JP2002533299A

JP2002533299A - 環状ペプチドの合成

Info

Publication number: JP2002533299A
Application number: JP2000572248A
Authority: JP
Inventors: マークレスリースミス，; ウィムデニスフランズミューターマンズ，; グレゴリートーマスボーン，; ロスピーターマックジアリー，
Original assignee: University of Queensland UQ
Current assignee: University of Queensland UQ
Priority date: 1998-09-25
Filing date: 1999-09-24
Publication date: 2002-10-08
Also published as: EP1115738A1; US7589170B1; CA2345407A1; AUPP616498A0; WO2000018790A1; EP1115738A4

Abstract

(57)【要約】本発明は、環状ペプチドおよびペプチド模倣化合物を溶液中および支持体に結合した状態で調製する方法、ならびに薬物スクリーニングプログラムでの使用のための環状ペプチドまたはペプチド模倣ライブラリに関する。特に、本発明は環状ペプチドまたはペプチド模倣物の合成のための一般的戦略に関し、これは穏和な条件下で多様な所望の化合物の効率的な合成を可能にする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、環状ペプチドおよびペプチド模倣物（ｍｉｍｅｔｉｃｓ）を溶液中
でおよび固体支持体に結合した状態で調製する方法、ならびに薬物スクリーニン
グプログラムで使用される環状ペプチドまたはペプチド模倣ライブラリに関する
。特に、本発明は環状ペプチドまたはペプチド模倣物の合成のための一般的スト
ラテジーに関し、これは穏和な条件下で多様な所望の化合物の効率的な合成を可
能にする。

【０００２】（発明の背景）組換えＤＮＡ技術および多様な生物学的活性を仲介するタンパク質の同定およ
び単離の開発は新規な薬物治療の開発を可能にしてきたが、タンパク質は一般に
消化酵素または他の酵素による分解を受けやすいという欠点がある。これは、こ
れらの薬剤が通常、注射によって投与されなければならないということを意味す
るのみならず、体内での半減期が短いことも意味する。

【０００３】タンパク質の生物学的活性はタンパク質分子の三次元構造に依存し、これは主
として種々の異なる非共有結合的相互作用の間のバランスに起因する。タンパク
質薬剤の安定性および受容性を向上させる試みにおいて、タンパク質の活性部位
を包含する比較的短いペプチド配列、ならびに、この活性部位に似た三次元構造
をとる合成分子の両方が広く研究されてきた。骨格がジスルフィド結合および非
共有結合的相互作用によって維持されている構造的に拘束されたペプチド、なら
びに環化によって構造的拘束が提供される環状ペプチドまたはペプチド模倣系は
、これらの分子の安定化に対する特に魅力的な２つのアプローチを提供する。

【０００４】環状ペプチドは多様な強力な生物学的活性を示す。これらは薬物開発プロセス
において、生物学的活性に対して必須の構造的、配座的および動力学的特性の評
価のために配座の拘束を導入する手段として広く探求されている。いくつかの環
状ペプチドはそれ自身が薬物として有用である。他のものは、複数の機能（少し
例を挙げれば、新規な生物学的特性、タンパク質模倣物の開発のためのプラット
フォーム、ナノテクノロジー、特異的金属配位部位、および触媒など）を提供す
べく設計されている。

【０００５】環化は２つの側鎖官能基間のジスルフィド結合形成、１つの側鎖官能基と骨格
α−アミノまたはカルボキシ官能性との間のアミドまたはエステル結合形成、２
つの側鎖官能基間のアミドまたはエステル結合形成、あるいは骨格α−アミノ官
能基およびカルボキシ官能基との間のアミド結合形成によって達成され得る。

【０００６】このクラスの化合物のいずれの適用における潜在的な有用性も、化合物の合成
の困難性によって妨害されている。直鎖状前駆体の合成は通常、高収率および高
純度で進行するが、最後の環化反応は困難であり得、低収率および／または不純
な生成物がもたらされ得る。これは特に、７アミノ酸残基よりも短い環状ペプチ
ドに当てはまり、環状テトラペプチドの合成はほとんど、あるいは全く、環状物
質をもたらさない。

【０００７】これらの環化反応は古典的には溶液中で高希釈で行われてきた。オルトゴナル
（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）保護ストラテジーおよび固相ペプチド合成のための新
規樹脂の出現で環化は達成されているが、ペプチドは樹脂に接続している。固体
支持体上での環状ペプチドの合成のための最も一般的な方法の１つは、アミノ酸
の側鎖を樹脂に接続させることによる。適切なオルトゴナル保護ストラテジーを
用いると、Ｃ末端およびＮ末端は選択的に脱保護され得、そして鎖が構築された
後、樹脂上で環化され得る。このストラテジーは広く用いられており、ｔｅｒｔ
−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）または９−フルオレニルメトキシカルボニ
ル（Ｆｍｏｃ）プロトコルのいずれかと両立する。しかし、これは固体支持体に
接続するための適切な側鎖官能基を含むペプチドに限定される。従って、これは
環状ペプチドのアレイのコンビナトリアル合成にはなじまない。

【０００８】環状ペプチドの効率的な合成を達成するための試行において多くのアプローチ
が用いられている。

【０００９】（リンカー）（ａ）活性化リンカー）環状ペプチドを合成するための１つの手順は環化と同時に樹脂から切断するこ
とに基づく。適切なペプチド配列が固相合成によって樹脂上で構築された後、あ
るいは直鎖状配列が樹脂に付加された後、スキーム１に模式的に示すように、脱
保護されたアミノ基はそのアンカー活性結合と穏和に反応して、保護された環状
ペプチドを生成し得る。

【００１０】

【化２２】

【００１１】環状ペプチドの合成のために用いられている、あるいはその合成に従う種々の
リンカーを表１に示す。

【００１２】

【表１】

【００１３】これらの切断ごとの環化（ｃｌｅａｖａｇｅ−ｂｙ−ｃｙｃｌｉｓａｔｉｏｎ
）ストラテジーは保護された環状ペプチドを生成するので、標的環状物質を合成
するためには最後の脱保護工程が必要とされる。環状反応は通常遅く、収率が低
い。なぜなら、直鎖状アナログの伸張した配座の優先度が、最終的な環化反応を
妨げるからである。

【００１４】（ｂ）セーフティーキャッチリンカー）これらのコンセプトの伸展は、構築物の末端で選択的に修飾されてリンカーの
不安定性を増大させ得る支持体を包含する。これらのリンカーはペプチド合成の
間は安定であり、そして選択的に活性化されて、環化および樹脂からの切断へと
至る。一般に、最終脱保護工程が標的環状ペプチドを得るために必要とされる。
このアプローチに用いられ得るリンカーの例を表２に示す。

【００１５】

【表２】

【００１６】これらのストラテジーもまた直鎖状前駆体の配座的優先性によって制限される
。

【００１７】（ｃ）骨格リンカー）Ｃ−からＮ−への環化を達成するために側鎖を樹脂に接続させるコンセプトの
単純な伸展が骨格Ｎの樹脂への接続である。近年、Ｊｅｎｓｅｎら（１９９６）
は直鎖状ペプチド、ジケトピペラジン、ペプチドアルデヒドおよび環状ペプチド
の合成のために骨格リンカーを用いることを報告した（Ｊｅｎｓｅｎら、１９９
８）。このプロセスにはいくつかの制限があり、これらには第二級アミンをアシ
ル化して「連結した（ｌｉｎｋｅｄ）」アミド結合を形成することの難しさ、お
よび標準的ＦｍｏｃＳＰＰＳがジペプチド段階でほとんど完全なジケトピペラジ
ン形成へと至るという事実が含まれる。この問題を回避するためには特別な保護
ストラテジーを用いることが必要である。

【００１８】

【化２３】（樹脂内鎖転移）環状ペプチドを合成するための別のアプローチは、ペプチド接続点を２つ含む
（そのうちの１つは一時的にマスクされている）リンカーを樹脂に接続させるこ
とを伴う。標準的固相技術を用いて、直鎖状前駆体を樹脂上で構築する。次にＸ
およびＹ官能基（スキーム３）を選択的に脱マスクして、環化させる。リンカー
での切断によりフリーのＣ末端カルボン酸基が遊離し、他方、ペプチドはまだ樹
脂に接続している。次にＣおよびＮ環化を標準的活性化条件によって達成し、環
状ペプチドを得る。

【００１９】

【化２４】この方法は、適切な官能基Ｘをペプチド配列に取り込むこと、ならびに複雑な
脱保護ストラテジーが必要とされることによって、幾分、制限される。これもま
た、直鎖状前駆体が伸張する性質のため、環化収率は低い。

【００２０】（環化のために予備組織化された（ｐｒｅｏｒｇａｎｉｚｉｎｇ）ペプチド）（ａ）可逆的Ｎ−置換）ペプチド環の形成は、任意の他の環化反応と同様に、相互に反応性の鎖末端の
生成と、これらの末端が分子内プロセスに有利な条件下で反応することを必要と
する。環の形成の容易さは、環の配座的安定性、および環形成で生じる内部自由
度の損失に関連する。従って、ターンを誘導するアミノ酸、例えば、Ｇｌｙ、Ｐ
ｒｏまたはＤ−アミノ酸の存在は環の配座的安定性を増大させ、環化収率を向上
させる。ターン構造を安定化させるアミノ酸残基を含まない直鎖状ペプチドにつ
いては、環化反応は潜在的に起こりそうにないか、あるいは遅いプロセスである
ようであり、伸張配座に対する優先度に起因して環形成のときの歪みが大きい。

【００２１】このため、ペプチド主鎖に種々の可逆的化学修飾を行って、シスアミド結合配
座を増強し、それにより環化の際の環の歪みを低減させ、環化収率を向上させる
ことが利用できることになる。シクロ−［ＰｈｅＰｈｅＰｈｅＰｈｅ］の
合成において、各アミドＮがＢｏｃで置換された（Ｃａｖｅｌｉｅｒ−Ｆｒｏｎ
ｔｉｎら、１９９３）。この例において、環化収率は１パーセント未満から２７
％に向上した。同様に、Ｎ−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）（ＨＭ
Ｂ）基を可逆的Ｎ−置換基として使用すると、環状ペプチドの収率が同様に向上
した（Ｅｈｒｌｉｃｈら、１９９６；Ｅｈｒｌｉｃｈら、１９９６）が、これら
の効果を定量する系統的な研究は行われていない。ペプチドライブラリの構築の
観点からは、直鎖状前駆体の全てのアミドＮを置換することは実施不可能である
。

【００２２】（ｂ）環縮小）環縮小化学は、最初により大きくフレキシブルな環を形成するために用いられ
得、ここで所望のＣ末端およびＮ末端が環縮小反応における「素早く閉じる（ｓ
ｎａｐｓｈｕｔ）」ように適した位置に配置されて、脱保護の後に標的環状ペ
プチドを得る。直鎖状未保護ペプチド前駆体からの分子内チアゾリジン形成によ
る環状ペプチドの合成のための環縮小（スキーム４）が、近年報告されている（
Ｂｏｔｔｉら、１９９６）。この手順はチアゾリジン環、および更なる立体中心
を全ての配列に取り入れるという欠点を有し、コンビナトリアルライブラリアプ
ローチに適した一般的手順ではない。

【００２３】

【化２５】いくつかの他の研究グループもまた環縮小アプローチを環状ペプチドの合成の
ために利用している（ＣａｍａｍｅｒｏおよびＭｕｉｒ，１９９７；Ｓｈａｏら
、１９９８）。これらの手順はＣｙｓの存在を必要とするか、あるいは一方の末
端にＧｌｙを含むペプチドの環化に限定されているかのいずれかであり、そのた
めライブラリ開発には適していない。

【００２４】従って、環状ペプチドの合成のための穏和で効率的、かつ用途の広い合成スト
ラテジーが当該分野で非常に必要とされている。本発明者らは今回、環化のため
にペプチドを予備組織化する置換基または他の部分を導入することによって、環
状ペプチドが穏和な条件下で、溶液中および樹脂上の両方で、効率的に合成され
得ることを見いだした。これらの部分（本発明者らはペプチド環化補助基と名付
けた）は、環状ペプチドの収率および純度の向上をもたらす。本発明者らは２つ
のアプローチを試験した：１．可逆的Ｎ−アミド置換基を配列中に配置する。

【００２５】２．分子内センスで天然のライゲーション化学を適用する。本発明者らは、これらを、小環状ペプチドの溶液および固相合成における向上に
ついて評価した。

【００２６】本発明者らは、環化前に予備組織化されたペプチドの効果を系統的に研究し、
そして環状ペプチド合成を補助する新規リンカーを開発した。本発明者らは、生
成物の収率および純度の両方において、従来技術の方法と比べて驚くべき向上を
見いだした。これらの技術の組み合わせは小環状ペプチドの溶液および固相合成
のための強力な一般的アプローチを提供する。

【００２７】本発明者らはまた、環状ペプチド合成を補助する、リンカーおよびペプチド環
化補助基を開発した。

【００２８】本発明の活性化、セーフティーキャッチ、および骨格リンカーストラテジーと
組み合わせて用いられる本発明の環縮小およびＮ−アミド置換技術は、環状ペプ
チドの固相合成のための改良された方法を提供する。

【００２９】（発明の要旨）本発明の特徴は、可逆または不可逆Ｎ置換、またはシス−アミド結合代用物（
ｓｕｒｒｏｇａｔｅ）によるシスアミド結合配座の強制による、ペプチド骨格に
おけるフレキシビリティの誘導と、新規環縮小化学とを組み合わせて、ペプチド
を予備組織化し、そして溶液中における環化反応を促進することである。本発明
の他の特徴は、これらの予備組織化技術の１つ以上と、ペプチドと樹脂との間の
接続を提供する新規リンカーとを組み合わせて、環状ペプチドまたは環状ペプチ
ドライブラリの穏和な効率的な合成のための固相ストラテジーを提供する、選択
肢である。

【００３０】最も好適な一般的局面において、本発明は構造：

【００３１】

【化２６】の環状ペプチドの調製のための溶液および固相方法を提供する。ここで

【００３２】

【化２７】は環状ペプチドまたはペプチド模倣物であり、ここでこの構造の表現は標準的慣
例に従い、Ｃ末端がＰの右側である。これは１から１５の間のモノマー、好まし
くは１から１０モノマー、より好ましくは１から５モノマーを含む。これは単環
状、二環状または多環状環であり得、そして保護または未保護モノマーを含み得
る。

【００３３】本発明の他の一般的局面は、構造：

【００３４】

【化２８】の環状ペプチドまたはペプチド模倣物の合成のための固相方法を提供する。ここ
でＬはリンカー単位であり、環状ペプチドを固体支持体

【００３５】

【化２９】に連結させる。リンカーＬはペプチドの任意の原子に結合し得るが、好ましくは
骨格窒素、またはモノマーの側鎖中の原子に結合する。

【００３６】それゆえ、第１の局面において、本発明は環状ペプチドまたは環状ペプチド模
倣化合物の合成方法を提供し、この方法は以下の工程を包含する：ａ）ペプチドまたはペプチド模倣化合物におけるフレキシビリティを、可逆的
Ｎ置換によって、またはシス−アミド結合代用物を用いてシスアミド結合配座を
強制することによって誘導して、環化を促進する工程、およびｂ）環状ペプチドまたはペプチド模倣化合物を環縮小反応に供する工程。この
環縮小反応は自発的に生じ得、そのため別個の反応は必ずしも必要とされない。

【００３７】この方法は溶液相および固相合成の両方に適用可能である。

【００３８】好適な実施態様において、本発明のこの局面は一般式Ｉの環状ペプチドの溶液
相合成のための方法を提供し、この方法は以下の工程を包含する：ａ）一般式ＩＩＩの直鎖状ペプチドを合成する工程

【００３９】

【化３０】ここでＰは１０から１５モノマー、好ましくは１から１０モノマー、最も好ま
しくは１から５モノマーの直鎖状ペプチドである。

【００４０】Ａ１は、ペプチド骨格上の１つ以上のＮ置換基であり（可逆または不可逆のい
ずれか）であり、あるいは骨格のシス配座を強制する化学的部分であり、そしてＡ２は、原子の共有結合基であり、所望の置換環状ペプチドへと環縮小する前
の大きい初期環状ペプチドを形成するための反応性官能基を含む；ｂ）Ｃ末端を活性化して、一般式ＩＶの環状ペプチドを形成する工程：

【００４１】

【化３１】ｃ）一般式ＩＶのペプチドを環縮小反応によって再配置させて（これは自発的
に生じ得る）、一般式Ｖの環状ペプチドを形成する工程；および必要に応じて

【００４２】

【化３２】ｄ）一般式Ｖの環状ペプチドを脱保護反応に供して、基Ａ１およびＡ２を除去
し、一般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る工程。

【００４３】必要に応じて、更なる化学的官能基で誘導体化されてライブラリの多様性を向
上させるため、または他の環状ペプチドまたは分子との二量体化またはオリゴマ
ー化のために、以下図示するように、Ａ１またはＡ２基の１つ以上をペプチドに
接続したままにして、固体支持体に接続するために適した点を提供する。

【００４４】

【化３３】Ｒ＝固体支持体または他の化学的部分

【００４５】

【化３４】あるいは環縮小はＡ２の自発的排除を導き得る。

【００４６】好ましくは、Ａ１は可逆的Ｎ置換基、例えば、２−ヒドロキシ−４−メトキシ
ベンジル、２−ヒドロキシベンジルまたは２−ヒドロキシ−６−ニトロベンジル
置換基である。

【００４７】好ましくは、Ａ２は求核基（例えば、チオールまたはヒドロキシル）を含み、
これはＣ末端と迅速に反応して、大きい初期環を形成し、これが次に自発的に、
あるいは加熱または更なる化学的処理（例えば、金属イオンの付加）によって、
縮小する。Ａ２は不可逆的置換基であり得、環縮小の後に除去され得、あるいは
環縮小の際に自発的に排除され得る。Ａ２はまた置換のための更なる部位へのア
クセスを提供し、ライブラリの多様性を増大させる。Ａ２はまた、１９９８年９
月２５日出願（本出願と同日）のオーストラリア仮特許出願番号ＰＰ６１６５に
対応する本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願（表題「アミド結合形成のための
補助基」）に記載の一般式Ｉの任意の化合物であり得る。これらの補助基の特定
の例は本明細書中に例示される。

【００４８】第２の局面において、本発明は環状ペプチドの固相合成の方法を提供し、この
方法は以下の工程を包含する：ａ）リンカーＬを介して固体支持体に結合した一般式ＶＩの直鎖状ペプチドを
合成する工程、

【００４９】

【化３５】ここでＡ１およびＰは上記定義の通りであり、Ｌはペプチドの任意の原子と固
体支持体との間のリンカーであり、および（ｂ）（ｉ）このペプチド（保護または非保護モノマーのいずれかを含む）を環化お
よび付随する固体支持体からの切断に供して、一般式ＶＩＩの環状ペプチドを得
、

【００５０】

【化３６】次いで、Ａ１を上記のようにして選択的に除去または誘導体化し、必要であれ
ば次にペプチドの側鎖を脱保護し、そしてＡ１を除去して、一般式Ｉの所望の環
状ペプチドを得る工程；または（ｉｉ）このペプチドを環化して、一般式ＶＩＩＩの第２の固体支持体結合環
状ペプチドを得る工程、

【００５１】

【化３７】のいずれかの工程。

【００５２】当業者はペプチドの側鎖脱保護、Ａ１の除去および固体支持体からの切断は別
々または同時に行われ得ることを理解する。ペプチド保護基、Ａ１の除去および
固体支持体からの切断により、一般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る。

【００５３】あるいは、上記のようなリンカー単位およびＡ２の両方が使用される。

【００５４】それゆえ、他の好適な実施態様において、本発明は環状ペプチドの固相合成の
方法を提供し、この方法は以下の工程を包含する：ａ）一般式ＩＸの直鎖状固体支持体結合ペプチドを調製する工程：

【００５５】

【化３８】ここで、Ａ２、ＰおよびＬは上記の通りである；ｂ）一般式ＩＸのペプチドを環化および付随する固体支持体からの切断に供し
て、一般式Ｘの環状ペプチドを得る工程；

【００５６】

【化３９】ｃ）環状ペプチドＸを環縮小（これは自発的に生じ得る）させて、一般式ＸＩ
の第２の環状ペプチドを得る工程、および

【００５７】

【化４０】ｄ）基Ａ２を誘導体化するか、あるいはＡ２を除去して、式Ｉの所望の環状ペ
プチドを得る工程。

【００５８】他の代替において、一般式ＩＸの直鎖状固体支持体結合ペプチドを固体支持体
上で初期の環化および環縮小に供して、一般式ＸＩＩの固体支持体結合環状ペプ
チドを得ることができ、

【００５９】

【化４１】そして、（ｉ）固体支持体から切断してＡ２置換環状ペプチドを得るか、あるいか（ｉｉ）脱保護し、そして固体支持体から切断して、一般式Ｉの環状ペプチド
を得る。

【００６０】あるいは、基Ａ２は固相または溶液中のいずれかで誘導体化され得る。

【００６１】またも、ペプチド脱保護、Ａ２の除去および固体支持体からの切断は、別々ま
たは同時に行われ得ることが理解される。

【００６２】最も好ましくは、本発明の方法は以下の３つ全てを利用する：（ｉ）Ｎ置換基、（ｉｉ）後で縮小される大きい初期環を形成する原子の共有結合基、および（ｉｉｉ）固体支持体上での合成。

【００６３】従って、第３の局面において、本発明は環状ペプチドの固相合成の方法を提供
し、この方法は以下の工程を包含する：ａ）一般式ＸＩＩＩの直鎖状固体支持体結合ペプチドの合成、

【００６４】

【化４２】ここでＡ１、Ａ２、ＰおよびＬは上記定義の通りである；ｂ）一般式ＸＩＩＩのペプチドを環化および付随する固体支持体からの切断に
供して、一般式ＸＩＶの環状ペプチドを得る工程、

【００６５】

【化４３】ｃ）一般式ＸＩＶの環状ペプチドを環縮小（これは自発的であり得る）に供す
る工程、およびｄ）基Ａ１およびＡ２を切断させて、一般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る工
程。

【００６６】あるいは、本発明のこの局面は環状ペプチドの固相合成の方法を提供し、この
方法は；ａ）一般式ＸＩＩＩの直鎖状固体支持体結合ペプチドの合成工程、ｂ）直鎖状ペプチドを固体支持体上で環化に供して、一般式ＸＶの環状ペプチ
ドを得る工程、

【００６７】

【化４４】ｃ）環状ペプチドを環縮小（これは自発的に生じ得る）に供して、一般式ＸＶ
Ｉの環状ペプチドを得る工程、

【００６８】

【化４５】およびｄ）基Ａ１およびＡ２を切断する工程であって、他方、ペプチドは固体支持体
に結合しており、一般式ＩＩの固体支持体結合環状ペプチドを得る工程、あるい
は

【００６９】

【化４６】ｅ）環状ペプチドを脱保護および付随する固体支持体からの切断に供して、一
般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る工程のいずれか。

【００７０】またも、ペプチドの脱保護、Ａ２の除去および固体支持体からの切断は別々ま
たは同時に行われ得ることが理解される。

【００７１】本明細書の目的に対して、用語「モノマー」は、アミノおよびカルボキシ末端
が１，２、１，３、１，４またはそれより大きい置換パターンで離されている化
合物を包含する。これは、２０の天然に生じるαアミノ酸（ＬまたはＤ配置のい
ずれも）、タンパク質中には通常見られない生合成で入手可能なアミノ酸、例え
ば、４−ヒドロキシ−プロリン、５−ヒドロキシリジン、シトルリン、およびオ
ルニチン；合成的に誘導されたαアミノ酸、例えば、α−メチルアラニン、ノル
ロイシン、ノルバリン、Ｃα−およびＮ−アルキル化アミノ酸、ホモシステイン
、およびホモセリン；および当該分野で公知の他の多くのものを含む。これはま
た、アミノおよびカルボキシ官能化基が１，３またはそれより大きい置換パター
ンで離されている化合物、例えば、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、Ｆｒｅｉｄ
ｉｎｇｅｒラクタム（Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒら、１９８２）、二環状ジペプチド
（ＢＴＤ）（Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒら、１９８２；ＮａｇａｉおよびＳａｔｏ、
１９８５）、アミノ−メチル安息香酸（ＳｍｙｔｈｅおよびｖｏｎＩｔｚｓｔ
ｅｉｎ、１９９４）、および当該分野で周知の他のものを含む。スタチン（ｓｔ
ａｔｉｎｅ）様アイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）、ヒドロキシエチレンアイソ
スター、還元アミド結合アイソスター、チオアミドアイソスター、ウレアアイソ
スター、カルバメートアイソスター、チオエーテルアイソスター、ビニルアイソ
スターおよび当該分野で公知の他のアミド結合アイソスターもまた本発明の目的
のために有用である。従って、用語「ペプチド」は本明細書で使用される場合、
ペプチド模倣化合物を包含する。任意に、ペプチドは当該分野で使用されるタイ
プの１つ以上の保護基で保護され得る（例えば、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｍ．（１
９８４）、”ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ”、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ参照）。

