KR20020074069A - 액체 측정 장치 및 그 사용 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽을 이용하여 측정 또는 운반하고자 하는 액체의 부피를 조절하는 분석법을 수행하기 위한 액체 측정 장치에 관한 것이다. 이 막은 소정부피의 액체를 측정할 필요가 있는 경우에 모두 사용가능하다.

Description

액체 측정 장치 및 그 사용 방법{Liquid Measuring Device and Method of Using}
발명 분야는 소정부피의 액체 샘플을 측정 및/또는 이동시키는 장치 및 이 장치의 사용방법에 관한 것이다.
o-프탈알데히드(OPA) 또는 글루타르알데히드 농도를 측정하는 일반적인 방법은 주로 크로마토그래피 측정법(크로마토그래피, HPLC 분석) 또는 비-크로마토그래피 측정법으로 분류될 수 있는 기구 측정법이다. HPLC 분석에 있어서, OPA 또는 글루타르알데히드는 유도체 방법 또는 비-유도체 방법 양 방법에 의해 측정된다. 가장 흔한 유도체 방법은 OPA 또는 글루타르알데히드를 2,4-디니트로페닐히드라진과 반응시켜 2,4-디니트로페닐히드라존으로 전환하는 방법이다. OPA 또는 글루타르알데히드 소독약과 같은 고농도의 OPA 또는 글루타르알데히드를 측정함에 있어서는 먼저 유도체로 만들지 않고도 직접 OPA 또는 글루타르알데히드를 측정할 수 있다. OPA 또는 글루타르알데히드는 GC 분석으로 쉽게 분석할 수 도 있다. 비-크로마토그래피 분석법에 있어서 OPA 또는 글루타르알데히드는 분광광도계법으로 직접 측정할 수 있다. 그러나, 이 방법의 단점의 하나는 사용한 특정 파장에서 간섭이 전혀 없어야만 한다는 것이다. 예를 들어, OPA 또는 글루타르알데히드는 공기에 의해 서서히 산화될 수 있는데 생성된 카르복실산이 이러한 분석을 방해할 수도 있다.
세가지 기구 측정법 모두 샘플 제조와 기구 사용을 포함한다. 이 방법들 모두 시간을 요하고 너무 고가이며 병원의 최종 사용자들에게는 너무 복잡하다. 따라서, 알버트 브라운과 3M은 통과/실패 시험을 위한 간단한 스트립 공정을 개발하였다. 이 시험에서는 상기 스트립을 OPA 또는 글루타르알데히드 용액에 소정의 시간 동안 담갔다. 소정의 시간이 경과한 후, 스트립 색깔을 기준색과 비교하였다. 이들의 스트립 화학 원리는 공개되지 않았다. 이 방법의 문제점은 정확성과 일관성이다. 스트립 방법은 다음과 같은 문제점이 있다. 즉, (1)적합한 용액들("기준점(Point of interest, POI)" 보다 높은 OPA 또는 글루타르알데히드)이 이런저런 이유로 종종 시험에 실패한다. (2)담금 시간과 방치 시간을 주의깊게 관리해야 한다. (3)스트립을 담글때 움직이면 OPA 또는 글루타르알데히드 용액에 대한 화학 반응물질의 손실을 가져오고 이는 오류 측정을 야기한다. (4)개별 시험자들은 서로 다른 색 인지습관을 갖고 있어서 종종 최종 색깔에 대해 서로 다른 의견을 갖는다. (5)최종 색깔은 많은 인자에 좌우되고 시간에 특히 예민하다.
본 발명은 소정부피의 액체 샘플을 측정 및/또는 이동시키는 장치를 제공하고, 본 발명은 상기한 문제점을 갖지 않는 다른 방법을 제공한다. 물론 스트립 접근 방법에서 화학 원리가 사용될 수 있긴 하나, 바람직한 양태에 있어서는 용액의 색변화를 위해 사용된다.
본 발명을 예시할 뿐 그 범위를 제한하지는 않는 본 발명의 바람직한 양태에 관한 도면을 참조하여 본 발명의 이러 저러한 특징들을 기술하고자 한다.
도1은, 전술한 분석의 기초 원리를 보여준다. 제1반응은, 알데히드와 화합물 X가 반응하여 제1색을 갖는 반응을 보여준다. 바람직하기로는, 제1색은 무색이다. 제2반응은 알데히드와 Y가 반응하여 제2색을 갖는 화합물을 형성하는 반응이다. 바람직하기로는, 제2반응은 제1반응보다 느리다. 알데히드 농도가 기준점(POI) 이하이면 화합물 X만이 반응할 것이고 그 결과 생성된 용액은 도1의 바닥쪽 반에 나타낸 바와 같이 제1색이 될 것이다. 만일 알데히드가 기준점(POI)과 동일하거나 그 이상의 농도를 가지면 제2색을 갖거나 제1색과 제2색이 혼합된 용액이 생성될 것이다.
도2는, 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽을 갖는 피펫과 두 개의 주사기를 보여준다.
