KR20010005971A

KR20010005971A - 메틸화된 실란올의 유도체 및 가수분해된 식물 단백질의 유도체를 함유하는 화장용 및/또는 피부과용 조성물

Info

Publication number: KR20010005971A
Application number: KR1019997009048A
Authority: KR
Inventors: 프뤽튀알렝이; 몽뜨플로랑스; 라자가브렐라; 톡고즈뉘르셀깡
Original assignee: 더 부츠 캄파니 피엘씨
Priority date: 1997-04-04
Filing date: 1998-03-31
Publication date: 2001-01-15
Also published as: PL335815A1; US20020025303A1; AU735957B2; NZ337779A; CN1259043A; ZA982748B; CA2285336A1; TR199902428T2; NO994792L; EP0971686B1; AR011209A1; HUP0002907A2; FR2761607A1; JP2001522356A; ID23700A; BG103772A; ATE281151T1; AU7758498A; EP0971686A1; BR9808122A

Abstract

본 발명은 메틸화된 실란올의 하나 이상의 유도체 및 가수분해된 식물 단백질의 하나 이상의 유도체의 배합물을 포함하는, 피부 노화 증상을 치료하기 위한 피부과용 및/또는 화장용 조성물에 관한 것이다. 보다 특히, 메틸화된 실란올의 유도체는 메틸실란올 만누로네이트이고 가수분해된 식물 단백질은 가수분해된 밀 단백질의 추출물이다. 당해 조성물은 또한 (a) 비타민 C 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체, 예를 들어, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트, (b) 비타민 E 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체 및/또는, (c) 비타민 A 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체 및/또는, (d) 올리고펩타이드 또는 이의 유도체 및/또는, (e) 헬리안투스 안누스 및/또는 헤데라 헬릭스로부터 추출된 식물성 오일 및/또는, (f) 피트산을 추가로 함유할 수 있다.

Description

메틸화된 실란올의 유도체 및 가수분해된 식물 단백질의 유도체를 함유하는 화장용 및/또는 피부과용 조성물{Cosmetic and/or dermatological composition containing a derivative of methylated silanol and a derivative of hydrolysed plant protein}

본 발명은 피부 치료, 예를 들어, 결합 조직의 단백질의 비가역적 가교결합을 억제함으로써 피부 노화의 증상을 치료하고 대기 오염의 영향을 감소시키는 것에 관한 것이다.

노화는 유기체의 기능의 점진적 쇠퇴로부터 발생하는 자연적 현상이다. 노화 동안, 광범위한 변이가 각 기관, 특히 결합 조직에서 발생한다.

예를 들어, 인체에서 가장 풍부한 단백질인 콜라겐은 보다 불용성으로 되고, 분해, 열 파괴 및 기계적 장력에 보다 내성으로 된다. 피부 노화의 경우, 콜라겐의 물리화학적 특성의 변이는 탄력성, 유연성 및 긴장성 상실과 같은 장기간 합병증 발현의 윈인이 된다.

콜라겐은 3중 나선으로 감긴 3개의 폴리펩타이드 쇄(트로포콜라겐 원섬유)로 구성된 섬유성 단백질이다. 상기 폴리펩타이드 쇄는 동일한 길이이고 각각 약 1000개 아미노산 그룹을 갖는다. 이들은 주로 35% 글리신, 21% 프롤린, 12% 하이드록시프롤린 및 11% 알라닌 잔기를 함유한다.

X선 회절 분석으로 트로포콜라겐의 각각의 폴리펩타이드 쇄 자체가 3중 나선을 형성시킴을 알 수 있다. 이들은 또한 수소 브릿지에 의해 형성된 이들간의 가교결합 및 콜라겐내에서만 발견되는 유별난 유형의 공유 가교결합(2개 쇄의 라이신 잔기간에 형성됨)을 나타낸다. 트로포콜라겐은 또한 하이드록시라이신의 하이드록실 그룹에 결합된 탄수화물 측쇄를 함유한다.

세포 내부에서의 콜라겐 분자의 합성은 복잡한 과정이고 두드러진 세포내 및 세포외 해독후 변이를 필요로 한다. 세포내 영역에서, 생합성 동안, 라이신 및 프롤린의 몇몇 잔기는 하이드록실화되고, 이들 하이드록실화된 잔기는 효소에 의해 글리코실화(glycosylation)된다. '글리코실화'는 탄소수 6의 당과 단백질의 유리 아미노 그룹과의 결합을 의미한다. 이러한 결합은 또한 당해 분야에 글루코실화(glucosylation) 또는 글리케이션(glycation)이라는 이름으로도 알려져 있다. 이러한 트로포콜라겐의 하이드록실화 및 글리코실화 반응은 트로포콜라겐이 세포 외부에서 분비되기 위해 필요하다. 세포외 영역에 분비되면, 트로포콜라겐 쇄는 공유 결합에 의해 결합되어 가교결합을 갖는 원섬유성 네트워크를 형성시킨다.

