JP5190926B2 - ツバキ由来のアントシアニン色素、その製造方法及び用途、並びにツバキの品種識別方法 - Google Patents
ツバキ由来のアントシアニン色素、その製造方法及び用途、並びにツバキの品種識別方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5190926B2 JP5190926B2 JP2007302353A JP2007302353A JP5190926B2 JP 5190926 B2 JP5190926 B2 JP 5190926B2 JP 2007302353 A JP2007302353 A JP 2007302353A JP 2007302353 A JP2007302353 A JP 2007302353A JP 5190926 B2 JP5190926 B2 JP 5190926B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- camellia
- cyanidin
- dye
- meoh
- glucopyranoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 240000001548 Camellia japonica Species 0.000 title claims description 125
- 235000018597 common camellia Nutrition 0.000 title claims description 114
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 title claims description 106
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 title claims description 106
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 title claims description 106
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 title claims description 106
- 239000000049 pigment Substances 0.000 title claims description 84
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 17
- 241000209507 Camellia Species 0.000 title 1
- VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O cyanidin cation Chemical group [O+]=1C2=CC(O)=CC(O)=C2C=C(O)C=1C1=CC=C(O)C(O)=C1 VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 288
- 235000007336 cyanidin Nutrition 0.000 claims description 144
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 50
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 35
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 32
- -1 (Z) -p-coumaroyl group Chemical group 0.000 claims description 23
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 22
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- ZCHPKWUIAASXPV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;methanol Chemical group OC.CC(O)=O ZCHPKWUIAASXPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- 241001343484 Camellia hongkongensis Species 0.000 claims description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- 241001552456 Camellia salicifolia Species 0.000 claims description 5
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 221
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 131
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 108
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 75
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 40
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 20
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 19
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 17
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 17
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 14
- 241000894007 species Species 0.000 description 14
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 13
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 12
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 12
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 9
- NGSWKAQJJWESNS-UHFFFAOYSA-N 4-coumaric acid Chemical compound OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C=C1 NGSWKAQJJWESNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 8
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 8
- 241001343471 Camellia saluenensis Species 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 7
- RKWHWFONKJEUEF-WVXKDWSHSA-O cyanidin 3-O-beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC2=C(O)C=C(O)C=C2[O+]=C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 RKWHWFONKJEUEF-WVXKDWSHSA-O 0.000 description 7
- KBXQNJOPXCACPY-UHFFFAOYSA-N formic acid methanol 2,2,2-trifluoroacetic acid hydrate Chemical compound O.OC.OC=O.OC(=O)C(F)(F)F KBXQNJOPXCACPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 6
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 5
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 5
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 4
- 240000006846 Camellia reticulata Species 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000033826 Promyelocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 4
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 4
- KSZVHVUMUSIKTC-UHFFFAOYSA-N acetic acid;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CC(O)=O KSZVHVUMUSIKTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 4
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 4
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 3