도3은, 가스 또는 증기 투과성이고 액체 비투과성인 방벽이 주사기 또는 피펫에 커플링되는 것을 보여준다. 도3B는, 피펫 또는 주사기 상단에 있는 삽입물(4)이 어떻게 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽을 피펫 또는 주사기에 부착시키는지를 보여준다. 도3C는, 삽입물을 제자리에 고정시키는 홀더(5)를 보여준다. 도3D는 삽입물과 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽 커플링을 보여준다.
도4는, 도3C의 확대도인데 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽(1), 삽입물(4) 및 홀더(5)를 보여준다.
도5는, 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽의 위치가 스크류에 의해 조정되는 본 발명의 한 양태를 보여준다.
도6A와 6B는, 모든 화학물질을 하나의 챔버내에 갖는 액체 운반 장치의 양태를 보여준다. 도6C는, 두개의 챔버를 갖는 액체 운반 장치 양태를 보여준다. 시험 샘플을 도1에 있는 화합물 X와 같은 제1화합물과 함께 제1챔버로 넣을 수 있다. 그 다음, 샘플을 일방향형 밸브 또는 수동식 온/오프 밸브(8)를 통해 제2챔버로 이동시켜 시험 샘플을 도1에 있는 화합물 Y와 같은 제2화합물과 반응시킨다.
본 발명은, 원단부와 근단부를 갖는 제1배럴(barrel)과, 이 배럴내의 원단부와 근단부 사이에 위치하고 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성으로서 액체가 여기까지만 가득찰 수 있도록 하는 방벽(barrier)을 포함하는, 소정부피의 액체 측정 장치에 관한 것이다. 이 액체 측정 장치는, 소정부피의 액체를 이동시키도록 방벽을 위치시켜 액체가 방벽까지만 가득찰 수 있도록 하는 수단을 더 포함한다.
바람직한 양태에서, 액체 측정 장치는 방벽을 측정 장치에 적합하도록 하기 위한 커플링 장치를 포함한다. 보다 바람직한 양태에서, 이 커플링 장치는 삽입물을 포함한다. 가장 바람직한 양태에서 이 삽입물은 배럴내에서 이동할 수 있다. 다른 가장 바람직한 양태에서 이 액체 측정 장치는 삽입물을 액체 측정 장치내에 안전하게 있도록 위치시키는 홀더를 포함한다. 다른 바람직한 양태에서 이 삽입물은 스크류에 의해 원하는 위치로 이동한다.
바람직한 양태에서, 액체 측정 장치는 피펫 또는 주사기이다.
바람직한 양태에서, 액체 측정 장치는 밸프를 통해 제1배럴과 유동적으로 연결되는 제2배럴을 포함한다. 바람직한 양태에서, 밸브는 일방향형 밸브이다. 다른 바람직한 양태에서, 밸브는 온/오프 스위치를 갖는다.
바람직한 양태에서, 액체 측정 장치는 말단부에 바늘을 포함할 수 있다.
바람직한 양태에서, 액체 측정 장치의 삽입물은 단면이 H-형이다. 다른 바람직한 양태에서 삽입물은 단면이 U-형이다.
바람직한 양태에서, 액체 측정 장치의 제1배럴은 말단부에 밸브를 갖는다. 보다 바람직한 양태에서 밸브는 일방향형 밸브이다. 다른 보다 바람직한 양태에서 밸프는 온/오프형 밸브이다. 바람직한 양태에서 액체 측정 장치의 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽은 소수성 물질을 포함한다.
본 발명의 개시는 소정부피의 액체 측정 방법에 관한 것으로, 이 방법은
1)말단부와 근단부를 갖는 제1배럴에 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽을 제공하는 단계;
2)액체가 포함된 샘플에 원단부를 삽입하는 단계;
3)근단부에 음압을 형성하는 단계;
4)액체가 방벽까지만 가득찰 수 있도록 액체를 샘플에서 배럴로 이동시키는 단계를 포함한다.
바람직한 양태에서, 이 측정 방법은 배럴내의 방벽의 위치를 적합하게 조정하는 단계를 포함한다. 바람직한 양태에서, 방벽은 커플링 장치의 한 부분이고 이 측정 방법은 커플링 장치를 배럴내에 적합하게 하는 단계를 포함한다.
바람직한 양태에서, 배럴은 원단부에 밸브를 더 포함하고, 이 측정 방법은 밸브를 열고 닫는(열거나 닫는) 단계를 더 포함한다.
본 발명과 선행기술에 대한 본 발명의 장점을 요약할 목적으로 발명의 특정 목적과 장점을 기술하였다. 물론, 전술한 모든 목적 또는 장점이 본 발명의 특정 양태 모두에서 반드시 달성되는 것은 아니라고 이해된다. 따라서, 예컨대 당업자는, 본 명세서에서 교시 또는 암시한 바와 같이, 본 발명이 다른 목적이나 잇점들을 반드시 달성하지 않고서도 하나의 장점 또는 일군의 장점을 달성하거나 최적화하는 방식으로 구체화될 수 있는 것으로 인식할 것이다.
