KR20060002838A - 주카라와 아카이 과일-기초한 식이 보조물질 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 안전하고, 맛있고, 동결-건조되며, 과일-기초한 식이 보조물질 및 이들의 용도에 관한다. 구체적으로, 본 발명은 높은 항산화 능력 및 사이클로옥시게나제-저해 활성을 갖는 아카이 과일과 주카라 과일의 조성물 및 이들의 용도에 관한다. 또한, 본 발명은 아카이 과일과 주카라 과일로부터 안전하고, 맛있고, 동결-건조되며, 과일-기초한 식이 보조물질을 제조하는 방법을 제시한다.
식이 보조물질

Description

주카라와 아카이 과일-기초한 식이 보조물질{JUCARA AND ACAI FRUIT-BASED DIETARY SUPPLEMENTS}
본 발명은 안전하고, 맛있고, 동결-건조되며, 과일-기초한 식이 보조물질 및 이들의 용도에 관한다.
지난 수십년동안, 유리 라디칼은 인간 건강과 질환에 대한 이들의 중요성이 더욱 부각되어 왔다. 죽상경화증, 암, 노화를 비롯한 많은 일반적인 치명적 질환은 손상의 기초 메커니즘으로 유리 라디칼 반응을 보유한다. 시간이 흐름에 따라, 살아있는 생물체와 유리 라디칼의 상호작용에 관한 우리의 개념적 이해는 진환되었고, 삶의 질과 수명을 개선하는데 전례없는 기회를 제공하고 있다.
가장 일반적인 유리 라디칼중의 하나는 활성 산소종(ROS)이다. 이들은 정상적인 세포 호흡과 대사의 산물이며, 일반적으로 체내에서 생산된 항산화제에 의해 조절된다. 오염과 같은 환경적 요인 및 흡연이나 운동과 같은 생활방식 요인으로 인하여, 유리 라디칼의 생산이 증가하고 있다. 이런 증가는 특히 신체가 노화되고 항산화제를 생산하는 메커니즘이 필요한 속도로 이들 화합물을 생산하는 능력을 상실함에 따라, 신체 균형을 붕괴시키고 산화 스트레스(oxidative stress)를 유발한다. 결과의 손상은 생물학적 과정의 교란, 세포의 사멸, 유전물질의 돌연변이 등인 데, 이들은 암의 유발할 수 있다.
산화 스트레스의 효과와 퇴행성 질환과 노화의 진행으로부터 보호를 위한 식이 보조물질의 잠재적 유용성은 과거 이십년동안 많은 연구의 주제이었다. 현재, 다양한 수준으로 항산화제를 함유하는 제품들이 시판되고 있다. 이들은 식품, 액체, 영양 보조제의 형태로 제공된다. 이들 필수 영양분의 가장 풍부한 공급원은 비타민 C, 비타민 E, 베타-카로텐 등과 같은 화합물을 함유하는 과일과 야채에서 흔히 발견된다.
항산화제 가설은 식이 항산화제 보충이 질병과 연관된 산화환원 불균형을 완화시킬 수 있다고 가정한다. 항산화제는 이들 유리 라디칼에 결합하여 이들을 안정화시키고 신체 조직으로부터 소거함으로써 유리 라디칼이 유발하는 손상의 정도를 감소시키는 역할을 한다.
현재까지, 합성 산화제, 예를 들면, BHA(부틸화된 하이드록시 아니솔), BHT(부틸화된 하이드록시 톨루엔), NDGA(노르하이드로-구아야레트산)이 개발되었다. 천연 항산화제의 예로써, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제, 퍼록시다아제, 카탈라아제, 글루타티온 퍼록시다아제와 같은 항산화제 효소 및 토코페롤(비타민 E), 아스코르브산(비타민 C), 카르테노이드, 글루타티온과 같은 비-효소 항산화제 물질이 존재한다.
하지만, 합성 항산화제는 체내에서 강한 독성으로 인하여 알레르기 반응과 종양을 유발하고, 온도 감수성으로 인하여 열에 의해 쉽게 파괴될 수 있다. 다른 한편, 천연 항산화제는 체내에서 합성 항산화제보다 안전하긴 하지만, 효과가 약한다는 문제점이 있다.
이런 이유로, 안전성에 문제가 없으면서도 우수한 항산화 활성을 보유하는 새로운 천연 항산화제의 개발이 요구되고 있다.
많은 연구에서 폴리페놀 플라보노이드의 보호 특성이 입증되었다. 플라보노이드는 시험관내 유리-라디칼 소거 잠재력이 입증된 과일, 야채, 곡물, 나무껍질, 차, 와인에서 발견되는 자연 발생 폴리페놀이다.
안토시아닌은 많은 과일, 야채, 거친 곡물, 꽃의 적색, 보라색, 파란색을 담당하는 자연 발생 화합물이다. 가령, 장과 과일, 예를 들면, 블루베리, 빌베리(bilberry), 딸기, 나무딸기, 보이센베리(boysenberry), 마이론베리(marionberry), 덩귤월귤의 색깔은 서로 다른 안토시아닌에 기인한다. 300개 이상의 구조적으로 상이한 안토시아닌이 자연에서 확인되었다. 안토시아닌은 자연적으로 생성되기 때문에, 이들은 식품과 음료의 착색제로서 많은 주목을 받고 있다. 프로안토시아닌은 과일과 야채에서 발견되는 다른 종류의 플라보노이드 화합물인데, 이는 무색이고 항산화제 활성을 보유한다.
최근에, 안토시아닌 색소는 식이 항산화제로서 건강상의 이점으로 인하여 관심이 고조되고 있다. 가령, 빌베리(Vaccinium myffillus)의 안토시아닌 색소는 시각적 예민함을 개선하고 순환계 질환을 치료하는데 오랫동안 사용되어 왔다. 특정 안토시아닌과 플라보노이드는 소염 특성을 보유하는 것으로 실험적으로 입증되었다. 이에 더하여, 경구 투여된 안토시아닌은 당뇨병과 궤양을 치료하는데 유효하고 항바이러스와 항생 활성을 보유하는 것으로 보고되었다. 플라보노이드의 이들 유익한 특성의 화학적 기초는 이들의 항산화 능력과 관련된 것으로 생각된다. 따라서, 장과 및 다른 과일과 야채에 연관된 항산화 특성은 이들의 안토시아닌 함량에 기인한다.
현재, 다양한 수준으로 항산화제를 함유하는 제품들이 다수 시판되고 있다. 이들은 식품, 액체, 영양 보조제의 형태로 제공된다. 이들 필수 영양분의 가장 풍부한 공급원은 비타민 C, 비타민 E, 베타-카로텐 등과 같은 화합물을 함유하는 과일과 야채에서 흔히 발견된다. 항산화제는 이들 유리 라디칼에 결합하여 이들을 안정화시키고 신체 조직으로부터 소거함으로써 유리 라디칼이 유발하는 손상의 정도를 감소시키는 역할을 한다.
많은 과일과 야채가 이들 필수 영양분을 함유하기 때문에, 유리 라디칼을 흡수하는 이들 식품에서 항산화제의 능력을 평가하는 것이 매우 중요하다. Tufts University의 USDA 연구원들은 항산화제 함량 및 유리 라디칼에 결합하는 능력에 따라 식품의 등급을 매기는 실험실 검사법, ORAC(Oxygen Radical Absorbance Capacity)를 개발하였다. 이런 검사를 통하여, 서로 다른 식품에서 항산화 능력을 비교하고 분석할 수 있다.
높은 ORAC 스코어를 보유하는 과일이나 야채의 확인 및 여기에 기초한 식이 보조물질의 개발과 생산이 요구된다
본 발명의 간단한 요약
본 발명은 높은 ORAC 스코어 및 사이클로옥시게나제-저해 활성을 보유하는 아카이 과일과 주카라 과일의 확인에 관한다. 한 측면에서, 본 발명은 동결-건조된 과육을 함유하는 식이 보조 조성물을 제시하는데, 여기서 전체 농도의 안토시아닌 은 전체 중량 g당 대략 1 ㎎ 이상이고, 상기 조성물은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 이상의 ORACFL 수치 및 전체 중량의 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유한다. 한 구체예에서, 식이 보조물질의 동결-건조된 과육은 동결 건조된 아카이(acai) 과육이다. 다른 구체예에서, 식이 보조물질의 동결-건조된 과육은 동결 건조된 주카라(Jucara) 과육이다. 한 구체예에서, 본 발명의 식이 보조 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 식이 보조 조성물의 전체 안토시아닌 농도는 전체 중량 g당 대략 1 ㎎ 내지 대략 500 ㎎이다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 전체 안토시아닌 농도는 전체 중량 g당 대략 1 ㎎ 내지 대략 100 ㎎이다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 전체 안토시아닌 농도는 전체 중량 g당 대략 1 ㎎ 내지 대략 10 ㎎이다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 내지 10 밀리몰 TE의 ORACFL 수치를 보유한다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 내지 5 밀리몰 TE의 ORACFL 수치를 보유한다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 내지 1 밀리몰 TE의 ORACFL 수치를 보유한다. 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 잔류 수분 함량은 전체 중량의 대략 0.01 내지 대략 3%이다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 잔류 수분 함량은 전체 중량의 대략 0.1 내지 대략 3%이다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 잔류 수분 함량은 전체 중량의 대략 1 내지 대략 3%이다.
다른 측면에서, 본 발명은 동결-건조된 과육을 함유하는 식이 보조 조성물을 제시하는데, 여기서 조성물은 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 이상의 사이클로옥시게나제 저해 수치 및 전체 중량의 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유한다. 한 구체예에서, 식이 보조물질의 동결-건조된 과육은 동결 건조된 아카이(acai) 과육이다. 다른 구체예에서, 식이 보조물질의 동결-건조된 과육은 동결 건조된 주카라(Jucara) 과육이다. 한 구체예에서, 본 발명의 식이 보조 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 식이 보조 조성물의 사이클로옥시게나제 저해 수치는 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 내지 대략 10,000 아스피린® ㎎ 당량이다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 사이클로옥시게나제 저해 수치는 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 내지 대략 1,000 아스피린® ㎎ 당량이다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 사이클로옥시게나제 저해 수치는 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 내지 대략 100 아스피린® ㎎ 당량이다. 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 잔류 수분 함량은 전체 중량의 대략 0.01 내지 대략 3%이다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 잔류 수분 함량은 전체 중량의 대략 0.1 내지 대략 3%이다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 잔류 수분 함량은 전체 중량의 대략 1 내지 대략 3%이다.
다른 측면에서, 본 발명은 안전하고 맛있는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 생산하는 방법을 제시하는데, 상기 방법은 아래의 단계를 포함한다: 과일을 수확하고; 과일을 칭량하고; 과일을 물로 청소하고; 과일을 대략 75℃ 내지 100℃의 온도 에서 대략 5초 내지 10분동안 세척하고; 과일의 껍질을 벗겨 과육을 과일로부터 분리하고; 과육을 대략 -5℃ 이하의 온도에서 동결시키고; 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유하는 과립의 동결-건조된 과육 분말이 산출되는 조건하에 과육을 동결-건조시키고; 여기서, 동결-건조된 과육 분말은 과육 제조물보다 안전하고 맛있다. 한 구체예에서, 과일은 아카이 과일이다. 다른 구체예에서, 과일은 주카라 과일이다. 한 구체예에서, 청소 단계는 과일을 0.1%(v/v)의 소독수로 씻어내는 과정으로 구성된다. 다른 구체예에서, 동결에 앞서 과육 제조물에 구연산이 첨가된다. 다른 구체예에서, 세척 단계는 대략 80℃ 온도에서 대략 10초동안 물에서 과일을 세척하는 과정으로 구성된다. 또 다른 구체예에서, 껍질을 벗겨내는 단계는 대략 2분 내지 5분동안 과일의 껍질을 기계적으로 벗겨내는 과정으로 구성되고, 껍질을 벗겨내는 단계는 2 ㎏ 과일당 1 리터의 물로 수행된다. 또 다른 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 이상의 ORACFL 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 내지 대략 10 밀리몰 TE의 ORACFL 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 내지 대략 5 밀리몰 TE의 ORACFL 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 350 마이크로몰 TE 내지 대략 1 밀리몰 TE의 ORACFL 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 이상의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다. 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 내지 대략 10,000 아스피린® ㎎의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다. 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 내지 대략 1,000 아스피린® ㎎의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 식이 보조 조성물의 제조 방법은 전체 중량 g당 대략 15 아스피린® ㎎ 당량 내지 대략 100 아스피린® ㎎의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하는 과일-기초한 식이 보조 조성물을 산출한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응에 의해 유도된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하는 방법을 제시하는데, 상기 방법은 상기 포유동물에 본 발명의 과일-기초한 식이 보조 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은 유리 라디칼을 소거하고 병리학적 유리 라디칼에 의해 유도된 손상을 감소시킨다. 한 구체예에서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응에 의해 유도된 질환이나 손상으로 고통받는 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응의 유해 효과를 완화시키는 방법을 제시하는데, 상기 방법은 상기 포유동물에 본 발명의 과일-기초한 식이 보조 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은 유리 라디칼을 소거하고 병리학적 유리 라디칼에 의해 유도된 손상을 감소시킨다. 한 구체예에서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 포유동물에서 사이클로옥시게나제 효소 활성을 저해하는 방법을 제시하는데, 상기 방법은 상기 포유동물에 본 발명의 과일-기초한 식이 보조 조성물을 함유하는 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 과일-기초한 식이 보조 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유한다. 다른 구체예에서, 과일-기초한 식이 보조 조성물은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 관절내, 동맥내, 뇌내, 소뇌내, 기관지내, 척수강내, 국소, 에어로졸 경로에서 선택되는 투여 경로로 투여된다.
다른 측면에서, 본 발명은 포유동물에서 증가된 사이클로옥시게나제 효소 활성과 연관된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하는 방법을 제시하는데, 상기 방법은 상기 포유동물에 본 발명의 과일-기초한 식이 보조 조성물을 함유하는 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 과일-기초한 식이 보조 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유한다. 다른 구체예에서, 과일-기초한 식이 보조 조성물은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 관절내, 동맥내, 뇌내, 소뇌내, 기관지내, 척수강내, 국소, 에어로졸 경로에서 선택되는 투여 경로로 투여된다. 다른 구체예에서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택된다.
본 발명의 상기한 목적은 아래에 제시된 본 발명의 상세한 설명으로부터 명백하다.
본 발명은 설명의 목적으로 하는 아래의 도면을 참조하면 더욱 명확하게 이해할 수 있다.
도 1은 동결-건조된 아카이 분말의 대표적인 흡수 스펙트럼을 보여주는 그래프이다.
도 2는 LC/MS/MS 크로마토그래피 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 주카라 분말의 안토시아닌 프로필을 보여주는 그래프이다.
도 3은 동결-건조된 주카라 분말에서 안토시아닌의 화학적 구조를 보여주는 개요도이다.
도 4는 LC/MS/MS 크로마토그래피 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 아카이 분말의 안토시아닌 프로필을 보여주는 그래프이다.
도 5는 동결-건조된 아카이 분말에서 안토시아닌의 화학적 구조를 보여주는 개요도이다.
도 6은 HPLC와 질량 분광법 크로마토그래피 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 주카라 분말의 페놀 화합물 프로필을 보여주는 그래프이다.
도 7은 동결-건조된 주카라 분말에서 페놀 화합물의 화학적 구조를 보여주는 개요도이다.
도 8은 크로마토그래피 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 아카이 분말과 동결-건조된 주카라 분말의 프로안토시아닌 프로필을 보여주는 그래프이다.
도 9는 동결-건조된 아카이 분말과 동결-건조된 주카라 분말에서 프로안토시아닌 화합물의 화학적 구조를 보여주는 개요도이다.
도 10은 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 선택된 야채의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 11은 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 선택된 신선한 과일의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 12는 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 선택된 신선한 과일의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 13은 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 아카이 분말과 동결-건조된 주카라 분말의 항산화 활성 및 선택된 신선한 과일의 항산화 활성을 비교하 는 히스토그램 그래프이다.
도 14는 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 아카이 분말의 항산화 활성 및 선택된 신선한 과일의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 15는 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 아카이 분말의 항산화 활성 및 선택된 신선한 야채의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 17은 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 선택된 견과류의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 18은 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 탈수된 아카이의 항산화 활성 및 선택된 탈수된 과일과 야채의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 19는 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 동결-건조된 아카이 분말의 항산화 활성 및 선택된 새로운 야채의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 20은 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 탈수된 아카이의 항산화 활성 및 선택된 탈수된 과일과 야채의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 21은 ORAC 분석 기술에 의한 측정에서, 과일과 야채의 항산화 활성을 비교하는 히스토그램 그래프이다.
도 22는 아카이 과일 주스 제조물을 상세히 설명하는 공정 흐름도이다.
도 23은 아카이 과일 주스 제조물에 이용되는 껍질 벗김 장치의 개요도이다.
도 24는 동결-건조된 아카이 분말을 제조하는 방법을 상세히 설명하는 공정 흐름도이다.
이런 이유로, 다양한 상세 수준에서 아래에 기술된 본 발명의 다양한 측면, 양식, 구체예, 변이, 특징은 본 발명에 관한 실질적인 이해를 위하여 제공된다. 일반적으로, 이런 명세는 식이 보조 조성물, 이런 조성물과 다른 식이 보조 조성물의 조합 및 이들을 생산하고 이용하는 관련 방법을 제시한다.
따라서, 본 발명의 다양한 측면은 병리학적 유리 라디칼 반응에 의해 유도된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하기 위한 특정 식이 보조 조성물의 치료적 또는 예방적 용도에 관한다. 또한, 본 발명의 다양한 측면은 증가된 사이클로옥시게나제 효소 활성과 연관된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하기 위한 특정 식이 보조 조성물의 치료적 또는 예방적 용도에 관한다. 따라서, 이들 측면을 예시하는 다양한 특정 구체예가 이후에 제시된다.
기술된 바와 같은 의학적 질환의 치료 또는 예방을 위한 다양한 양식은 완전하거나 부분적인 치료 또는 예방을 비롯한 일부 생물학적으로 또는 의학적으로 유관한 결과가 달성되는 경우에 “실질적”이다.
정의
본 명세서에서, “개체”는 가급적 포유동물, 예를 들면, 인간을 비롯하여 애완 동물(가령, 개, 고양이 등), 가축(가령, 소, 양, 돼지, 말 등), 실험실 동물(가령, 쥐, 생쥐, 기니 피그 등) 등이다.
본 명세서에서, 화합물의 “효과량”은 목적하는 치료 및/또는 예방 효과를 달성하는데 충분한 양, 예를 들면, 치료되는 질환과 연관된 증상의 예방 또는 이런 증상의 감소를 유도하는 양이다. 개체에 투여되는 화합물의 양은 질병의 유형과 심각도 및 개체의 특성, 예를 들면, 전반적인 건강, 연령, 성별, 체중, 약물에 대한 내약성에 좌우된다. 이는 질병의 등급, 심각도, 유형에도 좌우된다. 당업자는 이들 인자에 기초하여 적량을 결정할 수 있다. 전형적으로, 치료 또는 예방 효과를 달성하는데 충분한 본 발명에 따른 화합물의 효과량은 일일 체중 ㎏당 대략 0.000001 ㎎ 내지 대략 10,000 ㎎이다. 적절하게는, 용량 범위는 일일 체중 ㎏당 0.0001 ㎎ 내지 대략 100 ㎎이다. 본 발명의 화합물은 서로간의 조합으로, 또는 한가지이상의 다른 치료 화합물과의 조합으로 투여될 수도 있다.
“아카이(Acai)”는 Para로 알려져 있는 브라질 북부의 유명한 야자나무 종이다. 아카이는 얇은 줄기 및 짙은 보라색이며, 성숙하면 때때로 검은색을 띠는 둥근 귀-모양의 과일로 특성화된다. 아카이의 라틴명은 유테르페 올레라세아(Euterpe oleracea, Martius; 과(family), Palmaceae)이다. 이는 영어권에서 “캐비지 팜(Cabbage Palm)”으로 불린다. 브라질에서, 이는 아카이-도-파라(acai-do-para), 아카이-도 바익소 아마조나스(acai-do baixo Amazonas), 팔미토 아카이(palmito acai), 아카이제이로(acaizeiro), 아카이(acal), 아사이(assai), 지카라(jicara), 주카라(jucara), 팔미테이로(palmiteiro), 피리아(piria)로 불린다; 콜롬비아에서, 이는 아사이(assai)와 마라카(maraca); 우아카이(uacai)로 불린다; 수리남에서, 이는 마나카(manaka), 피나팜(pinapalm), 프라사라(prasara), 와포에(wapoe), 와세이(wasei)로 불린다. 아카이에는 다른 유테르페(Euterpe) 아종, 유테르페 키틴가(E. catinga Wallace) 역시 포함되는데, 이 역시 브라질에서 발견되고 “아카이”로 지칭된다. 최종적으로, 아카이에는 다른 유테르페(Euterpe) 아종, 유테르페 프로카토리아(E. precatoria Martius) 역시 포함되는데, 이는 볼리비아에서 발견되고 남아메리카 지역에서 “아카이”와 “주카라”로 불린다.
“주카라”는 야자나무의 다른 종이다. 주카라의 라틴명은 유테르페 에둘리스(Euterpe edulis, Martius; 과(family), Palmaceae이다. 이는 브라질에서 아사이(assai), 아카이(acai), 팔미토(plamito), 팔미토 도세(palmito doce), 이우카라(iucara), 팔미토 주카라(palmito jucara), 리페이라(ripeira), 이카라(icara), jucara(주카라), 엔사로바(ensarova), 팔미테이로(palmiteiro)로 불린다. 주카라에는 다른 유테르페(Euterpe) 아종, 유테르페 에스피리토산텐시스(E. espiritosantensis Fernandes)가 포함되는데, 이 역시 브라질에서 발견되고 “주카라”로 지칭된다. 최종적으로, 아카이에는 다른 유테르페(Euterpe) 아종, 유테르페 프로카토리아(E. precatoria Martius) 역시 포함되는데, 이는 볼리비아에서 발견되고 남아메리카 지역에서 “아카이”와 “주카라”로 불린다.
본 명세서에서 언급된 참고문헌은 순전히 참조로 한다.
항산화제 특성 및 이의 유용성
본 발명에서는 2가지 야자나무 과, 아카이와 주카라가 검사된 다른 과일이나 야채보다 훨씬 높은 ORAC 스코어를 보유한다는 것을 확인하였다.
아카이 과일은 높은 비율의 단일-불포화 지방산과 다중-불포화 지방산 및 상대적으로 낮은 농도의 포화된 지방과 트랜스 지방산을 함유하는 것으로 밝혀졌다. 또한, 아카이 과일은 지질, 섬유, 단백질이 풍부하고, 2가지 공지된 항산화제, 비타민 E와 안토시아닌을 함유하는 것으로 알려져 있다. 하지만, 이들 과일은 과거에 이용되지 못했는데, 그 이유는 아카이 과일이 산화 및 박테링, 진균, 효모에 의한 미생물 오염으로 인하여 쉽게 부패되기 때문이다. 따라서, 아카이 과일 및 이로부터 제조된 주스는 쉽게 부패하고, 풍미와 항산화 특성을 급격하게 상실한다 - 과일을 수확하고 2일 이내에 거의 절반 정도의 안토시아닌이 분해된다. 아카이 과일과 주스의 급격한 분해를 극복하고, 제품을 좀더 넓은 시장에 소개하기 위하여, 일부 회사는 이의 과육을 동결시키는 시도를 했다. 하지만, 아카이 과육을 이런 방식으로 단순히 동결시키는 것은 온도의 조심스런 모니터링을 요한다 - 온도에서 약간의 편차도 분해 효소와 발효 물질의 활성화를 초래한다. 게다가, 사용을 위하여 이런 동결 과육을 해동시키면, 이들 물질들이 활성화되어 과육에 결정감(grittiness)을 유발한다.
무엇보다도 상기한 문제점들이 본 발명에 의해 해결되었다. 구체적으로, 아래의 실시예에 기술된 바와 같이, 본 발명은 검사된 임의의 다른 동결-건조된 과일이나 야채 조성물보다 높은 안토시아닌 농도와 높은 ORAC 스코어를 보유하는 안전하고 맛있는 아카이-기초한 식이 보조 조성물을 제시한다.
본 발명의 결과로서, 아카이 과일이 식이 보조물질의 매우 우수한 공급원을 제공한다는 것은 명백하다. 본 발명 이전에, 아카이 과일은 반감기가 짧은 에너지 드링크로서 또는 동결 처리물의 일부로서 주로 이용되었다. 본 발명의 아카이-기초한 식이 보조 조성물은 상대적으로 긴 반감기를 보유하면서도 아카이 과일의 항산화 특성을 현저하게 증가시킨 안전하고 맛있는 산물을 제시한다. 본 발명은 아카이 과일의 높은 영양적 특징을 보존할 뿐만 아니라 이를 현저하게 개선하고, 급격한 분해의 우려없이 이를 즐길 수 있도록 한다.
상기한 설명은 아카이 과일 및 이로부터 유래된 식이 보조물질에 중심하였지만, 본 발명은 검사된 임의의 다른 동결-건조된 과일이나 야채 조성물보다 높은 안토시아닌 농도와 높은 ORAC 스코어를 보유하는 주카라-기초한 식이 보조 조성물을 또한 제시한다. 아래에 기술된 바와 같이, 주카라 과일 및 이로부터 유래된 식이 보조물질 역시 높은 수준의 프로안토시아닌 및 하이드록시 라디칼과 과산화질소(peroxynitrite)에 대한 높은 항산화 활성을 보이는 것으로 밝혀졌다.
본 발명에 따라, 아카이 과일과 주카라 과일, 주스, 식이 보조물질 및 아카이 과일과 주카라 과일로부터 유래된 다른 조성물은 유리 라디칼과 산화 스트레스의 유해 효과를 치료, 반전 및/또는 보호하는데 이용될 수 있다.
유리 라디칼과 산화 스트레스
지난 수십년동안, 고도 반응성의 파괴적인 분자인 유리 라디칼은 인간 건강과 질환에 대한 이들의 중요성이 더욱 부각되어 왔다. 죽상경화증, 암, 노화를 비롯한 많은 일반적인 치명적 인간 질환은 손상의 기초 메커니즘으로 유리 라디칼 반응을 보유한다.
