본 발명의 고지혈증 예방 및 치료제는 에피갈로카테킨-3-갈레이트(EGCG, C22H18O11, 분자량 458.4), 에피갈로카테킨(EGC, C15H14
O7, 분자량 306.3) 및 에피카테킨-3-갈레이트(ECG, C22H18O10, 분자량 442.5)를 포함하는 녹차카테킨(green tea catechins, GTC)을 유효성분으로 하고, 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다: 이때, GTC에 함유된 EGCG, EGC 및 ECG의 함량은 특별히 이에 제한되는 것은 아니나, 30 내지 90중량%의 EGCG, 6 내지 35중량%의 EGC 및 2 내지 35중량%의 ECG를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명을 설명하는데 있어서, "녹차카테킨(GTC)"이란 녹차에서 추출되어, 에피갈로카테킨-3-갈레이트(EGCG, C22H18O11, 분자량 458.4), 에피갈로카테킨(EGC, C15H14O7, 분자량 306.3) 및 에피카테킨-3-갈레이트(ECG, C22H
18O10, 분자량 442.5)를 다양한 함량으로 포함하고, 녹차에 포함된 다른 성분들, 예를 들어 카페인, 회분 등을 카테킨보다 적은 함량으로 포함하는 추출물을 의미한다. GTC에 함유된 카테킨 성분의 함량은 특별히 이에 제한되는 것은 아니나, 추출물 중량에 대하여 80 중량% 이상인 것이 바람직하고, 특히 전체 추출물중에 EGCG의 함량은 30 내지 90중량%, EGC의 함량은 6 내지 35중량% 및 ECG의 함량은 2 내지 35중량%를 포함하는 것이 더욱 바람직하다.
전기 GTC의 제조방법은 특별히 이에 제한되지는 않으나, 유럽특허공개 제 547370A2호, 일본특허공보 평2-22755호, 대한민국 특허공고 제 1997-11555호, 일본특허공보 평7-179353호 또는 미국특허 제 5,107,000호 등에 기술된 공지된 방법을 그대로 또는 적절히 변형시켜 사용할 수 있다.
본 발명의 녹차카테킨을 유효성분으로 하는 고지혈증 예방 및 치료제는 혈중의 중성지방(triglyceride, TG) 및 저비중 지방단백질(low density lipoprotein, LDL)의 함량을 저하시키고, 고비중 지방단백질(high density lipoprotein, LDL)의 함량을 향상시킬 수 있으므로, 고지혈증의 예방 및 치료에 널리 활용될 수 있을 것이다.
한편, 본 발명의 고지혈증 예방 및 치료제의 유효성분으로 함유되는 GTC는 약학적으로 허용가능한 결합제(예, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필셀룰로오스), 붕해제(예, 카복시메틸셀룰로오스칼슘, 전분글리콜산나트륨), 희석제(예, 옥수수전분, 유당, 콩기름, 결정셀룰로오스, 만니톨), 활택제(예, 스테아린산 마그네슘, 탈크), 감미제(예, 백당, 과당, 솔비톨, 아스파탐), 안정제(카복시메틸셀룰로오스나트륨, 알파 또는 베타 싸이클로덱스트린, 비타민 C, 구연산, 백납), 보존료(예, 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 안식향산나트륨) 및 향료(예, 에틸바닐린, 마스킹후레바, 멘톨후라보노, 허브향)와 혼합하여 정제, 캅셀제, 연질캅셀제, 액제, 연고제 또는 주사제와 같은 약학적 제제로 제조될 수 있다.
GTC의 급성독성실험
6 내지 7주령 된 비설치류 비글견(beagle)을 대상으로 본 발명의 GTC를 경구투여하여 24시간내의 개체사망율을 조사하였으며, 이때 암컷은 6 내지 8㎏인 개체를, 수컷은 7 내지 9㎏인 개체를 각각 8마리 사용하였다. 그 결과, 5g/kg 까지 죽은 개체가 발생하지 않아, 본 발명의 GTC는 kg당 5g까지도 급성독성을 관찰할 수 없을 만큼 안전하므로, 고지혈증 예방 및 치료제로서 생체내에 안전하게 투여할 수 있다.