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 3
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 3
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 3
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 3
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 3
- 235000000658 Camellia reticulata Nutrition 0.000 description 2
- 240000006833 Camellia sasanqua Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001354471 Pseudobahia Species 0.000 description 2
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101150093411 ZNF143 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000003898 horticulture Methods 0.000 description 2
- FUKUFMFMCZIRNT-UHFFFAOYSA-N hydron;methanol;chloride Chemical compound Cl.OC FUKUFMFMCZIRNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000000972 4,5-dimethylthiazol-2-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C1=C(N=C(*)S1)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- GPDIKHKTFOIWTN-UHFFFAOYSA-N 5,5-diphenyltetrazol-1-ium bromide Chemical compound Br.C1=CC=C(C=C1)C1(N=NN=N1)C1=CC=CC=C1 GPDIKHKTFOIWTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 235000015911 Amorpha canescens Nutrition 0.000 description 1
- 229910000906 Bronze Inorganic materials 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 0 CC1*(C)C(*)=C(*)*1C Chemical compound CC1*(C)C(*)=C(*)*1C 0.000 description 1
- 235000006467 Camellia japonica Nutrition 0.000 description 1
- 241001449794 Camellia mairei Species 0.000 description 1
- 241001343472 Camellia pitardii Species 0.000 description 1
- 235000002537 Camellia sasanqua Nutrition 0.000 description 1
- 241000772925 Camellia semiserrata Species 0.000 description 1
- 244000107780 Capraria biflora Species 0.000 description 1
- 241000247673 Clusia rosiflora Species 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- GCPYCNBGGPHOBD-UHFFFAOYSA-N Delphinidin Natural products OC1=Cc2c(O)cc(O)cc2OC1=C3C=C(O)C(=O)C(=C3)O GCPYCNBGGPHOBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 240000001238 Gaultheria procumbens Species 0.000 description 1
- 235000007297 Gaultheria procumbens Nutrition 0.000 description 1
- 241001316290 Gypsophila Species 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 235000007328 Hericium erinaceus Nutrition 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 241000692870 Inachis io Species 0.000 description 1
- 206010022653 Intestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 235000013629 Lippia javanica Nutrition 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- PUNHZJWPGLILKR-UHFFFAOYSA-N O.OC=O.CCOC=O Chemical compound O.OC=O.CCOC=O PUNHZJWPGLILKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMGPPHIYXLVZFF-UHFFFAOYSA-N OC=O.CCOC=O.C1=CC=CC=C1 Chemical compound OC=O.CCOC=O.C1=CC=CC=C1 CMGPPHIYXLVZFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000241413 Propolis Species 0.000 description 1
- 241000208422 Rhododendron Species 0.000 description 1
- 235000010394 Solidago odora Nutrition 0.000 description 1
- 241001062811 Stewartia malacodendron Species 0.000 description 1
- 244000223014 Syzygium aromaticum Species 0.000 description 1
- 235000016639 Syzygium aromaticum Nutrition 0.000 description 1
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000010974 bronze Substances 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 239000010495 camellia oil Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 210000003764 chromatophore Anatomy 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- KUNSUQLRTQLHQQ-UHFFFAOYSA-N copper tin Chemical compound [Cu].[Sn] KUNSUQLRTQLHQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- JKHRCGUTYDNCLE-UHFFFAOYSA-O delphinidin Chemical compound [O+]=1C2=CC(O)=CC(O)=C2C=C(O)C=1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 JKHRCGUTYDNCLE-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 235000007242 delphinidin Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124645 emergency medicine Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- AKPUJVVHYUHGKY-UHFFFAOYSA-N hydron;propan-2-ol;chloride Chemical compound Cl.CC(C)O AKPUJVVHYUHGKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940069949 propolis Drugs 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
特許文献9には、ツバキの花を発酵させることによってツバキ茶を製造する方法が開示されている。
(10)抽出溶媒が酢酸−メタノール混合溶媒である前記(4)〜(9)のいずれかに記載の製造方法。
(12)高速液体クロマトグラフィー法によりアントシアニン色素の組成を分析する前記(11)に記載のツバキの品種識別方法。
(14)ツバキの花又は花弁の抽出物又はその精製物を含有する抗酸化剤。
(16)ツバキの花又は花弁の抽出物又はその精製物を含有する抗癌剤。
(17)ツバキの花又は花弁の抽出物の精製物が単離・精製されたアントシアニン色素である前記(16)に記載の抗癌剤。