【００７２】ペプチドは１個と１５個との間のモノマー、好ましくは１個と１０個との間の
モノマー、より好ましくは１個と５個との間のモノマーから構成される。

【００７３】固体支持体は、ペプチド、ペプチド模倣物、オリゴヌクレオチド、オリゴサッ
カリド、または有機分子の固相合成に用いられる任意のタイプであり得る。固体
支持体はビーズ、ピン、または固相合成での使用に適した表面のそのような他の
形態であり得る。多様な適切な支持体材料が当該分野で公知である。例えば、Ｍ
ｅｌｄａｌ，Ｍ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９９７
２８９８３−１０４参照。市販のポリスチレン支持体（アミノメチルポリスチ
レン、ベンズヒドリルアミノポリスチレン、ポリエチレングリコール−ポリスチ
レンを含む）が特に適している。

【００７４】「リンカー」は、原子または分子フラグメントを共有結合を介して他のものに
接続する原子の任意の共有結合基を意味する。例えば、Ｓｏｎｇｓｔｅｒ，Ｍ．
Ｆ．、Ｂａｒａｎｙ．Ｇ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１
９９７２８９１２６−１７５参照。典型的には、リンカーは、官能基（例え
ば、エーテル、エステル、アミド、スルホアミド、スルフィド、またはスルホキ
シド官能基）をリンカー内に含む、必要に応じて置換されるアリル、アリール、
アルキレン基を含む。このような官能基は通常２つの基の間の接続を創出するた
め、あるいは基を分離するために、用いられる。

【００７５】「シスアミド結合代用物」はテトラゾールのような化学基（Ｍａｒｓｈａｌｌ
ら、１９８１）であり、これはシス配座を強制する。

【００７６】

【化４７】本明細書の目的に関して、用語「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は「
包含するがそれに限定されない」を意味し、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）
」は対応の意味を有することが、明白に理解される。

【００７７】ペプチド結合を形成するためのカップリング方法は当該分野で周知である。例
えば、ＡＬｂｅｒｉｃｉｏおよびＣａｒｐｉｎｏ，１９９７参照。環状ペプチド
を溶液中、あるいは側鎖または骨格の付加で合成する場合、活性化の選択が環状
物質の収率および純度に影響を与え得る。遅い環化に対して、中間体の活性化直
鎖状ペプチドの寿命が延びると、Ｃ末端残基でのエピマー化が増大する機会が提
供される。エピマー化の程度は、アジド法（Ｉｚｕｍｉｙａら、１９８１）また
はＤＰＰＡを用いたその改変法（Ｂｒａｄｙら、１９８３）の適用によって低減
され得る。しかし、これらの方法は非常に遅く、通常長時間から数日をさえ必要
とする（Ｉｚｕｍｉｙａら、１９８１；ＳｃｈｍｉｄｔおよびＮｅｕｂｅｒｔ，
１９９１；Ｈｅａｖｎｅｒら、１９９１）。ＤＰＰＡと比べて、ＴＢＴＵ（Ｋｎ
ｏｒｒら、１９８９）およびＢＯＰ（Ｃａｓｔｒｏら、１９７５）は速い環化を
提供するが、Ｃ末端でのエピマー化を導き得る。ＨＯＡｔカップリング試薬が、
ペンタ−およびヘキサ−ペプチドの頭−尾（ｈｅａｄ−ｔｏ−ｔａｉｌ）環化を
顕著に改良し、エピマー化率を低減することが、近年、報告されている（Ｅｈｒ
ｌｉｃｈら、１９９６）。

【００７８】（発明の詳細な説明）本発明を、ここで、以下の非限定的な例、および図面のみを参照して、詳細に
記載する。

【００７９】本明細書で用いられる略語は以下の通りである：ＤＩＥＡジイソプロピルエチルアミンＤＭＦジメチルホルムアミドＤＭＳＯジメチルスルホキシドＤＰＰＡジフェニルホスホリルアジドＢＯＰベンゾトリアゾ（ｂｅｎｚｏｔｒｉｚｏ）−１−イルオキシ−トリ
ス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートＨＯＡｔ７−アザ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＨＢＴＵＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロ
ニウムヘキサフルオロホスフェートＨＭＢ２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジルＨＰＬＣ高性能液体クロマトグラフィーＩＳＭＳイオンスプレー質量分析ＬＣ−ＭＳ液体クロマトグラフィー−質量分析ＮＭＲ核磁気共鳴ＲＯＥＳＹ回転フレームオーバーハウザーエンハンスメント分光法ｒ．ｔ．室温ＴＯＣＳＹ総相関（ｔｏｔａｌｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ）分光法。

【００８０】（実施例）（一般的方法）融点はＧａｌｌｅｎｋａｍｐｍ．ｐ．装置で決定され、補正していない。溶
媒の蒸発はＢｕｃｈｉロータリーエバポレータを用いて行った。脱イオン水が全
体を通じて用いられ、そしてこれはＭｉｌｌｉ−Ｑ水精製システム（Ｍｉｌｌｉ
ｐｏｒｅ−Ｗａｔｅｒｓ）によって調製された。焼結ガラスフィルターフリット
を備えたねじ蓋式ガラスペプチド合成反応容器（２０ｍＬ）はＥｍｂｅｌｌＳ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃＧｌａｓｓｗａｒｅ（Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ，Ａｕｓｔｒ
ａｌｉａ）から入手した。ａｌｌ−Ｋｅｌ−Ｆの装置（ＰｅｐｔｉｄｅＩｎｓ
ｔｉｔｕｔｅ）をＨＦ切断のために用いた。アルゴン、ヘリウムおよび窒素（全
て超純粋グレード）はＢＯＣガス（Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ
）から入手した。

【００８１】 ¹ＨＮＭＲスペクトルをＶａｒｉａｎＧｅｍｉｎｉ３００スペクトロメ
ーターで３００ＭＨｚで記録し、そして化学シフトをテトラメチルシランから低
磁場側にδｐｐｍで報告した。カップリング定数（Ｊ）はビシナルプロトン−プ
ロトンカップリングを示す。¹³ＣＮＭＲスペクトルもまたＶａｒｉａｎＧｅ
ｍｉｎｉスペクトロメーターで７５．５ＭＨｚで記録された。ＴＯＣＳＹおよび
ＲＯＥＳＹスペクトルはＢｕｃｈｉＡＲＸ５００スペクトロメーターで行わ
れた。

【００８２】質量スペクトルはイオンスプレー大気圧イオン化源を備えたＰＥ−Ｓｃｉｅｘ
ＡＰＩ−ＩＩＩ三重（ｔｒｉｐｌｅ）四重極子質量分光計で得た。試料（１０
ｍＬ）を、溶融シリカキャピラリインターフェース（内径５０ｍｍ×長さ５０ｃ
ｍ）を通じてイオン化源に直接接続する移動溶媒（３０ｍＬ／分；５０／５０Ｃ
Ｈ₃ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）に注入した。試料の液滴を５ｋＶの正電圧でイオ
ン化し、そしてアナライザにインターフェースプレートを通じて入れ、そして次
に電圧８０Ｖでオリフィス（直径１００−１２０ｍｍ）を通した。フルスキャン
質量スペクトルを質量範囲２００から１０００ダルトンにわたって、０．１Ｄａ
のサイズのスキャンステップで得た。分子質量は、観察されたｍ／ｚ値からＭａ
ｃＳｐｅｃ３．３およびＢｉｏｍｕｌｔｉｖｉｅｗ１．２ソフトウエアパッケ
ージ（ＰＥ−ＳｃｉｅｘＴｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ）を用いて誘導された
。

【００８３】薄層クロマトグラフィー（Ｔｌｃ）はシリカゲル６０Ｆ₂₅₄プレート（Ｍｅｒ
ｃｋＡｒｔ５７３５）上で行われた。クロマトグラムは紫外光下で観察され
、および／またはヨウ素蒸気で発色させた。分取カラムクロマトグラフィーは加
圧下で順相用ＭｅｒｃｋＫｉｅｓｅｌｇｅｌ６０（ＭｅｒｃｋＡｒｔ７
７３４）を用いて行われた。分析用逆相ＨＰＬＣはＣ−１８Ｖｙｄａｃカラム（
２１８ＴＰ５２０２２）を用いて行われ、他方、半−分取逆相ＨＰＬＣはＣ−１
８Ｖｙｄａｃカラム（２１８ＴＰ５２０２２）を用いて行われた。両方のカラム
ともＨｏｌｏｃｈｒｏｍｅ紫外検出器を装備したＷａｔｅｒｓＨＰＬＣ装置に
取り付けた。測定はλ＝２１４ｎＭまたは２５４ｎＭで行った。クロマトグラフ
ィー分離は、Ａ中のバッファーＢの線形グラジエント（Ａ＝０．１％水性ＴＦＡ
；Ｂ＝９０％ＣＨ３ＣＮ、１０％Ｈ２Ｏ、０．０９％ＴＦＡ）を用いて、流速０
．２５ｍＬ／分（マイクロボア（ｍｉｃｒｏｂｏｒｅ））、１ｍＬ／分（分析）
および８ｍＬ／分（分取）で達成した。

【００８４】（材料）Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸、Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ポリアミ
ノメチルスチレン樹脂、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＰＡＭ樹
脂、合成グレードのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）はＡｕｓｐｅｐ（Ｐａｒｋ
ｖｉｌｌｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）またはＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ａｌｅｘａ
ｎｄｒｉａ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から購入した。クロロトリチル樹脂はＰｅｐ
ｃｈｅｍ（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。ＨＢＴＵおよび
ＢＯＰはＲｉｃｈｅｌｉｅｕＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｍｏｎｔｒｅ
ａｌ、Ｃａｎａｄａ）から購入した。トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィ
ン塩酸塩（ＴＣＥＰ）はＳｔｒｅｍＣｈｅｍｉｃａｌｓＩｎｃ．Ｎｅｗｂｕ
ｒｙｐｏｒｔＭＡから購入した。ＡＲグレードのＥｔＯＡｃ、ＭｅＯＨ、ＣＨ ₂ Ｃｌ₂、ＣＨＣｌ₃、ヘキサン、アセトンおよびＨＰＬＣグレードのＣＨ₃ＣＮは
全てＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｕｐｐｌｙ（Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から入手し、
ＨＦはＣＩＧ（Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から購入した。他の全ての試薬はＡＲグレ
ードまたはそれ以上であり、ＡｌｄｒｉｃｈまたはＦｌｕｋａから入手した。

【００８５】（実施例１ペプチド環化補助基）（骨格置換）Ｎ置換はシス−トランス平衡をよりシス配座に有利に変化させて、環化収率を
増強する可能性がある：

【００８６】

【化４８】本発明者らはＮメチル化の数および位置のテトラグリシンの環化収率に対する
影響を検査した。８つの直鎖状テトラペプチドを合成し、これは３つのＣ末端残
基でグリシンおよびサルコシン（Ｎ−メチルグリシン）の全ての置換（ｐｅｒｍ
ｕｔａｔｉｏｎ）を含んでいた。これらを表３にまとめる。

【００８７】

【表３】＊対応するＮ−ＨＭＢ置換直鎖状テトラグリシンについての環化収率。すなわち
、サルコシンが［−Ｎ（ＨＭＢ）−ＣＨ２−ＣＯ−］で置換された場合。

【００８８】各環化についての収率は単離された生成物の重量から計算された。この実験の
結果は、テトラペプチドのＮ−１またはＮ−２位でのＮ置換が環化収率を有意に
向上させ、他方、第３残基でのＮ置換はあまり影響しないことを示唆する。２つ
以上のＮ部位での複数置換の効果は多少、付加的であるように見える。最も優れ
た環化の結果はＮ−１およびＮ−２置換前駆体Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓａｒ−Ｓａｒ
で得られた。しかし、合成の観点からは、Ｎ−１位での置換はあまり望ましくな
い。なぜならこれは直鎖状前駆体の構築の際のジペプチド段階でジケトピペラジ
ンの形成を促進するからである。本発明者らは、骨格置換の位置の変更が二量体
またそれより高次のオリゴマーに対する単環の比率に有意に影響し得ることを見
いだした。

【００８９】本発明者らはこのＮ置換アプローチを可逆的Ｎ置換を含むように広げた。３つ
の直鎖状前駆体、すなわち骨格が未保護のペプチドＸおよび骨格ＨＭＢ置換アナ
ログのＹおよびＺ、を調製した。

【００９０】

【化４９】これらの３つのペプチドを標準的環化プロトコルに供し、そして粗反応混合物
をＨＰＬＣおよびＩＳＭＳで分析した。生成物（モノマーおよび二量体）をさら
にＣ末端ロイシンでのエピマー化について検査した。表４は見いだされた生成物
および単離された物質の対応する収率を示す（重量％）。

【００９１】

【表４】期待されるように、未置換テトラペプチドＸは二量体を生成し、ＩＳＭＳで評
価して検出可能量の単環は存在しなかった。２つの二量体はＨＰＬＣで評価して
１／１０の割合で見いだされた。一番目に溶離する二量体はＬ−ロイシンおよび
Ｄ−ロイシンを１／１の比率で含んでいた。二番目に溶離する二量体は全てＬの
オクタペプチドの環化から形成される。ペプチドＸの環化について考えると、０
．５％のＤ−Ｌｅｕが観察され、そして全収率１８％が達成された。これはＣ末
端での全エピマー化が約３％（０．５／１８×１００）であることに相等しい。

【００９２】他方、骨格置換テトラペプチドＹおよびＺの両方が有意量の環状テトラペプチ
ド（単環）を生成し、これは上記のＮ−Ｍｅの研究に対応する。ペプチドＸにつ
いての場合のように、ペプチドＹを環化すると２つの二量体が形成される［Ｌ−
Ｌｅｕ／Ｄ−ＬｅｕおよびＬ−Ｌｅｕ／Ｌ−Ｌｅｕ］。テトラペプチドＹについ
て全部で８０％の分離した単環がＬ−Ｌｅｕを含むが、驚くべきことにテトラペ
プチドＺについては全部で７０％の分離した単環がＤ−Ｌｅｕを含む。ペプチド
Ｙについては、約５％のＤ−ロイシンが分離した生成物全体から見いだされ、そ
してペプチドＺについては４３％のＤ−Ｌｅｕが見いだされる。テトラペプチド
Ｚについては、これはほぼ１００％のラセミ化（５０％Ｄ−Ｌｅｕ：５０％Ｌ−
Ｌｅｕ）に等しい。Ｃ末端でのエピマー化を最小限にする試みにおいて、テトラ
ペプチドＺの環化をＢＯＰの代わりにＨＡＴＵで行った。これらの条件下で、総
％Ｄ−ロイシンは半分になった。

【００９３】一旦エピマー化したら、テトラペプチドＺはより効率的に環化する（１６％Ｄ
−Ｌｅｕ単環、Ｄ−Ｌｅｕ／Ｄ−Ｌｅｕ二量体は検出されない）。テトラペプチ
ドＹはそれより反応性が低く、有意量の直鎖状ペプチドが３時間の活性化の後に
もまだ存在していた。これはＮ末端での立体障害の増加によって説明され得る。

【００９４】本発明者らは、ＨＭＢ基をテトラペプチドＸの中間のアミド窒素上に導入する
（すなわちテトラペプチドＺ）と環化が補助されるが、Ｃ末端のエピマー化が有
意に促進されると結論する。第３のアミド窒素での置換（テトラペプチドＹ）は
エピマー化を増加させることなく環化を補助するが、ペプチドの反応性を低下さ
せる。以下の実施例３において、本発明者らは環縮小化学を記載する。これはエ
ピマー化の問題を軽減することを補助し得、他方Ｎ置換を通じて環化を増強する
。

【００９５】（実施例１についての実験）このセクションはＮ置換による環化の前のペプチドの予備組織化の実験的詳細
を記載する。

【００９６】（表３の日付（ｄａｔｅ））Ｂｏｃ−Ｓａｒ−Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂を以下のように調製した：Ｂｏｃ
−Ｓａｒ−ＯＨ（３８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）をＣｓ₂ＣＯ₃（３２６ｍｇ、１ｍｍ
ｏｌ）を含む２ｍＬのＨ₂Ｏに溶解した。混合物を凍結乾燥し、そして残渣をＤ
ＭＦ（５ｍＬ）中に取った。溶液をＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂（２．７グラム、
０．７ｍｍｏｌ／グラム）に加え、そして５０℃で終夜加熱した。樹脂を濾過し
、洗浄し、そして乾燥した（３．０５グラム、０．６５ｍｍｏｌ／グラム）。テ
トラペプチドをインサイチュ中和プロトコルを用いて構築した。構築の後、ペプ
チドをＨＦ／ｐ−クレゾール（９／１）を用いて０℃で１時間切断した。次にＨ
Ｆを蒸発させ、生成物を冷エーテル（１０ｍＬ）で沈殿させた。エーテル洗浄（
３×１０ｍＬ）の後、粗ペプチドを水中に溶解し、そしてＨＰＬＣで１００％水
（０．１％ＴＦＡ）を用いて精製した。

【００９７】（環化（表３））精製されたペプチド（０．１ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＤＭＦに溶解した。Ｂ
ＯＰ（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加え、ＤＩＥＡ（０．５ｍｍｏｌ、８７
μＬ）を加えた。終夜攪拌した後、ＤＭＦを減圧除去し、そして残渣をＴＦＡ（
０．１ｇ）を含むアセトニトリル／水（１／１）に溶解し、そして逆相ＨＰＬＣ
カラムに付した。ＨＰＬＣラン（１００％Ａで１０分間、次いで１％から５０％
Ｂへのグラジエント）で単離された生成物をＩＳＭＳおよび分析ＨＰＬＣで分析
し、乾燥および秤量した。収率は単離された生成物の重量から計算した。

【００９８】（エピマー化の研究（表４））Ｎ置換直鎖状ペプチドをクロロトリチル樹脂上で合成した。ＨＭＢ−保護基を
２−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒドによるＮ末端の固相還元的アル
キル化によって導入した（Ｅｄｅら、ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，１
９９６３７９０９７）。第二級アミンのアシル化は以下のＦｍｏｃ保護残基
をＨＯＡＴ（２当量）およびＤＩＣ（１当量）を用いてＤＭＦ中で３０分間予備
活性化し、そして５０℃で１２時間反応を行うことによって行った。ペプチド構
築は先に記載のように完了し、そして直鎖状ペプチドが樹脂から切断する（ＤＣ
Ｍ中１％ＴＦＡ）。全ての３つのペプチド（全てＬ−残基）が、環化の前に逆相
ＨＰＬＣで精製された。

【００９９】（環化）精製されたペプチド（０．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解した
。ＢＯＰ（１３３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加え、次いでＤＩＥＡ（０．５ｍｍ
ｏｌ、８７μＬ）を加えた。３時間攪拌後、ＤＭＦを減圧除去し、残渣をＴＦＡ
（０．１％）を含むアセトニトリル／水（１／１）に溶解し、そして溶液を逆相
ＨＰＬＣカラムに付した。ＨＰＬＣラン（８０％Ａで５分間、次に２％から１０
０％Ｂまでのグラジエント）で単離された生成物をＩＳＭＳ、分析ＨＰＬＣで分
析し、そしてロイシンのエピマー化はアミノ酸分析で決定した。収率は単離され
た生成物の重量およびＡＡ分析からのＬ／Ｄ比から計算された。

【０１００】（実施例２環縮小）小環状ペプチドの溶液および固相合成における問題を克服するための他のアプ
ローチは新規な環縮小化学を利用することである。先に述べたように、優先され
る伸張配座およびアミド結合の剛性が小ペプチド環化における問題である。最初
に大きい、よりフレキシブルな環をフレキシブルな「リンカー単位」を含めるこ
とによって形成することで、端−尾環化の可能性がＣ末端およびＮ末端の有効濃
度の増加によって増強される。次に所望のＣおよびＮ末端を、環縮小反応におけ
る「スナップシャット（ｓｎａｐｓｈｕｔ）」に適した位置に配置する。これ
はスキーム５に模式的に示される。

【０１０１】

【化５０】下記に図示する環縮小補助基はこの目的について評価される。

【０１０２】

【化５１】更なる補助基は以下を包含する：

【０１０３】

【化５２】環縮小アプローチの実現可能性を検査するために、本発明者らは、Ｎ末端にエ
タンチオール基を有する多くの直鎖状ペンタペプチドを合成した。直鎖状前駆体
の合成をスキーム６に示すように達成した。ブロモ酢酸を樹脂結合テトラペプチ
ドのＮ末端に対称的無水物アプローチを用いてカップリングした。ブロモペプチ
ドをＤＭＳＯ中のシスタミンの２Ｍ溶液で処理し、そして得られたペプチドを樹
脂から切断した。ジスルフィド部分をさらにＴＣＥＰを用いて０．１Ｍ炭酸アン
モニウム溶液中で還元し、そして遊離スルフィドをＨＰＬＣで精製した。次にス
ルフィドを標準的環化条件（ＤＭＦ中１０^-3Ｍ、３当量ＢＯＰ、５当量ＤＩＥＡ
）に供した。おそらく、最初に形成されるチオエステルは自発的に再配置されて
エタンチオール置換環状ペプチドとなる。得られる生成物をＮＭＲ試験によって
、ならびにフスルフィドが容易にＤＭＦ中で二量体化するという事実によって確
認した。二量体は単離され、ＩＳＭＳおよびＮＭＲによって特徴付けられた。二
量体のＴＣＥＰでの還元は、遊離スルフィド−ペプチドを定量的収率で再構築し
た。

【０１０４】

【化５３】このプロセスはいくつかの独特の利点を有する。アミンに比べてチオールの求
核性が高いことから、おそらく、チオエステルの迅速な形成がもたらされ、それ
によりエピマー化の可能性が有意に低減される。次にＣおよびＮ末端は環縮小反
応におけるスナップシャットのために適切に配置される。

【０１０５】この例において、エタンチオール基は不可逆的に環状標的に連結している。本
発明者らは先に概略した補助基−ペプチド結合の切断を可能とする他の補助基を
設計および試験した。上記全ての例において、環縮小は５員または６員の縮合環
遷移状態を経て進行する。

【０１０６】（困難な環状ペプチド［シクロ［Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］
の合成：）Ｈ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨは近年報告された環化が
困難な配列の例である（ＳｃｈｍｉｄｔおよびＬａｎｇｅｒ，１９９７）。環化
条件に供した場合、二量体およびそれより高次のオリゴマーが生成された場合、
目的とするシクロペンタペプチドは形成されなかった。以下の一連の実験（スキ
ーム７にまとめる）において、本発明者らは環縮小ストラテジーを用いて単環が
入手可能であったことを示す。

【０１０７】（非置換Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａの環化）対照実験として、本発明者らは非置換直鎖状ペプチド（Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）の環化を標準的な環化条件（ＤＭＦ中１ｍＭ、３当量ＢＯ
Ｐ、５当量ＤＩＥＡ、３時間、室温）を用いて試みた。以前に報告された結果（
ＳｃｈｍｉｄｔおよびＬａｎｇｅｒ，１９９７）から予期されるように、環化二
量体およびいくつかの三量体が得られたのみであり、目的の単環状生成物は単離
されなかった。

