KR20050039739A - Ｎ-메틸-호모시스테인 및 그 용도와 그 제조방법 - Google Patents

Ｎ-메틸-호모시스테인 및 그 용도와 그 제조방법 Download PDF

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데이르키 하인즈
그레고르 만
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Abstract

N-메틸-호모시스테인 합성과 이의 용도가 발표된다.

Description

Ｎ-메틸-호모시스테인 및 그 용도와 그 제조방법{N-Methyl-Homocysteins, Use thereof and Method for the production thereof}
본 발명은 청구범위에서 특징으로 하는 주제, 즉 화학식 I 및 화학식 II의 N-메틸-호모시스테인 및 그 용도와 그 제조방법에 관계한다.
N-메틸-아미노산은 합성 화학에서 가치가 있는 중간 제품이다. 많은 고 잠재성 및 선택성 약제가 N-메틸-아미노산을 함유하므로 주로 제약 화학은 이러한 성분을 자주 사용한다.
광학적으로 활성이 있는 N-메틸-아미노산은 단일 화합물로서 자연 발생되지만(예, N-메틸-트리프토판; Liebigs ann. Chem. 1935, 520, 31-34), 가령 돌라스타틴(G.R. Pettit등, J. Org. Chem. 1990, 55, 2989-2990; Tetrahedron 1993 , 41, 9151-9170) 또는 디뎀닌(K.L. Rinehart등, J. Nat. Prod. 1988, 51, 1-21; J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 6846-6848; J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 3734-3748)과 같은 수많은 생물학적으로 활성이 있는 천연물질의 성분으로도 발견된다. 다른 예는 자스플라키놀라이드(J. Org. Chem. 1991, 56, 5196-5202)와 다른 세포독성 펩티드(J. Org. Chem. 1989, 54, 617-627; Tetrahedron 1995, 51, 10653-10662; J. Org. Chem. 1989, 54, 736-738) 이다. 면역억제 작용을 하는 시클로스포린 역시 N-메틸-아미노산을 포함한다(예컨대 R.M. Wenger, Helv.Chim Acta 1983, 66, 2672-2702; S.L. Schreiber등, Tetrahedron Lett. 1988, 29, 6577-6580참조). N-메틸-아미노산은 또한 신경약리학적 활성을 가질 수 있다(J.C. Watins, J.Med.Pharm.Chem. 1962, 5, 1187-1199).
한편으론 형상 및 생물학적 활성을 알아보기 위해 제약학적 연구에서 생물학적으로 활성이 있는 펩티드에 N-메틸-아미노산의 도입이 종종 사용된다(예컨대 J.Org.Chem. 1981, 46, 3436-3440; Int.J.Pept.Protein Res. 1995, 46, 47-55; Int.J.Pept.Protein Res. 1986, 27, 617-632). H. Kessler, Angew.Chem.[Applied Chemistry] 1982, 94, 509-520과 G.R.Marshall등, Ann.Rep.Med.Chem. 1978, 13, 227-238은 펩티드의 형상 연구 및 생물학적 활성과의 관게에 대한 개요를 제공한다.
다른 한편으론 펩티드 리간드의 활성도나 선택도를 증가시키기 위해서 펩티드의 아미노산을 대응 N-메틸 화합물로 치환시킨다(예컨대 J.Med.Chem. 1994, 37, 769-780; Int.J.Pept.Protein Res. 1995, 46, 47-55 참조). N-메틸-펩티드 결합은 종종 비-메틸화 결합에 비해서 단백질 가수분해에 대해 더 높은 안정성을 보이므로 증가된 경구 이용성 및 연장된 작용을 가져올 수 있다(R.H.Mazur등, J.Med.Chem. 1980, 23, 758-763). N-메틸-아미노산의 도입이나 다른 변형에 의한 펩티드 디자인에 대해서는 W.F.Degrado, Adv.Protein Chem. 1988, 39, 51-124 및 J.Rizo, L.M.Gierasch, Annu.Rev.Biochem 1993, 61, 387-418을 참조하시오. 펩티드 모방물에 관한 개관을 위해서는 A.Giannis등, Angew.Chem. 1993, 105, 1303-1326 및 J.Gante, Angew.Chem. 1994, 106, 1780-1802를 참조하시오.