본 발명의 또 다른 양태, 특성 및 장점들은, 후술되는 본 발명의 바람직한 양태에 관한 상세한 설명으로부터 명백하다.
전술한 양태들이 본 발명의 바람직한 양태들을 나타내기는 하지만, 당업자들은 본 발명의 기술사상에서 벗어나지 않고서 본 발명의 양태를 변형할 수 있는 것으로 이해된다. 따라서 본 발명의 범위는 첨부된 특허청구범위에 의해서만 오로지 결정되어야 한다.
알데히드를 아미노산 또는 아민과 같이 아미노-함유 화합물과 반응시켜 이민 (흔히 쉬프 염기(Schiff's base)로 알려져 있음)을 형성하는데, 이는 통상 유색이다. 예를 들어, 글리신을 선택하는 경우,
OPA와 글리신간에 쉬프 염기 형성
다른 공지된 알데히드 반응은 소듐 비설파이트 카보닐 부가 반응이다.
OPA에 소듐 비설파이트 부가 반응
쉬프 염기 형성 반응은 빠르고 가역반응이 일어나기 어렵기 때문에 소듐 비설파이트 부가 반응이 더 유리하다. 따라서, 아미노산과 같이 아민 그룹을 함유하는 화합물과 소듐 디설파이트 같은 시약이 모두 존재하는 경우에는, 알데히드는 먼저 소듐 비설파이트와 반응하고 다음으로 아미노산과 반응할 것이다. 따라서, 포름알데히드, OPA 또는 글루타르알데히드와 같은 알데히드와 반응하는 시약의 양을 조절함으로써 색 통과/실패 반응을 설계하는 것이 가능하다. 가장 중요한 것은 아미노산 존재하에서 색이 발현되지 않으면서 알데히드와 반응하도록 설계된 소듐 비설파이트와 같은 시약의 함량이다. 남은 알데히드는 그 다음 아미노산과 반응하여 색을 갖는 용액으로 진행할 것이다. 이는, 소독용액과 같은 시험 용액에서 포름알데히드, OPA 또는 글루타르알데히드와 같은 알데히드가 소정부피 존재한다는 것을 확인시켜 준다. 한편, 색이 발현되지 않으면, 이는 포름알데히드, OPA 또는 글루타르알데히드 농도가 수용가능한 정도 이하로 존재한다는 것을 확인시켜 준다. 어느 지점에서든, 사용한 화학물질 시약의 양을 조절하거나 서로 다른 양의 알데히드(포름알데히드, OPA 또는 글루타르알데히드)를 사용함으로써 구체적인 농도를 결정할 수있다.
이렇게, 알데히드와 반응하는 시약을 조절함으로써 과량의 알데히드를 측정하는 색 통과/실패 반응을 기술하였다. 중요한 것은, 아미노산과 같이 아민 그룹을 함유하는 화합물이 존재하는 경우에는 색이 발현되지 않으면서 기준점(POI) 농도의 알데히드와 반응하도록 설계된 소듐 비설파이트와 같은 시약의 함량이다. 기준점(POI)을 초과하는 "과량"의 알데히드는 모두 아미노 그룹을 함유하는 화합물과 반응하여 색이 발현되도록 할것이다. 바람직한 양태에서, 알데히드는 OPA 또는 글루타르알데히드이고 아미노 그룹을 함유하는 화합물은 아미노산이다. 이 방법은 검사 대상 성분이 소정부피의 범위로 존재하게 하는 품질 관리에 특히 유용하다.
알데히드와 신속히 반응한다고 알려진 많은 시약들이 본 발명 실시에 사용될 수 있다. 여기에는 알데히드 그룹을 산화 또는 환원시키는 화학물질이 모두 포함되며, 알데히드의 카보닐 관응기와 반응하여 이를 변형시키는 화학물질이 모두 포함된다. 이러한 시약들의 예는 모리슨 앤 보이드저 "유기화학"(Allyn and Bacon, 제3판, 1973) 제19장에 개시되어 있는데, 그 내용 그대로 본 명세서에 참고문헌으로 통합된다. 이러한 시약들로는, Ag(NH3)2; KMnO4; K2Cr2O7; H2+ Ni, Pt 또는 Pd; LiAlH4또는 NaBH4, 다음 H+; Zn(Hg), 농염산; NH2NH2, 염기; 그리그나드 시약; 시안화염 및 비설파이트염; 하이드록시아민, 하이드라진, 페닐하이드라진 및 세미카바자이드와 같은 암모니아 유도체; 산 존재하에서 알콜과 반응; 카니자로 반응, 알돌 축합반응 및 퍼킨 축합반응과 같은 산 또는 염기와의 반응이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. 바람직한 양태에서, 알데히드와 반응하는 시약은 비설파이트 또는 시안화물의 염이다.