【０１０８】（５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補助基を用いた環化）この実験および他の実験で用いられた５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補
助基は、本発明者らの同時係属中のＰＣＴ出願（オーストラリア仮出願番号ＰＰ
６１６５、１９９９年９月２５日出願に対応）に記載の通りとした。５−ニトロ
−２−ヒドロキシベンジル置換基を含むペプチド１ａを合成し、標準的条件下で
環化すると、２つの単環状生成物ならびに有意量の副生成物３ａ（Ｍｒ、８１２
Ｄａ）が得られた。これはフェノール官能基と反応混合物中の過剰のＢＯＰとの
反応によって引き起こされる（スキーム７、Ａ）。活性化試薬と塩基の量を調節
することによって、この副生成物の形成は完全に回避された。初期環化時間の後
の温度および塩基の量を変更し、そして単環状生成物の形成をＬＣ／ＭＳ分析に
よってモニターすることによって、反応条件をさらに最適化した。最も良好な結
果は３時間の反応（ＤＭＦ中１ｍＭ、１当量ＢＯＰ、２当量ＤＩＥＡ、室温）の
後、過剰のＤＩＥＡ（１０当量）を加え、そして混合物を２４時間放置するか、
あるいは６５℃で１時間加熱した場合に得られた。

【０１０９】

【化５４】スキーム７：ペプチド１，２（Ａ）を含む補助基の環化および目的環状ペプチド
７，８（Ｂ）の形成；ｉ）３当量ＢＯＰ／５当量ＤＩＥＡ、３時間、室温；ｉｉ
）１当量ＢＯＰ／２当量ＤＩＥＡ、３時間、室温；１０当量ＤＩＥＡ、１２時間
室温または１時間、６５℃；ｉｉｉ）ｈν（３６６ｎｍ）。

【０１１０】粗生成物のＨＰＬＣプロファイルを図３Ｂに示す。主生成物（５０％単離収率
）はＮＭＲ、ＥＳ−ＭＳおよびキラルアミノ酸分析によって明白に、全てＬの目
的の単環状生成物７ａであると特徴づけられた。１１．５ｐｐｍの¹ＨＮＭＲ
吸収により生成物が遊離ヒドロキシ置換基を含むことが確認され、従って、エス
テル構造を有さず、目的の環状アミド構造構造を有することが確認された。さら
に、少量のＣ末端ラセミ化生成物７ｂ（図３Ｂ参照）もまた単離された。生成物
のキラルアミノ酸分析により、Ｄ−Ａｌａ残基の存在が確認された。

【０１１１】（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補助基を用いた環化）５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補助基は環化の後、容易に除去されない
ので、本発明者らは６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補助基ペプチド２ａを
用いた環化を試験した。オルト−ニトロ置換基は環状中間体６ａの環縮小に対し
て（５ａと比べて）同様の活性化効果を維持するが、感光性の補助基となるとい
う更なる利点を有する。直鎖状ペプチド２ａを合成し、先に５−ニトロ−２−ヒ
ドロキシ誘導体について記載したのと同様に処理した。従って、環化（ＤＭＦ中
１ｍＭ、１当量ＢＯＰ／２当量ＤＩＥＡ）を室温で３時間行い、次いで過剰のＤ
ＩＥＡ（１０当量）を加えて、６５℃で１時間加熱した。主生成物は収率３９％
で単離され、そしてＮＭＲおよびキラルアミノ酸分析で全てＬのシクロペンタペ
プチド８ａと特徴づけられた。少量のＣ末端ラセミ化環状生成物（Ｄ−Ａｌａを
含む）８ｂもまた単離された。

【０１１２】同様にＮ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
−Ａｌａ−Ａｌａ２ｃを構築し、そして上記のように環化した。全てＬのシク
ロペンタペプチド８ｃが収率４５％で単離された。

【０１１３】（補助基の除去）次に、キラルペプチド８ａを、標準的なＵＶランプを用いて３６６ｎｍで、種
々の溶媒条件下で光分解に供した。ほとんどの溶媒（ＭｅＯＨ、ＭｅＯＨ／Ａｃ
ＯＨ、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ、ジオキサン）において、骨格窒素上のニトロベンジル
置換基は容易に除去されて、標的環状ペプチド９ａ（スキーム５、Ｂ）が生じる
。図４は、完全かつ効率的な転化（８ａから９ａ）を示す。

【０１１４】環状生成物をキラルアミノ酸分析および¹ＨＮＭＲで特徴づけた。スペクト
ルデータは報告されたデータと良く一致した。さらに、Ｓｃｈｍｉｄｔら（１９
９７）に従ってＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａの環化によって調製さ
れた環状ペプチドの独立した試料を光分解から得られた生成物と共に溶離した。

【０１１５】同じ生成物９ａが位置（ｒｅｇｉｏ）アナログ８ｃの光分解から得られた。ラ
セミ化環状生成物８ｂを光分解し、そして同様に非置換Ｄ−Ａｌａ含有生成物９
ｂを生成し、これを独立して合成した試料と共に溶離した。

【０１１６】（実施例２の実験）このセクションは、環縮小コンセプトを小環状ペプチドの合成のために用いる
実験的詳細を記載する。

【０１１７】（環縮小）（環縮小補助基の合成）（Ｎ−（２−ブロモエトキシ）フタルイミド）

【０１１８】

【化５５】Ｎ−（２−ブロモエトキシ）フタルイミドを、ＢａｕｅｒおよびＳｕｒｅｓｈ
の手順（Ｂａｕｅｒら、１９６３）の変法によって合成した。Ｎ−ヒドロキシフ
タルイミド（８０ｇ、０．４９ｍｏｌ）、トリエチルアミン（１５０ｍＬ、１．
０８ｍｏｌ）、および１，２−ジブロモエタン（１７５ｍＬ、２．３０ｍｏｌ）
をＤＭＦ（５７５ｍＬ）中で合わせ、室温で終夜攪拌した。固体を濾過し、ＤＭ
Ｆで洗浄し、そして濾液を水（４．０Ｌ）で希釈し、得られた沈殿を濾過し、Ｅ
ｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶解し、そして１ＮのＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、水
（１×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。揮発性物質を減圧除去し
、得られた固体を９５％ＥｔＯＨから再結晶して（９）を白色固体として得た。
（８７．１ｇ、７０％）：ｍｐ．９４−９６℃；文献ｍｐ．９４−９６℃。¹Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ７．８２（ｍ，４Ｈ）、４．４９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝
６．９Ｈｚ）、３．６５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。

【０１１９】（Ｎ−［２−［Ｓ−（４−メチルベンジル）チオ］エトキシ］フタルイミド）

【０１２０】

【化５６】Ｎ−［２−［Ｓ−（４−メチルベンジル）チオ］エトキシ］フタルイミドを、
Ｃａｎｎｅらの手順（Ｆｌａｎｉｇａｎ、１９７１）の変法によって合成した。
ブロミド（５５．１５ｇ、２１７ｍｍｏｌ）、４−メチルベンジルメルカプタン
（３０ｇ、２１７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３８．５５ｍＬ、２１７ｍｍｏ
ｌ）をアセトニトリル（２００ｍＬ）中で合わせ、室温で７２時間攪拌した。揮
発性物質を減圧除去し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を加え、濾過した。固体をＥ
ｔＯＡｃで洗浄し、有機相を合わせ、そして１ＮのＨＣｌ（２×２００ｍＬ）、
ブライン（１×２００ｍＬ）および水（１×２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄
で乾燥した。揮発性物質を減圧除去し、得られた固体をＥｔＯＡｃ：ヘキサン（
１：１）から再結晶して、（１０）を白色固体として得た。（５０．１４ｇ、７
１％）：ｍｐ．８２−８４℃；¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ７．８０（ｍ，４
Ｈ）、７．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．０４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．
０Ｈｚ）、４．２２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）、３．７５（ｓ，２Ｈ）、２
．７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．２７（ｓ，３Ｈ）。

【０１２１】（ｓ−（４−メチルベンジル）−２−（アミノオキシ）エタンジオール）

【０１２２】

【化５７】ｓ−（４−メチルベンジル）−２−（アミノオキシ）エタンジオールをＯｓｂ
ｙら（１９９３）の手順の変法で合成した。Ｎ−置換フタルイミド（２０．０ｇ
、６１．１ｍｍｏｌ）を２−プロパノール（５５０ｍＬ）および水（８５ｍＬ）
の溶液中に懸濁し、１０℃より下に冷却した。ＮａＢＨ₄（１８．９ｇ、２５２
ｍｍｏｌ）を滴下し、温度がこの温度を越えないようにした。混合物を室温まで
加温し、終夜攪拌した。酢酸（１３５ｍＬ）をバブリングが止むまでゆっくりと
加え、そしてフラスコに栓をし、５０℃で３時間加熱した。揮発性物質を減圧除
去し、得られた油溶液を１ＮのＮａＯＨで希釈し、そしてＥｔＯＡｃ（４×２０
０ｍＬ）で抽出した。次にヒドロキシルアミンををＨＣｌ（２Ｎ、５００ｍＬ）
の溶液中に抽出し、そしてＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍＬ）で洗浄した。次にＮａ
ＣＯ₃を水相にバブリングが止むまで加え、そしてヒドロキシルアミンをＥｔＯ
Ａｃ（３×２５０ｍＬ）中に抽出した。合わせた有機層をＨ₂Ｏ（２×２５０ｍ
Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。揮発性物質を減圧除去し、得られた油状
物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、３：１）で精製し
て、透明な無色油状物を得た。（１０．０４ｇ、８４％）：¹ＨＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ₃）：δ７．２１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．１２（ｄ，２Ｈ，Ｊ
＝８．０Ｈｚ）、５．４０（ｂｒｓ，２Ｈ）、３．７７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．
５Ｈｚ）、２．７１（ｓ，２Ｈ）、２．６４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），２
．３３（ｓ，３Ｈ）。

【０１２３】（環縮小補助基（スキーム６）ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａ
ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨの適用）

【０１２４】

【化５８】ペプチドＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ
−Ｇｌｙ−ＯＨを、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｐａｍ樹脂（０．５ｇ、０．５ｍｍｏｌ／
ｇ）から、確立された方法で、Ｂｏｃ化学に対するインサイチュ中和／ＨＢｔＵ
活性化プロトコルを用いて段階的な方法で合成した。Ｐｍｃ保護基をＡｒｇ残基
に対して用いた。カップリング反応を定量的ニンヒドリンアッセイでモニターし
、典型的には＞９９．９％であった。鎖構築が完了し、Ｎα−Ｂｏｃ基をニート
なＴＦＡ（２×１分処理）で除去し、そしてＤＭＦ中１０％ＤＩＥＡ（２×１分
処理）で中和した後、ペプチドをＲｏｂｅｙ（Ｒｏｂｅｙ，Ｆ．Ａ．、Ｆｉｅｌ
ｄｓ，Ｒ．Ｌ．、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９９８１７７３７３−３
７７）の方法でブロモアセチル化した。ブロモ酢酸（２７７．９ｍｇ、２．０ｍ
ｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）に溶解し、これにＤＩＣ（１２６．２ｍｇ、１
ｍｍｏｌ）を加えた。１０−１５分間活性化して対称無水物を形成した後、混合
物をＤＭＦ（２ｍＬ）で希釈し、ペプチド樹脂に加え、そして３０分間カップリ
ングした。樹脂をＤＭＳＯで洗浄し、そしてシスタミン（ＤＭＦ中２Ｍ、４ｍＬ
）をブロモアセチル化ペプチド樹脂と１６時間反応させた。直鎖状ペプチドを樹
脂から、チオクレゾール：クレゾール、１：１（１ｍＬ）の添加、次いでＨＦ（
１０ｍＬ）で１時間、−５℃で処理することによって切断させた。ＨＦを減圧下
除去した後、粗ペプチドを無水Ｅｔ₂Ｏ中で沈殿させ、そして濾過してスカベン
ジャーを除去した。ペプチドをＨＯＡｃ：Ｈ₂Ｏ、１：１９に溶解し、濾過し、
そして濾液を凍結乾燥した。ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨを半−分取ＨＰＬＣ（２０−８０％Ｂ、６０分
）で精製して、所望の物質（７９．６ｍｇ、４７％）を得た。ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺
＝６６８．１（予想６６８．３）。

【０１２５】（ＨＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ）

【０１２６】

【化５９】ジスルフィド（６６．８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をＮＨ₄ ⁺ＯＡｃ^-（２０ｍ
Ｌ）の０．０３Ｍ溶液に溶解した。トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン
塩酸塩（ＴＣＥＰ）（３５．６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、室温で溶液を攪拌
しながら滴下した。さらに室温で３時間の後、得られた混合物を凍結乾燥して、
白色粉末を得た。ペプチドＨＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−
ＯＨを半−分取ＨＰＬＣ（２０−８０％Ｂ、６０分）で精製して、白色粉末を得
た（４０．１ｍｇ、６８％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝５９３．１（予想５９３．３
）。

【０１２７】（シクロ−（ＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ））

【０１２８】

【化６０】直鎖状ペプチドＨＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−
ＯＨ（４０．０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）およびＢＯＰ（８８．４ｍｇ、０．
２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６８ｍＬ、１×１０^-3Ｍ）中で−１０℃で攪拌した。Ｄ
ＩＰＥＡ（１２１μＬ、０．６８ｍｍｏｌ）を溶液に滴下した。反応をさらに２
時間、この温度で攪拌して放置し、その後全ての揮発性物質を減圧除去した。ペ
プチドシクロ−（ＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ）を
半−分取ＨＰＬＣ（２０−８０％Ｂ、６０分）で精製して、白色粉末を得た（１
２．２ｍｇ、３１％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７４３．２（予想７４３．４０９２
）。

【０１２９】（ビス−［シクロ−Ｇｌｙ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｓ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌ
ｙ］）

【０１３０】

【化６１】ペプチド、シクロ−（ＳＣＨ₂ＣＨ₂−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌ
ｙ）（１２ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）をＮａ₂ＨＰＯ₄（０．０３Ｍ）の溶液に
溶解し、室温で終夜攪拌した。得られた溶液を凍結乾燥して白色粉末を得た。ペ
プチド、ビス−［シクロ−Ｇｌｙ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｓ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−
Ｇｌｙ］を逆相ＨＰＬＣ（２０−８０％Ｂ、６０分間）で精製し、白色粉末を得
た。（７．４ｍｇ、８１％）；ＭＳ［Ｍ＋２Ｈ］⁺＝５７４．２２（予想５７４
．２７）。

【０１３１】（シクロ−（Ｇｌｙ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＨ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ）
）

【０１３２】

【化６２】ジスルフィド（７．４ｍｇ、６．５０μｍｏｌ）をＮＨ₄ ⁺ＯＡｃ^-（２０ｍＬ
）の０．０３Ｍ溶液に溶解した。ＴＣＥＰ（４．７５ｍｇ、２０．０μｍｏｌ）
を室温で攪拌した溶液に滴下した。この温度でさらに３時間後、得られた混合物
を凍結乾燥して、白色粉末を得た。ペプチド、シクロ−（Ｇｌｙ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｓ
Ｈ）−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ）を半−分取ＨＰＬＣ（２０−８０％Ｂ
、６０分間）で精製して、白色粉末を得た。（５．５ｍｇ、７４％）；ＭＳ［Ｍ
＋Ｈ］⁺＝５７５．２４（予想５７５．２８）。

【０１３３】（シクロ［ＡｌａＰｈｅＬｅｕＰｒｏＡｌａ］の合成のための実験）（環化実験）補助基含有ペプチド１および２の環化：ＤＭＦ中の１当量のＢＯＰおよび２当
量のＤＩＥＡをＤＭＦ中の直鎖状ペプチドの１ｍＭ溶液に加え、そして３時間、
室温で攪拌した。１０当量のＤＩＥＡを次に加え、そして溶液を６５℃で１時間
加熱した。ＤＭＦを減圧除去し、そして粗生成物をアセトニトリル／水（１：１
）に溶解し、そしてＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。

【０１３４】他の直鎖状ペプチドの環化：環化をＤＭＦ中の直鎖状ペプチドの１ｍＭ溶液を
用いて行った。３当量のＢＯＰおよび５当量のＤＩＥＡを加え、そして溶液を室
温で３時間攪拌した。ワークアップを上記のように行った。

【０１３５】（シクロ−［Ｎ−（５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（７ａ））Ｎ−（５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ａｌａ１ａ（ＴＦＡ塩３０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）の環化により７
ａ（１２．５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を収率５１％で生成した：ＥＳ−ＭＳ
Ｍｒ６５０．２、Ｃ₃₃Ｈ₄₂Ｎ₆Ｏ₈の計算値、６５０．３（モノ同位体）。

【０１３６】

【数１】（シクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（８ａ））Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ａｌａ２ａ（ＴＦＡ塩２０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）の環化から、８
ａ（６．５ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を収率３９％で得た：

【０１３７】

【数２】（シクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ］（８ｃ））Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａ
ｌａ−Ａｌａ（ＴＦＡ塩２０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）の環化から、８ａ（７
．３ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を収率４４％で得た：ＥＳ−ＭＳＭｒ６５
０．２、計算値Ｃ₃₃Ｈ₄₂Ｎ₆Ｏ₈、６５０．３（モノ同位体）。

【０１３８】

【数３】（シクロ−［Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（９ａ））ａ）シクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（１ｍＭＭｅＯＨ）を窒素で３０分間パージし
、そして次に標準的な実験室用ＵＶランプ（３６６ｎｍ、０．２５Ａ）で３時間
、光分解した。ＭｅＯＨを蒸発させ、そして残渣を５０％バッファーＢに溶解し
、そして溶液をＨＰＬＣ精製のためにＶｙｄａｃＣ１８カラム（分取）に直接
充填した。シクロ−［Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］が収率５２％
で単離された。生成物を独立して合成された試料と共に溶離した。ＥＳ−ＭＳ
Ｍｒ４９９．４、計算値Ｃ₂₆Ｈ₃₇Ｎ₅Ｏ₅、４９９．３（モノ同位体）。ｂ）精
製されたシクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ｐｈｅ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ］を上記のように光分解した。シクロ−［Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ］を収率２８％で単離した。生成物を独立し
て合成した試料で共に溶離した。ＥＳ−ＭＳＭｒ４９９．１、Ｃ₂₆Ｈ₃₇Ｎ₅
Ｏ₅の計算値、４９９．３（モノ同位体）。

【０１３９】（実施例３溶液中での骨格置換および環縮小）この実施例において、本発明者らは、環縮小による環化が、骨格置換ペプチド
に対しての方がその骨格非置換アナログに対してよりもかなり容易であることを
実証する。本発明者らは６−ニトロベンジル−２−ヒドロキシ補助基を骨格置換
基および環縮小補助基の両方として使用した。当業者はＨｎｂ−基が容易に、上
記のように他の多くの補助基で置き換えられ得ることを理解する。一般反応スキ
ームは以下の通りである：二置換直鎖状ペプチド１の環化により二置換頭−尾環
状ペプチド２が生成される。骨格上の両置換基を次に光分解によって除去して、
目的の環状ペプチド３を形成する。

【０１４０】

【化６３】スキーム８：組み合わせたアプローチ：骨格置換および環縮小環縮小の役割ならびに環状テトラペプチドの形成における骨格置換基の位置を
評価するために、本発明者らは以下の直鎖状ペプチドの組を合成した：１ａ．［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ１ｂ．Ｔｙｒ−［Ｈｎｂ］Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ１ｃ．Ｔｙｒ−Ａｒｇ−［Ｈｎｂ］Ｐｈｅ−Ｇｌｙ１ｄ．［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−［Ｈｎｂ］Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ１ｅ．［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−［Ｈｎｂ］Ｐｈｅ−Ｇｌｙ。

【０１４１】全てのペプチドを並行して同じ条件下（室温または６５℃のいずれか）で、１
ｍｇペプチドスケールで、環化した。ＤＭＦ中のペプチド（１ａ−ｅ）の１ｍＭ
溶液を１当量のＢＯＰおよび２当量のＤＩＥＡで処理した。室温で３時間後、１
０当量のＤＩＥＡを加え、そして攪拌を室温で６時間または６５℃で１時間続け
た。次に溶媒を除去し、そして残渣をアセトニトリル／水で溶解し、そしてＨＰ
ＬＣおよびＭＳで分析した。

【０１４２】ペプチド１ａは容易に初期閉環されたが、環縮小して目的の生成物となるのは
遅く、更なる加熱時間を必要とした（６５℃／２時間）。１ａの環化を室温（６
時間）で行った場合、環化ペプチドは粗生成物中に検出されなかった。対照ペプ
チド１ｃは主として環化二量体（ＭＷ：計算値Ｃ₆₆Ｈ₇₆Ｎ₁₆Ｏ₁₆＝１３４８．６
、実験値＝１３４８．２）および直鎖状二量体（ＭＷ：計算値Ｃ₆₆Ｈ₇₈Ｎ₁₆Ｏ₁₇ ＝１３６６．５（モノ同位体）、実験値＝１３６６．７）を生じ、目的の単環の
形成はほんの少量であった。対照ペプチド１ｂは環化条件下で生成物の複雑な混
合物を生じた。

【０１４３】対照的に、ペプチド１ｄおよび１ｅは両方とも骨格置換基および環縮小補助基
を含み、閉環および環縮小は同じ穏和な反応条件下（６時間、室温）でほぼ完了
した。図５はペプチド１ａ、１ｄおよび１ｅの室温で６時間後の環化プロファイ
ルを示す。これらの穏和な条件下で、ペプチド１ａは有意な環縮小を全く受けず
、そして粗生成物は大量の直鎖状ペプチド（Ｌ）を含んでいた。他方、ペプチド
１ｄおよび１ｅは、目的の環状ペプチドであるシクロ−［［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−［
Ｈｎｂ］Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］２ｄおよびシクロ−［［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−Ａ
ｒｇ−［Ｈｎｂ］Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］２ｅを各々（ＭＷ：計算値Ｃ₄₀Ｈ₄₃Ｎ₉Ｏ₁₁
＝８２５．５（モノ同位体）、実験値（シクロペプチド２ｄ）＝８２５．１、実
験値（シクロペプチド２ｅ）＝８２５．１）、優れた純度および収率で生成した
。環状生成物は同じ分子量を有するが置換パターンは異なることに留意のこと。

【０１４４】これらの結果は明らかに、Ｎ−骨格置換基がテトラペプチドのような高度に拘
束された環系に対する環縮小の促進に重大な役割を果たしていることを示す。ま
た、このことから、本発明者らの組合せストラテジーによって、種々の環状テト
ラペプチドおよびペプチド模倣物を入手することが可能となることが明らかであ
る。ペプチド１ｄ（１０ｍｇ）の大規模での環化は環状（二置換）生成物２ｄを
、ＨＰＬＣ単離の後、収率６１％で生成した。この生成物の光分解（３時間／Ｄ
ＭＦ）は目的のシクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］３を生成した。環
化、精製、光分解およびＨＰＬＣ単離の後の全体での収率は２８％（重量）であ
った。

【０１４５】（ラセミ化の評価）環化の際のラセミ化の程度を試験するために、本発明者らは以下のペプチドの
組の合成および環化を選択した：１ｆ．［Ｈｎｂ］Ｇｌｙ−［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ１ｇ．［Ｈｎｂ］Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−［Ｈｎｂ］Ａｒｇ−Ｐｈｅ１ｈ．［Ｈｎｂ］Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−［Ｈｎｂ］Ｐｈｅ。

【０１４６】これらのペプチドの環化は、異なる構造であるが同じＭＷの環化生成物を生じ
ることに留意のこと。環化は最初は小規模（１ｍｇ）で行った。ペプチド１ｆお
よび１ｇは本発明者らの「標準」環化条件下で正しい分子量の２つの単環状生成
物を生じた。出発物質または他の生成物は検出されなかった。ペプチド１ｆにつ
いてのＨＰＬＣプロファイルを図６に示す。

【０１４７】他方、ペプチド１ｈの環化はいくらか遅く、そして主としてＤ−Ｐｈｅ環状生
成物を生じた。この生成物は６０％の直鎖状ペプチドを含む。

【０１４８】ラセミ化をさらに研究するために、以下の試薬および溶媒の組合せを評価した
：溶媒：ジオキサンまたはＤＭＦ活性化試薬：ＢＯＰまたはＨＡＴＵ塩基：ＤＩＥＡまたは対称コリジン時間／温度：室温で２０時間または７０℃で１時間。

