JPH06271850A - 天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造方法 - Google Patents
天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造方法Info
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- JPH06271850A JPH06271850A JP5087896A JP8789693A JPH06271850A JP H06271850 A JPH06271850 A JP H06271850A JP 5087896 A JP5087896 A JP 5087896A JP 8789693 A JP8789693 A JP 8789693A JP H06271850 A JPH06271850 A JP H06271850A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、食品の酸化防止と生体内での酸化
的ストレスを制御することなどを目的としたものであ
る。 【構成】 次の 【化１】 で示すシアニジン−３−０−（β）−グルコシドを有効
成分とする天然物を原料とした抗酸化剤。シアニジン−
３−０−（β）−グルコシド含有の植物を粉砕し、脱脂
した後、濾過して、その残渣に溶媒を加えて得た抽出物
を減圧濃縮することを特徴とした天然物を原料とした抗
酸化剤の製造方法。
的ストレスを制御することなどを目的としたものであ
る。 【構成】 次の 【化１】 で示すシアニジン−３−０−（β）−グルコシドを有効
成分とする天然物を原料とした抗酸化剤。シアニジン−
３−０−（β）−グルコシド含有の植物を粉砕し、脱脂
した後、濾過して、その残渣に溶媒を加えて得た抽出物
を減圧濃縮することを特徴とした天然物を原料とした抗
酸化剤の製造方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、食品の酸化防止と生体
内での酸化的ストレスを制御することなどを目的とした
シアニジン−３−０−（β）−グルコシド（Ｃｙａｎｉ
ｄｉｎ−３−０−（β）−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）を有効
成分とする天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造
方法に関する。
内での酸化的ストレスを制御することなどを目的とした
シアニジン−３−０−（β）−グルコシド（Ｃｙａｎｉ
ｄｉｎ−３−０−（β）−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）を有効
成分とする天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造
方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来から米種子、特にインディカ米の貯
蔵安定性に着目し、米籾殻に含まれるイソビテシンとい
うＣ−グルコシルフラボノイドが抗酸化的防御機構に大
きな役割を果たしていることが解明されている。
蔵安定性に着目し、米籾殻に含まれるイソビテシンとい
うＣ−グルコシルフラボノイドが抗酸化的防御機構に大
きな役割を果たしていることが解明されている。
【０００３】一方、最近、米種子のもつ色素が種子の貯
蔵・保存性に重要な役割を果たしているのではないかと
推測され、色素の抗酸化性が関与していることが示唆さ
れている。
蔵・保存性に重要な役割を果たしているのではないかと
推測され、色素の抗酸化性が関与していることが示唆さ
れている。
【０００４】米の中には赤色色素を有する赤米又は黒米
があり、ジャポニカタイプの赤米の色素は、タンニン系
色素であり、インディカタイプの赤米はアントシアニン
系色素であることが報告されている。しかし、米種子の
色素と抗酸化性の関連性に着目した研究例は少なく、こ
のものの詳細な抗酸化性を中心とする生理的役割や化学
的構造は明らかになっていない。
があり、ジャポニカタイプの赤米の色素は、タンニン系
色素であり、インディカタイプの赤米はアントシアニン
系色素であることが報告されている。しかし、米種子の
色素と抗酸化性の関連性に着目した研究例は少なく、こ
のものの詳細な抗酸化性を中心とする生理的役割や化学
的構造は明らかになっていない。
【０００５】
【発明により解決すべき課題】本発明者らは、黒米や赤
米等の有色米を対象に抗酸化性の研究を進め、この有効
成分の単離・同定を行い、その生理的意義について抗酸
化性を中心に検討を加え、応用・開発への基礎を確立す
ることを課題とした。
米等の有色米を対象に抗酸化性の研究を進め、この有効
成分の単離・同定を行い、その生理的意義について抗酸