유효량
본 발명의 고지혈증 예방 및 치료제의 유효성분인 GTC의 투여량은 환자의 연령, 성별, 증상, 투여방법 또는 예방목적에 따라, 체중 kg 당 6 내지 30㎎을 일일 1회 내지 3회 분복할 수 있다. 특이 증상을 나타내는 환자에 대한 투여용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설율, 질환의 중증도 등에 따라 당업자가 투여량을 변화시킬 수도 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 녹차카테킨(GTC)의 수득
녹차(Theae sinensis L., Theaceae-var. bohea 中 yabugida, 제주도산) 1000g에 70%(v/v) 에탄올수용액 10ℓ로 85 내지 90℃에서 3시간 동안 1차 추출한 다음, 동일한 용매 5ℓ로 동일한 조건하에 2차 추출을 완료하여, 진공회전증발기에서 약 1000㎖이 될 때까지 농축하였다. 전기 농축액에 물을 가하여 2 내지 3배로 희석시키고, 14,000rpm에서 20분간 원심분리하여 고형성분을 완전히 제거한 다음, 모아진 상등액을 1.2배의 클로로포름으로 2회 추출하였다. 그런 다음, 클로로포름층을 제거하고, 수층을 1.2배의 에틸아세테이트로 4회 추출하여 얻은 액을 합한 후, 추출용매가 완전히 없어질 때까지 감압건조시켰다. 전기 건조물을 소량의 물로 용해시키고 동결건조하여 GTC 분말을 수득하였다.
또한, 수득한 GTC 분말에 함유된 카테킨의 함량을 공지된 방법에 의하여 측정한 결과(참조: 대한민국 특허공개 제 2001-84165호), 전기 수득한 GTC 분말의 중량에 대하여, 에피갈로카테킨-3-갈레이트 37.5%(w/w), 에피갈로카테킨 12.5%(w/w), 에피카테킨-3-갈레이트 5.7%(w/w) 및 잔량의 기타 카테킨을 함유함을 알 수 있었다.
실시예 2: 혈중 지질의 함량에 대한 GTC의 효과
전기 실시예 1에서 수득한 GTC가 고지혈증의 예방 및 치료여부를 혈중 지질(TG, LDL, HDL)의 함량을 비교하여 확인하였다.
실시예 2-1: GTC의 고지혈증 예방효과
웅성 랫트에 전기 실시예 1에서 수득한 GTC 900mg을 포함하고 동물성 지방함량이 30중량%인 사료를 30일간 섭식시킨 후, 채혈하고 혈중 TG, LDL, HDL 및 총 콜레스테롤의 함량을 지질자동분석기(RA-XT, Technicon, USA)를 사용하여 측정하였다: 이때, 양성대조군으로는 GTC를 투여하지 않은 랫트를 사용하고, 음성대조군으로는 동물성 지방 및 GTC를 투여하지 않은 랫트를 사용하였다(참조: 표 1).
GTC에 의한 혈중 지질의 함량변화(㎎/㎗)
|
TG |
LDL |
HDL |
총콜레스테롤 |
음성대조군 |
206 |
140 |
130 |
270 |
실험군 |
208 |
148 |
140 |
288 |
양성대조군 |
380 |
280 |
132 |
410 |
상기 표 1에서 보듯이, GTC를 섭식시킨 경우에는 TG 및 LDL의 혈중함량이 음성대조군 수준으로 낮아지고, HDL의 혈중함량은 음성대조군 및 양성대조군보다도 증가됨을 알 수 있었다. 고지혈증의 병리학적 주원인은 혈중에 증가된 TG 및 LDL의 함량이므로, GTC가 고지혈증의 예방에 효과적으로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
실시예 2-2: GTC의 고지혈증 치료효과
웅성 랫트에 동물성 지방함량이 30중량%인 사료를 30일간 섭식시킨 후, 전기 실시예 1에서 수득한 GTC를 하루 900mg씩 7일간 경구투여하고, 채혈한 다음, 혈중 TG, LDL 및 HDL의 함량을 지질자동분석기(RA-XT, Technicon, USA)를 사용하여 측정하였다: 이때, 양성대조군으로는 GTC를 투여하지 않은 랫트를 사용하고, 음성대조군으로는 동물성 지방 및 GTC를 투여하지 않은 랫트를 사용하였다(참조: 표 2).
