럼 크로마토그래피에서 클로로포름:메탄올:물 (7:3:1의 비율로부터 65:35:10의 비율로 이동)의 조건으로 용출하였고 6개의 분획물을 획득하였다(VII-A ~ VII-F). 생물학적 활성을 보인 3번 분획물(VII-C) 100 mg을 메탄올:물 (2:1) 조건에서 세파덱스 (sephadex) LH-20 컬럼으로 분리하여 6개의 분획물을 획득하였다(VII-C-a ~ VII-C-e). 3번 분획물(VII-C-c) 20 mg을 prep HPLC (Gilson 321 322)를 이용하여 활성물질 20mg을 획득하였다. 검출은 208 nm에서 UV로 측정했으며 컬럼은 제이스피어(J'sphere) ODS-H80 모델로 규격은 250 × 4.6 mm (S-4 ㎛)이였다. 이동상은 아세토니크릴:물 (53:46)의 조건이였으며 칼럼온도는 30℃을 유지하였고 용출속도는 1 ml/분이였다. 주입부피는 20 ㎕ (10 mg/ml)이였다. 활성물질의 구조분석은 바리안(varian) U1500 (500 MHz, CDCl₃)을 이용하여 ¹H-NMR과 ¹³C-NMR를 통해 확인하였다.

이상의 기기분석결과, 하기 물성치를 갖는 스피카토사이드 A 화합물 1.2 g을 수득하여 이를 하기의 실험예의 시료로 사용하였다.

H¹-NMR (200 MHz) δ0.86(s), 1.07(d, J=7.2Hz), 1.10(d, J=6.8Hz), 1.35(s), 1.52(d, J=6.2Hz), 4.85(d, J=7.6Hz), 5.28(d, J=7.6Hz), 5.45(d, J=7.6Hz), 5.56(d, J=5.2Hz)

¹³C-NMR (50.3 MHz) δ15.3, 15.6, 16.8, 17.2, 24.1, 26.7, 26.9, 28.0, 32.5, 32.9, 33.5, 37.8, 40.7, 40.9, 43.0, 43.4, 44.2, 50.9, 57.5, 63.4, 65.5, 68.7, 81.7, 83.4, 110.2, 124.5, 140.2

참고예 1. PC12 세포의 배양

PC 12 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 말 혈청(Horse serum 10%, v/v), 우태아 혈청(Fetal bovine serum 5%, v/v) 그리고 1% 페니실린 스트렙토마이신(penicillin-streptomycin)이 포함된 RPMI 1640 배지에서 배양하여 하기 실험예에 사용하였다.

실험예 1. PC12 세포의 스피카토사이드 A에 의한 신경돌기 성장(neurite outgrowth) 유도 측정

미분화 된 PC12 세포에서 스피카토사이드 A의 신경돌기 성장에 미치는 영향을 알아보기 위하여, PC12 세포를 폴리-D-라이신(Poly-D-lysine)으로 코팅한 6 웰 플레이트에 2% 말 혈청(horse serum), 1% 페니실린 스트렙토마이신 배지조건으로 웰당 5 × 10⁴개로 분주하여, 24시간 후에 스피카토사이드 A 1, 5, 10 ㎍/㎖와 NGF 50 ng/㎖을 처리하였다. 신경돌기(neurite)의 길이는 시료 처리 후 48시간 후에 도립 상대비 현미경(CK-2, Olympus, USA)을 이용하여 측정하였다.

상기 실험의 결과, 스피카토사이드 A 1, 5, 10 ㎍/㎖와 NGF 50 ng/㎖를 처리하였을 때, 신경돌기 성장이 증가함을 모두 확인 할 수 있었고, 스피카토사이드 A는 농도의존적으로 신경돌기 성장을 증가 시켰음을 확인 하였다. 또한, 스피카토사이드 A 10 ㎍/㎖ 농도는 NGF 50 ng/㎖와 같은 신경돌기 성장 효과를 나타내어, 스피카토사이드 A가 PC12 세포의 분화를 유도시키는 효과가 있음을 확인하였다(도 1a 내지 도 1b 참조).

실험예 2. PC12 세포의 스피카토사이드 A에 의한 NGF 유사 신호전달 체계 확인

스피카토사이드 A가 NGF와 같은 신호전달 체계를 통해 신경돌기 성장을 증가시키는지에 대해 알아보았다.