유리 라디칼은 외부 궤도에 하나이상의 홀 전자를 보유하는 분자이다. 이들 분자 종의 대부분은 산소(일부 질소)이다. 실제로, 우리가 숨 쉬는 분자 산소는 유리 라디칼이다. 이들 상당히 불안정한 분자은 인접한 분자와 급속하게 반응하여 외부 궤도 전자를 공여하거나, 빼앗거나 또는 공유한다. 이런 반응은 때때로 심원한 방식으로 인접 표적 분자를 변화시킬 뿐만 아니라 표적 분자에 홀 전자를 이전시켜 아차 유리 라디칼 또는 다른 ROS를 발생시키는데, 이들은 이후 새로운 표적과 반응할 수 있다. 실제로, 많은 고도 반응성 ROS는 이런 분자 연쇄 반응의 발생에 기인하고, 이들의 효과를 수배로 증폭시킨다. 항산화제는 보호를 제공하는데, 그 이유는 ROS가 다양한 생물 분자에 대한 손상을 야기하기 이전에 항산화제가 이들 ROS를 소거하거나, 또는 예로써 지질 과산화의 급격한 연쇄 반응을 교란시킴으로써 산화 손상이 확산되는 것을 예방할 수 있기 때문이다.
ROS와 인간 건강
인간의 신체는 외부 출처(일광, 다른 형태의 방사선, 오염)로부터 유래되거나 내적으로 발생된 유리 라디칼 및 다른 ROS에 끊임없이 노출되기 때문에, ROS-매개된 조직 손상은 다수의 질환 과정의 최종적인 공통 경로이다.
방사선 손상
방사선 손상은 ROS-매개된 질환의 중요한 원인이다. 극단의 실례는 태양의 중심과 열핵폭발(thermonuclear blast) 중심에서 물리적-화학적 반응이다. 상황에 따라, 통상적으로 직면하는 수준의 방사선에서, 지속적 손상의 대략 2/3은 방사선 자체가 아닌 이차적으로 발생된 ROS에 의해 매개된다. 이는 방사선 손상의 급격한 독성 형태뿐만 아니라 장기적인 돌연변이(이에 따른 발암) 효과에도 적용된다.
이런 원칙의 중요한 임상적 적용은 방사선 치료에 의한 암의 치료에서 통상적으로 직면된다. 대형 종양은 혈액 공급을 빈번하게 외생시키고, 산소가 주변 부위에 효과적으로 공급됨에도 불구하고 중심에서 종양 세포는 사멸한다. 이들 두 영역 사이에는 산소 공급이 불량함에도 여전히 생존하는 종양 부위가 위치한다. 이런 종양의 방사선 치료는 주변 부위에 특히 효과적인데, 여기에는 종양살해(tumorcidal) ROS를 형성할 만큼 충분한 농도의 산소가 존재한다. 산소 공급이 불량한 중심은 현저하게 적은 수준으로 파괴된다. 중심에서 사멸 세포는 더 이상 생존하지 못하는 반면, 이들 두 부위 사이에 산소 공급이 불량하지만 여전히 생존하는 세포는 방사선 요법의 안전 선량에서 생존하여, 이후에 종양의 국소 재발을 초래한다. 이는 많은 대형 종양이 방사선 요법(진전된 단계의 암을 죽임) 및 이들 위험한 잔류 세포를 비롯한 종양 덩어리의 외과적 제거의 조합으로 치료되는 주요 이유이다.
암 및 다른 악성 종양
암 및 다른 악성 종양은 세포의 유전자 정보에서 변화에 기초한 무제한적 세포 성장과 증식을 수반한다. 대부부의 경우에, 세포 성장과 복제를 정상적으로 억제하는 하나이상의 유전자가 돌연변이되거나, 또는 불활화된다. 이들 유전적 결함은 세포의 DNA에 위치하는 유전자 코드에서 결실과 서열 변화에 직접적으로 상응한다. 이런 DNA 손상의 가장 일반적인 공통 원인은 유리 라디칼 손상이다. 일일 기준으로 DNA에 가해지는 무수한 손상 중에서, 대부분은 세포 내에서 정상적인DNA 회복 메커니즘에 의해 회복되지만 일부는 세포 사멸을 유발한다. 이런 손상이 산발적이고 전체 게놈에 다소 무작위하게 분포되기 때문에, 대부분의 치사적 DNA 손상은 임상적으로 중요하지 않고 수백만개의 세포 중에서 몇몇 세포의 상실을 유발한다. 하지만, 단일 세포에 성장 조절을 파괴하는 손상이 가해지면, 이는 부적절하게 증식하고 급격하게 성장하여, 양성 자연 선택에 의해 세포 개체군을 지배하게 된다. 이의 결과는 종양, 빈번하게는 악성 종양인데, 성장과 증식의 억제가 특히 결핍된다. 이런 이유로, 유전물질에 대한 유리 라디칼 손상은 발암의 주요한 최종 공통 경로이다.
ROS는 방사선의 외부 원인뿐만 아니라 신체 내에서 정상적인 대사 과정의 부산물로서 세포에서 발생될 수 있다. 내인성 유리 라디칼의 중요한 출처는 일부 약물, 오염원 및 다른 화학물질과 독소(총체적으로, 이물질)의 대사이다. 이들중 일부는 직접적인 독성을 나타내지만, 대부분의 다른 이물질은 신체가 이들을 해독하기 위하여 이용하는 대사 과정을 통한 대규모 유리 라디칼 흐름을 발생시킨다. 한가지 실례는 제초제 패러콰트(paraquat)의 대사이다. 한때, 약물 통제 당국은 마리화나를 죽이는데 이 제초제를 이용했었다. 재배업자들은 마리화나가 시들기 전에 제초제가 뿌려진 작물을 수확할 수 있음을 알아차리고 이를 내다 팔았다. 이후, 이를 피웠던 많은 사람들이 돌발성 폐 손상으로 사망했다. 다행스럽게도, 이런 방식은 약물 문제를 해결하기는 있어 특히 비인간적인 방법으로 간주되어 폐기되었다.
패라콰트 이야기가 유리 라디칼 독성의 대사 기전에 관한 극명한 실례이긴 하지만, 담배 연기, 공기 오염물질, 알코올을 비롯한 많은 통상적으로 직면하는 이물질이 독성을 나타내고, 체내에서 이들의 이화작용에 의해 발생된 유리 라디칼의 관점에서 상당한 수준으로 발암성이다. 게다가, 천연 항산화제가 풍부하게 존재하는 포화 지방(ROS 손상의 특히 취약한 표적)이 적은 과일과 야채를 많이 섭취하는 식이는 죽상경화증과 암의 위험을 감소시키는 것으로 여러 증거에 의해 입증되고 있다.
죽상경화증
죽상경화증은 선진국에서 무능력과 조기 사망의 주요 원인이다. 게다가, 2020년까지, 심혈관 질환, 특히, 죽상경화증은 건강한 삶에서 무능력 또는 조기 사망을 뺀 연수로 정의되는 전체 질환 부담(disease burden)의 주도적인 원인이 될 것으로 현재 예측되고 있다. 죽상경화증은 죽상경화성 플라크로 동맥을 차단함으로써 심장 마비, 뇌졸중, 수족 상실을 초래하는 복합적인 과정이다. 상기 플라크는 산화된 지방 형태이다. 유리 라디칼이 지질과 반응하면, 지질 산화가 발생하는데, 이런 과정은 버터가 공기중의 산소에 노출될 때 고약하게 변하는 과정과 동일하다. 다수의 인자가 죽상경화증의 발생과 심각도에 영향을 주긴 하지만, 주요 인자는 저밀도지단백(LDL, “나쁜 콜레스테롤”)의 ROS-매개된 과산화이다. 심장 질환과 뇌졸중의 예방을 위한 식이요법 방식은 지방 자체의 섭취를 감소시킬 뿐만 아니라 LDL 산화를 제한하기 위하여 식이 항산화제를 첨가하는데 부분적으로 기초한다. 이들 방식이 심장 질환으로 인한 치사율에 이미 상당한 영향을 주고 있긴 하지만, 본 발명의 조성물은 식이와 운동에서처럼 의지에 좌우되지 않고 안전한 약리학적 예방법을 제공한다.
신경학적 질환과 신경퇴행성 질환
신경학적 질환과 신경퇴행성 질환은 수백만명의 미국인에게 영향을 주고 있다. 여기에는 우울증, 강박 장애, 알츠하이머병, 알레르기 질환, 식욕부진, 정신분열증, 신경전달물질 수준의 부적절한 조절 또는 면역계기능의 부적절한 조절에 기인한 다른 신경학적 이상, 행동 장애, 예를 들면, ADD(주의력 결핍 장애)와 ADHD(주의력 결핍 과잉행동 장애) 등이 포함된다. 이들 질환 중에서 다수가 ROS 독성을 신경 세포 파괴의 기초 메커니즘에서 중심 구성요소로 하는데, 여기에는 근위축성 측삭 경화증(ALS, 또는 루게릭병), 파킨슨씨병, 알츠하이머병 등이 포함된다.
허혈/재관류 손상
기관은 혈액 공급이 부족하면(허혈), 산소의 일시적인 손실에 의해서뿐만 아니라 혈액 공급이 재개될 때 재관류시에 재도입된 산소와의 반응으로 발생된 ROS에 의해 손상을 입는다. 일부 임상적 상황에서, 손상은 허혈이후에도 재관류에 앞서 항산화제를 제공함으로써 예방될 수 있다. 가령, 다른 약물을 비롯하여 항산화제를 함유하는 용액에서 신장, 간, 다른 기관의 보존은 이식에 앞서 일반적인 절차이다. 다른 실례는 심장 수술을 위하여 심장을 중단시키기에 앞서 유리 라디칼 발생 효소의 기능을 차단하는 약물의 이용이다. 이들 약물은 심장 박동이 재개되고 혈류가 회복될 때 재관류 손상을 예방하는데 도움을 준다. 이런 재관류 손상 메커니즘은 외상이후 복수 기관 부전, 대규모 수술 또는 쇼크로 겪은 환자에서 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. 현재, 복수 기관 부전은 중환자실에서 사망의 주도적인 원인이며, ROS가 이런 증상에 어떻게 기여하는 지를 이해하기 위한 광범위한 노력이 진행되고 있다.
노화
노화는 과학적인 이해가 상대적으로 덜된 매우 복잡한 과정이다. 노화가 일련의 과정, 다시 말하면, 일련의 조절된 메커니즘이며 시간의 흐름에 따른 마모의 수동적인 누적이 아니라는 증거가 있다. 노화가 일련의 과정이라면, 이들 과정중 일부는 잠재적으로 조절되거나 적어도 변형될 수 있다. 이들 과정중 가장 중요한 과정은 유리 라디칼과 다른 ROS에 의해 매개되는 분자 손상의 축적으로 구성된다. 최근의 연구에서, ROS 메커니즘의 치료적 조절은 생쥐의 전체 수명을 상당하게 연장시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다.
자폐성 장애
자폐증은 수천명의 미국에게 영향을 주고 다양한 아형을 포괄하는 무능력 신경 장애인데, 원인은 다양하게 추정되지만 개선 치료법은 보고된 바가 거의 없다. 자폐성 장애는 출생시에 나타하거나, 또는 이후, 예를 들면, 2-3세때 발병한다. 자폐증에 대한 명확한 생물학적 마커는 없다. 자폐증은 불량한 의사소통 능력, 사교와 인식 능력에서 특이성, 서투른 행동 패턴으로 특성화되는 아이의 행동 증상에 대응되는 수준을 고려하여 진단된다.
자폐증에 대한 다수의 상이한 치료법이 개발되었다. 하지만, 치료법의 대부분은 원인이 아닌 병의 증상에 중심한다. 가령, 정신분석에서부터 정신약리에 이르는 요법이 자폐증의 치료에 이용되고 있다. 일부 임상 증상이 이들 치료법에 의해 완화되긴 하지만, 극히 일부 증례에서 기껏해야 중등도의 개선이 보고되었다. 극히 일부의 자폐증 환자들이 자족적 성인으로서 역할을 수행할 수 있게 된다.
예비 연구에서, 아카이-기초한 식이 보조물질이 언어가 매우 제한된 한 자폐증 아이에게 제공되었는데, 이후 이 아이는 언어가 현저하게 개선된 것으로 보고되었다.
사이클로옥시게나제 저해물질의 특성과 유용성
본 발명에서는 2가지 야자나무 과, 아카이와 주카라가 양 동등형의 사이클로옥시게나제, COX-1과 COX-2의 현저한 저해 특성을 보유한다는 것을 확인하였다. 사이클로옥시게나제(또는, 프로스타글란딘 엔도페록사이드 합성효소)는 프로스타글란딘 합성에 관여한다. COX-1 발현은 본질적인 것으로 간주되는데, 그 이유는 기초 수준의 COX-1 mRNA과 단백질이 존재하고 정상적인 생리 기능을 위한 프로스타글란딘을 생산하는 것으로 관찰되었기 때문이다. 대조적으로, COX-2 발현은 유도성이다.
본 발명에 따라, 아카이 과일과 주카라 과일, 주스, 식이 보조물질 및 아카이 과일과 주카라 과일로부터 유래된 다른 조성물은 증가된 사이클로옥시게나제 활성과 연관된 질환이나 손상을 치료, 반전 및/또는 예방하는데 이용된다.
위십이장 점막 방어(Gastroduodenal Mucosal Defense)
위 상피는 HCl, 펩시노겐/펩신, 담즙산염을 비롯한 일련의 내인적 독성 인자에 의해 지속적인 공격을 받는다. 이에 더하여, 약물, 알코올, 박테리아와 같은 외인성 물질의 지속적 유동이 위 점막에 가해진다. 점막 손상으로부터 방어를 제공하고 발생하는 임의의 손상을 회복시키기 위한 고도로 복잡한 생물 시스템은 위치한다.
프로스타글란딘은 위 상피 방어/회복에서 중심적인 역할을 수행한다. 위 점막은 풍부한 수준의 프로스타글란딘을 함유한다. 아라키돈산의 이들 대사물질은 점막 중탄산염과 점액의 방출을 조절하고, 체벽 세포 분비를 저해하며, 점막 혈류와 상피 세포 복원을 유지하는데 중요하다. 프로스타글란딘은 인지질효소 A2의 작용에 의해 인지질(세포 막)로부터 형성된 에스테르화된 아라키돈산으로부터 유래된다. 프로스타글란딘 합성에서 속도-제한 단계를 조절하는 핵심 효소는 사이클로옥시게나제(COX)인데, 이는 2가지 동등형(COX-1, COX-2)으로 존재하며, 구조, 조직 분포, 발현과 관련하여 각각 별개의 특성을 보유한다. COX-1은 위, 혈소판, 신장, 내피 세포를 비롯한 여러 조직에서 발현된다. 상기 동등형은 본질적 방식으로 발현되고 신장 기능, 혈소판 응집, 위장관 점막 완전성을 유지하는데 중요한 역할을 수행한다. 대조적으로, COX-2의 발현은 염증 자극에 의해 유도되고, 대식세포, 백혈구, 섬유아세포, 활액 세포에서 발현된다. 조직 염증에 대한 비-스테로이드성 소염제(NSAID)의 유익한 효과는 COX-2의 저해에 기인한다. COX-2-저해물질은 위장관에서 독성을 최소화하면서 조직 염증을 감소시키는 유익한 효과를 제공하는 잠재력이 있다.
류머티스 관절염
류머티스 관절염은 원인이 불명한 만성 다기관 질환이다. 다양한 전신 증상이 나타나긴 하지만, RA의 특징은 일반적으로 대칭성 분포에서 주변 관절의 지속적인 염증성 활액막염이다. 연골 파괴와 골 부식 및 골 완정성에서 후속적인 변화를 유발하는 활액 염증의 잠재력이 상기 질환의 징표이다.
RA의 의학적 관리에서 제1선은 국소 염증 과정의 증상과 징후를 조절하는 비-스테로이드성 소염제(NSAID)와 단순한 마취제의 이용이다. 이들 약물은 징후와 증상을 신속하게 완화시키긴 하지만, 상기 질환의 진행에는 별다른 효과가 없는 것으로 보인다. NSAID는 Cox 효소의 활성을 차단하고, 이런 이유로 프로스타글란딘, 프로스타사이클린, 트롬복산의 생산을 차단한다. 결과적으로, 이들은 진통, 소염, 해열 특성을 갖는다. 이에 더하여, 이들 약물은 다른 소염 효과를 발휘한다. 이들 약물 모두 광범위한 스펙트럼의 독성 부작용과 연관하기 때문에, 본 발명의 천연 식이 보조 조성물은 NSAID에 대한 비-독성 대안을 제공할 수 있다.
암
사이클로옥시게나제는 다양한 암에서 연구되었는데, COX-1 또는 COX-2는 여러 유형의 암에서 일정한 역할을 하는 것으로 보인다. 가령, COX-1와 COX-2 모두 폐암 생쥐에서 고도로 발현되는 것으로 밝혀졌다(Bauer et al., 2000, Carcinogenesis 21, 543-550). COX-1은 인간 대식세포에서 담배 발암물질에 의해 유도되는 것으로 보고되었고, NFkB 활성화와 상관한다(Rioux & Castonguay, 2000, Carcinogenesis 21, 1745-1751). COX-1은 인간 난소 아데노암종에서 발현되는 것으로 보고된 반면 COX-2는 그렇지 않았다(Dor et a/., 1998, J. Histochem. Cytochem. : 46,77-84). Ryu 등(2000, Gynecologic Oncology 76, 320-325)에 따르면, COX-2 발현은 1D 단계 경부암에서 높다. COX-2는 인간 경부암에서 과다발현되는 것으로 보고되었다(Kulkarni et al., 2001, Clin. Cancer Res. 7, 429-434). 최종적으로, COX-1은 경부 암종에서 상향 조절되는 것으로 보고되었고, COX-1의 저해물질은 경부의 종양 치료에 제안되었다(Sales et al., US Patent Application 20030220266).
본 발명에 따라, 아카이 과일과 주카라 과일, 주스, 식이 보조물질 및 아카이 과일과 주카라 과일로부터 유래된 다른 조성물은 증가된 사이클로옥시게나제 활성과 연관된 암을 치료, 반전 및/또는 예방하는데 이용된다.
제약학적 조성물과 제형
본 발명의 과일-기초한 식이 보조물질은 음료, 강장제, 혼화물, 또는 식품에 단독으로, 또는 다른 식이 보조물질이나 치료제와 공동으로 사용될 수 있다. 본 발명의 과일-기초한 식이 보조물은 단독으로 사용되거나, 또는 긍정적인 전달 프로필을 보유하는, 다시 말하면, 개체에 전달하기 적합한 제약학적으로 수용가능한 화합물, 운반제, 또는 어쥬번트와 함께 조제될 수 있다. 이런 조성물은 전형적으로, 본 발명의 과일-기초한 식이 보조물질 및 제약학적으로 수용가능한 담체를 함유한다. 본 명세서에서, “제약학적으로 수용가능한 담체”는 제약학적 투여에 적합한 모든 용제, 분산 매체, 코팅, 항생제와 항균제, 등장성과 흡수 지연성 화합물 등을 포괄한다. 적절한 담체는 당분야에서 표준 참고 교재인 Remington's Pharmaceutical Science의 최신판에 기술되어 있다. 이런 담체 또는 희석제의 바람직한 실례는 물, 식염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 5% 인간 혈청 알부민 등이다. 리포좀과 비-수성 운반제, 예를 들면, 불휘발성유(fixed oil) 역시 사용될 수 있다. 제약학적 활성 물질에 대한 이들 매체와 화합물의 이용은 당분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매체 또는 화합물이 활성 화합물과 양립하지 않는 경우를 제외하고, 조성물에 사용될 수 있다. 보조 활성 화합물 역시 조성물에 포함될 수 있다.
본 발명의 제약학적 조성물은 의도된 투여 경로에 적합하도록 조제된다. 투여 경로의 실례는 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 관절내, 동맥내, 뇌내, 소뇌내, 기관지내, 척수강내, 국소, 에어로졸 경로이다. pH는 산이나 염기, 예를 들면, 염산 또는 수산화나트륨으로 조정할 수 있다.
경구 조성물은 일반적으로, 불활성 희석제 또는 식용 담체를 함유한다. 이들은 젤라틴 캡슐, 캡슐에 캡슐화되거나 정제로 압착될 수 있다. 경구 치료 투여를 위하여, 본 발명의 과일-기초한 식이 보조물질은 부형제와 혼합되고 정제, 트로치 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 경구 조성물은 유체 담체를 이용하여 세척액으로 제조될 수 있는데, 여기서 유체 담체에 담긴 화합물은 입으로 적용되고 뱉어지거나 삼켜지게 된다. 제약학적으로 적합한 결합 화합물 및/또는 어쥬번트 물질이 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로치 등은 아래의 성분중 임의 한가지, 또는 유사한 성격의 화합물을 함유할 수 있다: 결합제, 예를 들면, 미세결정성 셀룰로오스, 검 트래거캔스 또는 젤라틴; 부형제, 예를 들면, 전분 또는 락토오스; 붕해 화합물, 예를 들면, 알긴산, 프리모겔(primogel) 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예를 들면, 스테아르산마그네슘 또는 스테로테스(sterotes); 활택제, 예를 들면, 콜로이드성 이산화실리콘; 감미 화합물, 예를 들면, 수크로오스 또는 사카린; 향미 화합물, 예를 들면, 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지향.
본 발명의 과일-기초한 식이 보조물질은 제약학적 조성물로서 직장 전달을 위한 좌약 형태(가령, 코코아 버터와 다른 글리세리드와 같은 통상적인 좌약 염기로) 또는 체류 관장약(retention enemas) 형태로 제조될 수도 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 과일-기초한 식이 보조물질은 화합물을 체내에서 급속한 제거로부터 보호하는 담체를 이용하여, 예로써 이식물과 미세캡슐화된 전달 시스템을 함유하는 서방 제형으로 제조된다. 생분해성, 생적합성 중합체, 예를 들면, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이런 제형의 제조 방법은 당업자에게 명백하다. 이들 물질은 Alza Corporation과 Nova Pharmaceuticals, Inc.로부터 상업적으로 구입할 수도 있다. 리포좀 현탁액 역시 제약학적으로 수용가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 예로써 U.S. Patent No. 4,522,811에 기술된 바와 같이 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다.
용이한 투여와 균일한 용량을 위하여 단위 약형(dosage unit form)으로 경구 또는 장관외 조성물을 제조하는 것이 바람직하다. 본 명세서에서 단위 약형은 치료되는 개체에 대한 단위 투약에 적합한 물리적으로 개별적인 단위를 의미한다; 각 단위는 필요로 하는 제약학적 담체와 공동으로, 목적하는 치료 효과를 달성하기 위하여 미리 계산된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 단위 약형에 대한 특정화는 과일-기초한 식이 보조물질의 독특한 특성; 달성되는 특정 치료 효과; 개체의 치료를 위한 이런 활성 화합물의 합성에 내재된 한계에 직접적으로 좌우된다. 제약학적 조성물은 투여를 위한 사용설명서와 함께 용기, 팩 또는 분배기에 포함될 수 있다.
본 발명은 아래의 실시예에 대한 참조에 의해 더욱 명확하게 정의되는데, 이들 실시예는 본 발명의 범위를 한정하지 않는다. 당업자가 인지하는 바와 같이, 본 발명의 목적과 관심을 벗어나지 않는 범위 내에서 물질과 방법에 대한 다양한 개변이 가능하다.
실시예 1
동결-건조된 아카이의 조성 분석
동결 건조된 아카이 OPTACAI; Lot #: 231003/041 0-C의 조성 분석은 아래의 표 1과 2에 상세히 기술한다.
Figure 112005052705019-PCT00001
Figure 112005052705019-PCT00002
Figure 112005052705019-PCT00003
달리 명시하지 않는다면, 모든 방법은 Official Methods of Analysis of AOAC international, 17th Edition, 2000(이후, AOAC)에 기술된 바에 따라 실행하였다. 테스트 샘플의 수분 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #926.08을 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 단백질 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #991.20E를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 지방 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #933.05를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 재(Ash) 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #935.42를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 탄수화물 함량은 차이로 계산하였다. 테스트 샘플의 칼로리 함량은 Atwarter Factors를 이용하여 계산하였다. 당은 AOAC 방법, 참조 번호 #982.14를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플에서 총 식이 섬유는 AOAC 방법, 참조 번호 #991.43을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 콜레스테롤 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #994.10을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 지방산 프로필은 AOAC 방법, 참조 번호 #969.33을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 나트륨, 칼슘 및 철 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #984.27을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 C 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #967.22를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 A 함량은 Reynolds and Judds, Analyst, 109:489, 1984의 방법을 이용하여 측정하였다.
실시예 2
동결-건조된 아카이의 조성 분석
동결 건조된 아카이 FD 장과 분말(lot# 231003/0410-C)의 조성 분석은 IBC Labs(Integrated Biomolecule Corporation, Tucson, AZ)에 의해 수행되었다. 결과는 아래의 3에 상세하게 기술한다.
Figure 112005052705019-PCT00004
Figure 112005052705019-PCT00005
달리 명시하지 않는다면, 모든 방법은 Official Methods of Analysis of AOAC international, 17th Edition, 2000(이후, AOAC)에 기술된 바에 따라 실행하였다. 테스트 샘플의 수분 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #926.08을 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 단백질 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #991.20E를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 지방 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #933.05를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 재(Ash) 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #935.42를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 탄수화물 함량은 차이로 계산하였다. 테스트 샘플의 칼로리 함량은 Atwarter Factors를 이용하여 계산하였다. 당은 AOAC 방법, 참조 번호 #982.14를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플에서 총 식이 섬유는 AOAC 방법, 참조 번호 #991.43을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 콜레스테롤 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #994.10을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 지방산 프로필은 AOAC 방법, 참조 번호 #969.33을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 나트륨, 칼슘 및 철 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #984.27을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 C 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #967.22를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 A 함량은 Reynolds and Judds, Analyst, 109:489, 1984의 방법을 이용하여 측정하였다. 미량 미네랄/금속은 IBC Labs(Integrated Biomolecule Corporation, Tucson, AZ)에 의해 IPC/MS(Aligent HP-7500a) 방법으로 분석하였다.