WO 01/44177에서, 사이클릭 6-머 부분 서열에서 N-메틸-호모시스테인을 함유한 펩티드가 발표된다. 금속 이온-결합 서열의 결합은 호모시스테인의 황 원자를 경유하여 수행된다. 99mTc 또는 186Re와 같은 방사성 핵종의 킬레이션화에 의해 암증의 진단 또는 치료에서 방사능 진단제나 방사능 치료제로서 사용이 가능하다(US 6,056,940, US 6,022,857, US 6,017,509도 참조하시오).
WO 01/44177에서, 합성의 단계적 과정에서 N-메틸화 반응에 의해 펩티드가 합성된다(예컨대 J.Am.Chem.Soc. 1997, 119, 2301-2302참조). 고체 상에 C-말단 결합된 4-머 펩티드가 3단계에서 메티온으로부터 접근 가능한 아미노산 N-Fmoc-S-트리틸호모시스테인(Fmoc는 9H-플로오렌-9-일메틸옥시카르보닐임)과 반응하여 5-머 펩티드를 형성한다(J.Med.Chem. 1996, 39, 1361-1371). 보호기가 제거된 후에 호모시스테인의 말단 아미노 기는 2-니트로벤젠술폰산 클로라이드와 반응하여 술폰아미드를 형성한다. MTBD(1,3,4,6,7,8-헥사히드로-1-메틸-2H-피리미돌[1,2-a]피리미덴)을 사용한 메틸화 반응과 후속의 2-메르캅토에탄올을 사용한 술포닐기의 절단이 수행된다. 그러면 펩티드 서열이 추가 구축된다. 그러나 이 합성은 반응이 불완전하고 펩티드의 추가 정제를 요하는 결점을 갖는다.
N-메틸 아미노산을 함유한 펩티드 서열의 생성은 보통 부분 서열을 Fmoc-보호된 N-메틸 아미노산과 반응시켜 수행된다(J.Med.Chem. 1996, 39, 1361-1371). 그러므로 WO 01/44177에서 펩티드 서열에 요구되는 아미노산 N-Fmoc-S-트리틸호모시스테인은 예전에는 생성될 수 없었다.
문헌에는 대장성 천연물질로서 상업적으로 다량 입수 가능한 대응 비-메틸화 아미노산으로부터 시작하는 N-메틸 아미노산 제조방법이 여러개 제공된다.
비-라세미체 N-메틸 아미노산의 제1 합성은 E.Fisher에 따른다. 이 경우에 아미노산의 N-토실 유도체는 수산화나트륨 용액 및 요오드화메틸과 반응에 의해 메틸화 된다. 이후에 끓는 염화수소산으로 토실기의 절단이 수행된다(Ann.Chem. 1913, 398, 96-125; Ber. dt chem. Ges. 1915, 48, 360-378). 이 방법으로 부분 라세미체화가 일어남이 기재된다(A.H.Cook등, J.Chem.Soc. 1949, 1022-1028).
Fisher의 또 다른 방법은 2-브로모카르복시산과 메틸아민의 반응이다(Ber. dt chem. Ges. 1916, 49, 1355-1366; 응용의 경우 A.H.Cook등, J.Chem.Soc. 1949 , 1022-1028도 참조). 이 경우에 부분적으로 라세미체화된 생성물도 발생된다(P.Quitt등, Helv.Chim Acta 1963, 46, 327-333참조). 우리는 2-브로모-4-메틸술파닐-부탄산과 메틸아민의 반응으로 이 관찰을 확인할 수 있다. 문헌에서 D-메티오닌의 디아조화 반응과 유지 하에서 브로마이드에 의한 후속 치환 반응과 이후 역전 하에서 메틸아민에 의한 치환반응으로 N-메틸-L-메티오닌 제조가 발표된다(N.Izumiya, A.Nagamatsu, Kyushu.Mem.Med.Sci. 1953, 4, 1-16). 생성물의 거울상이성질체 순도는 측정되지 않았다. 우리는 온화한 것으로 발표된 Ellman의 디아조와 방법(Synthesis 1999, 583-585)의 경우에서 조차 반응은 단지 75% 거울상이성질체 과잉량으로 진행함을 알 수 있었다. 그러므로 이 방법은 순수한 거울상이성질체 N-메틸-호모시스테인 제조에 적합하지 않다.