2-1. PC12 세포의 스피카토사이드 A에 의한 단백질 발현 측정

PC12 세포의 스피카토사이드 A에 의한 단백질 발현량을 측정하기 위하여 면 역블롯(Immunoblot) 분석을 실시하였다.

PC12 세포를 PBS로 씻어준 후에 트립신(Trypsin)-EDTA를 이용하여 세포를 수득하였다. 용해 버퍼(Lysis buffer, 50 mM 트리스(Tris)-Cl, pH 8.0, 0.1% SDS, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.02% 소디움 아자이드(sodium azide) 및 0.5% 소디움 디옥시콜레이트(sodium deoxycholate))로 세포를 용해시킨 후에 원심분리를 하였다. 상층액을 걷어낸 뒤 BSA를 표준품으로 바이오-래드 단백질 측정 키트(Bio-Rad protein assay kit)를 이용 단백질을 정량하였다. 동일의 단백질량 100 ㎍에 시료 버퍼(sample buffer)를 넣고 끓여주었다. 단백질을 12% SDS-PAGE 겔에서 전기영동한 후에 PVDF막으로 옮기고 5% 스킴 밀크(skim milk)로 블로킹(blocking)하였다. PVDF 막을 일차항체(Erk 1/2, Akt, Trk A, 포스포(phospho)-Erk 1/2, 포스포(phospho) Akt, 포스포(phospho) Trk A, bad 및 포스포(phopho)-bad 는 1:1,000으로 희석, CREB, 포스포(phospho)-CREB은 1:3,000으로 희석)로 상온에서 16시간 반응시켰다. 일차항체를 제거한 후에는 HRP-접합성 이차항체(래빗 항-마우스(rabbit anti-mouse) IgG 및 마우스 항-래빗(mouse anti-rabbit) 1:10000 희석)로 1시간 반응시켰다. ECL 용액과 반응 시킨 후에 필름에 노출시켜 단백질의 발현량 차이를 관찰하였다(도 2a 내지 도 2h 참조).

2-2. PI3 키나제 활성측정 (PI3 kinase assay)

PC12 세포를 PBS로 씻어준 후에 1ml의 용해 버퍼(Lysis buffer, 20 mM 트리 스(Tris)-Cl, pH 7.5, 137 mM NaCl, 1 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 100 uM Na₃VO₄, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 10% 글리세롤 (Glycerol), 5 ㎍/ml 루펩틴 (leupeptin) 및 1 mM 페닐메틸술포닐 프로라이드 (phenylmethyl-sulfonyl fluoride: PMSF))로 세포를 용해시킨 후에 원심분리하여 상등액을 취하였다. 면역침전을 위하여 20 ㎕의 항-포스포티로신(anti-phosphotyrosine) 항체를 500 ㎍의 단백질을 함유하고 있는 상등액에 넣어 4℃에서 1시간동안 반응시켰다. 면역침전물을 1% NP-40과 100uM Na₃VO₄을 넣은 PBS로 세 번 세척한 후에 500 mM LiCl₂ 와 100 uM Na₃VO₄을 함유한 100 mM 트리스(Tris)-Cl (pH 7.5)로 다시 세 번 세척하고 마지막으로 100 mM NaCl, 1 mM EDTA 과 100 uM Na₃VO₄를 넣은 25 mM 트리스 (Tris)-Cl (pH 7.5)로 두 번 세척하였다. 면역침전물을 100 ㎕의 키나제 측정 용액(kinase assay buffer, 20 mM 트리스 (Tris)-Cl, pH 7.6, 75 mM NaCl, 10 mM MgCl₂)과 200 ㎍/ml 포스파티딜이노시톨(phosphatidylinositol, 10 mM 트리스 (Tris)-Cl , pH 7.6, 1 mM EGTA, 10μ Ci[γ-³²P]ATP) 용액을 함께 상온에서 20분간 방치하였다. 반응을 반응정지 용액 (stop solution, 1 N HCl 100 ㎕ 및 클로로포름:메탄올(1:1) 200 ㎕)으로 정지시켰다. 원심분리 후에 유기용매층을 걷어내어 1%의 포타슘 옥살레이트 (potassium oxalate)로 코팅한 실리카겔 TLC판에 CHCl₃:CH₃OH:H₂O:NH₄OH(60:47:11.3:2)용액으로 전개하였다. TLC판을 말린후에 오토라디오그파피 (autoradiogrpahy)로 PI3 키나제의 활성을 확인하였다.