본 발명의 이러한 양태는 도1에 도시되어 있다. 도1에서 화합물 X와 Y는 모두 알데히드와 반응한다. 바람직하기로는 X는 Y보다 신속히 반응한다. 바람직하기로는, X와 알데히드는 반응하여 무색 화합물을 생성하나 Y는 알데히드와 반응하여 유색 화합물을 생성한다. 기준점을 정하고 기준점과 반응할 X 양을 정한다. 알데히드를 X 및 Y와 혼합하면, 알데히드는 속도론적으로 그리고 열역학적으로 유리한 X와 먼저 반응할 것이다. 과량의 알데히드는 모두 그 다음 화합물 Y와 반응하여 유색 용액을 생성할 것이다. 따라서, 유색 용액이 생성되면 알데히드 농도가 기준점이상이다. 측정은 육안으로 가능한데 색 챠트를 사용하거나 사용하지 않을 수 있다. 다르게는, 광학분광계를 사용할 수 있다. 알데히드와 화합물 X간의 반응이 속도론적으로 그리고 열역학적으로 유리하지 않으면, 알데히드가 화합물 X와 반응한 후에 화합물 Y를 첨가할 수도 있다.
이론적인 OPA량 대 소듐 비설파이트의 비는 1:2 이다. 그러나, 좋은 색 발현을 위해서는 OPA와 반응하는 소듐 비설파이트가 이론량보다 적은량으로 요구된다는 것을 알았다.
본 발명의 다른 양태는 상기 분석을 수행하기 위한 피펫 또는 주사기와 같은 액체-측정 장치이다. 이 장치는 화학, 생화학, 임상화학 또는 기타 다른 산업분야에서 어떠한 "소정부피"의 측정 및 이동을 위해서도 사용될 수 있다.
이 장치는, 하나 이상의 배럴과 플런저 그리고 커플링 장치를 갖거나 갖지않는 막 방벽을 구비한 주사기 또는 피펫일 수 있다. 이 막 방벽은 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽이다. 방멱의 양면 사이에 어떤 압력차가 존재하면 가스 또는 증기는 막을 통해 흐르나 액체는 그렇지 못하다. 적합한 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 물질은 모두 이러한 목적으로 사용될 수 있다. 그 예로는, Tyvek(상표명, 비직조 폴리에틸렌)또는 CSR(비직조 폴리프로펠렌 중앙 공급 룸)과 같은 비직조 폴리올레핀, 포장 물질 및 기타 소수성 여과 물질이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 임의에 따라서 이 장치는 삽입물과 홀더를 포함한다. 주사기 또는 피펫은 액체의 흐름을 조절하는 밸브를 포함하기도 한다.
막 방벽은 주사기 또는 피펫에 열에 의해 결합될 수 있다. 또한 부착제에 의해 주사기 또는 피펫에 부착되어 있거나 커플링 장치에 의해 주사기 배럴에 연결되어 있을 수 있다. 커플링 장치는 삽입물에 연결되어 막 장벽의 위치를 변화시킬 수 있다. 막 장벽의 위치는 삽입물 길이에 의해 조정될 수 있다. 삽입물은 홀더에 의해 안전하게 유지될 수 있다.
막 방벽은 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽이다. 막 방벽이 존재하므로 액체는 방벽까지만 찰 수 있다. 본 발명은 수가지 바람직한 양태를 갖는다.
제1양태(도2)에서, 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 막(1)이 피펫(7) 또는 주사기(6)에 고정되어 당업계에 공지된 수단에 의해 원하는 최대 부피를 갖는 위치로 자리잡는다. 주사기는 플런저(3)를 포함한다. 주사기는 바늘캡을 갖거나 갖지 않는 금속 또는 플라스틱 바늘을 가질 수 있다. 한 양태(도3A-3D)에서, 피펫(7) 또는 주사기(6) 직경보다 크거나 작은 커플링 장치가 사용된다. 상이한 길이의 피펫 또는 주사기 두 부분이 이러한 커플링 장치에 의해 연결될 수 있다.
막 방벽이 주사기 또는 피펫에 커플링된 모습이 도 3A, 3B, 3C, 3D 및 도4에 도시되어 있다. 막은 홀더(5)에 의해 안전하게 유지되기도 하는 삽입물(4)에 의해 피펫 또는 주사기의 꼭대기로부터 삽입될 수 있고 그 위치는 스크류(도5) 또는 활주성 조절장치(도4)와 같이 당업계에 공지된 수단에 의해 달라질 수 있다. 도3D는 피펫 또는 주사기보다 큰 직경을 갖는 삽입물을 도시한다. 삽입물을 조절함으로써 그리고 피펫 또는 주사기 상부에 음압을 발생시킴으로써 액체를 주사기 또는 피펫안 방벽까지 채울 수 있다.