【０１４９】全部で１６の反応条件を並行して適用し、これは、上記溶媒、試薬、塩基およ
び条件の全ての組合せを含んでいた（１当量の活性化試薬、２当量の塩基、溶媒
中１ｍＭのペプチド１ｆ）。反応生成物を、Ｇｅｎｅｖａｃ中で溶媒を除去し、
そして残渣をアセトニトリル／水中に再懸濁し、次にＨＰＬＣ分析することによ
って分析した。ジオキサンは環化のための貧溶媒であることが証明された。試験
したほとんどの場合において、出発物質のみが検出され得た。これはおそらく直
鎖状ペプチドがジオキサンにほとんど溶解しないという事実によるものである。
ＤＭＦの実験について、ＨＡＴＵ活性化はＬ−環状ペプチドをより多く生成した
が、その影響は小さかった（図４参照）。コリジンをＤＩＥＡに替えても生成物
プロファイルには影響はなく、同量のラセミ化が観察された。

【０１５０】大規模環化をペプチド１ｆで行い、そして２つの環状生成物がＨＰＬＣによっ
て混合物として収率６８％（重量）で単離された。２つの生成物はＨＰＬＣで分
離され、そして光分解されて、１つの非置換環状ペプチドを各々生成し得た（Ｍ
Ｗ＝５２３グラム／ｍｏｌ）（同時溶離なし）。生成物の１つはペプチド１ｄ由
来の生成物と同時に溶離し、従って、全てＬのシクロ−［Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｈｅ］と帰属された。２つ目に溶離した生成物はシクロ−［Ｇｌｙ−Ｔｙ
ｒ−Ａｒｇ−（Ｄ）Ｐｈｅ］と帰属された。混合物の光分解は２つの環状非置換
ペプチドの混合物を収率３４％（総収率２３％）で生じた。第１の生成物はペプ
チド１ｄの環化とその後の光分解によって得られる生成物と共に溶離した。

【０１５１】（シクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ａｌａ］の合成のための環縮小および
骨格置換とＴｙｒからＡｌａ部位での環化との組合せ）本明細書の背景のセクションで述べたように、ＧｌｙおよびＰｒｏのような回
転誘導要素は環化に有利であり得る。ここで、本発明者らは、本発明者らの組合
せ技術を回転誘導アミノ酸を含まないペプチドの合成に適用する。この実施例に
おいて、本発明者らは組合せ方法（骨格置換および環縮小補助基）を、非常に困
難な標的、すなわち全てがＬの環状テトラペプチドシクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−
Ｐｈｅ−Ａｌａ］の合成ために利用した。

【０１５２】（４［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−［Ｈｎｂ］Ｐｈｅ−Ａｌａ）小規模（１ｍｇペプチド）環化を以下の条件を用いて研究した：ｉ．ＤＭＦ中１ｍＭのペプチド溶液、１当量ＢＯＰ、２当量ＤＩＥＡ、室温で
３時間。

【０１５３】ｉｉ．１０当量のＤＩＥＡの添加ｉｉｉ．室温で２０時間；または７０℃で１時間；または７０℃で２０時間。

【０１５４】これらの環化条件下のペプチド４は、正確な分子量の環状生成物を提供した。

【０１５５】ペプチド４の環化が改良され得たかどうかを立証するために、最適化を行った
。ここで溶媒および温度条件は上記の標準プロトコル内で変更した。溶媒：（ｉｉｉ）中の温度条件ＤＭＦ２０時間室温ＤＭＳＯ１時間７０℃ ジオキサン２０時間７０℃ トルエンジオキサンまたはトルエンとして用いた場合、使用したいずれの温度でも非常
に低い収率で環状生成物が得られた。一般に，ＤＭＳＯはＤＭＦと比べて、図７
に示すように、有意にきれいな反応プロファイルを生じた。

【０１５６】ＤＭＳＯ実験の結果を以下のようにまとめることができる：２０時間／室温：２つの主要な環状生成物が形成される（ＡおよびＢ）；両方と
もＥＳ−ＭＳで正しい分子量を示した（ＭＨ⁺ ８４０ｍ／ｚ）。１時間／７０℃：同様の結果、ただし２つの単環状生成物のうちの１つ（Ａ）は
強度が減少する。２０時間／７０℃：１つの単環状生成物のみが形成される（Ｂ）。単環状生成物
（Ａ）は存在しない。

【０１５７】大規模環化（直鎖状ペプチド６０ｍｇ）をＤＭＳＯ中、室温（２０時間）で行
い、２つの単環状生成物がＨＰＬＣによって単離された（合わせた収率：４６％
、比率は約１／１である）。

【０１５８】２つの環状生成物を加熱および光分解に供した：生成物Ａ：熱に対して不安定；生成物は、ＤＭＳＯ中、７０℃で２０時間加熱す
ると、完全に分解した。加水分解に対して安定（水性緩衝液、ｐＨ９）。この化
合物のＤＭＳＯ中での光分解は適度に進行した；両方のＨｎｂ基が除去され、そ
してシクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−（Ｄ）Ａｌａ］がＨＰＬＣで収率４２
％で単離された。Ｄ−Ａｌａの存在はキラルアミノ酸分析で確認された。生成物Ｂ：熱におよび加水分解条件（水性緩衝液、ｐＨ９）に対して安定。光分
解は容易には進行しなかった。キラルアミノ酸分析によりＬ−Ａｌａの存在が確
認された。この生成物は全てＬのシクロ−［（Ｈｎｂ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｈｎ
ｂ）Ｐｈｅ−Ａｌａ］である。

【０１５９】組合せアプローチの用途の広さをさらに評価するために、本発明者らはペプチ
ド５の環化を「通常」条件下で試験した：（ｉ）１当量ＢＯＰ、２当量ＤＩＥＡ、１ｍＭＤＭＦ（３時間、室温）；（ｉｉ）１０当量ＤＩＥＡ（１２時間、室温）。

【０１６０】（５．［Ｈｎｂ］Ａｌａ−Ｔｙｒ−［Ｈｎｂ］Ａｒｇ−Ｐｈｅ）ＡｌａからＰｈｅ部位での環化を大規模（３０ｍｇ）で行った。１つの環状生
成物（これは予想した分子量および同位体分布パターンをＥＳ−ＭＳで示した）
が分取ＨＰＬＣによって収率５３％で単離された。

【０１６１】驚くべき結果がこの実施例で報告され、これは環状ペプチドおよびペプチド模
倣物の合成のための組合せアプローチの力を示す。当業者はまた、この組合せを
固体支持体上での環状ペプチドの合成に適用する可能性を理解するであろう。

【０１６２】（実施例３のための実験：）ペプチド合成：直鎖状ペプチド１ａ−ｅをクロロトリチル樹脂（０．９１ｍｍ
ｏｌ／ｇ）上で合成した。Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨを樹脂に、供給者（Ｐｅｐｃ
ｈｅｍ）によって推奨される様式で負荷した。次にペプチドをＦｍｏｃ−ＳＰＰ
Ｓプロトコルを用いて構築した。Ｆｍｏｃ基の除去は、Ｆｍｏｃ−ペプチド樹脂
をＤＭＦ中の５０％ピペリジン（２×２分）で処理することによって行った。続
くアミノ酸のカップリングを以下のように行った：４当量のＦｍｏｃアミノ酸を
４当量のＨＢＴＵを含むＤＭＦ（ＨＢＴＵの０．５Ｍ溶液）中に溶解した。１分
後、この溶液をアミノペプチド樹脂に加え、樹脂を１０分間振盪した。ニンヒド
リンテストを行って、完全なアシル化を保証した。アシル化が完了していなかっ
た場合、ニンヒドリンテストがネガティブ（＞９９％カップリング）となるまで
、反応混合物をさらに放置した。２−ヒドロキシ−６−ニトロベンジル補助基を
実施例２で記載するように、還元的アミノ化によって付加した。Ｈｎｂ基の導入
後、次の残基を同じＨＢＴＵ活性化プロトコルを用いてカップリングしたが、カ
ップリング反応は室温で２０時間放置した。次にペプチドを樹脂から、９５％Ｔ
ＦＡ／５％水（４５分間、室温）で処理することによって切断した。ＴＦＡをエ
バポレートし、そしてペプチドをエーテルで沈殿させた。沈殿物をアセトニトリ
ル／水に溶解し、そして分取ＨＰＬＣカラムに付し、そして２％／分勾配（１０
０％Ａから２０％Ａ）を用いて、生成物を溶離した。次に目的生成物を含む画分
を合わせて、ＨＰＬＣ（純度）およびＥＳ−ＭＳで分析した。ペプチド１ａは収率５０％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₃₃Ｈ₄₀Ｎ₈Ｏ₉＝６９２．３（モノ同位体）、実験値＝６９
２．４。ペプチド１ｂは収率５４％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−Ｍ
Ｓ：計算値Ｃ₃₃Ｈ₄₀Ｎ₈Ｏ₉＝６９２．３（モノ同位体）、実験値＝６９２．２。ペプチド１ｃは収率２５％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₃₃Ｈ₄₀Ｎ₈Ｏ₉＝６９２．３（モノ同位体）、実験値＝６９
２．２。ペプチド１ｄは収率２８％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₀Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₂＝８４３．３（モノ同位体）、実験値＝８
４３．２。ペプチド１ｅは収率２２％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₀Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₂＝８４３．３（モノ同位体）、実験値＝８
４３．２。

【０１６３】ペプチド１ｄの大規模環化：０．０１１ｍｍｏｌの直鎖状ペプチド１ｄ（ＴＦ
Ａ塩１０ｍｇ）を０．０１２ｍｍｏｌのＢＯＰ（５．２ｍｇ）を含むＤＭＦ（５
ｍＬ）中に溶解した。０．０２５ｍｍｏｌのＤＩＥＡ（４．３μＬ）を含むＤＭ
Ｆ（５ｍＬ）を加え、混合物を３時間（室温）で攪拌した。０．２５ｍｍｏｌの
ＤＩＥＡ（４０μＬ）を加え、反応をさらに２０時間攪拌した。溶媒を高真空下
でエバポレートし、残渣をアセトニトリル／水に溶解し、分取ＨＰＬＣに付した
。１．５％勾配を用いて生成物を溶離した（１００％緩衝液Ａから２０％緩衝液
Ａ）。シクロ−［（Ｈｎｂ）Ｔｙｒ−（Ｈｎｂ）Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］２ｄ
（５．３ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ、６１％）を単離した：ＥＳ−ＭＳ：計算
値Ｃ₄₀Ｈ₄₃Ｎ₉Ｏ₁₁＝８２５．３（モノ同位体）、実験値＝８２５．１。

【０１６４】生成物２ｄ（５ｍｇ、６×１０^-3ｍｍｏｌ）を、次に、ＤＭＦ（１０ｍＬ）に
溶解し、その溶液をビーカーに入れ、そしてＵＶランプ（３５０−３６５ｎｍ、
２０Ｗ、ブラック／ホワイト／ブルー）を用いて３時間、光分解した。ＤＭＦを
減圧下で除去し、残渣をアセトニトリル／水に溶解し、溶液を濾過し、そして分
取ＨＰＬＣカラムに付した。１００％Ａから２０％Ａへの１．５％勾配を用いて
生成物を溶離した。シクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］を収率４７％
（１．５ｍｇ、２．８１０^-3ｍｍｏｌ）で単離した：ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₂₆ Ｈ₃₃Ｎ₇Ｏ₅＝５２３．２（モノ同位体）、実験値＝５２３．３。

【０１６５】（ラセミ化の評価）ペプチド合成：ペプチド１ｆおよび１ｇを上記のように合成した。ペプチド１
ｆは収率３９％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算値
Ｃ₄₀Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₂＝８４３．３（モノ同位体）、実験値＝８４２．９。ペプチド
１ｇは収率２８％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算
値Ｃ₄₀Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₂＝８４３．３（モノ同位体）、実験値＝８４３．３。ペプチ
ド１ｈはＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＰＡＭ樹脂上で上記のようにＢｏｃＳＰＰＳプロト
コルを用いて合成され、そして収率２８％（樹脂の理論的置換値より）で単離さ
れた。ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₀Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₂＝８４３．３（モノ同位体）、実験
値＝８４３．２。

【０１６６】（標準的環化条件：）ｉ．直鎖状ペプチド、ＤＭＦ中１ｍＭ、１当量ＢＯＰ、２当量ＤＩＥＡ、３時間
、室温。ｉｉ．１０当量のＤＩＥＡの付加、および室温で２０時間または７０℃で１時間
。

【０１６７】この後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をアセトニトリル／水に溶解し、そして
粗生成物溶液をＥＳ−ＭＳおよびＨＰＬＣで分析した。

【０１６８】ペプチド１ｆの大規模環化：ペプチド１ｆ（ＴＦＡ塩３０ｍｇ、０．０３５５
ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）中に溶解し、そして６当量のＤＩＥＡ（１８．
３μＬ）を加えた。１当量のＢＯＰ（１７．１ｍｇ）を加えた後、この反応系を
２０時間攪拌した。次に溶媒を除去し（高真空）、残基をアセトニトリル／水に
溶解し、そして溶液を直接、分取ＨＰＬＣカラムに付した。１００％Ａから２０
％Ａまでの１．５％勾配を用いて、生成物を溶離した。環状生成物を含む画分を
採取し、合わせて、凍結乾燥した。１７．５ｍｇの２つの生成物の混合物が得ら
れた（収率６８％）：ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₀Ｈ₄₃Ｎ₉Ｏ₁₁＝８２５．３（モノ
同位体）、実験値＝８２５．１。２つの生成物の混合物（１７ｍｇ）をＤＭＦ（
２０ｍＬ）に溶解し、そして３時間光分解した。溶媒を除去し、残渣をアセトニ
トリル／水に溶解し、そして溶液を分取ＨＰＬＣカラムに付した。１００％Ａか
ら２０％Ａまでの１．５％勾配を用いて生成物を溶離した。目的の環状生成物シ
クロ−［Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｌ）Ｐｈｅ］およびシクロ−［Ｇｌｙ−Ｔ
ｙｒ−Ａｒｇ−（Ｄ）Ｐｈｅ］を混合物として単離した（３．８ｍｇ、収率３５
％）：ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₂₆Ｈ₃₃Ｎ₇Ｏ₅＝５２３．２（モノ同位体）、実験値
＝５２３．３。Ｌ−Ｐｈｅ／Ｄ−Ｐｈｅの比はキラルアミノ酸分析で２／３と決
定された。２つの環状生成物の混合物のうち、第１に溶離するものは、上記のよ
うに合成した全てＬのシクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］１ｄと共に
溶離した。

【０１６９】（シクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ａｌａ］の合成、ＴｙｒからＡｌａ部
位での環化に対する環縮小と骨格置換との組合せ）ペプチド合成：ペプチド合成および切断をＦｍｏｃ−Ａｌａ−Ｗａｎｇ樹脂（
０．４５ｍｍｏｌ／グラム）上で上記のようにして行った。ペプチド４ｂは収率
７７％（樹脂の理論的置換値より）で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₁Ｈ₄₇ Ｎ₉Ｏ₁₂＝８５７．９（モノ同位体）、実験値＝８５７．４。ペプチド５は収率
２８％で単離された。ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₁Ｈ₄₇Ｎ₉Ｏ₁₂＝８５７．９（モノ
同位体）、実験値＝８５７．４。

【０１７０】ペプチド４の大規模環化：ペプチド４（ＴＦＡ塩６０ｍｇ、０．０６２ｍｍｏ
ｌ）をＤＭＳＯ（６０ｍＬ）に溶解し、１当量のＢＯＰ（３１．２ｍｇ）を加え
た。２当量のＤＩＥＡ（２４μＬ）を加え、そして反応系を室温で３時間攪拌し
た。１０当量のＤＩＥＡ（２０μＬ）を加え、攪拌をさらに２０時間続けた。溶
媒を除去し（高真空）、残渣をアセトニトリル／水に溶解し、そして溶液を分取
ＨＰＬＣカラムに直接付した。９５％Ａから１０％Ａまでの２％勾配を用いて、
生成物を溶離した。２つの環状生成物を分離した：生成物Ａ（９ｍｇ、１８％）ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₁Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₁＝８３９．３
（モノ同位体）、実験値＝８３９．５。生成物のキラルアミノ酸分析はＬ−Ｔｙ
ｒ、Ｌ−Ａｒｇ、Ｌ−ＰｈｅおよびＤ−Ａｌａの存在を示した。生成物Ａ＝シク
ロ−［（Ｈｎｂ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｈｎｂ）Ｐｈｅ−（Ｄ）Ａｌａ］。生成物Ｂ（７ｍｇ、１３％）ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₁Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₁＝８３９．３
（モノ同位体）、実験値＝８３９．５。キラルアミノ酸分析はＬ−Ｔｙｒ、Ｌ−
Ａｒｇ。Ｌ−ＰｈｅおよびＬ−Ａｌａの存在を示した。生成物Ｂ＝シクロ−［（
Ｈｎｂ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｈｎｂ）Ｐｈｅ−Ａｌａ］。さらに８ｍｇの生成物
ＡおよびＢ（１５％）の混合物が単離され、全体の環化収率は４６％であった。

【０１７１】シクロ−［（Ｈｎｂ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｈｎｂ）Ｐｈｅ−（Ｄ）Ａｌａ］の
光分解：生成物Ａ（９ｍｇ）をＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解し、そして光分解を
３時間行った。溶媒を除去し、残渣をアセトニトリル／水に溶解し、そして溶液
を分取ＨＰＬＣカラムに付した。９５％Ａから１０％Ａまでの１．５％勾配を用
いて生成物を溶離した。環状生成物シクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−（Ｄ）
Ａｌａ］を単離した（２．４ｍｇ、収率４２％）：ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₂₇Ｈ₃₅ Ｎ₇Ｏ₅＝５３７．６１（モノ同位体）、実験値＝５３７．２。この生成物のキラ
ルアミノ酸分析はＬ−Ｔｙｒ、Ｌ−Ａｒｇ、Ｌ−ＰｈｅおよびＤ−Ａｌａの存在
を示した。

【０１７２】ペプチド４の大規模環化：ペプチド４（ＴＦＡ塩３０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏ
ｌ）をＤＭＦ（３５ｍＬ）に溶解し、１当量のＢＯＰ（１５．５ｍｇ）を加えた
。３当量のＤＩＥＡ（１８．２μＬ）を加え、そして反応系を室温で３時間攪拌
した。１０当量のＤＩＥＡ（６１μＬ）を加え、攪拌をさらに２０時間続けた。
溶媒を除去し（高真空）、残渣をアセトニトリル／水に溶解し、そして溶液を分
取ＨＰＬＣカラムに直接付した。９５％Ａから１０％Ａまでの２％勾配を用いて
、生成物を溶離した。１つの環状生成物が分離された：シクロ−［（Ｈｎｂ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−（Ｈｎｂ）Ｐｈｅ−Ａｌａ］：（１５．
６ｍｇ、６０％）ＥＳ−ＭＳ：計算値Ｃ₄₁Ｈ₄₅Ｎ₉Ｏ₁₁＝８３９．３（モノ同位
体）、実験値＝８３９．２。

【０１７３】（実施例４活性化リンカー）一般式：

【０１７４】

【化６４】の活性化リンカーを、鎖構築中でのそれらの安定性、ならびに最終環化反応にお
けるそれらの不安定性について評価した。ｎ＝０リンカーに対して、本発明者ら
は一連の拘束環状ペプチドを下記表５に示すようにして合成した。

【０１７５】用いられる手順の一般的な概略をスキーム９に示す。ヒドロキシ安息香酸（１
）をＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨでアシル化した。得られたエステル結合は、化合物（
２）をＴＦＡで処理し、次に生成物（３）を１ＨＮＭＲ分析することによって
確認されるように、ＴＦＡ処理に対して安定であることが見いだされた。

【０１７６】

【化６５】化合物（２）を、ＤＭＦ中のＨＢＴＵを用いてアミノ−メチル化樹脂（ポリス
チレン）（置換値（ｓｖ）＝０．２１ｍｍｏｌ／ｇ）に付加した（スキーム９）
。ペプチド構築を定量的ニンヒドリンテストでモニターし、直鎖状配列の構築の
成功が示された。これを樹脂重量の増加で確認した。側鎖保護基の脱保護をＨＦ
／アニソール（９／１）で−５℃で１時間処理することによって達成した。ＨＦ
のエバポレートの後、樹脂をエーテルで洗浄した。

【０１７７】環化および付随する切断を、ＤＭＦ中の１０当量のＤＩＥＡで３日間処理する
ことによって達成した。反応混合物を濾過によってワークアップし、そして濾液
を水で希釈し、凍結乾燥した。粗凍結乾燥生成物をアセトニトリル／水（１／１
）に再溶解し、そしてさらに分析および分取ＨＰＬＣで分析した。

【０１７８】粗生成物のＨＰＬＣプロファイルを図１に示す。主成分は目的のペプチドであ
り、これは溶液相で合成した物質とのＨＰＬＣ比較ならびに同時溶離実験によっ
て証明される。この結果は、特に粗物質の驚くべき純度を考慮すると、このスト
ラテジーの、拘束環状ペプチドの合成における潜在的な能力を示す。環状物質の
収率を表５に示す。

【０１７９】（表５）活性化リンカーを使用する環状ペプチドの収率

【０１８０】

【表５】（実施例４のための実験）このセクションは活性化リンカーおよびモデルペプチドの合成についての実験
的詳細を記載する。

【０１８１】（活性化リンカーシクロ［ＤＧＡｃｔＲＧ］を用いるモデル化合物の合成（表
５））（リンカー樹脂）アミノメチル化樹脂（２．３８グラム、０．５ｍｍｏｌ）を最初にＤＭＦ中の
１０％ＤＩＥＡで洗浄し（５分間）、そして次にＤＭＦ（３×５ｍＬ）で洗浄し
た。ヒドロキシ安息香酸（２７６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を４ｍＬのＤＭＦ中の０．
５ＭＨＢＵＴＵに溶解し、そしてＤＩＥＡ（４００μＬ、２．３ｍｍｏｌ）を
加えた。次に活性化溶液を、中和した樹脂に加えた。１０分後、樹脂を排出し、
そしてＤＭＦ（３×５ｍＬ）で洗浄した。ＤＭＦ（４ｍＬ）中の水性水酸化ナト
リウム（１Ｍ、２ｍＬ）の溶液を樹脂に加え、１０分間混合した。水酸化ナトリ
ウム処理を繰り返し、そして樹脂をＤＭＦ／水（１／１）（３×５ｍＬ）で洗浄
し、そして次にＤＭＦ（３×５ｍＬ）で洗浄した。

【０１８２】（ペプチドの構築）Ｂｏｃ−グリシンを以下のように、最初にリンカーにカップリングした。Ｂｏ
ｃグリシン（３５０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を２ｍＬのＤＣＭに溶解し、そしてＤＩ
Ｃ（１５６μＬ、１ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、溶液を２ｍＬのＤＭＦで希
釈し、そして樹脂にＤＩＥＡ（４００μＬ、２．３ｍｍｏｌ）と共に加えた。３
０分後、樹脂を排出し、そしてＤＭＦ（３×５ｍＬ）で洗浄した。次いでＢｏｃ
基をニートなＴＦＡ（２×１分間）を用いて除去した。次の残基を以下のインサ
イチュ中和プロトコルに従ってカップリングした：２ｍｍｏｌのＢｏｃ−保護ア
ミノ酸を４ｍＬのＤＭＦ中の０．５ＭＨＢＴＵ溶液に溶解し、そしてＤＩＥＡ
（４６０μＬ、２．６ｍｍｏｌ）の添加によって活性化した。活性化された溶液
を次に樹脂に加え、そして１０分間混合した。樹脂を排出し、そしてＤＭＦで洗
浄した。ニートなＴＦＡ（２×１分間）を再び用いて、Ｎ末端を脱保護した。以
下の残基を系統的にカップリングした：Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）ＯＨ、Ｂｏｃ
−Ｇｌｙ−Ｃａｔ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｘ）−ＯＨ。