化性を中心に検討を加え、応用・開発への基礎を確立す
ることを課題とした。
【０００６】この課題のために予備的に、本発明者らは
米種子を長期間室温で保存した後の発芽率を検討したと
ころ、黒米で最も高く、次いで赤米、白米の順で、保存
性と色素との間に高い相関性が示唆された（図１）。
又、各種子のアルコール抽出物について抗酸化性の比較
を行った。その結果、籾殻、穀粒のいづれの抽出物も黒
米に最も強い抗酸化性が見出だされ、黒米中の抗酸化性
色素成分の単離・同定を行い、本発明を完成させるに至
った。
米種子を長期間室温で保存した後の発芽率を検討したと
ころ、黒米で最も高く、次いで赤米、白米の順で、保存
性と色素との間に高い相関性が示唆された（図１）。
又、各種子のアルコール抽出物について抗酸化性の比較
を行った。その結果、籾殻、穀粒のいづれの抽出物も黒
米に最も強い抗酸化性が見出だされ、黒米中の抗酸化性
色素成分の単離・同定を行い、本発明を完成させるに至
った。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するため、まず、穀粒中の色素成分に着目して、
単離、精製を行い、ＩＲ、ＵＶ、ＮＭＲ、ＦＡＢ−ＭＳ
などの機器分析の検討を行い、最も抗酸化性の強い主要
色素の同定と安定性、特にｐＨによる影響や品種間での
色素の種類と含量の比較と保存性や機能性との関連性に
ついての検討を行った。
を達成するため、まず、穀粒中の色素成分に着目して、
単離、精製を行い、ＩＲ、ＵＶ、ＮＭＲ、ＦＡＢ−ＭＳ
などの機器分析の検討を行い、最も抗酸化性の強い主要
色素の同定と安定性、特にｐＨによる影響や品種間での
色素の種類と含量の比較と保存性や機能性との関連性に
ついての検討を行った。
【０００８】黒米をヘキサンで脱脂し、０．５％ＴＦＡ
−９５％ＥｔＯＨで抽出後、アンバーライトＸＡＤ−７
を用いたカラムクロマトフィ−ＨＰＬＣで測定した。リ
テンシォンタイム（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）と
ＯＤＳカラムにより分取、最大ピークのところを構造解
析を行ったところ、純度検定、ＵＶ−ＶＩＳ、ＦＡＢ−
ＭＳ、ＦＴ−ＩＲ、ＮＭＲ、メタノリシス（Ｍｅｔｈａ
ｎｏｌｙｓｉｓ）による構成糖の分析により、黒米の色
素部分の主要成分（約４８％）の物質構造は、次の構造
式のシアニジン−３−０−（β）−グルコシド
−９５％ＥｔＯＨで抽出後、アンバーライトＸＡＤ−７
を用いたカラムクロマトフィ−ＨＰＬＣで測定した。リ
テンシォンタイム（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）と
ＯＤＳカラムにより分取、最大ピークのところを構造解
析を行ったところ、純度検定、ＵＶ−ＶＩＳ、ＦＡＢ−
ＭＳ、ＦＴ−ＩＲ、ＮＭＲ、メタノリシス（Ｍｅｔｈａ
ｎｏｌｙｓｉｓ）による構成糖の分析により、黒米の色
素部分の主要成分（約４８％）の物質構造は、次の構造
式のシアニジン−３−０−（β）−グルコシド
【０００９】
【化２】 と決定した。
【００１０】また、この黒米の色素成分中に既に知られ
ているイソビテキシン（Ｉｓｏｖｉｔｅｘｉｎ）が含ま
れているかどうかＨＰＬＣ分析で確認したところ含まれ
ておらず、従来から抗酸化性のあるイソビテキシンとは
異なる物質であることを確認した。次に、この黒米の抗
酸化性の強さについて検討を行った。先ず、インディカ
タイプの色素成分であるアントシアニンＡ・Ｂをチオシ
アネート法（ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ）
で抗酸化性を分析したところ、区Ａでは７０％抑制、区
Ｂでは２０％を抑制することがわかった。前記実験で
は、α−トコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）９６
％、ＢＨＡ９０％抑制であった。α−ｔｏｃ＞ＢＨＡ＞
区Ａ＞区Ｂの強さの順位であった。さらにチオシアネー
ト法によるヒドロペルオキシド量を測定するとα−ｔｏ
ｃ＞ＢＨＡ＞区Ａ＞区Ｂの抗酸化性の強さの順位であっ
た。
ているイソビテキシン（Ｉｓｏｖｉｔｅｘｉｎ）が含ま
れているかどうかＨＰＬＣ分析で確認したところ含まれ
ておらず、従来から抗酸化性のあるイソビテキシンとは
異なる物質であることを確認した。次に、この黒米の抗
酸化性の強さについて検討を行った。先ず、インディカ
タイプの色素成分であるアントシアニンＡ・Ｂをチオシ
アネート法（ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ）
で抗酸化性を分析したところ、区Ａでは７０％抑制、区
Ｂでは２０％を抑制することがわかった。前記実験で
は、α−トコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）９６