本発明に係るツバキの花又は花弁の抽出物(以下「ツバキ色素抽出物」という。)は、ツバキ、好ましくは紅花ツバキの花弁又は花を溶媒抽出に供することで得ることができる。例えば、ツバキの花弁を、酢酸と低級アルコール(例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、好ましくはメタノール)の1〜1.5対1、好ましくは1対1(容量比)で混合した溶媒を用いた抽出に供し、これを1回又は数回(例えば3回)繰り返すことでツバキ色素抽出物を得ることができる。
(1)花弁から色素の抽出と単離、精製の方法
トウツバキから花弁を採集した。採集した花弁は、褐変を防ぐため熱湯に3〜5秒間浸漬し、ポリフェノールオキシダーゼなどの酵素を死活させた。浸漬後、花弁を室温で乾燥させた。乾燥花弁2kgに、酢酸とメタノールを1対1で混合した溶液(50%酢酸−メタノール)12Lを加え、20〜25℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を5%酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルCHP−20P(MCI gel CHP−20P、三菱化学株式会社、Mitsubishi Chemical Corporation)、セファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)、クロマトレックスODS(Chromatorex ODS、富士シリシア化学株式会社、Fuji Silysia Chemical LTD.)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を10%ずつ増やすことによって、MCIgelのカラム(以下MCIカラム)−Sephadex LH−20カラム−ODSカラムの順番で各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、C液として5%酢酸−アセトン(アセトンに酢酸を5%量加えたもの)を用い、C液からA液の含量を2%ずつ増やすことによってクロマトグラフィーを行った。最後に、Sephadex LH−20カラムとODSカラムを用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を5%ずつ増やすことを繰り返した。
単離・精製したアントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル(1H-Nuclear magnetic resonance [NMR] spectrum)を測定した。測定装置は、JNM-ECA600型核磁気共鳴装置(JEOL JNM-ECA600KS、日本電子データム株式会社、JEOL DATUM LTD.)を用いた。測定は、CD3ODとCF3COODの9対1混合溶液を用いて行った。その結果を表1及び表2に示す。表中の数値はデルタ(δ、ppm)で示す。また、二番目に表された数値は、カップリング定数(J値)を示している。表中の記号で、brは、broad、sはsinglet、dはdoublet、ddはdouble doublet、dddはdouble double doublet、tはtriplet、mはmultipletを示す。
色素(1):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 282 (4.31), 379 (3.10), 538 (3.47); 0.01% HCl-MeOH: 282 (4.37), 332 (3.68), 530 (4.59); AlCl3−MeOH: 289 (4.40), 312 (4.00), 411 (3.81), 564 (4.62)。
色素(2):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.51), 311sh (4.40), 553 (3.18); 0.01% HCl-MeOH: 284 (4.53), 314 (4.40), 530 (4.54); AlCl3−MeOH: 289 (4.46), 313 (4.49), 570 (4.61)。
色素(3):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.58), 311sh (4.48), 553 (3.25); 0.01% HCl-MeOH: 284 (4.60), 314 (4.48), 530 (4.61); AlCl3−MeOH: 289 (4.53), 313 (4.56), 570 (4.69)。
色素(4):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.61), 331 (4.46), 532 (4.53); 0.01% HCl-MeOH: 284 (4.65), 330 (4.50), 530 (4.69); AlCl3−MeOH: 289 (4.48), 314 (4.47), 349 (4.49), 571 (4.75)。
色素(6):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.04), 311sh(4.17), 538 (3.55); 0.01% HCl−MeOH: 283 (4.08), 332 (3.64), 530 (4.19); AlCl3−MeOH: 288 (3.99), 313 (3.94), 571 (4.28)。
色素(7):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.30), 308sh (4.19), 531 (3.89); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.33), 311 (4.17), 375sh (3.58), 530 (4.35); AlCl3−MeOH: 289 (4.26), 311 (4.27), 411 (3.70), 573 (4.44)。
色素(8):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.49), 311sh (4.39), 553 (3.17); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.51), 314 (4.39), 530 (4.52); AlCl3−MeOH: 289 (4.45), 313 (4.47), 570 (4.60)。
色素(9):赤色無晶形粉末、 UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.61), 331 (4.46), 532 (4.53); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.65), 330 (4.50), 530 (4.69); AlCl3−MeOH: 289 (4.48), 314 (4.47), 349 (4.49), 571 (4.75)。
色素(10):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 282 (4.12), 333 (3.26), 530 (4.27); 0.01% HCl-MeOH: 282 (4.19), 332 (3.40), 530 (4.42); AlCl3−MeOH: 287sh (4.00), 313 (3.82), 409 (3.57), 570 (4.50)。
色素(15):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 283 (4.00), 311sh (3.22), 530 (3.08); 0.01% HCl−MeOH: 282 (4.54), 331 (3.97), 529 (4.74); AlCl3−MeOH: 272 (4.43), 312 (4.24), 571 (4.85)。
色素(1):ESI−MS (m/z): 581.37 M+ (Calcd for C26H29O15 581.41)。
色素(2):ESI−MS (m/z): 727.37 M+ (Calcd for C35H35O17 727.53)。
色素(3):ESI−MS (m/z): 727.38 M+ (Calcd for C35H35O17 727.53)。
色素(4):ESI−MS (m/z): 743.35 M+ (Calcd for C35H35O18 743.53)。
色素(6):ESI−MS (m/z): 449.21 M+ (Calcd for C21H21O11 449.31)。
色素(7):ESI−MS (m/z): 595.19 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(8):ESI−MS (m/z): 595.14 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(9):ESI−MS (m/z): 611.22 M+ (Calcd for C30H27O14 611.44)。
色素(10):ESI−MS (m/z): 581.18 M+ (Calcd for C26H29O15 581.41)。
色素(15):ESI−MS (m/z): 449.23 M+ (Calcd for C21H21O11 449.31)。
以上の結果、理論値と測定値がよく一致した。
(1)花弁から色素の抽出と単離、精製の方法