GTC에 의한 혈중 지질의 함량변화(㎎/㎗)
|
TG |
LDL |
HDL |
총콜레스테롤 |
음성대조군 |
206 |
140 |
130 |
270 |
실험군 |
220 |
158 |
140 |
298 |
양성대조군 |
380 |
280 |
130 |
410 |
상기 표 2에서 보듯이, GTC를 투여할 경우에는 TG 및 LDL의 혈중함량이 음성대조군 수준으로 낮아지고, HDL의 혈중함량은 음성대조군 및 양성대조군보다도 증가됨을 알 수 있었다. 고지혈증의 병리학적 주원인은 혈중에 증가된 TG 및 LDL의 함량임을 감안한다면, GTC가 고지혈증의 치료에 효과적으로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
실시예 3: GTC의 최적 조성비 결정
본 발명의 GTC에 함유된 EGCG, EGC 및 ECG의 함량변화에 따른 혈중 TG함량을 비교하여, 최적의 고지혈증 예방 및 치료효과를 나타내는 EGCG, EGC 및 ECG의 조성비를 결정하였다.
실시예 3-1: EGCG의 함량결정
5중량%의 EGC 및 5중량%의 ECG를 포함하고, EGCG의 함량이 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 및 90중량%인 GTC를 각각 제조한 후, 실시예 1에서 수득한 GTC 대신에 전기 제조된 각 GTC를 하루 900mg씩 7일간 경구투여하는 것을 제외하고는, 실시예 2-2와 동일한 방법을 이용하여, 혈중 지질의 함량을 비교하였다(참조: 표 3)
EGCG의 함량에 의한 혈중 지질의 함량변화(㎎/㎗)
EGCG의 함량 |
TG |
LDL |
HDL |
총 콜레스테롤 |
음성대조군 |
206 |
140 |
130 |
270 |
10중량% |
360 |
200 |
134 |
334 |
20중량% |
320 |
184 |
136 |
320 |
30중량% |
240 |
166 |
138 |
304 |
40중량% |
220 |
158 |
140 |
298 |
50중량% |
218 |
156 |
141 |
297 |
60중량% |
215 |
155 |
142 |
297 |
70중량% |
212 |
152 |
144 |
296 |
80중량% |
208 |
150 |
145 |
295 |
90중량% |
206 |
149 |
145 |
294 |
양성대조군 |
380 |
280 |
130 |
510 |
상기 표 3에서 보듯이, EGCG의 함량이 30 내지 90중량%인 경우, TG의 함량이 효과적으로 감소함을 알 수 있었다.
실시예 3-2: EGC의 함량결정
50중량%의 EGCG 및 5중량%의 ECG를 포함하고, EGC의 함량이 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 및 45중량%인 GTC를 각각 제조한 후, 실시예 1에서 수득한 GTC 대신에 전기 제조된 각 GTC를 하루 900mg씩 7일간 경구투여하는 것을 제외하고는, 실시예 2-2와 동일한 방법을 이용하여, 혈중 지질의 함량을 비교하였다(참조: 표 4)
EGC의 함량에 의한 혈중 지질의 함량변화(㎎/㎗)
EGC의 함량 |
TG |
LDL |
HDL |
총 콜레스테롤 |
음성대조군 |
206 |
140 |
130 |
270 |
5중량% |
230 |
192 |
135 |
327 |
10중량% |
220 |
162 |
138 |
300 |
15중량% |
215 |
155 |
142 |
297 |
20중량% |
214 |
150 |
142 |
292 |
25중량% |
214 |
148 |
143 |
291 |
30중량% |
213 |
145 |
142 |
287 |
35중량% |
212 |
142 |
144 |
286 |
40중량% |
212 |
141 |
143 |
284 |
45중량% |
211 |
142 |
143 |
285 |
양성대조군 |
380 |
280 |
130 |
410 |
상기 표 4에서 보듯이, EGC의 함량이 10중량% 이상인 경우, LDL의 함량이 현저히 저하됨을 알 수 있고, 35중량% 이상인 경우에는 LDL의 함량이 더 이상 저하되지 않음을 알 수 있었다. EGC의 함량을 좀 더 구체적으로 한정하기 위하여 EGC의 함량이 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10중량%인 GTC를 각각 제조한 후, 동일한 방법으로 각 GTC의 간염 예방효과를 비교하였다(참조: 표 5).
EGC의 함량에 의한 혈중 지질의 함량변화(㎎/㎗)
EGC의 함량 |
TG |
LDL |
HDL |
총 콜레스테롤 |
음성대조군 |
206 |
140 |
130 |
270 |
4중량% |
245 |
213 |
141 |
354 |
5중량% |
230 |
192 |
135 |
327 |
6중량% |
228 |
180 |
135 |
315 |
7중량% |
225 |
176 |
136 |
311 |
8중량% |
223 |
172 |
137 |
309 |
9중량% |
221 |
168 |
137 |
305 |
10중량% |
220 |
162 |
138 |
300 |
양성대조군 |
380 |
280 |
130 |
410 |
상기 표 5에서 보듯이, EGC의 함량이 6중량% 이상인 경우, LDL의 함량이 현저히 저하됨을 알 수 있었다.
실시예 3-3: ECG의 함량결정
50중량%의 EGCG 및 5중량%의 EGC를 포함하고, ECG의 함량이 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 및 45중량%인 GTC를 각각 제조한 후, 실시예 1에서 수득한 GTC 대신에 전기 제조된 각 GTC를 하루 900mg씩 7일간 경구투여하는 것을 제외하고는, 실시예 2-2에 개시된 동일한 방법을 이용하여, 혈중 지질의 함량을 비교하였다(참조: 표 6)
ECG의 함량에 의한 혈중 지질의 함량변화(㎎/㎗)
ECG의 함량 |
TG |
LDL |
HDL |
총 콜레스테롤 |
음성대조군 |
206 |
140 |
130 |
270 |
5중량% |
215 |
155 |
142 |
297 |
10중량% |
214 |
153 |
145 |
298 |
15중량% |
213 |
151 |
148 |
299 |
20중량% |
213 |
151 |
152 |
303 |
25중량% |
212 |
150 |
155 |
305 |
30중량% |
210 |
148 |
159 |
307 |
35중량% |
209 |
149 |
163 |
312 |
40중량% |
210 |
148 |
164 |
312 |
45중량% |
208 |
147 |
163 |
310 |
양성대조군 |
380 |
280 |
130 |
410 |
상기 표 6에서 보듯이, ECG의 함량이 5중량% 이상인 경우, HDL의 함량이 현저히 증가됨을 알 수 있고, 35중량% 이상인 경우에는 HDL의 함량이 더 이상 증가되지 않음을 알 수 있었다. ECG의 함량을 좀 더 구체적으로 한정하기 위하여 ECG의 함량이 1, 2, 3, 4, 5 및 6중량%인 GTC를 각각 제조한 후, 동일한 방법으로 각 GTC의 간염 예방효과를 비교하였다(참조: 표 7).
ECG의 함량에 의한 혈중 지질의 함량변화(㎎/㎗)
ECG의 함량 |
TG |
LDL |
HDL |
총 콜레스테롤 |
음성대조군 |
206 |
140 |
130 |
270 |
1중량% |
228 |
167 |
130 |
297 |
2중량% |
223 |
164 |
135 |
299 |
3중량% |
219 |
161 |
137 |
298 |
4중량% |
217 |
158 |
139 |
297 |
5중량% |
215 |
155 |
142 |
297 |
6중량% |
215 |
154 |
143 |
297 |
양성대조군 |
380 |
280 |
130 |
410 |
상기 표 7에서 보듯이, ECG의 함량이 2중량% 이상인 경우, HDL의 함량이 현저히 증가됨을 알 수 있었다.
따라서, 상기 실시예 3-1 내지 3-3의 결과를 종합하면, 30 내지 90중량%의 EGCG, 6 내지 35중량%의 EGC 및 2 내지 35중량%의 ECG를 포함하는 GTC는 고지혈증의 예방 및 치료효과가 현저히 우수함을 알 수 있었다.