％、ＢＨＡ９０％抑制であった。α−ｔｏｃ＞ＢＨＡ＞
区Ａ＞区Ｂの強さの順位であった。さらにチオシアネー
ト法によるヒドロペルオキシド量を測定するとα−ｔｏ
ｃ＞ＢＨＡ＞区Ａ＞区Ｂの抗酸化性の強さの順位であっ
た。
【００１１】尚、品種間によるチオシアネート法による
ヒドロペルオキシド量の測定による抗酸化性の強さは、
α−ｔｏｃ＝ＢＨＡ＞黒米（野生種）＞黒米（インディ
カ）＞赤米（ジャポニカ）＞赤米（インディカ）とな
り、黒米の方が抗酸化性が強いことが確認された。
ヒドロペルオキシド量の測定による抗酸化性の強さは、
α−ｔｏｃ＝ＢＨＡ＞黒米（野生種）＞黒米（インディ
カ）＞赤米（ジャポニカ）＞赤米（インディカ）とな
り、黒米の方が抗酸化性が強いことが確認された。
【００１２】以上の結果から、黒米（インディカ）の中
の主要色素は、シアニジン−３−０−（β）−グルコシ
ドと同定され、抗酸化性を主に有している物質であるこ
とが判明した。この物質は、従来から知られる米籾殻の
イソビテキシンとは異なる新規物質である。酸性条件下
でも強く、安定した抗酸化性を有することが特徴として
考えられる。
の主要色素は、シアニジン−３−０−（β）−グルコシ
ドと同定され、抗酸化性を主に有している物質であるこ
とが判明した。この物質は、従来から知られる米籾殻の
イソビテキシンとは異なる新規物質である。酸性条件下
でも強く、安定した抗酸化性を有することが特徴として
考えられる。
【００１３】本発明は、黒米（インディカ）から、抗酸
化成分シアニジン−３−０−（β）−グルコシドを単離
・精製して、新規物質を得たのであるが、黒米（インデ
ィカ）に限定されることなく、当然のこと乍ら前記成分
を含有する植物全般（例えば黒豆、ブルーベリー）から
得ることができる。
化成分シアニジン−３−０−（β）−グルコシドを単離
・精製して、新規物質を得たのであるが、黒米（インデ
ィカ）に限定されることなく、当然のこと乍ら前記成分
を含有する植物全般（例えば黒豆、ブルーベリー）から
得ることができる。
【００１４】以下、この発明を実施例により詳細に説明
する。
する。
【００１５】
【実施例１】２０g ずつ４種の米種子を脱殻し、ブレン
ダーで粉砕したものを体積の６０mlのｎ−ヘキサンによ
って脱脂し、吸引瀘過した。その残渣を５００mlの０．
５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）−９５％エタノール溶
液によって抽出、瀘過したものを減圧濃縮して得たもの
を粗抽出物とした。
ダーで粉砕したものを体積の６０mlのｎ−ヘキサンによ
って脱脂し、吸引瀘過した。その残渣を５００mlの０．
５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）−９５％エタノール溶
液によって抽出、瀘過したものを減圧濃縮して得たもの
を粗抽出物とした。
【００１６】得られた色素の粗抽出物の収率は、インデ
ィカタイプの黒米が最も高かった。また、ＵＶ測定によ
り黒米は２８０nmと４６０nmに、赤米は２８０nmと４６
０nmにそれぞれ極大吸収をもつことがわかった。逆相Ｈ
ＰＬＣ分析では、黒米に特徴的なピークが確認された。
ィカタイプの黒米が最も高かった。また、ＵＶ測定によ
り黒米は２８０nmと４６０nmに、赤米は２８０nmと４６
０nmにそれぞれ極大吸収をもつことがわかった。逆相Ｈ
ＰＬＣ分析では、黒米に特徴的なピークが確認された。
【００１７】得られた色素の粗抽出物の抗酸化性の試験
は、リノール酸の自動酸化の系で行い、チオシアネート
法とＴＢＡ法によって評価した。その際、スタンダード
の天然抗酸化剤として広く食品中に含まれているα−ト
コフェロール、合成抗酸化剤であるｔ−ブチル−ヒドロ
キシアニソール（ＢＨＡ）を比較として用いた。前記チ
オシアネート法は、不飽和脂肪酸の過酸化によって、生
成したヒドロペルオキシドが二価鉄を三価鉄に酸化し、
この三価鉄がチオシアン酸アンモニウム（ＮＨ4 ＳＣ
Ｎ）と反応して赤色のロダン鉄Ｆｅ（ＳＣＮ）3 を生成
し、このロダン鉄の５００nmの吸収を測定することによ
り過酸化物の量を求めるものである。チオシアネート法
により脂質過酸化の初期段階を検討することができる。
この方法としては、試験管に反応液を０．２mlとり、こ
れに７５％エタノール９．４m 、３０％l チオシアン酸
アンモニウム水溶液０．２mlを加え、０．０２M 塩化第
一鉄−３．５％塩酸水溶液０．２mlを加えてよく攪拌
し、３分後に比色計により５００nmの吸光度を測定した
（図２）。
は、リノール酸の自動酸化の系で行い、チオシアネート
法とＴＢＡ法によって評価した。その際、スタンダード
の天然抗酸化剤として広く食品中に含まれているα−ト
コフェロール、合成抗酸化剤であるｔ−ブチル−ヒドロ
キシアニソール（ＢＨＡ）を比較として用いた。前記チ
オシアネート法は、不飽和脂肪酸の過酸化によって、生