ホンコンツバキから花弁を採集した。採集した花弁10kgに直接、酢酸とメタノールを1対1で混合した溶液(50%酢酸−メタノール)20Lを加え、20〜25℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を5%酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルCHP−20P(MCI gel CHP−20P、三菱化学株式会社、Mitsubishi Chemical Corporation)、セファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)、クロマトレックスODS(Chromatorex ODS、富士シリシア化学株式会社、Fuji Silysia Chemical LTD.)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を10%ずつ増やすことによって、MCIgelのカラム(以下MCIカラム)−Sephadex LH−20カラム−ODSカラムの順番で各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、C液として5%酢酸−アセトン(アセトンに酢酸を5%量加えたもの)を用い、C液からA液の含量を2%ずつ増やすことによってクロマトグラフィーを行った。最後に、Sephadex LH−20カラムとODSカラムを用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を5%ずつ増やすことを繰り返した。これらのオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、アントシアニン色素として、cyanidin 3−O−β−glucopyranoside(6)、cyanidin 3−O−(6−O−(Z)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(7)、cyanidin 3−O−(6−O−(E)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(8)、cyanidin 3−O−(6−O−(E)−caffeoyl)−β−glucopyranoside(9)、cyanidin 3−O−β−galactopyranoside(15)、cyanidin 3−O−(6−O−(Z)−p−coumaroyl)−β−galactopyranoside(16)、cyanidin 3−O−(6−O−(E)−p−coumaroyl)−β−galactopyranoside(17)、cyanidin 3−O−(6−O−(E)−caffeoyl)−β−galactopyranoside(18)、delphinidin 3−O−β−glucopyranoside(19)、delphinidin 3−O−(6−O−(Z)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(20)、delphinidin 3−O−(6−O−(E)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(21)、delphinidin 3−O−(6−O−(E)−caffeoyl)−β−glucopyranoside(22)を単離及び精製した(図2)。単離及び精製したアントシアニン色素のうち、(16)、(17)、(18)は新規な色素である(図2)。
単離・精製したアントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル(1H-Nuclear magnetic resonance [NMR] spectrum)を測定した。測定装置は、JNM-ECA600型核磁気共鳴装置(JEOL JNM-ECA600KS、日本電子データム株式会社、JEOL DATUM LTD.)を用いた。測定は、CD3ODとCF3COODの9対1混合溶液を用いて行った。その結果を表4〜表6に示す。表中の数値はデルタ(δ、ppm)で示す。また、二番目に表された数値は、カップリング定数(J値)を示している。表中の記号で、brは、broad、sはsinglet、dはdoublet、ddはdouble doublet、dddはdouble double doublet、tはtriplet、mはmultipletを示す。
色素(6):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.04), 311sh (4.17), 538 (3.55); 0.01% HCl−MeOH: 283 (4.08), 332 (3.64), 530 (4.19); AlCl3−MeOH: 288 (3.99), 313 (3.94), 571 (4.28)。
色素(7):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.30), 308sh (4.19), 531 (3.89); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.33), 311 (4.17), 375sh (3.58), 530 (4.35); AlCl3−MeOH: 289 (4.26), 311 (4.27), 411 (3.70), 573 (4.44)。
色素(8):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.49), 311sh(4.39), 553 (3.17); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.51), 314 (4.39), 530 (4.52); AlCl3−MeOH: 289 (4.45), 313 (4.47), 570 (4.60)。
色素(9):赤色無晶形粉末、 UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.61), 331 (4.46), 532 (4.53); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.65), 330 (4.50), 530 (4.69); AlCl3−MeOH: 289 (4.48), 314 (4.47), 349 (4.49), 571 (4.75)。
色素(15):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 283 (4.00), 311sh (3.22), 530 (3.08); 0.01% HCl−MeOH: 282 (4.54), 331 (3.97), 529 (4.74); AlCl3−MeOH: 272 (4.43), 312 (4.24), 571 (4.85)。
色素(16):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.26), 309 (4.14), 531 (4.06); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.28), 310 (4.15), 530 (4.28); AlCl3−MeOH: 289 (4.25), 313 (4.27), 405 (3.66), 571 (4.39)。
色素(17):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.29), 311sh (4.19), 531 (4.10); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.31), 312 (4.19), 530 (4.32); AlCl3−MeOH: 289 (4.25), 313 (4.26), 401 (3.54), 558 (4.32)。
色素(18):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.27), 330 (4.14), 531 (4.00); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.30), 330 (4.18), 531 (4.29); AlCl3−MeOH: 287 (4.13), 312 (4.13), 351 (4.16), 569 (4.38)。
色素(19):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 281 (3.96), 319sh (3.16), 544 (4.37); 0.01% HCl−MeOH: 278 (4.08), 333 (4.46), 542 (4.35); AlCl3−MeOH: 277 (4.03), 318 (3.68), 580 (4.41)。
色素(20):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.32), 308 (3.84), 545 (3.04); 0.01% HCl−MeOH: 285 (4.32), 300 (4.25), 545 (4.16); AlCl3−MeOH: 288 (4.32), 315 (4.27), 586 (4.25)。
色素(21):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.28), 307 (4.24), 544 (3.79); 0.01% HCl−MeOH: 283 (4.31), 299 (4.26), 542 (4.36); AlCl3−MeOH: 288 (4.27), 315 (4.27), 584 (4.43)。
色素(22):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.05), 318sh (3.90), 329 (3.94), 548 (3.74); 0.01% HCl−MeOH: 282 (4.11), 317sh (3.94), 332 (3.98), 544 (4.20); AlCl3−MeOH: 285 (4.00), 329sh (4.01), 350 (4.06), 587 (4.26)。
色素(6):ESI−MS (m/z): 449.21 M+ (Calcd for C21H21O11 449.31)。