【０１８３】（側鎖の脱保護）構築の後、Ｎ末端Ｂｏｃ基を上記のようにＴＦＡで除去し、そして樹脂を乾燥
した。側鎖を以下のようにＨＦ処理を用いて除去した：１グラムの樹脂を１ｍＬ
のチオアニソールと混合し、そして９ｍＬのＨＦを加えた。混合物を−５℃で１
時間攪拌し、そしてＨＦを減圧下除去した。樹脂をジエチルエーテル（３×２０
ｍＬ）で洗浄し、乾燥した。

【０１８４】（環化）樹脂をＤＩＥＡ（１００μＬ）を含むＤＭＦ（１０ｍＬ）中で１２時間攪拌し
た。樹脂を濾別し、そしてＤＭＦを減圧除去した。残渣を最少量のアセトニトリ
ル／水（１／１）中に溶解し、そして生成物のＨＰＬＣ分離のために分取逆相カ
ラムに直接付した。シクロ−［ＤＧＣａｔＲＧ］（２７ｍｇ、出発樹脂からの収
率１１％）を得た。

【０１８５】同じプロトコルに従って、以下のペプチドを構築、脱保護、および環化した：
シクロ−［ＤＧＡｍｂＲＧ］：７．６％収率（３％二量体）；シクロ−［ＤＡｍ
ｂＧＲＧ］：５％収率（５％二量体）。

【０１８６】（実施例５セーフティーキャッチリンカー）本発明者らはまた、一般クラス：

【０１８７】

【化６６】のセーフティーキャッチリンカーを評価した。

【０１８８】このリンカーの活性化はベンジル基の除去によって達成される。セーフティー
キャッチリンカー（ｎ＝２）はスキーム１０に示すようにして合成された。

【０１８９】本発明者らは、ｎが１または２の場合により良好な結果が得られることを見い
だし、それゆえ、このタイプのセーフティーリンカーが好適である。

【０１９０】

【化６７】このセーフティーキャッチリンカーをアミノメチル化ポリスチレンにＤＭＦ中
のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡを用いて付加し、次にペプチド構築を標準的Ｂｏｃプロ
トコルを用いて達成した。樹脂を無水ＨＦで捕捉剤としてのアニソールの存在下
、−５℃で処理すると、脱保護されたアミノ酸側鎖がもたらされ、リンカーのベ
ンジル基の除去が付随する。ＨＦをエバポレートさせ、そして樹脂をジエチルエ
ーテルで洗浄して捕捉剤を除去した。樹脂をＤＭＦ中のＤＩＰＥＡで４８時間処
理すると、粗環状生成物が得られた。この粗環状物質のＬＣ−ＭＳプロファイル
を図２に示す。主生成物は所望の環であり、感知し得る量のシクロ二量体もまた
存在している。分取スケールＨＰＬＣは単量体および二量体の混合物を与え、全
体の収率は約５０％である。

【０１９１】（実施例５の実験）このセクションは１つのタイプのセーフティーキャッチリンカーおよびモデル
ペプチドの合成を記載する。

【０１９２】（セーフティーキャッチリンカーを用いたモデル化合物の合成）（ベンジル４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシベンゾエート）

【０１９３】

【化６８】臭化ベンジル（１．５０ｃｍ³、２．１６ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を３，４−
ジヒドロキシ安息香酸（１．００ｇ、６．４９ｍｍｏ）、炭酸カリウム（１．９
７ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）および触媒量のヨウ化テトラブチルアンモニウムをＮ
，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｃｍ³）中に含む、攪拌した懸濁液に加えた
。懸濁液を窒素下で終夜攪拌し、次に水（５００ｃｍ³）および５％塩酸（５０
ｃｍ³）を加え、そして混合物をジエチルエーテル（３×１００ｃｍ³）で抽出し
た。合わせた抽出物を水（３×１００ｃｍ³）およびブライン（１００ｃｍ³）で
抽出し、次に乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、そしてエバポレートさせて燈色の油状物を
得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：１０−２０％酢酸エチル
、軽質石油中）は最初にベンジル３，４−ジベンジルオキシベンゾエート（１６
８ｍｇ、６％）を与え、これは上記で調製したものと同一であった。さらに溶離
すると次にベンジル４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシベンゾエート（１．３
１２ｇ、６０％）が淡黄色油状物として得られた。ベンジルオキシ基の位置は、
５位のプロトンと４位のベンジルオキシ基のメチレンプロトンとの間に認められ
るｎ．Ｏ．ｅ．から推論された。

【０１９４】

【数４】（４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシ安息香酸）

【０１９５】

【化６９】水酸化リチウム水和物（３００ｍｇ、７．１５ｍｍｏｌ）の水（１５ｃｍ³）
溶液を、攪拌したベンジル４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシベンゾエート（
１．１７７ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３５ｃｍ³）溶液に
滴下した。得られた乳濁液を終夜攪拌し、この時点で、透明な淡黄色の溶液が形
成された。さらに水酸化リチウム水和物（３００ｍｇ、７．１５ｍｍｏｌ）水（
２５ｃｍ³）およびテトラヒドロフラン（２５ｃｍ³）を加え、そして攪拌を２４
時間続けた。テトラヒドロフランを減圧除去した。水（１００ｃｍ³）を残渣混
合物に加え、これをジエチルエーテル（２×５０ｃｍ³）で洗浄し、５％ＨＣｌ
でｐＨ１に酸性化し、そしてジクロロメタン（３×１００ｃｍ³）で抽出した。
合わせた抽出物をブライン（５０ｃｍ³）で洗浄し、乾燥（ＮａＳＯ₄）し、そし
てエバポレートさせて、４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシ安息香酸を白色固
体（６３８ｍｇ、７４％）として得た。ジエチルエーテル洗浄液を１Ｍ水酸化カ
リウム（２×２５ｃｍ³）で抽出した。合わせた抽出物を５％ＨＣｌでｐＨ１に
酸性化し、そしてジクロロメタン（３×１００ｃｍ³）で抽出した。合わせた抽
出物をＭｇＳＯ₄で乾燥し、そしてエバポレートさせて、さらに１１９ｍｇの生
成物を得た（総収量７５７ｍｇ、８８％）、ｍ．ｐ．１６３−１６５℃。

【０１９６】

【数５】（３，４−ジヒドロキシ安息香酸のアルキル化：プロペン−２−イル３，４−
ビス（プロペン−２−イルオキシ）ベンゾエート、プロペン−２−イル３−ヒド
ロキシ−４−（プロペン−２−イルオキシ）ベンゾエートおよびプロペン−２−
イル３，４−ジヒドロキシベンゾエートの調製）

【０１９７】

【化７０】アリルブロミド（１．１８ｃｍ³、１．６５ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）を、３，
４−ジヒドロキシ安息香酸（１．００ｇ、６．４９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウ
ム（１．９７ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）を乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５
０ｃｍ³）中に含む攪拌した懸濁液に加えた。終夜窒素雰囲気下で攪拌した後、
混合物を水（５００ｃｍ³）に注ぎ入れ、５％塩酸で酸性化し、そして酢酸エチ
ル（３×１００ｃｍ³）で抽出した。合わせた抽出物を水（３×１００ｃｍ³）お
よびブライン（５０ｃｍ³）で洗浄し、次にＭｇＳＯ₄で乾燥し、そしてエバポレ
ートさせて、褐色の油状物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（
溶離液：１０−５０％酢酸エチル、軽質石油中）で精製した。最初に溶離する化
合物は淡黄色油状物としてのプロペン−２−イル３，４−ビス（プロペン−２−
イルオキシ）ベンゾエートであった（４６０ｍｇ、２６％）。

【０１９８】

【数６】次に溶離したのは、淡紅色油状物としてのプロペン−２−イル３−ヒドロキシ
−４−（プロペン−２−イルオキシ）ベンゾエート（７８２ｍｇ、５１％）であ
った。

【０１９９】

【数７】最後に溶離したのは、淡黄色半固体としてのプロペン−２−イル３，４−ジヒ
ドロキシベンゾエート（８０．２ｍｇ、６％）であった。

【０２００】

【数８】（プロペン−２−イル３−ベンジルオキシ−４−（プロペン−２−イルオキシ
）ベンゾエート）

【０２０１】

【化７１】臭化ベンジル（０．４４０ｃｍ³、６３４ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）をプロペ
ニル−２−イル３−ヒドロキシ−４−（プロペン−２−イルオキシ）ベンゾエー
ト（７８２ｍｇ、３．３４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５５３ｍｇ、４．０
０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｃｍ³）中に含む攪拌した
混合物中に加えた。混合物を窒素下で終夜攪拌し、次に水（３００ｃｍ³）に注
ぎ入れ、そして酢酸エチル（３×１００ｃｍ³）で抽出した。合わせた抽出物を
水（３×５０ｃｍ³）およびブライン（５０ｃｍ³）で洗浄し、次にＭｇＳＯ₄で
乾燥し、そしてエバポレートさせて無色油状物とした。これをジクロロメタンに
溶解し、シリカのプラグを通して濾過した。濾液をエバポレートさせて、プロペ
ン−２−イル３−ベンジルオキシ−４−（プロペン−２−イルオキシ）ベンゾエ
ートを無色油状物として得た（１．０９６ｍｇ、１００％）。

【０２０２】

【数９】（３−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ安息香酸）

【０２０３】

【化７２】プロペン−２−イル３−ベンジルオキシ−４−（プロペン−２−イルオキシ）
ベンゾエート（１．０３５６ｇ、３．１９ｍｍｏｌ）、トリス（トリフェニルホ
スフィン）ロジウムクロリド¹（２０４ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）および１，４
−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（７４ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）をエ
タノール（１８ｃｍ³）および水（２ｃｍ³）中に入れた混合物を還流下、窒素雰
囲気下で１６時間加熱した。冷却した混合物を１Ｍ塩酸（１００ｃｍ³）に注ぎ
、６０分間攪拌し、次にジクロロメタン（３×１００ｃｍ³）で抽出した。合わ
せた抽出物をＭｇＳＯ₄で乾燥し、エバポレートさせて燈色の固体を得、これを
フラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：１：１ＥｔＯＡｃ：軽質石油）
で精製して、３−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシ安息香酸を燈色固体（６５０
ｍｇ、８３％）、ｍ．ｐ．１６７．２−１７１．３℃として得た。

【０２０４】

【数１０】１．Ｃｏｒｅｙ，Ｅ．Ｊ．およびＳｕｇｇｓ，Ｊ．Ｗ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ
．，１９７３３８３２２４。

【０２０５】（ベンジル３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−４−ベンジルオ
キシベンゾエート）

【０２０６】

【化７３】ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（５７９ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）
のジクロロメタン（１０ｃｍ³）溶液を、ベンジル４−ベンジルオキシ−３−ヒ
ドロキシベンゾエート（６４２．３ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）およびイミダゾー
ル（３２７ｍｇ、４．８０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｃｍ³）中に含む
攪拌した溶液に加えた。濃い沈殿が即時形成された。１時間後、混合物を水（５
０ｃｍ³）に注ぎ入れた。層を振盪および分離し、そして次に水相をさらにジク
ロロメタン（２×５０ｃｍ³）で抽出した。合わせた抽出物をブライン（５０ｃ
ｍ³）で洗浄し、次に乾燥し（Ｍｇ₂ＳＯ₄）、そしてエバポレートさせて淡黄色
油状物を得た。これを石油エーテル中の２０％酢酸エチルに溶解し、そしてシリ
カのプラグを通して濾過した。濾液をエバポレートさせて、表題化合物を淡黄色
油状物（９３６ｍｇ）として得、これをすぐに次の工程で用いた。

【０２０７】

【数１１】（３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−４−ヒドロキシ安息香酸
）

【０２０８】

【化７４】１０％炭素担持パラジウム（８０ｍｇ）を含む粗シリルエーテル（９３６ｍｇ
、２，０９ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｃｍ³）溶液を水素雰囲気下、２５ｐ
．ｓ．ｉ．で４８時間振盪した。混合物をセライトを通して濾過し、エバポレー
トさせ、次に残渣を酢酸エチルに溶解し、そして濾液をシリカのプラグを通して
濾過して、表題化合物を淡緑色油状物として得た（４２４ｍｇ、７６％）。

【０２０９】

【数１２】（ベンジル４−ベンジルオキシ−３−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオ
キシ）ベンゾエート）

【０２１０】

【化７５】ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド（８５０ｍｇ、３．０９ｍｍｏｌ
）のジクロロメタン（１０ｃｍ³＋５ｃｍ³すすぎ）溶液をベンジル４−ベンジル
オキシ−３−ヒドロキシベンゾエート（８２７ｍｇ、２．４７ｍｍｏｌ）および
イミダゾール（４２１ｍｇ、６．１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｃｍ³
）中に含む、攪拌した溶液に加えた。数分後、沈殿を形成した。混合物を終夜窒
素雰囲気下で攪拌し、次に水（５０ｃｍ³）に注ぎ入れた。層を振盪および分離
し、次に水相をさらにジクロロメタン（２×５０ｃｍ³）で抽出した。合わせた
抽出物をブライン（５０ｃｍ³）で洗浄し、そしてエバポレートさせて、淡黄色
油状物を得た。これを短いシリカカラムを通して濾過し、そして石油エーテル中
の２０％酢酸エチルで溶離した。濾液をエバポレートさせて、ベンジル３−（ｔ
ｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）−４−ベンジルオキシベンゾエート（
１，６４６ｇ）をいくらかｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシラノールを含む非常に
淡い黄色の油状物として得、これを次の工程に直接用いた。

【０２１１】

【数１３】（セーフティーキャッチリンカーを用いたモデル化合物の合成）（メチル３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロピオネート）

【０２１２】

【化７６】３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロピオン酸（１．００ｇ、５．４９
ｍｍｏｌ）および濃縮Ｈ₂ＳＯ₄（１０滴）をメタノール（２５ｃｍ³）中に含む
溶液を還流下、終夜加熱した。溶媒をエバポレートさせ、残渣を水（５０ｃｍ³
）と共に振盪し、そしてＣＨＣｌ₃（３×５０ｃｍ³）中に抽出した。合わせた抽
出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そしてエバポレートさせてメチルエステルを淡黄
色油状物として得、これを静置して結晶化した（１．１２ｇ、１００％）、ｍ．
ｐ．７１．９−７４．１℃（文献¹ｍ．ｐ．７４−７６℃）。

【０２１３】

【数１４】ＦｒｅｕｄｅｎｂｅｒｇおよびＨｅｅｌ，（１９５３）（メチル３−（３−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシフェニル）プロピオネー
トおよびメチル３−（４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシフェニル）プロピオ
ネート）

【０２１４】

【化７７】臭化ベンジル（０．６０６ｃｍ³、８７２ｍｇ、５．２０ｍｍｏｌ）をメチル
３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロピオネート（１．０００ｇ、５．１
０ｍｍｏｌ）、Ｋ₂ＣＯ₃（８４５ｍｇ、６．１２ｍｍｏｌ）および触媒量のヨウ
化テトラブチルアンモニウムをＤＭＦ（２５ｃｍ³）中に含む、攪拌した懸濁液
に加えた。懸濁液を終夜、窒素雰囲気下で攪拌した。水（５００ｃｍ³）および
５％ＨＣｌ（５０ｃｍ³）を加え、そして混合物をジエチルエーテル（３×１０
０ｃｍ³）で抽出した。合わせた抽出物を水（３×１００ｃｍ³）およびブライン
（１００ｃｍ³）で洗浄し、次に乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そしてエバポレートさ
せて、褐色油状物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（５−２０％Ｅｔ
ＯＡｃ、ガソリン中）で精製して、モノベンジルエーテルの１：１混合物を無色
油状物（１．１５０ｇ、７９％）として得た。

【０２１５】

【数１５】（３−（３−ベンジルオキシ−４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸および
３−（４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸）水酸化リチウム一水和物（５．２５ｇ、１２５ｍｍｏｌ）の水（１５０ｃｍ³
）溶液を、メチルエステル混合物（１１．９５ｇ、４１．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ
（１５０ｃｍ³）中に含む、攪拌した溶液に加えた。得られた混合物を窒素雰囲
気下で攪拌した。翌朝、透明な淡黄色溶液が形成された。ＴＨＦをエバポレート
させ、残渣を水（１５０ｃｍ³）で希釈し、そして５％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化
した。混合物をＣＨＣｌ₃（３×３５０ｃｍ³）で抽出し、合わせた抽出物を乾燥
し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、そしてエバポレートさせて、褐色油状物とし、これを放置し
て固化した。これをＥｔＯＡｃ中に溶解し、そして短いシリカラムを通過させた
。溶出物をエバポレートさせて、生成物を黄褐色固体として得た（１１．１２ｇ
、９８％）。

【０２１６】

【数１６】（３−（３−ベンジルオキシ−４−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グ
リシルオキシ）フェニル−プロピオン酸および３−（４−ベンジルオキシ−３−
（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）グリシルオキシ）フェニル−プロピオン
酸）

【０２１７】

【化７８】トリエチルアミン（１．４０ｃｍ³、１．０１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）および
エチルクロロホルメート（０．９６０ｃｍ³、１．０８５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ
）を、ジクロロメタン（２０ｃｍ³）中のＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（１．７５ｇ、
１０．０ｍｍｏｌ）の撹拌冷却（−２０℃）溶液に添加した。この溶液を、−１
０〜−１５℃で２０分間撹拌した。この時間の間、沈殿物が形成した。ジクロロ
メタン（２０ｃｍ³＋５ｃｍ³リンス）中のベンジルオキシ酸（２．８６ｇ、１０
．０ｍｍｏｌ）の位置異性体混合物およびトリエチルアミン（１．４０ｃｍ³、
１．０１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の溶液を、次いで滴下した。得られた溶液を、
−５〜０℃で２時間、撹拌し、次いで、１０％クエン酸（２×１０ｃｍ³）およ
びブライン（１０ｃｍ³）で洗浄し、次いで、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、そしてシ
ロップになるまでエバポレートした。これを、少量の１：１酢酸エチル／石油エ
ーテルに溶解し、そしてショートシリカカラムに通した。この溶出液をエバポレ
ートすることによって、表題のカルボン酸の混合物を無色のシロップとして得た
（３．９８６ｇ、９３％）。

【０２１８】

【数１７】（シクロ−［Ｄ−Ｇ−Ａｍｂ−Ｒ−Ｇ］の固相合成）

【０２１９】

【化７９】アミノメチル樹脂（ＰｅｐｔｉｄｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ、０．８３ｍｍｏｌ
／グラム、６０２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中の１０％ＤＩＰＥＡと
ともに３０の間（ｆｏｒ３０）振盪し、次いで、ドレインし、そしてＤＭＦで
よく洗浄した。

【０２２０】ベンジルオキシリンカー（４２９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、２当量）を、標準Ｈ
ＢＴＵ／ＤＩＰＥＡプロトコルを使用して一晩、カップリングした。残りの残基
を、標準ＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡプロトコルを使用して各々、１０分間、カップリ
ングした。この乾燥樹脂の最終収率は、９０６ｍｇであった。この７２５ｍｇ（
約０．４ｍｍｏｌ）を、捕捉剤としてアニソールを使用して無水ＨＦで切断した
。この樹脂を、ジエチルエーテルでよく洗浄し、吸引乾燥し、次いで、０．５ｃ
ｍ³のＤＩＰＥＡを含有する５．０ｃｍ³のＤＭＦ中で４８時間、穏やかに撹拌し
た。樹脂を、濾過して取り除き、そしてＤＭＦでよく洗浄した。濾液のエバポレ
ーション、続いて分取用ＨＰＬＣによって、シクロ−［Ｄ−Ｇ−Ａｍｂ−Ｒ−Ｇ
］をけば状の白色固体として得た（１０３ｍｇ、４９％）。生成物のＬＣ−ＭＳ
による分析は、シクロダイマーである、シクロ−［Ｄ−Ｇ−Ａｍｂ−Ｒ−Ｇ−Ｄ
−Ｇ−Ａｍｂ−Ｒ−Ｇ］の存在を示した。モノマーのダイマーに対する比は、約
３：２であった。

【０２２１】（実施例６）（骨格置換および活性化またはセイフティーキャッチリンカー）この実施例は、セイフティーキャッチリンカーの骨格置換との使用が環状ペプ
チドの合成のための有用な組み合わせであることを示す。

【０２２２】配列Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａは、ＢＯＰ／ＤＩＥＡを使用す
る溶液条件（ＳｃｈｍｉｄｔおよびＬａｇｎｅｒ、１９９７）下、またはセイフ
ティーキャッチリンカーを使用する樹脂上（ｏｎ−ｒｅｓｉｎ）条件下で環化し
ない。しかし、骨格置換方法は、セイフティーキャッチリンカーとの組み合わせ
で適用される場合、相当量の環状生成物が得られる。例えば、Ａｌａ−（Ｍｅ）
Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａの合成および環化により、ＥＳ−ＭＳによって
特徴付けられる環状生成物が生成される。この例において、骨格置換はメチル基
であったが、当業者は、多数の他の置換基（ＨＭＢおよびＨｎＢのような可逆的
な置換基を含む）もまた使用され得ることを理解する。

【０２２３】（実施例６に対する実験）ペプチドの構築を、上記のように（実施例５を参照のこと）セイフティーキャ
ッチリンカーで誘導体化されたアミノメチル化ポリスチレン樹脂（ｓｖ＝０．２
６ｍｅｑ／ｇ）において、標準インサイチュ中和Ｂｏｃ−ＳＰＰＳプロトコルを
使用して行った。Ｂｏｃ−（Ｍｅ）Ｐｈｅ−ＯＨのカップリングおよびＢｏｃ基
の除去の後、ペプチドを、ＤＣＭ中Ｂｏｃ−Ａｌａ（１０当量）およびＤＩＣ（
５当量）から調製される、Ｂｏｃ−Ａｌａの対称無水物の溶液を使用してアシル
化した。次いで、この樹脂を、ＴＦＭＳＡ／ＴＦＡｐ−クレゾール（１：１０：
１）で２時間処理し、リンカー活性化のためにベンジル基を除去した。次いで、
この樹脂をＴＦＡ（３×１０ｍＬ）、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）およびＤＭＦ（３
×１０ｍＬ）で洗浄した。次いで、この樹脂を、ＤＭＦ中の２％ＤＩＥＡで一晩
処理した。溶媒を、Ｇｅｎｅｖａｃで除去し、そしてこの残渣を、アセトニトリ
ル／水中に再懸濁し、そしてＥＳ−ＭＳおよび逆相ＨＰＬＣによって分析した。
ＥＳ−ＭＳスペクトルは、シクロ−［Ａｌａ−（Ｍｅ）Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
−Ａｌａ］について予想されるｍ／ｚ値に主要ピークを示した（Ｃ₂₇Ｈ₃₉Ｎ₅Ｏ₅ の計算値＝５１３．３（１同位体）、実測値＝５１３．３）。

【０２２４】（実施例７）（環縮小および活性化またはセイフティーキャッチリンカー）実施例２において、環縮小補助（ＨｎＢ）を、異なる環状ペンタペプチドを合
成するために使用した。この実施例において、本発明者らは、これら補助の活性
化またはセイフティーキャッチリンカーとの組み合わせを考察した。

【０２２５】以下に列挙された化合物のアレイは、活性化またはセイフティーキャッチリン
カーおよび環縮小補助を使用して合成する。生成物の収率および純度に対するこ
の組み合わせの効果が評価される。

【０２２６】

【化８０】（実施例８）（環縮小、骨格置換、および活性化またはセイフティーキャッチリンカー）すべての３つのアプローチの組み合わせは、活性化およびセイフティーキャッ
チリンカー環化ならびに同時切断の利点とともに、骨格置換および環縮小の前組
織化利点を提供する。

【０２２７】

【化８１】この実施例において、環縮小および骨格置換の組み合わせはまた、樹脂上環化
ストラテジーに適用され得ることが示される。選択された配列［Ｈｎｂ］Ｇｌｙ
−［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅは、実施例３に示されるように、溶液中で
容易に環化する。本発明者らは、標的環状ペプチドを樹脂から直接生成するため
に、本発明のセイフティーキャッチリンカー（実施例５）を適用してきた。