실시예 3
동결-건조된 아카이의 영양 분석
100 g의 동결-건조된 아카이의 영양 분석은 Silliker, Inc. illinois Laboratory(Chicago Heights, IL; laboratory lid No. 170547501)에 의해 수행되었다. 결과는 아래의 표 4에 상세하게 기술한다.
Figure 112005052705019-PCT00006
Figure 112005052705019-PCT00007
달리 명시하지 않는다면, 모든 방법은 Official Methods of Analysis of AOAC international, 17th Edition, 2000(이후, AOAC)에 기술된 바에 따라 실행하였다. 테스트 샘플의 수분 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #926.08을 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 단백질 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #991.20E를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 지방 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #933.05를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 재(Ash) 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #935.42를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 탄수화물 함량은 차이로 계산하였다. 테스트 샘플의 칼로리 함량은 Atwarter Factors를 이용하여 계산하였다. 당은 AOAC 방법, 참조 번호 #982.14를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플에서 총 식이 섬유는 AOAC 방법, 참조 번호 #991.43을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 콜레스테롤 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #994.10을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 지방산 프로필은 AOAC 방법, 참조 번호 #969.33을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 나트륨, 칼슘 및 철 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #984.27을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 C 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #967.22를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 A 함량은 Reynolds and Judds, Analyst, 109:489, 1984의 방법을 이용하여 측정하였다.
실시예 4
동결-건조된 주카라 과일의 영양 분석
100 g의 동결-건조된 주카라 과일의 영양 분석은 Silliker, Inc. illinois Laboratory(Chicago Heights, IL; laboratory lid No. 170547501)에 의해 수행되었다. 결과는 아래의 표 5에 상세하게 기술한다.
Figure 112005052705019-PCT00008
Figure 112005052705019-PCT00009
달리 명시하지 않는다면, 모든 방법은 Official Methods of Analysis of AOAC international, 17th Edition, 2000(이후, AOAC)에 기술된 바에 따라 실행하였다. 테스트 샘플의 수분 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #926.08을 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 단백질 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #991.20E를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 지방 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #933.05를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 재(Ash) 함량은 AOAC 방법, 참조 번호 #935.42를 이용하여 측정하였다. 테스트 샘플의 탄수화물 함량은 차이로 계산하였다. 테스트 샘플의 칼로리 함량은 Atwarter Factors를 이용하여 계산하였다. 당은 AOAC 방법, 참조 번호 #982.14를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플에서 총 식이 섬유는 AOAC 방법, 참조 번호 #991.43을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 콜레스테롤 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #994.10을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 지방산 프로필은 AOAC 방법, 참조 번호 #969.33을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 나트륨, 칼슘 및 철 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #984.27을 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 C 함량은 AOAC 방법, 참조번호 #967.22를 이용하여 계산하였다. 테스트 샘플의 비타민 A 함량은 Reynolds and Judds, Analyst, 109:489, 1984의 방법을 이용하여 측정하였다.
실시예 5
냉동-건조된 아카이 분말에서 스테롤의 정량 분석
냉동-건조된 아카이 분말(#001 Agai Powder; Flora ID No. 210823003)의 스테롤 조성물은 고해상 가스 크로마토그래피(HRGC)(Flora Research Laboratories, Grand Pass, OR)를 통하여 측정하였고, 그 결과를 표 6에 요약하였다.
Figure 112005052705019-PCT00010
테스트 샘플에서 스테롤 함량은 INA Method 109.001을 이용하여, FID가 장착된 Hewlett Packard 5890 시리즈 II에서 가스 크로마토그래피를 이용하여 결정하였다. 5-알파-콜레스탄을 기준으로 이용하였다(Matreya, Inc. Pleaseant Gap, PA). 이들 분석에 이용된 컬럼은 Restek Rtx-5, 5% 디페닐-95% 디메틸 폴리실옥산, 60m x 0.25 mm, 0.25㎛ 필름 두께이다.
실시예 6
냉동-건조된 아카이의 잔류 습도 분석
Instituto Adolfo Lutz(1976)(UNIVERSIDADE DE SAO PAULO, Faculdade do Ciencias Farmaceuticas Departamento de Alimentos e Nutricilio Experimental Laboratorio de Analiste de Alimentos)의 방법을 이용하여 동결-건조 전과 후에 아카이 준비물의 잔류 습도를 결정하였다. 원료 아카이 펄프의 습도는 85.37+/-0.14%이다. 냉동-건조된 아카이 펄프의 잔류 습도 비율은 1.06%이다. 안토전체 칼리나즈(antocianinas totals(mg/100g Acai pulp)는 239.32+/-0.74로 이는 Francis & Fuleki,(J.Food Sci, v.33, p. 72-77, 1968) 방법을 이용하여 측정되었다. 도 1에서는 냉동 건조된 아카이 분말에서 관측된 대표적은 흡수 스펙트럼을 나타낸 것이다.
실시예 7
주카라 및 아카이 준비물에서 안토시아닌 및 페놀 화합물 분석
프로안토시아니딘은 “프랑스 패러독스”를 설명하는데 도움이 되거나 고지방 음식 및 적 포도주 소비로 유명한 프랑스 지방에서 왜 관상 심장 질환 비율이 낮은 지를 설명할 수 있다. 적포도주는 포도씨에 있는 프로안토시아니딘을 포함하는 몇 가지 가망 플라보노이드의 알코올 팅크제로 간주될 수 있다. Fulvio Ursini, M.D., from the University of Padova, Italy는 지원자들에게 적포도주 유무하에 고지방 음식을 공급하는 흥미를 유발시킨 연구를 실시하였다. 포도주를 마신 사람들에서는 식사 후 혈장 과산화물 수준이 상당히 낮다는 것을 발견하였다(Ursini F. et a/. Post-prandial plasma peroxides: a possible link between diet and atherosclerosis. Free Rad Biol Med 1998; 25:250-2.)
역학적 자료 및 약간의 인체를 대상으로 한 연구 자료가 보총된 동물 및 in vitro 연구에서 이들 화합물은 여러 가지 건강에 이로운 점이 있는 것으로 나타났다. 이들 잇점중에 주요한 것이 심장 질환 및 암에 대해 항산화 보호이다.
프로안토시아니딘-좀더 기술적으로 올리고머 프로안토시아니딘 및 OPC moniker-는 플라보노이드 계이다. 이전에는 “응축 탄닌”으로 불렀는데, 모든 프로안토시아니딘은 화학적으로 유사하며, 단지 이들의 폴리페놀 링의 모양 및 부착에서 약간의 차이가 있다. 자연상태에서, 상이한 프로안토시아니딘 혼합물이 항상 함께 발견되는데, 이들은 개별 단위 범위에서부터 여러 단위가 연결된 복합 분자(올리고머)까지 다양하다.
프로안토시아니딘은 1960년 후반에 맥관 벽을 강화시키는 성질 및 유리 라디칼 소거 활성으로 인하여 상당히 연구된 바이오플라보노이드의 매우 특별한 군이다. 프로안토시아니딘은 공지된 가장 강력한 자유 라디칼 소거물질중에 하나로써, 비타민 E보다 최고 50배 항산화 효과를 가지고, 비타민 C보다는 최고 20배 강한 효과를 가진다. 프로안토시아니딘은 또한 세포 막 친화성을 가지고, 이는 모세 침투성 및 허약성을 감소시키는 영양학적 지원을 제공한다. 바이오플라보노이드는 자연에 만연하지만, 강력한 프로안토시아니딘 화합물이 가장 풍부하고, 해송 및 포도 씨 껍질에서 이용할 수 있다.
월귤 추출물에는 청구된 시각적 그리고 설명된 맥관 강화 성질을 가지는 안토시아니딘을 포함한다. 월귤은 시력 피로를 감소시키며, 로돕신-옵신 시스템, 밝음과 어두움을 보는 것을 중개하는 색소계, 어슴프레한 공간에서의 시각적 적응에 대한 친화력을 통하여 밝은 곳에서 어두운 곳으로 적응이 개선시킨다. 그러나, 이스라엘 및 미국에서 실시한 두 가지 군인 대상 연구에서는 월귤 추출물에서 이와 같은 잇점을 발견하지 못하였다. 그러나, 추출물은 망막 고유의 항산화 방어 기작을 촉진시켰다.
맥관 시스템에서, 안토시아니딘 추출물은 세포내에 비타민 C수준을 증가시키고, 특정 단백질분해성/리소좀 효소의 침투 효과를 감소시키고, 세포 막을 안정화시키고, 콜라겐 및 결합 조직 물질 조직 합성을 촉진시킴으로써 맥관 벽의 일체성을 지원한다.
포도 씨는 강력한 프로안토시아니딘 또는 피코게놀(pycnogenols)의 원료이다 Jacques Masquelier, Ph.D.,는 프로안토시아니딘 연구의 선구자로써, 피코게놀이란 신조어를 만들었는데, 이는 프로안토시아니딘 조사에서 포도씨 추출물에 사용된 용어이다.
in vitro 연구에서, OPCs는 또한 암으로부터 보호한다. Vaccinium-계열의 열매(블루베리, 덩굴월귤 포함)에 있는 OPCs는 종양 세포에서 단백질 합성을 저해하여 종양 생장을 차단하여 이들이 증식되는 것을 방지한다(Bomser J. and Madhavi D.L. In vitro anticancer activity of fruit extracts from Vaccinium species. Planta Med. 1996; 62:212-6.) 실험실에서는 보리 겨 OPCs를 사람 골수 백혈병 세포로 형질전환시키면 세포는 더 이상 암종이 아니다(Tamagawa K, and Fukushima S. Proanthocyanidins from barley bran potentiate retinoic acid-induced granulocytic and sodium butyrate- induced monocytic differentiation of HL60 cells. Biosci Biotechnol Biochem, 1998; 62:1483-7). 또 다른 in vitro 연구에서, 특허된 포도씨는 암 세포를 죽이고, 사람의 유방, 폐, 위, 골수 백혈병 세포의 생장을 최고 73% 저지하고, 정상 세포 생장을 강화시키는 것으로 밝혀졌다(Ye, X. and Krohn. R.L. The cytotoxic effects of a novel 1 H636 grape seed proanthocyanidin extract on cultured human cancer cells. Mol Cell Biochem, 1999; 196:99-108.)
프로안토시아니딘은 여러 가망 독성 물질로부터 신체를 보호할 수 있다. TylenolTM에서 활성 성분이 되는 아세타미노펜은 강력한 간 독성으로 매년 미국에서 입원을 요하는 중독이 75,000경우의 원인 물질이다. 동물 실험에서 100㎎/㎏ 포도씨로 매주 치료를 받으면 아세타미노펜으로 인한 간 손상을 방지할 수 있는 것으로 나타났다. 기관 손상은 손상에 대한 간 세포를 연구하고, 동물의 건강을 모니터하여 평가할 수 있다(Ray SD, et a/. A novel proanthocyanidin 1 H636 grape seed extract increases in vivo bcl-XI expression and prevents acetaminophen- induced programmed and unprogrammed cell death in mouse liver. Arch Biochem Biophys., 1999; 369(1:42-58.)
프로안토시아니딘은 질병 예방 이상의 것을 할 수 있는데, 이들은 노화를 지연시키는 것을 도울 수 있고, 시각적으로 나타나는 노화 현상을 지연시킬 수 있다. 산화반응 손상으로 인하여 우리 피부에는 눈에 보이는 노화 현상의 원인이 된다. 이와 같은 손상을 예방하면 피부는 더 젊게 유지시킬 수 있다. 이렇게 할 수 있는 한 가지 방법이 UV광의 손상 효과를 감소시키는 것이다. 태양광 차단제는 피부에 태양광 손상을 예방할 수 있을 정도의 다양한 항산화제가 결합되어 있다. 한 연구에서, 포도씨 OPCs는 UV광에 의해 유도되는 지질 과산화반응으로부터 상이한 폴리불포화된 지방산을 보호하는 비타민 E와 동등한 효과로 단독으로 항산화 효과를 발휘하였다(Carini M., et al. The protection of polyunsaturated fatty acids in micellar j systems against UVB-induced photo-oxidation by procyanidins from Vitis vinifera L., and the protective synergy with Vitamine E. Intl J Cosmetic Sci., 1998; 20:203- 15.) 동일한 연구에서, 포도 OPCs는 비타민 E와 시너지효과적으로 상호작용하여, 비활성 비타민을 활성 형으로 재순환시켜, 실제 비타민 E 증량제로 작용할 수 있었다.
노화 과정의 일부분으로 염증 반응에서 방출되는 엘라스타제 효소에 의해 피부가 분해이다. OPCs는 특이적으로 엘라스타제를 차단하여, 엘라스틴의 일체성을 유지시킨다(Meunier MT, and Villie F. The interaction of Cupressus sempervirens L. proanthocyanidolic - 22 oligomers with elastase and elastins. J Pharm Beig., 1994;49: 453-61.)
동물 실험을 사람에서 적용시킨 다면, OPCs는 모발의 두꺼운 머리부분의 생장을 도울 수 있다. 일본의 연구자들은 쥐의 털을 깍고, 이들 털의 40%가 자연적으로 다시 자란다는 것을 발견하였다. 세가지 프로안토시아니딘중 임의의 1% 용액을 피부에 바를 경우에, 털의 70 내지 80%가 다시 생장하였다. 테스트 튜브 실험에서 OPCs는 실제 케라티노사이트를 자극하여 기준에 비하여 3배 이상 모발 생장을 시켰다(Takahashi T. et a/. Procyanidin oligomers selectively and intensively promote proliferation of mouse hair epithelial cells in vitro and activate heir follicle growth in vivo. J Invest Dermatol., 1999;112:310-6.)
B. 페놀 화합물: 누레토린-4‘글루토시드(Luteolin-4'-glucoside)
대식세포에서 선염증성 사이토킨 생산을 저해한다. 항-암 플라보노이드;독소 진핵 DNA 포토이소메라제 I
II. 냉동-건조된 주카라 분말에서 안토시아닌 측정
냉동-건조된 주카라 분말에서 안토시아닌 프로필을 LC/MS/MS을 이용하여 측정하고, 이를 도 2에 나타내었다. 도 2에 나타난 LC/MS/MS 결과 피크를 아래 표 7에 요약하였다.
안토시아닌 및 OPC 분석(페놀 화합물)은 다음과 같이 실시하였다. 간략하게 설명하면, 분말 샘플을 물 및 에틸 아세테이트로 상이하게 그리고 동시에 추출하였다. 각 층을 수집하고, 고체가 없도록 여과하였다. 물 층에서 고유 안토시아닌을 HPLC를 이용하여 C-18 Zorbex 5㎛ 150 X 4.6 mm 컬럼상에서 분석하는데, 기울기 이동상(분당 1㎖ 유속)은 A(0.5% 인산), B(물: 아세토니트릴: 아세트산: 인산- 50:48.5:1:.5); 그리고 다음의 프로그램 즉, 최초 100% A; 20분 80% A, 30분 1O% A, 36분 80% A를 이용한다. 확인/정량은 외부 기준을 이용한다. 올리고머 프로안토시아니딘은 에틸 아세테이트 층에서 분석하는데, 증발 건조 및 무수 메탄올에서 재구성시켜 분석하였다. Phenyl-hexyl Luna 3㎛ 250 x 3.5 mm 컬럼상에서 이동상(분당 1㎖ 유속)은 A(물: 아세토니트릴: 아세트산-89:9:2), B(물: 아세토니트릴- 20:80) 및 다음의 프로그램 즉, 최초 100% A; 25분 60% A, 32분 10O% B, 40분 100% A를 이용한다. 모체 에티카타친(epicatachin) 및 타카친(catachin) 고리 구조의 추출 상수에 근거한 제 1 원리에 의해 동정/정량을 실시하였다.
Figure 112005052705019-PCT00011
냉동-건조된 주카라에서 안토시아닌의 구조는 도 3에 나타내었다.
III. 냉동-건조된 아카이 분말에서 안토시아닌의 측정
냉동-건조된 아카이 분말에서 안토시아닌의 측정은 LC/MS/MS을 이용하고 그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4의 LC/MS/MS 결과는 아래 표 8에 요약하였다.
Figure 112005052705019-PCT00012
분석은 상기에서 설명한 것과 같이 실행하였다.
냉동-건조된 주카라에서 안토시아닌의 구조는 도 5에 나타내었다.
IV. 냉동 건도된 주카라 분말 및 냉동-건조된 아카이 분말에서 안토시아닌의 함량
냉동 건도된 주카라 분말 및 냉동-건조된 아카이 분말에서 안토시아닌의 함량은 표 9에 요약하였다.
Figure 112005052705019-PCT00013
분석은 상기에서 설명한 것과 같이 실행하였다.
V. 냉동-건조된 주카라 분말에서 개별 페놀의 특징
냉동-건조된 주카라에 개별 페놀 화합물의 프로필을 HPLC를 이용하여 측정하고, 질량 스펙트럼은 도 6에 나타내었다. 도 6의 피크에 대한 HPLC 결과는 하기 표 10에 요약하였다.
Figure 112005052705019-PCT00014
냉동-건조된 주카라 분말에 있는 개별 페놀 화합물의 구조는 도 7에 나타내었다. 냉동-건조된 주카라 분말에 있는 상당량이 감지되지 않았다. 분석은 상기에서 설명하는 바와 같이 실행하였다.
VI. 냉동-건조된 아카이 분말 및 냉동-건조된 주카라 분말에서 프로안토시아니딘 측정
냉동-건조된 아카이 분말 및 냉동-건조된 주카라 분말에서 프로안토시아니딘 프로필은 크로마토그래피를 이용하여 측정하고, 도 8에 나타내었다. 도 8에서 볼 수 있는 바와 같이, 프로안토시아니딘 프로필에서 B1은 에피카테친 및 카테친이다. 피크 B2에서 B8은 B 타입 프로시아니딘의 이량체부터 8량체를 나타낸다. 도 8에 나타낸 피크 결과를 하기 표 11에 요약하였다.
Figure 112005052705019-PCT00015
냉동-건조된 샘플에서 프로안토시아니딘의 함량
주카라에는 매우 많은 량의 프로안토시아니딘과 하이드록실 라디칼 및 퍼옥시니트라이트에 대한 항산화 활성이 높은 것으로 나타났다. 도 9에서는 냉동-건조된 아카이 및 냉동-건조된 주카라 분말에서 감지된 프로안토시아니딘의 대표적인 구조를 나타내고 있다. 분석은 상기에서 설명한 바와 같이 실행하였다.
실시예 8
냉동-건조된 아카이 베리 분말의 안토시아닌 함량의 조성 분석
냉동-건조된 아미노산 FD 베리 분말(lot#MAL001)의 안토시아닌 함량의 조성 분석을 IBC Labs(Integrated Biomolecule Corporation, Tucson, AZ)에서 실시하였다. 그 결과는 표 12에 나타내었다.
Figure 112005052705019-PCT00016
안토시아닌 및 OPC 분석은 Brunswick Laboratories에서 이용한 방법에 따라 실시하였다. 간략하게 설명하면, 분말 샘플을
물 및 에틸 아세테이트로 상이하게 그리고 동시에 추출하였다. 각 층을 수집하고, 고체가 없도록 여과하였다. 물 층에서 고유 안토시아닌을 HPLC를 이용하여 C-18 Zorbex 5㎛ 150 X 4.6 mm 컬럼상에서 분석하는데, 기울기 이동상(분당 1㎖ 유속)은 A(0.5% 인산), B(물: 아세토니트릴: 아세트산: 인산- 50:48.5:1:0.5); 그리고 다음의 프로그램 즉, 최초 100% A; 20분 80% A, 30분 1O% A, 36분 80% A를 이용한다. 확인/정량은 외부 기준을 이용한다. 올리고머 프로안토시아니딘은 에틸 아세테이트 층에서 분석하는데, 증발 건조 및 무수 메탄올에서 재구성시켜 분석하였다. Phenyl-hexyl Luna 3㎛ 250 x 3.5 mm 컬럼상에서 이동상(분당 1㎖ 유속)은 A(물: 아세토니트릴: 아세트산-89:9:2), B(물: 아세토니트릴- 20:80) 및 다음의 프로그램 즉, 최초 100% A; 25분 60% A, 32분 10O% B, 40분 100% A를 이용한다. 모체 에티카타친(epicatachin) 및 타카친(catachin) 고리 구조의 추출 상수에 근거한 제 1 원리에 의해 동정/정량을 실시하였다.
실시예 9
냉동-건조된 아카이의 지방산 분석
냉동-건조된 아카이 펄프의 지방산 분석은 Silliker, Inc. lilinois Laboratory(Chicago Heights, IL; laboratory ID No.170547512)에서 실시하였다. 그 결과는 하기 표 13, 14, 16에 상세하게 나타내었다.
Figure 112005052705019-PCT00017
Figure 112005052705019-PCT00018
Figure 112005052705019-PCT00019
달리 명시하지 않는다면, 모든 방법은 Official Methods of Analysis of AOAC International, 17th Edition, 2000(이후, AOAC)에 따라 실시하였다. 테스트 샘플의 지방산 프로필은 AOAC 방법, 참조번호 #969.33을 이용하여 측정하였다.
실시예 10. 냉동-건조된 주카라 열매의 지방산 분석
냉동-건조된 아카이 펄프의 지방산 분석은 Silliker, Inc. lilinois Laboratory(Chicago Heights, IL; laboratory ID No.170547512)에서 실시하였다. 그 결과는 하기 표 16, 17, 18에 상세하게 나타내었다.
Figure 112005052705019-PCT00020
Figure 112005052705019-PCT00021
Figure 112005052705019-PCT00022
달리 명시하지 않는다면, 모든 방법은 Official Methods of Analysis of AOAC International, 17th Edition, 2000(이후, AOAC)에 따라 실시하였다. 테스트 샘플의 지방산 프로필은 AOAC 방법, 참조번호 #969.33을 이용하여 측정하였다.
실시예 11 냉동-건조된 아카이의 아미노산 분석
I. 포스트 컬럼 유도한 이온 교환 크로마토그래피를 이용한 아미노산 분석.
아미노산 분석은 다음에서 설명하는 일반적인 과정에 의해 실행하였다.
A. 원리
이 방법은 6N 염산으로 가수분해하고, 이온-교환 크로마토그래피를 이용하여 아미노산을 정량한다. 0-프탈알데히드(phthaldehyde)를 이용하여 포스트-컬럼 유도하고, 연속하여 형광 감지한다.
B. 범위
이 과정은 성분, 기질을 포함하는 혼합 단백질에 이용할 수 있다.
C. 중요한 점
샘플을 건조시키는 동안 과도한 기화는 피한다. 일부 아미노산 손실이 발생될 수도 있다.
D. 시약 및 화학물질, 프로토콜
1. 물, HPLC 등급, EM Science EM WN0004-1 또는 자체 물 정화 시스템
2. O-프탈알데히드(phthaldehyde), 시약 등급 Anresco 0317.
3. 아미노산 표준 용액, 2.5pmoles/mL, Sigma A9531.
4. 메탄올, HPLC 등급, Chempure 831-295 또는 등가.
5. Brij 3 용액 30%(w/w), Sigma 430Agr.6
6. 2-멀캅토에탄올,(2-하이드록시에틸멀캅탄), Sigma M-6250.
7. L-노르루이신, Sigma N-6877.
8. 피커링(Pickering) 완충액, pH 2.2, 3.28, 7.40, Picketing laboratories Na 220, Na 328, Na 740.
9. 수산화칼륨, pellets, Chempure 831-706.
10. 수산화나트륨, pellets, Chempure 832-050.
11. 염산, 6N 용적액, Chempure RR-155.
12. 에틸렌디아민테트라아세트산(Ethylenediaminetetraacetic Acid) EDTA 테트라나트륨 염, 수화물, hydrate, Sigma ED4SS.
13. 질소원.
14. 붕산(Boric acid), Chempure 830-314.
15. 노르루이신 내부 표준-분석용 저울에 0.1 mg, 0.1640g 노르루이신 무게를 단다. 1000㎖ 용적 플라스크에 옮긴다. 250㎖ HPLC 물을 첨가한다. 1㎖농축 염산을 첨가하고, 혼합한다. HPLC 물로 용적을 맞추고, 혼합하고, 소니케이트한다. 이 용액에는 1.25pxn/㎖ L-Norleucine을 포함한다. 세균 생장을 피하도록 냉장보관한다.
16. 아미노산 표준 용액 - 아미노산 바이알 표준 용액을 실온으로 따뜻하게 한다. 5.0㎖를 50㎖ 용적 플라스크에 피펫팅한다. 10.0㎖ 1.25 pm/mL L-Norleucine 내부 표준을 동일한 50㎖ 플라스크에 피펫팅한다. HPLC 물로 용적을 맞춘다. 잘 혼합하고, 몇 분간 소니케이트시킨다. 표준을 4㎖ 물 샘플 바이알에 옮긴다. 0℃보관한다.
17. 수산화칼륨 용액, 50% - 탑-로딩 저울에서, 무게를 재는 1ℓ Nalgene 용기에서 150g 수산화나트륨을 무게를 달아 넣는다. 150g 탈이온수로 용해시키고, 필요하면 교반시킨다. 용액은 사용하기 전에 실온으로 차갑게 한다.
18. 붕산 완충액 - 중량을 재는 2000㎖ 비이커에서 122g 붕산을 중량을 잰다음 1800㎖ HPLC 물을 첨가한다. pH는 50% 수산화칼륨 용액을 이용하여 11.0로 조절한다. 용액을 4ℓ 유리 컵에 넣고, HPLC 물을 이용하여 용적을 4ℓ로 맞춘다음 잘 혼합한다. 최종 용액의 pH는 10.4가 되어야 한다.
19. 피커링 완충액 이동상:
a. pH 3.28 - 이 완충액을 병에 것 그대로 이용할 수 있다. 0.45 pm 필터 막을 통하여 여과시키고, 기체를 뺀 후, HPLC 사용하기 위해 진공하에서 소니케이션한다.
b. pH 7.40 - 이 완충액을 병에 것 그대로 이용할 수 있다. 0.45 pm 필터 막을 통하여 여과시키고, 기체를 뺀 후, HPLC 사용하기 위해 진공하에서 소니케이션한다.