色素(7):ESI−MS (m/z): 595.19 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(8):ESI−MS (m/z): 595.14 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(9):ESI−MS (m/z): 611.22 M+ (Calcd for C30H27O14 611.44)。
色素(15):ESI−MS (m/z): 449.23 M+ (Calcd for C21H21O11 449.31)。
色素(16):ESI−MS (m/z): 595.19 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(17):ESI−MS (m/z): 595.17 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(18):ESI−MS (m/z): 611.39 M+ (Calcd for C30H27O14 611.44)。
色素(19):ESI−MS (m/z): 465.23 M+ (Calcd for C21H21O12 465.31)。
色素(20):ESI−MS (m/z): 611.35 M+ (Calcd for C30H27O14 611.44)。
色素(21):ESI−MS (m/z): 611.22 M+ (Calcd for C30H27O14 611.44)。
色素(22):ESI−MS (m/z): 627.37 M+ (Calcd for C30H27O15 627.43)。
以上の結果、理論値と測定値がよく一致した。
(1)花弁から色素の抽出と単離、精製の方法
サルウィンツバキから花弁を採集した。採集した花弁は、褐変を防ぐため熱湯に3〜5秒間浸漬し、ポリフェノールオキシダーゼなどの酵素を死活させた。浸漬後、花弁を室温で乾燥させた。乾燥花弁3kgに、酢酸とメタノールを1対1で混合した溶液(50%酢酸−メタノール)13Lを加え、20〜25℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を5%酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルCHP−20P(MCI gel CHP−20P、三菱化学株式会社、Mitsubishi Chemical Corporation)、セファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)、クロマトレックスODS(Chromatorex ODS、富士シリシア化学株式会社、Fuji Silysia Chemical LTD.)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を10%ずつ増やすことによって、MCIgelのカラム(以下MCIカラム)−Sephadex LH−20カラム−ODS カラムの順番で各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、C液として5%酢酸−アセトン(アセトンに酢酸を5%量加えたもの)を用い、C液からA液の含量を2%ずつ増やすことによってクロマトグラフィーを行った。次いで、Sephadex LH−20カラムとODSカラムを用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を5%ずつ増やすことを繰り返した。これらのオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、アントシアニン色素として、cyanidin 3−O−β−glucopyranoside(6)、cyanidin 3−O−(6−O−(Z)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(7)、cyanidin 3−O−(6−O−(E)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(8)、cyanidin 3,5−di−O−β−glucopyranoside(23)、cyanidin 3−O−(6−O−(Z)−p−coumaroyl−β−glucopyranoside)−5−β−glucopyranoside(24)、cyanidin 3−O−(6−O−(E)−p−coumaroyl−β−glucopyranoside)−5−β−glucopyranoside(25)を単離及び精製した(図3)。
単離・精製したアントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル(1H-Nuclear magnetic resonance [NMR] spectrum)を測定した。測定装置は、JNM-ECA600型核磁気共鳴装置(JEOL JNM-ECA600KS、日本電子データム株式会社、JEOL DATUM LTD.)を用いた。測定は、CD3ODとCF3COODの9対1混合溶液を用いて行った。その結果を表10及び表11に示す。表中の数値はデルタ(δ、ppm)で示す。また、二番目に表された数値は、カップリング定数(J値)を示している。表中の記号で、brは、broad、sはsinglet、dはdoublet、ddはdouble doublet、dddはdouble double doublet、tはtriplet、mはmultipletを示す。
色素(6):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.04), 311sh (4.17), 538 (3.55); 0.01% HCl−MeOH: 283 (4.08), 332 (3.64), 530 (4.19); AlCl3−MeOH: 288 (3.99), 313 (3.94), 571 (4.28)。
色素(7):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.30), 308sh (4.19), 531 (3.89); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.33), 311 (4.17), 375sh (3.58), 530 (4.35); AlCl3−MeOH: 289 (4.26), 311 (4.27), 411 (3.70), 573 (4.44)。
色素(8):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.49), 311sh (4.39), 553 (3.17); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.51), 314 (4.39), 530 (4.52); AlCl3−MeOH: 289 (4.45), 313 (4.47), 570 (4.60)。
色素(23):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 282 (3.14), 311sh (1.89), 527 (2.71); 0.01% HCl−MeOH: 279 (3.14), 331 (2.49), 526 (3.43); AlCl3−MeOH: 284sh (2.97), 313 (2.82), 452 (2.64), 570 (3.44)。
色素(24):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 286 (4.27), 317sh (4.09), 531 (2.58); 0.01% HCl−MeOH: 281 (4.25), 294 (4.22), 530 (4.34); AlCl3−MeOH: 281 (4.19), 312 (4.21), 421 (3.68), 571 (4.37)。
色素(25):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.56), 311sh(4.46), 553 (3.23); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.58), 314 (4.46), 530 (4.59); AlCl3−MeOH: 289 (4.51), 313 (4.54), 570 (4.67)。
色素(6):ESI−MS (m/z): 449.21 M+ (Calcd for C21H21O11 449.31)。
色素(7):ESI−MS (m/z): 595.19 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(8):ESI−MS (m/z): 595.14 M+ (Calcd for C30H27O13 595.44)。
色素(23):ESI−MS (m/z): 611.39 M+ (Calcd for C27H31O16 611.43)。
色素(24):ESI−MS (m/z): 757.44 M+ (Calcd for C36H37O18 757.55)。
色素(25):ESI−MS (m/z): 757.44 M+ (Calcd for C36H37O18 757.55)。
以上の結果、理論値と測定値がよく一致した。
(1)花弁から色素の抽出と単離、精製の方法