상기 실험의 결과, 면역블롯 분석을 통해 스피카토사이드 A가 Trk A 및 Erk 1/2의 인산화를 증가시키고 PI3 키나제 활성을 증가시키는 것을 확인하여, 스피카토사이드 A가 Trk A를 통해 Erk 1/2과 PI3 키나제 신호전달체계를 활성시킴을 확인하였고, Erk 1/2의 기질로 알려진 CREB 및 PI3 키나제의 하위 단백질인 Akt의 인산화가 스피카토사이드 A에 의해 증가함을 확인할 수 있었다(도 3a 내지 도 3b 참조).

2-3. 단백질 저해제 처리 후 스피카토사이드 A에 의한 신경돌기 성장(neurite outgrowth) 측정

스피카토사이드 A에 단백질 저해제인 PD98059 5 uM, LY294002 5 uM 및 K252b 100 nM를 각각 처리한 후, 상기 실험예 1의 방법을 수행하여 PC12 세포에서 신경돌기의 길이를 측정하여 PC12 세포의 신경돌기 성장에 대한 신호전달 체계를 관찰하였다.

상기 실험의 결과, 스피카토사이드 A로 유도된 PC12 세포의 신경돌기 성장이 PD98059의 처리로 억제되었고, PI3 키나제(kinase) 저해제인 LY294002와 Trk A 저해제인 K252b에 의해서도 스피카토사이드 A의 활성이 억제되었다(도 4 참조).

상기 실험예 2의 결과, 스피카토사이드 A가 Trk A를 활성화시킨 다음 그 하위 신호전달 단백질인 Erk 1/2과 PI3 키나제를 다시 활성화시킴으로써 신경돌기의 성장이 유도됨을 확인하여, 세포막의 Trk A를 자가 인산화 시켜 활성화 시키면서 Erk 1/2과 PI3 키나제를 활성화 시키는 신호전달 체계를 갖는 NGF와 유사 신호전달 체계를 갖음을 확인하였다.

실험예 3. 스피카토사이드 A의 Aβ로 유도된 PC12 세포사멸 억제 효과

스피카토사이드 A가 Aβ로 유도한 PC12 세포사멸에 대한 억제 효과를 관찰하였다.

3-1. Aβ로 유도된 PC12 세포 사멸의 관찰

PC 12세포를 2% 말 혈청(horse serum)과 1%의 우태아혈청(fetal bovine serum)이 들어가 있는 배양액에서 16시간 배양한 후, 스피카토사이드 A를 1, 5, 10 ㎍/㎖의 농도로 각각 2시간 전처리해준 후에 Aβ 10uM를 배양액에 넣어주었다. 48시간 후에 배양액을 걷어내고 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolim bromide, 0.5 ㎎/㎖)를 넣고 배양기에서 2시간동안 방치한 후에 상층액을 걷어내고 DMSO로 결정을 용해한 후, 마이크로플레이트 판독기(microplate reader)를 이용하여 580 nm에서 흡광도를 측정하였다(도 5 참조).

3-2. DNA 단편(fragmentation) 관찰

PC 12 세포 1 × 10⁶ 개의 세포를 100 mm 배양접시에서 24시간 배양한 후에 스피카토사이드 A를 10 ㎍/㎖의 농도로 2시간 전처리한 다음, Aβ 10 uM를 넣고 24시간 배양하였다. 세포를 모은 다음 450 ㎕의 완충 버퍼(5 mM 트리스(Tris)-Cl, pH7.4, 5 mM EDTA, 0.5% 트라이톤(Trition) X-100)로 세포를 분해 후 원심분리(13,000 rpm, 15분) 하였다. 상층액을 걷어내고 페놀과 클로로포름으로 단백질을 제거 후 알콜침전법으로 DNA를 얻었다. 2% 아가로스 겔에서 전기영동한 후에 에티디움 브로마이드 (ethidium bromide)로 염색하였다(도 6 참조).