도6A, 6B 및 6C, 측정 장치를 본 발명에 사용하는 것을 도시한다. 도6A와 도6B, 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽과 두 화학물질을 갖는 주사기를 도시한다. 플라스틱 바늘을 샘플 용액안으로 삽입시키고 플런저를 잡아당겨 주사기내에 음압을 발생시켜 액체를 주사기내로 들어가게 함으로써 주사기에 액체를 채울 수 있다. 측정 장치는 화학물질을 배럴내에 보유하기 위한 여과 물질(도6A) 또는 밸브(도B)를 포함할 수 있다. 주사기내 화학물질은 액체 또는 고체형일 수 있다. 밸브는 일방향형 또는 수동형 온/오프 밸브일 수 있다.
도6C, 하나 이상의 반응물질을 성공적으로 혼합하는 또 다른 양태를 도시한다. 여기에 도시된 장치는 두개의 챔버(9, 10)를 갖는다. 알데히드를 포함하는, 그러나 이에 국한되는 것은 아닌, 액체 소정부피를 일방향형 또는 온/오프형 밸브(8)를 통해 제1챔버(9)로 끌어 올려 여기서 제1반응물, 예컨대 소듐 비설파이트와 혼합한다. 소정 시간이 경과한 후, 반응물은 제2의 일방향형 또는 온/오프형 밸브(8)를 통해 제2반응 챔버(10)로 흘러가고, 제2챔버는 반응을 완결시키기 위한 예컨대 리신과 같은 아미노산을 함유한다. 다르게는, 두개의 일방향형 밸브 대신 삼방향형 밸브를 사용할 수 있다.
본 발명은 선행기술에 비하여 몇가지 장점을 갖는다. 첫째, 통과/실패 결론이 일관성 있고 편리하다. 바람직하게는 색을 추측할 필요가 없다. 사용자의 결론이란 "변색" 또는 "비변색" 밖에는 없다. 둘째, 액체 이동 장치가 일관성있고 편리하다. 간단한 조작으로 소정부피의 액체를 취할 수 있다. 세째, 용액 색깔이 시험 스트립 페이퍼보다 육안 관찰하기 용이한데, 스트립 페이퍼는 그 자체가 색이 있기 때문에 거짓 양성 반응으로 이끌 수 있기 때문이다. 네째, 염기를 첨가해 반응을 촉진하거나 산을 첨가해 반응을 지연시킴으로써 색 발현 시간을 조절할 수 있다. 다섯째, 다른 종류의 아미노산 또는 아민을 선택함으로써 발현되는 색을 조절할 수 있다. 여섯째, 아미노산 또는 아민의 양을 조절함으로써 발현되는 색의 명암을 조절할 수 있다. 일곱째, 분석을 수행하고 해석하는 것이 극도로 용이하다. 마직막으로, 화학, 생화학, 임상화학 또는 기타 다른 분야의 어떠한 "소정부피"의 운반을 위해서든 이 장치를 사용할 수 있다.
실시예
실시예 1: OPA 대 소듐 비설파이트 몰 비율(0.5:1 내지 8:1)의 영향
소듐 비설파이트, 글리신 및 OPA를 순서대로 첨가하였다. OPA 대 소듐 비설파이트의 몰 비율은 0.5:1 내지 8:1로 조정하였다(표1). 표1로 부터, 일주일 후에 2:1 비율의 용액은 색이 발현된 반면 1:1 비율의 용액은 색이 발현되지 않은 것을알 수 있다.
실시예 1: OPA 대 소듐 비설파이트 몰 비율(1:1 내지 2:1)의 영향
소듐 비설파이트, 글리신 및 OPA를 첨가하였고, OPA 대 소듐 디설파이트의 몰 비는 실시예 1에서와 같이 조절하였다. 표2는 세개의 기준점(POI)을 보여준다. 제1기준점은 OPA 대 소듐 비설파이트가 2:1 몰비였고, 제2기준점은 1.75:1 몰비였으며 제3기준점은 1.5:1 몰비였다. 2:1 몰비에서는 초기색이 발현되는데 5분이 필요했다. 1.75:1 몰비에서는 초기색이 발현되는데 13분이 필요하였다. 1.5:1 몰비에서는 며칠간 색이 발현되지 않았다.
표2에서는 OPA 용액량이 400㎕에서 800㎕로 변화함에 따라 반응용액량도 달라진다.분석은 반응량(부피)에 좌우되지 않는다. OPA 대 소듐 설파이트의 몰비가 분석의 중요 파라미터이다.
실시예 3: OPA 대 소듐 비설파이트의 몰비가 1:1 내지 2:1인 영역에서 OPA 농도의 변화 (동일량 상이한 농도)
소듐 비설파이트, 글리신 및 OPA를 첨가하였고, OPA 대 소듐 디설파이트의 몰 비는 실시예 2에서와 같이 조절하였다. 표3에서 보는 바와 같이, 제1기준점은 6분20초 내지 7분20초 지점이었고 색 변화에 필요한 시간은 매우 일관적이었다. 그러나, 제2기준점에 대해서는 시간 변동이 좀 있었다(17 내지 24분). 어떠한 작용 기전에도 구속되지 않는다면, 이는 육안관찰의 한계일 수도 있고, 또는 희석된 농도에서는 색 발현이 온도, pH 또는 심지어 태양 광선에의 노출과 같은 미세한 반응 조건의 변화에 영향 받기 쉽다는 것을 의미할 수 도 있다.