매우 자주 사용되는 방법은 Benoiton에 따라서 THF 또는 DMF에서 수소화나트륨과 요오드화메틸을 사용한 직접적인 알킬화 반응이다(Can.J.Chem. 1973, 51, 1915-1919, Can.J.Chem. 1977, 55, 906-910). 이 방법은 Z- 및 Boc-보호된 N-메틸아미노산 제조를 위한 표준으로 사용된다(예컨대 Tetrahedron 1995, 51, 10653-10662, D.L.Boger등, J.Am.Chem.Soc. 1999, 121, 6197-6205, H.Waldmann등, Chem.Eur.J. 1999, 5, 227-236참조). 우리의 경우에 Boc-보호된 메티오닌 아미드와 요오드화 메틸과 같은 메틸화제의 반응은 술포늄 이온의 형성과 황 원자의 메틸화를 가져온다(또한 S.J.F.Macdonald등, J.Med.Chem. 1999, 64, 5166-5175참조). 그러므로 이 방법은 N-메틸-호모시스테인 제조에 사용될 수 없다.
아미노산 에스테르로부터 시작하는 여러 N-메틸-아미노산 제조방법이 있다. 이것은 보레인으로 N-포밀 아미노산의 선택적 환원(Tetrahedron Lett. 1982, 23, 3315-3318, J.Org.Chem. 1991, 56, 5196-5202)과 아미노산 에스테르의 Schiff염기와 디메틸술페이트 또는 메틸트리플레이트의 반응과 후속 가수분해반응(M.J.O'Donnell등, Tetrahedron Lett. 1984, 25, 3651-3654)을 포함한다. 그러나 아미노산 에스테르를 비누화반응시켜 아미노산을 형성하면 부분적 라세미체화가 일어난다(S.T.Cheung, N.L.Benoiton, Can.J.Chem. 1977, 55, 906-910). 그러므로 이들 방법 역시 적합하지 않다.
아미노산은 또한 환원적 알킬화반응에서 알데히드와 반응될 수 있다. 중간에 형성된 Schiff염기는 수소 및 촉매(R.W.Bowman등, J.Chem.Soc. 1950, 1342-1345, 1346-1349) 또는 소듐 보로하이드라이드(K.A.Schellenberg, J.Org.Chem. 1963, 28, 6776-6784)의 존재 하에서 동일 반응계에서 환원된다. 이 방법은 용액(예컨대 J.Org.Chem. 1996, 61, 3849-3862; J.Org.Chem. 1995, 60, 6776-6784참조)과 고체 상(예컨대 J.Org.Chem. 1996, 61, 6720-6722; Tetrahedron Lett. 1997 , 38, 4943-4946; Bioorg Med.Chem.Lett. 1995, 5,47-50참조)에서 둘 다 수행된다. 이 방법에 따라서 Bowman에 의해 디-및 트리펩티드가 역시 예전에 과메틸화 되었다(J.Chem.Soc. 1950, 1349-1351). 이 방법에 따라 포름알데히드로 선택적 모노메틸화 반응이 불가능하고 오히려 비-메틸화, 모노메틸화 및 디메틸화 아미노산으로 구성된 혼합물이 형성되며 이들은 분리될 수 없다(Quitt등, Helv.Chim.Acta 1963, 46, 327-333; 또한 R.E. Bowman, H.H. Stroud, J.Chem.Soc. 1950, 1342-1345참조).