3-3. 유세포 분석(Flow cytometry)

PC 12 세포 1 × 10⁶ 개를 Aβ 처리 2시간 전에 스피카토사이드 A를 10 uM로 처리해준 후 12시간 배양하였다. 세포를 수집하여 아넥신(annexin) V-FITC와 PI를 결합 완충액(binding buffer, 10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4)에서 상온 15분간 반응시켰다. 아넥신(annexin) V-FITC와 PI의 결합(binding) 여부는 FACScan를 통해 분석하였다. 아넥신 V⁺/PI⁺ 세포는 괴사성(necrotic) 세포사로, 아넥신 V⁺/PI^- 세포는 자멸성(apoptotic) 세포사로 정의하였다(도 7 참조).

3-4. Hoechst 염색법

PC 12 세포를 수집하고 4% 파라포름알데하이드(100 ㎕)로 세포를 고정시켰다. 원심분리로 세포를 모으고 PBS로 씻어준 후 10 ㎕를 걷어내어 현미경 슬라이드에 올리고 말렸다. Hoechst 33258 (10 ㎍/㎖)를 세포위에 더해주고 형광현미경으로 형태를 관찰하였다(도 8 참조).

상기 실험의 결과, MTT 법을 통하여 Aβ로 유도된 PC12 세포사에 대하여 스피카토사이드 A의 1, 5, 10 ㎍/㎖의 농도 범위에서 세포사멸이 억제됨을 확인하였다. 세포자멸(apoptosis)로 알려진 Aβ에 의한 PC12 세포사에 대하여 DNA 단편, PI, 아넥신 V 염색 및 Hoechst 33258 염색으로 확인한 결과, PC12 세포에서 Aβ처리는 DNA　단편을 형성하고 아넥신 V 결합(binding)을 증가시켰고, 스피카토사이드 A 처리 시 대조군과 비슷한 양상을 나타냄을 확인함으로써 세포사멸이 스피카토사이드 A에 의해 억제됨을 알 수 있었다. 또한, Hoechst 염색에서 Aβ 처리 시 핵의 분절 및 뭉침 현상을 확인 할 수 있었으나, 스피카토사이드 A 처리 시에는 그 수가 감소했음을 관찰하였다.

실험예 4. 역전사 중합효소 반응

PC 12세포를 2% HS 및 1% FBS조건에서 16시간 배양한 후 스피카토사이드 A를 처리하였다. 다시 2시간 후에 Aβ를 처리하여 전체 RNA(Total RNA)는 트리졸(TRIzol, Gibco BRL사)을 이용하여 추출하였다. 1 ㎍/㎖의 전체 RNA를 5X PCR 버퍼, dNTP (각 0.5 mM), 0.1 M DTT, 40 U/㎖ RNase 억제제(inhibitor) 및 200 U 슈퍼스크립트(Superscript) II 역전사 중합효소 조건에서 1번째 가닥(strand)을 제작하였다. 이 1번째 가닥을 주형으로 하여 95℃에서 30초, 60℃에서 1분, 그리고 72℃에서 2분 40초 동안 30회 중합효소 반응을 하였다. 증폭된 DNA는 1.5% 아가로즈 겔에서 에티디움 브로마이드 (ethidium bromide)로 염색하여 확인하였다.

상기 실험 과정을 통하여, Aβ 처리 시 c-jun, p53 및 Bax의 mRNA가 증가됨 을 확인할 수 있었고, NGF (50 ng/㎖l) 및 스피카토사이드 A는 이들 유전자의 발현을 억제함을 확인하였으며, Bcl-2는 약간 증가시키는 것으로 관찰 되었다. PI3 키나제는 Akt의 인산화를 활성화 시키고 Akt는 세포사멸 유도와 관련된 Bad를 인산화를 통해 불활성화 시키는 것으로 알려져 있다. 따라서 스피카토사이드 A가 Aβ 처리로 인한 c-jun, Bax, p53의 유전자 발현증가를 억제함을 확인하였다(도 9 참조).

실험예 5. 수동회피반응(passive avoidance) 실험

5-1. 실험동물 준비

6주령의 ICR계 수컷 마우스(22 - 27 g)를 (주) 샘타코 (Osan, Gyunggi-Do, Korea)에서 공급받아 경희대학교 약학대학의 동물사육실에서 1주일 이상 사육하여 적응시켜 사용하였으며, 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였고, 온도 (23 ± 2 ℃), 습도 (55 ± 10 %) 및 명암주기 (12 시간)는 자동으로 조절되도록 하였다. 각 실험에 1군당 5 내지 8 마리의 마우스를 사용하였다.

5-2. 실험방법

마우스를 칸막이로 나누어진 상자의 한쪽 구획에 넣고 30초간의 적응시간을 준 다음 조명을 켜주어 조명이 없는 어두운 구획으로 20초 내에 가도록 훈련을 시켰다. 훈련을 시킨 24시간 후에 스피카토사이드 A를 10mg/kg의 농도로 경구투여 하였고 30분후에 스코폴라민(scopolamine)을 1mg/kg의 농도로 경구투여 하였다. 스코폴라민 투여 30분 후에 마우스를 칸막이로 나누어진 상자(shuttle box)에 넣고 어 두운 구획으로 들어가면 0.5mA의 전류를 바닥에 2초 동안 흘려 전기충격을 주었다. 24시간 후에 마우스를 칸막이로 나누어진 상자에 넣어 30초의 적응시간을 준 뒤 조명을 킨 후부터 어두운 구획으로 넘어가 입구가 닫힐 때까지의 시간을 타이머로 측정하였다. 각 실험군은 대조군으로 10% 트윈(tween) 20 투여군, 스코폴라민 1 mg/kg 투여군, 스피카토사이드 A 10mg/kg 투여 후 스코폴라민 1 mg/kg 투여군으로 하여 비교하였다(**p<0.01 : 스코폴라민 투여군과 비교, ##p<0.01 : 대조군과 비교).

상기 실험결과, 스피카토사이드 A 10mg/kg 투여 후 스코폴라민 1 mg/kg 투여군에서 스코폴라민 1 mg/kg 투여군에 비하여 82% 정도의 기억 회복효과를 확인 할 수 있었다(도 10 참조).

실험예 6. 급성독성 실험

6-1. 경구투여

ICR계 마우스(몸무게 25 ± 5 g)와 스프라그-도올리계(sprague-dawly) 랫트(몸무게 235 ± 10 g)를 각각 10마리씩 4군으로 나누어 본 발명의 조성물을 각각 100, 250, 500 및 1000 ㎎/㎏의 용량으로 경구 투여한 후 2주간 독성여부를 관찰한 결과 4군 모두에서 사망한 예가 한 마리도 없었고 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다.

6-2. 복강투여

ICR계 마우스(몸무게 25 ± 5 g)와 스프라그-도올리계(sprague-dawly) 랫트(몸무게 235 ± 10 g)를 각각 10마리씩 4군으로 나누어 본 발명의 조성물을 각각 25, 50, 100 및 200㎎/㎏의 용량으로 복강투여한 후 24시간 동안 독성여부를 관찰한 결과 4군 모두에서 사망한 예가 한 마리도 없었고 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다.

실험 결과, 본 발명의 조성물은 급성독성이 거의 없음이 확인되었다.

하기에 본 발명의 스피카토사이드 A를 포함하는 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

스피카토사이드 A 화합물 300 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

스피카토사이드 A 화합물 50 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

스피카토사이드 A 화합물 50 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

스피카토사이드 A 화합물 50 mg

주사용 멸균 증류수 적량

pH 조절제 적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

스피카토사이드 A 화합물 1000 ㎎

설탕 20 g

이성화당 20 g

레몬향 적량

정제수를 가하여 전체 1000 ㎖로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

스피카토사이드 A 화합물 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B₁ 0.13 ㎎

비타민 B₂ 0.15 ㎎

비타민 B₆ 0.5 ㎎

비타민 B₁₂ 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

스피카토사이드 A 화합물 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A(Spicatoside A) 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 신경 세포의 신경돌기의 성장(neurite outgrowth)을 유도함과 동시에 베타-아밀로이드(β-amyloid)로 인한 신경세포사멸을 억제함으로써 신경세포 손상을 보호하는 효과가 있으므로, 신경세포의 사멸에 의해 발생되는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료뿐만 아니라, 후유증의 개선을 위한 용도로 광범위하게 응용될 수 있다.

Claims

신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A 화합물을 유효성분으로 함유하고, 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 신경세포사 유발에 기인한 뇌졸중, 중풍, 치매, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 피크(Pick)병 또는 크로이츠펠트-야콥(Creutzfeld-Jakob)병인 약학조성물.
신경세포 보호활성을 갖는 스피카토사이드 A 화합물을 유효성분으로 함유하고, 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 건강기능식품.
제 3항에 있어서, 건강음료인 건강기능식품.