실시예 4: OPA 농도 변화 연구
소듐 비설파이트, 글리신 및 OPA를 실시예 1에서와 같이 첨가하였다. OPA 대 소듐 비설파이트의 몰비에 따라 기준점(POI)이 변화하기 때문에, OPA 량을 변화시켜 기준점을 어떤 POA 농도 범위로든 바꿀수 있다. 따라서, 표4에서, 바이알 1, 바이알 2 및 바이알 3으로부터 취한 실제의 OPA 몰은 표3에 있는 바이알 3, 바이알 4 및 바이알 5와 동일하다.
따라서, 본 발명의 중요 인자중 하나는 알데히드 대 소듐 비설파이트의 몰비이다. 상이한 최종 색이 관찰되었다는 것을 제외하고는, 유사한 결과를 DL-알라닌, ε-아미노-n-카프로산 및 L-리신에 대하여 얻었다.
실시예 5: POI가 0.35% 내지 0.30% 범위로 있게 하기 위해 OPA로 실험한 추가 실험
하기 실시예에서는 아미노산 종류 및 몰비로 인한 변화를 예시하였는데 여기서는 DL-도파를 아미노산으로 사용하였다(도7 참조). 소듐 비설파이트 및 OPA를 실시예 1에서와 같이 첨가하였다. 아미노산으로서의 글리신 대신 DL-도파를 사용하였다.
위 실시예에서, 아민으로 DL-도파를 사용한 결과 주황색을 나타내었다. 아미노산 종류, 몰비 및 반응시간 모두가 색 형성에 중요하다.
실시예 6: 염기가 색 발현 시간에 미치는 영향
이 실시예는 염기 첨가가 반응 속도를 촉진시켜 색 발현 시간이 단축될 수 있다는 것을 보여준다. 따라서, 원하는 시간대에 색을 발현시킬 목적으로 특정량의 염기르 사용할 수 있다.
반대로, 시트르산과 같은 산을 첨가하면 색 발현을 지연시킬 것이다. 이는 색이 너무 조속히 발현되는 경우에 유용할 것이다(데이타 생략).
실시예 7: 염기(100㎕) 첨가된 다른 아미노산
다른 아미노산으로 색 발현이 다르다는 것이 밝혀졌다. 예를 들어, OPA와 반응하는 경우 DL-알라닌은 밝은 황색이었고 ε-아미노-n-카프로산은 분홍색이었다. 더우기, 반응 속도 또한 상이했다. 따라서, DL-알라닌 과 ε-아미노-n-카프로산은 글리신보다 상당히 후에 색을 나타냈다(데이타 생략).
실시예 8: 리신으로 활성화된 시덱스 용액(글루타르알데히드 2.1% 함유)
5개의 신틸레이션 바이알에 글루타르알데히드, 소듐 비설파이트 및 리신을 넣고 혼합하였다. 바이알 5에서 부터 황색이 발현되었다. 바이알 1에서는 색이 발현되지 않았다. 바이알 2에서 바이알 4는 "중간(between)"색을 발현했는데 너무 "점차적으로"라서 육안으로 구별할 수 없었다.
이는 관련 화합물의 안정성면으로 설명될 수 있다. 첫째, 알데히드-소듐 비설파이트 복합체(5)가 알데히드-소듐 비설파이트 복합체(6)보다 더 안정하다면, 글루타르알데히드로부터 더 넓은 범위의 기준점(POI)을 볼 수 있을 것이다.
(무색) 보다 안정(무색) 덜 안정
기준점(POI) 범위는 화합물 5 및 6의 안정성과 관련있다.
또는 보다 정확히 말하면, OPA와 글루타르알데히드간의 기준점(POI)의 차이는, 알데히드-소듐 비설파이트 형성과 알데히드/아미노산 쉬프 염기 형성간의 속도론 및 열역학적 면에서의 경쟁의 결과일 수 있다.
경로 1에서, 세 성분이 혼합되면, 화합물 5의 형성이 화합물 7의 형성보다 속도론적 측면 및 열역학적 측면 양자에서 더 유리하다.
이는 경로 2에서의 상황과 다소 다르다. 화합물 6의 형성이 화합물 9의 형성보다 여전히 더 유리하다 하더라도 그 차이는 경로 1에서의 화합물 7과 화합물 5간의 차이보다 훨씬 작다. 따라서, 만일 세 성분(글루타르알데히드, 소듐 비설파이트 및 리신)이 혼합되면, 그 비율에 따라 좀 적은량의 화합물 9가 형성될 것이고 따라서 검출가능한 황색을 나타낸다. 그러나, 이 상황은 화합물 8과 NaHSO3를 먼저 혼합한 후 최후에 리신을 넣음으로써 조절된다. 이 경우, 만일 알데히드가 남지 않으면리신은 화합물 6과 경쟁하여 화합물 9를 형성해야만 하는데 이는 그다지 유리하지 않다. 아미노산과 알데히드의 적절한 조합에 있어 그 반응물질의 첨가 순서가 중요할 수 있다. 후술되는 실시예에는 아미노산을 최후에 첨가하였다.