Fmoc-보호된 N-메틸-아미노산의 합성을 위한 Freidinger의 방법(J.Org.Chem. 1983, 48, 77-81)은 매우 유명하다. 이 방법은 두 단계로 구성된다: 제1 단계에서 아미노산을 포름알데히드와 반응시켜 옥사졸리디논이 형성되고 이후 제2 단계에서 산성 조건 하에서 트리에틸실란을 수단으로 N-메틸 화합물로 환원된다. Fmoc-L-메티오닌을 포름알데히드와 반응시켜 88%의 수율로 옥사졸리디논을 형성하는 반응은 Freidinger에 의해 발표되지만 트리에틸실란을 사용하여 Fmoc-N-메틸-L-메티오닌으로 환원시키는 반응은 5일 후에도 여전히 불완전하고 수율이 단지 22%이다(J.Org.Chem. 1983, 48, 77-81).
그러므로 본 발명의 목적은 펩티드 서열의 생성에 사용되는 화합물, N-메틸화 호모시스테인을 함유한 화합물을 발견하고 고체 상 N-메틸화를 방지하는 것이며 또한 그 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 화학식 I의 순수한 거울상이성질체 및 라세미체일 수 있는 N-메틸-호모시스테인에 의해 달성된다.
여기서 X1은 황 보호기이고 X2는 수소 원자 또는 질소 보호기이다. X1은 바람직하게는 벤질(Bn), 4-메톡시벤질(Mob), 디페닐메틸, 비스(4-메톡시페닐)메틸, 4,4'-디메톡시트리페닐메틸(DMT), 트리페닐메틸(트리틸), 메톡시메틸(MOM), 9H-플루오렌-9-일메틸 또는 t-부틸술파이드(T.W.Greene, P.G.M.Wuts, 유기합성에서 보호기, 2판, J.Wiley & Sons, New York 1991), 바람직하게 벤질(Bn), 4-메톡시벤질(Mob), 디페닐메틸, 비스(4-메톡시페닐)메틸, 4,4'-디메톡시트리페닐메틸(DMT), 또는 트리페닐메틸(트리틸), 더욱 바람직하게 트리페닐메틸(트리틸)이고 보호기인 경우 X2는 바람직하게는 9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐(Fmoc), 2,7-디브로모-9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐, t-부틸옥시카르보닐(Boc), 벤질옥시카르보닐(Cbz 또는 Z), 트리플루오로아세틸, 2,2,2-트리클로로에틸옥시카르보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에틸-옥시카르보닐(Teoc) 또는 2-트리메틸실릴에틸술포닐(위의 T.W.Greene, P.G.M.Wuts 참조), 바람직하게 t-부틸옥시카르보닐(Boc), 벤질옥시카르보닐(Cbz 또는 Z) 또는 9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐(Fmoc), 특히 바람직하게 9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐(Fmoc)이다.
본 발명에 따라 화학식 I 화합물의 제조는 문헌의 방법(Ben-Ishai, J.Am.Chem.Soc. 1957, 79, 5736-5738; M.A.Blaskovich, M.Kahn, Synthesis 1998, 379-380; G.V.Reddy등, Synth.Commun. 1999, 29, 4071-4077)에 따라 메티오닌(실시예1 참조)으로부터 제조되는 화학식 II의 옥사졸리디논이 산의 존재 하에서 환원제로 개환되어 화학식 III의 N-메틸메티오닌을 형성하고 이후 당해 분야에서 공지된(위의 T.W.Greene, P.G.M.Wuts 참조) 방식으로 황 보호기와 임의로 질소 보호기가 도입되어서 수행된다. 알킬실란, 바람직하게는 트리에틸실란이 환원제로서 선호된다. 트리플루오로아세트산, 펜타플루오로프로피온산, 트리플루오로메틸술폰산 또는 메탄술폰산, 바람직하게는 트리플루오로아세트산이 산으로 선호된다. 반응은 바람직하게는 염화 용매, 디옥산, THF, 디메톡시에탄, 바람직하게는 디클로로메탄이나 클로로포름에서 수행된다. 반응은 -20 내지 +100℃, 바람직하게는 0 내지 40℃에서 수행된다. 반응시간은 5분-10시간, 바람직하게는 0.5-2시간이다. N-메틸메티오닌이 70 내지 95%수율로 획득된다.