20. 수산화나트륨, 0.2 N - 2ℓ용적 플라스크에서 16g 수산화나트륨 무게를 단다. 약 1000㎖ HPLC 물을 첨가하고, 수산화나트륨이 용해될 때까지 혼합한다. 0.5g EDTA를 용적 플라스크에 첨가한 다음, HPLC 물로 용적을 맞추고, 잘 혼합후, 0.45mm 필터 막을 통하여 여과시킨다. HPLC 저장기로 플라스틱 갤런 물병을 이용한다. 주기적으로 여과한다.
21. O-프탈알데히드. 1.4g o-프탈알데히드(OPA) 결정을 50㎖ 비이커에 무게를 달아 넣는다. 20㎖ HPLC 등급의 메탄올을 첨가하고, 결정이 용해될 때까지 소니케이트시킨다. 용액을 약 1500㎖붕산완충액이 들어있는 2ℓ비이커에 넣고, 혼합한다. 후드에서, 4.0㎖2-멀캅토에탄올(악취)를 첨가하고, 붕산 완충액으로 용적을 맞춘 후에 혼합한다. 용액을 0.45 pm 필터를 통하여 여과시킨 다음, 여과된 용액을 2개의 1ℓ Nalgene 병에 넣고, 각 병에 3.0㎖ Brij-35를 첨가한다. 용기를 질소로 채우고, 잘 혼합한다. 필요시까지 냉장한다. OPA 용액은 이와 같은 조건하에서 약 1주일간 안정적이다(최장 2주까지 연장될 수 있다).
E. 장비 및 장치
1. Waters model 712 B 주기주사기 또는 등가 장비.
2. Waters model 6000 pump(2), Waters 2100 또는 등가장비.
3. Digital Pro 380 + Waters Expert software 또는 등가장비.
4. Kratos FS-950 형광 감지지 또는 등가장비.
5. Kratos URS 051 포스트 컬럼 펌프 또는 등가장비.
6. Fiatron 컬럼 히터, Eppendorf Cl1-30 또는 등가장비.
7. Fisher Isotemp Oven, model 215 P 또는 등가장비.
8. Savant Speed Vac Concentrator, model SVC-20011.
9. Savant refrigerated condensation trap, model RT-490.
10. Savant chemical trap, model SCT-120.
11. Savant disposable cartridge for acid vapor neutralization, model DC120A.
12. Precision direct drive vacuum pump, model Dd-310 또는 등가장비.
13. Vacuum gauge, Waters Pico-Tag work station 또는 등가장비.
14. Glass-Col small pulsing vortexer, model S8216, Glas-Col PV6.
15. Beckman pH140 Meter, Beckman 123118 또는 등가장비.
16. Mettler Analyiicai balance, model AE160 또는 등가장비.
17. Millipore solventfiltration a,oparatus, Waters 85116.
18. 상호작용-나트륨이 적하된 이온교환 컬럼-보호컬럼있음. Interaction Chromatography AMI 1.
19. Bransonic Ultrasonic bath model 220.
20. Mettler top loading balance, model P-1000.
21. Pipeman. Gilson,1 ㎖, 5㎖, Rainin P4000 and P-5000.
22. Universal lit pipes tips, 1 mL SoS mL, Rainin.
23.Plastipak syringe with Luer-Lok, 3 cc x 1/10 cc, Bl) 9585 또는 등가장비.
24. Syringe filters, polypropylene, Teflon, 0.45 micron, Nalgene 199-2045.
25. Magna Nylon 66 membrane 47mm diameter, 0.45 micron pore size, Fisher N045P0410 26. Repipet II Dispenser, S mL, Fisher 13-687-62A.
27. Universal fir pipes tips, 200 - 100C) d. VWR 53508-819.
28. Disposable culture tubes, 12 x 75 mm, borosilicate glass, VWR 60825- 550 또는 등가장비
29. Sample vial assembly, 4㎖, 텝 및 PFTE septa, Waters 73018.
30. Low volume insert with springs, plastic, for 4㎖ 샘플 바이알. Waters 72163.
31. Firestone valve, rapid purge, Ace Glass mc, 8766.
32. Culture tubes, 1회용, 20 x 150 mm, screw cap, borosilicate glass, VWR 60826.280.
33. 1회용 배양 튜브용 스크루 캡, 20mm), PTFB liner, VWR 60828-570.
34. Brinkman centrifugal mill, model ZM-1(with 0.5 ruin screen) 또는 등가장비.
F. 샘플 준비
샘플은 수분 손실을 최소화시키면서 가능한 미세하게 연마한다. 샘플은 Brinkman Centrifugal Grinding mill model ZM-1, 또는 등가장비를 이용하여 0.5 mm 스크린을 통하여 미세한 분말을 만든다.
G. 공정
1. 분석용 저울 눈금을 0으로 조정한다.
2. 아미노산 분석을 위해 무게를 재기전에 샘플에 단백질 함량을 아는 것이 유익하다. 이를 염두에 두고, 20mg 단백질에 상응하는 샘플 무게는 분석용 저울상에서 잰다(자유 아미노산 결정을 위한 보충 부분을 참고). 거의 순수한 샘플의 경우에 약 38mg 정도 된다. 이 무게를 실험 노트에 기록한다. 샘플을 표시해둔 20 x 150 스크루 뚜겅이 있는 배양 튜브로 옮긴다.
3. Repipet II Dispenser를 이용하여, 15㎖ 6N 염산을 각 배양 튜브에 첨가한다. 취한 샘플의 연마 및 양이 제한적이기 때문에, 배양 튜브로부터 샘플을 손실하게 되는 양이 없도록 한다.
4. 후드에서, 75㎕ 2-멀캅토에탄올을 각 배양 튜브에 첨가한다(Note 1). 이로써 L-메티오닌 피크를 더 잘 파악할 수 있다.
5. 각 배양 튜브를 질소(10-12psi)와 진공을 적어도 각 5회 번갈아 가면서 firestoned 시킨다(Note 2).
6. 샘플을 질소 하에 두고, PTFE-캡을 고정시킨다.
7. 배양 튜브를 24시간동안 110℃± 2℃온도의 오븐에 둔다.
8. Savant 기화 시스템을 어셈블리한다. 시스템 의 파워는 사용하기 적어도 2시간 전에 넣는다. -92℃의 최종 작업 온도까지 도달할 수 있는 충분한 시간을 가질 수 있다. 진공 펌프에 오일에서 완전하게 기체를 빼낸다. 필요할 경우에, 펌프상에 기체 밸래스터 벨브를 열고, 펌프를 작동시킨다. 1시간이면 일반적으로 충분하다. 펌프 작동을 중단시키고, 가스 밸래스터 벨브는 완전히 닫는다.
9. 24시간 후에, 배양물 튜브를 오븐에서 빼내고, 실온으로 냉각시킨다.
10. 5㎖ HPLC 등급의 물을 각 배양물 튜브에 첨가한다. 캡을 고정시키고, 잘 혼합한다.
11. 5㎖ 노르루이신 내부 표준(1.25pm/㎖)을 각 배약물에 첨가한다(Note 3).(이때, 필요에 따라 분석을 다음날까지 중단시킬 수 있다. 하룻밤동안 보관할 필요가 있다면 0℃에 배양 튜브를 보관한다).
12. 1㎖ pipetman을 이용하여, 2㎖ 가수분해물을 표시된 12x75mm 1회용 배양 튜브로 옮긴다.
13. 스피드 vac 농축기의 뚜껑을 열고, 2㎖ 가수분해물을 포함하는 튜브를 로터를 중심으로 배치하여, 적하물의 균형을 맞춘다.
14. 뚜껑을 닫고, 통풍구를 개방한 후, 원심분리를 시작한다. 로터가 작동 rpm에 도달하면, 진공 가우지의 통풍구를 받고, 진공 펌프를 가동시작한다. 기화 과정은 필요에 따라 하룻밤동안 일어날 수 있다. 많은 샘플을 기화시킬 경우 그날 늦게 시작할 수도 있다.(Note 4).
15. 샘플을 건조시킬 때(진공 가우지가 500milliliter미만), 통풍구를 천천히 열어 챔버내로 공기가 흘러들어가게 한다. 펌프 작동을 중단시키고, 일단, 챔버에 공기가 완전히 통하게 되면, 원심분리를 중단시키고, 튜브를 빼낸다.
16. 3㎖ 피커링 나트륨 희석액 220을 각 튜브에 첨가하고, 순간적으로 소니케이트 시킨 후에 볼텍스한다.
17. 0.45pm 필터를 3㎖ 주사기에 부착시킨다. 준비된 가수분해물질을 표시된 4㎖ 바이알로 여과시키는데, 이 바이알에는 Waters Low volume 삽입물과 스프링이 들어있다. 이 바이알을 712B WISP 자동 샘플러 트레이상에 둔다.
18. HPLC 조건:
a. 진공하에 모든 완충액 및 OPA 용액에서 기체를 제거한다. 완충라인을 적절한 용액에 두고, OPA 라인은 OPA 용액에 둔다. 컬럼은 완충액 3.28로 평형을 맞춰둔다. 분당 유속은 적어도 20분간 0.5㎖이다.
b. 형광측정의 감응성 기준을 450으로 설정하고, 범위는 0.5, 시간 상수는 1초, 배경 스프레션은 “to"로 설정한다.
c. 컬럼 히터 온도는 60℃로 설정하고 작동하는 동안 모니터한다.
d. OPA 펌프를 작동시키고, 유속은 분당 0.50㎖(필요에 따라 하향 조절할 수 있다.)으로 설정한다.
e. 기준을 WISP의 #1과 #2에 위치시킨다. Multi 방법 및 방법 테이블을 만들고, 20 F1 표준을 주사한다. 60분간 작동하도록 한다. 생성된 크로마토그래피를 관찰한다. 크로마토그래피가 만족스럽지 않는 경우에 세 번째 주입한다.
f. 매 5개 샘플 다음에 기준을 얹는다. 보정된 반응 인자가 생성되고, 연속 주입에 이용할 수 있다.
9. 피크가 윈도우 밖에 있는 경우에, 샘플을 재처리하고, 보유 시간을 구경 테이블내에서 조정하여 샘플의 것과 일치되도록 한다. 새로 보정된 크로마토그래피를 프린트하고 저장한다.
h. 2개 완충액을 이용하여 구배 용출(Gradient elusion)시킨다. Waters 소프트웨어를 이용하여 아미노산 용출에 대해 2개 완충액을 이용하면 만족스런 구배를 얻을 수 있다. 펌프 테이블은 다음과 같다.
Figure 112005052705019-PCT00023
J. 계산
반응 인자 = 아미노산 양(mg) x 노르루이신 면적(내부 표준)
첨가된 아미노산 면적
그 다음 RF x 아미노산 샘플 면적 = 아미노산 농도(㎎)
내부 표준의 노르루이신 면적
샘플 용적이 최종 농도를 결정하기 때문에, 아미노산 농도는 샘플 농도에 곱한다=최종 아미노산의 농도
K. 주의:
1. Lrs quek를 보존하기 위해, Brij-35-dad를 이용한 경우-필요에 따라 멀캅토아세트산을 이용할 수 있다.
2. Firestone 공정은 음파조(sonic bath)내 산-샘플 용액에서 질소가스를 배출 및 주입을 교대로 하는 것으로 구성된다. 이로써 용액에서 기체를 빼내고, 산위에 비활성 대기를 만들어, 가수분해하는 동안에 산화반응을 최소화할 수 있다.
3. 5㎖ pipetman을 이용하여 실온 물을 5.000 B ± 0.005g이 되도록 한다.
4. 양호한 진공을 이용하여, 튜브에서 샘플을 냉동시킬 수 있다. 그럴 경우에 약 45분 내지 60분 후에, 튜브를 빼내고, 뜨거운 물이 담겨있는 비이커에서 가수분해물을 따뜻하게 할 수 있다. 튜브를 로터에 다시 넣고, 증발을 계속한다.
L. 유효
M. 품질 제어:
1. 품질 보증 매뉴얼에 설명된 표준 품질 보증 규정에 따른다.
2. 기준 표준(제2 표준)을 각 샘플 운영시에 포함시켜야 한다. 카제인이 현재 기준으로 이용된다.
3. 기준 표준의 결과는 실험 노트에 기록해야 한다.
4. 표준의 중복 실시는 8%이상까지 다양해서는 안된다.
5. 기록은 테스트를 실행하는 분석자의 이니셜이 기재되고, 날짜도 기입되어야 한다.
6. 기록 기입장에는 다른 분석자가 리뷰하고, 이해할 수 있도록 기재되어야 하고, 다른 분석자의 이니셜 및 날짜도 기록되어야 한다.
참고문헌:
1. JADAC: Vol 66, No.2, 1982, pp 496-497. Calculated Protein Efficiency Ration.
2. Degussa - Literature Digest for the Feedstuffs Industry - Amino Acid Analysis. Chemie/Anwendungstechnik Hanau Stadtteil Wolfgang, Fed. Rep. of Germany.
3. The Peptides, Vol. 4, Amino Acid Analysis of Peptides, Ch 5. pp 217- 259, JO Benson, P.C. Louie and LA. Bradsbaw. Copyright 1981, Academic Press, Inc.
4. USDA Chemistry Laboratory Guidebook, G-41
5. IAOAC: Vol. 68, No. 5, 1985, pp 811-821. Sample Preparation for Chromatography of Amino Acids: Acid Hydrolysis of Proteins.
II. 냉동-건조된 아카이 펄프의 아미노산 분석
냉동-건조된 아카이 펄프의 아미노산 분석은 Silliker, Inc. Illinois Laboratory(Chicago Heights, IL; laboratory iD No. 170547512)에 의해 실시되었다. 그 결과는 표 20에 상세하게 나타내었다.
Figure 112005052705019-PCT00024
Figure 112005052705019-PCT00025
실시예 12: 냉동-건조된 주카라 열매의 아미노산 분석
냉동-건조된 주카라 열매의 아미노산 분석은 Silliker, Inc. Illinois Laboratory(Chicago Heights, IL; laboratory ID No. 171378575; 실시예 11에서 상세하게 설명된)에 의해 실시되었다. 그 결과는 하기 표 21에 상세하게 나타내었다.
Figure 112005052705019-PCT00026
실시예 13
냉동-건조된 아카이의 항산화제의 비교 분석 및 ORAC FL 분석으로 야채 선별
I. 일반적인 ORAC 검사
ORAC 검사는 Cao et al에 의해 개발되었고, 1993년에 처음으로 보고되었다"Cao G. Alesslo HM, ; Cutler RG, Oxygen radical absorbance capacity assay for antioxidant:. Free Rad. Biol. Med. 1993:14:303-11". 분석 과정을 자동화하기 위해 변형을 시켰고, 이는 1995년에 문헌에 보고되었다 "Automated Assay of Oxygen Radical Absorbance Capacity with the COBAS FARA II Guohua Cao, Carl P. Verdon. Akin H.B. WU, Hong Wang and Ronald L. Prior, CLINICAL CHEMISTRY, Vol. - 33 41, NO.12 1995".
이시점부터, 자동화된 ORAC 검사는 상당한 정도로 이용되고, ORAC 가치는 연구 및 자연 상품 시장에서 중요하게 되었다. Brunswick Laboratories는 1997년에 두개의 COBAS FARA 11 분석기를 구입하여, Cao, Prior, et al에서 개발한 자동화 방법에 대체하였고, 현재까지 과일, 야채, 음료, 곡물 기능성/조작된 식품, 추출물, 천연 상품 소스에 대해 ORAC 5000개이상의 데이터로 구성된 항산화제 데이터베이스를 구축하였다.
Brunswick Laboratoriess는 USDA와 같이 작업하는데, 베타-피코에리트린(beta-Phycoerythrin) 수 백가지 샘플로 테스트되는 새로운 형광 프로브, 플로르레신을 소개하였다. 베타-PE와는 달리 플로레신은 테스트 샘플과 상호작용하지 않고, 합성 화합물이며, 플레레신은 로트마다 측정할 정도의 다양성을 가지지 않는다. 가장 중요한 것은 동일한 조건하에서 샘플을 여러 회 반복 테스트하여 일관성있고, 반복되는 결과를 유지한다는 것이다.
형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORAC 검사를 개발은 베타-PE를 형광 프로브로 이용하는 고유 자동화된 ORAC검사 개발자와 협력하여 실행된 것이다. 상당한 연구에 근거하여, 두 집단은 새로운 표준 ORAC과정으로 플로레신 근거한 ORAC 검사를 개발하였다. 두가지 ORAC 검사는 피코에리신에 대해 PE를 이용하는 것과 플로레신 ORACPE 및 ORACFL을 FL로 이용하는 것에 차이가 있다.
II. 냉동-건조된 아카이 분말의 분석 및 선별 야채와의 비교
냉동-건조된 아카이 분말(Brunswick Lab l D. 02-0104; Brunswick Laboratories, Wareham, IDA)의 항산화 활성을 ORACFL 분석 기술(상기에서 설명, 도 10)을 이용하여 결정된 선택 야채들의 항산화 활성과 비교하였다. 냉동-건조된 아카이의 ORAC 값은 442umole TE/g이다. 이 값은 순수한 캐비지의 ORAC 값(42umole TE/g)보다 약 10배이상되는 것이다(도 10). 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 14. ORAC FL 분석을 이용하여 냉동-건조된 아카이와 선택된 신선한 과일의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 신선한 과일들의 항산화 활성과 냉동-건조된 아카이 분말(231003/0410-C; Brunswick Lab ID. 03-2096; Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 10). 도 11에서 볼 수 있는 바와 같이, 냉동-건조된 아카이 분말(536umole TE/g)은 신선한 아카이(185umole TE/g) 또는 블랙 나무딸기(164umole TE/g)의 것보다 2배 이상 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 15. ORAC FL 분석을 이용하여 냉동-건조된 아카이와 선택된 신선한 과일의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 신선한 과일들의 항산화 활성과 냉동-건조된 아카이 분말(Brunswick Lab ID. 02-0104; Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 12). 냉동-건조된 아카이 분말의 ORAC값은 442umole TE/g이다. 이는 블랙 나무딸기(164umole TE/g)의 것보다 2배 이상 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 16. ORAC FL 분석을 이용하여 냉동-건조된 아카이와 선택된 신선한 과일의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 신선한 과일들의 항산화 활성과 냉동-건조된 아카이 분말(Brunswick Lab ID. 02-0104; Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 13). 냉동-건조된 아카이 분말의 ORAC값은 442umole TE/g이다. 냉동-건조된 자카라 분말의 ORAC값은 1193umole TE/g)의 것보다 2배 이상 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 17. ORAC FL 분석을 이용하여 냉동-건조된 아카이와 선택된 신선한 과일의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 신선한 과일들의 항산화 활성과 냉동-건조된 아카이 분말(231003/0410-C; Brunswick Lab ID. 03-2096; Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 14). 도 14에서 볼 수 있는 바와 같이, 냉동-건조된 아카이 분말(536umole TE/g)은 블랙 나무딸기(164umole TE/g)의 것보다 3배 이상 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 18. ORAC FL 분석을 이용하여 냉동-건조된 아카이와 선택된 신선한 과일의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 신선한 과일들의 항산화 활성과 냉동-건조된 아카이 분말(231003/0410-C; Brunswick Lab ID. 03-2096; Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 15). 도 15에서 볼 수 있는 바와 같이, 냉동-건조된 아카이 분말(536umole TE/g)은 퍼플 캐비지(42umole TE/g)의 것보다 10배 이상 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 19. ORAC 분석을 이용하여 선택된 과일, 야채, 너트의 항산화 능력의 비교 분석
도 16에서는 ORAC 분석 기술(Brunswick Laboratories, Wareham, MA)에 의해 측정된 과일, 야채, 너트의 항산화 활성을 나타낸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 20. ORAC FL 분석을 이용하여 냉동-건조된 아카이와 선택된 너트의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 너트의 항산화 활성과 냉동-건조된 아카이 분말(Brunswick Lab ID. 02-0104; Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(상기에서 상세히 설명). 냉동-건조된 아카이 분말의 ORAC 값은 442umole TE/g이다. 이 값은 피칸의 값(164umole TE/g)의 것보다 4배 이상 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 21. ORAC FL 분석을 이용하여 수화된 아카이와 선택된 수화된 과일 및 야채의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 수화된 과일 및 야채들의 항산화 활성과 수화된 아카이 분말(Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 18). 도 18에서 볼 수 있는 바와 같이, 수화된 아카이 분말(536umole TE/g)은 수화된 블랙 나무딸기(340umole TE/g)의 것보다 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 22. ORAC FL 분석을 이용하여 수화된 아카이와 선택된 신선한 야채의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 신선한 야채들의 항산화 활성과 수화된 아카이 분말(Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 19). 도 19에서 볼 수 있는 바와 같이, 수화된 아카이 분말(536umole TE/g)은 퍼플 캐비지(42umole TE/g)의 것보다 10배이상 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 23. ORAChydro 분석을 이용하여 수화된 과일, 야채의 항산화 능력의 비교 분석
표 22에서는 ORAChydro 분석 기술(Brunswick Laboratories, Wareham, MA)에 의해 측정된 과일, 야채의 항산화 활성을 요약한 것이다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
Figure 112005052705019-PCT00027
실시예 24. ORAChydro 분석을 이용하여 수화된 과일, 야채의 항산화 능력의 비교 분석
표 23에서는 ORAChydro 분석 기술(Brunswick Laboratories, Wareham, MA)에 의해 측정된 과일, 야채의 항산화 활성을 요약한 것이다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
Figure 112005052705019-PCT00028
실시예 25. ORAC FL 분석을 이용하여 선택 수화된 과일 및 야채와 냉동 건조된 아카이의 항산화 능력의 비교 분석
ORACFL 분석 기술(상기에서 자세하게 설명)을 이용하여 측정하였을 때 선별된 수화된 과일 및 야채들의 항산화 활성과 수화된 아카이 분말(231003/0410-C; Brunswick Lab. ID 03-2096, Brunswikc Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 비교하였다(도 20). 도 20에서 볼 수 있는 바와 같이, 수화된 아카이 분말(536umole TE/g)은 수화된 블랙 나무딸기(340umole TE/g)의 것보다 컸다. 형광 프로브로 플로레신을 이용한 ORACFL 분석으로 신체에서 발견되는 가장 흔한 반응 산소 종(ROS)중에 하나인 퍼록시 라디칼에 대한 항산화제 소거 활성을 측정할 수 있다. ORAChydro 분석은 수용성 항산화 활성을 반영한다. Trolox, 수용성 비타민 E 유사체로써 계산 기준으로 이용하고, ORAC 결과는 micromole Trolox 등가(TE)/gram으로 나타낸다.
실시예 26. 트란스-Reveratrol 분석을 이용한 냉동-건조된 아가키의 항산화 능력 분석
냉동-건조된 아카이 분말(231003/0410-C; Brunswick Lab. ID 03-2096, Brunswikc Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성을 트란스-Resveratrol 분석(하기에서 설명)을 이용하면 1.1㎍/g으로 나타났다.
샘플을 HPLC 크로마토그래피를 이용하여, HP 1100 시리즈- HPLC Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl(250x4.6mM)+ 2 밴드 프리필터, 자동샘플러/주사기, 이중 HPLC 펌프, 컬럼히터, 다이오드 어레이 감지기, 형광 감지기가 갖추어진 것을 이용하였다. 이동 상 B2는 아세토니트릴:DI H2O(80:20v/v)이었다. 모든 생물학적 샘플은 분석 때까지 -80℃ 냉동기에 보관하였다. 모든 건성과 과일 샘플은 20 ml의 메탄올(MeOH)로 추출하였다. 추출이후, 샘플은 1시간동안 초음파처리하였다. 모든 샘플은 14000 rpm, 4℃에서 5분동안 원심분리하였다. 샘플은 35분의 작동 시간(run time)과 10분의 작동후 시간(post-run time)에서 1 ml/min의 유속으로 분석하였다. 체류 시간은 대략 26분이었다. 구배는 아래와 같이 설정되었다: 0% B에서 10분; 40% B에서 25분; 100% B에서 32분; 100% B에서 35분. 280 nm에서 흡수를 모니터하였다. HPLC에 의한 화합물의 정량은 공지된 용액에서 화합물의 미지 농도를 결정하는 과정이다. 이는 검출을 위하여 HPLC에 일련의 공지된 농도의 esveratrol의 표준 화합물 용액을 주입하는 과정을 수반한다. 이들 공지된 농도의 크로마토그래피는 주입된 화합물의 농도에 상관하는 일련의 피크를 제공한다.
실시예 27
주카라와 아카이 제조물에서 하이드록시 라디칼과 과산화질소에 대한 항산화 활성의 분석
I. 전반적
A. 과산화질소
과산화질소는 산화질소(NO)와 슈퍼옥사이드의 세포독성 산물이다. 과산화질소는 훨씬 강한 산화제이며, 개별적으로 작용하는 산화질소 또는 슈퍼옥사이드보다 훨씬 강한 독성을 나타낸다.
다양한 병리가 NO와 슈퍼옥사이드의 반응으로부터 형성된 강력한 산화제인 과산화질소의 형성과 연관한다. 이런 반응은 NO에서 진행되는 가장 빠른 반응이며, 2가지 상대적으로 비활성인 라디칼을 더욱 강한 반응성 산화제, 과산화질소로 전환시킨다. 과산화질소는 더욱 많은 NO가 생산되거나 상승된 수준의 O2 -가 우세한 경우에 더욱 많은 양으로 형성된다.
과산화질소는 다수의 병리학적 과정에 관련된 강력한 산화제이다. 과산화질소는 세포 지질막을 자유롭게 이동한다. 과산화질소에 대한 계산된 투과성 계수는 물에 필적하고 슈퍼옥사이드보다 400배 더 크며, 이런 이유로 반응성과 확산성에서 현저한 생물학적 작용 분자이다(Lee, J., Marla, S.S. Peroxynitrite rapidly permeates phospholipid membranes. Proc Natl Acad Sci., 1997.).