실시예 9: 아미노산을 최후에 첨가함
5개의 신틸레이션 바이알에, 글루타르알데히드와 소듐 비설파이트를 먼저 넣어 혼합한 후 리신 용액을 최후에 넣었다. 바이알 5에서부터 바이알 2까지 황색이 점차적으로 발현되었으나, 바이알 1에서는 발현되지 않았다(표8).
리신 및 소듐 비설파이트와 반응하는 글루타르알데히드에서 더 좁은 범위의 기준점(POI)이 관찰되었다. 아미노산(리신)을 최후에 넣는 것이 중요했다. 표8은 바이알 1(무색)과 바이알 3(황색)간에 명확한 차이를 보여준다. 따라서, 글루타르알데히드와 소듐 비설파이트를 먼저 반응시키고 그 다음에 리신을 첨가하면 전술한 OPA에서 관찰한 결과와 유사한 결과를 얻는다.
사용한 화학물질에 따라, 시간이 달라질 수 있다. NaHSO3에서는 알데히드와 NaHSO3를 혼합한 직후 바로 리신을 첨가할 수 있다. 따라서, 기술한 분석법은 알데히드 함량의 통과/실패형 분석을 얻기 위해 일반적으로 알데히드 및 아민에 적용할 수 있다.
실시예 10
상기 화학 원리는 알데히드와 아미노 그룹을 함유한 화합물간의 반응에 일반적으로 적용될 수 있다. 이 실시예는 아미노산으로서 글리신 또는 리신을 사용한 글루타르알데히드와 소듐 시안화물간의 반응을 보여준다. 상응하는 두개의 알데히드 시안화물 부가 화합물을 하기에 나타내었다.
무색의 알데히드-시안화물 부가 화합물 10과 11
5개의 신틸레이션 바이알 각각에 글루타르알데히드와 소듐 시안화물을 넣어 먼저 혼합한 후(표9), 리신 용액을 최후에 첨가하였다. 바이알 5에서 황색이 발현되었고 다른 바이알에서는 발현되지 않았다. 바이알 4와 바이알 5 사이에 기준점(POI)이 확인되었다.
실시예 11
5개의 신틸레이션 바이알 각각에, 글루타르알데히드와 소듐 시안화물을 넣어 먼저 혼합한 후 리신을 최후에 첨가하였다(표10). 바이알 2에서 바이알 5까지 황색이 발현하였고 바이알 1에서는 검출되지 않았다. 바이알 1과 바이알 3 사이에서 기준점(POI)이 확인되었다. 현실적으로 바이알 1과 바이알 3간의 차이를 식별하는 것만 맨눈으로 가능하다. 즉, 바이알 1과 바이알 2간의 차이나 바이알 2와 바이알 3간의 차이를 구별하는 것은 어려울 것이다. 따라서, 기구를 사용하지 않고서는 더 좁은 기준점(POI)을 확인할 수 없다고 결론지을 수 있다.
알데히드 용액은 통상의 피펫 또는 주사기와 같이 당업계에 공지된 수단에 의해 측정 및 이동될 수 있다. 바람직한 양태에서, 알데히드 용액은 여기에 기술된 장치에 의해 측정 및 이동될 수 있는데, 이 장치는 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 막을 특징으로 한다. 본 발명에 개시된 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 막을 함유하는 액체 측정 장치를 사용하면, 간단한 조작만으로 그리고 일관성있는 결과를 얻으면서 액체를 용이하게 운반할 수 있다는 장점이 있다.
화합물 X와 화합물 Y(도1)는 같은 바이알에 있거나 두 개의 다른 바이알에 있을 수 있다. 이들은 피펫 또는 주사기를 이용하여 운반할 수 있다. 알데히드를 화합물 X에 첨가한 후 생성된 혼합물을 화합물 Y에 첨가할 수도 있고, 알데히드를 화합물 X와 Y에 함께 첨가할 수도 있으며, 알데히드와 화합물 Y를 순차적으로 화합물 X에 첨가할 수도 있다. 알데히드 시험 샘플의 측정 및/또는 운반은 통상의 피펫 또는 주사기를 이용할 수도 있다. 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽은 전술한 많은 장점을 가져다 준다.
도6C에 보인 본 발명의 한 양태에서, 화합물 X는 제1챔버에 있을 수 있다. 알데히드는 밸브(8)를 통해 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽(1)까지 끌어 올려진다. 소정의 시간 경과 후, 알데히드와 화합물 X는 일방향형 또는 온/오프형 밸브(8)을 통해 제2챔버(10)로 운반되어 거기서 화합물 Y와 반응한다. 소정의 시간 경과 후, 제2챔버의 색이 관찰되고 시험 샘플에 과량의 알데히드 존재 여부가 결정된다.