트로포콜라겐의 아미노산 그룹의 효소적 글리코실화외에, 라이신 및 하이드록시라이신의 특정 잔기의 비효소적 글리코실화가 또한 세포외 영역에서 발생한다. 사실, 탄소수 6의 당의 단백질의 유리 아미노산 그룹에의 비효소적 첨가는 조직의 구조적 및 기능적 변이를 유발한다. 콜라겐의 경우, 이는 콜라겐 섬유간의 비가역적 가교결합의 형성을 유도하여, 궁극적으로 조직의 강직 및 피부의 탄력성 상실을 유발한다(Cerami et al 1987).

단백질의 비효소적 글리코실화 및 이의 화학적 결과는 오랫동안 식품 화학에서 소위 당의 마일라르(Maillard) 또는 브라우닝(Browning) 반응을 참조로 하여 공지되어 왔다. 상기 반응은 글리코알데히드 또는 케톤과 단백질의 유리 아미노 그룹과의 축합을 유발하여, 글리코실아민(쉬프 염기)을 생성시킨다. 생성된 생성물은 아마도리 재배열(Amadori rearrangement)을 겪어 보다 안정한 아마도리 생성물을 형성시킬 수 있다. 다음, 상기 생성물은 일련의 탈수화 및 재배열을 개시하여, 이들의 형광단 및 발색단 특성에 의해 확인된 고도로 반응성인 카보닐 화합물을 형성시킬 수 있다. 상기 쇄 반응으로부터 생성된 형광단 및 발색단은 전개된 브라우닝 생성물 또는 마일라르 생성물의 전개된 글리코실화의 최종 생성물(EPEG)의 이름으로 명명되어 왔다(식품 화학에서). EPEG의 반응성 카보닐 그룹은 단백질의 다른 아미노 그룹과 비가역적 가교결합을 형성시켜, 노화 과정의 원인 중 하나인, 단백질의 용해성을 감소시킬 수 있다(Cerami et al 1987, Brownlee et al 1986, Shin et al 1988).

비효소적 글리코실화에 의한 콜라겐 섬유간의 비가역적 가교결합의 형성의 억제는 모든 '노화 방지' 치료의 관심사이다. 사용되는 방법 중 하나는 이들의 반응성 카보닐 그룹을 차단함으로써 초기 단계의 글리코실화 생성물(쉬프 염기 및 아마도리 재배열로부터 생성된 부가 생성물)을 불활성화시키는 것으로 이루어져 있다. 이 분야에서, 친핵성 하이드라진 화합물인 아미노구아니딘(Cerami et al 1987, Brownlee et al 1986) 및 이의 유도체인 구아노벤조아세테이트(Igaki et al 1991)를 사용한 몇몇 연구가 수행되었다. 또 다른 접근법은 마크로파지의 활성화에 의한 EPEG 생성물의 제거로 이루어진 노화 방지 치료와 관련하여 단백질간의 가교결합 형성의 억제를 목표로 한다(Cerami et al 1987).

일상 생활에서 피부는, 예를 들어, 자동차 또는 담배 연기로부터의 배기 형태의 대기 오염에 노출된다. 이러한 배기는 피부 수분의 감소를 일으킬 수 있고 바람직하지 않은 피부과학적 결과를 유발할 수 있다. 따라서, 대기 오염에의 노출의 불리한 결과를 예방하는 피부과용 및 화장용 조성물이 요망되고 있다. 본 발명은 이러한 피부과용 및 화장용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 주로 결합 조직의 단백질의 비가역적 가교결합을 방지함으로써 피부 노화 증상의 결과를 예방하고 대기 오염에의 노출의 결과를 예방하기 위한 메틸화된 실란올의 유도체와 가수분해된 식물 단백질의 유도체와의 배합물에 관한 것이다.

따라서, 본 발명은 메틸화된 실란올의 하나 이상의 유도체 및 가수분해된 식물 단백질의 하나 이상의 유도체의 배합물을 포함하는, 피부 노화 증상을 치료하고 대기 오염에의 노출의 결과를 예방하기 위한 피부과용 및 화장용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 목적은 메틸화된 실란올의 유도체, 가수분해된 식물 단백질의 추출물 및 비타민 C(및/또는 이의 유도체, 특히 마그네슘 아스코르빌 포스페이트)의 배합물을 사용하여 새로운 콜라겐의 합성을 자극하고 새롭게 합성된 콜라겐 상에서의 글리코실화율을 일정한 값으로 유지함으로써 피부 노화 증상의 결과를 예방하고, 대기 오염에의 노출의 결과를 예방하는 것이다.