園芸品種ツバキから花弁を採集した。採集した花弁は、褐変を防ぐため熱湯に3〜5秒間浸漬し、ポリフェノールオキシダーゼなどの酵素を死活させた。浸漬後、花弁を室温で乾燥させた。乾燥花弁2kgに、酢酸とメタノールを1対1で混合した溶液(50%酢酸−メタノール)11Lを加え、20〜25℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を5%酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルCHP−20P(MCI gel CHP−20P、三菱化学株式会社、Mitsubishi Chemical Corporation)、セファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)、クロマトレックスODS(Chromatorex ODS、富士シリシア化学株式会社、Fuji Silysia Chemical LTD.)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を10%ずつ増やすことによって、MCIgelのカラム(以下MCIカラム)−Sephadex LH−20カラム−ODSカラムの順番で各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスLH−20(Sephadex LH−20、GE Healthcare Biosciences AB)を用い、移動相にA液として5%酢酸水溶液、C液として5%酢酸−アセトン(アセトンに酢酸を5%量加えたもの)を用い、C液からA液の含量を増やすことによってクロマトグラフィーを行った。これらのオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、アントシアニン色素として、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl)−β−glucopyranoside(1)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(Z)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(2)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(E)−p−coumaroyl)−β−glucopyranoside(3)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(E)−caffeoyl)−β−glucopyranoside(4)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−acetyl)−β−glucopyranoside(5)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl)−β−galactopyranoside(10)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(Z)−p−coumaroyl)−β−galactopyranoside(11)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(E)−p−coumaroyl)−β−galactopyranoside(12)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(E)−caffeoyl)−β−galactopyranoside(13)、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−acetyl)−β−galactopyranoside(14)を単離及び精製した(図4)。単離及び精製したアントシアニン色素のうち、(5)、(11)〜(14)は新規な色素である(図4)。
単離・精製したアントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル(1H-Nuclear magnetic resonance [NMR] spectrum)を測定した。測定装置は、JNM-ECA600型核磁気共鳴装置(JEOL JNM-ECA600KS、日本電子データム株式会社、JEOL DATUM LTD.)を用いた。測定は、CD3ODとCF3COODの9対1混合溶液を用いて行った。その結果を表13及び表14に示す。表中の数値はデルタ(δ、ppm)で示す。また、二番目に表された数値は、カップリング定数(J値)を示している。表中の記号で、brは、broad、sはsinglet、dはdoublet、ddはdouble doublet、dddはdouble double doublet、tはtriplet、mはmultipletを示す。
色素(1):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 282 (4.31), 379 (3.10), 538 (3.47); 0.01% HCl-MeOH: 282 (4.37), 332 (3.68), 530 (4.59); AlCl3−MeOH: 289 (4.40), 312 (4.00), 411 (3.81), 564 (4.62)。
色素(2):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.51), 311sh (4.40), 553 (3.18); 0.01% HCl-MeOH: 284 (4.53), 314 (4.40), 530 (4.54); AlCl3−MeOH: 289 (4.46), 313 (4.49), 570 (4.61)。
色素(3):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 284 (4.58), 311sh (4.48), 553 (3.25); 0.01% HCl-MeOH: 284 (4.60), 314 (4.48), 530 (4.61); AlCl3−MeOH: 289 (4.53), 313 (4.56), 570 (4.69)。
色素(4):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.61), 331 (4.46), 532 (4.53); 0.01% HCl-MeOH: 284 (4.65), 330 (4.50), 530 (4.69); AlCl3−MeOH: 289 (4.48), 314 (4.47), 349 (4.49), 571 (4.75)。
色素(5):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 283 (4.17), 340 (3.22), 361 (3.25), 531 (3.58); 0.01% HCl-MeOH: 283 (4.22), 336 (3.56)), 382 (3.65), 531 (4.45); AlCl3−MeOH: 286 (4.09), 313 (3.89), 409 (3.71), 570 (4.52)。
色素(10):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 282 (4.12), 333 (3.26), 530 (4.27); 0.01% HCl-MeOH: 282 (4.19), 332 (3.40), 530 (4.42); AlCl3−MeOH: 287sh (4.00), 313 (3.82), 409 (3.57), 570 (4.50)。
色素(11):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.39), 313sh(4.22), 534 (4.38); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.41), 311 (4.23), 534 (4.48); AlCl3−MeOH: 289 (4.32), 311 (4.31), 405 (3.80), 574 (4.57)。
色素(12):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.22), 308sh (4.12), 535 (3.36); 0.01% HCl-MeOH: 284 (4.24), 312 (4.12), 531 (4.25); AlCl3−MeOH: 290 (4.18), 313 (4.20), 407 (3.46), 571 (4.33)。
色素(13):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 285 (4.30), 330 (4.12), 532 (3.40); 0.01% HCl−MeOH: 284 (4.32), 331 (4.18), 531 (4.40); AlCl3−MeOH: 289 (4.12), 315 (4.12), 355 (4.18), 567 (4.48)。
色素(14):赤色無晶形粉末、UV−vis λmax MeOH (nm) (log ε): 283 (4.10), 347 (3.29), 550 (2.99); 0.01% HCl−MeOH: 283 (4.14), 335 (3.55), 381 (3.56), 531 (4.36); AlCl3−MeOH: 287 (3.97), 312 (3.79), 403 (3.63), 572 (4.43)。
色素(1):ESI−MS (m/z): 581.37 M+ (Calcd for C26H29O15 581.41)。
色素(2):ESI−MS (m/z): 727.37 M+ (Calcd for C35H35O17 727.53)。
色素(3):ESI−MS (m/z): 727.38 M+ (Calcd for C35H35O17 727.53)。
色素(4):ESI−MS (m/z): 743.35 M+ (Calcd for C35H35O18 743.53)。
色素(5):ESI−MS (m/z): 623.25 M+ (Calcd for C28H31O16 623.44)。色素(10):ESI−MS (m/z): 582.22 [M+H]+ (Calcd for C26H29O15 581.41)。
色素(11):ESI−MS (m/z): 727.37 M+ (Calcd for C35H35O17 727.53)。
色素(12):ESI−MS (m/z): 727.32 M+ (Calcd for C35H35O17 727.53)。
色素(13):ESI−MS (m/z): 743.48 M+ (Calcd for C35H35O18 743.53)。
色素(14):ESI−MS (m/z): 623.38 M+ (Calcd for C28H31O16 623.44)。