당업자는 본 발명의 기술사상을 벗어나지 않고 다수의 그리고 다양한 변형이 가능하다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 양태들은 단지 예시적인 것일 뿐 본 발명의 범위를 제한하려는 목적이 아니라는 것을 명확히 이해하여야 할 것이다.
소정부피의 액체를 분석하는 본 발명의 액체 측정 장치 및 이를 이용한 분석법은, 통과/실패 결론이 일관성 있고 편리하고, 액체 이동 장치가 일관성있고 편리하고, 용액 색깔이 시험 스트립 페이퍼보다 육안 관찰하기 용이하고, 염기를 첨가해 반응을 촉진하거나 산을 첨가해 반응을 지연시킴으로써 색 발현 시간을 조절할 수 있고, 다른 종류의 아미노산 또는 아민을 선택함으로써 발현되는 색을 조절할 수 있고, 아미노산 또는 아민의 양을 조절함으로써 발현되는 색의 명암을 조절할 수 있고, 분석을 수행하고 해석하는 것이 극도로 용이하다는 장점을 갖는다. 이 장치는 화학, 생화학, 임상화학 또는 기타 다른 분야의 어떠한 "소정부피"의 측정및 운반을 위해서 사용할 수 있다.

Claims (26)

  1. 원단부와 근단부를 갖는 제1배럴; 및
    상기 배럴내 근단부와 원단부 사이에 위치하는 방벽으로서 이에 의해 액체가 방벽까지만 채워지는, 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽을 포함하는, 소정부피의 액체를 측정하기 위한 액체 측정 장치.
  2. 제1항에 있어서, 배럴내 방벽까지의 부피와 상기 소정부피가 동일한 액체 측정 장치.
  3. 제1항에 있어서, 소정부피의 액체를 운반하도록 방벽을 위치시켜 액체가 이 방벽까지만 찰 수 있도록 하는 수단을 더 포함하는 액체 측정 장치.
  4. 제3항에 있어서, 방벽을 측정 장치에 적합시키는 커플링 장치를 더 포함하는 액체 측정 장치.
  5. 제4항에 있어서, 커플링 장치가 삽입물을 포함하는 액체 측정 장치.
  6. 제5항에 있어서, 삽입물이 배럴내에서 이동가능한 것인 액체 측정 장치.
  7. 제5항에 있어서, 삽입물을 액체 측정 장치내에 안전하게 위치시키고 고정시키기 위한 홀더를 더 포함하는 액체 측정 장치.
  8. 제6항에 있어서, 삽입물이 스크류에 의해 원하는 위치로 이동하는 액체 측정 장치.
  9. 제1항에 있어서, 피펫인 액체 측정 장치.
  10. 제1항에 있어서, 주사기(syringe)인 액체 측정 장치.
  11. 제1항에 있어서, 밸브에 의해 제1배럴과 액체상태로 연결되는 제2배럴을 더 포함하는 액체 측정 장치.
  12. 제11항에 있어서, 밸브가 일방향형인 액체 측정 장치.
  13. 제11항에 있어서, 밸브가 온/오프 스위치형인 액체 측정 장치.
  14. 제1항에 있어서, 원단부에 바늘을 더 포함하는 액체 측정 장치.
  15. 제5항에 있어서, 삽입물의 횡단면이 H-형인 액체 측정 장치.
  16. 제5항에 있어서, 삽입물의 횡단면이 U-형인 액체 측정 장치.
  17. 제1항에 있어서, 원단부에 밸브를 더 포함하는 액체 측정 장치.
  18. 제17항에 있어서, 밸브가 일방향형인 액체 측정 장치.
  19. 제17항에 있어서, 밸브가 온/오프 스위치형인 액체 측정 장치.
  20. 제1항에 있어서, 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽이 소수성 물질을 포함하는 액체 측정 장치.
  21. 근단부 및 원단부를 갖는 배럴내로 가스 또는 증기 투과성 액체 비투과성 방벽을 제공하는 단계;
    원단부를 액체를 함유하는 샘플내로 삽입하는 단계;
    근단부에 음압을 발생시키는 단계; 및
    액체가 방벽까지만 채워지도록 샘플로부터 배럴내로 액체를 운반하는 단계를 포함하는, 소정부피의 액체를 측정하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 배럴내 방벽의 위치를 조절하는 단계를 더 포함하는 방법.
  23. 제21항에 있어서, 방벽이 커플링 장치의 일부이고 이 커플링 장치를 배럴내에 적합시키는 단계를 더 포함하는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 적합단계가 커플링 장치를 배럴내로 삽입하는 것을 포함하는 방법.
  25. 제21항에 있어서, 배럴이 원단부에 밸브를 포함하고 이 밸브를 열고/열거나 닫는 단계를 더 포함하는 방법.
  26. 제21항에 있어서, 방벽내 플런저를 잡아당겨 음압을 발생시키는 단계를 더 포함하는 방법.
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