따라서, 본 발명은 또한 상기한 바와 같은 비타민 C 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체를 함유하는 피부과용 및 화장용 조성물에 관한 것이다.

식물성 공급원, 예를 들어, 헬리안투스 안누스(Helianthus annuus) 및 헤데라 헬릭스(Hedera helix)로부터 추출된 오일 및/또는 예를 들어, 쌀겨로부터 추출된 피트산을 추가로 함유하는 본 발명의 조성물은 대기 오염에의 노출의 결과의 치료에서 특정한 유용성을 갖는다.

따라서, 본 발명은 또한 식물성 공급원, 예를 들어, 헬리안투스 안누스 및 헤데라 헬릭스로부터 추출된 오일 및/또는 예를 들어, 쌀겨로부터 추출된 피트산을 추가로 함유하는, 상기한 바와 같은 피부과용 및 화장용 조성물에 관한 것이다.

하나 이상의 올리고펩타이드 또는 이의 유도체를 추가로 함유하는 본 발명의 조성물은 추가의 항-글리케이션 특성을 제공한다. 적합한 올리고펩타이드 또는 이의 유도체는 올리고펩타이드가 글리신, 히스티딘 및 라이신 잔기 또는 아르기닌, 글리신 아스파르트산 및 세린 잔기로 구성된 팔미토일 올리고펩타이드를 포함한다.

따라서, 본 발명은 또한 올리고펩타이드 또는 이의 유도체를 추가로 함유하는, 상기한 바와 같은 피부과용 및 화장용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 목적은 메틸화된 실란올의 유도체, 가수분해된 식물 단백질의 추출물(특히 가수분해된 밀 단백질의 추출물), 비타민 C(및/또는 이의 유도체, 특히 마그네슘 아스코르빌 포스페이트), 및 비타민 E(및/또는 이의 유도체)의 배합물을 사용하여 유리 라디칼의 생성을 억제함으로써 피부 노화 증상의 결과를 예방하고 대기 오염에의 노출 결과를 예방하는 것이다.

따라서, 본 발명은 또한 메틸화된 실란올의 하나 또는 다수의 유도체, 가수분해된 식물 단백질의 추출물(특히 가수분해된 밀 단백질의 추출물), 비타민 C(및/또는 이의 유도체, 특히 마그네슘 아스코르빌 포스페이트), 및 비타민 E(및/또는 이의 유도체)를 포함하는 피부과용 및 화장용 조성물에 관한 것이다.

특히, 노화 증상의 치료 및 대기 오염에의 노출의 결과의 예방에 유용한 것으로 판정된 본 발명의 조성물은 상기한 항-글리코실화제, 비타민 C 및/또는 이의 유도체, 및, 임의로, 비타민 E 및/또는 이의 유도체, 및 비타민 A 및/또는 이의 유도체 및/또는 식물성 공급원, 예를 들어, 헬리안투스 안누스 및 헤데라 헬릭스로부터 축출된 오일 및/또는 예를 들어, 쌀겨로부터 추출된 피트산 중 2개 이상의 배합물로 구성된다.

이와 관련하여, 본 발명은 추가로 비타민 E 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체, 또는 비타민 A 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체를 함유하는, 상기한 바와 같은 피부과용 및 화장용 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 조성물의 국부 또는 국소적 적용뿐만 아니라 피부에 국부적으로 적용시키는 것으로 이루어진, 피부 노화 증상을 치료하는 방법 및 치료할 포유동물의 신체의 부위에 상기한 조성물 중 하나를 유효한 양으로 적용시킴으로써 대기 오염에의 노출의 결과를 예방하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 의약품으로서의 상기한 조성물 중 하나의 용도 및 피부 노화 증상 치료용 및 대기 오염에의 노출 결과 예방용 의약품의 제조를 위한 상기 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 이점 및 특성은 다음 설명으로부터 본원의 도면을 참고로 하여 보다 명백하게 이해될 것이다.

도 1은 메틸실란올 만누로네이트(Algisium C)의 항-글리코실화 활성을 제시하고,

도 2는 가수분해된 밀 단백질의 추출물(Integrissyme)의 항-글리코실화 활성을 제시하고,

도 3은 메틸실란올 만누로네이트(Algisium C) 및 가수분해된 밀 단백질의 추출물(Integrissyme)의 배합물의 항-글리코실화 활성을 제시하고,

도 4는 사람 섬유아세포의 배양에 의한 콜라겐의 합성에 미치는 각종 피부과용 조성물의 영향을 제시하고,

도 5는 사람 섬유아세포의 배양에 의해 생성된 콜라겐의 글리코실화에 미치는 각종 피부과용 조성물의 영향을 제시한다.