成したヒドロペルオキシドが二価鉄を三価鉄に酸化し、
この三価鉄がチオシアン酸アンモニウム（ＮＨ4 ＳＣ
Ｎ）と反応して赤色のロダン鉄Ｆｅ（ＳＣＮ）3 を生成
し、このロダン鉄の５００nmの吸収を測定することによ
り過酸化物の量を求めるものである。チオシアネート法
により脂質過酸化の初期段階を検討することができる。
この方法としては、試験管に反応液を０．２mlとり、こ
れに７５％エタノール９．４m 、３０％l チオシアン酸
アンモニウム水溶液０．２mlを加え、０．０２M 塩化第
一鉄−３．５％塩酸水溶液０．２mlを加えてよく攪拌
し、３分後に比色計により５００nmの吸光度を測定した
（図２）。
【００１８】ＴＢＡ法は、脂質の過酸化により生成した
ヒドロペルオキシドの代表的な二次分解物であるマロン
ジアルデヒド（ＭＤＡ）及びその類似物質がチオバルビ
ツール酸（ＴＢＡ）と反応して、縮合物を生成し、この
縮合物の５３２nmの吸収を測定することによって、脂質
の過酸化の後期段階を検討することができるものであ
る。
ヒドロペルオキシドの代表的な二次分解物であるマロン
ジアルデヒド（ＭＤＡ）及びその類似物質がチオバルビ
ツール酸（ＴＢＡ）と反応して、縮合物を生成し、この
縮合物の５３２nmの吸収を測定することによって、脂質
の過酸化の後期段階を検討することができるものであ
る。
【００１９】前記具体的方法としては、キャップ付きス
クリュー管に反応液１．０mlをとり、これにブチル化ヒ
ドロキシトルエン（ＢＨＴ）１０μｌ、２０％トリクロ
ロ酢酸（ＴＣＡ）０．５ml、０．６７％チオバルビツー
ル酸水溶液１．０mlを加えよく攪拌した後、沸騰水浴中
で１０分間加熱し、氷冷し、３．５００rpm で１５分間
遠心分離を行い、比色計により上澄みの５３２nmの吸光
度を測定した（図３）。
クリュー管に反応液１．０mlをとり、これにブチル化ヒ
ドロキシトルエン（ＢＨＴ）１０μｌ、２０％トリクロ
ロ酢酸（ＴＣＡ）０．５ml、０．６７％チオバルビツー
ル酸水溶液１．０mlを加えよく攪拌した後、沸騰水浴中
で１０分間加熱し、氷冷し、３．５００rpm で１５分間
遠心分離を行い、比色計により上澄みの５３２nmの吸光
度を測定した（図３）。
【００２０】以上の結果から、どの米種子の粗抽出物に
も脂質過酸化に対して抑制効果があることがわかった。
その中でも黒米に比較的強い抗酸化性がみられたこと、
また、粗抽出物の収率が高く、ＨＰＬＣによる分離がよ
いこと、さらに、種子の発芽率が最も高いことから、黒
米にこの着目し、色素の単離・同定を試みた。
も脂質過酸化に対して抑制効果があることがわかった。
その中でも黒米に比較的強い抗酸化性がみられたこと、
また、粗抽出物の収率が高く、ＨＰＬＣによる分離がよ
いこと、さらに、種子の発芽率が最も高いことから、黒
米にこの着目し、色素の単離・同定を試みた。
【００２１】
【実施例２】脱殻した黒米種子１７５g をブレンダーで
粉砕した後、５００mlのｎ−ヘキサンで脱脂し、吸引瀘
過した。その残渣を２．５ｌの０．５％ＴＦＡ−９５％
エタノールによって抽出し、瀘過したものを減圧濃縮し
て粗抽出物を得た。
粉砕した後、５００mlのｎ−ヘキサンで脱脂し、吸引瀘
過した。その残渣を２．５ｌの０．５％ＴＦＡ−９５％
エタノールによって抽出し、瀘過したものを減圧濃縮し
て粗抽出物を得た。
【００２２】色素粗抽出物の収量は、８．７７g であっ
た。この粗抽出物から得られた５つのフラクションのう
ち、ＵＶ測定と逆相ＨＰＬＣ分析により０．１％ＴＦＡ
−７０％メタノール画分に最も多く色素が含まれている
ことがわかった。画分から３つの色素が単離され、溶出
時間の早いものからピグメント（Ｐｉｇｍｅｎｔ）Ａ、
Ｂ、Ｃと名付けた。収量はそれぞれ２．６mg、５０．３
mg９．０mgであった。これら３つの色素の抗酸化性の試
験を行った結果、ピグメントＢに最も強い活性がみられ
たことから、ピグメントＢについて機器分析による構造
解析を行った。
た。この粗抽出物から得られた５つのフラクションのう
ち、ＵＶ測定と逆相ＨＰＬＣ分析により０．１％ＴＦＡ
−７０％メタノール画分に最も多く色素が含まれている
ことがわかった。画分から３つの色素が単離され、溶出
時間の早いものからピグメント（Ｐｉｇｍｅｎｔ）Ａ、
Ｂ、Ｃと名付けた。収量はそれぞれ２．６mg、５０．３
mg９．０mgであった。これら３つの色素の抗酸化性の試
験を行った結果、ピグメントＢに最も強い活性がみられ
たことから、ピグメントＢについて機器分析による構造
解析を行った。
【００２３】まず質量分析により分子量を測定したとこ
ろ、分子量４４９［Ｍ´］のピークが確認された。
ろ、分子量４４９［Ｍ´］のピークが確認された。
【００２４】化学構造を明確にするため、1 Ｈ−ＮＭ
Ｒ、15Ｃ−ＮＭＲのほかＤＢＰＴ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢ
Ｃ、ＤＱＰ−ＣＯＳＹを測定した。なお、試料は１０％
ＴＦＡを含む重水素置換されたメタノールに溶解した。
基準物質としては、トリメチルシラン（ＴＭＳ）を用い
た。この結果と他の機器分析の結果をふまえて、ピグメ
ントＢはシアニジンをアグリコンとするモノグルコシド
であると判断された。
Ｒ、15Ｃ−ＮＭＲのほかＤＢＰＴ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢ
Ｃ、ＤＱＰ−ＣＯＳＹを測定した。なお、試料は１０％
ＴＦＡを含む重水素置換されたメタノールに溶解した。
基準物質としては、トリメチルシラン（ＴＭＳ）を用い
た。この結果と他の機器分析の結果をふまえて、ピグメ
ントＢはシアニジンをアグリコンとするモノグルコシド
であると判断された。
【００２５】また、ＴＭＳ化した水層をガスクロマトグ
ラフィーによって分析した結果、溶出時間は１０分付近
に糖由来のピークが確認された。標品との比較からこの
ピークはメチルグルコシドのものであると同定された。
よって、構成糖はグルコースであることがわかった。ま
た1 Ｈ−ＮＭＲによってアノマー位のプロトンの結合定
数（ＪH H ）が７．６Hzであったことから、このグルコ
ースは、β位で結合していることがわかった。
ラフィーによって分析した結果、溶出時間は１０分付近
に糖由来のピークが確認された。標品との比較からこの
ピークはメチルグルコシドのものであると同定された。
よって、構成糖はグルコースであることがわかった。ま
た1 Ｈ−ＮＭＲによってアノマー位のプロトンの結合定
数（ＪH H ）が７．６Hzであったことから、このグルコ
ースは、β位で結合していることがわかった。
【００２６】前記における機器分析の結果に数多くの文
献による検討を加えて、ピグメントＢの化学構造はシア
ニジン−３−０−（β）−グルコシドであると判明し
た。
献による検討を加えて、ピグメントＢの化学構造はシア
ニジン−３−０−（β）−グルコシドであると判明し
た。
【００２７】また、その収量が最も高く抗酸化性も強い
ことから、黒米の保存性においてこの色素が中心的な役
割を果たしているのでないかと推測された。
ことから、黒米の保存性においてこの色素が中心的な役
割を果たしているのでないかと推測された。
【００２８】明らかになったＰｉｇｍｅｎｔＢの構造
は、抗酸化性の発見において重要視されているｏ−ディ
ヒドロキシ（ｏ−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ）タイプのフェノ
ール性水酸基をもっている。
は、抗酸化性の発見において重要視されているｏ−ディ
ヒドロキシ（ｏ−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ）タイプのフェノ
ール性水酸基をもっている。
【００２９】
【実施例３】黒米色素の抗酸化性について、リノール酸
の自動酸化による抗酸化試験を行った。反応液の組成及
び方法は実施例１と同様にした。ここでは試料溶液の濃
度を１．０ｍＭとして用いた。評価法は今までに述べた
チオシアネート法、ＴＢＡ法とウレア（Ｕｒｅａ）法を
使用した。また、比較として、α−トコフェロール、Ｂ
ＨＡの他、実施例２で構造が明らかになったピグメント
Ｂのアグリコンであるシアニジンを用いて、水溶性の差
による抗酸化の違いについても検討した。
の自動酸化による抗酸化試験を行った。反応液の組成及
び方法は実施例１と同様にした。ここでは試料溶液の濃
度を１．０ｍＭとして用いた。評価法は今までに述べた
チオシアネート法、ＴＢＡ法とウレア（Ｕｒｅａ）法を
使用した。また、比較として、α−トコフェロール、Ｂ
ＨＡの他、実施例２で構造が明らかになったピグメント
Ｂのアグリコンであるシアニジンを用いて、水溶性の差
による抗酸化の違いについても検討した。
【００３０】また、ラット肝ミクロソームを用いた抗酸
化試験についても行った。これは、ブイ、イー、ケガン
（Ｖ．Ｅ．Ｋｅｇａｎ）らの方法を引用したものであ
り、ラット肝ミクロソームに含まれる酸素がＮＡＤＰＨ
を電子供与体として鉄を還元し、生じた三価鉄により活
性酸素が生成して脂質の過酸化を引き起こすというもの
である。ラット肝ミクロソームの調整は、ラットから摘
出された肝臓に１０倍容の０．３Ｍマンニトール−０．
０１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を加え、ホモジ
ネートした後、４℃、８００g で１０分間遠心分離す
る。得られた上澄液をさらに４℃、８，０００g で２０
分間遠心分離し、その上澄液をさらに４℃、１０５，０
００g で１時間遠心分離して得られた沈澱物をミクロソ
ームとした。あらかじめ調整したミクロソームを０．１
Ｍリン酸緩衝液（Ｎａ2 ＨＰＯ4 ／ＫＨ2 ＰＯ4 ，ｐＨ
７．４）によって任意に希釈した懸濁液から０．５mlを
キャップ付スクリュー管に入れ、そこに１．０ｍＭのＮ
ＡＤＰＨ０．５ｍＭエタノール溶液とした試料を０．０
１ml加えたものを反応液とした。この反応液を３７℃の
湯浴中で３０分間インキュベートした後、直ちに氷冷
し、ウレア法によって評価した。
化試験についても行った。これは、ブイ、イー、ケガン
（Ｖ．Ｅ．Ｋｅｇａｎ）らの方法を引用したものであ
り、ラット肝ミクロソームに含まれる酸素がＮＡＤＰＨ
を電子供与体として鉄を還元し、生じた三価鉄により活
性酸素が生成して脂質の過酸化を引き起こすというもの
である。ラット肝ミクロソームの調整は、ラットから摘
出された肝臓に１０倍容の０．３Ｍマンニトール−０．
０１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を加え、ホモジ
ネートした後、４℃、８００g で１０分間遠心分離す
る。得られた上澄液をさらに４℃、８，０００g で２０
分間遠心分離し、その上澄液をさらに４℃、１０５，０
００g で１時間遠心分離して得られた沈澱物をミクロソ
ームとした。あらかじめ調整したミクロソームを０．１
Ｍリン酸緩衝液（Ｎａ2 ＨＰＯ4 ／ＫＨ2 ＰＯ4 ，ｐＨ
７．４）によって任意に希釈した懸濁液から０．５mlを
キャップ付スクリュー管に入れ、そこに１．０ｍＭのＮ
ＡＤＰＨ０．５ｍＭエタノール溶液とした試料を０．０
１ml加えたものを反応液とした。この反応液を３７℃の
湯浴中で３０分間インキュベートした後、直ちに氷冷
し、ウレア法によって評価した。
【００３１】脂質過酸化測定法として最も一般的に用い
られているＴＢＡ法は、ＭＤＡに必ずしも特異的ではな
い。そこで、ＭＤＡを特異的に検出する方法として大澤
らによって開発されたのが、このウレア法である。
られているＴＢＡ法は、ＭＤＡに必ずしも特異的ではな
い。そこで、ＭＤＡを特異的に検出する方法として大澤
らによって開発されたのが、このウレア法である。
【００３２】前記ウレア法は過酸化脂質の二次的な分解
によって生成したＭＤＡが、酸性条件下ウレアと反応し
て２−ヒドロキシピリミジンを与える。これを逆相ＨＰ
ＬＣによって定量する。この方法によるとＭＤＡの生成
を直接的に検出することができる。方法としては、反応
液１．０mlに対して２％ＢＨＴを１０μｌ、１．２Ｎの
塩素０．１ml、０．１２Ｍのウレア０．１mlを加え、よ
く攪拌し、１００℃で１時間加熱した。その後氷冷し、
Ｃ15カートリッジ処理したものを逆相ＨＰＬＣによって
分析した。
によって生成したＭＤＡが、酸性条件下ウレアと反応し
て２−ヒドロキシピリミジンを与える。これを逆相ＨＰ
ＬＣによって定量する。この方法によるとＭＤＡの生成
を直接的に検出することができる。方法としては、反応
液１．０mlに対して２％ＢＨＴを１０μｌ、１．２Ｎの
塩素０．１ml、０．１２Ｍのウレア０．１mlを加え、よ
く攪拌し、１００℃で１時間加熱した。その後氷冷し、
Ｃ15カートリッジ処理したものを逆相ＨＰＬＣによって
分析した。
【００３３】まず、チオシアネート法により経時的に脂
質過酸化度を測定した結果を図６に示した。この結果、
ピグメントＢとそのアグリコンは常に高い抗酸化性を示
していた。次に、３通りの評価法による結果を図５、
６、７に示した。ロダン鉄法が６１時間後、ＴＢＡ法と
ウレア法が１９２時間後のものである。どの結果からも
ピグメントＢには強い抗酸化性が確認された。
質過酸化度を測定した結果を図６に示した。この結果、
ピグメントＢとそのアグリコンは常に高い抗酸化性を示
していた。次に、３通りの評価法による結果を図５、
６、７に示した。ロダン鉄法が６１時間後、ＴＢＡ法と
ウレア法が１９２時間後のものである。どの結果からも
ピグメントＢには強い抗酸化性が確認された。
【００３４】ラットのミクロソーム抗酸化試験でも、ピ
グメントＢ及びサイアニディンは強い抗酸化性を示した
（図８）。
グメントＢ及びサイアニディンは強い抗酸化性を示した
（図８）。
【００３５】
【発明の作用、効果】４種類の有色米から得られた色素
粗抽出物は、どれもリノール酸を基質とした自動酸化の
系において強い抑制効果を示したが、その中でもインデ
ィカタイプの黒米中に、強い抗酸化性を持つ色素が単離
された。
粗抽出物は、どれもリノール酸を基質とした自動酸化の
系において強い抑制効果を示したが、その中でもインデ
ィカタイプの黒米中に、強い抗酸化性を持つ色素が単離
された。
【００３６】機器分析によってその化学構造を検討した
ところ、シアニジン−３−０−（β）−グロコシドと同
定された。この物質は、構造的にはフラボノイド骨格及
びｏ−デヒドロキシタイプのフェノール性水酸基をもっ
ている。フラボノイド類縁体には、既にいくつもの抗酸
化活性を示すものが明らかにされているほか、ｏ−デヒ
ドロキシ構造はその金属に対するキレート効果によって
脂質の過酸化に抑制的に働くものと認められた。
ところ、シアニジン−３−０−（β）−グロコシドと同
定された。この物質は、構造的にはフラボノイド骨格及
びｏ−デヒドロキシタイプのフェノール性水酸基をもっ
ている。フラボノイド類縁体には、既にいくつもの抗酸
化活性を示すものが明らかにされているほか、ｏ−デヒ
ドロキシ構造はその金属に対するキレート効果によって
脂質の過酸化に抑制的に働くものと認められた。
【００３７】また、いくつかのモデル系を用いてその抗
酸化性について検討を行ったところ、食品モデル系のみ
ならず生体モデル系においても強い抗酸化性効果がみら
れた。
酸化性について検討を行ったところ、食品モデル系のみ
ならず生体モデル系においても強い抗酸化性効果がみら
れた。
【図１】各種米種子の保存期間（室温３７℃）と発芽率
低下との相関性グラフ。
低下との相関性グラフ。
【図２】リノール酸系における米種子粗抽出物の抗酸化
活性を示すグラフ（チオシアネート法）。
活性を示すグラフ（チオシアネート法）。
【図３】リノール酸系における米種子粗抽出物の抗酸化
活性を示すグラフ（ＴＢＡ法）。
活性を示すグラフ（ＴＢＡ法）。
【図４】リノール酸系における米種子色素の抗酸化活性
を示すグラフ（チオシアネート法）。
を示すグラフ（チオシアネート法）。
【図５】リノール酸系における米種子色素の抗酸化活性
を示すグラフ（チオシアネート法）。
を示すグラフ（チオシアネート法）。
【図６】リノール酸系における米種子色素の抗酸化活性
を示すグラフ（ＴＢＡ法）。
を示すグラフ（ＴＢＡ法）。
【図７】リノール酸系における米種子色素の抗酸化活性
を示すグラフ（ウレア法によるＭＤＡ量定量）。
を示すグラフ（ウレア法によるＭＤＡ量定量）。
【図８】ラット肝ミクロゾーム系における米種子色素の
抗酸化活性を示すグラフ（ウレア法によるＭＤＡ量定
量）。
抗酸化活性を示すグラフ（ウレア法によるＭＤＡ量定
量）。
Claims (3)
- 【請求項１】 次の 【化１】 で示すシアニジン−３−０−（β）−グルコシドを有効
成分とする天然物を原料とした抗酸化剤。 - 【請求項２】 シアニジン−３−０−（β）−グルコシ
ド含有の植物を粉砕し、脱脂した後、濾過して、その残
渣に溶媒を加えて得た抽出物を減圧濃縮することを特徴
とした天然物を原料とした抗酸化剤の製造方法。 - 【請求項３】 シアニジン−３−０−（β）−グルコシ
ド含有の植物を、黒米、赤米、黒豆又はブルーベリーと
することを特徴とした請求項２記載の天然物を原料とし
た抗酸化剤の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5087896A JPH06271850A (ja) | 1993-03-23 | 1993-03-23 | 天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5087896A JPH06271850A (ja) | 1993-03-23 | 1993-03-23 | 天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06271850A true JPH06271850A (ja) | 1994-09-27 |
Family
ID=13927659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5087896A Pending JPH06271850A (ja) | 1993-03-23 | 1993-03-23 | 天然物を原料とした抗酸化剤およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06271850A (ja) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0713706A2 (en) * | 1994-11-28 | 1996-05-29 | Suntory Limited | Lipoprotein (a) lowering agent, cholesterol lowering agent and medicaments comprising these agents respectively |
| WO2000033667A3 (en) * | 1998-12-11 | 2000-08-31 | Univ Michigan State | Bioflavonoids, anthocyanins and phenol compounds from cherries as antioxidants |
| WO2001052809A1 (de) * | 2000-01-19 | 2001-07-26 | Cognis France, S.A. | Kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitungen enthaltend eine wirksame menge eines extraktes von arrabidaea chica |