당해 분야에서 공지된 방법에 따라(M.Goodman(편집자), Houben-Weyl, Vol. E22, 펩티드 및 펩티드 모방물의 합성, Thieme, 2001) 화학식 I의 화합물이 N-메틸-호모시스테인을 함유한 펩티드 및 펩티드 중간 단계의 생성, 바람직하게는
Fmoc-(N-CH3)Hcy(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-OH,
시클로-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-(N-CH 3 )Hcy 및
시클로-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-(N-CH 3 )Hcy(CH2CO-β-Dap-Phe(4-NH 2)-Cys-Thr-Ser)의 제조에 사용된다.
실시예1
a) t-부틸-(S)-4-[2-(메틸술파닐)에틸]-5-옥소옥사졸리디논-3-카르복실레이트
1리터의 톨루엔에 N-(t-부톡시카르보닐)-L-메티오닌(100g, 0.4몰), 파라포름알데히드(100g, 3.3몰), 건조된 황산마그네슘(200g, 1.7몰) 및 파라톨루엔술폰산(4g, 0.02몰)의 혼합물이 90℃로 3시간 가열된다. 20℃로 냉각하고 얼음으로 냉각하면서 800ml의 포화 중탄산나트륨 용액이 첨가된다. 여과하고 잔류물을 400ml의 에틸 아세테이트로 세정한다. 유기상을 300ml물로 추출하고 황산마그네슘 상에서 건조하고 진공에서 건조될 때까지 증발시킨다. 조잡한 생성물을 150ml의 1:3 헥산/에틸아세테이트에 용해하고 실리카겔 상에서 여과하고 실리카겔을 500ml의 1:3 헥산/에틸아세테이트으로 재-세정한다. 진공에서 건조상태 까지 증발시키면 85.3g의 황색 오일(0.33밀리몰, 83%수율)이 수득된다.
b) N-메틸-L-메티오닌
0℃에서 65ml의 디클로로메탄에 용해된 t-부틸-(S)-4-[2-(메틸술파닐)에틸]-5-옥소옥사졸리디논-3-카르복실레이트(19.4g, 0.074몰)의 용액에 45ml의 트리프루오로아세트산과 40ml의 트리에틸실란(0.25몰)이 0℃에서 적가된다. 얼음으로 냉각하면서 추가 1시간 교반하고 20℃에서 추가 1시간 교반한다. 이후 반응 용액을 진공에서 건조 상태까지 증발시킨다. 다시 100ml디클로로메탄으로 3회 잔류물을 취하고 건조 상태까지 증발시킨다. 이후 100ml물로 잔류물을 취하고 3회 50ml MTBE로 추출한다. 수성 상을 진공에서 건조 상태까지 증발시킨다. 다시 50ml에탄올로 3회 잔류물을 취하고 건조 상태까지 증발시킨다. 잔류물을 150ml MTBE와 혼합하고 20℃에서 2시간 교반한다. 여과하고 50ml MTBE로 재-세정한다. 건조 후에 9.6g(0.059몰, 이론치의 80%)의 무색 고체가 수득된다.
C) N-메틸-S-트리틸-L-호모시스테인
MeOH/드라이아이스로 냉각하면서 N-메틸-L-메티오닌(7.5g, 0.046몰)이 도입되고 암모니아(200ml)와 축합된다. -35℃에서 나트륨(5.2g, 0.23몰)이 한 시간에 걸쳐 조금씩 첨가되고 추가 2시간 교반된다. 이후 염화암모늄(9.7g, 0.18몰)이 조금씩 첨가되고 냉각을 중단하고 질소로 하룻밤 암모니아가 배출된다. 트리페닐메탄올(14.0g, 0.054몰)이 첨가된다. 얼음으로 냉각하면서 50ml의 디클로로메탄과 90ml의 트리플루오로아세트산이 첨가된다. 한 시간 동안 실온에서 교반하고 건조 상태로 증발시킨다. 잔류물을 200ml의 물에 현탁하고 수산화나트륨 용액으로 pH를 13이 되게한다. 추가 한 시간 교반한 후에 흡입시키고(suction off) 고체를 500ml의 물에 현탁한다. 시트르산을 첨가하여 pH4로 설정된다. 600ml의 MTBE가 첨가되고 30분간 교반된다. 흡입하고 각각 100ml의 MTBE로 2번 세정한다. 잔류물을 100ml의 디클로로메탄과 혼합하고, 20ml의 에탄올이 첨가되고 이후 500ml의 MTBE가 적가된다. 추가 한 시간 교반하고 흡입하고 MTBE로 세정한다. 건조 후에 12.6g(0.032몰, 이론치의 70%)의 무색 고체가 수득된다.
d) N-(9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐)-N-메틸-S-트리틸-L-호모시스테인
N-메틸-S-트리틸-L-호모시스테인(16.6g, 0.042몰)이 90ml의 물 및 100ml의 THF에 현탁되고 탄산나트륨(12.58g, 0.12몰)이 첨가된다. 0℃에서, 50ml의 THF에 든 플루오렌일메틸숙신이미딜카보네이트(14.88g, 0.044몰)이 적가되고 추가 3시간 교반된다. 이후 80ml의 물 및 130ml의 에틸 아세테이트와 혼합하고 10분간 교반하고 시트르산으로 pH4가 되게한다. 유기상을 각각 100ml의 물로 2회, 100ml 식염 용액으로 1회 세정한다. 수성상은 100ml 에틸 아세테이트로 1회 재-추출된다. 조합된 유기상을 회전 증발기에서 증발시켜 농축하고 260ml 에틸 아세테이트와 혼합하고 회전 증발기에서 증발시켜 29.2.g의 거품으로 농축하고 디클로로메탄/아세톤 6:4로 크로마토그래피 정제한다. 22.4g(0.036몰, 이론치의 86%)의 생성물이 수득된다.
실시예2
N-(t-부톡시카르보닐)-L-메티오닌 대신에 N-(t-부톡시카르보닐)-D-메티오닌 을 사용하여 위에서 기술된 것과 유사하게 실시예1d)의 제목 화합물의 거울상이성질체 화합물이 수득될 수 있다.
a) t-부틸-(R)-4-[2-(메틸술파닐)에틸]-5-옥소옥사졸리디논-3-카르복실레이트
b) N-메틸-D-메티오닌
c) N-메틸-S-트리틸-D-호모시스테인
d) N-(9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐)-N-메틸-S-트리틸-D-호모시스테인
실시예3
N-벤질옥시카르보닐-N-메틸-S-트리틸-L-호모시스테인
N-메틸-S-트리틸-L-호모시스테인(16.6g, 0.042몰, 실시예1c의 제목 화합물)이 90ml의 물 및 100ml의 THF에 현탁되고 탄산나트륨(12.58g, 0.12몰)이 첨가된다. 10℃에서, 50ml의 THF에 용해된 N-벤질옥시카르보닐-옥시숙신이미드(10.97g, 0.044몰)이 적가되고 10℃에서 추가 3시간 교반된다. 이후 80ml의 물 및 130ml의 에틸 아세테이트와 혼합하고 10분간 교반하고 시트르산으로 pH4가 되게한다. 유기상을 각각 100ml의 물로 2회, 100ml 식염 용액으로 1회 세정한다. 수성상은 100ml 에틸 아세테이트로 1회 재-추출된다. 조합된 유기상을 진공에서 건조상태로 증발시키고 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피 정제한다(이동 용매: 디클로로메탄/아세톤 6:4). 22.08g(이론치의 87%)의 생성물이 무색 고체 거품으로 수득된다.
원소분석
실시예4
N-t-부틸옥시카르보닐-N-메틸-S-트리틸-L-호모시스테인
N-메틸-S-트리틸-L-호모시스테인(16.6g, 0.042몰, 실시예1c의 제목 화합물)이 90ml의 물 및 100ml의 THF에 현탁되고 탄산나트륨(12.58g, 0.12몰)이 첨가된다. 10℃에서, 50ml의 THF에 용해된 디-t-부틸-디카보네이트(9.60g, 0.044몰)이 적가되고 10℃에서 추가 3시간 교반된다. 이후 80ml의 물 및 130ml의 에틸 아세테이트와 혼합하고 10분간 교반하고 시트르산으로 pH4가 되게한다. 유기상을 각각 100ml의 물로 2회, 100ml 식염 용액으로 1회 세정한다. 수성상은 100ml 에틸 아세테이트로 1회 재-추출된다. 조합된 유기상을 진공에서 건조상태로 증발시키고 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피 정제한다(이동 용매: 디클로로메탄/아세톤 6:4). 17.14g(이론치의 83%)의 생성물이 무색 고체 거품으로 수득된다.
원소분석
실시예5
a) N-메틸-S-(4,4'-디메톡시-트리틸)-L-호모시스테인
N-메틸-L-메티오닌(7.5g, 0.046몰, 실시예1b의 제목 화합물)이 도입되고 MeOH/드라이아이스로 냉각하면서 암모니아(200ml)와 축합된다. -35℃에서 나트륨(5.2g, 0.23몰)이 한 시간에 걸쳐 조금씩 첨가되고 추가 2시간 교반된다. 이후 염화암모늄(9.7g, 0.18몰)이 조금씩 첨가되고 냉각을 중단하고 질소로 하룻밤 암모니아가 배출된다. 비스(4-메톡시페닐)-페닐-메탄올(DMT)(17.3g, 0.054몰)이 첨가된다. 얼음으로 냉각하면서 50ml의 디클로로메탄과 90ml의 트리플루오로아세트산이 첨가된다. 한 시간 동안 실온에서 교반하고 건조 상태로 증발시킨다. 잔류물을 200ml의 물에 현탁하고 수산화나트륨 용액으로 pH를 13이 되게한다. 추가 한 시간 교반한 후에 흡입시키고(suction off) 고체를 500ml의 물에 현탁한다. 시트르산을 첨가하여 pH4로 설정된다. 600ml의 MTBE가 첨가되고 30분간 교반된다. 흡입하고 각각 100ml의 MTBE로 2번 세정한다. 잔류물을 100ml의 디클로로메탄과 혼합하고, 20ml의 에탄올이 첨가되고 이후 500ml의 MTBE가 적가된다. 추가 한 시간 교반하고 흡입하고 MTBE로 세정한다. 건조 후에 13.92g(이론치의 67%)의 무색 고체가 수득된다.
원소분석
실시예6
b) N-(9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐)-N-메틸-S-(4,4'-디메톡시트리틸)-L-호모시스테인
N-메틸-S-4,4'-디메톡시트리틸-L-호모시스테인(18.97g, 0.042몰, 실시예5a의 제목 화합물)이 90ml의 물 및 100ml의 THF에 현탁되고 탄산나트륨(12.58g, 0.12몰)이 첨가된다. 10℃에서, 50ml의 THF에 용해된 플루오렌일메틸숙신이미딜 카보네이트(14.88g, 0.044몰)이 적가되고 10℃에서 추가 3시간 교반된다. 이후 80ml의 물 및 130ml의 에틸 아세테이트와 혼합하고 10분간 교반하고 시트르산으로 pH4가 되게한다. 유기상을 각각 100ml의 물로 2회, 100ml 식염 용액으로 1회 세정한다. 수성상은 100ml 에틸 아세테이트로 1회 재-추출된다. 조합된 유기상을 진공에서 건조상태로 증발시키고 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피 정제한다(이동 용매: 디클로로메탄/아세톤 6:4). 22.92g(이론치의 81%)의 생성물이 무색 고체 거품으로 수득된다.
원소분석
실시예6
Fmoc-(N-CH3)Hcy(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-ClTrt-고체상
WO 01/44177(실시예1, 단계1-3)에 기술된 대로 제조된 고체상의 펩티드 Fmoc-(N-CH3)Hcy(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-ClTrt-고체상 기판이 10분간 1:1 NMP/DCM(75ml)에 용해된 5% 피페리딘으로 처리되고 이어서 15분간 NMP(75ml)에 용해된 20% 피페리딘과 반응된다. 고체상을 NMP(3×75ml×1분) 및 DCM(3×75ml×1분)으로 연속 세정한다. 작은 고체상 샘플상에서 수행된 닌히드린 분석으로 반응의 종료를 알 수 있으며 고체상이 NMP(75ml)로 세정된다. 작은 캐리어 수지 부위가 HFIPA로 처리되고 HPLC로 분석된다(디아티에드(Diatied)의 HPLC방법 참조). 21.7분에서 Fmoc-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-OH에 대한 피크는 탐지되지 않지만 12.7분에서 H-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-OH에 대한 피크는 탐지된다. 별도 용기에서 50ml의 NMP에 N-α-Fmoc-N-α-메틸-S-트리틸-호모시스테인(9.20g, 15밀리몰), HATU 시약(5.70g, 15밀리몰) 및 HOAt(2.04g, 15밀리몰)가 용해된다. DIEA(6.96ml, 40밀리몰)을 보호된 N-메틸호모시스테인 용액에 첨가한다. 1분간 교반되고 혼합물을 고체-상 배체에 첨가한다. 약한 아르곤 기류 하에서 4시간 반응 혼합물을 섞는다. 용액을 분리하고 고체상을 NMP(3×75ml×1분) 및 DCM(3×75ml×1분)으로 연속 세정된다. 작은 고체상 샘플상에서 수행된 닌히드린 분석으로 반응의 종료를 알 수 있다. 더 작은 캐리어 수지 부위가 HFIPA로 처리되고 HPLC로 분석된다(디아티에드(Diatied)의 HPLC방법 참조). 12.7분에서 H-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-OH에 대한 피크는 탐지되지 않지만 26.7분에서 Fmoc-(N-CH3)Hcy(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-OH에 대한 피크는 탐지된다.

Claims (10)

  1. 화학식 I의 화합물.
    <화학식 I>
    여기서 X1은 황 보호기이고 X2는 수소 원자 또는 질소 보호기이다.
  2. 제1항에 있어서, X1은 벤질(Bn), 4-메톡시벤질(Mob), 디페닐메틸, 비스(4-메톡시페닐)메틸, 4,4'-디메톡시트리페닐메틸(DMT), 트리페닐메틸(트리틸), 메톡시메틸(MOM), 9H-플루오렌-9-일메틸 또는 t-부틸술파이드임을 특징으로 하는 화합물.
  3. 제1항에 있어서, X2는 9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐(Fmoc), 2,7-디브로모-9H-플루오렌-9-일메틸옥시카르보닐, t-부틸옥시카르보닐(Boc), 벤질옥시카르보닐(Cbz 또는 Z), 트리플루오로아세틸, 2,2,2-트리클로로에틸옥시카르보닐(Troc), 2-트리메틸실릴에틸-옥시카르보닐(Teoc) 또는 2-트리메틸실릴에틸술포닐임을 특징으로 하는 화합물.
  4. 화학식 II의 옥사졸리디논이 산의 존재 하에서 환원제로 개환되어 화학식 III의 N-메틸메티오닌을 형성하고 이후 당해 분야에서 공지된 방식으로 황 보호기와 임의로 질소 보호기가 도입되는 제1항에 따른 화학식 I 화합물의 제조방법.
    <화학식 II>
    <화학식 III>
  5. 제4항에 있어서, 알킬실란이 환원제로 사용되는 방법.
  6. 제4항에 있어서, 산으로서 트리플루오로아세트산, 펜타플루오로프로피온산, 트리플루오로메틸술폰산 또는 메탄술폰산이 사용되는 방법.
  7. N-메틸-호모시스테인을 함유한 펩티드 및 펩티드 중간 단계의 생성을 위한 제1항에 따른 화학식 I 화합물의 용도.
  8. Fmoc-(N-CH3)Hcy(Trt)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-OH의 제조를 위한 제1항에 따른 화학식 I 화합물의 용도.
  9. 시클로-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-(N-CH 3 )Hcy 의 제조를 위한 제1항에 따른 화학식 I 화합물의 용도.
  10. 시클로-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-(N-CH 3 )Hcy(CH2CO-β-Dap-Phe(4-NH 2)-Cys-Thr-Ser)의 제조를 위한 제1항에 따른 화학식 I 화합물의 용도.
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