以上の結果、理論値と測定値がよく一致した。
(1)トウツバキ(C.reliculata Lindl.)の分析
トウツバキ(C.reliculata Lindl.)の花弁(花)0.5gを採集し、予め準備した抽出溶媒10mlで20℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出溶媒の組成は、メタノール−ギ酸−トリフルオロ酢酸−水(MeOH−HCOOH−CF3COOH−H2O)の70:2:1:27(v/v%)である。抽出液は、ミリポアフィルター(メッシュは0.45μM)で通導後、下記のHPLC分析条件にて分析した。その結果を図5に示す。色素がよく分離していることが分かる。
(HPLC分析条件)
HPLCの溶出溶媒としては、A液として1.5%リン酸を含む水溶液と、B液としてリン酸−ギ酸−アセトニトリル−テトラヒドロフラン−水の1.4:19:23.8:5:50.8の比率で混合した溶液を用い、流速を1分間に0.8ml、カラムの温度を40℃に保ち、検出波長を525nmに設定し、A液とB液との比率を82:18から30:70の比率で35分かけてリニアーグラジエント溶出させた。
ピタールツバキ雲南種(西南山茶雲南種、C.pitardii var. yunnanica)の花弁(花)0.5gを採集し、予め準備した抽出溶媒10mlで20℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出溶媒の組成は、メタノール−ギ酸−トリフルオロ酢酸−水(MeOH−HCOOH−CF3COOH−H2O)の70:2:1:27(v/v%)である。抽出液は、ミリポアフィルター(メッシュは0.45μM)で通導後、前記HPLC条件にて分析した。その結果を図6に示す。色素がよく分離していることが分かる。また、トウツバキ(C.reliculata Lindl.)の花弁(花)から得られたアントシニン色素組成と類似しているが、両者のHPLC分析のデータによる品種識別は可能であると考える。
ホンコンツバキ(C.hongkongensis Seem.)の花弁(花)0.5gを採集し、予め準備した抽出溶媒10mlで20℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出溶媒の組成は、メタノール−ギ酸−トリフルオロ酢酸−水(MeOH−HCOOH−CF3COOH−H2O)の70:2:1:27(v/v%)である。抽出液は、ミリポアフィルター(メッシュは0.45μM)で通導後、前記HPLC条件にて分析した。その結果を図7に示す。色素がよく分離していることが分かる。
ヤブツバキ(C.japonica)の花弁(花)0.5gを採集し、予め準備した抽出溶媒10mlで20℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出溶媒の組成は、メタノール−ギ酸−トリフルオロ酢酸−水(MeOH−HCOOH−CF3COOH−H2O)の70:2:1:27(v/v%)である。抽出液は、ミリポアフィルター(メッシュは0.45μM)で通導後、前記HPLC条件にて分析した。その結果を図8に示す。色素がよく分離していることが分かる。また、ホンコンツバキ(C.hongkongensis)の花弁(花)から得られたアントシニン色素組成とは違い、デルフィニジン(delphinidin)系の配糖体が認められないことが分かる。
サルウィンツバキ(C.saluenensis Stapf ex Heam)の花弁(花)25gを採集し、予め準備した抽出溶媒10mlで20℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出溶媒の組成は、メタノール−ギ酸−トリフルオロ酢酸−水(MeOH−HCOOH−CF3COOH−H2O)の70:2:1:27(v/v%)である。抽出液は、ミリポアフィルター(メッシュは0.45μM)で通導後、前記HPLC条件にて分析した。その結果を図9に示す。色素がよく分離していることが分かる。
ピタールツバキピタール種(西南山茶西南種、C.pitardii var. pitardii)の花弁(花)0.5gを採集し、予め準備した抽出溶媒10mlで20℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出溶媒の組成は、メタノール−ギ酸−トリフルオロ酢酸−水(MeOH−HCOOH−CF3COOH−H2O)の70:2:1:27(v/v%)である。抽出液は、ミリポアフィルター(メッシュは0.45μM)で通導後、前記HPLC条件にて分析した。その結果を図10に示す。色素がよく分離していることが分かる。また、サルウィンツバキ(C.saluenensis Stapf ex Heam)の花弁(花)から得られたアントシニン色素組成と類似しているが、両者のHPLC分析データによる品種識別は可能であると考える。
園芸品種ツバキ:大理茶(Dalicha)の花弁(花)0.25gを採集し、予め準備した抽出溶媒10mlで20℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出溶媒の組成は、メタノール−ギ酸−トリフルオロ酢酸−水(MeOH−HCOOH−CF3COOH−H2O)の70:2:1:27(v/v%)である。抽出液は、ミリポアフィルター(メッシュは0.45μM)で通導後、前記HPLC条件にて分析した。その結果を図11に示す。色素がよく分離していることが分かる。
(1)アントシアニンサンプルの調製
実施例2と同様に、ホンコンツバキの花弁からアントシアニンを抽出した。採集した花弁8kgに直接、酢酸とメタノールを1対1で混合した溶液(50%酢酸−メタノール)20Lを加え、20−25℃でアントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を5%酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルCHP−20P(MCI gel CHP−20P、三菱化学株式会社、Mitsubishi Chemical Corporation)、移動相にA液として5%酢酸水溶液、B液として5%酢酸−メタノールを用い、A液からB液の含量を10%ずつ増やすことによって、MCIgelのカラム(以下MCIカラム)クロマトグラフィーを行い、6つの分画を得た。
抗酸化作用の実験は、以下の文献に記載の方法を用いて行った(Harwat, K.S.M. et al, Free Radical Res., 36:177−187, 2002)。
HL−60細胞増殖抑制作用の実験は、特開2005−075790号公報に記載の方法を用いて行った。
RMPI1640(10%FBS+)培地の作成:
RMPI1640を2.04g秤取し、蒸留水にて全量を200mlとし、攪拌して溶解した後、溶液をオートクレーブで滅菌した(121℃、20分)。冷却後、これに、10%炭酸水素ナトリウム(NaHCO3)を4ml、FBS(予め非動化したもの)を20ml、抗生物質溶液(ペニシリン・ストレプトマイシン)2mlを加え、4℃で保存した。
−80℃で保管しておいたHL−60細胞を37℃で溶解し、予め37℃で保温したRMPI1640(10%FBS+)培地5mlに混入し、よく混合した。培地は、遠心分離(1200rpm、5分間)を行った後、上澄みを除去した。これにRMPI1640(10%FBS+)培地1mlを加え、軽く攪拌し、更にRMPI1640(10%FBS+)培地5mlを加え、混合した後、遠心分離(1200rpm、5分間)を行い、上澄みを除去した。これにRMPI1640(10%FBS+)培地1mlを加え、軽く攪拌し、更にRMPI1640(10%FBS+)培地5mlを加え、混合した後、シャーレ(6cm)に培地を入れ、5%二酸化炭素含有大気中37℃の条件で、インキュベーターでHL−60細胞を培養した。
培養し、増殖されたHL−60細胞を15mlチューブで回収し、丁寧に攪拌した後、その少量を血球計算盤に採取し、細胞数をカウントした。15mlチューブで回収したHL−60細胞は、遠心分離(1200rpm、5分間)を行った後、上澄みを除去した。これに予め37℃で保温したRMPI1640(10%FBS+)培地1mlを加え、軽く攪拌し、先の細胞数を計算した値から、培地中の細胞の濃度が2x106cells/6mlとなるように、RMPI1640(10%FBS+)培地で濃度を調整した。調製した培地は、5%二酸化炭素含有大気中37℃の条件で、インキュベーターでHL−60細胞を継代した。
継代されたHL−60細胞を15mlチューブで回収し、丁寧に攪拌した後、その少量を血球計算盤に採取し、細胞数をカウントした。15mlチューブで回収したHL−60細胞は、遠心分離(1200rpm、5分間)を行った後、上澄みを除去した。これに予め37℃で保温したRMPI1640(10%FBS+)培地1mlを加え、軽く攪拌し、先の細胞数を計算した値から、培地中の細胞の濃度が2x106cells/1mlとなるように、RMPI1640(10%FBS+)培地を80%、FBSを10%、ジメチルスルホキシド(DMSO)を10%の組成を有する培地で、濃度を調整した。これをセラムチューブに1mlずつ分注し、−20℃で一夜保存後、翌日より−80℃にて
保存した。
本法は、文献記載の方法を参考にした(Mosmann、T.:J.Immunol.Methods、65:55−63、1983)。2x106cells/mlのRMPI1640(10%FBS+)培地で継代したHL−60細胞を、平底の96 wellのプレート1 wellあたり2x104cells/100μlのHL−60細胞数になるように培地でRMPI1640(10%FBS+)培地で希釈し、2x104cells/100μlのHL−60細胞を各wellへ分注した。これを5%二酸化炭素含有大気中37℃の条件で、インキュベーターで24時間培養した。
Claims (5)
- 前記ツバキがホンコンツバキ(Camellia hongkongensis Seem.)であり、アントシアニン色素がcyanidin 3−O−(6−O−(E)−caffeoyl)−β−galactopyranosideである請求項1記載の製造方法。