| WO2003064538A1 (fr) * | 2002-02-01 | 2003-08-07 | San-Ei Gen F.F.I., Inc. | Couleur de mais rouge purifiee et procede de preparation de celle-ci |
| KR100441927B1 (ko) * | 1998-12-11 | 2004-07-30 | 미시간 스테이트 유니버시티 | 체리 단리물을 포함하는 뉴트라슈티칼 또는 파이토슈티칼의 잇점을 제공하는 배합물 |
| WO2006076387A2 (en) * | 2005-01-11 | 2006-07-20 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention | Cyanidin-3-glucoside as an anti-neoplastic agent |
| JP2006520804A (ja) * | 2003-03-21 | 2006-09-14 | ケー２エイ インコーポレイテッド | ジュカラ及びアサイ果実ベースの健康補助食品 |
| EP1617837A4 (en) * | 2003-04-04 | 2008-08-06 | Tg Biotech Corp | COMPOSITION FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF ALLERGIC DISEASES, COMPRISING A BLACK RICE EXTRACT AND THE THERAPEUTIC USE THEREOF |
| CN102659870A (zh) * | 2012-04-24 | 2012-09-12 | 哈尔滨工业大学 | 蓝靛果花色苷的提取方法 |
| CN102659871A (zh) * | 2012-05-08 | 2012-09-12 | 魏有良 | 一种黑米中花色苷的提取精制方法 |
| WO2013058194A1 (ja) * | 2011-10-17 | 2013-04-25 | 花王株式会社 | Ｓｒｆシグナル活性化剤 |
| JP2013249265A (ja) * | 2012-05-30 | 2013-12-12 | Bloom Classic Co Ltd | 美白剤及び皮膚化粧料 |
-
1993
- 1993-03-23 JP JP5087896A patent/JPH06271850A/ja active Pending
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| EP0713706A2 (en) * | 1994-11-28 | 1996-05-29 | Suntory Limited | Lipoprotein (a) lowering agent, cholesterol lowering agent and medicaments comprising these agents respectively |
| KR100441927B1 (ko) * | 1998-12-11 | 2004-07-30 | 미시간 스테이트 유니버시티 | 체리 단리물을 포함하는 뉴트라슈티칼 또는 파이토슈티칼의 잇점을 제공하는 배합물 |
| WO2000033667A3 (en) * | 1998-12-11 | 2000-08-31 | Univ Michigan State | Bioflavonoids, anthocyanins and phenol compounds from cherries as antioxidants |
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| US7192456B2 (en) | 2002-02-01 | 2007-03-20 | San-Ei Gen F.F.I., Inc., | Method of preparing a purified purple corn coloring agent |
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| WO2013058194A1 (ja) * | 2011-10-17 | 2013-04-25 | 花王株式会社 | Ｓｒｆシグナル活性化剤 |
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| JP2013249265A (ja) * | 2012-05-30 | 2013-12-12 | Bloom Classic Co Ltd | 美白剤及び皮膚化粧料 |
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