【０２２８】（実施例８に対する実験）ペプチドの構築を、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−リンカー−樹脂で行い、この樹脂は、標
準様式（実施例６を参照のこと；樹脂はアミノメチル化樹脂（ｓｖ＝０．２６ｍ
ｅｑ／ｇｒ）であった）で合成した。次いで、このペプチドを、上記のように、
インサイチュ中和プロトコルおよびＢｏｃ−ＳＰＰＳを使用して構築した。Ｈｎ
ｂ基を、標準還元的アミン化アプローチを使用して導入した。特定のケアを行っ
て、ＮａＢＨ₄への曝露の時間を最小化した（１当量のＮａＢＨ₄を１分間）。な
ぜならば、このことは、樹脂からのペプチドの切断の早発を引き起こし得るから
である。第１のＨｎｂ基の導入後、Ｂｏｃ−Ｇｌｙを、そのＨＢＴＵ活性化エス
テルを介して接続した（一晩）。樹脂をさらに、１％ピペリジンで（５分間）処
理し、フェノール（Ｈｎｂ）においてＯ−アシル化を除去した。上記のような第
２のＨｎｂ基の導入の後、この樹脂を、ＨＦ／ｐ−クレゾール（９／１；０℃で
１時間）で処理し、側鎖保護基およびベンジル基をリンカー活性化のために除去
した。次いで、この樹脂を、エーテル（３×１０ｍＬ）、ＤＭＦ（３×１０ｍＬ
）、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、そして高真空下で２時間乾
燥した。次いで、この樹脂を、ＤＭＦ中の１％ＤＩＥＡで一晩処理した。この溶
媒の除去の後、残渣を、アセトニトリル／水中に再懸濁し、そしてＥＳ−ＭＳお
よび逆相ＨＰＬＣによって分析した。ＥＳ−ＭＳスペクトルは、シクロ−［［Ｈ
ｎｂ］Ｇｌｙ−［Ｈｎｂ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ］について予想されるｍ／ｚ
値に主要ピークを示した（Ｃ₄₀Ｈ₄₃Ｎ₉Ｏ₁₁の計算値＝８２５．３（１同位体）
、実測Ｍ＝８２５．４ｇｒ／ｍｏｌ）。

【０２２９】（骨格リンカー）環状ペプチドを合成するための通常アプローチは、Ｃ−末端保護されたアミノ
酸の樹脂へのその側鎖を介しての接続である。

【０２３０】

【化８２】樹脂におけるペプチド環化のための方法論。

【０２３１】方法Ａ−側鎖接続方法Ｂ−骨格接続。

【０２３２】この手順を広く適用した。なぜならば、環化を行う利点を有し、一方、ペプチ
ドはなお樹脂に接続するからであり、従って、プソイド希釈環境を提供する。次
いで、環化ペプチドを、脱保護し、そして切断し、非保護環状ペプチドを生成す
る。しかし、ライブラリの観点から、このストラテジーは不適切である。なぜな
らば、特定のアミノ酸の樹脂への接続に制限されるからである。これらの問題を
克服する試みにおいて、本発明者らは、２つの骨格リンカーを開発し、これは、
Ｃ−末端において第１のＮ−アミドを介してペプチドを樹脂に連結する。

【０２３３】骨格連結アプローチの主な利点は、これが直鎖状前駆体（すなわち、環化の位
置）を選択する際の柔軟性を可能にすることである。このことは重要である。な
ぜならば、環化の収率が、直鎖状前駆体の選択に依存していることが知られてい
るからである。本発明者らは、２つの骨格リンカーを設計し、そして開発してき
た。リンカー（７）は、Ｂｏｃ化学（すなわち、ニートなＴＦＡに対して安定で
あるが、ＨＦを用いて切断される）を可能にするが、一方、リンカー（８）は、
Ｆｍｏｃ化学（すなわち、ＴＦＡによる切断（９５％））を可能にする。

【０２３４】

【化８３】研究された骨格リンカー。

【０２３５】（実施例９）（リンカー（７））例として、本発明者らは、スチロスタチン（ｓｔｙｌｏｓｔａｔｉｎ）の合成
を研究した。この環状ヘプタペプチドは、本来、Ｓｔｙｌｏｔｅｌｌａａｕｒ
ａｎｔｉｕｍから単離され、そして非常に細胞傷害性であることが見出された。

【０２３６】

【化８４】スチロスタチンの構造、ならびにスチロスタチンの合成のために使用される２
つのリンカーａおよびｂ。

【０２３７】２つのリンカー−ジペプチドユニット（上記）を、スキーム９において概説さ
れるように溶液中で調製し、そしてアミノメチル化樹脂に連結し；ａおよびｂは
、スチロスタチン骨格上の連結位置をいう（この上で樹脂接着がなされる）。

【０２３８】

【化８５】次いで、直鎖状前駆体配列を、インサイチュ中和プロトコルを使用して樹脂上
に構築した。Ｃ−末端アリル保護基の除去を、Ｐｄ（Ｐｈ₃Ｐ）₄を使用して達成
した。樹脂が結合した直鎖状ペプチドをさらに、ＢＯＰ／ＤＩＥＡ活性化を使用
して環化した。脱保護および切断（ＨＦ）後、生成物を、分離し、分析し、そし
て重量測定した。反応生成物は、主に環状モノマーおよび環状ダイマーから構成
された。結果を表６に示す。ここで、アミノ酸配列は、単一文字コードによって
与えられる。

【０２３９】

【表６】これらの結果は、いくつかの興味深いポイントを強調する。第１に、骨格連結
ストラテジーは、環状ペプチドを生成する方向への可能な経路である。単離され
た物質の収率は、開始樹脂の置換値に基づいて、溶液相環化から得られる全収率
によく匹敵する。第２に、環化収率は、モノマー対ダイマーの点で、２つの前駆
体に関して有意に異なる。これは、先行の樹脂上環化アプローチよりも勝る骨格
連結アプローチの利点（すなわち、同じ環状ペプチドに対していくつかの前駆体
を選択し得ること）を示す。環化に関する最適な前駆体を予測することは一般に
不可能である。この固相ストラテジーは、いくつかの前駆体を同時に構築し、そ
して迅速かつ効率的な手段でそれらの環化プロフィールを比較することを可能に
する。

【０２４０】（実施例１０に対する実験）この節は、Ｂｏｃ化学を使用する骨格リンカーおよびモデルペプチドの合成の
詳細を記載する。

【０２４１】（骨格リンカーの合成（スキーム１２）およびＢｏｃ化学を使用するモデル化
合物（表６））（４−［５−オキシ−（トリメチルシリルエチルバレレート）］ベンズアルデ
ヒド（ｂｅｎｚａｌｄｈｙｄｅ））

【０２４２】

【化８６】４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２．２ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、５−ブ
ロモ（トリメチルシリルエチル）バレレート（１３．８２ｇ、０．２０ｍｏｌ）
およびＫ₂ＣＯ₃（４０．０ｇ、０．２９ｍｏｌ）を、アセトン（２５０ｍＬ）中
、１６時間、還流した。固体を、濾過し、アセトンで洗浄し、そして揮発性物質
を真空下で除去した。生成物を、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯ
Ａｃ、８：１）によって精製し、無色オイル（２８．２ｇ、８７％）を得た。

【０２４３】

【数１８】（Ｎ−［４−（５−オキシ−（トリメチルシリルエチルバレレート））ベンジ
ル］−Ｌ−フェニルアラニンアリルエステル）

【０２４４】

【化８７】アルデヒド（１６．２ｇ、５０．２ｍｍｏｌ）、フェニルアラニンアリルエス
テル（２０．５、１００ｍｍｏｌ）および過剰のＭｇＳＯ₄（約４０ｇ）を、Ｃ
Ｈ₂Ｃｌ₂（７５ｍＬ）中で室温、１６時間、撹拌した。固体を、濾過し、そして
揮発性物質を、真空下で除去し、粗製イミンを黄色のオイルとして得た。ＭｅＯ
Ｈ（２００ｍＬ）およびＨＯＡｃ（３ｍＬ）を、添加し、そして反応混合物を１
０℃まで冷却した。ＮａＣＮＢＨ₃（６．１ｇ、１００ｍｍｏｌ）を、撹拌溶液
に少しずつ添加した。この反応混合物を、室温まで加温し、その後、さらに２時
間、撹拌した。揮発性物質を、真空下で除去し、そして得られた残渣をＨ₂Ｏ（
１００ｍＬ）で希釈し、そしてＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わ
せたＥｔＯＡｃ抽出物を、飽和ブライン（１×２００ｍＬ）および水（１×２０
０ｍＬ）で洗浄し、その後、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。揮発性物質を、真空下で除
去し、そして得られたオイルをフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサンＥｔ
ＯＡｃ、１：１）によって精製し、無色透明のオイルを得た（２０．２ｇ、７９
％）。

【０２４５】

【数１９】（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ−［Ｎ−（４−（５−オキシ−（トリメチルシリルエチ
ルバレレート））ベンジル）］−Ｌ−フェニルアラニンアリルエステル）

【０２４６】

【化８８】Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（８．６１ｇ、４０．０ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＡｃ（３
０ｍＬ）に溶解し、これに、ＤＣＣＩ（４．１２ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）を添加
した。対称無水物を形成するために１０〜１５分間の活性化した後、この混合物
を、濾過し、そして濾液をアミン（６）（５．１１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）およ
びＤＩＥＡ（２．６７ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この反応系を、
室温で１６時間、撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を、添加し、そしてこの
反応混合物を、１０％Ｋ₂ＣＯ₃溶液（２×２５０ｍＬ）、ブライン（１×２５０
ｍＬ）およびＨ₂Ｏ（１×２５０ｍＬ）で洗浄し、その後、ＭｇＳＯ₄で乾燥した
。揮発性物質を、真空下で除去し、そして得られたオイルをフラッシュクロマト
グラフィー（ヘキサン：Ｅｔ₂Ｏ、５：１）によって精製し、無色透明のオイル
を得た（３．５５ｇ、６０％）。

【０２４７】

【数２０】（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｒｏ−［Ｎ−（４−（５−オキシ吉草酸）ベンジル）］−Ｌ
−フェニルアラニンアリルエステル）

【０２４８】

【化８９】エステル（２．０ｇ、２．８２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ溶液（２０ｍＬ）中、室
温で撹拌した。ＴＢＡＦ（３ｍＬ、１Ｍ）を滴下し、そしてけん化を３時間、進
めた。Ｈ₂Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＯＡｃ（３ｍＬ）を、反応混合物に添加し
た。酸を、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）中に抽出し、そしてＨ₂Ｏ（１×２５
０ｍＬ）で洗浄し、その後、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。揮発性物質を、真空下で除
去し、そして得られたオイルをフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：Ｅｔ ₂ Ｏ、５：１）によって精製し、無色透明のオイルを得た。３級アミド（生成物
）を、カラムクロマトグラフィー（ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ、１９：１）によって
精製し、白色固体を得た（２．５４ｇ、９０％；融点２８〜３０℃）：

【０２４９】

【数２１】（Ｎ−［４−（５−オキシ−（トリメチルシリルエチルバレレート））ベンジ
ル］−Ｌ−イソロイシンアリルエステル）アルデヒド（１６．２ｇ、５０．２ｍｍｏｌ）、イソロイシンアリルエステル
（２０．５、１００ｍｍｏｌ）および過剰のＭｇＳＯ₄（約４０ｇ）を、ＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（７５ｍＬ）中で室温、３時間、撹拌した。固体を、濾過し、そして揮発性
物質を、真空下で除去し、粗製イミンを黄色のオイルとして得た。ＭｅＯＨ（２
００ｍＬ）およびＨＯＡｃ（３ｍＬ）を、添加し、そして反応混合物を１０℃ま
で冷却した。ＮａＣＮＢＨ₃（６．１ｇ、１００ｍｍｏｌ）を、撹拌溶液に少し
ずつ添加した。この反応混合物を、室温まで加温し、その後、さらに２時間、撹
拌した。揮発性物質を、真空下で除去し、そして得られた残渣をＨ₂Ｏ（１００
ｍＬ）で希釈し、そしてＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせたＥ
ｔＯＡｃ抽出物を、飽和ブライン（１×２００ｍＬ）および水（１×２００ｍＬ
）で洗浄し、その後、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。揮発性物質を、真空下で除去し、
そして得られたオイルをフラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサンＥ
ｔＯＡｃ）によって精製し、無色透明のオイルを得た（２０．２ｇ、７９％）。

【０２５０】

【数２２】（Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−［Ｎ−（４−（５−オキシ−（トリメチルシリルエチ
ルバレレート））−ベンジル）］−Ｌ−イソロイシンアリルエステル）

【０２５１】

【化９０】Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（２．８９ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０
ｍＬ）に溶解し、これにＤＡＳＴ（４．１２ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）を添加した
。１０〜１５分間活性化して、酸フッ化物を形成した後、この混合物を冷Ｈ₂Ｏ
で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そして揮発物を真空下で除去した。次いで、す
ぐに、酸フッ化物を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のアミン（４．７８ｇ、１０．０ｍ
ｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２．６７ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。こ
の反応系を室温で１６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を添加し、そし
てこの反応混合物を、１０％Ｋ₂ＣＯ₃溶液（２×２５０ｍｌ）、ブライン（１
×２５０ｍＬ）およびＨ₂Ｏ（１×２５０ｍＬ）で洗浄し、その後ＭｇＳＯ₄で乾
燥した。揮発物を真空下で除去し、そして得られたオイルを、フラッシュクロマ
トグラフィー（ヘキサン：ジエチルエーテル、１：５）で精製して、透明な無色
のオイルを得た（２．８６ｇ、４４％）。

【０２５２】

【数２３】（Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−［Ｎ−（４−（５−オキシ吉草酸）ベンジル）］−Ｌ
−イソロイシンアリルエステル）

【０２５３】

【化９１】エステル（２．０ｇ、２．８２ｍｍｏｌ）を、室温で、ＴＨＦ（２０ｍＬ）の
溶液中で撹拌した。ＴＢＡＦ（３ｍｌ、１Ｍ）を滴下し、そして３時間鹸化を進
めた。Ｈ₂Ｏ（１００ｍＬ）およびＨＯＡｃ（３ｍＬ）を、この反応混合物に添
加した。酸をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）に抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽
出物を、飽和ブライン（１×１００ｍＬ）および水（１×１００ｍＬ）で洗浄し
、その後、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。揮発物を真空下で除去し、得られたオイルを
、半分取用ＨＰＬＣ（６０分にわたって０〜６０％のＢ）により精製して、第３
級アミドを無色のオイルとして得た（２．５４ｇ、４４％）。

【０２５４】

【数２４】（Ｈ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＯＨ）

【０２５５】

【化９２】このペプチドを、Ｂｏｃ化学．１３についてのインサイチュの中和／ＨＢｔＵ
活性化プロトコルを使用する確立した方法によって、段階的な様式で合成した。
キサンチル保護基を、Ａｓｎ残基のために使用して、ベンジルエーテルをＳｅｒ
残基のために使用した。カップリング反応を、定量的ニンヒドリンアッセイによ
ってモニターし、この反応は典型的に、９９．９％より上であった。鎖の構築が
完了した後、ＣＨＣｌ₃：ＨＯＡｃ：ＮＭＭの溶液中の樹脂にテトラキス（トリ
フェニルホスフィン）パラジウム［Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄］（５８０ｍｇ、０．５ｍ
ｍｏｌ、３モル当量）を添加することによって、アリル保護基の除去を行った。
激しい振盪を開始し、１４時間続けた。溶媒を除去し、残渣を、ジエチルジチオ
カルバミン酸のナトリウム塩酸三水和物［（Ｃ₂Ｈ₅）Ｎ₂ＣＳ₂Ｎａ・３Ｈ₂Ｏ］
の、１０％ＤＭＦ溶液（２×１０ｍＬ）、ＤＭＦ（２×１０ｍＬ）、ＭｅＯＨ：
ＣＨ₂Ｃｌ₂、１：１（２×１０ｍＬ）、およびＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１０ｍＬ）で洗
浄した。

【０２５６】

【化９３】をニートなＴＦＡ（２×１分の処理）で除去し、ペプチドを、ＨＦ：ｐ−クレゾ
ール（１１ｍＬ、１０：１）を使用して、１時間、−５℃で、樹脂（２００ｍｇ
、０．１６６ｍｍｏｌ／ｇ）から切断した。減圧下でＨＦを除去した後、粗ペプ
チドを無水エーテル中で沈殿させ、その後ＨＰＬＣ緩衝液に溶解し、そして凍結
乾燥した。ペプチド、Ｈ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−
Ｐｈｅ−ＯＨ（２０）を、半分取用ＨＰＬＣ（６０分にわたって３０〜９０％の
Ｂ）で精製して、白色粉末を得た（２５ｍｇ、７８％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７
６１．２１（計算値７６１．４２）。

【０２５７】（Ｈ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−ＯＨ）

【０２５８】

【化９４】このペプチドを、前記の実験と同様の手順を使用し、前駆体Ｂｏｃ−Ａｌａ−
［骨格付属物］−Ｉｌｅ−Ｏ−アリル（２００ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ／ｇ）
を使用して合成した。ペプチド、Ｈ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ
−Ａｌａ−Ｉｌｅを、半分取用ＨＰＬＣ（６０分にわたって３０〜９０％のＢ）
で精製して、白色粉末を得た（１０．５ｍｇ、３９％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７
６１．２（計算値７６１．４）。

【０２５９】（溶液環化）（方法１：シクロ−（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉ
ｌｅ））

【０２６０】

【化９５】直鎖状ペプチド、Ｈ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｈｅ−ＯＨ（１５．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）およびＢＯＰ（２６．１ｍｇ
、０．０６０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１９．７ｍＬ、１×１０^-3Ｍ）中、−１０
℃で撹拌した。この溶液に、ＤＩＰＥＡ（３５μＬ、０．１９７ｍｍｏｌ）を滴
下した。この反応系を、この温度でさらに２時間撹拌した後、全ての揮発物を真
空下で除去した。ペプチド、シクロ−（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ）を、半分取用ＨＰＬＣ（６０分にわたって３０〜９０％の
Ｂ）で精製して、白色粉末を得た（７．０ｍｇ、４８％）。¹ＨＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ）：δ ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７４３．２（計算値７４３．４０９２）。二
量体、シクロ−（Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−
Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ）（３ｍｇ、２１％
）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝１４８６．２（計算値１４８６．８）、および三量体
、シクロ−（Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓ
ｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ）（０．７ｍｇ、５％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］ ²⁺ ＝１１１５．１（計算値１１１５．１）もまた単離した。

【０２６１】（方法２：シクロ−（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉ
ｌｅ）

【０２６２】

【化９６】このペプチドを、Ｈ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉ
ｌｅ−ＯＨ（１００ｍｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（１７４ｍｇ、０．３
９３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（２２８μＬ、１．３１ｍｍｏｌ）を使用し
、上記方法１と同様の手順を使用して、合成した。ペプチド、シクロ−（Ｐｒｏ
−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ）を、半分取用ＨＰＬＣ（
６０分にわたって１０〜７０％のＢ）で精製して、白色粉末を得た（１０．５ｍ
ｇ、６７％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７４３．２（計算値７４３．４０９２）。
全ての他の物理的特性（¹ＨＮＭＲ、ｍ．ｐ．、ＨＰＬＣ保持時間、およびア
ミノ酸分析）もまた、方法１について報告された結果と一致した。

【０２６３】（樹脂上環化）（方法１：シクロ−（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉ
ｌｅ））

【０２６４】

【化９７】直鎖状ペプチドの鎖構築を完了した（リンカーがＢｏｃ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｏ
−アリルの間に結合されている固体支持体から合成した）。アリル保護基および

【０２６５】

【化９８】を、［Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄］（５８０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（２×
１分の処理）を用いて除去し、次いで、この反応混合物を−１０℃まで冷却し、
そしてＢＯＰ（２２１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、２，６ルチ
ジン（１９４μＬ、１．６６ｍｍｏｌ）を滴下し、ニンヒドリンアッセイに０．
１％未満のアミンの存在が見られるまで、この反応を続けた。有機物を樹脂（２
５０ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ／ｇ）から濾過し、そして、ＨＦ：ｐ−クレゾー
ル（１１ｍＬ、１０：１）を使用して、−５℃で１時間、環状ペプチドをこの樹
脂から切断した。減圧下でＨＦを除去した後、粗ペプチドを無水エーテル中で沈
殿させ、その後、ＨＰＬＣ緩衝液に溶解し、そして凍結乾燥した。ペプチド、シ
クロ−（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ）を、半分
取用ＨＰＬＣ（６０分にわたって３０〜９０％のＢ）で精製して、白色粉末を得
た（３．１ｍｇ、１０％）：¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７４
３．２（計算値７４３．４０９２）。二量体、シクロ−（Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌ
ｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉ
ｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ）（７．６ｍｇ、２４．５％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝１４
８６．２（計算値１４８６．８）、および三量体、シクロ−（Ａｓｎ−Ｓｅｒ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ
−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ
−Ｐｈｅ）（０．４ｍｇ、１％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］²⁺＝１１１５．２（計算値
１１１５．１）もまた単離した。全ての他の物理的特性（¹ＨＮＭＲ、ｍ．ｐ
．、ＨＰＬＣ保持時間、およびアミノ酸分析）もまた、上記で報告されたものと
一致した。

【０２６６】（方法２：シクロ−（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉ
ｌｅ））

【０２６７】

【化９９】このペプチドを、リンカーがＢｏｃ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｏ−アリル間で連結さ
れた前駆体（２００ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ／ｇ）、［Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄］（
２９０ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（６０ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）
、および２，６−ルチジン（ｌｕｔｉｄｅｎｅ）（２３７μＬ、２．０３ｍｍｏ
ｌ）を使用し、方法１と同様の手順を使用して合成した。ペプチド、シクロ−（
Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ）（３）を、半分取
用ＨＰＬＣ（６０分にわたって３０〜９０％のＢ）で精製して、白色粉末を得た
（８．２ｍｇ、２５％）；ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７４３．２（計算値７４３．４
）。全ての他の物理的特性（¹ＨＮＭＲ、ｍ．ｐ．、ＨＰＬＣ保持時間、およ
びアミノ酸分析）もまた、上記で報告されたものと一致した。

【０２６８】（実施例１０）（リンカー８を使用するＦｍｏｃベースの合成）リンカー（７）と同様に、本発明者らは、一連の環状ペンタペプチドのＦｍｏ
ｃベースの合成のために、リンカー（８）を用いた。このリンカーの合成は、ス
キーム１３に示され、このリンカーを使用して得られる環状生成物は、表７に列
挙される。

【０２６９】

【化１００】（表７）Ｆｍｏｃ骨格リンカーを使用する環化収率

【０２７０】

【表７】（実施例１１に対する実験）このセクションは、Ｆｍｏｃ化学を使用する、骨格リンカーおよびモデルペプ
チドの合成についての、合成の詳細を記載する。

【０２７１】（Ｆｍｏｃ化学を使用する骨格リンカーおよびモデル化合物の合成）（一般方法）ＨＢＴＵ（４ｍｏｌ当量）およびＤＩＥＡ（５ｍｏｌ当量）を添加することに
よって、フルオレニル保護アミノ酸を、それらの遊離酸（４ｍｏｌ当量）として
、樹脂に結合した。このカップリングは、ＤＭＦ中で、２０分間行った。各々の
連続カップリングの後、この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＤＣＭで連続的に
リンスし、その後、Ｋａｉｓｓｅｒニンヒドリンアッセイで成功をモニタリング
した。ＤＭＦ中２０％のピペリジンで処理（１０分）することにより、Ｆｍｏｃ
基の除去を行った。ＣＨＣｌ₃：ＨＯＡｃ：ＮＭＭの溶液（３７：２：１、５ｍ
Ｌ）中の樹脂に、窒素雰囲気下で、Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄（３ｍｏｌ当量）を添加す
ることによって、アリル保護基の除去を行った。振盪を開始し、そして３時間続
けた。樹脂を、ＤＭＦ中１０％のジチオ二炭酸ナトリウム三水和物の溶液（２回
）、ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＤＣＭで連続的にリンスし、そして真空下で乾燥し
た。

【０２７２】直鎖状ペプチドを、５時間、ＴＦＡ（１００％）により除去し、そしてＨＰＬ
Ｃによって純度を調べた。ＨＰＬＣを、Ｗａｔｅｒｓ装置を用い、λ＝２５４ｎ
ｍで、分析用Ｖｙｄａｃカラム（これは、７０％緩衝液Ａ（Ｈ₂Ｏ、０．１％Ｔ
ＦＡ）を５分間、続いて、８０％緩衝液Ｂ（９０％ＣＨ₃ＣＮ、１０％Ｈ₂Ｏ
、０．１％ＴＦＡ）までの２．５％直線勾配を用いる無勾配溶離を、２ｍＬ／
分の流速で使用する）で行った。Ｆｍｏｃ基の最終的な除去の後、樹脂をＤＭＦ
でリンスし、その後、ＤＭＦ（２ｍＬ）の溶液中の樹脂に、ＨＡＴＵ（５ｍｏｌ
当量）を滴下した。ＤＩＥＡ（１０ｍｏｌ当量）を滴下し、振盪を開始し、６時
間続け、その後さらに、５ｍｏｌ当量のＨＡＴＵおよび１０ｍｏｌ当量のＤＩＥ
Ａを添加した。この樹脂が陰性のニンヒドリン試験を示すまで、振盪を再び続け
た。この樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＤＣＭでもう一度リンスし、そして真
空下で乾燥した。

【０２７３】環状ペプチドを、５時間、ＴＦＡ（１００％）で除去し、そしてＨＰＬＣで精
製した。ＨＰＬＣを、Ｗａｔｅｒｓ装置を用い、λ＝２１４ｎｍで、半分取用Ｖ
ｙｄａｃカラム（これは、１００％緩衝液Ａ（Ｈ₂Ｏ、０．１％ＴＦＡ）を１０
分間、続いて、５０％緩衝液Ｂ（９０％ＣＨ₃ＣＮ、１０％Ｈ₂Ｏ、０．１％
ＴＦＡ）までの１％直線勾配を用いる無勾配溶離を、１０ｍＬ／分の流速で使
用する）で行った。

【０２７４】（３−メトキシ−４−ホルミルフェノール（３））

【０２７５】

【化１０１】滴下漏斗、温度計および乾燥管を備えた１Ｌの３つ口フラスコ中に、３−メト
キシフェノール５（７０ｇ、０．６４ｍｏｌ）および新たに蒸留した塩化ホスホ
リル（１００ｍＬ、１．０８ｍｏｌ）を入れた。ＤＭＦ（７５ｍＬ、０．９７ｍ
ｏｌ）を４５分間かけて滴下しながら、この溶液を０℃で撹拌した。この溶液を
、さらに２４時間撹拌し、その後、淡いオイルをクラッシュアイス（１Ｌ）に注
ぎ入れ、そして１０分後、濁った溶液をエーテル（２×３００ｍＬ）で洗浄した
。水相をもう一度０℃まで冷却し、ＮａＯＨ（３９ｇ、０．９８ｍｏｌ）、次い
で、ＮａＯＡｃ（３８０ｇ、４．６３ｍｏｌ）を慎重に添加することによって、
ｐＨを５．５〜６に調整した。水（１５０ｍＬ）および酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ
）（５００ｍＬ）を添加し、水層を、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）でさらに洗浄し
た。合わせた有機抽出物を、ブライン（２５０ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）で
洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そしてエバポレートした。残渣を、沸騰した石油
エーテルで粉末化し、結晶化固体を回収して、表題化合物を得た（２５．２ｇ、
２７．２％）。

【０２７６】

【数２５】（メチル３−メトキシ−４−ホルミルフェノキシエチルエステル）

【０２７７】

【化１０２】５００ｍＬのフラスコに、フェノール（２４ｇ、０．１６６ｍｏｌ）、メチル
ブロモアセテート（７５ｇ、０．４９ｍｏｌ）、およびアセトン（１００ｍＬ）
中のＫ₂ＣＯ₃（６７．０ｇ、０．４９ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１
６時間還流下で撹拌し、室温まで冷却し、濾過し、そして減圧下でエバポレート
した。油状の残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（
１：３））で精製して、メチルエステルを得た（３１．６３ｇ、８５％）。

【０２７８】

【数２６】（３−メトキシ−４−ホルミルフェノキシ酢酸）

【０２７９】

【化１０３】Ｈ₂Ｏ：ＴＨＦ（３：２、１００ｍＬ）中のメチルエステル（７．５ｇ、３３
．４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、０℃で、ＬｉＯＨ（０．５Ｍ、７５ｍＬ）を滴
下した。この反応混合物を、室温まで加温し、さらに１６時間撹拌した。ＥｔＯ
Ａｃ（２５０ｍＬ）およびクエン酸溶液（２０％、５００ｍＬ）を添加し、水層
をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄した。次いで、合わせた有機抽出物を、ブラ
イン（２５０ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そ
して乾固するまで減圧下でエバポレートして、表題化合物を得た（６．７５ｇ、
９６％）。

【０２８０】

【数２７】（アリル３−アミノ−［メチル−（２’−メトキシ−４’−フェノキシ酢酸）
］プロパン酸エステル）

【０２８１】

【化１０４】アルデヒド（１．８７ｇ、８．９２ｍｍｏｌ）およびアミン（２．５８ｇ、２
０ｍｍｏｌ）を、乾燥ＭｇＳＯ₄（１５ｇ）の存在下、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中、
室温で７２時間撹拌した。この反応混合物を濾過し、乾固するまで減圧下でエバ
ポレートして、固体残渣を得た。次いで、この固体をメタノール（ＭｅＯＨ）（
５０ｍＬ）に溶解し、ＮａＣＮＢＨ₃を１０分間かけて滴下した。この反応混合
物を、さらに３時間撹拌し、その後、エーテル（１００ｍＬ）を添加した。アミ
ノ酸を、Ｈ₂Ｏ（３×２５０ｍＬ）に抽出した。次いで、このＨ₂Ｏ層に、過剰の
ＮａＣｌを添加し、アミノ酸をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）に抽出し戻した。
合わせた有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥し、乾固するまで減圧下でエバポレートして
、表題化合物を未精製オイルとして得た（２．５９ｇ、９０％）。

【０２８２】

【数２８】（アリル３−アミノ−［カルボキシメチル−Ｎ−（９’−フルオレニルメトキ
シカルボニル）−アミノ］−［メチル−（２’−メトキシ−４’−フェノキシ酢
酸）］プロパン酸エステル）

【０２８３】

【化１０５】ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＦｍ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５９４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、ＢＯ
Ｐ（８８４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（１ｍＬ）の撹拌溶液に、室温
で、アミノ酸（５１８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物をさ
らに２４時間撹拌し、その後、乾固するまで減圧下でエバポレートした。ＥｔＯ
Ａｃ（５０ｍＬ）およびクエン酸（１０％、５０ｍＬ）を添加し、そして水層を
ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）でさらに洗浄した。合わせた有機抽出物を、ブライン（
５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そして乾固す
るまで減圧下でエバポレートした。表題化合物を、ＨＰＬＣ（Ｃ−１８逆相）で
精製した。ＨＰＬＣを、Ｖｙｄａｃカラム（これは、７０％緩衝液Ａ（Ｈ₂Ｏ、
０．１％ＴＦＡ）から８０％緩衝液Ｂ（９０％ＣＨ₃ＣＮ、１０％Ｈ₂Ｏ、０
．１％ＴＦＡ）までの１．０％直線勾配を、２０ｍｌ／分の流速で使用する）
、λ＝２５４ｎｍで行った（５２２ｍｇ、５３％）。

【０２８４】（酸に不安的なリンカーからのＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ−Ｏ−アリルの
切断）

【０２８５】

【化１０６】切断を、５ｍｇの三級アミドを使用しＴＦＡ（２ｍＬ）中で５時間攪拌して実
施した。混合物をエバポレートして乾燥した。ＨＰＬＣを、無勾配溶出７０％緩
衝液Ａ（Ｈ₂Ｏ、０．１％ＴＦＡ）で５分間、続いて、直線勾配２．５％〜８０
％の緩衝液Ｂ（９０％ＣＨ₃ＣＮ、１０％Ｈ₂Ｏ、０．１％ＴＦＡ）を１０ｍｌ／
分の流速で使用する分析Ｖｙｄａｃカラムにおいてλ＝２５４ｎＭで実施した。
ジペプチドを公知のサンプルと共に共溶出し、そして正確な分子イオンを得た。

【０２８６】（酸に不安定なリンカーを固体支持体に結合させるための手順）ＤＩＥＡ（０．４９ｍＬ、２．７５ｍｍｏｌ）をＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（４３
．７５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、およびＨＢＴＵ（９５ｍｇ、０．２５ｍｍｏ
ｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液に添加した。この混合物を次いで、アミノメチルポ
リスチレン樹脂（０．８３ｍｍｏｌ／ｇ、１．０ｇ）に添加した。振盪を開始し
、そして２０分間続け、その後、ＤＭＦでリンスした。次いで、ピリジン：ＤＭ
Ｆ：無水酢酸（Ａｃ₂Ｏ）（１：１：８、５ｍＬ）を添加し、そして振盪をさら
に２０分間再び続け、その後、過剰量のＤＭＦでリンスした。Ｂｏｃ基の除去を
ＴＦＡで処理（２×１分）することによって達成した。第二のＢｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ（１７５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を同様の方法によって結合させた［ＤＭＦ
（４ｍＬ）中、ＤＩＥＡ（０．４９ｍＬ，２．７５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３７
９ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）］。もう一回、Ｂｏｃ基の除去をＴＦＡでの処理（２
×１分）によって達成した。アリル３−アミノ−［カルボキシメチル−Ｎ−（９
’−フルオレニルメトキシカルボニル）−アミノ］−［メチル−（２’−メトキ
シ−４’−フェノキシ酢酸）］プロパン酸エステル８の樹脂への結合を、ＤＭＦ
（４ｍＬ）中の酸（３０１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．２７ｍＬ、
１．５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１８０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を添加することよ
って達成した。振盪を開始し、そして２０分間続け、その後、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ
およびジクロロメタン（ＤＣＭ）でリンスし、そして真空で乾燥した。樹脂への
各カップリング後、カップリングの成功をＫａｉｓｓｅｒニンヒドリンアッセイ
によってモニターした。

【０２８７】（固体支持体からのＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ−Ｏ−アリルの切断）

【０２８８】

【化１０７】切断を、１０ｍｇの樹脂を使用し、ＴＦＡ（２ｍＬ）中で５時間攪拌して実施
した。混合物を減圧下でエバポレートして乾燥し、その後、Ｈ₂Ｏ：ＣＨ₃ＣＮ（
１：１、５ｍＬ）の溶液中に溶解し、濾過し、次いで、凍結乾燥した。ＨＰＬＣ
を、無勾配溶出９０％緩衝液Ａ（Ｈ₂Ｏ、０．１％ＴＦＡ）で１０分間、続いて
、直線勾配１．０％〜７０％の緩衝液Ｂ（９０％ＣＨ₃ＣＮ、１０％Ｈ₂Ｏ、０．
１％ＴＦＡ）を１０ｍｌ／分の流速で使用する、半分取（ｓｅｍｉ−ｐｒｅｐａ
ｒａｔｉｖｅ）Ｖｙｄａｃカラムにおいてλ＝２５４ｎＭで実施した。

【０２８９】（シクロ−［Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ］）

【０２９０】

【化１０８】シクロ−［Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ］を凍結乾燥し、白
色粉末を得た（１２．３ｍｇ、１８％）：ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝４５６．３（４５
６．３）；アミノ酸分析：Ｇｌｙ＝１．０６、β−Ａｌａ＝１．０１、Ａｓｐ＝
１．０３、Ｖａｌ＝１．０３、Ｌｅｕ＝０．８８。

【０２９１】（シクロ−［Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ］）

【０２９２】

【化１０９】シクロ−［Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ］を凍結乾燥し、白
色粉末を得た（８．１ｍｇ、９％）：ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝５９０．１（理論値５
９０．３）；アミノ酸分析：Ｇｌｙ＝０．９９、β−Ａｌａ＝１．０１、Ｌｙｓ
＝１．０４、Ｐｈｅ＝１．０２、Ｔｒｐ＝０．９５。

【０２９３】（シクロ−［Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ］）

【０２９４】

【化１１０】シクロ−［Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ］を凍結乾燥し、、
白色粉末を得た（８．２ｍｇ、１５％）：ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝４５７．１（４５
７．３）；アミノ酸分析：Ｇｌｙ＝１．９５、β−Ａｌａ＝１．０１、Ａｓｐ＝
０．９６、Ａｒｇ＝１．０９。

【０２９５】（実施例１１骨格リンカー＋環収縮（ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ））（シクロ−［ＡｌａＰｒｏＬｅｕＰｈｅＡｌａ］合成への適用）以下に強調するように、本発明者らは、シクロ［ＡｌａＰｒｏＬｅｕＰ
ｈｅＡｌａ］の合成における、骨格リンカーと環収縮の組み合せアプローチを
評価した。この場合、ペプチドを骨格リンカーにおいて構築し、そして環収縮補
助基（ａｕｘｉｌｉａｒｙ）は還元的アミノ化よってＮ末端に結合させた。最初
の環化および環収縮を樹脂上で進行させた。得られた環状生成物を次いで、無水
ＨＦを使用して樹脂から切断した。

【０２９６】

【化１１１】スキーム１４試薬および条件：ｉ、

【０２９７】

【化１１２】ＨＢＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温；ｉｉ、Ａｌａ−Ｏアリル、ＮａＢＨ₃Ｃ
Ｎ、５％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ、室温、３時間；ｉｉｉ、（Ｂｏｃ−Ｐｒｏ）₂−
Ｏ、ＤＣＭ、室温、１６時間；ｉｖ、ＳＰＰＳ；ｖ、２−ヒドロキシ−４−ニト
ロ−ベンズアルデヒド、ＮａＢＨ₄、ＤＭＦ、２時間、ｖｉ、Ｐｄ（Ｐｈ₃）₄、
ＣＨ₃Ｃｌ：ＨＯＡｃ：ＮＭＭ、３７：２：１、室温、３時間；ｖｉｉ、ＤＩＣ
、ＤＩＥＡ、７０℃、２時間；ｖｉｉｉ、ＨＦ：ｐ−クレゾール、１０：１、−
５℃、１時間。

【０２９８】（環状テトラペプチド、シクロ［［Ｈｎｂ］ＴｙｒＡｒｇＰｈｅＧｌｙ
］合成への適用）リンカーのアミノメチルポリスチレン樹脂１１（ｓｖ＝０．２１ｍｍｏｌ／ｇ
）への結合のから出発し、ＮａＣＮＢＨ₃を使用する保護されたアミノ酸Ｈ−Ｇ
ｌｙ−Ｏアリルの還元的アミノ化、続くアシル化を定量的に進行させて、１２を
得た。標準的な固相ペプチドプロトコルを使用したＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−
ＯＨの付加によって、直鎖状ペプチド１３を得た（スキーム１５）。

【０２９９】

【化１１３】 ^a試薬：（ｉ）Ｈ−Ｇｌｙ−Ｏアリル、ＮａＣＮＢＨ₃、ＭｅＯＨ、室温、３時
間；（ｉｉ）Ｂｏｃ−Ｐｈｅ₂−Ｏ、ＤＣＭ、室温、６時間；（ｉｉｉ）Ｂｏｃ
−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ。

【０３００】スキーム１５

【０３０１】

【化１１４】 ^a試薬：ｉ、ＴＦＡ：ＤＣＭ（４０：６０）、２×５分；ｉｉ、Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｙｒ−（Ｂｏｃ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、１時間；ｉｉｉ、ピペ
リジン：ＤＭＦ、１：１、２×５分；ｉｖ、ＨｎＢ２、ＮａＢＨ₄、ＤＭＦ、
室温、１時間；ｖ、３当量のＰｄ（Ｐｈ₃）₄、ＣＨ₃Ｃｌ、：ＨＯＡｃ：ＮＭＭ
、３７：２：１、室温、３時間：ｖｉ、ＨＦ：ｐ−クレゾール、１：１。

【０３０２】スキーム１６インサイチュでの中和プロトコルおよびＨＢＴＵ活性化を使用するＦｍｏｃ−
Ｔｙｒ（Ｂｏｃ）−ＯＨの１３への付加によって、直鎖状ペプチド１４を得た（
スキーム１６）。Ｐｄ（ＰＰｈ₃）₄を使用する１４のアリル脱保護、続く最終Ｔ
ＦＡ処理によって、所望の樹脂上直鎖状ペプチド１５を得、一方、Ｆｍｏｃ保護
基の除去およびＨｎＢおよびＮａＢＨ₄を使用した還元的アミノ化、続いて、再
度アリル除去によって所望の直鎖状ペプチド１６を得た。

【０３０３】純度および合成の容易さを示すために、これらのペプチドを次いで、切断（Ｈ
Ｆ：ｐ−クレゾール、９：１）し、直鎖状ペプチド１７および１８を得た。この
直鎖状ペプチドのＨＰＬＣプロフィールを図８に示す。

【０３０４】直鎖状ペプチド１５および１６の環化をＤＭＦ中のＢＯＰ、ＤＩＥＡを使用し
て３日間実施した。直鎖状ペプチド１５（［ＨｎＢ］補助基は存在しない）に関
して、環化、続くＨＦ切断は、所望の生成物を生成しなかった。一連のオリゴマ
ー副生成物をＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳの両方によって検出した。直鎖状ペプチ
ド１６（［ＨｎＢ］補助基を含む）の環化により、所望の環状生成物を得た。こ
れらの反応をスキーム１７に要約し、そして環状ペプチドのＨＰＬＣプロフィー
ルを図９に示す。

【０３０５】

【化１１５】 ^a試薬：ｉ、ＢＯＰ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、３時間；ｉｉ、ＨＦ：ｐ−ク
レゾール、１：１。

【０３０６】スキーム１７（実施例１１に関する実験）（シクロ［ＡｌａＰｒｏＬｅｕＰｈｅＡｌａ］の合成）（樹脂に結合された４−（５−オキシ吉草酸）ベンジルアルデヒド２）

【０３０７】

【化１１６】４−（５−オキシ吉草酸）ベンジルアルデヒド１（０．８９ｇ、４．０ｍｍｏ
ｌ）およびＨＢＴＵ（１．５２ｇ、４．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に
溶解した。ＤＩＥＡ（１ｍＬ）をこの溶液に添加し、そしてこの反応混合物を次
いで、予めカップリングさせたＨ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−アミノメチルポリ
スチレン樹脂に添加した。アミノメチルポリスチレン樹脂の置換値（ｓｕｂｓｔ
ｉｔｕｔｉｏｎｖａｌｕｅ）（４．８ｇ、ｓｖ＝０．２１ｍｍｏｌ／ｇ）。振
盪を３０分間続け、溶離液を濾別し、そして樹脂をＤＭＦ（２×１０ｍＬ）、Ｃ
Ｈ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（１：１、２×１０ｍＬ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１０ｍＬ
）で洗浄し、その後、乾燥した。

【０３０８】（樹脂に結合したＮ−［４−（５−オキシ吉草酸）ベンジル］−Ｌ−アラニン
アリルエステル３）

【０３０９】

【化１１７】アルデヒド２およびアラニンアリルエステル（１．２９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を
５％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で５分間
攪拌し、その後、ＮａＢＨ₃ＣＮ（０．６１ｇ、１０ｍｍｏｌ）をこの溶液に滴
下した。反応混合物をさらに２時間攪拌し、その後、溶離液を濾別した。樹脂を
５％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）、５％ＤＩＥＡ／ＭｅＯＨ（３×１０
ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（１：１、２×１０ｍＬ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂（２
×１０ｍＬ）で洗浄し、その後、乾燥した。

【０３１０】（樹脂に結合したＢｏｃ−Ｐｒｏ［Ｎ−（４−（５−オキシ吉草酸）ベンジル
）］−Ｌ−アラニンアリルエステル４）

【０３１１】

【化１１８】Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（４．３１ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂（１０
ｍＬ）に溶解し、これにジイソプロピルカルボジイミドＤＩＣ（１．２６ｇ、
１０．０ｍｍｏｌ）を添加した。対称無水物を形成するために１０〜１５分の活
性化後、この混合物を濾過し、そして濾液を樹脂３に添加した。反応系を室温で
１６時間振盪し、その後、溶離液を濾別した。樹脂をＣＨ₂Ｃｌ₂（５×１０ｍＬ
）で洗浄し、その後乾燥した。

【０３１２】（樹脂に結合したＨ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−［Ｎ−（４−（５−
オキシ吉草酸）ベンジル）］−Ｌ−アラニンアリルエステル５）

【０３１３】

【化１１９】ペプチド５を、インサイチュ中和／Ｂｏｃ化学に関するＨＢＴＵ活性化プロト
コルを使用した確立された方法によって段階様式で合成した。カップリング反応
を定量的ニンヒドリンアッセイによってモニターし、これは、典型的に、＞９９
．９％であった。

【０３１４】（樹脂に結合したＮ−（２−ヒドロキシ−４−ニトロベンジル）−Ａｌａ−Ｐ
ｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−［Ｎ−（４−（５−オキシ吉草酸）ベンジル）］−Ｌ−
アラニンアリルエステル６）

【０３１５】

【化１２０】２−ヒドロキシ４−ニトロ−ベンズアルデヒド（１．６７ｇ、１０ｍｍｏｌ）
および樹脂上のペプチド５をＤＭＦ（４ｍＬ）中、室温で５分間攪拌した。Ｎａ
ＢＨ₄（０．３４ｇ、１０ｍｍｏｌ）をこの溶液に滴下し、そしてこの反応混合
物をさらに１時間攪拌し、その後、溶離液を濾別した。次いで、ＤＭＦ（１０ｍ
Ｌ）中、ベンズアルデヒドおよびＮａＢＨ₄の添加を一回繰り返した。樹脂をＤ
ＭＦ（３×１０ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（１：１、２×１０ｍＬ）および
ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１０ｍＬ）で洗浄し、その後乾燥した。

【０３１６】アリル保護基を、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム［Ｐｄ（
ＰＰｈ₃）₄］（１．７４ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を樹脂（ＣＨＣｌ₃：ＨＯＡｃ：
ＮＭＭ（３７：２：１）の溶液中）へと添加し、そして１４時間攪拌を続けて達
成した。溶媒を除去し、そして残渣を１０％のジエチルジチオカルバミン酸（ナ
トリウム塩三水和物［（Ｃ₂Ｈ₅）Ｎ₂ＣＳ₂Ｎａ．３Ｈ₂Ｏ］）のＤＭＦ溶液（２
×１０ｍＬ）、次いで、ＤＭＦ（２×１０ｍＬ）、ＭｅＯＨ：ＣＨ₂Ｃｌ₂ １：
１（２×１０ｍＬ）で洗浄し、そして最後にＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１０ｍＬ）で洗浄
した。

【０３１７】少量のペプチド７を樹脂（１００ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ／ｇ）から、ＨＦ
：ｐ−クレゾール、５．５ｍＬ、１０：１を使用して１時間、１５℃で切断した
。減圧下でのＨＦの除去後、粗ペプチドを無水エーテル中で沈殿させ、濾過し、
ＨＰＬＣ緩衝液に溶解し、そして凍結乾燥した。分析用ＨＰＬＣ（２０〜７０％
Ｂ、２０分間）は１つのピークのみを示した；ＥＳ−ＭＳＭ_r ６６８．４
（計算値６６９．３）。

【０３１８】（シクロ−［Ｎ−（２−ヒドロキシ−４−ニトロベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］１０）

【０３１９】

【化１２１】ＤＩＣ（６．７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（４ｍＬ）中、樹脂上
のペプチド７（２００ｍｇ、ｓｖ＝０．１７６ｍｍｏｌ／ｇ）の溶液に添加した
。ＤＩＥＡ（？ｍＬ）をこの溶液に滴下し、そして反応混合物を室温で１時間攪
拌したまま放置し、その後、７０℃まで２時間加熱した。溶離液を濾別し、そし
てＤＭＦ（３×１０ｍＬ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（１：１、２×１０ｍＬ）お
よびＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１０ｍＬ）で洗浄し、その後乾燥した。環状ペプチド１０
を樹脂から、ＨＦ：ｐ−クレゾール、５．５ｍＬ、１０：１を使用し、１時間、
０℃で切断した。減圧下でＨＦの除去後、粗ペプチドを無水エーテル中に沈殿さ
せ、その後、ＨＰＬＣ緩衝液に溶解し、そして凍結乾燥した。分析用ＨＰＬＣ（
２０〜７０％Ｂ、２０分）は２つのピークを示した；ａ）直鎖状ペプチドＥ
Ｓ−ＭＳＭ_r ６６８．４（計算値６６９．３）、および環状物質ＥＳ−ＭＳ
Ｍ_r ６５０．４（計算値６５０．３）。

【０３２０】（環状テトラペプチドシクロ［［ＨｎＢ］ＴｒｙＡｒｇＰｈｅＧｌｙ
］の合成に関する実験）（ペプチド合成）Ｓｃｈｎｏｌｚｅｒ（１９９２）によって以前に記載されたように、Ｆｍｏｃま
たはＢｏｃ保護基のいずれか、およびインサイチュでのＨＢＴＵ活性化プロトコ
ルを使用して全ての直鎖状ペプチドを、化学的に、段階合成した。カップリング
効率を定量的なニンヒドリン試験によって決定し、そして必要であれば再びカッ
プリングし、＞９９．５％を得た。Ｋａｔｅｓ（１９９３）によって以前に報告
されたように、アリルの脱保護を３当量のＰｄ（Ｐｈ₃）₄、ＣＨ₃Ｃｌ：ＨＯＡ
ｃ：ＮＭＭ、３７：２：１を使用し、室温、３時間、実施した。

【０３２１】（還元的アミノ化）選択された補助基−アルデヒド（０．１Ｍ）をＭｅＯＨ／ＭＤＦ（１：１）また
はＤＭＦ／ＡｃＯＨ（１００：１）中に溶解し、そして樹脂結合Ｂｏｃ−脱保護
ペプチド（樹脂結合アミンに対して２当量）に添加した。５分後、樹脂を濾過し
、そしてアルデヒドの第二の部分を添加した。さらに５分後、この樹脂を濾過し
、そしてＭｅＯＨ／ＤＭＦ（１：１）、またはＤＭＦで洗浄した。ＭｅＯＨ／Ｄ
ＭＦ（１：３）中のＮａＢＨ₄（１０当量）を添加し、そして反応混合物を５分
間そのまま静置した。樹脂を再度濾過し、そしてＭｅＯＨ／ＤＭＦ（１：３）、
ＤＭＦ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１：１）で洗浄し、そして空気乾燥し、その後切断
した。

【０３２２】（切断）ペプチドを以下のように切断した：２５０ｍｇの樹脂を１ｍＬのｐ−クレゾール
および０℃で添加された１０ｍＬのＨＦと混合し、そしてこの混合物を０℃で１
時間攪拌した。ＨＦのエバポレーション後、粗生成物を沈殿させ、そしてエーテ
ル（２×１０ｍＬ）で洗浄した。沈殿を次いで、ＨＰＬＣ精製（上記）のために
、水（０．０９５％ＴＦＡ）中の５０％ＣＨ₃ＣＮに溶解した。

【０３２３】（Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ１７）直鎖状ペプチドを単離した（％収率）：ＥＳ−ＭＳＭ_r ５４２．２、Ｃ₂₆Ｈ₃ ₆ Ｎ₇Ｏ₆の計算値、５４２．３（単一の異性体）。

【０３２４】（Ｈ−［ＨｎＢ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ１８）直鎖状ペプチドを単離した（％収率）：ＥＳ−ＭＳＭ_r ６９３．１、Ｃ₃₃Ｈ₄ ₁ Ｎ₈Ｏ₉の計算値、６９３．３（単一の異性体）。

【０３２５】（シクロ［［ＨｎＢ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］２２）骨格リンカー１８におけるＨ−［ＨｎＢ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｈ］の環化はシクロ［［ＨｎＢ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］を生成した
（％収率）。ＥＳ−ＭＳＭｒ６７５．３、Ｃ₃₃Ｈ₃₄Ｎ₇Ｏ₈の計算値、６７５
．３（単一の異性体）。

【０３２６】（実施例１２環収縮、骨格置換および骨格リンカー）本発明者らの現在の骨格リンカーは、ペプチド骨格の任意の原子に結合され得
る。表３のデータが教示するように、１つより多くのＮα−置換基は、研究した
実施例における環状テトラペプチドの最高収率を生じる。環収縮との組み合せに
おいて、これは、環化ペプチド合成のための強力なアプローチを提供する。

【０３２７】以下に概説されるペプチドは、この組み合わされたアプローチを使用して合成
される。このペプチドは、２個のＮα−置換基（一方はリンカーＬである）およ
び環収縮補助基を含む。このペプチドは環化され、そして生成物の純度および収
率を試験する。メチル化の置き換えにおける可逆Ｎα−置換基がまた研究される
。

【０３２８】

【化１２２】（実施例１３シクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］およびシクロ［Ｔ
ｙｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］の生物学的活性）オピオイドレセプター結合活性を有する薬物は、疼痛緩和ならびにアヘン常習
者の解毒に対して治療学的に有用であり、そしてモルフィンおよびナロキソンは
それぞれ、鎮痛薬および解毒薬として広く使用される。モルフィンは望ましくな
い副作用（例えば、薬物依存および呼吸低下）を有し、その結果として、深刻な
副作用がほとんどないか、または少ないより有効な薬物のための明確な医薬の必
要性が存在する。

【０３２９】デモルフィンは、南アフリカカエル（ＳｏｕｔｈＡｆｒｉｃａｎｆｒｏｇ
）の皮膚から単離されたオピオイドヘプタペプチドであり、これは、以下の配列
を有する；（Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅ
ｒ−ＮＨ₂）。テトラペプチドアナログ（Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｈｅ−ＮＨ−Ｙ）は、脳室内注射によって投与される場合、強力な鎮痛
薬である。実施例３において、本発明者らは、本発明者らの組み合せ戦略を使用
して、環状テトラペプチドであるシクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］お
よび嗜癖シクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］（ＷＰ１５２と命名）
を合成した。実施例１０および１１は、これらの化合物の、Ｌａｖｉｄｉｓ（１
９９５）によって記載されるように測定された、視覚化交感神経性静脈瘤様腫脹
からの接合部電流に対して誘起された興奮性（ｅｖｏｋｅｄｅｘｃｉｔａｒｙ
ｆｏｒｊｕｎｃｔｉｏｎｃｕｒｒｅｎｔｓ）（ＥＪＣ）の局所的細胞外記
録に対する影響を示す。これらの結果は、こらの化合物の混合物が伝達物質の放
出を大幅に減少させることを示す。この効果は、ナロキソンの添加によって逆転
され、１方または両方の化合物が強力なμ−オピエートアゴニストであることを
強く教示する。

【０３３０】本発明は明瞭さおよび理解を目的としてかなり詳細に記載されているが、本明
細書中に記載される実施態様および方法に対する種々の改変および変更が、本明
細書中に開示される本発明の概念の範囲から逸脱することなく実施され得ること
が当業者に明らかである。

【０３３１】本明細書中に引用される文献を以下の頁に列挙する。これらは本明細中に参考
として援用される。

【０３３２】

【化１２３】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、環化および付随する樹脂からの切断の後のシクロ−Ｄ−Ｇ−（Ｃａｔ
）−Ｒ−Ｇの固相合成の粗生成物のＨＰＬＣ溶離プロファイル（プロファイルＡ
）および溶液相中で合成されたＨＰＬＣ精製されたシクロ−Ｄ−Ｇ−（Ｃａｔ）
−Ｒ−Ｇ（プロファイルＢ）を示す。

【図２】図２は、ｎ＝２のセーフティーキャッチリンカーを用いて合成された環状ペプ
チドのＨＦ切断および塩基環化の後に得られた粗濾液のＬＣ−ＭＳプロファイル
を示す。

【図３】図３は、過剰のＤＩＥＡの存在下、Ａ）室温で３時間後、およびＢ）６５℃で
１時間加熱後の直鎖状ペプチド１ａの環化のＨＰＬＣ分析の結果を示す。溶液は
高真空下で乾燥され、５０％水性アセトニトリルに溶解され、そしてＶｙｄａｃ
逆相Ｃ−１８（５μｍ、３００Å、０．４６×２５ｃｍ）ＨＰＬＣカラムに直接
付された。生成物は線形０−８０％バッファーＢグラジエントを用いて４０分間
、流速１ｍｌ／分で分離された。

【図４】図４は、一定時間間隔での環状ペプチド８ａの光分解のＨＰＬＣ分析結果を示
す。ペプチド８ａのＭｅＯＨ／１％ＡｃＯＨ中での０．１５ｍＭ溶液を標準ＵＶ
ランプを用いて光分解し、そして異なる時間間隔で、少量のアリコートをＺｏｒ
ｂａｘ逆相Ｃ−１８（３μｍ、３００Å、０．２１×５ｃｍ）ＨＰＬＣカラムに
注入した。生成物を線形０−１８％バッファーＢグラジエントを用いて１０分間
、流速２００μＬ／分で分離した（２１４ｎｍで検出）。

【図５】図５は、ペプチド１ａ、１ｄおよび１ｅの環化由来の反応生成物のＨＰＬＣプ
ロファイルを示す。（ｉ）１当量ＢＯＰ、２当量ＤＩＥＡ、ＤＭＦ中１ｍＭ；（
ｉｉ）１０当量ＤＩＥＡ、６時間、室温。Ｌ＝直鎖状ペプチド、Ｃｙｃｌ＝頭−
尾環状生成物。

【図６】図６は、ＨＡＴＵまたはＢＯＰを環化試薬として用いたペプチド１ｆの粗環状
生成物のＨＰＬＣ比較を示す。クロマトグラム中の２つの主ピークは分子量８２
５ｇ／ｍｏｌを有し、標的環状生成物シクロ−［（Ｈｎｂ）Ｇｌｙ−（Ｈｎｂ）
Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ］に対応する。第１の溶離生成物は全てＬの異性体であ
り、第２の生成物はＤ−Ｐｈｅを含む。

【図７】図７は、ある範囲の反応条件下でペプチド４の環化から得られた反応プロファ
イルを示す。

【図８】図８は、骨格連結を用いた直鎖状ペプチド１７および１８の粗ＨＰＬＣの結果
を示す。Ａ＝Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ１７；Ｂ＝［ＨｎＢ
］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ１８；切断はＨＦ：ｐ−クレゾール
、９：１を用いて、−５℃、１時間で行われた。

【図９】図９は、骨格連結を用いた直鎖状ペプチド１６の環化についての粗ＨＰＬＣの
結果を示す。Ａ＝［ＨｎＢ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ１８；Ｂ
＝シクロ−［［ＨｎＢ］Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］２１。環化は、ＢＯ
Ｐ、ＤＩＥＡを用いて３日間で行われ、切断はＨＦ：ｐ−クレゾール、９：１を
用いて、−５℃で１時間行われた。

【図１０】図１０は、マウスの精管の交感神経性静脈瘤様腫脹からの誘発された興奮性接
合部電流（伝達物質の放出の測定値）に対する化合物（１μＭ）の影響を示す。
各黒丸は１００分間の間に記録されたＥＪＣを表す。ＥＪＣの記録の失敗はｙ軸
のゼロ上の黒丸で示される。低い水平線は環状テトラペプチドの混合物（１μＭ
）を組織浸漬溶液（ｔｉｓｓｕｅｂａｔｈｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎ）に適用
した場合を示し、そして上の水平線はナロキソン（１μＭ）を組織浸漬溶液に加
えた場合を示す。テトラペプチドの混合物（１μＭ）はＥＪＣの振幅および周波
数を極度に減少させること、そしてオピエート拮抗薬（ナロキソン）がこの効果
を阻害することに留意のこと。

【図１１】図１１は、環状テトラペプチドの混合物（１μＭ）の、マウス精管の交感神経
性静脈瘤様腫脹から記録された平均興奮性接合部電流（ＥＪＣ）に対する影響を
示す。各棒は少なくとも６０回の記録の平均であり、垂直線は平均の標準偏差を
示す。調製物を環状テトラペプチドに２０分間曝露した後にＥＪＣの振幅および
周波数が、高度に有意に減少し、この効果がナロキソンで逆転したことに留意の
こと。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 1/08 Ｃ０７Ｋ 7/00 7/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ミューターマンズ，ウィムデニスフランズオーストラリア国クイーンズランド 4006，ハーストン，フレミングロード 16 (72)発明者ボーン，グレゴリートーマスオーストラリア国クイーンズランド 4105，モールーカ，ラボールストリート３ (72)発明者マックジアリー，ロスピーターオーストラリア国クイーンズランド 4067，セントルシア，ハイランドテラス 130 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA03 AA06 AA07 BA01 BA16 BA24 CA59 NA14 ZA082 4H045 AA10 AA20 AA30 BA11 BA12 BA13 BA14 BA15 BA16 BA17 BA30 BA31 BA35 BA50 BA60 CA53 EA20 EA50 FA30 FA33 FA51

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式Ｉ【化１】または一般式ＩＩ【化２】の環状ペプチドまたはペプチド模倣化合物の合成方法であって、ここでＬはリンカー単位であり、該環状ペプチドを固体支持体【化３】に連結し、ここで該環は単環、二環または多環であり、１から１５個のモノマー
を含み、該方法は：ａ）該ペプチドまたはペプチド模倣化合物のフレキシビリティを可逆的Ｎ置換
によって、またはシス−アミド結合代用物を用いてシスアミド結合配座を強制す
ることによって誘導して、環化を促進する工程、および必要ならばｂ）該環状ペプチドまたはペプチド模倣化合物を環縮小反応に供する工程を包
含する、方法。
【請求項２】前記環が１から１０個のモノマーを含む、請求項１に記載の方
法。
【請求項３】前記環が１から５個のモノマーを含む、請求項２に記載の方法
。
【請求項４】前記環が単環である、請求項１から３のいずれか一項に記載の
方法。
【請求項５】前記環が二環である、請求項１から３のいずれか一項に記載の
方法。
【請求項６】前記環が２つより多い環を含む、請求項１から３のいずれか一
項に記載の方法。
【請求項７】前記化合物が一般式ＩＩの化合物であり、そして前記リンカー
Ｌが骨格窒素に、あるいは前記モノマーの側鎖中の原子に接続してる、請求項１
から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】溶液中で行われる請求項１から６のいずれか一項に記載の方法
であって、以下：ａ）一般式ＩＩＩ【化４】の直鎖状ペプチドを調製する工程であって、ここでＰは１から１５モノマーの直鎖状ペプチドであり；Ａ１は可逆または不可逆のいずれかの、ペプチド骨格上の１つ以上のＮ置換基
であり、あるいは骨格のシス配座を強制する化学的部分であり、Ａ２は原子の共有結合基であり、環縮小して所望の置換環状ペプチドとなる前
に大きい初期環状ペプチドを形成するための反応性官能基を含む、工程；ｂ）Ｃ末端を活性化して一般式ＩＶ：【化５】の環状ペプチドを形成する工程；ｃ）一般式ＩＶのペプチドを環縮小反応（これは自発的に生じ得る）によって
再配置して、一般式Ｖ：【化６】の環状ペプチドを形成する工程；および必要に応じてｄ）一般式Ｖの環状ペプチドを脱保護反応に供して基Ａ１およびＡ２を除去し
、一般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る工程を包含する、方法。
【請求項９】Ｐが１から１０モノマーの直鎖状ペプチドである、請求項８に記
載の方法。
【請求項１０】Ｐが１から５モノマーの直鎖状ペプチドである、請求項９に記
載の方法。
【請求項１１】Ａ１および／またはＡ２がペプチドに接続したまま残る、請求
項８または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】Ａ１および／またはＡ２が次に固体支持体に連結し、誘導体化
されるか、あるいは他の環状ペプチドまたはペプチド模倣化合物と連結する、請
求項１１に記載の方法。
【請求項１３】Ａ１が可逆的Ｎ置換基である、請求項８から１２のいずれか一
項に記載の方法。
【請求項１４】Ａ１が２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル、２−ヒドロキ
シベンジルまたは２−ヒドロキシ−６−ニトロベンジル置換基である、請求項１
３に記載の方法。
【請求項１５】Ａ２が自発的環縮小によって除去される、請求項８から１０の
いずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】Ａ２が求核基を含み、該求核基がＣ末端と迅速に反応して大き
い初期環を形成し、これが次に自発的に、あるいは加熱またはさらなる化学的処
理のいずれかによって、縮小する、請求項８から１５のいずれか一項に記載の方
法。
【請求項１７】Ａ２がチオールまたはヒドロキシルである、請求項１６に記載
の方法。
【請求項１８】Ａ２が不可逆的置換基であり、環縮小の後に除去されるか、あ
るいいは環縮小の際に自発的に除去される、請求項８から１５のいずれか一項に
記載の方法。
【請求項１９】Ａ２が一般式（ａ）：【化７】の化合物であり、ここで該環は（ａ）必要に応じて、窒素、酸素、および硫黄からなる群から選択される１つ
以上のヘテロ原子を含み；（ｂ）５から７原子であり；（ｃ）各々ＸＨ、Ｚ、およびＹで置換される３つの炭素原子を含み；そして（ｄ）さらに、基Ｒ³およびＲ⁴で置換されており、ここで該化合物は５員環で
あるか、あるいは基Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵で置換されており、ここで該化合物は
６員環であるか、あるいはさらに基Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶で置換されており、
ここで該化合物は７員環であり、ここでＸは、酸素、硫黄、ＣＨ₂Ｏ−、またはＣＨ₂Ｓ−であり；Ｙは、電子吸引性基であり；Ｚは炭素−窒素共有結合の形成を可能とする任意の基であり；そしてＲ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は各々独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリー
ル、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール
、置換ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ＸＨまたはＹであるか、
あるいは固体支持体に対する共有結合であり、そしてここで、Ｒ³およびＲ⁴またはＲ⁴およびＲ⁵は必要に応じて該環と共に５員、６員
、または７員の環を形成し得る、請求項８から１５のいずれか一項に記載の方法
。
【請求項２０】以下の構造：【化８】の環状ペプチドまたはペプチド模倣化合物の固相合成方法であって、ここでＬはリンカー単位であり、該環状ペプチドを固体支持体【化９】に連結し、ここで該方法は：ａ）リンカーＬを介して固体支持体に結合した一般式ＶＩ：【化１０】の直鎖状ペプチドの合成であって、ここでＰは１から１５モノマーの直鎖状ペプチドであり、そしてＡ１は可逆または不可逆のいずれかの、ペプチド骨格上の１つ以上のＮ置換基
であるか、あるいは骨格のシス配座を強制する化学的部分であり、そしてＬは該ペプチドの任意の原子と該固体支持体との間のリンカーである、工程；
およびｂ）以下のいずれか（ｉ）該ペプチドを環化および付随する固体支持体からの切断に供して、一般
式ＶＩＩ、【化１１】の環状ペプチドを得、次いで、Ａ１を選択的に除去または誘導体化して、必要で
あれば次に、該ペプチドの側鎖を脱保護し、そしてＡ１を除去して、一般式Ｉの
所望の環状ペプチドを得る工程；あるいは（ｉｉ）該ペプチドを環化して、一般式ＶＩＩＩ【化１２】の第２固体支持体結合環状ペプチドを得、そして一般式ＶＩＩＩの該化合物をＡ
１の除去および任意のペプチド側鎖保護基の除去、および固体支持体からの切断
に供して、一般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る工程を包含する、方法。
【請求項２１】前記リンカーＬが骨格窒素または前記モノマーの側鎖中の原子
に接続する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】前記環が単環である、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】前記環が二環である、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２４】前記環が２つより多い環を含む、請求項２０または２１に記載
の方法。
【請求項２５】ペプチドの側鎖の脱保護、Ａ１の除去および固体支持体からの
切断が別々に行われる、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】ペプチドの側鎖の脱保護、Ａ１の除去および樹脂からの切断が
同時に行われる、請求項２０から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】環状ペプチドの固相合成の方法であって：ａ）一般式ＩＸ：【化１３】の直鎖状樹脂結合ペプチドを調製する工程であって、ここでＰは１から１５モノマーの直鎖状ペプチドであり；Ａ２は原子の共有結合基であり、環縮小して所望の置換環状ペプチドとなる前
に大きい初期環状ペプチドを形成するための反応性官能基を含み；Ｌは該ペプチドの任意の原子と該固体支持体との間のリンカーである、工程；
およびｂ）一般式ＩＸの該ペプチドを環化および付随する樹脂からの切断に供して、
一般式Ｉ：【化１４】の環状ペプチドを得る工程；ｃ）該環状ペプチドＸを環縮小（これは自発的に生じ得る）させて、一般式Ｘ
Ｉ：【化１５】の第２の環状ペプチドを得る工程、およびｄ）基Ａ２を誘導体化するか、あるいはＡ２を除去して、一般式Ｉの所望の環
状ペプチドを得る工程、を包含する方法。
【請求項２８】一般式ＩＸの直鎖状樹脂結合ペプチドが初期環化および環縮小
に固体支持体上で供されて、一般式ＸＩＩ【化１６】の固体支持体結合環状ペプチドを得、そして（ｉ）固体支持体から切断してＡ２−置換環状ペプチドを得るか、あるいは（ｉｉ）脱保護および固体支持体からの切断により、一般式Ｉの環状ペプチド
を得る、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】Ａ２が固相または溶液中で誘導体化される、請求項２８に記載
の方法。
【請求項３０】ペプチドの側鎖脱保護、Ａ１の除去および樹脂からの切断が別
々に行われる、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】ペプチドの側鎖脱保護、Ａ１の除去および固体支持体からの切
断が同時に行われる、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３２】環状ペプチドの固相合成の方法であって：ａ）一般式ＸＩＩＩ【化１７】の直鎖状固体支持体結合ペプチドの合成工程であって、ここでＰは１から１５モノマーの直鎖状ペプチドであり；Ａ１は可逆または不可逆のいずれかの、ペプチド骨格上の１つ以上のＮ置換基
であるか、あるいは骨格のシス配座を強制する化学的部分であり、そしてＡ２は原子の共有結合基であり、環縮小して所望の置換環状ペプチドとなる前
に大きい初期環状ペプチドを形成するための反応性官能基を含み；Ｌは該ペプチドの任意の原子と該固体支持体との間のリンカーである、工程、
およびｂ）一般式ＸＩＩＩのペプチドを環化および付随する固体支持体からの切断に
供して、一般式ＸＩＶ【化１８】の環状ペプチドを得る工程、ｃ）一般式ＸＩＶの環状ペプチドを環縮小（これは自発的であり得る）に供す
る工程、ｄ）基Ａ１およびＡ２を切断させて、一般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る工
程、を包含する方法。
【請求項３３】環状ペプチドの固相合成の方法であって：ａ）一般式ＸＩＩＩの直鎖状固体支持体結合ペプチドの合成工程；ｂ）直鎖状ペプチドを固体支持体上で環化に供して、一般式ＸＶ【化１９】の環状ペプチドを得る工程、ｃ）該環状ペプチドを環縮小（これは自発的に生じ得る）に供して、一般式Ｘ
ＶＩ【化２０】の環状ペプチドを得る工程、および以下のいずれかｄ）基Ａ１およびＡ２を切断する工程であって、他方、該ペプチドは固体支持
体に結合しており、一般式ＩＩ【化２１】の樹脂結合環状ペプチドを得る工程、あるいはｅ）該環状ペプチドを脱保護および付随する固体支持体からの切断に供して、
一般式Ｉの所望の環状ペプチドを得る工程を包含する、方法。
【請求項３４】前記ペプチドの側鎖脱保護、Ａ１の除去および固体支持体から
の切断が別々に行われる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】前記ペプチドの側鎖脱保護、Ａ１の除去および固体支持体から
の切断が同時に行われる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】１つ以上のモノマーが側鎖保護基を有する、請求項１から３５
のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】シクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｄ−ＰｈｅＧｌｙ］。
【請求項３８】シクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］。
【請求項３９】シクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｄ−ＰｈｅＧｌｙ］および／また
はシクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］を、薬学的に受容可能なキャリア
と共に含む、組成物。
【請求項４０】請求項３７または請求項３８の化合物の医薬中での使用。
【請求項４１】疼痛の処置のための医薬の製造における請求項３７または請求
項３８の化合物の使用。