CN112592382B - 一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用，其中树脂的结构通式如下所示：
本发明通过三次顺序化学修饰(即二硫醇试剂修饰、二(溴甲基)苯修饰和巯基乙胺修饰)2‑氯三苯甲基氯树脂获得该种新树脂。通过Fmoc固相合成和液相N端溴乙酰基与C端硫醇的反应，该树脂可直接用于制备不同链长的和结构的硫醚键键合的头尾环肽。
Description
技术领域
本发明涉及一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用。本发明提供的树脂可用于快速制备含有不同链长和结构的硫醚键键合的头尾环肽，有利于头尾硫醚键键合环肽的硫醚连接臂结构优化。
背景技术
头尾相连的大环肽具有结构刚性，能够抵抗多种蛋白酶的水解，并具有更高的靶标选择性和细胞膜通透性，是现代多肽药物发现中一个极具吸引力的框架结构。在多肽药物的结构改造和功能改进方面，多肽的头尾环化修饰是一种极为常见的结构优化方式。目前，人们发展了多种合成头尾环肽的方法，包括天然化学连接、基于Ser的肽连接、C-C偶联、巯基双烷基化等。由于操作简单和合成成本低，巯基双烷基化策略被人们广泛应用于构建硫醚键键合的环肽，并已经成为组合文库和噬菌体文库中构建环肽的主流策略。
最近研究表明，硫醚键交联臂键长和键角的微小变化能够引起环肽的生物活性的显著变化。为了得到更高活性的、酶学稳定性更强的硫醚键键合的头尾相连大环肽，人们需要通过改变头尾环化连接臂的化学结构和连接臂的长短来进一步优化环肽的结构与功能。但是，对环肽连接臂化学结构和连接臂长短的优化涉及繁复的多步修饰操作，耗时和效率低。不同链长硫醚键键合的头尾环肽合成，前人方法涉及树脂上保护多肽的N端的巯基修饰和溶液中未保护肽头尾的巯基双烷基化。多肽的固相化学修饰和液相再环化过程往往存在操作繁琐和周期长的缺点。为了突破前人方法的困难，本发明中提供了一种新型树脂用于该类型环肽的快速直接合成，将有利于快速优化环肽连接臂的化学结构和连接臂的长短。
发明内容
本发明针对上述现有技术所存在的问题，提供了一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用。本发明提供的树脂结构可以轻松改变头尾环化连接臂的化学结构和连接臂的长短进而进一步优化环肽的结构与功能。
本发明树脂，其结构通式如下所示：
本发明树脂是通过对2-氯三苯甲基氯树脂依次进行二硫醇试剂修饰、二(溴甲基)苯修饰和巯基乙胺修饰后获得的，具体包括如下步骤：
步骤1：二硫醇试剂修饰2-氯三苯甲基氯树脂
80μmol的2-氯三苯甲基氯树脂在含有30％TFA的DCM中处理一段时间后，再与溶解在DCM的二硫醇试剂反应(800μmol，10倍当量)多次，直至树脂颜色由深红色变为浅黄色。
步骤2：树脂上未反应基团的封闭
在DCM洗涤树脂4次后，加入混合溶剂MeOH/DIEA/DCM，常温震荡30分钟。
步骤3：树脂上形成二硫键的还原
在DCM洗涤树脂4次后，加入混合溶剂β-ME/DIEA/NMP，常温震荡30分钟。
步骤4：二(溴甲基)苯修饰树脂
依次用DCM和DMF洗涤树脂4次，加入现配制的混合溶剂二(溴甲基)苯/DIEA/DMF反应混合液，常温震荡1小时。
步骤5：巯基乙胺修饰树脂
在DMF洗涤树脂4次后，加入现配制的混合溶剂巯基乙胺/DIEA/DMF，常温震荡1小时。
步骤6：树脂上未反应基团的封闭
在DMF洗涤树脂4次后，加含20％哌啶的DMF溶液，常温震荡30分钟。
步骤7：树脂上未反应基团的再次封闭
在DMF洗涤树脂4次后，加入混合溶剂MTG/DIEA/NMP，常温震荡30分钟后，用DMF洗涤树脂4次，得到本发明树脂。
步骤1中，所述二硫醇试剂包括1，2-乙二硫醇、1，3-丙二硫醇、1，4-丁二硫醇、1，5-戊二硫醇、1，6-己二硫醇、1，8-辛二硫醇、3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇、1，9-壬二硫醇、1,10-癸二硫醇、1，11-十一二硫醇、1，16-十六二硫醇。
步骤2中，所述混合溶剂MeOH/DIEA/DCM的具体组成为0.4mL MeOH，0.2mL DIEA，2.4mL DCM。
步骤3中，所述混合溶剂β-ME/DIEA/NMP的具体组成为0.745mLβ-ME，1.76mL DIEA和2.5mL NMP。
步骤4中，所述混合溶剂二(溴甲基)苯/DIEA/DMF的具体组成为108mg(5倍当量)的二(溴甲基)苯，28μL(2倍当量)DIEA和2mL的DMF。
步骤5中，所述混合溶剂巯基乙胺/DIEA/DMF的具体组成为26mg(4倍当量)巯基乙醇，28μL(4倍当量)DIEA和2mL的DMF。
步骤7中，所述混合溶剂MTG/DIEA/NMP的具体组成为0.69mL的MTG，1.76mL的DIEA和2.55mL的NMP。
本发明树脂的应用，是将其用于制备含有不同链长和结构的硫醚键键合的头尾环肽，以优化头尾硫醚键键合环肽的硫醚连接臂结构。具体包括如下步骤：
(1)对一个特定序列的多肽(无特殊要求)，利用本发明树脂，通过标准的Fmoc多肽固相合成进行多肽的拼接；
(2)在完成N末端氨基酸的拼接后，用20％哌啶的DMF脱除N末端Fmoc基团，随后在缩合剂的存在下，采用封闭试剂封闭N末端氨基。
所述封闭试剂包括氯乙酸、溴乙酸或碘乙酸。
(3)使用三氟乙酸切割液将多肽从树脂上切割，冰乙醚沉淀，获得粉末状态的多肽；
(4)将步骤(3)得到的多肽粗品溶解在有机溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析与目标肽的纯化分离。
所述有机溶剂为DMF、DMSO、H2O或者为由三者按照任意比例配成的混合溶剂。所述有机溶剂的酸度通过加入一定体积的NH4HCO3(1.0M)调节到pH＝8～9(精密pH试纸测定)。
所述头尾环肽是通过N端溴乙酰基团、氯乙酰基或碘乙酰基与C末端巯基的烷基化反应而制备的，在N末端氨基与C端羧基之间通过如下结构的连接臂实现共价交联：
本发明树脂可以便捷地在多肽的C端引入不同化学结构特征的自由巯基。在Fmoc多肽固相合成中，我们同时在多肽的N端引入溴乙酰基(或者氯乙酰基、碘乙酰基)。粗肽经过多肽N端溴乙酰基团(或者氯乙酰基、碘乙酰基)与C末端巯基的烷基化反应，高效转化为硫醚键键合的头尾相连大环肽。该新型树脂使得环肽的连接臂的结构优化不需要对多肽进行繁复的多步骤操作，具备良好的实际应用前景。
本发明中，通过利用新发明的树脂，多肽N末端氨基与C端的羧基之间被共价交联，形成头尾相连的环状多肽。在本发明中，通过改变二(溴甲基)苯的取代基的立体构型，可以优化头尾环化连接臂的化学结构；通过改变二硫醇试剂的链长，可以优化头尾环化连接臂的链长短。该树脂对环肽连接臂化学结构和连接臂长短的优化，不需要繁复的多步修饰操作，有利于环肽的结构与功能关系研究。
附图说明
图1是cyclo-1的色谱图和质谱图。
图2是cyclo-2的色谱图和质谱图。
图3是cyclo-3的色谱图和质谱图。
图4是cyclo-4的色谱图和质谱图。
图5是cyclo-5的色谱图和质谱图。
图6是cyclo-6的色谱图和质谱图。
图7是cyclo-7的色谱图和质谱图。
图8是cyclo-8的色谱图和质谱图。
图9是cyclo-9的色谱图和质谱图。
图10是cyclo-10的色谱图和质谱图。
图11是cyclo-11的色谱图和质谱图。
图12是cyclo-12的色谱图和质谱图。
图13是cyclo-13的色谱图和质谱图。
图14是cyclo-14的色谱图和质谱图。
图15是cyclo-15的色谱图和质谱图。
具体实施方式
以下通过实施例进一步分析说明本发明的具体技术方案。注意，没有特别说明的地方，该发明中使用的说法和技术术语与该发明所在的领域的科技人员的理解是相同的。此外，其它与本发明内容所述的等同的任意材料对于该发明的实施也是同样地使用。同时，本发明所论述的新型树脂并不局限于合成这里展示的环肽。
本发明所使用的缩写的含义列于下表：
为了便于展示发明的实施细节，我们通过合成一系列硫醚键键合的头尾环化肽为例子，展示本发明的具体内容。
实施例1：通过1,2-乙二硫醇/1,4-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-1。
本实施例中树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,2-乙二硫醇处理：取1,2-乙二硫醇(10eq,76μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，4-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量128mg Fmoc-Leu-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Pro固相组装完成，脱去N端Pro的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计44mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMF/H2O(2：1，pH8.0，用1M NH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-1。
实施例2：通过1,6-己二硫醇/1,4-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-2。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,6-己二硫醇处理：取1,6-己二硫醇(10eq,121μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，4-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量128mg Fmoc-Leu-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Pro固相组装完成，脱去N端Pro的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计20mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMF/H2O(2：1，pH8.0，用1M NH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-2。
实施例3：通过1,8-辛二硫醇/1,4-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-3。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,8-辛二硫醇处理：取1,8-辛二硫醇(10eq,143μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，4-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量128mg Fmoc-Leu-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Pro固相组装完成，脱去N端Pro的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计18mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMF/H2O(2：1，pH8.0，用1M NH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-3。
实施例4：通过1,2-乙二硫醇/1,4-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-4。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,2-乙二硫醇处理：取1,2-乙二硫醇(10eq,76μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，4-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计34mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-4。
实施例5：通过1,2-乙二硫醇/1,3-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-5。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,2-乙二硫醇处理：取1,2-乙二硫醇(10eq,76μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，3-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计34mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-5。实施例6：通过1,2-乙二硫醇/1,2-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-6。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,2-乙二硫醇处理：取1,2-乙二硫醇(10eq,76μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，2-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计34mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-6。实施例7：通过1,6-己二硫醇/1,4-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-7。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,6-己二硫醇处理：取1,6-己二硫醇(10eq,121μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，4-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计28mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-7。实施例8：通过1,6-己二硫醇/1,3-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-8。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,6-己二硫醇处理：取1,6-己二硫醇(10eq,121μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，3-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计28mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-8。实施例9：通过1,6-己二硫醇/1,2-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-9。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,6-己二硫醇处理：取1,6-己二硫醇(10eq,121μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，2-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计28mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-9。实施例10：通过1,8-辛二硫醇/1,4-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-10。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,8-辛二硫醇处理：取1,8-辛二硫醇(10eq,143μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，4-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计18mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-10。实施11：通过1,8-辛二硫醇/1,3-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-11。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,8-辛二硫醇处理：取1,8-辛二硫醇(10eq,143μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，3-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计21mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-11。实施例12：通过1,8-辛二硫醇/1,2-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-12。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)1,8-辛二硫醇处理：取1,8-辛二硫醇(10eq,143μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，2-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计18mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-12。实施例13：通过3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇/1,4-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-13。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇处理：取3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇(10eq,135μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，4-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计32mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-13。实施例14：通过3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇/1,3-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-14。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇处理：取3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇(10eq,135μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，3-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计32mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-14。实施例15：通过3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇/1,2-二溴甲基苯/2-氨基乙硫醇处理2-氯三苯甲基氯树脂，获得新型树脂，并应用于制备硫醚键键合的大环肽cyclo-15。
本实施例树脂及其制备方法及利用其制备头尾环肽的具体合成过程包括如下步骤：
(1)酸处理2-氯三苯甲基氯树脂(载量0.56mmol/g,80μmol)：于143mg树脂中加入配好的3mL的含有30％TFA的DCM中，常温反应5分钟后，排除废液。
(2)3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇处理：取3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇(10eq,135μL)溶于3mL的DCM中，转移至酸处理的树脂中，常温反应10分钟，重复该过程，直至树脂褪色至淡黄色，DCM洗涤树脂4次。
(3)MeOH封闭：向树脂中加入3mL的甲醇封闭试剂(MeOH/DIEA/DCM，0.4mL/0.2mL/2.4mL)，常温反应30分钟,DCM洗涤树脂4次。
(4)硫醇还原：向树脂加硫醇还原剂(0.745mLβ-ME、1.76mL DIEA、2.5mL NMP)常温反应30分钟，树脂依次被DCM洗涤4次、DMF洗涤树脂4次。
(5)二(溴甲基)苯修饰修饰树脂：向树脂加入混合溶液1，2-二(溴甲基)苯/DIEA/DMF(108mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(6)巯基乙胺修饰树脂：向树脂加入混合液巯基乙胺/DIEA/DMF(26mg/28μL/2mL)，常温反应1小时，DMF洗涤树脂4次。
(7)哌啶封闭树脂：向树脂加入3mL 20％哌啶的DMF液，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次。
(8)硫醇封闭树脂：向树脂加入混合液MTG/DIEA/M\NMP(690μL/1.76mL/2.55mL)，常温反应30分钟，DMF洗涤树脂5次，DMF溶胀树脂20分钟。
(9)氨基酸的缩合：称量107mg Fmoc-Gly-OH(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次；
(10)未反应胺基的封闭：向树脂中加入1.5mL的混合溶剂乙酸酐/2,6-二甲基吡啶/DMF(5:6:89)，常温反应2分钟后，用DMF洗涤树脂5次；
(11)Fmoc脱除：向树脂加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，弃去溶液，再向树脂中加入1.5mL 20％哌啶的DMF液，常温反应10分钟，DMF洗涤树脂5次；
(12)氨基酸的固相拼接：重复(9)-(11)的步骤，逐一依次将相应氨基酸进行缩合，直至N端Val固相组装完成，脱去N端Val的Fmoc基团；
(13)N端的溴乙酰化反应：称取32mg溴乙酸(4.5eq)、52mg Oxyma(4.5eq)、56μLDIC(4.5eq)溶解在1.5mL的DMF中，混匀后加入到固相合成管中，金属浴55℃，反应40分钟，用DMF洗涤树脂3次，DCM洗涤树脂3次；
(14)树脂的切割与沉淀：常温干燥树脂5分钟后，将3mL配好的的切割试剂(TFA:苯酚:水:TIPS＝88:5:5:2，v/v)加入合成管中，常温反应2h，收集TFA切割液，用冰乙醚沉淀3次，离心得到粗肽共计32mg。
(15)多肽的头尾环化：称取1mg的线性多肽粗品溶解在0.2mL的DMSO(pH 8.0，用1MNH4HCO3调节)混合溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析(流动相为A:90％水+10％乙腈+0.1％TFA，B:90％乙腈+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为1.0mL/min，方法(2→2→90→90→90B％)，Time/min(0→2→30→35→40)，得到目标环肽cyclo-15。
Claims (7)
1.一种树脂，其特征在于其结构通式如下所示：
2.一种权利要求1所述树脂的制备方法，其特征在于：
通过对2-氯三苯甲基氯树脂依次进行二硫醇试剂修饰、二(溴甲基)苯修饰和巯基乙胺修饰后获得的，包括如下步骤：
步骤1：二硫醇试剂修饰2-氯三苯甲基氯树脂
80μmol的2-氯三苯甲基氯树脂在含有30％TFA的DCM中处理一段时间后，再与溶解在DCM的二硫醇试剂反应多次，直至树脂颜色由深红色变为浅黄色；
步骤2：树脂上未反应基团的封闭
在DCM洗涤树脂4次后，加入混合溶剂MeOH/DIEA/DCM，常温震荡30分钟；
步骤3：树脂上形成二硫键的还原
在DCM洗涤树脂4次后，加入混合溶剂β-ME/DIEA/NMP，常温震荡30分钟；
步骤4：二(溴甲基)苯修饰树脂
依次用DCM和DMF洗涤树脂，加入现配制的混合溶剂二(溴甲基)苯/DIEA/DMF反应混合液，常温震荡1小时；
步骤5：巯基乙胺修饰树脂
用DMF洗涤树脂，然后加入现配制的混合溶剂巯基乙胺/DIEA/DMF，常温震荡1小时；
步骤6：树脂上未反应基团的封闭
用DMF洗涤树脂，加含20％哌啶的DMF溶液，常温震荡30分钟；
步骤7：树脂上未反应基团的再次封闭
用DMF洗涤树脂，加入混合溶剂MTG/DIEA/NMP，常温震荡30分钟后，用DMF洗涤树脂4次，得到目标产物树脂。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
步骤1中，所述二硫醇试剂包括1，2-乙二硫醇、1，3-丙二硫醇、1，4-丁二硫醇、1，5-戊二硫醇、1，6-己二硫醇、1，8-辛二硫醇、3,6-二氧杂-1,8辛烷二硫醇、1，9-壬二硫醇、1,10-癸二硫醇、1，11-十一二硫醇、1，16-十六二硫醇。
4.一种权利要求1所述树脂的应用，其特征在于：
将其用于制备含有不同链长和结构的硫醚键键合的头尾环肽，以优化头尾硫醚键键合环肽的硫醚连接臂结构，包括如下步骤：
(1)对一个特定序列的多肽，利用所述树脂，通过标准的Fmoc多肽固相合成进行多肽的拼接；
(2)在完成N末端氨基酸的拼接后，用20％哌啶的DMF脱除N末端Fmoc基团，随后在缩合剂的存在下，采用封闭试剂封闭N末端氨基；
(3)使用三氟乙酸切割液将多肽从树脂上切割，冰乙醚沉淀，获得粉末状态的多肽；
(4)将步骤(3)得到的多肽粗品溶解在有机溶剂中，常温震荡2小时后，利用反相液相色谱进行分析与目标肽的纯化分离；
所述有机溶剂为DMF和H2O按体积比2:1的比例复配构成，或者为DMSO。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
所述封闭试剂包括氯乙酸、溴乙酸或碘乙酸。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
所述有机溶剂的酸度通过加入NH4HCO3调节到pH＝8～9。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
所述头尾环肽是通过N端溴乙酰基团、氯乙酰基或碘乙酰基与C末端巯基的烷基化反应而制备的，在N末端氨基与C端羧基之间通过如下结构的连接臂实现共价交联：
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