이와 관련하여, 당뇨병, 죽상경화증, 허혈성-재관류 손상과 같은 병리는 증가된 과산화질소 형성을 유발할 수 있는 상승된 수준의 O2 -에 의해 특성화되는 산화 스트레스와 연관한다. 최근의 증거는 다발성 경화증과 알츠하이머병 역시 과산화질소 형성과 연관한다는 것을 입증하였다. 이에 더하여, 과산화질소는 허혈과 재관류동안 및 패혈증과 성인 호흡기 곤란 증후군에도 관여한다. 허혈과 재관류는 각각 산틴 옥시다아제와 NAPDH 옥시다아제의 활성화에 기인한 슈퍼옥사이드의 증가를 수반한다. 따라서, 과산화질소는 다수의 병리에 관여하는 것으로 보이는데, 여기서 NO와 O2 -의 불균형이 발생한다. 과산화질소의 형성은 비-특이적 면역에는 바람직하지만 NO에 의한 신호전달에는 그렇지 않다.
과산화질소는 산화질소와 슈퍼옥사이드의 반응으로부터 생물학적으로 형성된다. 효소 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD)는 슈퍼옥사이드를 강하시키고 과산화질소 형성을 예방한다(참조: Pryor, W. A. and Squadrito, G.L.(1995). Am. J. Physiol.(Lung Cell. Mol. Physiol. 12) 268, L699-L722). The chemistry of peroxynitrite: a product from the reaction of nitric oxide with superoxide). 과산화질소는 강력한 산화제이며, 자체적으로 다수의 생물분자를 산화시킬 수 있다. 그럼에도 불구하고, 생물 시스템에서, 이는 대부분 이산화탄소와 반응하여 반응성 중간물질, 예를 들면, ONOOCO2 -, 02NOCO2 -, COO3 -, NO2를 형성한다. 이들 중간물질중에서, COO3 -와 NO2만 생물학적 표적 분자와의 반응에 참가한다; CO2는 ONOOCO2 -를 내전시키고, O2NOCO2 -는 짧게 존재하고 생물분자로서 반응하기 전에 분해된다.
과산화질소에 의해 유발되는 것과 같은 산화 스트레스는 혈관 내피를 손상시키는 것으로 알려져 있는데, 이런 과정은 죽상경화증을 유발할 수 있다(Thom, S.R. and Ischiropoulos, H. Mechanism of oxidative stress from low levels of carbon monoxide. Health Effects Institute Research Report, number 80, 1 997)
B. 하이드록시 라디칼
라디칼의 기능이 분자와 조직을 파괴하는 것이라면, 하이드록시 라디칼은 라디칼의 라디칼이다. 이는 DNA, 막 지질, 단백질, 탄수화물과 같은 거대분자를 비롯한 자신의 경로에서 발견되는 거의 모든 분자와 확산 속도로 반응한다. DNA의 관점에서, 하이드록시 라디칼은 가닥 파열 및 디옥시리보오스와 퓨린과 피리미딘 염기에서 화학적 변화를 유도할 있다.
대부분이 신경에서 중요한 효소인 손상된 단백질은 효력을 상실하고 세포 기능이 약화된다. 뇌를 비롯한 많은 조직에서 단백질 산화는 노화와 연관된 기능적 결함에 대한 설명으로 제안되었다.
하이드록시 라디칼은 과산화수소(H2O2)로부터 유래된 라디칼의 3세대 종인데, 이는 효소 슈퍼옥사이드 디스뮤타제의 작용을 통하여 슈퍼옥사이드 라디칼로부터 유래된다.
과산화수소는 효소 글루타티온 전이 금속, 예를 들면, 철 또는 구리의 존재에서 퍼록시다제와 카탈라아제에 의해 하이드록시 라디칼로 환원된다.
II. 결과
동결-건조된 아카이 분말과 동결-건조된 주카라 분말(Brunswicl; Lab ID. Brunswick Laboratories, Wareham, MA)의 항산화 활성은 ORAC 분석 기술로 측정하고, 아래의 표 24에 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00029
표 24에서 HORAC 결과는 g당 마이크로몰 갈릭산 당량으로 표시한다. 표 24에서 NORAC 결과는 g당 마이크로몰 Trolox 당량으로 표시한다.
실시예 28 아카이 및 주카라 제제의 슈퍼옥사이드 디뮤타아제-유사 활성 및 사이클로옥시게나아제 억제 활성 분석
I. 슈퍼옥사이드 (O 2 ) 스캐벤징(스캐밴징) 활성 분석 (SOD)
A. 배경
성인(70 kg 체중)에 의하여 소비되는 총 산소의 일 퍼센트가 슈퍼옥사이드 음이온으로 전환되는 것으로 측정된다. 휴식중인 성인은 3.5 mL 02/kg/분를 이용하는데, 이는 0.147 몰/일 O2-가 된다. O2-는 하이드로겐 퍼옥사이드, 퍼옥시나이트라이트, 그리고 하이드록실 라이칼(하이드로겐 퍼옥사이드로부터)와 같은 다른 반응성 산소의 원인이되는 것으로 생각된다. 그러므로, 인체의 02-스캐벤징 용량은 산화성 스트레스에 대항하는 제 일차 방어이다. 사실, 3분의 1 정도로 유전자 이식 파리에서 일생동안 연장되는 슈퍼옥사이드 디뮤타아제 및 카탈라아제의 과도한 발현은 아마도 낮은 단백질 카보닐 조성에 의한 감소된 산화성 스트레스에 기인하는 것으로 보고된다. (Orr and Sohal, Science 263: 1128-1130, 1994.) 혈액의 슈퍼옥사이드 스캐밴장 용량은 개체의 항산화 상태에 대한 매우 중요한 매개변수이다. 이 분석은 높은 처리량 양상으로 이 매개변수를 정확히 정량하기 위하여 고안되었다.
B. 실험 절차
실험 기구
Precision 2000 eight channel liquid handling system 및 Bio-tek Inc.의 Synergy HT microplate UV-VWAS 그리고 fluorescence reader (Winooski, VT).
시약
하이드로에티딘은 Polysciences, Inc. (Warrington, PA)에서 구입하였다. 잔틴 옥시다아제 (butter milk, Catalog number X4875), 잔틴, 슈퍼옥사이드 디뮤타아제 (소 적혈, cataiog number S 2515)는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)에서 구입하였다.
i. 시약의 제조
완충액
완충액은 100 μM 디에틸렌트리아민 펜타아세틱 애시드 (DTPA)를 함유하는 75mM 인산 완충액으로 구성된다. 완충액을 제조하기 위하여, 0.0393g의 디에틸렌트리아민 (DTPA)을 계량하고 10 mL의 ORAC 완충액 작업 용액이 첨가되었다. 이것은 10 mL의 10 mM DTPA 저장액을 만든다. 다음, 198 mL의 ORAC 완충액 작업 용액에 2 mL의 DTPA 저장 용액이 첨가되었다. 이것은 200 mL의 DTPA를 함유하는 100 μM O2- 완충 작업 용액이 된다.
잔틴 옥시다아제
Sigma의 잔틴 옥시다아제 현탁앤(냉장 보관)은 완충액으로 20배 희석되어 균질 용액으로 만들었다. 19 mL의 O2-완충액을 취하여 1.0 mL의 잔틴 옥시다아제 현탁액을 첨가한다. 이것은 20 ml의 잔틴 옥시다아제 작업 용액을 생성하는데, 이것은 매일 신선하게 제조되었다.
잔틴 용액.
잔틴 (15 mg)을 계랑 후 깨끗한 유리 병에 담았다. 5 mL의 0.1 N 소듐 하이드록사이드 (0.1N NaOH)가 첨가되었으며 용액은 고체가 녹을때까지 볼텍스로 혼합되고 소니케이션 되었다. 95 mL의 O2- 완충액이 첨가된 후 볼텍스로 혼합되었다. 이것은 100 mL의 잔틴 용액이 된다. 이 용액운 실온에 보관하여 잔틴의 침전을 막는다. 이 잔틴 용액 매일 새로 제조되었다.
하이드로에티딘 (HE) 작업 용액.
하이드로에티딘의 저장용액
0.04 g의 디하이드로에티디움이 20 mL의 아세토니트릴에 첨가되었다. 이것은 20 mL의 HE 저장 용액 (2 mg/mL)이 되며, 이것은 소량 분액 바이알에 -80°C에서 저장된다. 다음, 0.125 mL의 디하이드로에티디움 (HE) 저장 용액이 24.875 mL의 잔틴 용액에 첨가되었다. 이 용액은 맑아질 때까지 소니케이션 되고 가열되었다. 이것은 25 mL의 하이드로에티딘 (HE) 작업 용액이 되며, 매일 새로 제조되었다.
슈퍼옥사이드 디뮤타아제 작업 용액 (SOD).
SOD (Sigma)의 3000 유닛이 10mL 완충액 용액에 재구성되었다. 이 용액은 소량의 분액으로 나누어졌다. (바이알 당 0.4 mL, 저장 용액) 그리고 -20°C에 보관되었다. 이것은 3000 유닛이 사용을 위하여 30 유닛으로 희석되도록 한다. (이하 참조) 200 μL의 SOD 3000 유닛 저장 용개이 19.8 mL의 02-완충액에 첨가되어 20 mL의 SOD 30 유닛 작업 용액이 된다.
대조군
저장 용액은 망간 (III) 5,10, 15,20 테트라클로라이드 저장 용액 1144 μM 이며 -80°C에 저장되었다. 작업 용액을 제조하기 위하여, 저장 용액은 02-완충액으로 100배 희석되고 볼텍스로 혼합되었다. 9.9 mL의 02-완충액을 취하여 100 μL의 망간 저장용액을 가한다. 10 mL의 11. 44 μM 망간 작업 용액은 대조군으로서 웰 G1 및 G12에 적용된다.
분석 절차
분석은 96-웰의 마이크로 플레이트를 갖는 Precision 2000 liquid handling 시스템을 사용하여 아래의 프로토콜을 따라 수행되었다. :
- 플레이트(폴르프로필렌) 1에서 200 μL의 샘플이 B1, C1. E1, F1, 및 B12, C12, E12, F12 웰에 첨가되었다.
- 200 μL의 SOD 작업 용액이 웰 D1 및 D12에 첨가되었다.
- 200 μL의 O2- 완충액이 A1, H1, A12, 및 H12 웰에 첨가되었다.
- 200 μL의 망간 작업 용액이 G1 및 G12에 첨가되었다.
- 시약들은 다음과 같이 precision 2000의 rack B의 컵에 장전되었다. :
B1에 20 mL의 02-완충액
B2에 20 mL의 HE
B4에 20 mL의 잔틴 옥시다아제
- Precision 2000에서 Ax2 희석 (ORACx2)이 수행되었다. 희석은 모든 샘플, 표분, 블랭크에서 2, 4, 8,16, 및 32 배로 수행되었다.
- 각 웰에서 25μL의 용액이 반응 플레이트(폴리스티렌, 320μL)로 이동되었으며, 150 μL HE 작업 용액이 첨가되었다.
- 기록될 플레이트(reading plate)를 20 분간 37°C에서 인큐베이션 하였다.
- 인큐베이션 후, AAPH 첨가 (B4)프로그램을 작동하여 잔틴 옥시다아제를 첨가한다. 이로써 25μL 잔틴 옥시다아제 작업 용액이 플레이트 #2의 모든 웰에 첨가된다.
- 잔틴 옥시다아제 첨가 후, 플레이트를 플레이트 기록계(platereader)에 배치한다.
- 플레이트 및 형광은 여기 필터(excitation filter)로 485±25 nm에서 그리고 방사 필터(emission filter)로 590±30 nm에서 10분 마다 기록되었다. 이 기록은 5000유닛에서 D1 무작위 세트(arbitrarily set)의 낮은 웰에 대조되었다. 플레이트 2의 설계(폴리스티렌)은 각 웰이 150 μL HE 작업 용액, 25 μL 샘플, 그리고 25μL 잔틴 옥시다아제 (30분 예열 후 첨가됨)을 함유하는 것이다.
C. 데이터 처리
초기 데이터로부터, 선형 곡선이 얻어지며, KC-4 프로그램에 의하여 계산된 이 곡선의 기울기는 플레이트 기록계(plate reader)를 조절하기 위하여 사용된다. 이 기울기는 밖으로 전달되어 마이크로소프트의 엑셀 소프트웨어로 더욱 계산된다.
단순 화학적 동력학
02-는 다음의 반응에 의하여 잔틴 옥시다아제에 의하여 계속 생성되었다. 슈퍼옥사이드 생성율은 일정하였으며 잔틴 옥시다아제에 비하여 매우 과량인 잔틴에 대하여 슈도-제로 오더(pseudo-zero order)였다.
잔틴 + O2 -> 유릭 애시드(uric acid) + O2- (1)
생성된 슈퍼옥사이드는 HE와 반응하거나 슈퍼옥사이드 디뮤타아제에 의하여 스캐벤징 되었다.
HE + O2- -> 산화된 HE (2)
2 O2- -> 02 + H2O2 (3)
O2- + 샘플 -> P (4)
O2- 농도의 일정한 상태인 것으로 가정하면, 02-스캐빈저 (SOD)의 부재(Vo)하 및 존재(V) 하에서 형광 증가 속도는 다음의 식을 갖는다. :
Vo/V = 1 + k3[SOD]/(k2·[He]) (5)
Vo/V vs [SOD]의 도면은 (0, 1)에서의 절편(interception) 및 기울기 k3/k2[HE]을 갖는 선형 곡선이 될 것이다. 미지의 샘플에 대하여 표준과 미지의 샘플 사이의 기울기 비율은 다음과 같다. :
{k3/k2 [HE]}/{ks/k2 [HE]) = k3/ks (6)
방정식(5)는 샘플의 Vo/V vs 농도 곡선의 도면에 사용된 농도에 따라 샘플 일 리터당 또는 그램당 SOD 유닛 당량의 단위를 갖는 샘플의 상대 SOD 활성을 제공할 것이다.
II. 사이클로옥시게나아제 분석
A. 개요
염증이란 화학적 또는 물리적 공격은 물론 바이러스나 병균과 같은 병원체의 침입에 대한 우리의 면역 시스템의 반응이다. 종종 고통스러운 염증은 대개 치료 반응이다. 그러나 어떤 경우 염증은 만성 상태로 진행하고, 관절염, 다발성 경화증 또는 심지어 암과 같은 쇠약하게 만드는 병과 관련된다. 실험적 및 계통적 생물학에 대한 연구는 복합 염증 진행에 서광을 비추었다. 그들 중 한 방법은 염증과 직접적으로 관련된 사이클로옥시게나아제-2 (COX-2)의 활성을 억제하여 염증의 억제를 유지하는 것이다. 비-스테로이드 항 염증제(NSAIDs)는 우수한 COX 억제제라는 것 또한 밝혀졌다. NSAIDs의 유익한 작용은 COX-2의 억제와 관련될 수 있으며, 반면 그들의 해로운 부작용 (가장 흔하게는 위장관 독성)은 COX-1의 억제와 관련된다. 이들 종합적 COX 억제제에는 아스피린, 이부프로펜, 나프록센 및 셀레콕시브 (celebrexTM)가 포함된다. 차세대 NSAIDs로서 보다 선택적이며 활성인 COX-2 억제제의 개발에 대한 보다 많은 연구가 이루어지고 있다.
역사적으로, 염증 치료를 위하여 수천년 동안 생약 성분이 사용되어 왔다. 사실, 셀수스(Celsus)가 약 AD 40년 경에 'rubor, calor, dolor, tumor' (발적, 열, 통증 및 부종)로 정의한 것은 오늘날의 염증 증상이다. 오직 최근에 들어서 생약 혼합물로부터 효과적인 성분의 분리를 위한 가이드로서 COX-1 & COX-2 억제 분석을 사용하여 분자생물학에서 식물 추출물에 대한 작용 매카니즘이 조사되었다. 이러한 접근은 또한 건강 식품 산업에서 통증-완화 및 항-염증 생약 보충 효과에 대한 보다 나은 평가 및 최적화가 가능하도록 한다. 식물 기원의 샘플의 COX 억제 용량 측정에 대한 산업적 요구를 충족시키기 위하여, 효율을 개선시키고 비용을 감소시키도록 변형된 생체 외 COX-1 & COX-2 억제제 스크리닝 분석이 채택되었다. 식물 제품에 적용가능한 COX-1 & COX-2 억제 활성 분석의 세부 사항이 이하에서 설명된다.
B. 분석 원리
COX-1 및 COX-2 모두는 아라키돈산의 산화를 촉매하여 프로스타그란딘이 생성되도록 한다. (도. 1). 효소 활성은 산소 소비율에 의하여 측정될 수 있다. 사실, 효소의 단위 활성은 "37°C에서, 100 mM 아라키돈산, 5 mM EDTA, 2 mM 페놀, 및 1 mM 헤마틴을 함유하는 0.1 M 트리스-HCl 완충액 pH 8.0에서 일분당 일 nmol의 산소를 소비하는 효소의 일 단위"로 정의된다. 산소의 농도는 실시간으로 Hansatech에서 구입한 Oxytherm (도 2), 즉 산소 농도 측정 시스템에 의하여 감시된다. 초기 산소 소비율은 동력학 곡선으로 부터 얻는다. 억제제의 존재 하에서, 초기 속도는 감소한다. 초기 산소 소비율이 50% 감소한 농도인 IC50는 COX-1 & 2 억제 활성의 표현에 사용된다. 선택성은 COX-1 및 COX-2에 대한 IC50의 비율로서 표현된다. 샘플은 보통 디메틸 술폭사이드 (DMSO), 에탄올 또는 물에 용해된다.
C. 실험 세부사항
(1) 분석 조건 :
기구 : Oxytherm
분석 완충액 : 5 mM EDTA, 2 mM 페놀, 및 1 mM 헴(heme) 을 함유하는 0. 1 M 트리스-HCl, pH 8. 0
온도 : 37°C
초기 [02] : 212 mM
효소 부피: 5 mL (or~100 unit)
총 부피 : 0.5 mL
샘플 부피: 5 mL
기질: 5 μL 아라키돈산 (Conc. 10 mM in 0. 01 M NaOH 용액)
헴(Heme): 5 mL (최종 농도. 1 mM)
데이터 기록 속도: 초당 5회 리딩
(2) 실험 절차
트리스 완충액 (37°C 오븐에서 배양)의 반을 반응 챔버에 가하고 DMSO 내의 5 mL의 100 mM 헴을 가한다. 이 용액에 50mL COX-1 (또는 10 mL COX-2) 효소 용액을 가한다. (공급자로 부터 받은대로 사용됨). 이 혼합물은 1분간 배양된다. 5 mL 샘플 (DMSO 또는 에탄올 내의)이 첨가되고 일분간 배양된다. 5 mL 아라키돈산이 첨가되고 반응이 감시된다. 초기 속도는 동력학 곡선으로 부터 얻어졌다.
샘플의 추출 및 용해 : 고체 샘플은 용해도에 따라 디메틸 술폭사이드 (DMSO), 에탄올, 물 내의 50% 아세톤 또는 물로 추출되었다. 물-기초 액체 샘플은 곧바로 테스트되거나 필요한 경우 희석되어 테스트 되었다. 오일-기초 샘플은 분석을 위하여 DMSO 또는 에탈올에 용해되었다.
품질 제어:
데이터의 유효성 및 시스템의 정상 작동을 확보하기 위하여, 몇가지 품질 제어 측정이 적용되었다.
(1) 공지의 COX-1 & 2 억제제 인도메타신이 품질 대조 샘플로서 사용되었다. 인도메타신은 COX-1에 대하여 0.1 mM의 그리고 COX-2에 대하여 6.0 mM의 IC50를 갖는다. 인도메타신의 IC50는 효소의 각각의 로트(lot)에 대하여 측정되었다. 적절하게 작용하는 oxytherm 시스템은 두 효소 모두에 대한 정상 값의 20% 이내의 IC50를 제공해야 한다.
(2) 각 샘플 용액은 평균 IC50 값을 얻기 위하여 이중 또는 삼중으로 테스트 되었다.
(3)재현성을 더욱 확보하기 위하여 한 블랭크 (100% 활성)가 5개의 샘플 용액마다 작동되었다.
IC50: 효소 활성의 50%가 억제된 샘플의 농도. IC50가 낮을수록 활성은 높다. IC50 비율: 이 수치는 COX 효소의 억제에서 샘플의 선택성을 지시한다. 이 비율이 1인 경우, 선택성은 없다. 만일 이 비율이 1보다 작은 경우, 샘플은 COX-2보다 COX-1를 더 억제한다. 만일 1보다 큰 경우, 샘플은 COX-2를 더 억제한다. 표준 편차는 약 20%이다.
D. 참조문헌:
1. Nathan, Nature 2002, 420 : 846-52.
2. Tracey, Nature 2002, 420 : 853-59.
3. Couzer and Marnett, Chemical Rev. 2003, ASAP.
4. Wu et al., J. Agri. Food Chem. , 2002,50 : 701-05.
5. Smith and Marnett, Biochim, Biophys. Acta 1991,1083, 1-17.
6. Johnson et a/., Arch. Biochem. Biophys. 1995, 324 : 26-34.
7. Kulmacz and Lands W. E. M. Requirements for hydroperoxide by the cydooxygenase and peroxidase acitivties of andin H synthase. Prostaglandin 1983, 25, 531-40.
III. 아카이 및 동결-건조된 주카라 분말의 슈퍼옥사이드 음이온 스캐밴징 잠재력
아카이 및 동결-건조된 주카라 분말의슈퍼옥사이드 음이온 스캐밴징 잠재 능력은 이상과 같이 측정되었다. (Brunswick Lab ID. Brunswick Laboratories, Wareham, MA). 천연 원료로 부터 가장 많이 연구된 슈퍼옥사이드 디뮤타아제 (SOD)는 밀 싹 SOD이다. 밀 싹에 대한 SOD 활성은 그램당 160 ~ 500 유닛이다. 비교로서, 동결 건조된 아카이 및 동결 건조된 주카라 분말은 이하의 표 25에서 요약된 바와 같이 실질적으로 높은 슈퍼옥사이드 스캐밴징 용량을 갖는다.
샘플 SOD (unit/g) * COX 억제 (mg/g) **
아카이 1,614 19
주카라 6,657 60
* 결과는 그램당 SOD 유닛 당량으로 표현됨.
** 결과는 그램당 아스피린 mg 당량으로 표현됨.
사이클로옥시게나아제 (COX) 활성 (COX Type 1, 즉, COX I ; 그리고 COX Type 2, 즉 COX II)은 위와 같이 동결-건조된 아카이 분말 및 동결-건조된 주카라 분말의 존재 및 부재 하에서 측정되었다. (Brunswick Lab ID. Brunswick Laboratories, Wareham, MA). 표 25 및 이하의 표 26에 요약된 바와 같이, 동결-건조된 아카이 분말 및 동결-건조된 주카라 분말은 COX 효소를 억제하였다. 표 26과 같이, 동결-건조된 아카이 분말 및 동결-건조된 주카라 분말은 COX I 및 COX II 이소자임 모두를 억제하였다. 동결-건조된 아카이 분말 및 동결-건조된 주카라 분말은 그러므로 COX I 및 COX II 활성과 관련된 염증성 질병, 예를 들면 관절염의 예방 및 치료에 효과적이다.
샘플 COX I (mg/mL) COX II (mg/mL)
Acai 6. 96 12. 50
Jucara 2. 20 10. 92
* 결과는 IC50 (50% 효소 활성 억제 농도)으로 표현됨
실시예 29 ORAC HO 분석에 의한 과실 및 채소의 항산화 잠재력의 비교 분석
도 21은 ORAC 분석 기술에 의하여 측정된 과실과 채소의 항산화 활성을 도시한다. (Brunswick Laboratories, Wareham, MA; as detailed above). 형광 프로브를 사용하는 ORACFL 분석은 인체에서 발견되는 가장 흔한 반응성 산소 종(ROS)인 퍼옥실 라디칼에 대한 항상화제의 스캐벤징 용량의 측정을 제공하였다. ORAChydro는 수용성 항산화제 용량을 반영한다. 수용성 비타민 E 아날로그인 Trolox는 보정용 표준(calibration standard)으로서 사용되며 ORAC 결과는 그램당 마이크로몰 Trolox 당량 (TE)으로 표현된다. 표 21의 HORAC 결과는 그램당 마이크로몰 갈릭 애시드(gallic acid) 당량으로 표현된다.
실시예 30 Acai 쥬스의 제조
도 22는 과실의 세척 및 멸균을 포함하는 Acai 쥬스 제조의 세부 흐름도를 도시한다. 과실과 쥬스의 보다 나은 보존은 식품의 소비를 허용하며 영양적 가치를 보존하고 수확과 상업화 사이의 체계을 용이하게 할 것이다. Acai 쥬스의 제조 및 가공 단계는 도 22에 도시된다.
과실의 삭피는 몇개의 다른 방법으로 수행되며 연화 조건은 제품마다 달라진다.
I. 펄프 추출 공정의 최적화- 연화 및 기계적 삭피.
과실의 삭피는 몇가지 방법으로 수행될 수 있으며, 각 제조자는 Acai를 가공하는 각자의 방법을 가지고 있다. (연화 시간 및 온도, 과실의 킬로그램당 물의 용량, 기계 내에서 과실의 체류 시간). 우리의 경험의 재현성을 유지하고 우수한 결과를 확보하기 위하여 펄프 추출 공정을 체계화 하고 최적화할 필요가 있다.
Acai 과실 삭피, 대부분 Acai 과실에 특히 맞도록 사용되는 세로 축을 갖는 기계적 삭피가 수행된다. 대표적인 기계적 삭피 장치의 사진이 도 23에 도시된다. 이것은 각 공정에서 과실의 양을 최소화 화기 위하여 시간 당 2 kg의 Acai가공을 위하여 설계되었다.
과실의 침지를 위한 물의 온도 및 시간은 거래 업자마다 다르다. 과실은 가공 전에 실온에서 흐르는 물에 몇시간 동안 침지(soaking)될 수 있으며, 또는 보다 단 시간(10~20분) 동안 따듯한 물에서 연화될 수 있다.
실험실에서, 몇가지의 연화 시간 (0,5, 10,15, 20,30 분) 및 침지 물 온도 (30,40, 45,50 및 60°C)가 테스트되었다. 비록 결과에서 다른 연화 조건 사이에 현저한 차이는 없었으나, Acai가 45°C 에서 20분 동안 물에서 연화되는 경우 보다 우수한 결과가 관찰되었다.
삭피 총 시간, 물의 양 및 이 시간동안 사용된 방법은 쥬스의 밀도 및 산출에 매우 중요한 변화를 구성한다. 5가지의 총 삭피 시간 (2: 30 내지 5: 00)이 테스트 되었으며 각각에 대하여 제 1 용량의 물에 넣기 전에 몇가지의 삭피 시간이 테스트되었고, 삭피 장치 내에서 물에 넣는 몇가지 방법(삭피 후 쥬스의 드리핑[dripping] 시간은 45초로 세팅되었다.)이 테스트되었다. 총 물의 양은 과실 2Kg당 1리터 였다.(너무 강하거나 약하지 않은 이상적이 쥬스를 얻기 위하여).
이 연구로 부터, 삭피를 위한 총 시간 및 삭피 장치 내에서 물을 넣는 방법을 건조 물질의 산출에 매우 현저한 효과를 가진다는 것이 주목되었다. 이들 경험으로 부터, 쥬스의 제조를 위한 다음의 프로토콜이 확정되었다 :
1. 2 kg의 원료 물질 계량 (Acai).
2. 각각 200 mL의 물이 든 5개의 용기 준비
3. Acai를 기계에 넣고, 시간은 0으로 맞춤.
4. 1분간 삭피 후 첫번째 용기의 200 mL의 물 넣음.
5. 30분; 2 분; 2 분30초; 및 3분 후, 각각 나머지 4 용기의 물을 넣음.
6. 45 초 내지 3 분 45초 동안 드리핑[dripping]되도록 방치.
쥬스의 일부의 재순환 손상이 분석되었다. 비록 쥬스 제조를 위한 이 기술이 매우 인기있는 방법이기는 하지만, 건조 물질의 산출에 별 차이는 나타나지 않았다.
II. ACAI 과실 수확 후 미생물학적 특성의 진화
Acai의 특성과 품질이 수확 후 및 수확기 전에 비교되면, 감각 수용성 품질 및 많은 과학적 표지 (미생물적, 중량[thy weight], 색)에 현저한 변화가 주목된다. 예를 들면, Belm에서 판매되는 수확된 Acai는 싸고 풍부하다. 이것은 Beim 근처에서 오므로 우수한 품질을 가지며 운반 도중 변화를 겪지 않는다. 한편, 수확기 전에 Acai는 낮은 양으로 생산되며 이것의 감각 수용성 특성은 수확기의 Acai에 비하여 열등하고 더 비싸다. 수확기 전에 생산된 Acai는 보다 먼 곳(Maranho, Maraj island)에서 오며, Belm 부두에 닿기 전에 장거리 여행을 한다. 과실의 수확 및 판매/소비 사이에 경과되는 시간은 매우 중요하다. (48시간은 어느 정도 수확 후 과실이 실온에서 지속될 수 있는 최대의 시간이다.)
수확기의 그것에 비하여 수확기 전에 구입한 Acai에서 증가된 미생물적 부하가 주목되었다. 수확기에, 신선한 Acai의 그램당 미생물의 평균 부하는 건조 펄프의 그램당 106 microorganism 이다. - 이것은 10 ml의 쥬스로 고려된다. 수확기 전에 그램당 미생물의 평균 부하는 109이며, 이것은 미생물이 1000배나 많다는 것을 지시한다.
따라서, 오염의 증가가 주로 그 지역의 야쟈의 낮은 품질, 불량한 운송 조건 때문인지 또는 과실 표면에 이미 존재하는 미생물의 자연적 성장을 초래하는 수확 후의 시간 경과의 증가 때문인지 결정하는 것이 필요하다. 수확과 가공 사이의 시간 경과의 영향이 연구되었으며, 미생물 부하의 증가와 연관되었다.
미생물 부하가 신선한 과일(수확 10시간 후 취함)에서 30 시간의 기간동안 몇 가지의 간격을 두고 측정되었다. 그 결과는 과실의 원래 미생물 부하의 상당하고 정규적 증가가 있음을 나타낸다. 수확 직후 건조 펄프 일 그램당 미생물 부하는 약 105-106 microorganism (박테리아, 곰팡이 및 효모) 이며 40 시간 후에 건조 펄프 일그램당 109 microorganism를 약간 초과하는 최대가 된다. 수확 40 시간 후 관찰된 미생물의 부하가 수확기 전(middle harvest)의 그것과 매우 유사하므로, 수확기 및 수확기가 아닌 때의 미생물 부하의 변이는 지역의 야쟈수의 낮은 품질 보다는 과실 표면의 미생물의 자연적 증가에 의해 주로 일어난다고 결론짓는 것이 가능하다.
그러므로, Acai는 생성물의 품질의 변화(미생물 증가에 의하여 일어나는 자연적 변화는 물론 제품의 보존을 위한 열적 라디칼 처리의 사용에 의하여 필연적으로 일어나는 변화)를 방지하기 위하여 수확 직후에 미생물 부하의 현저한 증가가 일어나기 전에 사용되어야 한다. 그러나, 미생물 부하를 감소시키는 방법이 아래에 설명된다.
III. 세정(CLEANING).
쥬스의 미생물 부하의 감소에 대한 세정 방법의 효율이 연구되었다. 이 연구들은 수확기 전의 Acai를 사용하여 수행되었으며, 이는 Acai가 상당의 정도의 요염을 갖는다는 것을 의미한다. 가공 전에 0.1 % (v/v) 농도의 위생수(hygienic water)로 과실을 세정하는 것은 미생물 부하를 2~400 배 감소시킨다. (화학 물질의 첨가가 없는 음용수[potable water]로 세정하는 것에 비하여s).
IV. 세척(WASHING)
세척 공정은 Acai 쥬스의 가공의 기초적 단계로 여겨진다. 이는 조직을 현저히 변화시키지 않으면서도, Acai를 가공하기 전에 미생물 부하를 감소시키기 때문이다. Acai 과실의 경우, 가공 단계 전의 세척은 쥬스의 품질 및 완전성을 보존하는데 도움이 되므로, 따라서 Acai 쥬스의 감각 수용성, 조직 및 영양적 품질을 보존하는데 도움이 된다. (Tournas, 1994).
세척은 과실을 가공 전에 뜨거운 또는 끓는 물 또는 증기를 적용하는 것으로 구성된다. (Cruess, 1995). 과실 표면에 존재하는 오염물질의 감소를 위한 처치의 선택은 과실의 물리적 구조에 따른다. 외피 펄프의 소량의 층만을 갖는 과실은 그리 높지 않은 온도 또는 길지 않은 시간동안의 펄프와 뜨거운 물 또는 증기 상이의 짧은 접촉이 처치의 유리한 효율을 유도한다.
수확기의 Acai와 수확기 전(middle harves)의 Acai에 대하여 연구가 몇가지 다른 온도(75°C ~ 100°C) 및 다른 세척 시간(5 sec ~ 10 min)에서 수행되었다. (Rogez et al., 1996). 처치들은 미생물 부하 (박테리아, 곰팡이 및 효모)의 감소에 상당한 영형을 주었다. 그러나, 세척 조건은 퍼옥시다아제의 불활성화에 영향을 주지 못하였는데, 이는 이들 효소과 열 저항성이기 때문이다. 높은 온도에서 오랫동안 세척해야만이 퍼옥시다아제의 활성을 부분적으로 감소시킬 수 있었다. (20% 까지). 그러나 심한 처치 (즉, 80°C이상의 온도에서 10초 이상)는 쥬스 표면에 나타나는 (노란빛의 오일인) 지방성 물질의 분리를 초래하였다. 이 조직의 변화는 그 외관 때문에 소비자에 의한 제품의 수용을 감소시킨다.
보다 미생물 부하를 더욱 감소시키지 못하면서도 자극적인 세척에 의하여 감각 수용성 특징의 손실이 보다 많이 일어난다. 80°C의 온도 및 10초의 시간이 Acai 과실의 보다 우수한 세척 조건으로 선택되었다.
실시예 31 Acai 음료의 제조 방법 및 제조 표준
I.혼합 장치(MIXING INSTRUCTIONS)
Acai 14: 1 탈수액(dehydrate)은 중량으로 1부의 탈수액에 대하여 13부 물/액체가 요구된다. Acai를 이용한 가능한 음료는 거의 무제한이다. 세가지 실시예는 다음과 같다. :
혼합물 1: 25그램의 Acai 분말이 325 ml의 냉수에 첨가되었다. 이 혼합물은 분말이 적절히 수화되도록 30초 이상 혼합되었다. 만일 혼합이 1분동안 지속되면 조직감(texture)이 더 개선될 것이다.
혼합물 2 : 25그램의 Acai 분말이 200 ml의 물과 125 그램의 얼음에 첨가되었고, 30초간 혼합되었다. 이 혼합물은 1분동안 유지된다.
혼합물 3 : 얼음 대신 125 ml의 우유 또는 크림이 맛있는 스무디(smoothie)를 만든다.
Acai는 당과 비타민C가 적으므로 산화/발효의 방지에 미약하다. 당과 비타민 C의 첨가가 권장된다. 순수한 Acai의 맛은 부드러운 편이며 색은 매우 진한 적갈색이다. 1-2 테이블스푼의 설탕 또는 다른 감미제의 첨가가 향을 매우 좋게 만든다. 색은 비타민C(산)를 첨가함으로써 보다 붉게 만들수 있다. 붉은 식용 색소의 첨가는 또한 보다 식욕을 돋구며 선호되는 외관을 만들 것이다. 더욱이, 혼합물에 바나나의 첨가는 물론 과실의 그라놀라(granola) 및 장식은 Acai 음료의 준비에 창조적인 대안을 제공할 수 있다.
II. 장치 :
블렌더 ; 그램 저울; 밀리리터 측정 장치
III. ACAI 펄프를 위한 확인 및 품질 표준
1. 목표
현재의 규제 목표는 음료로 사용되기 위하여 Acai 완전 펄프(integral 펄프) 및 acai에 적합한 최소의 확인 및 품질 표준의 수립을 위한 것이다. 이 규제는 다른 용도를 위한 Acai 펄프에는 적용되지 않는다.
2. 정의
Acai 완전 펄프 및 acai는 acai 나무 (Euterpe oleracea, Mart.)의 과실이 적절한 기술적 방법에 의하여 연화된 후 먹을 수 있는 부분으로 부터 추출된 제품이다.
3. 분류
이 제품은 펄프에 첨가되는 물/액체의 용량에 따라 다음과 같이 분류된다. :
3.1 Acai 완전 펄프는 기계적 방법에 의하여 물의 첨가 없이, 그리고 여과 없이 Acai로부터 추출된 펄프이다. 이것은 물리적 보존 공정에 도입될 수 있다.
3.2 두꺼운 또는 특별(special) Acai (타입 A)는 물의 첨가로 추출된, 14% 이상의 총 고체를 제공하며 매우 조밀한 외관의 펄프이다.
3.3 중간(Medium) 또는 보통(regular) Acai (타입 B)는 물의 첨가로 추출된 11~14%의 총 고체를 제공하며 조밀한 외관의 펄프이다.
3.4 얇은(Thin) 또는 인기(popular) Acai (타입 C)은 물의 첨가로 추출된, 8~11%의 총 고체를 제공하며 조밀하지 않은 외관의 펄프이다.
4. 기초 성분
Acai 완전 펄프 및 Acai는 여기에 개시된 상세한 설명에 따르면 제품을 소비에 부적합하게 만들 수 있는 먼지, 기생충 또는 미생물이 없는, 신선한, 성숙되고 건강한 과실로 부터 얻는다.
5. 선택적 성분
5.1 물
펄프 추출에 사용되는 물은 음용수(potable)이어야 한다.
5.2 산의 첨가(Acidulante)
실온에서 유지되는 파르퇴르 멸균된 Acai의 경우,우수 제조 기준 (GMP)의 규제에 따라 구연산이 첨가될 것이다.
6. 조성
6.1 Acai 완전 펄프 및 Acai는 다른 종의 과실 또는 법적인 관행, 변화가 없는 과실 특성에 따른 조성을 가져야 한다.
6.2 Acai 완전 펄프는 다음의 물리적, 화학적, 그리고 감각 수용성 특성에 맞아야 한다. :
6.2.1 물리적 및 화학적
Figure 112005052705019-PCT00030
6.2.2. 감각 수용성
물리적 측면: 반죽같은, 과실에 의한 피부로 부터의 진한 반점 돌출 제공.
색 : 보라 Acai 펄프의 경우 보라색 계통 그리고 녹색 Acai 펄프의 경우 밝은 녹색.
냄새 : 특이적 (이하 참조).
6.3 Acai (특별, 보통, 인기)는 다음의 물리적, 화학적, 그리고 감각 수용성 특성에 맞아야 한다. :
6.3.1- 물리적 및 화학적
Figure 112005052705019-PCT00031
6.3.2 감각 수용성
물리적 측면 : 이 유액은 80°C까지 가열되어도 안정하게 유지되어야 한다.
색: 보라 Acai 펄프의 경우 보라색 계통 그리고 녹색 Acai 펄프의 경우 밝은 녹색.
냄새: 특이적 (이하 참조).
6.4 완전(integral) acai 펄프 및 acai는 제품의 감각 수용성 특성 및 품질을 변화시키지 않는 한도의 과실의 먹지 못하는 부분을 함유할 수 있다. 완전 Acai 펄프 및 acai는 일반적 과실 펄프에 대한 확인 및 품질 표준에 확정된 다른 모든 물리적, 화학적, 현미경적, 미생물적, 및 감각 수용성 특성에 맞아야 한다.
6.5 acai 완전 펄프 및 Acai에서의 곰팡이와 효모의 최대 한도는 5 x 103이다.
7. 첨가물
최대 1kg 포장으로 직접 소비를 위하여 유도되는 완전 Acai 펄프 및 Acai는 물리적 공정으로 유지되어야 하며, Acai 과실로 부터 얻어지는 색을 제외하고, 금지된 화학 보존료 또는 착색 물질의 사용이 금지된다.
실시예 32 동결-건조된 Acai의 제조
동결-건조된 Acai 분말의 제조 방법은 도 24에 도시된다. 도시된 바와 같이, Acai 과실은 수확되고 씨가 제거된다. 그 후 펄프가 분리되고 동결된다. 많은 Acai 과실로부터의 펄프는 동결-건조되어 동결-건조된 분말을 생성한다. 동결-건조된 Acai 분말은 몇 시간 내에 분해되어 불쾌감을 부여하는 Acai 과실 펄프의 가공되지 않은 제조에 비하여 안정하다. 가공 동안에 그리고 동결 전에 Acai 과실 펄프에 구연산을 첨가하는 것은 과실 펄프를 보다 더 안정화 시키는데 유용하다. 구연산은 다른 과실 펄프 제제, 예컨대 본원 발명의 방법으로 가공된 Jucara의 안정화에도 사용될 수 있다.
Acai 생산은 특히 과실로부터 분리되는 펄프의 용량에 비하여 과실 과피의 발효 성분의 비율적으로 높은 부하 및 효소에 의한 잘못이 허용되지 않는 배열이다. 이러한 이유로, Acai 생산은 전통적으로 지역의 즉각적인 소비에 제한되었다.
Acai 동결된 과실 펄프는 -5°C 또는 그 이하의 온도에서 유지되어야 한다. 보다 높은 온도에서는, 효소 및 발효 성분이 활성화되어 과실 펄프의 특성을 변화시킨다. 하나의 효과는 전술한 석질(grit)인 불용성 화합물을 생성하는 것이다. 이것은 마지막 배치(batch)에서 명확히 나타난다. 이 불용성 물질은 Acai 탈수물 (두 가공기로부터)의 첫번째 배치에서 나타났으며 재수화를 위한 제조 중에 펄프의 해동에 의한 것으로 밝혀졌다. 이 문제는 동결-건조를 통한 탈수의 전에 동결된 Acai 과실 펄프가 미리-해동되지 않도록 함으로써 해결되었다. 즉, 일단 Acai 과실 펄프가 동결되면, 동결-건조에 의한 탈수 전에는 약 -50℃ 이상의 온도로 해동되지 않도록 한다. 탈수 전에 선-해동 없이 제조된 Acai 과실 펄프는 과립을 생성하며, 이 동결-건조된 Acai 분말은 매우 성공적으로 재-수화되며 높은 품질의 색과, 조직 및 향을 보유한다. 그러므로, 본원 발명은 펄프가 일단 분리되고 동결되면 탈수 전에는 선-해동되지 않는 방법에 의하여 과실 펄프가 제조되는 과실-기초 식이 보충제를 제공하는 방법을 제공한다. 이 방법은 예컨대, 제한적인 것은 아니나, 아카이 과실 및 주카라 과실과 같은 많은 과일로 부터 동결-건조된 과실 분말의 제조에 유용하며, 이 분말은 재-수화될 수 있으며, 높은 품질의 색, 조직감 및 맛을 보유할 수 있다. 과립의, 동결-건조된 과실 분말은 사용될 때까지 플라스틱-라이닝된 포일 백에 광-차단하여 저장된다.
실시예 33 선택된 미생물에 대한 안정성을 위한 동결-건조된 Acai 제품의 도전 테스트
I. 목적
이 연구의 목적은 이스트, 곰팡이, 락트산 박테리아, 살모넬라 및 Staphylococcus aureus의 각 균주로 실험하는 경우 제품의 미생물에 대한 안정성을 평가하기 위한 예비적 도전 테스트를 수행하는 것이다. (Silliker Laboratories Research Center, South Holland, IL).
II. 응용
이 연구는 잠재적 손상 미생물 및 두 병원체에 대한 제품의 스크리닝을 제공한다. 한 제품에 대한 초기 데이터를 수집하거나 및 /또는 개발 중의 다수의 제품을 비교하는 것이 적당하다.
III. 제한
각 도전 미생물의 하나의 균주에 대하여는 제품이 성장에 저항성이나 다른 균주에는 감수성일 가능성이 있다. 대조군 제품에서 자라는 도전 미생물에서는, 연구의 종말까지 측정되지 않았다. 이 연구는 시간 간격, 저장 온도 및 보고서의 범위에 제한된다. 이 연구는 4주 이상의 결과에 대하여는 예측하지 않는다.
IV. 실험물질 및 방법
A. 테스트 제품
"Acai 과실-동결 건조"라고 표지된 3.5 킬로그램의 재밀봉 가능한 포일 백의 제품이 고객으로 부터 접수되었다. 제품은 대기 온도에서 연구가 개시될 때까지 저장되었다.
B. 도전 미생물
제품은 표 29에 요약된 바와 같이 Silliker Research Culture Collection (SRCC) 에서 생성된 Aspergillus niger (곰팡이), Zygosaccharomyces bailii (이스트); Lactobacillus fructivorans (락트산 박테리아), Salmonella typhimurium, 및 Staphylococcus aureus의 동결 건조 균주로 시험 도전되었다. 살아있는 세포 또는 포자가 플레이트 카운팅법(plate count methods)으로 검증되었다.
미생물 SRCC Number
Aspergillus niger 1131
Zygosaccharomyces bailii 764
Lactoabacilus fructivorans 464
Salmonella typhimurium 449
Staphylococcus aureus 713
C. 테스트 샘플의 제조 및 저장
제품은 100 그람 비율로 6개의 용기에 무균적으로 분할 되었다. 1 분획는 음성 대조군으로 하였다. 다른 분획들은 대략 그램당 10,000 콜로니 형성 단위로 하나의 배양으로 접종되었다. 접종 후, 샘플은 골고루 섞인 후 75°F에서 저장되었다.
D. 샘플 분석
접종되지 않은 대조군 분획은 0일 및 28일에 도전균을 분석하였다. 접종된 분획은 0,7, 14,21, 및 28에 분석되었다. 각 시간 간격마다 단일 11-그램 샘플을 각 분획에서 취하여 플레이트 카운팅법으로 도전 미생물을 분석하였다.
V. 결과 및 논의
식품의 미생물 안정성은 손상성 및 병원성 미생물로 도전 시험에 의하여 측정될 것이다. 도전 미생물의 농도가 저장중에 증가하지 않으면, 제품의 제제는 미생물의 성장에 저항성이며 미생물학적으로 안정한 것으로 생각된다.
표 30 및 31에 결과가 도시된다. 데이타에서 나타나는 바와 같이, 저장 도중에 이스트, 곰팡이, 박테리아, 살모넬라 및 Staphylococcus aureus의 갯수는 대조군 또는 접종된 분획에서 증가하지 않았다. 따라서, Acai 과실-동결 건조 제품은 이스트, 곰팡이, 박테리아, 살모넬라 및 Staphylococcus aureus로 도전 시험하고 75°F에서 저장되는 경우 적어도 28일 이상 미생물학적으로 안정하다. 이하에서 나타나는 바와 같이, 이 제품은 도전 시험에 안정하다.
Figure 112005052705019-PCT00032
Figure 112005052705019-PCT00033
VI. 동결-건조된 ACAI의 저장수명에 대한 연구
동결-건조된 Acai 제품에 대한 저장수명의 연구가 표 32에 요약된 바와 같이 Silliker Laboratories에서 수행되었다.
Figure 112005052705019-PCT00034
식품의 맛, 향 및 외관 (감각 수용적 품질)은 소비자가 식품의 수용성을 판단하는데 사용하는 절대적인 기준이다. 이 품질은 식품-박테리아, 이스트 및 곰팡이의 세균총이 성장하고, 사용 가능한 영양분을 대사함에따라 변화되기 시작한다. 감각 수용적 변화는 일반적으로 미생물군이 높아질때까지는 검출되지 않는다. 손상을 일으키는 미생물의 수는 식품의 종류 및 자라고 있는 미생물의 타입에 따라 다르다. 그러나 일반적으로, 저장 수명의 종말은 저장을 제한한다. 그러므로, Acai 과실-동결 건조 제품의 저장 수명은 75°F에서 12개월 이상이다.
실시예 34 쥐에서 14일의 처치 후 관찰에 의한 'Acai 과실 펄프 동결 건조'의 급성 경구 독성 연구 (한계 테스트)
쥐에서의 처치 14일 후 관찰에 의한 'Acai 과실 펄프 동결 건조'의 급성 경구 독성 연구가 수행되었다. (한계 테스트) ((Study code: PCDL-0221; Pharmaceutical Control and Development Laboratory Co. Ltd. , 9. Mexik6i Street Budapest, H-1149).
I. 일반적 정보 :
A. 투여량
2,000 mg/kg 체중의 단일 경구 한계 투여량의 'Acai 과실 펄프 동결 건조' (로트 넘버: 22.10)가 쥐에 경구로 위관 영양(gavage)에 의하여 적용되었다. 동물은 치사 및 독성 증상을 14일 동안 관찰하였다. 총체적 병리학적 시험(Gross pathological examination)이 15째 날에 수행되엇다. 전체 시험동안에 동물의 체중은 그 종 및 연령에 대응되었다. 2,000 mg/kg 체중의'Acai 과실 펄프 동결 건조'의 경구 투여 후 치사는 일어나지 않았다. 독성 임상 증상은 관찰되지 않았다. 계획된 부검이 15일에 수행되었으며 독성인 총체적 병리학적 변화는 나타나지 않았다. 암컷 및 수컷 쥐에서 2,000 mg/kg 체중의 경구 투여한 'Acai 과실 펄프 동결 건조' 경우 부작용은 일어나지 않은 것으로 결론지었다.
B. 목적
쥐에서 '아카이 과실 펄프 동결 건조'의 단일 경구 투여의 잠재적 독성 효과에 대한 데이터를 얻기 위함. 테스트 제품은 식이 보충제로 사용됨.
C. 연구의 유형
미국의 식품 의약품 안정청의 비 임상 실험 연구 우수 실험실 실무 규정 및 동물 보호를 위한 헝가리 규정[Good Laboratory Practice Regulations for Nonclinical Laboratory Studies of the United States Food and Drug Administration and the Hungarian Act 1998 : XXVIII. regulating animal protection.]에 따른 선임상 독성 연구. 한계 테스트.
D. 연구 프로토콜로부터의 편차
i. 제조자의 근절을 위하여 사용되는 내용 T61의 특성(Characteristics of substance T61 used for extermination Manufacturer.)
원래 프로토콜 : Hoechst VeterinarGmbH
최종 보고: Intervet International
이유: 제조자 명칭 변경
ii. 사망지수(Mortality)
원래 프로토콜: 처치 후 4시간 동안 및 그 후 1일 2회 관찰.
최종 보고: 처치 후 4시간 동안 관찰하였으며 및 그 후 15일째 아침까지 작업일 초기 및 작업일 말에 1일 2회 관찰하였으며 주말에는 1회 관찰하였다.
원인: 절차는 원래의 것보다 정확하게 기술되었다.
iii. 일반적 상태, 외관, 거동 및 임상 증상
원 프로토콜 : 처치-후 기간동안에, 15일째 아침까지 동물은 1일 2회 체크되었다.
최종 보고: 처치-후 기간동안에, 15일째 아침까지 동물은 1일 2회 체크되었으며, 주말에는 1회 체크되었다.
원인: 절차는 원래의 것보다 정확하게 기술되었다.
II. 테스트 및 참조 제품
A. 테스트 제품의 특성
테스트 제품의 특성을 이하의 표 33에 설명된다.
제품명 아카이 과실 펄프-동결 건조
식물명 Euterpe oleracea, Family : Palmae
사용된 부위 신선한 동결 과실 펄프
제조자 Greater Continents do Brasil Ltda. Rua Alabastro, 55-112, Aclimacao 01531-010 Sao Paulo, SP Brasil
로트 번호 22. 10
PCDL 식별 번호: 2002/22885
재수화 1: 13 물
잔여 수분 최대 3%, 결과 1%
물리적 특성 특이한 맛과 향을 갖는 진보라 과립 동결 건조 분말, 흡습성
저장 조건 USP (2-8°C, 습도 조절 안함)에 따라 냉장, 개봉 후 즉시 재-밀봉
B. 미생물
USP에 따른 미생물 한도 시험이 PCDL의 미생물 부서에 의하여 수행되었음.
C. 테스트 제품의 현탁을 위하여 사용되는 제품의 특성
i. 메틸셀룰로오스
메틸셀룰로오스(Bach No. 127H1066 ; Expiration 02/2003)를 Sigma로 부터 상업적으로 구입하였으며 사용전에 실온에서 보관하였음.
ii. 증류수
증류수(Batch No. A0010102; Expiration 03/2003)를 PCDL로 부터 상업적으로 구입하였으며 사용전 실온에서 보관하였음.
iii. 검시 전 마취에 사용된 제품의 특성
ml당 0.2g 엠부트라마이드, 0.005 g 테라싱 염산염(terracing hydrochloride), 및 0.05g 메조니움 요오다이드를 함유하는 T61 (Batch No. 09W008 ; Expiration 05/2006)를 Intervet International로 부터 상업적으로 구입하였으며 사용전 실온에서 독성 약물을 위한 안전함에 저장하였다.
iv. 테스트 제품의 제제
테스트 제품의 필요한 용량이 계량되었으며 투여하기 30분 전보다 빠르지 않게 1% 메틸셀룰로오스 함유 용액에 현탁시켰다. 다음의 현탁액이 준비되었다: 명목 투여량 2,000 mg/kg: 5.0 g 아카이 과실 펄프 및 50 ml의 1% 메틸-셀룰로오스 용액. 이후 처리하는 동안 현탁액을 OP-951 타입의 라델키스(Radelkis) 자력 교반기로 교반시켰다.
v. 제조된 테스트 제품의 농도 제어
농도 및 균질성 검사를 위하여 제조된 시험 물질의 샘플을 취하였다. 중량 측정에 의하여 농도 및 균질성 검사를 수행하였다. 현탁액의 가장 윗부분, 중간 부분, 및 가장 낮은 부분의 세 개 한벌로 측정된 모두 세가지의 샘플 농도(균질성 검사)는 수용가능한 ±10% 한도, 즉, 가장 윗부분: +4.4±4.6%. 중간 부분: +4.0±4.8%, 가장 낮은 부분: +5.4±2.8% 이내였다.
Ⅲ. 테스트 시스템
A. 동물
본 연구에서는 Sprague Dawley계 쥐, Crl:CD BR (도착시 6-7 주 령)가 사용되었다. 수컷은 143.9 g 내지 159.4 g 범위의 체중을 가졌다. 암컷은 140.5 g 내지 161.4 g 범위의 체중을 가졌다. 주문된 동물의 풀: 30마리(15마리의 수컷, 15마리의 암컷). 연구에 관계된 동물의 수: 20마리(10마리의 수컷, 10마리의 암컷). 쥐는 Charles River Hungary Ltd 사로부터 상업적으로 구입하였다. 동물들은 도착시 SPF 상태 였으며, 연구하는 동안 전통적인 환경에서 유지되었다. 쥐는 국제적 장점에 의하여 독물학상의 연구를 위해 통상적으로 사용된다. Sprague Dawley 품종은 충분한 조직학적 데이타를 가진 잘-알려진 실험 모델이다.
동물들은 귀 넘버링 기술(ear numbering technique)에 의하여 식별되고, 동일한 성별 다섯 마리씩 우리(cage)에서 사육되었다. 우리를 쥐의 I.D. 번호, 연구 코드, 군 식별, 투여 경로, 성별, 및 실험 기간의 시작일 및 최종일을 지시하는 꼬리표를 가지고 라벨을 붙였다.
동물 사육 조건은 아래 표 34에 요약되어 있다. 환경 조선은 아래 표 35에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00035
Figure 112005052705019-PCT00036
온도와 상대습도를 계속하여 기록하였다. 처리 전 하룻밤의 금식 기간, 처리 동안 그리고 처리 후 처음 2시간의 관찰 기간 동안을 제외하고, 표준화된 쥐 및 생쥐 먹이 VRF-1에 자유롭게 근접한 먹이가 동물들에게 제공되었다. 먹이의 조성은 D-4937 Lage/Lippe Lange Str. 42에 위치한 제조업자 Altromin GmbH사에 의하여 제어되었다. 먹이는 제조일자(30. 09. 2002), 안정성: 4 개월에 의하여 식별되었다. 쥐는 음료 병을 통해 수돗물을 자유롭게 마실 수 있었다. 마시는 물은 PCDL의 미생물 부서에 의하여 매달 검사되었다. 처리하기 전에 동물들을 5일동안 관찰하였다. 오직 어떠한 임상적 증후도 없는 건강한 동물만이 연구에 사용되었다.
동물의 그룹화는 컴퓨터에 의하여 생성된 임의의 표를 가지고 이루어졌다. 각각의 군의 체중 분포가 유사하도록 동물들을 이들의 체중에 기초한 군으로 임의적으로 할당하였다.
IV. 실험 고안
투여량 수준 및 군 분할은 아래 표 36에 요약되어 있다.
군 번호 처리 투여량 동물의 수 식별번호
mg/kg 수컷 암컷 수컷 암컷
1 아카이 과일 펄프 2,000 10 - 851-860 -
2 아카이 과일 펄프 2,000 - 10 - 861-870
합리적인 투여량 선택은 다음과 같다. 아카이 과일 펄프의 예상되는 사람 일일 복용량은 하루에 약 1000 mg이며, 이는 어른(70 kg)의 체중 kg 당 14 mg 또는 4살 나이의 어린이(20 kg)의 체중 kg 당 50 mg에 해당한다. 본 연구에서 처리된 2000 mg/kg 제한 투여량은 만약 어른에 의하여 섭취된다면 일일 복용량의 140배, 만약 5g이 어린이의 체중에 대하여 계산된다면 일일 복용량의 40배에 해당한다.
V. 투여
위관 영양법에 의하여 경구적으로 투여되었다. 투여 경로는 국제 가이드라인에 따라 선택되었다. 경구적 경로는 시험 제품에 대해 사람이 노출되는 예상된 경로이다. 시험 제품의 투여는 단일 투여로 제공된다. 시험 제품은 체중 kg 당 20 ml의 부피로 투여되었다. 실험 기간은 5일의 순응, 처리일, 처리일을 포함하여 처리 후 14일의 관찰 기간, 및 15일째 날:검시로 이루어졌다.
Vl. 관찰, 검사
A. 치사도
처리에 따른 4시간 동안, 그리고 이후 주중에는 그날의 시작 및 마지막에 하루 두번, 주말에는 하루 한번씩 15일째 아침까지 관찰하였다. 사망 시간은 가능한한 정확하게 기록되어야 하였다.
B. 일반적 상태, 외형, 행동, 및 임상적 증후
노출 바로 전, 이후, 6시간 동안의 처리 후 계속하여 쥐를 주의깊게 임상적으로 관찰하였다. 후속 기간 동안에, 주말에 동물들을 한번 검사한 것을 제외하고는 15일 아침까지 하루에 두번씩 검사하였다. 관찰되는 징후들은 피부, 털, 눈 및 가시적인 점막의 변화; 분비 및 배설 및 자율신경계 활동[예컨대, 유루(lacrimation), 기모(piloerection), 설사(diarrhea), 동공 크기, 비정상적인 순환계 패턴)을 포함하였다. 또한, 걷는 모양, 자세의 잠재적 변화 및 취급에 대한 반응, 기면(somnolence), 떨림(trembling), 간헐적 경련성 또는 긴장성 움직임, 스테레오타입 또는 행동 장애를 기록하였다.
C. 체중
실험실에 도착하였을 때, 무작위 추출하는 날에, 처리일에, 검시하기 전 실험 2일째, 8일째, 및 15일째 날에 동물의 체중을 재었다.
Vll. 검시 및 조직학적 검사
A. 검시(Necropsy)
처리 후 관찰 기간이 끝날때 생존한 모든 쥐를 T 61 마취하에서 몰살하고, 검시하였다. 외부 및 내부 상태를 주의깊게 관찰하고 기록하였다. 장기 기관의 현미경 검사는 하지 않았다.
Ⅷ. 평가, 통계적 분석
수컷 및 암컷 군을 분리하여 평가하였다.
A. 매개변수 값(Parametric value)
체중의 평균 값과 표준 편차를 계산하였다.
B. 비매개변수 값(치사도 및 임상적 증후)
치사 발생율, 임상적 증후, 및 육안의 조사 결과를 표로 만들었다.
IX. 절차
제약학적 통제 및 개발실 Co. Ltd.의 독물학 부서의 현 표준 실험 절차에 따라 실험을 수행하였다.
X. 동물 보호
동물 복지의 관심에서 동물의 불필요한 사용을 피하였다. 명백히 죽어가는 동물을 온건하게 몰살하는 것은 연구 지도자의 책임이었다. 현재의 방법(한도 시험)은 다른 공지된 그리고 인식된 급성 독성 시험에 비하여 감소된 수의 실험 동물을 사용한다.
Xl. 데이타 기록 및 집적
모든 원 자료는 다음과 같은 적절한 형태에서 표준 실험 절차에 의하여 지시된 바에 따라 유지된다:
시험 화합물 중량 측정
동물실 일지(Animal room logbook)
체중 일지
치사도 및 임상 관찰 일지
검시 기록(Postmortem records)
연구 절차에서 얻은 데이타를 연구 파일에 수집하였다. 연구 프로토콜, 연구하는 동안 및 연구의 결과로 생성된 모든 데이타, 연구와 관계된 모든 문서 및 모든 정보, 시험 제품의 대조 샘플 및 최종 보고는 PCDL의 기록 보관소에서 15년 이상동안 보관되고, 이후 후원자에게 제공될 것이다.
Xll. 결과
A. 치사도
처리 후 14일의 관찰 기간 이후에 관찰된 치사도가 아래 표 37에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00037
표 38은 쥐에 처리 후 14일의 관찰 기간에 '동결 건조된-아카이 과일 펄프'의 급성 경구 독성 연구(한도 시험)에서 수컷 시험 대상에 대한 개별적인 치사도 데이타를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00038
수컷
표 39는 쥐에 처리 후 14일의 관찰 기간에 동결 건조된 아카이(아카이) 과일 펄프의 급성 경구 독성 연구(한도 시험)에서 암컷 시험 대상에 대한 개별적인 치사도 데이타를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00039
암컷
쥐에게 동결 건조된 아카이 과일 펄프를 2,000 mg/kg의 투여량으로 한번 경구 투여 하였을 때 사망은 일어나지 않았다. 수컷 및 암컷 모두는 관찰 기간 14일이 끝날때까지 생존하였다.
B. 임상적 증후
처리 후 14일의 관찰 기간 이후에 관찰된 임상적 증후가 아래 표 40에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00040
표 41은 쥐에 처리 후 14일의 관찰 기간에 '동결 건조된-아카이 과일 펄프'의 급성 경구 독성 연구(한도 시험)에서 수컷 시험 대상에 대한 개별적인 임상적 증후를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00041
수컷
표 42는 쥐에 처리 후 14일의 관찰 기간에 '동결 건조된-아카이 과일 펄프'의 급성 경구 독성 연구(한도 시험)에서 암컷 시험 대상에 대한 개별적인 임상적 증후를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00042
암컷
처리된 어떠한 동물군에서도 처리일 및 처리 후 14일의 기간 동안 독성 증후가 관찰되지 않았다.
C. 체중
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 체중은 아래 표 43에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00043
수컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 체중은 아래 표 44에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00044
암컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 체중 변화는 아래 표 45에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00045
수컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 체중 변화는 아래 표 46에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00046
암컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 개별적인 체중은 아래 표 47에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00047
수컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 개별적인 체중은 아래 표 48에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00048
암컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 개별적인 체중 변화는 아래 표 49에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00049
수컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 개별적인 체중 변화는 아래 표 50에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00050
암컷
* 1군 : 아카이 과일 펄프(2,000 mg/kg,po.), **(1) 차이는 1일 및 2일, 2일 및 8일, 8일 및 15일 각각에 재어진 체중으로부터 계산하였다. (2) 동물의 체중 및 체중 증가는 연구전체를 통하여 동물의 종 및 연령과 일치하였다.
D. 육안 병리(육안 병리)
시험 동물에 대한 육안 병리 조사 결과는 표 51에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00051
* 외부: 평균 발달의 동물. 피부, 털, 가시적인 점막이 손상되지 않음; ** 내부: 장기 기관들은 병리학적 변화 없음; *** 2,000 mg/kg, po.
수컷 시험 대상에 대한 육안 병리 조사 결과는 표 52에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00052
수컷
* 아카이 과일 펄프 2,000 mg/kg, po.; ** "발견되지 않음"은 다음을 의미한다: 외부: 평균 발달의 동물. 피부, 털, 가시적인 점막이 손상되지 않음; 내부: 장기 기관들은 병리학적 변화 없음.
모든 동물들은 예정된 검시일인 15일째까지 생존하였으며, 모두 독성의 병리학적 변화가 없는 것으로 밝혀졌다.
E. 평가
'동결 건조된 아카이 과일 펄프'를 2,000 mg/kg 으로 한번 경구 투여한 이후에 어떠한 사망도 발생하지 않았다. 어떠한 독성의 임상적 증후도 발생하지 않았다. 15일 째에 예정된 검시는 어떠한 독성의 육안 병리학적 변화도 나타내지 않았다. 수컷 및 암컷 생쥐에 '동결 건조된-아카이 과일 펄프' 2,000 mg/kg을 한번 경구 투여 하였을 때 어떠한 역효과도 인지되지 않았다는 결론을 내렸다.
실시예 35 쥐에 처리 후 관찰 기간 14일 째에 '동결-건조된' 주카라 과일 펄프의 급성 경구 독성 연구(한도 시험)
쥐에 처리 후 14일의 관찰 기간에 동결-건조된 주카라 과일 펄프의 급성 경구 독성을 평가하기 위한 연구를 수행하였다(한도 시험)((연구 코드: PCDL-0222; Pharmaceutical Control and Development Laboratory Co. Ltd., 9. Mexikoi Street Budapest, H-1149).
Ⅰ. 일반 정보:
A. 투여량
'동결 건조된-주카라 과일 펄프'[로트 번호(Lot number): 2208]를 체중(kg)당 2,000 mg의 단일 경구 제한 투여량으로 쥐에게 위관 영양법에 의하여 경구적으로 투여하였다. 14일 동안 치사도 및 독성 증후에 관하여 동물들을 관찰하였다. 육안 병리학 조사는 15일 째에 수행하였다. 동물의 체중은 연구 전체를 통하여 동물의 종 및 연령과 일치하였다. 동결 건조된-주카라 과일 펄프를 2,000 mg/kg으로 경구 투여한 후에 어떠한 사망도 일어나지 않았다. 어떠한 독성의 임상적 증후도 관찰되지 않았다. 15일 째에 수행되었던 예정된 검시는 어떠한 독성의 육안 병리학적 변화도 없음을 나타내었다. 수컷 및 암컷 쥐에 '동결 건조된-주카라 과일 펄프'를 2,000 mg/kg의 단일 경구 투여량으로 투여하였을 때 어떠한 역효과고 없었다는 결론을 내렸다.
B. 목적
쥐에서 '아카이 과실 펄프 동결 건조'의 단일 경구 투여의 잠재적 독성 효과에 대한 데이터를 얻기 위함. 테스트 제품은 식이 보충제로 사용됨.
C. 연구 유형
미국의 식품 의약품 안정청의 비 임상 실험 연구 우수 실험실 실무 규정 및 동물 보호를 위한 헝가리 규정[Good Laboratory Practice Regulations for Nonclinical Laboratory Studies of the United States Food and Drug Administration and the Hungarian Act 1998 : XXVIII. regulating animal protection.]에 따른 선임상 독성 연구. 한계 테스트.
D. 연구 프로토콜로부터의 편차
i. 제조자의 근절을 위하여 사용되는 내용 T61의 특성(Characteristics of substance T61 used for extermination Manufacturer.):
최초 프로토콜: 호에치스트 베테리나르 게엠베하(Hoechst Veterinar GmbH)
최종 보고: 인터벳 인터네셔널(Intervet International) 사
이유: 제조자의 이름이 변경되었음.
ii. 사망지수(Mortality)
최초 프로토콜: 처치 후 4시간 동안 및 그 후 1일 2회 관찰.
최종 보고: 처치 후 4시간 동안 관찰하였으며, 이후 15일 아침까지 주중에는 하루의 시작 및 마지막에 두번, 주말에는 한번 관찰하였다.
이유: 최초 보다 더 정확하게 절차를 기술하였다.
iii. 일반적 상태, 외형, 행동, 및 임상적 증후
최초 프로토콜: 처리 후 기간 동안, 15일째 아침까지 동물들을 하루에 두번 검사하였다.
최종 보고: 처리 후 기간 동안, 주말에 동물을 한번 검사할 때를 제외하고는 15일째 아침까지 동물들을 하루에 두번씩 검사하였다.
이유: 최초보다 더 정확하게 절차를 기술하였다.
Ⅱ. 시험 및 참고 제품
A. 시험 제품의 특성
시험 제품의 특성이 아래 표 53에 기술되어 있다.
제품명 동결 건조된-주카라 과일 펄프
학명 유테르페 이둘리스(Euterpe edulis), 과:팔매(Palmae)
사용되는 식물 부분 신선한 냉동 과일 펄프
제조자 Greater Continents do Brasil Ltda. Rua Alabastro, 55-112, Aclimacao 01531-010 Sao Paulo, SP Brasil
로트 넘버 2208
PCDL에서의 식별 번호 2002/22886
잔류 수분: 최대. <2%
물리적 특성 특징적 냄새 및 향을 가진 어두은 보라색의 입자 동결건조분말,습기를 흡수하기 쉬움
보관 조건 USP에 따라 냉장보관(2-8℃, 제어되지 않은 습기), 개봉시 재빨리 다시 밀봉할 것.
B. 미생물학적 분석
PCDL의 미생물 부서에 의하여 c. USP에 따른 미생물학적 한도 시험을 수행하였다.
C. 시험 제품을 현탁하기 위하여 사용되는 제품의 특성
i. 메틸셀룰로오스
메틸셀룰로오스(Bach No. 127H1066; 유효기간 02/2003)를 시그마(Sigma)로부터 상업적으로 구입하고, 사용하기 전에 실온에 보관하였다.
ii. 증류수
증류수(Batch No.A0010102; 유효기간 03/2003)를 PCDL로부터 상업적으로 구입하고, 사용하기 전에 실온에 보관하였다.
iii. 검시 전 마취(overanesthesia)를 위하여 사용되는 제품의 특성
밀리리터 당 0.2 g의 엠부트라마이드(embutramide), 0.005 g의 테트라카인 하이드로클로라이드, 및 0.05 g의 메베조늄 요오다이드(mebezonium iodide)를 함유하는 T 61(Batch No.09W008; 유효기간 05/2006)을 인터벳 인터네셔널 사로부터 상업적으로 구입하고, 사용하기 전에 독성 약제를 위한 안전 상자안에 실온에서 보관하였다.
iv. 시험 제품의 제조(Formulation of the test article)
시험 제품의 필요량을 무게 달아, 투여하기 30분 전보다 빠르지 않게 1% 메틸셀룰로오스 함유 용액에 현탁시켰다.
다음의 현탁액이 준비되었다: 명목 투여량 2,000 mg/kg: 5.0 g 주카라 과일 펄프 및 50 ml의 1% 메틸-셀룰로오스 용액. 이후 처리하는 동안 현탁액을 OP-951 타입의 라델키스(Radelkis) 자력 교반기로 교반시켰다.
v. 제조된 시험 제품의 농도 제어
농도 및 균질성 검사를 위하여 제조된 시험 물질의 샘플을 취하였다. 중량 측정에 의하여 농도 및 균질성 검사를 수행하였다.
현탁액의 가장 윗부분, 중간 부분, 및 가장 낮은 부분의 세 개 한벌로 측정된 모두 세가지의 샘플 농도(균질성 검사)는 수용가능한 ±10% 제한, 즉, 가장 윗부분: +9.4±4.2%. 중간 부분: +9.4±4.6%, 가장 낮은 부분: +6.6±2.0% 이내였다.
Ⅲ. 시험 시스템
A. 동물
본 연구에서는 Sprague Dawley계 쥐, Crl:CD BR (도착시 6-7 주 령)가 사용되었다. 수컷은 143.8 g 내지 151.9 g 범위의 체중을 가졌다. 암컷은 144.2 g 내지 161.6 g 범위의 체중을 가졌다. 주문된 동물의 풀: 30마리(15마리의 수컷, 15마리의 암컷). 연구에 관계된 동물의 수: 20마리(10마리의 수컷, 10마리의 암컷). 쥐는 Charles River Hungary Ltd 사로부터 상업적으로 구입하였다. 동물들은 도착시 SPF 상태 였으며, 연구하는 동안 전통적인 환경에서 유지되었다. 쥐는 국제적 장점에 따라서 독물학상의 연구를 위해 통상적으로 사용된다. Sprague Dawley 품종은 충분한 조직학적 데이타를 가진 잘-알려진 실험 모델이다.
동물들은 귀 넘버링 기술(ear numbering technique)에 의하여 식별되고, 동일한 성별 다섯 마리씩 우리(cage)에서 사육되었다. 우리를 쥐의 I.D. 번호, 연구 코드, 군 식별, 투여 경로, 성별, 및 실험 기간의 시작일 및 최종일을 지시하는 꼬리표를 가지고 라벨을 붙였다.
동물 사육 조건은 아래 표 54에 요약되어 있다.
위생 수준: 관례적인 수준
동물 우리의 타입: 타입 Ⅱ 마크롤론
우리의 크기: H×W×D: 17.5 cm×22.5 cm×37.5 cm
청소 일주일에 세번 우리의 바닥을 교환
우리당 동물의 수: 5
동물 보관실의 수: 123
환경 조건은 아래 표 55에 요약되어 있다.
공기 교환: 약 15번/시간
온도: 22±3℃
상대 습도 30 - 70 %
빛: 인공, 12시간의 명암 주기
온도와 상대습도를 계속하여 기록하였다.
처리 전 하룻밤의 금식 기간, 처리 동안 그리고 처리 후 처음 2시간의 관찰 기간 동안을 제외하고, 표준화된 쥐 및 생쥐 먹이 VRF-1에 자유롭게 근접한 먹이가 동물들에게 제공되었다. 먹이의 조성은 D-4937 Lage/Lippe Lange Str. 42에 위치한 제조업자 Altromin GmbH사에 의하여 제어되었다. 먹이는 제조일자(30. 09. 2002), 안정성: 4 개월에 의하여 식별되었다. 지방은 마시는 유리병을 통하여 수돗물에 근접하였다. 쥐는 음료 병을 통해 수돗물을 자유롭게 마실 수 있었다. 마시는 물은 PCDL의 미생물 부서에 의하여 매달 검사되었다. 처리하기 전에 동물들을 5일동안 관찰하였다. 오직 어떠한 임상적 증후도 없는 건강한 동물만이 연구에 사용되었다.
동물의 그룹화는 컴퓨터에 의하여 생성된 임의의 표를 가지고 이루어졌다. 각각의 군의 체중 분포가 유사하도록 동물들을 이들의 체중에 기초한 군으로 임의적으로 할당하였다.
IV. 실험 고안
투여량 수준 및 군 분할은 아래 표 56에 요약되어 있다.
군 번호 처리 투여량 동물의 수 식별번호
mg/kg 수컷 암컷 수컷 암컷
1 주카라 과일 펄프 2,000 10 - 871-880 -
2 주카라 과일 펄프 2,000 - 10 - 881-890
합리적인 투여량 선택은 다음과 같다. 주카라 과일 펄프의 예상되는 사람 일일 복용량은 하루에 약 1000 mg이며, 이는 어른(70 kg)의 체중 kg 당 14 mg 또는 4살 나이의 어린이(20 kg)의 체중 kg 당 50 mg에 해당한다. 본 연구에서 처리된 2000 mg/kg 제한 투여량은 만약 어른에 의하여 섭취된다면 일일 복용량의 140배, 만약 5g이 어린이의 체중에 대하여 계산된다면 일일 복용량의 40배에 해당한다.
V. 투여
위관 영양법에 의하여 경구적으로 투여되었다. 투여 경로는 국제 가이드라인에 따라 선택되었다. 경구적 경로는 시험 제품에 대해 사람이 노출되는 예상된 경로이다. 시험 제품의 투여는 단일 투여로 제공된다. 시험 제품은 체중 kg 당 20 ml의 부피로 투여되었다. 실험 기간은 5일의 순응, 처리일, 처리일을 포함하여 처리 후 14일의 관찰 기간, 및 15일째 날:검시로 이루어졌다.
Vl. 관찰, 검사
A. 치사도
처리에 따른 4시간 동안, 그리고 이후 주중에는 그날의 시작 및 마지막에 하루 두번, 주말에는 하루 한번씩 15일째 아침까지 관찰하였다. 사망 시간은 가능한한 정확하게 기록되어야 하였다.
B. 일반적 상태, 외형, 행동, 및 임상적 증후
노출 바로 전, 이후, 6시간 동안의 처리 후 계속하여 쥐를 주의깊게 임상적으로 관찰하였다. 후속 기간 동안에, 주말에 동물들을 한번 검사한 것을 제외하고는 15일 아침까지 하루에 두번씩 검사하였다. 관찰되는 징후들은 피부, 털, 눈 및 가시적인 점막의 변화; 분비 및 배설 및 자율신경계 활동[예컨대, 유루(lacrimation), 기모(piloerection), 설사(diarrhea), 동공 크기, 비정상적인 순환계 패턴)을 포함하였다. 또한, 걷는 모양, 자세의 잠재적 변화 및 취급에 대한 반응, 기면(somnolence), 떨림(trembling), 간헐적 경련성 또는 긴장성 움직임, 스테레오타입 또는 행동 장애를 기록하였다.
C. 체중
실험실에 도착하였을 때, 무작위 추출하는 날에, 처리일에, 검시하기 전 실험 2일째, 8일째, 및 15일째 날에 동물의 체중을 재었다.
Vll. 검시 및 조직학적 검사
A. 검시(Necropsy)
처리 후 관찰 기간이 끝날때 생존한 모든 쥐를 T 61 전체마취하에서 몰살하고, 검시하였다. 외부 및 내부 상태를 주의깊게 관찰하고 기록하였다. 장기 기관의 현미경 검사는 하지 않았다.
Ⅷ. 평가, 통계적 분석
수컷 및 암컷 군을 분리하여 평가하였다.
A. 매개변수 값(Parametric value)
체중의 평균 값과 표준 편차를 계산하였다.
B. 비매개변수 값(치사도 및 임상적 증후)
치사 발생율, 임상적 증후, 및 육안의 조사 결과를 표로 만들었다.
IX. 절차
제약학적 통제 및 개발실 Co. Ltd.의 독물학 부서의 현 표준 실험 절차에 따라 실험을 수행하였다.
X. 동물 보호
동물 복지의 관심에서 동물의 불필요한 사용을 피하였다. 명백히 죽어가는 동물을 온건하게 몰살하는 것은 연구 지도자의 책임이었다. 현재의 방법(제한 시험)은 다른 공지된 그리고 인식된 급성 독성 시험에 비하여 감소된 수의 실험 동물을 사용한다.
Xl. 데이타 기록 및 집적
모든 최초의 데이타는 다음과 같은 적절한 형태에서 표준 실험 절차에 의하여 지시된 바에 따라 유지된다:
시험 화합물 중량 측정
동물실 일지(Animal room logbook)
체중 일지
치사도 및 임상 관찰 일지
검시 기록(Postmortem records)
연구 절차에서 얻어진 데이타는 연구 파일에 수집되었다. 연구 프로토콜, 연구하는 동안 및 연구의 결과로 생성된 모든 데이타, 연구와 관계된 모든 문서 및 모든 정보, 시험 제품의 대조 샘플 및 최종 보고는 PCDL의 기록 보관소에서 15년 이상동안 보관되고, 이후 후원자에게 제공될 것이다.
XII. 결과
A. 치사도
처리 후 관찰 기간 14일이 지난 후에 관찰된 치사도가 아래 표 57에 요약되어 있다.
1군-수컷 2군-암컷
처리 사망/동물의 수
주카라 과일 펄프; 2,000 mg/kg, po. 0/10 0/10
표 58은 쥐에 처리 후 관찰 기간 14일 동안의 '동결 건조된-주카라 과일 펄프'의 급성 경구 독성 연구(제한 시험)에서 수컷 시험 대상에 대한 개별적인 치사도 데이타를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00053
수컷
표 59는 쥐에 처리 후 관찰 기간 14일 동안의 '동결 건조된-주카라 과일 펄프'의 급성 경구 독성 연구(제한 시험)에서 암컷 시험 대상에 대한 개별적인 치사도 데이타를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00054
암컷
쥐에 '동결 건조된-주카라 과일 펄프' 2,000 mg/kg을 한번 경구 투여한 후에 어떠한 사망도 일어나지 않았다. 수컷 및 암컷 모두는 14일의 관찰 기간이 끝날때까지 생존하였다.
B. 임상적 증후
처리 후 14일간의 관찰 기간 후에 관찰된 임상적 증후가 아래 표 60에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00055
표 61은 쥐에 처리 후 14일의 관찰 기간 동안의 '동결 건조된-주카라 과일 펄프'의 급성 경구 독성 연구(제한 시험)에서 수컷 시험 대상에 대한 개별적인 임상적 증후를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00056
수컷
표 62는 쥐에 처리 후 14일의 관찰 기간 동안의 '동결 건조된-주카라 과일 펄프'의 급성 경구 독성 연구(제한 시험)에서 암컷 시험 대상에 대한 개별적인 임상적 증후를 요약한다.
Figure 112005052705019-PCT00057
암컷
처리된 어떠한 동물군에서도 처리일 및 처리 후 14일의 기간 동안 어떠한 독성 증후도 관찰되지 않았다.
C. 체중
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 체중이 아래 표 63에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00058
수컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 체중이 아래 표 64에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00059
암컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 체중 변화가 아래 표 65에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00060
수컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 체중 변화가 아래 표 66에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00061
암컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 개별적인 체중이 아래 표 67에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00062
수컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 개별적인 체중이 아래 표 68에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00063
암컷
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 수컷 시험 대상의 개별적인 체중 변화가 아래 표 69에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00064
수컷
* 주카라 과일 펄프(2,000 mg/kg, p.o.);
** 차이는 1일 및 2일, 2일 및 8일, 8일 및 15일 각각에 재어진 체중으로부터 계산하였다.
처리 후 14일의 관찰 기간에 관찰된 암컷 시험 대상의 개별적인 체중 변화가 아래 표 70에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00065
암컷
* 주카라 과일 펄프(2,000 mg/kg, p.o.);
** 차이는 1일 및 2일, 2일 및 8일, 8일 및 15일 각각에 재어진 체중으로부터 계산하였다.
동물의 체중 및 체중 증가는 연구 전체를 통하여 동물의 종 및 연령과 일치하였다.
D. 육안 병리
시험 동물에 대한 육안 병리 조사 결과가 표 71에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00066
수컷 시험 동물에 대한 육안 병리 조사 결과가 표 72에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00067
수컷
* 주카라 과일 펄프;(2,000 mg/kg, po.); ** "발견되지 않음"은 여기서 다음을 의미한다: 외부: 평균 발달의 동물. 피부, 털, 가시적인 점막이 손상되지 않음; 내부: 장기 기관들은 병리학적 변화 없음.
암컷 시험 동물에 대한 육안 병리 조사 결과가 표 73에 요약되어 있다.
Figure 112005052705019-PCT00068
암컷
* 주카라 과일 펄프;(2,000 mg/kg, po.); ** "발견되지 않음"은 여기서 다음을 의미한다: 외부: 평균 발달의 동물. 피부, 털, 가시적인 점막이 손상되지 않음; 내부: 장기 기관들은 병리학적 변화 없음.
모든 동물은 예정된 검시일, 15일째까지 생존하였으며, 모두 독성의 병리학적 변화가 없는 것으로 밝혀졌다.
E. 평가
'동결 건조된-주카라 과일 펄프'를 2,000 mg/kg 으로 한번 경구 투여한 이후에 어떠한 사망도 발생하지 않았다. 어떠한 독성의 임상적 증후도 발생하지 않았다. 15일 째에 예정된 검시는 어떠한 독성의 육안 병리학적 변화도 나타내지 않았다. 수컷 및 암컷 쥐에 '동결 건조된-주카라 과일 펄프' 2,000 mg/kg을 한번 경구 투여 하였을 때 어떠한 역효과도 인지되지 않았다는 결론을 내렸다.
균등물
본원 발명을 이들의 특정한 실시예와 연결하여 기술하였지만, 또다른 변형이 가능함을 이해하여야 할 것이다. 또한 본 출원은 본원 발명이 속하는 당해 분야에서 공지된 또는 관습적인 실시와 같이 본원의 개시로부터 벗어나는 것을 포함한 본원 발명의 어떠한 변형, 용도, 또는 개조도 포함하고자 하며, 청구항의 범위에 속하는 것으로 간주한다.

Claims (40)

  1. 동결-건조된 유테르페 에둘리스(Euterpe edulis)(주카라) 과육을 함유하는 식이 보조 조성물에 있어서,
    (a) 전체 중량 g당 대략 1 ㎎ 이상의 전체 농도의 안토시아닌을 함유하고;
    (b) 전체 중량 g당 350 마이크로몰 TE 이상의 ORACFL 수치를 보유하며;
    (c) 전체 중량의 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유하는 것을 특징으로 하는 식이 보조 조성물.
  2. 동결-건조된 주카라 과육을 함유하는 식이 보조 조성물에 있어서,
    (a) 전체 중량 g당 15 아스피린® ㎎ 당량 이상의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하고;
    (b) 전체 중량의 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유하는 것을 특징으로 하는 식이 보조 조성물.
  3. 제 1항 또는 2항에 있어서, 식이 보조 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 식이 보조 조성물.
  4. 안전하고 맛있는 주카라-기초한 식이 보조 조성물을 생산하는 방법에 있어 서,
    (a) 주카라 과일을 수확하고;
    (b) 주카라 과일을 칭량하고;
    (c) 주카라 과일을 물로 청소하고;
    (d) 주카라 과일을 75℃ 내지 100℃의 온도에서 5초 내지 10분동안 세척하고;
    (e) 주카라 과일의 껍질을 벗겨 주카라 과육을 주카라 과일로부터 분리하고;
    (f) 주카라 과육을 -5℃ 이하의 온도에서 동결시키고;
    (g) 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유하는 과립의 동결-건조된 주카라 과육 분말이 산출되는 조건하에 주카라 과육을 동결-건조시키고;
    여기서, 동결-건조된 주카라 과육 분말은 주카라 과육 제조물보다 안전하고 맛있는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 청소 단계는 주카라 과일을 0.1%(v/v)의 소독수로 씻어내는 과정으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 4항에 있어서, 세척 단계는 80℃ 온도에서 10초동안 물에서 주카라 과일을 세척하는 과정으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 4항에 있어서, 껍질을 벗겨내는 단계는 2분 내지 5분동안 주카라 과일의 껍질을 기계적으로 벗겨내는 과정으로 구성되고, 껍질을 벗겨내는 단계는 2 ㎏ 주카라 과일당 1 리터의 물로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 4항에 있어서, 주카라-기초한 식이 보조 조성물은 전체 중량 g당 350 마이크로몰 TE 이상의 ORACFL 수치를 보유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 4항에 있어서, 주카라-기초한 식이 보조 조성물은 전체 중량 g당 15 아스피린 ㎎ 당량 이상의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응에 의해 유도된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 포유동물에 제 1항 내지 3항중 어느 한 항에 따른 주카라-기초한 식이 보조 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은 유리 라디칼을 소거하고 병리학적 유리 라디칼에 의해 유도된 손상을 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 10항에 있어서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응에 의해 유도된 질환이나 손상으로 고통받는 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응의 유해 효과를 완화시키는 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 포유동물에 제 1항 내지 3항중 어느 한 항에 따른 주카라-기초한 식이 보조 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은 유리 라디칼을 소거하고 병리학적 유리 라디칼에 의해 유도된 손상을 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 12항에 있어서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 포유동물에서 사이클로옥시게나제 효소 활성을 저해하는 방법에 있어서, 상기 포유동물에 제 1항 내지 3항중 어느 한 항에 따른 주카라-기초한 식이 보조 조성물을 함유하는 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 14항에 있어서, 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 14항에 있어서, 조성물은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 관절내, 동맥내, 뇌내, 소뇌내, 기관지내, 척수강내, 국소, 에어로졸 경로에서 선택되는 투여 경로로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 포유동물에서 증가된 사이클로옥시게나제 효소 활성과 연관된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서, 상기 포유동물에 제 1항 내지 3항중 어느 한 항에 따른 주카라-기초한 식이 보조 조성물을 함유하는 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 17항에 있어서, 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 17항에 있어서, 조성물은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 관절내, 동맥내, 뇌내, 소뇌내, 기관지내, 척수강내, 국소, 에어로졸 경로에서 선택되는 투여 경로로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 17항에 있어서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 동결-건조된 유테르페 에둘리스(Euterpe edulis)(아카이) 과육을 함유하는 식이 보조 조성물에 있어서,
    (a) 전체 중량 g당 대략 1 ㎎ 이상의 전체 농도의 안토시아닌을 함유하고;
    (b) 전체 중량 g당 350 마이크로몰 TE 이상의 ORACFL 수치를 보유하며;
    (c) 전체 중량의 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유하는 것을 특징으로 하는 식이 보조 조성물.
  22. 동결-건조된 아카이 과육을 함유하는 식이 보조 조성물에 있어서,
    (a) 전체 중량 g당 15 아스피린® ㎎ 당량 이상의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하고;
    (b) 전체 중량의 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유하는 것을 특징으로 하는 식이 보조 조성물.
  23. 제 21항 또는 22항에 있어서, 식이 보조 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 식이 보조 조성물.
  24. 안전하고 맛있는 아카이-기초한 식이 보조 조성물을 생산하는 방법에 있어서,
    (a) 아카이 과일을 수확하고;
    (b) 아카이 과일을 칭량하고;
    (c) 아카이 과일을 물로 청소하고;
    (d) 아카이 과일을 75℃ 내지 100℃의 온도에서 5초 내지 10분동안 세척하고;
    (e) 아카이 과일의 껍질을 벗겨 아카이 과육을 아카이 과일로부터 분리하고;
    (f) 아카이 과육을 -5℃ 이하의 온도에서 동결시키고;
    (g) 3wt% 이하의 잔류 수분 함량을 보유하는 과립의 동결-건조된 아카이 과육 분말이 산출되는 조건하에 아카이 과육을 동결-건조시키고;
    여기서, 동결-건조된 아카이 과육 분말은 아카이 과육 제조물보다 안전하고 맛있는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 24항에 있어서, 청소 단계는 아카이 과일을 0.1%(v/v)의 소독수로 씻어내는 과정으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 24항에 있어서, 세척 단계는 80℃ 온도에서 10초동안 물에서 아카이 과일을 세척하는 과정으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 24항에 있어서, 껍질을 벗겨내는 단계는 2분 내지 5분동안 아카이 과일의 껍질을 기계적으로 벗겨내는 과정으로 구성되고, 껍질을 벗겨내는 단계는 2 ㎏ 아카이 과일당 1 리터의 물로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 24항에 있어서, 아카이-기초한 식이 보조 조성물은 전체 중량 g당 350 마이크로몰 TE 이상의 ORACFL 수치를 보유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제 24항에 있어서, 아카이-기초한 식이 보조 조성물은 전체 중량 g당 15 아스피린 ㎎ 당량 이상의 사이클로옥시게나제 저해 수치를 보유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응에 의해 유도된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 포유동물에 제 21항 내지 23항중 어느 한 항에 따른 아카이-기초한 식이 보조 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은 유리 라디칼을 소거하고 병리학적 유리 라디칼에 의해 유도된 손상을 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제 30항에 있어서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응에 의해 유도된 질환이나 손상으로 고통받는 포유동물에서 병리학적 유리 라디칼 반응의 유해 효과를 완화시키는 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 포유동물에 제 21항 내지 23항중 어느 한 항에 따른 아카이-기초한 식이 보조 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은 유리 라디칼을 소거하고 병리학적 유리 라디칼에 의해 유도된 손상을 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 32항에 있어서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 포유동물에서 사이클로옥시게나제 효소 활성을 저해하는 방법에 있어서, 상기 포유동물에 제 21항 내지 23항중 어느 한 항에 따른 아카이-기초한 식이 보조 조성물을 함유하는 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 34항에 있어서, 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제 34항에 있어서, 조성물은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 관절내, 동맥내, 뇌내, 소뇌내, 기관지내, 척수강내, 국소, 에어로졸 경로에서 선택되는 투여 경로로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 포유동물에서 증가된 사이클로옥시게나제 효소 활성과 연관된 질환이나 손상을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서, 상기 포유동물에 제 21항 내지 23항중 어느 한 항에 따른 아카이-기초한 식이 보조 조성물을 함유하는 조성물의 효과량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제 37항에 있어서, 조성물은 제약학적으로 수용가능한 담체를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 제 37항에 있어서, 조성물은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 관절내, 동맥내, 뇌내, 소뇌내, 기관지내, 척수강내, 국소, 에어로졸 경로에서 선택되는 투여 경로로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 제 33항에 있어서, 질환이나 손상은 암, 결장암, 유방암, 염증성 장 질환, 크론병, 혈관 질환, 관절염, 궤양, 급성 호흡기 곤란 증후군, 허혈-재관류 손상, 신경퇴행성 질환, 자폐증, 파킨슨씨병, 알츠하이머병, 위장관 질환, 염증에 의해 유발된 조직 손상, 환경 독소에 의해 유도된 조직 손상에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1791418B (zh) * 2003-03-21 2012-03-07 K2A公司 Jucara和a*ai果实基营养补充剂
US7749545B2 (en) 2005-03-18 2010-07-06 Sakura Properties, Llc Fucoidan compositions and methods for dietary and nutritional supplements
US9028882B2 (en) 2005-05-02 2015-05-12 4Life Patents, Llc Nutraceutical gels
MY162337A (en) 2005-05-02 2017-06-15 4Life Res Llc Transfer factor preparations and associated methods
BRPI0615540A2 (pt) * 2005-08-15 2011-05-17 Unilever Nv combinação de um recipiente, canudo e método para a preparação de um canudo
UA92784C2 (ru) * 2006-01-19 2010-12-10 Мэри Кей, Инк. Композиции, которые содержат фруктовый экстракт, выбранный из экстракта сливы какаду или экстракта ягоды акаи
BRPI0604281A (pt) 2006-07-18 2008-03-04 Roberto Soares De Moura processo para obtenção de decotos de frutos e caroços de euterpe oleracea (açaì) processo de obtenção de extratos hidro-alcoólicos a partir dos decotos; processo obtenção de liofilizado e/ou spray dryer do extrato hidro-alcoólico; composições farmacêuticas contendo os liofilizados e/ou spray dryer dos ditos extratos e uso terapêutico das composições como vasodilatador no tratamento das sìndromes isquêmicas, vaso-espásticas e da hipertenção arterial
FR2910815B1 (fr) * 2006-12-28 2010-10-29 Expanscience Lab Composition comprenant un extrait de graines de quinoa
WO2008156627A1 (en) * 2007-06-15 2008-12-24 The Texas A & M University System Phytochemical-rich oils and methods related thereto
JP5563824B2 (ja) * 2007-10-24 2014-07-30 サントリーホールディングス株式会社 ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ｐｐａｒ）のリガンド剤
JP2009256326A (ja) * 2008-03-21 2009-11-05 Kose Corp 美白剤、及び皮膚外用剤
US20090246344A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-01 Sasaki Tea Manufacturing Co., Ltd. Antioxidant Agent and Beverage Using Same
BRPI0913499B1 (pt) 2008-09-15 2020-03-17 Laila Nutraceuticals Composições anti-inflamatórias sinergísticas compreendendo extratos de boswellia serrata
US9176146B2 (en) * 2009-08-03 2015-11-03 Theta Biomedical Consulting & Development Co., Inc. Methods of treating autism spectrum disorders and compositions for same
US9050275B2 (en) * 2009-08-03 2015-06-09 Theta Biomedical Consulting & Development Co., Inc. Methods of screening for and treating autism spectrum disorders and compositions for same
US8048456B2 (en) 2009-08-28 2011-11-01 Mary Kay Inc. Skin care formulations
WO2011026202A1 (pt) * 2009-09-03 2011-03-10 Universidade Do Estado Do Rio De Janeiro - Uerj Processo de obtenção de produtos de tabaco contendo substâncias antioxidantes e produto obtido
US8932468B2 (en) * 2010-01-12 2015-01-13 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Separation of enzymatically synthesized polyepicatechin via high performance liquid chromatography
BRPI1003215A2 (pt) * 2010-02-23 2012-03-20 Universidade Do Estado Do Rio De Janeiro - Uerj Processo para preparação de pomadas, contendo antioxidantes obitdos de plantas ricas em polifenóis, para utilização no tratamento de feridas de diversas etiologias nas quais existe um aumento de fatores pró-oxidantes e/ou grande formação de espécies reativas derivadas do oxigênio e/ou menor formação de óxido nítrico
US8828377B2 (en) 2010-03-15 2014-09-09 Laila Nutraceuticals Boswellia oil, its fractions and compositions for enhancing brain function
JP5818410B2 (ja) * 2010-08-03 2015-11-18 長谷川香料株式会社 食品にオラック値を付与する香料組成物
BRPI1003060B1 (pt) 2010-08-04 2017-03-07 Amazon Dreams Indústria E Comércio S A processo de obtenção de extratos parcialmente purificados de compostos antioxidantes de frutos de palmeiras do gênero euterpe
US20120121763A1 (en) * 2010-11-12 2012-05-17 Marni Markell Hurwitz Pulp food product, process and method of manufacturing same
JP5821259B2 (ja) 2011-04-22 2015-11-24 セイコーエプソン株式会社 画像表示システム、画像表示装置、３ｄメガネ、及び、画像表示方法
CN103648301A (zh) * 2011-07-22 2014-03-19 雀巢产品技术援助有限公司 来自未加工原料的干燥的果肉制品
KR101317738B1 (ko) * 2012-03-30 2013-10-15 이상호 가축 성장촉진용 첨가제 및 그 제조방법
JP6072545B2 (ja) * 2013-01-18 2017-02-01 株式会社ミルボン 非水系毛髪化粧料
CN103736085B (zh) * 2013-12-27 2015-07-29 南宁市品迪生物工程有限公司 一种预防和治疗老年性痴呆的药物
WO2019046444A2 (en) * 2017-08-29 2019-03-07 Flaask, Llc COMPOSITIONS AND METHODS FOR DIAGNOSING SENSITIVITY TO AUTISM SPECTRUM DISORDER (ASD), REDUCING THE PROBABILITY OF DEVELOPING ASD AND / OR TREATING ASD
EP3694523A4 (en) 2017-10-13 2021-07-07 Locus IP Company, LLC METHODS AND SUBSTANCES FOR PREVENTION AND TREATMENT OF NEURODEGENERATIVE DISEASES
MY194335A (en) * 2018-03-08 2022-11-29 Malaysian Palm Oil Board Composition for delaying ageing process and increasing longevity in a subject and methods thereof
CN114009755A (zh) * 2021-09-29 2022-02-08 黑龙江飞鹤乳业有限公司 阿萨伊的发酵方法及发酵产物
US20230155505A1 (en) * 2021-11-12 2023-05-18 Diodes Incorporated Adaptive minimum duty cycle design to extend operational voltage range for dcdc converters

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3920815A (en) * 1970-04-15 1975-11-18 Mirlin Corp Taste-modifying composition
JPH06271850A (ja) * 1993-03-23 1994-09-27 Nikken Food Kk 天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造方法
US6231866B1 (en) * 1998-04-30 2001-05-15 Douglas G. Mann Infused vegetable, fruit, herb, and/or seed fiber product and dietary supplements containing same
US6194469B1 (en) * 1998-12-11 2001-02-27 Board Of Trustees Operating Michigan State Univeristy Method for inhibiting cyclooxygenase and inflammation using cherry bioflavonoids
AU2358400A (en) * 1998-12-11 2000-06-26 Michigan State University Method and compositions for producing berry derived products
JP2001046030A (ja) * 1999-08-02 2001-02-20 Tama Seikagaku Kk ブルーベリー抽出エキスの製造法
KR20060123663A (ko) * 1999-08-27 2006-12-01 미시간 스테이트 유니버시티 천연 사이클로옥시게나제 저해물질을 함유하는 조성물
US8790727B2 (en) * 2000-12-05 2014-07-29 Tahitian Noni International, Inc. Morinda citrifolia and iridoid based formulations
US20030077343A1 (en) * 2001-03-16 2003-04-24 Martin Katharine M. Composition containing feverfew extract and use thereof
US7014873B2 (en) * 2001-11-14 2006-03-21 Morinda, Inc. Method and formulation for treating candidiasis using morinda citrifolia
US7182935B2 (en) * 2002-06-19 2007-02-27 Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuaria Embrapa Bacterial plaque evidencing composition based on natural colorants
US20060251750A1 (en) * 2002-09-30 2006-11-09 Tabor Aaron T Soy formulations and their use in skin care
CN1791418B (zh) 2003-03-21 2012-03-07 K2A公司 Jucara和a*ai果实基营养补充剂
US7232585B2 (en) * 2004-06-24 2007-06-19 Xel Herbaceuticals, Inc. Green tea formulations and methods of preparation
US20080050498A1 (en) * 2004-10-07 2008-02-28 Next Proteins, Inc. Powdered protein beverage mix and methods of making the same
WO2006055550A2 (en) * 2004-11-15 2006-05-26 Borba, Llc Nutritional beverage with skin improvement aids
US20060210688A1 (en) * 2005-03-18 2006-09-21 Mower Thomas E Dehydrated sports drink powder
US20060210697A1 (en) * 2005-03-18 2006-09-21 Mower Thomas E Infant formula composition
US7749545B2 (en) * 2005-03-18 2010-07-06 Sakura Properties, Llc Fucoidan compositions and methods for dietary and nutritional supplements
US20060210692A1 (en) * 2005-03-18 2006-09-21 Mower Thomas E Baby food composition
US7776915B2 (en) * 2005-03-24 2010-08-17 Tracie Martyn International, Llc Topical formulations and methods of use
MY162337A (en) * 2005-05-02 2017-06-15 4Life Res Llc Transfer factor preparations and associated methods
US20070166253A1 (en) * 2005-05-31 2007-07-19 Velveteen Bunni Llc Cosmetic and dermatological formulations with natural pigments
US20070196298A1 (en) * 2005-05-31 2007-08-23 Kostick Richard H Cosmetic and dermatological formulations with natural pigments and methods of use
US20070065396A1 (en) * 2005-09-21 2007-03-22 Tracie Martyn International, Llc Topical macqui berry formulation
US8962058B2 (en) * 2005-11-23 2015-02-24 The Coca-Cola Company High-potency sweetener composition with antioxidant and compositions sweetened therewith
CA3123249A1 (en) * 2006-01-19 2007-07-26 Mary Kay, Inc. Skin care compositions comprising kakadu plum extract and acai berry extract
CN101939411A (zh) * 2008-02-06 2011-01-05 宝洁公司 用于提高呼吸病症免疫应答的组合物、方法和试剂盒

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10130673B2 (en) 2006-01-19 2018-11-20 Mary Kay Inc. Compositions comprising kakadu plum extract or acai berry extract
KR20200051855A (ko) * 2006-01-19 2020-05-13 마리 케이 인코포레이티드 카카두 플럼 추출물 또는 아카이 베리 추출물을 포함하는 조성물
US10668124B2 (en) 2006-01-19 2020-06-02 Mary Kay Inc. Compositions comprising kakadu plum extract or acai berry extract
US10675323B2 (en) 2006-01-19 2020-06-09 Mary Kay Inc. Topical compositions comprising acai berry extract
US10918591B2 (en) 2006-01-19 2021-02-16 Mary Kay Inc. Compositions comprising kakadu plum extract or acai berry extract
KR20220074982A (ko) * 2006-01-19 2022-06-03 마리 케이 인코포레이티드 카카두 플럼 추출물 또는 아카이 베리 추출물을 포함하는 조성물

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