- 前記ツバキが園芸品種のツバキ:大理茶(Dalicha)であり、アントシアニン色素がcyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−acetyl)−β−glucopyranoside、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(Z)−p−coumaroyl)−β−galactopyranoside、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(E)−p−coumaroyl)−β−galactopyranoside、cyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−(E)−caffeoyl)−β−galactopyranoside又はcyanidin 3−O−(2−O−β−xylopyranosyl−6−O−acetyl)−β−galactopyranosideである請求項1記載の製造方法。
- 前記単離及び精製手段がカラムクロマトグラフィーである請求項1〜3のいずれか1項に記載の製造方法。
- 抽出溶媒が酢酸−メタノール混合溶媒である請求項1〜4のいずれか1項に記載の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007302353A JP5190926B2 (ja) | 2007-11-22 | 2007-11-22 | ツバキ由来のアントシアニン色素、その製造方法及び用途、並びにツバキの品種識別方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007302353A JP5190926B2 (ja) | 2007-11-22 | 2007-11-22 | ツバキ由来のアントシアニン色素、その製造方法及び用途、並びにツバキの品種識別方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009126810A JP2009126810A (ja) | 2009-06-11 |
JP5190926B2 true JP5190926B2 (ja) | 2013-04-24 |
Family
ID=40818089
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007302353A Expired - Fee Related JP5190926B2 (ja) | 2007-11-22 | 2007-11-22 | ツバキ由来のアントシアニン色素、その製造方法及び用途、並びにツバキの品種識別方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5190926B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104761596A (zh) * | 2015-02-01 | 2015-07-08 | 云南农业大学 | 一种制备花青素苷标准品的方法 |
KR102563502B1 (ko) * | 2016-09-30 | 2023-08-07 | (주)아모레퍼시픽 | Gc-ims를 이용하여 동백 오일의 품질을 평가하는 방법 |
CN110713506A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-01-21 | 长春中医药大学 | 一种稳态化花翠素-3-o-葡萄糖苷衍生物及制备方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997041137A1 (en) * | 1996-04-17 | 1997-11-06 | Unifob | Use of anthocyanidin and anthocyanidin derivatives |
WO2005077176A1 (en) * | 2004-02-11 | 2005-08-25 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Anthocyanin compounds and methods of use thereof |
JP5704292B2 (ja) * | 2006-05-09 | 2015-04-22 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 茶葉抽出組成物 |
-
2007
- 2007-11-22 JP JP2007302353A patent/JP5190926B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2009126810A (ja) | 2009-06-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bueno et al. | Analysis and antioxidant capacity of anthocyanin pigments. Part II: Chemical structure, color, and intake of anthocyanins | |
Hussain et al. | Betalains: biomolecular aspects | |
Kumorkiewicz-Jamro et al. | Multi-colored shades of betalains: Recent advances in betacyanin chemistry | |
KR101174497B1 (ko) | 새싹보리 유래 폴리페놀계 화합물을 함유하는 추출물 및 이의 제조방법 | |
Coy-Barrera | Analysis of betalains (betacyanins and betaxanthins) | |
Liang et al. | Analysis of edible characteristics, antioxidant capacities, and phenolic pigment monomers in Lilium bulbs native to China | |
JPWO2008026507A1 (ja) | 美白剤 | |
JP5190926B2 (ja) | ツバキ由来のアントシアニン色素、その製造方法及び用途、並びにツバキの品種識別方法 | |
KR101340081B1 (ko) | 항고혈압, 항당뇨 및 항노화성 플라보노이드 함유 뽕나무 잎 추출물의 신규한 제조 방법 및 그 산물 | |
KR102121915B1 (ko) | 결명 새싹 유래 나프토파이론 유도체를 포함하는 신경세포 보호용 조성물 | |
KR20140144429A (ko) | 복분자 줄기와 잎 및 씨앗의 추출물을 주성분으로 하는 항산화용 조성물 | |
JP6436337B2 (ja) | エラスチン産生作用を呈するケルセチン誘導体及びその製造方法 | |
KR100998573B1 (ko) | 벌개미취 추출물, 벌개미취 분획물, 이로부터 분리한짐나스테르코리아인 유도체 또는 이의 약학적으로허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 발암 예방용건강기능성 식품 조성물 | |
Carrillo‐López et al. | Betalains: chemistry and biological functions | |
AU2004317862A1 (en) | Process for isolation of imperatorin from aegle marmelos correa | |
JP6741965B2 (ja) | ケラチン増加作用を呈するデヒドロレチノール誘導体 | |
JP6831049B2 (ja) | NF−κB抑制作用を呈するグランジフロル酸誘導体の製造方法 | |
CN105188419B (zh) | 制备圆叶葡萄果渣提取物的方法 | |
CN103087119A (zh) | 一种亚麻脑苷酯类化合物及其提取分离方法 | |
Sharma et al. | A review on the pharmagnostic evaluation of Meswak, Salvadora persica | |
KR100966837B1 (ko) | 피부 미백 활성을 갖는 쿠마로일 화합물 | |
JP7325149B1 (ja) | 芳香族化合物配糖体及び該配糖体の製造方法、該配糖体を含む抗酸化組成物、脂質代謝改善組成物及び糖尿病改善・予防組成物 | |
Van Quang et al. | Anticaries activity of mangiferin isolated from Mangifera indica leaves in Vietnam | |
KR101424130B1 (ko) | 안토시아닌을 포함하는 항산화용 조성물 | |
KR102313083B1 (ko) | 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100525 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121002 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121129 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130108 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130124 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5190926 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20160208 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |