KR20040062273A - Composition comprising the extracts of Longanae arillus, Zizyphi spinosae semen, Polygalae radix and Poria cocos for the enhancement of memory and the prevention and treatment of dementia - Google Patents

Composition comprising the extracts of Longanae arillus, Zizyphi spinosae semen, Polygalae radix and Poria cocos for the enhancement of memory and the prevention and treatment of dementia Download PDF

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KR20040062273A KR1020030000069A KR20030000069A KR20040062273A KR 20040062273 A KR20040062273 A KR 20040062273A KR 1020030000069 A KR1020030000069 A KR 1020030000069A KR 20030000069 A KR20030000069 A KR 20030000069A KR 20040062273 A KR20040062273 A KR 20040062273A
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Abstract

PURPOSE: Provided is a composition for increasing memory and preventing and treating dementia, which composition essentially contains the mixed extract of Euphoria longana, Zizyphus jujuba Miller, Polygalae Radix and Poria cocos. CONSTITUTION: A composition for increasing memory and preventing and treating dementia, essentially contains Euphoria longana, Zizyphus jujuba Miller, Polygalae Radix and Poria cocos. It further contains at least one selected from the group consisting of Angelica gigas Nakai, ginseng radix, Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge, Atractylodes japonica(Koidz) Kitag, Inula Helenium L., licorice roots, ginger and Jujubae Fructus.

Description

용안육, 산조인, 원지 및 백복신의 추출물을 함유한 기억력 증진 및 치매 예방 및 치료용 조성물 {Composition comprising the extracts of Longanae arillus, Zizyphi spinosae semen, Polygalae radix and Poria cocos for the enhancement of memory and the prevention and treatment of dementia}Composition comprising the extracts of Longanae arillus, Zizyphi spinosae semen, Polygalae radix and Poria cocos for the enhancement of memory and the prevention and treatment of dementia}

본 발명은 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 증진을 위한 생약조성물에 관한 것으로, 구체적으로 용안육, 산조인, 원지 및 백복신의 추출물을 유효성분으로 함유하여 기억력을 증진시키고, 기억에 관여하는 뇌세포 증식 효과가 우수한학습 능력 및 기억력 향상, 건망증 또는 치매 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a herbal composition for memory enhancement containing the extract as an active ingredient, specifically, extracts of longan meat, Sanjoin, Wonji and baeksinsin as an active ingredient to enhance memory, brain cell proliferation effect involved in memory The present invention relates to a composition for preventing and treating excellent learning ability and memory improvement, forgetfulness or dementia.

기억이란 경험의 결과나 주위환경으로부터 얻어진 정보를 저장하고 이를 다시 끄집어 내어 회상하는 것을 말한다 (William F Ganong; Ganong's 생리학, 서울, 한우리, p289, pp291-292, 1999). 기억의 과정은 부호화, 강화, 인출의 3단계로 구분하는데 이러한 기억의 과정에는 뇌시경 연결부위의 화학적인 물질의 교류뿐 아니라 단기기억이 장기기억으로 변환되는 과정에서 뇌의 구조적인 변화도 생기는 것으로 알려져 있다 (Belcheva Iet al.;Peptides,21(3), pp407-411, 2000).Memory refers to storing and recalling the results of experiences or information obtained from the environment (William F Ganong; Ganong's Physiology, Seoul, Hanwoori, p289, pp291-292, 1999). The process of memory is divided into three stages: encoding, reinforcement, and withdrawal. In this process, not only the exchange of chemical substances at the cerebral endoscopy, but also the structural change of the brain occurs in the process of converting short-term memory into long-term memory. Known (Belcheva I et al .; Peptides , 21 (3) , pp407-411, 2000).

심리학에서의 학습은 연습이나 경험을 통해 생긴 유기체내의 특정한 변화이며, 기억은 정신활동에 필요한 정보를 저장하였다가 필요에 따라 의식세계로 꺼내어 사용하는 능력을 말하고, 학습에 의한 변화가 오래 지속되는 것을 기억이라 하므로 학습과 기억은 서로 불가분의 관계에 있으며 학습은 기억의 양과 질을 통해서만 그 결과를 측정할 수 있다 (장동환 외; 심리학입문, 서울, 박영사, p214, p267, p272, p313).Learning in psychology is a specific change in the organism that has occurred through practice or experience, and memory refers to the ability to store information needed for mental activity and bring it out into the conscious world as needed. Because it is called memory, learning and memory are inseparable from each other, and learning can be measured only through the quantity and quality of memory (Jang Dong-hwan et al., Psychology Introduction, Seoul, Park Youngsa, p214, p267, p272, p313).

한편, 사회적인 환경이 다변화되어 감에 따라 사람들은 더 많은 자극을 접하게 되고 이러한 자극을 수용하기 위한 신속한 두뇌활동이 요구된다. 특히, 최근 경제성장과 더불어 산업화, 공업화에 따른 환경 파괴와 수질오염, 그리고 인스탄트 식품의 범람으로 우리의 건강상태가 위협을 받고 있으며, 소득증대에 따른 육식 중심의 식생활에 의한 영양의 과잉섭취와 기계문명의 발달에 의한 운동량의 절대부족 등이 비만을 촉진할 뿐만 아니라 이들 비만이 원인이 되어 동맥경화, 고혈압, 관상심장질환, 심근경색, 협심증, 뇌졸중 등의 만성 퇴행성 성인병이 만연하고 있는 실정이다. 또한, 노인들의 알쯔하이머형 (Alzheimer-type) 치매증 환자도 해마다 증가하고 있다. 그 밖에도, 청소년, 특히 수험생들은 장기간 학습 활동을 함으로써 두뇌와 심신의 피로를 느끼게 될 뿐 아니라 두뇌의 건전한 발달에도 심각한 영향을 받고 있다. 따라서, 사회가 복잡해지고 입시 경쟁이 치열해짐에 따라 피로해진 두뇌를 맑게 하여 기억력을 증진시키고 피로 회복을 촉진시킬 수 있는 방법의 개발이 절실히 요구되고 있다. 최근 성장기 학생들의 과중한 학습 부담은 사회적 문제로 대두되고 있는 실정이다.On the other hand, as the social environment is diversified, people are exposed to more stimuli and need more rapid brain activity to accommodate these stimuli. In particular, with the recent economic growth, environmental damage and water pollution caused by industrialization, industrialization, and flooding of instant foods are threatening our health condition. Absolute lack of exercise due to the development of civilization not only promotes obesity, but also causes such obesity, chronic degenerative adult diseases such as arteriosclerosis, hypertension, coronary heart disease, myocardial infarction, angina pectoris, stroke. In addition, the number of Alzheimer-type dementia patients in the elderly is increasing year by year. In addition, adolescents, especially examinees, have long-term learning activities that not only feel the brain and mind and body fatigue, but are also seriously affected by the healthy development of the brain. Therefore, as the society becomes more complex and competition for admission increases, there is an urgent need for the development of a method to clear the tired brain and improve memory and promote fatigue recovery. In recent years, the overburdened learning burden of students has emerged as a social problem.

한의학에서는 건망이라는 증상에 대하여 동의보감을 비롯한 여러 문헌에 다양한 치료 처방이 기록되어 있으며, 이들 처방을 이용한 다양한 치료가 기억력 향상에 도움을 주는 것으로 알려져있다.In oriental medicine, various treatment prescriptions are recorded in various documents, including consent, and the various treatments using the prescriptions are known to help improve memory.

그러나 이러한 처방이 건망의 치료 또는 기억력 향상에 미치는 효과에 대한 동물 모델을 통한 실험이 최근 발표되고 있다 (박찬원 외; 대한한의학회지, 20(4), pp573-583, 2000).However, experiments with animal models on the effects of these regimens on the treatment of memory or improvement of memory have recently been published (Park Chan-Won et al; Korean Journal of Oriental Medicine, 20 (4), pp573-583, 2000).

한편, 본 발명에 사용된 용안육 (Longanae Arillus)은 무화과나무과 (Sapindaceae)의 용안 (Euphoria longan(LOUR.) STEUD.)의 가종피를 말린 것으로, 진정, 건위, 자양작용이 있으며, 불면증을 치료한다.On the other hand, Longanae Arillus used in the present invention is dried dried asters of Euphoria longan (LOUR.) STEUD. Of the fig tree (Sapindaceae), has a calming, dry, nourishing, and insomnia treatment .

산조인 (Zizyphi Spinosae Semen)은 묏대추나무 (Zizyphus jujubaMILL.)의 종자 (種子)로 다량의 지방질, 단백질과 2종의 스테롤을 함유한다. 진정작용 및 진통작용이 있고, 한방에서는 건위, 진정, 최면제로 사용한다.Sanzoin (Zizyphi Spinosae Semen) is a seed of Zizyphus jujuba MILL., Which contains a large amount of fat, protein and two sterols. It has sedation and analgesic action, and is used as a sanitary, soothing and hypnotic in herbal medicine.

원지 (Polygalae Radix)는 원지과 (Polygalaceae)에 속하는 다년생 초본인 원지(Polygala tenuifoliaWILLD.) 뿌리로, 사포닌이 함유되어 있고, 신경안정, 거담, 불면 등을 치료하며, 강장제, 강정제로 사용된다.Polygalae Radix is the root of Polygala tenuifolia WILLD., A perennial herb belonging to the Polygalaceae family.

백복신 (Poria Cocos)은 소나무의 뿌리에 기생하는 균류 덩어리 가운데 소나무 뿌리가 관통하여 자란 것만 골라낸 약재로, 한방에서는 주로 정신을 안정시키고 머리를 맑게하는데 사용되고, 이뇨작용도 있다.Pacococcus (Poria Cocos) is a medicinal herb that only grows through the roots of the fungus parasitic on the roots of pine. It is mainly used in oriental medicine to stabilize the mind and clear the head, and also has a diuretic effect.

대한민국 공개특허 특2002-73237에는 세신 추출물을 함유하는 뇌세포 보호 및 기억력 증진용 조성물을 개시하고 있고, 대한민국 공개특허 특2002-38381는 구기자 추출물을 포함하는 학습능력 및 기억력 향상 생약 조성물에 관해 개시되어 있다. 또한 대한민국 공개특허 특2002-74285에는 숙지황 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 향상 생약조성물에 관하여 개시되어 있다.Korean Patent Laid-Open Publication No. 2002-73237 discloses a composition for protecting brain cells and enhancing memory containing sessin extract, and Korean Patent Laid-Open Publication No. 2002-38381 discloses a learning and memory enhancing herbal composition comprising a wolfberry extract. have. In addition, the Republic of Korea Patent Publication No. 2002-74285 discloses a memory-enhancing herbal composition containing Sukji sulfur extract as an active ingredient.

그러나, 상기 문헌에서 본 발명에 사용된 생약이 기억력증진이나 뇌신경세포의 증식효과를 갖는다고는 개시된 바가 없다.However, it is not disclosed in the above document that the herbal medicine used in the present invention has a memory enhancing or proliferating effect of cranial nerve cells.

본 발명자들은 상기의 생약들을 함유하는 복합생약의 기억력 향상 및 기억에 관여하는 뇌세포 증식 효과를 약리학적으로 관찰하여, 전통적으로 많은 임상자료가 축적되어 있는 생약에 대하여 치매 치료에 가능성이 있는지를 중점적으로 연구하였다.The present inventors have pharmacologically observed the effect of improving the memory and brain cell proliferation involved in memory of the complex herbal containing the above herbal medicines, focusing on whether there is a possibility to treat dementia for herbal medicines, which have accumulated a large amount of clinical data. Was studied.

이에 본 발명자들은 기억력 및 학습능력 향상에 기여할 수 있는 새로운 생약조성물을 개발하여, 이의 효과를 동물 모델을 이용한 행동 실험 및 뇌조직에서의 세포증식 관찰실험을 통하여 그 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors have developed a new herbal composition that can contribute to the improvement of memory and learning ability, and completed the present invention by confirming its effect through behavioral experiment using animal model and observation of cell proliferation in brain tissue. .

본 발명의 목적은 기억력 및 학습능력을 향상시키고, 건망증 등의 기억력 장애를 개선하며, 치매의 예방 및 치료에 효과적인 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 제공하는 것이다.An object of the present invention is to improve the memory and learning ability, to improve memory disorders such as forgetfulness, and to provide a composition containing a herbal extract as an active ingredient effective in the prevention and treatment of dementia.

도 1 은 본 발명의 조성물을 투여한 랫트에서의 수동회피실험의 잠재적 유지를 관찰한 도이고,1 is a diagram observing the potential maintenance of passive avoidance experiments in rats administered the composition of the present invention,

도 2 는 본 발명의 조성물을 투여한 랫트의 시상뇌회에서 BrdU-면역반응을 관찰한 도이다.Figure 2 is a diagram illustrating the BrdU-immune response in the sagittal brain of the rat administered the composition of the present invention.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 뇌세포증식효과를 갖는 용안육 Longanae Arillus), 산조인 (Zizyphi Spinosae Semen), 원지 (Polygalae Radix) 및 백복신 (Poria Cocos)을 필수적으로 포함하는 복합생약의 조추출물을 함유하는 기억력 증진·학습능력 향상 및 치매의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention yonganyuk having a brain cell proliferation effect Longanae Arillus), sanjoin (Z izyphi Spinosae Semen), sheet (Polygalae Radix) and baekboksin (crude extract of the composite herbal essentially comprises a Poria Cocos) Provides a composition for enhancing memory, improving learning ability, and preventing and treating dementia.

또한, 본 발명은 상기 필수적인 복합생약, 즉 용안육, 산조인, 원지 및 백복신에 추가적으로 당귀 (Angelicae Gigantis Radix), 인삼 (Ginseng Radix), 황기 (Astragali Radix), 백출 (Atractylodis Macrocephalae Rhizoma), 목향 (Aucklandiae Radix), 감초 (Glycyrrhizae Radix), 생강 (Zingiberis Rhizoma Recens) 및 대조 (Jujubae Fructus) 등의 생약을 포함할 수 있다.In addition, the present invention, in addition to the essential complexes, yongan meat, sanjoin, base and baeksinsin (Angelicae Gigantis Radix), Ginseng (Ginseng Radix), Astragali Radix, Atractylodis Macrocephalae Rhizoma, Auklandiae Radix ), Licorice (Glycyrrhizae Radix), ginger (Zingiberis Rhizoma Recens) and control (Jujubae Fructus) and the like.

본 발명의 바람직한 조성물로 용안육, 산조인, 원지, 백복신, 당귀, 인삼, 황기, 백출, 목향, 감초, 생강 및 대조를 포함하는 복합생약의 추출물을 함유하는 조성물을 제공한다.A preferred composition of the present invention provides a composition containing an extract of a combination herbal comprising longan meat, Sanjoin, Wonji, Baeksin, Angelica, Ginseng, Astragalus, Baekchul, Mokji, Licorice, Ginger and Control.

상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 등과 같은 극성용매 및 이들의 혼합용매에 가용한 추출물을 의미한다.The extract refers to an extract available in a polar solvent such as water, methanol, ethanol and the like and a mixed solvent thereof.

또한, 본 발명은 상기 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of dementia containing the complex herbal extract as an active ingredient.

본 발명의 기억력 증진·학습능력 향상 및 치매의 예방 및 치료용 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 본 발명의 복합생약 추출물을 0.1 내지 90 중량%로 포함한다.The composition for improving memory, improving learning ability, and preventing and treating dementia of the present invention comprises 0.1 to 90% by weight of the complex herbal extract of the present invention based on the total weight of the composition.

본 발명의 상기 생약으로부터 추출물을 분리하는 방법은 하기와 같다.The method of separating the extract from the herbal medicine of the present invention is as follows.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 복합생약 추출물은, 건조된 생약 무게(㎏)의 약 5배 내지 20배, 바람직하게는 약 10배 내지 15배의 물, 저급 알콜 또는 약 1:0.1 내지 1:10, 바람직하게는 1:0.2 내지 1:5의 혼합비(㎏/ℓ)를 갖는 이들의 혼합용매로 20 내지 120℃, 바람직하게는 50 내지 100℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 2일, 바람직하게는 약 2시간 내지 1일 정도에서 열수 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등의 추출방법에 의하여 추출 후 여과하고 감압농축을 수행하고, 부가적으로 동결건조하여, 본 발명의 물, 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매에 따른 가용 추출물인 복합생약 조추출물을 수득할 수 있다.The herbal extract of the present invention is about 5 to 20 times, preferably about 10 to 15 times water, lower alcohol or about 1: 0.1 to 1:10, preferably about 1 kg of dried herbal weight (kg). These mixed solvents having a mixing ratio (kg / L) of 1: 0.2 to 1: 5 are used at an extraction temperature of 20 to 120 ° C, preferably 50 to 100 ° C for about 1 hour to 2 days, preferably about 2 hours to After the extraction by extraction method such as hot water extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, etc. in about 1 day, filtered and concentrated under reduced pressure, and additionally lyophilized, according to the water, lower alcohol or mixed solvent of the present invention. A crude herbal crude extract that is a soluble extract can be obtained.

본 발명의 복합생약의 주 생약인 용안육, 백복신, 산조인, 원지의 함량은 총 중량에 대하여 전체가 100%를 넘지 않는 범위내에서 각각 5 내지 25 중량%로 함유하고, 용안육:백복신:산조인:원지 조성비는 1-3 : 1-2 : 1-2 : 1-2, 바람직하게는 1:1:1:1의 중량비(g)로 한다. 이 조성비로 이들의 유효성분을 혼합하는 경우에 본 발명의 기억력 향상, 건망증 또는 치매의 예방 및 치료효과를 극대화시킬 수 있다.Contents of the main herbal medicines of the complex herbal medicine of the present invention, yongan meat, baekboksin, sanjoin, and raw paper are contained in 5 to 25% by weight, respectively, within the range of not more than 100% of the total weight, yongan meat: baekxin: sanjoin: original paper The composition ratio is 1-3: 1-2: 1-2: 1, preferably 1: 1: 1: 1 weight ratio (g). When these active ingredients are mixed at this composition ratio, the memory improvement, forgetfulness or dementia of the present invention can be maximized.

본 발명에서는 필수적인 용안육, 백복신, 산조인, 원지 이외에 추가생약인 당귀, 인삼, 황기, 백출, 목향, 감초, 생강, 대조의 함량은 총 중량에 대하여 전체가 100%를 넘지 않는 범위내에서 각각 1 내지 20 중량%로 함유하고, 바람직하게는 당귀 8 내지 12 중량%, 인삼 8 내지 12 중량%, 황기 8 내지 12 중량%, 백출 8 내지 12 중량%, 목향 4 내지 8 중량%, 감초 2 내지 6 중량%, 생강 4 내지 8 중량%, 대조 4 내지 8 중량% 를 함유한다.In the present invention, the essential yongan meat, baekboksin, sanjoin, supplements in addition to the base, donkey, ginseng, Astragalus, Baekchul, Mokyang, licorice, ginger, the control content of the total weight does not exceed 100% each in the range of 1 to 1 20% by weight, preferably 8 to 12% by weight, 8 to 12% by weight, ginseng 8 to 12% by weight, 8 to 12% by weight, 8 to 12% by weight, 4 to 8% by weight, licorice 2 to 6 weight %, Ginger 4-8% by weight, control 4-8% by weight.

본 발명의 바람직한 실시예에는, 용안육, 산조인, 원지, 백복신, 당귀, 인삼, 황기, 백출, 목향, 감초, 생강 및 대조를 함유하는 복합생약 추출물을 제공하며, 더욱 바람직하게는 총 중량에 대하여 전체가 100%를 넘지 않는 범위내에서 용안육 5 내지 25 중량%, 산조인 5 내지 25 중량%, 원지 5 내지 25 중량%, 백복신 5 내지 25 중량%, 당귀 8 내지 12 중량%, 인삼 8 내지 12 중량%, 황기 8 내지 12 중량%, 백출 8 내지 12 중량%, 목향 4 내지 8 중량%, 감초 2 내지 6 중량%, 생강 4 내지 8 중량%, 대조 4 내지 8 중량% 로 혼합된 복합생약 추출물을 제공한다.In a preferred embodiment of the present invention, it provides a complex herbal extract containing longan meat, Sanjoin, Wonji, Baeksin, Angelica, Ginseng, Astragalus, Baekchul, Mokyang, Licorice, Ginger, and control, more preferably the total weight relative to the total weight Is within the range of not more than 100% of the long-term meat 5-25% by weight, 5-25% by weight of acid, 5-25% by weight of raw paper, 5-25% by weight of Baeksin, 8-12% by weight of Angelica ginseng, 8-12% by weight , 8-12% by weight, 8-12% by weight, 4-8% by weight of Mokcho, 2-6% by weight licorice, 4-8% by weight of ginger, 4-8% by weight of mixed extract do.

본 발명의 복합생약 추출물을 흰 쥐에 투여하여 수동회피실험 (passive avoidance test)을 이용한 행동실험 결과, 대조군에 비하여 복합생약 투여군에서 잠재적 유지 (retention latency) 시간이 지연되어 기억력이 유의성 있게 증강되었슴을 확인하였으며, 흰쥐의 뇌의 조직 중 기억에 관여하는 해마(hippocampus) 부위의 증식된 신경세포의 수를 조사한 결과 대조군에 비하여, 본 발명의 복합생약 추출물 투여군에서 유의성있게 증가되었음을 확인하였다.As a result of behavioral experiments using the passive avoidance test by administering the herbal extract of the present invention to the white rats, the potential retention time was delayed in the composite herbal group compared to the control group, indicating that memory was significantly enhanced. As a result of examining the number of proliferated neurons in the hippocampus region involved in memory of the brain tissue of the rat, it was confirmed that significantly increased in the multi-drug extract administration group of the present invention compared to the control group.

본 발명은 상기 추출공정에서 얻어지는 복합생약 추출물들을 포함하는 건망증 또는 치매의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of forgetfulness or dementia comprising the complex herbal extracts obtained in the extraction process.

추가적으로, 본 발명의 복합생약 추출물을 함유하는 기억력 증진 및 치매 예방 및 치료용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 복합생약 추출물을 0.1 내지 90 중량%로 포함한다.Additionally, the pharmaceutical composition for memory enhancement and dementia prevention and treatment containing the complex herbal extract of the present invention comprises 0.1 to 90% by weight of the complex herbal extract based on the total weight of the composition.

본 발명의 복합생약 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.The composition comprising the multi-drug extract of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.

본 발명의 복합생약 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition comprising the complex herbal extract of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin , Calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.

본 발명에 따른 복합생약 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.The composition comprising the complex herbal extract according to the present invention is in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, respectively, according to a conventional method. Can be formulated and used.

본 발명의 복합생약 추출물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 500 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 추출물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The amount of the combined herbal extract of the present invention may vary depending on the age, sex, and weight of the patient, but may be administered once to several times in an amount of 0.1 to 500 mg / kg. In addition, the dosage of the extract can be increased or decreased depending on the route of administration, the degree of disease, sex, weight, age and the like. Therefore, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any aspect.

또한 본 발명의 추출물은 기타 식품의 주, 부원료 및 식품첨가제로서 사용이 가능하다.In addition, the extract of the present invention can be used as a main, secondary ingredient and food additive of other foods.

또한 본 발명은 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함하는 기억력 증진, 학습능력 향상 및 치매 예방을 위한 건강기능식품을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a dietary supplement for memory enhancement, learning ability improvement and dementia prevention, including extracts and food acceptable food supplement additives.

본 발명의 용안육, 산조인, 원지 및 백복신을 포함하는 복합생약의 추출물을 함유한 조성물은 기억력 증진 및 치매 예방 및 치료를 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능식품류 등이 있다.The composition containing the extract of the complex herbal including the long-term meat, sanjoin, base paper and vaccine of the present invention can be used in a variety of drugs, foods and beverages for memory enhancement and prevention and treatment of dementia. Examples of the food to which the present extract can be added include various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, and health functional foods.

본 발명의 추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.Extract itself of the present invention is a drug that can be used with confidence even for long-term administration for the purpose of prevention because there is little toxicity and side effects.

본 발명의 상기 복합생약 추출물은 기억력 증진 및 치매 예방 예방을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다.The complex herbal extract of the present invention may be added to food or beverage for the purpose of memory enhancement and prevention of dementia.

본 발명의 건강기능음료 조성물은 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.The health functional beverage composition of the present invention has no special limitation except for containing the extract as an essential ingredient, and may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, as in general beverages. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The proportion of said natural carbohydrates is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof. , Organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like. The compositions of the present invention may also contain pulp for the production of natural fruit juices and fruit juice beverages and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is generally selected from the range of 0 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1. 복합생약 추출물 제조Example 1. Manufacture of complex herbal extracts

본 발명에 사용된 약재는 원광약업사(서울, 한국)에서 구입하였고, 용안육 (Longanae arillus) 35 내지 40g, 산조인 (Zizyphi spinosae Semen) 35 내지 40g, 원지 (Polygalae Radix) 35 내지 40g, 백복신 (Poria Cocos) 35 내지 40g, 당귀 (Angelicae gigantis Radix) 35 내지 40g, 인삼 (Ginseng Radix) 35 내지 40g, 황기 (Astragali Radix) 35 내지 40g, 백출 (Atractylodis macrocephalae Rhizoma) 35 내지 40g, 목향 (Aucklandiae Radix) 35 내지 40g, 감초 (Glycyrrhizae Radix) 10 내지 15g, 생강 (Zingiberis Rhizoma Recens) 23 내지 27g 및 대조 (Jujubae Fructus) 1 내지 3g 을 10 리터 둥근 플라스크에 넣고 5,000 ㎖의 증류수를 가하고 냉각장치를 연결하여 2시간동안 전탕하였다. 전탕액을 여과지에 여과하고 감압농축기(EYELA Co, Japan)로 농축한 후 동결건조기(EYELA Co, Japan)로 동결건조하여 동결건조물을 얻었다(수율:22%). 위의 과정을 반복하여 전실험과정동안 필요한 시료를 준비하였다.The medicine used in the present invention was purchased from Wonkwang Pharmaceutical Co., Ltd. (Seoul, Korea), 35-40 g of Longanae arillus, 35-40 g of Zizyphi spinosae Semen, 35-40 g of Polygalae Radix, and Poria Cocos ) 35-40 g, Angelicae gigantis Radix 35-40 g, Ginseng Radix 35-40 g, Astragali Radix 35-40 g, Atractylodis macrocephalae Rhizoma 35-40 g, Aucklandiae Radix 35-40 g 40 g, licorice (Glycyrrhizae Radix) 10 to 15 g, ginger (Zingiberis Rhizoma Recens) 23 to 27 g and control (Jujubae Fructus) 1 to 3 g are added to a 10 liter round flask, 5,000 ml of distilled water is added and the chiller is connected for 2 hours. It was plunged. The whole solution was filtered on a filter paper, concentrated with a reduced pressure concentrator (EYELA Co, Japan), and lyophilized with a freeze dryer (EYELA Co, Japan) to obtain a freeze-dried product (yield: 22%). The above procedure was repeated to prepare the necessary samples during the entire experiment.

실시예 2. 실험동물의 준비Example 2 Preparation of Experimental Animals

본 발명에 사용된 동물은 중앙실험동물에서 공급받은 위스타 (Wistar)계의 6주령 된 웅성 흰쥐이며 공급받은 당시의 몸무게는 180 내지 200g이었다. 물과 사료 (Purina Inc., 서울)는 자유롭게 먹도록 하였으며, 온도 18 내지 24℃, 습도 40 내지 60%의 사육실 환경에서 10일간 적응시킨 후 실험하였다. 낮과 밤의 주기는 각각 12시간이었으며 밤시간은 오전 7시부터 오후 7시까지로 하였다. 실험실 환경도 사육실과 동일하게 하였으며 실험이 진행되는 동안 같은 환경이 유지되도록 하였다.The animal used in the present invention is a 6-week-old male rat of the Wistar system supplied from a central laboratory animal and the weight at the time of supply was 180 to 200 g. Water and feed (Purina Inc., Seoul) was free to eat, and experimented after 10 days in a nursery environment with a temperature of 18 to 24 ℃, humidity 40 to 60%. Day and night cycles were 12 hours each and night time was from 7 am to 7 pm. The lab environment was the same as the kennel and the same environment was maintained during the experiment.

이와 같이 10일간 실험실 환경에 적응시킨 실험동물을 대조군과 실험군으로 각각 10마리씩 나누었다.Thus, the experimental animals adapted to the laboratory environment for 10 days were divided into 10 control animals and 10 experimental animals.

물과 사료를 충분히 공급하면서 대조군은 음용수를, 실험군은 상기 실시예 1의 추출물을 2g/10㎖의 농도로 음용수에 녹여서 2주간 1일 1회씩 14회 연속투여(2.0g/kg/day, p.o) 하였다. 행동실험기간 중 유지시험 (Retention test) 전 즉, 학습 1일과 2일에도 위와 동일하게 투여하여 총 16일간 16회 투여하였다.While supplying enough water and feed, the control group was drinking water, and the experimental group dissolved the extract of Example 1 in drinking water at a concentration of 2g / 10ml, and administered 14 times once a day for 2 weeks (2.0g / kg / day, po ). During the behavioral test period, 16 times for a total of 16 days were administered before the retention test, that is, the same day as the first and second day of study.

실시예 3. 추출물 투여에 따른 기억력 변화 관찰Example 3. Observation of memory change by administration of extract

본 발명의 추출물 투여에 따른 기억력 변화를 관찰하기 위한 행동실험으로, 셔틀박스 (shuttle box)를 이용한 수동회피실험 (passive avoidance test)을 시행하였으며, 방법은 다쿤하의 방법 (Da Cunha;Braz. J. Med. Biol. Res.,23, pp301-306, 1990)을 참고하였으며, 하기와 같은 방법으로 3일동안 진행하였다.As a behavioral experiment to observe the memory change according to the administration of the extract of the present invention, a passive avoidance test using a shuttle box (shuttle box) was performed, the method is Da Cunha ( Braz. J. Med. Biol. Res ., 23 , pp301-306, 1990) and proceeded for 3 days in the following manner.

매 실험시작 1시간 전에 실험동물을 행동실험실로 옮기고 안정화시켰으며, 행동실험실의 조명이 꺼진 어두운 상태에서 실험이 진행되었다.One hour before the start of each experiment, the animals were transferred to the behavioral laboratory and stabilized.

(3-1) 행동실험 1 일째 (training trial)(3-1) Training trial day 1

수동회피상자 (passive avoidance box)의 좌측방의 불을 켜고 좌우측방사이의 문을 닫은 채 실험동물을 좌측방에 놓고 10초간 탐색하게 하였다. 좌우측방 사이의 문을 열면 실험동물은 방을 탐색하다가 본능적으로 어두운 우측방으로 이동하는데 이때 좌우측방사이의 문을 닫고 1분간 우측방을 탐색하게 한 후 실험동물을 꺼내어 쥐 사육장(cage)으로 옮겼다. 위의 방법을 반복하여 좌측방에서 우측방으로 들어가는 시간이 20초 이하가 되게 하였다.The light on the left side of the passive avoidance box was turned on and the animals were placed in the left side for 10 seconds with the door between the left and right sides closed. When the door between the left and right sides is opened, the experimental animal instinctively moves to the dark right room, while closing the door between the left and right sides and searching for the right room for 1 minute, the experimental animal is taken out and moved to the cage. . The above method was repeated so that the time from the left room to the right room was less than 20 seconds.

(3-2) 행동실험 2일째 (acquisition trial)(3-2) Acquisition trial

수동회피상자의 좌측방의 불을 켜고 좌우측방 사이의 문을 닫은 채 실험동물을 좌측방에 놓고 10초간 탐색하게 하였다. 좌우측방 사이의 문을 열면 실험동물은 어두운 우측방으로 이동하는데 이때 좌우측방 사이의 문을 닫고 실험동물의 발바닥에 2.0mA의 전기자극을 2초간 가하였다. 전기자극 후에 좌우측방 사이의 문을 열면 실험동물은 바로 좌측방으로 피하는데 이곳에서 30초간 머무르게 한 후 쥐 사육장으로 옮겨 주었다.The left side of the manual evacuation box was turned on and the test animals were placed in the left side and closed for 10 seconds with the doors between the left and right sides closed. When the door between the left and right sides is opened, the test animal moves to the dark right room. The door between the left and right sides is closed and 2.0 mA electric stimulation is applied to the sole of the test animal for 2 seconds. When the door between the left and right sides is opened after the electrical stimulation, the test animal is avoided to the left room, where it stayed for 30 seconds and then moved to the rat breeding ground.

(3-3) 행동실험 3일째 (retention test)(3-3) Day 3 of behavioral test (retention test)

전기자극 24시간 후에 수동회피상자 (passive avoidance box)의 좌측방의 불을 켜고 좌우측방 사이의 문을 닫은 채 실험동물을 좌측방에 놓고 30초간 머무르게 하였다. 좌우측방 사이의 문을 열고 실험동물이 우측방으로 들어가는 시간을 측정하였다. 실험동물의 네발 모두가 우측방으로 들어가는 시간을 측정하였고, 300초를 경과하여도 들어가지 않으면, 300초로 유지시간(retention time)을 기록하였다.After 24 hours of electrical stimulation, the left room light of the passive avoidance box was turned on and the animals were placed in the left room for 30 seconds with the doors between the left and right sides closed. The door between the left and right sides was opened and the time taken for the test animal to enter the right room was measured. All four feet of the test animals were measured to enter the right chamber, and if not entered after 300 seconds, the retention time was recorded as 300 seconds.

본 발명의 추출물이 흰쥐의 학습 및 기억 능력에 미치는 영향을 알아보기 위해 학습 24시간 후 기억 능력 측정을 한 결과는 표 1과 같다.In order to determine the effect of the extract of the present invention on the learning and memory ability of the rats, the results of measuring memory capacity after 24 hours of study are shown in Table 1.

측정 결과 우측방의 전기자극에 대한 공포를 기억함으로써 우측방으로 가기를 주저하는 시간인 잠재적 유지시간(retention latency)은 대조군 평균 48.70 ± 24.86 (평균 ±표준편차, n=10)초에 비해, 본 발명의 추출물 투여군은 평균 191.40 ± 34.58 (평균 ±표준편차, n=10)초로 유의성 있게 지연되었다. (P=0.003, Mann-Whitney U-test)As a result of the measurement, the potential latency, which is the time to hesitate to go to the right room by remembering the fear of electric stimulation in the right room, was compared with the control average of 48.70 ± 24.86 (mean ± standard deviation, n = 10) seconds. Was significantly delayed to 191.40 ± 34.58 (mean ± standard deviation, n = 10) seconds. (P = 0.003, Mann-Whitney U-test)

수동회피반응의 잠재적 유지Potential maintenance of passive avoidance 실험쥐 번호Rat number 대조군Control 추출물 투여군Extract administration group 잠재적 유지 (초)Potential hold (seconds) 1One 88 148148 22 1414 300300 33 2020 300300 44 262262 300300 55 3131 300300 66 9090 2020 77 1717 181181 88 1717 2424 99 1414 180180 1010 1414 161161 평균 ±표준편차(초)Mean ± Standard Deviation (sec) 48.70±24.8648.70 ± 24.86 191.40±34.58** 191.40 ± 34.58 ** *대조수치와의 유의한 편차(*:p<0.05 and **:p<0.01)* Significant deviation from control (*: p <0.05 and **: p <0.01)

실시예 4. 추출물 투여에 따른 뇌조직세포 변화 관찰Example 4. Observation of changes in brain tissue cells following administration of extract

본 발명의 추출물이 흰쥐의 기억관여 뇌조직인 해마 (hippocampus) 부위의 세포 증식 (cell proliferation)에 미치는 영향을 알아보기 위해 BrdU를 이용한 면역조직화학 방법 (Immunohistochemical method)을 사용하여 해마의 시상뇌회 (dentate gyrus) 중 과립층 (granule layer) 부위에서 증식된 세포의 개수를 측정하였다. 방법은 박 등의 방법(Chan Parket al.; Neuroscience Letters, 309, pp9-12, 2001)을 참고하였다.In order to investigate the effect of the extract of the present invention on cell proliferation of hippocampus, the memory-associated brain tissue of rats, dentate of hippocampus was obtained using immunohistochemical method using BrdU. The number of cells proliferated at the granule layer in gyrus was measured. See Park et al. , Neuroscience Letters, 309 , pp 9-12, 2001.

(4-1) BrdU 주입(4-1) BrdU injection

상기 유지시험 (retention test) 결과를 토대로, 대조군에서는 잠재적 유지 (retention latency)가 가장 빠른 동물 2마리와 가장 늦은 동물 1마리를 배제시키고 실험군에서는 잠재적 유지 시간(retention latency)이 가장 빠른 동물 1마리와 가장 늦은 동물 2마리를 배제시켜서, 각 군당 8마리씩 선택하여 BrdU (Sigma Chemical ㏇, U.S.A.)를 투여하였다. BrdU를 생리식염수 (saline)에 녹인 용액을 유지시험 (retention test)이 끝난 날의 저녁과 다음날 오전 실험동물의 심장관류 2시간 전에 2회 복강내 투여(50mg/kg, i.p)하였다.Based on the results of the retention test, the control group excludes the two animals with the fastest retention latency and the one with the latest one. In the experimental group, the animals with the earliest retention latency are the same. Two of the most recent animals were excluded and 8 animals of each group were selected and administered BrdU (Sigma Chemical ㏇, USA). The solution of BrdU dissolved in saline was administered intraperitoneally (50 mg / kg, i.p) 2 hours before the perfusion of the animals in the evening and the morning of the day after the retention test.

(4-2) 조직 준비 (Tissue preparation)(4-2) Tissue preparation

실험동물을 펜토바비탈 소디움 (pentobarbital sodium)으로 마취 (50mg/kg, i.p)시키고, 4%의 파라포름알데히드 (paraformaldehyde, 0.1M 인산완충액에 용해)로 심장관류시켰다. 뇌를 적출하여 4% 파라포름알데히드로 하룻밤 후고정 (postfixation)시켰다. 30% 수크로스(0.05M PBS에 용해)로 5일간 이동시켰다. 뇌조직을 40μm 두께로 관상 절단 (coronal section)하고 30% 에틸렌 글리콜 (ethylene glycol), 30% 글리세린 (glycerin), 0.05M 인산완충액로 된 보존액에 보관시켰다.Experimental animals were anesthetized with pentobarbital sodium (50 mg / kg, i.p) and perfused with 4% paraformaldehyde (dissolved in 0.1 M phosphate buffer). The brain was extracted and postfixed overnight with 4% paraformaldehyde. Transfer was made with 30% sucrose (dissolved in 0.05M PBS) for 5 days. Brain tissue was coronally sectioned (40 μm thick) and stored in a preservation solution of 30% ethylene glycol, 30% glycerin, and 0.05 M phosphate buffer.

(4-3) 면역조직화학적 탐색 (Immunocytochemical detection)(4-3) Immunocytochemical detection

보관 중인 조직절편 중 각 동물당 브레그마 (Bregma) -2.56mm에서 4.16mm에 해당되는 부위의 조직절편을 3에서 4개씩 골라 면역조직화학적 방법으로 탐색하였다. BrdU-라벨된 핵을 면역세포화학적 탐색을 하려면 DNA를 변성 (denaturation)시켜야한다. 항-BrdU 일차 항체 (anti-BrdU primary antibody)와 반응시키기 전에 free-floating 뇌조직절편 (brain section)을 65℃에서 2시간동안 50% 포름아마이드(formamide)-2×SSC로 전처리 한 후 37℃에서 30분간 2N HCl에서 처리하였다. 그 다음에 조직을 25℃에서 10분간 0.1M 붕산 (pH 8.5)에서 씻어내었다. 0.05M PBS로 매회 5분씩 3회 세척하였다. 조직을 25℃에서 하룻밤동안 일차항체 (primary antibody, 1:1000 희석, Roche Diagnostics사, Mannheim, Germany)와 반응시켰다. 이 때 일차항체는 0.3% 트리톤(Triton) X-100, 0.5 ㎎/㎖ 우혈청알부민 (bovine serum albumin), 1.5% 정상 염소 혈청 (normal goat serum)을 함유한 인산완충액으로 희석시켰다. 조직을 90분간 상온에서 말 항-마우스 이차항체 (horse anti-mouse secondary antibody, 1:100 희석, Vector사, Burlingame, CA, USA)와 반응시킨 후 1시간 동안 상온에서 아비딘-비오틴-퍼록시다제 복합체 (avidin-biotin-peroxidase complex, 1:100 dilution; Vector사, Burlingame, CA, USA)와 반응시켰다. 조직을 0.02% 3,3'-디아미노벤지딘 테트라히드로클로라이드 (3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride), 0.01% 과산화수소, 0.04% 염화니켈(NiCl2)과 3분간 반응시켰다. 매 반응마다 조직을 매회 5분간 3회씩 PBS로 세척하였다. 조직을 젤라틴 코팅된 슬라이드 (gelatin coated slide)에 마운트(mount)하여 충분히 말리고 크레질 바이올렛 (cresyl violet)으로 대조염색 (counterstaining)한 후, 폴리마운트 (polymount)로 마운트하였다. 슬라이드가 마른 후 광학현미경으로 100배의 배율에서 해마의 치상 뇌회 (dentate gyrus) 위치를 찾은 후 400배의 배율에서 과립세포층 (granule cell layer) 부위에서 BrdU로 염색된 세포의 수를 세었다. 염색하는 중에 손상된 조직은 결과계산에서 제외하였다.Among the tissue sections in storage, three to four tissue sections of Bregma -2.56 mm to 4.16 mm per animal were selected and examined by immunohistochemical method. Immunohistochemical detection of BrdU-labeled nuclei requires DNA denaturation. Before reacting with anti-BrdU primary antibody, free-floating brain sections were pretreated with 50% formamide-2 × SSC at 65 ° C. for 2 hours and then 37 ° C. Treated in 2N HCl for 30 min. The tissues were then washed in 0.1M boric acid (pH 8.5) at 25 ° C. for 10 minutes. Washed three times each 5 minutes with 0.05M PBS. The tissue was reacted with primary antibody (primary antibody, 1: 1000 dilution, Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) overnight at 25 ° C. The primary antibody was diluted with phosphate buffer containing 0.3% Triton X-100, 0.5 mg / mL bovine serum albumin and 1.5% normal goat serum. The tissue was reacted with a horse anti-mouse secondary antibody (1: 100 dilution, Vector, Burlingame, Calif., USA) for 90 minutes at room temperature, followed by avidin-biotin-peroxidase at room temperature for 1 hour. It was reacted with a complex (avidin-biotin-peroxidase complex, 1: 100 dilution; Vector, Burlingame, CA, USA). The tissues were reacted with 0.02% 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride, 0.01% hydrogen peroxide, 0.04% nickel chloride (NiCl 2 ) for 3 minutes. Tissues were washed with PBS three times for five minutes each time for each reaction. Tissues were mounted on gelatin coated slides (mounted), dried sufficiently, counterstained with cresyl violet, and then mounted with polymount. After the slide was dried, the position of the dentate gyrus of the hippocampus was found at 100 times magnification by optical microscope, and the number of BrdU stained cells was counted at the granule cell layer at 400 times magnification. Tissues damaged during staining were excluded from the calculation.

(4-5) 통계처리(4-5) Statistical Processing

행동실험의 결과 데이타는 평균 ±표준편차로 표시하였고 유의성 평가는 SPSS 프로그램 (SPSS 11.0 for Window, SPSS, Inc.)를 이용하여 만-휘트니 U-테스트 (Mann-Whitney U-test)를 실시하였다.The results of the behavioral experiments were expressed as mean ± standard deviation, and the significance was assessed by the Mann-Whitney U-test using the SPSS program (SPSS 11.0 for Window, SPSS, Inc.).

측정 결과, 표 2에서 보는 바와 같이 증식된 세포의 개수는 대조군 평균 10.24 ±1.11 (평균 ±표준편차, n=25)개에 비해 본 발명의 추출물 투여군은 평균 21.04 ±1.70 (평균 ±표준편차, n=25)개로 유의성있게 증가되었다. (P=0.000, student t-test)As a result, as shown in Table 2, the number of proliferated cells was 21.04 ± 1.70 (mean ± standard deviation, n) compared to the control average of 10.24 ± 1.11 (mean ± standard deviation, n = 25). = 25), significantly increased. (P = 0.000, student t-test)

쥐의 치상뇌회 (rat dentate gyrus)에 대한 추출물 투여 효과Effect of Extract Administration on Rat Dentate Gyrus in Rats 뇌조직절편 번호Brain tissue section number 대조군Control 추출물 투여군Extract administration group BrdU-면역반응세포 수BrdU-Immune Response Cell Number 1One 22 1212 22 22 1313 33 33 1414 44 33 1414 55 44 1414 66 66 1515 77 66 1515 88 66 1616 99 99 1717 1010 99 1717 1111 99 1717 1212 1010 1717 1313 1010 1818 1414 1111 1919 1515 1111 1919 1616 1111 2020 1717 1212 2020 1818 1212 2121 1919 1313 2323 2020 1313 2727 2121 1717 2828 2222 1717 3131 2323 1919 3535 2424 2020 4141 2525 2121 4343 평균 ±표준편차(초)Mean ± Standard Deviation (sec) 10.24±1.1110.24 ± 1.11 21.04±1.70*** 21.04 ± 1.70 *** *대조수치와의 유의한 편차(*:p<0.05, **:p<0.01 and ***:p<0.001)* Significant deviation from control (*: p <0.05, **: p <0.01 and ***: p <0.001)

실험예 5. 급성독성 시험Experimental Example 5. Acute Toxicity Test

마우스(20±5 g, 중앙실험동물)와 래트(235±10 g, 중앙실험동물)를 사용하여 추출물의 급성독성 시험을 실시하였다. ICR계 마우스와 스프라그-도올리 래트를 각각 10마리씩 4군으로 나누어 본 발명의 추출물을 각각 250, 500 및 1000 ㎎/㎏의 용량으로 경구 투여한 후 2주간 독성여부를 관찰한 결과 3군 모두에서 사망한 예가 한 마리도 없었고 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다.Acute toxicity testing of the extracts was performed using mice (20 ± 5 g, central laboratory animals) and rats (235 ± 10 g, central laboratory animals). ICR-based mice and Sprague-Dawley rats were divided into four groups of 10 rats each. Oral administration of the extracts of the present invention at doses of 250, 500, and 1000 mg / kg, respectively, was observed for 2 weeks. There were no cases of death in the group, and no symptoms were found.

급성독성 시험 결과 물 추출물의 경우 LD50이 1000 ㎎/㎏ 이상이었다. 또한 그 투여 가능 용량인 2000 ㎎/㎏에서 사망 예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없었다. 따라서 추출물의 경우 안전한 약물임을 알 수 있었다.The acute toxicity test showed that the LD 50 was more than 1000 mg / kg for water extracts. In addition, no mortality was observed at the dose of 2000 mg / kg, and no significant abnormality was found in weight gain and feed intake. Therefore, the extract was found to be a safe drug.

하기에 상기 조성물의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Examples of the formulation of the composition are described below, but are not intended to limit the present invention but to explain in detail only.

제제예 1.주사제제의 제조 Formulation Example 1 Preparation of Injection

실시예 1 건조 추출물 .............................. 100 ㎎Example 1 Dry Extract ............... 100 mg

소디움 메타비설파이트 ............................. 3.0 ㎎Sodium metabisulfite ......................................... 3.0 mg

메틸파라벤 ....................................... 0.8 ㎎Methylparaben ...... 0.8 mg

프로필파라벤 ...................................... 0.1 ㎎Propylparaben ...................................... 0.1 mg

주사용 멸균증류수 ................................ 적 량Sterile Distilled Water for Injection ...

상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 2㎖로 한 후, 2㎖ 용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조하였다.The above ingredients were mixed and adjusted to 2 ml by a conventional method, and then filled into 2 ml ampoules and sterilized to prepare an injection.

제제예 2.정제의 제조 Formulation Example 2 Preparation of Tablet

실시예 1 건조 추출물............................... 200 ㎎Example 1 Dry Extract ............... 200 mg

유당 .............................................. 100 ㎎Lactose 100 mg

전분............................................... 100 ㎎Starch ......................................... 100 mg

스테아린산 마그네슘 ............................... 적 량Magnesium Stearate ...............

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.The tablets were prepared by mixing the above components and tableting according to a conventional method for producing tablets.

제제예 3.캡슐제의 제조 Formulation Example 3 Preparation of Capsule

실시예 1 건조 추출물 ............................ 100 ㎎Example 1 Dry Extract ............... 100 mg

유당 ............................................ 50 ㎎Lactose ...... 50 mg

전분 ............................................ 50 ㎎Starch ............................ 50 mg

탈크 ............................................ 2 ㎎Talc ........................................ 2 mg

스테아린산 마그네슘 ............................ 적 량Magnesium Stearate ...............

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.The capsules were prepared by mixing the above components and filling the gelatin capsules according to a conventional method for preparing capsules.

제제예 4.액제의 제조 Formulation Example 4 Preparation of Liquid

실시예 1 건조 추출물 ........................... 1000 ㎎Example 1 Dry Extract ..................... 1000 mg

설탕 ........................................... 20 gSugar ........................... 20 g

이성화당 ....................................... 20 gIsomerized sugar ......................................... 20 g

레몬향 ......................................... 적량Lemon scent .........................

정제수를 가하여 전체 100 ㎖으로 맞추었다.Purified water was added to adjust the total volume to 100 ml.

상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100 ㎖ 의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액제를 제조하였다.The above-mentioned components were mixed according to a conventional method for preparing a liquid solution, filled into a 100 ml brown bottle, and sterilized to prepare a liquid solution.

또한 하기와 같은 방법으로 건강기능식품 및 건강기능음료를 제조하였다.In addition, health functional foods and health functional drinks were prepared in the following manner.

제제예 5. 건강기능식품의 제조Formulation Example 5 Preparation of Health Functional Food

실시예 1 건조분말 ......................... 1000 ㎎Example 1 Dry Powder ......................................... 1000 mg

비타민 혼합물 .............................. 20 gVitamin Blend ............... 20 g

비타민 A 아세테이트......................... 70 ㎍Vitamin A Acetate ............... 70 μg

비타민 E ................................... 1 ㎎Vitamin E ......................... 1 mg

비타민 B1 .................................. 0.13 ㎎Vitamin B1 ..................................... 0.13 mg

비타민 B2 .................................. 0.15 ㎎Vitamin B2 ..................... 0.15 mg

비타민 B6 .................................. 0.5 ㎎Vitamin B6 ......................................... 0.5 mg

비타민 B12 ................................. 0.2 ㎍Vitamin B12 ................................. 0.2 μg

비타민 C ................................... 10 ㎎Vitamin C ......................................... 10 mg

비오틴 ..................................... 10 ㎍Biotin .......................... 10 μg

니코틴산아미드 ............................. 1.7 ㎎Nicotinic Acid Amide ......................................... 1.7 mg

엽산 ....................................... 50 ㎍Folic acid ......................................... 50 μg

판토텐산 칼슘 ............................... 0.5 ㎎Calcium Pantothenate ......................................... 0.5 mg

무기질 혼합물 ............................... 적량Mineral mixture ...............

황산제1철 ................................... 1.75 ㎎Ferrous Sulfate ............... 1.75 mg

산화아연 .................................... 0.82㎎Zinc Oxide ......................................... 0.82mg

탄산마그네슘 ................................ 25.3 ㎎Magnesium Carbonate ......................................... 25.3 mg

제1인산칼륨 .................................. 15 ㎎Potassium monophosphate ......................................... 15 mg

제2인산칼슘 .................................. 55 ㎎Dicalcium Phosphate ............... 55 mg

구연산칼륨 ................................... 90 ㎎Potassium Citrate ......................................... 90 mg

탄산칼슘 ..................................... 100 ㎎Calcium Carbonate ... 100 mg

염화마그네슘 ................................. 24.8 ㎎Magnesium Chloride ................................. 24.8 mg

상기 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.Although the composition ratio of the vitamin and mineral mixture is a composition suitable for a relatively healthy food in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health functional food production method. The granules may be prepared and used for preparing the nutraceutical composition according to a conventional method.

제제예 6. 건강기능음료의 제조Formulation Example 6 Preparation of Health Functional Drink

실시예 1 건조분말 .......................... 1000 ㎎Example 1 Dry Powder .......................... 1000 mg

구연산...................................... 100 ㎎Citric Acid ..................... 100 mg

올리고당 ................................... 100 gOligosaccharide ......................................... 100 g

매실농축액 ................................. 2 gPlum concentrate ..................... 2 g

타우린 ..................................... 1 gTaurine ..................................... 1 g

정제수를 가하여 전체 ....................... 900㎖Purified water is added.

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강기능음료 조성물 제조에 사용한다.After mixing the above components in accordance with a conventional healthy beverage production method, and stirred and heated at 85 ℃ for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and then refrigerated and stored in the present invention It is used to prepare a health functional beverage composition.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Although the composition ratio is a composition suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and use purpose.

상기와 같이, 본 발명의 복합생약 추출물은 수동회피실험을 통한 흰 쥐의 행동 실험의 결과로 기억능력증강에 효과가 있음을 확인하였고, 흰 쥐 뇌의 해마부위의 신경 세포 생성 촉진을 확인함으로써, 본 발명의 추출물은 학습능력개선 및 기억력 증강, 치매의 예방 및 치료에 효과적인 조성물 또는 건강기능식품으로 사용될 수 있다.As described above, the composite herbal extract of the present invention was confirmed to have an effect on enhancing memory capacity as a result of behavioral experiments of white rats through passive avoidance experiments, and by confirming the promotion of neural cell production in the hippocampus of the white rat brain, Extract of the present invention can be used as a composition or health functional food effective for improving learning ability and memory enhancement, prevention and treatment of dementia.

Claims (10)

용안육 (Longanae Arillus), 산조인 (Zizyphi Spinosae Semen), 원지 (Polygalae Radix) 및 백복신 (Poria Cocos)을 필수적으로 포함하는 복합생약 추출물을 함유하는 기억력 증진,학습능력 향상 및 치매의 예방 및 치료용 조성물.A composition for enhancing memory, improving learning ability, and preventing and treating dementia, including a complex herbal extract comprising essentially Longanae Arillus, Zizyphi Spinosae Semen, Polygalae Radix, and Poria Cocos. 제 1항 있어서, 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 등의 저급 알콜 및 이들의 혼합용매로부터 선택된 하나 이상의 극성용매로 추출된 조성물.The composition of claim 1, wherein the extract is extracted with one or more polar solvents selected from lower alcohols such as water, methanol, ethanol, and mixed solvents thereof. 제 1항에 있어서, 상기 필수 생약 이외에 추가적으로 당귀 (Angelicae Gigantis Radix), 인삼 (Ginseng Radix), 황기 (Astragali Radix), 백출 (Atractylodis Macrocephalae Rhizoma), 목향 (Aucklandiae Radix), 감초 (Glycyrrhizae Radix), 생강 (Zingiberis Rhizoma Recens) 및 대조 (Jujubae Fructus)로 이루어진 군에서 선택된 하나이상의 생약을 포함하는 조성물.According to claim 1, in addition to the essential herbal medicine Angelicae Gigantis Radix, Ginseng Radix, Astragali Radix, Atractylodis Macrocephalae Rhizoma, Aucklandiae Radix, Glycyrrhizae Radix, Ginger (Zingiberis Rhizoma Recens) and control (Jujubae Fructus) composition comprising one or more herbs selected from the group consisting of. 제 1항에 있어서, 용안육, 산조인, 원지 및 백복신이 총 중량에 대하여 각각 5 내지 25 중량%로 혼합된 조성물.The composition of claim 1, wherein the longan meat, sanjoin, base paper, and baekxin are mixed at 5 to 25% by weight, respectively, based on the total weight. 제 4항에 있어서, 용안육: 산조인: 원지 : 백복신의 조성비가 1: 1: 1: 1인 조성물.The composition according to claim 4, wherein the composition ratio of the long-term meat: sanjoin: base paper: baekxin is 1: 1: 1: 1. 제 1항에 있어서, 복합생약이 용안육, 산조인, 원지, 백복신, 당귀, 인삼, 황기, 백출, 목향, 감초, 생강 및 대조를 포함하는 것인 조성물.The composition according to claim 1, wherein the compound herbal compound includes longan meat, sanjoin, raw paper, white baeksin, donkey, ginseng, coriander, baekryeok, mokyang, licorice, ginger and a control. 제 6항에 있어서, 복합생약이 총 중량에 대하여 용안육 5 내지 25 중량%, 산조인 5 내지 25 중량%, 원지 5 내지 25 중량%, 백복신 5 내지 25 중량%, 당귀 8 내지 12 중량%, 인삼 8 내지 12 중량%, 황기 8 내지 12 중량%, 백출 8 내지 12 중량%, 목향 4 내지 8 중량%, 감초 2 내지 6 중량%, 생강 4 내지 8 중량% 및 대조 4 내지 8 중량%로 혼합된 조성물.The compound according to claim 6, wherein the combined herbal is 5 to 25% by weight, 5 to 25% by weight, 5 to 25% by weight, 5 to 25% by weight of vaccine, 8 to 12% by weight, Angelica 8 to 12% by weight, ginseng 8, based on the total weight. To 12% by weight, 8 to 12% by weight, 8 to 12% by weight, 8 to 12% by weight, 4 to 8% by weight, licorice 2 to 6% by weight, 4 to 8% by weight and 4 to 8% by weight of ginger. . 기억력 증진, 학습능력 향상 및 치매 예방 효과를 나타내는 상기 용안육, 산조인, 원지 및 백복신 추출물을 필수적으로 포함하는 복합생약 추출물과 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품.A health functional food comprising a compound herbal extract and a food-acceptable food supplement additive which essentially include the yongan meat, sanjoin, raw paper and baekxin extracts exhibiting memory enhancement, learning ability improvement and dementia prevention effect. 제 8항에 있어서, 복합생약이 용안육, 산조인, 원지, 백복신, 당귀, 인삼, 황기, 백출, 목향, 감초, 생강 및 대조를 포함하는 것인 건강기능식품.10. The health functional food according to claim 8, wherein the complex herbal medicine includes longan meat, sanjoin, raw paper, white baeksin, donkey, ginseng, astragalus, baekchul, mokyang, licorice, ginger and a control. 제 8항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 건강기능식품.The dietary supplement of claim 8 in the form of a powder, granule, tablet, capsule or beverage.
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