메틸화된 실란올 유도체

다음 화합물을 포함하는 수개의 화합물을 메틸화된 실란올 유도체로서 사용할 수 있으며, 하기 목록이 전부는 아니다:

나트륨 만누로네이트 메틸실란올(Algisium, Exsymol)

메틸실란올 만누로네이트(Algisium C^R, Exsymol)

메틸실란올 만누로네이트 나일론-12(Algisium C powder^R, Exsymol)

아스코르빌메틸실란올(Ascorbosilane concentrate C^R, Exsymol)

아스코르빌메틸실란올 펙티네이트(Ascorbosilane C^R, Exsymol)

디메틸 옥소벤조디옥실란(DSBC^R, Exsymol)

디메틸 옥소벤조디옥사실란 나일론-12(DSBC powder^R, Exsymol)

나트륨 히알루로네이트 디메틸실란올(DSH^R, Exsymol)

디메틸실란올 히알루로네이트(DSHC^R, Exsymol)

메틸실란올 글리시리지네이트(Glysinol^R, Exsymol)

메틸실란올하이드록시프롤린(Hydroxyprolisilane^R, Exsymol)

메틸실란올하이드록시프롤린 아스파르테이트(Hydroxyprolisilane C^R, Exsymol)

나트륨 락테이트 메틸실란올(Lasilium^R, Exsymol)

락토일메틸실란올 엘라스티네이트(Lasilium C^R, Exsymol)

디올레일 토코페릴 메틸실란올(Liposiliol C^R, Exsymol)

메틸실란올 아세틸메티오네이트(Methiosilane^R, Exsymol)

아세틸메티오닐메틸실란올 엘라스티네이트(Methiosilane C^R, Exsymol)

메틸실란올 PEG 7 글리세릴 코코에이트(Monosiliol^R, Exsymol)

메틸실란올 트리 PEG 7 글리세릴 코코에이트(Monosiliol C^R, Exsymol)

메틸실란올 엘라스티네이트(Proteosilane C^R, Exsymol)

피롤리돈 카복실레이트 가성 메틸실란올(Silhydrate^R, Exsymol)

피롤리돈 카복실레이트 구리 메틸실란올(Silhydrate C^R, Exsymol)

메틸실란올카복시메틸 테오필린(Theophyllisilane^R, Exsymol)

메틸실란카복시메틸 테오필린 알기네이트(Theophyllisilane C^R, Exsymol)

메틸실란올 아세틸티로신(Tyrophyllisilane^R, Exsymol) 또는

구리 아세틸 티로시네이트 메틸실란올(Tyrosilane C^R, Exsymol).

메틸화된 실란올의 유도체 중 본 발명의 배경에서는 나트륨 만누로네이트 메틸실란올, 메틸실란올 만누로네이트, 아스코르빌메틸실란올, 아스코르빌메틸실란올 펙티네이트, 메틸실란올 하이드록시프롤린, 메틸실란올 하이드록시프롤린 아스파르테이트 또는 메틸실란올 아세틸티로신이 바람직하다.

특히 바람직한 메틸실란올의 유도체는 메틸실란올 만누로네이트이다.

상기 확인된 메틸실란올 유도체는 표시된 공급원으로부터 시판되고 있다. 예를 들어, 메틸실란올 만누로네이트는 상품명 Algisium C로 Exsymol로부터 시판되고 있다. 이 시판품은 1% 메틸실란올 만누로네이트를 함유하는 수용액이다.

본 발명의 제형내에 포함될 수 있는 메틸화된 실란올의 유도체를 함유하는 시판품의 양은 일반적으로 조성물의 총 중량의 1 내지 20중량%의 범위이고, 바람직한 농도는 통상적으로 2 내지 7중량%의 범위이다. 따라서, 조성물은 메틸화된 실란올 유도체를 0.01 내지 0.2%, 바람직하게는 0.02 내지 0.07% 함유할 수 있다.

가수분해된 식물 단백질의 유도체

가수분해된 식물 단백질, 보다 특히 곡류 기원(예를 들어, 보리, 밀, 귀리)의 가수분해된 식물 단백질의 수개의 유도체를 메틸화된 실란올의 유도체와 배합하여 본 발명의 조성물을 형성시킬 수 있다. 이러한 유도체는 당해 분야의 숙련가에 의해 용이하게 선택될 수 있다. 상기 생성물은 효소에 의해 가수분해되고 상이한 분자량의 2개의 펩타이드 그룹을 함유하는 밀 단백질의 추출물을 포함한다.

적합한 가수분해된 식물 단백질의 유도체는 시판되고 있다. 예를 들어, 가수분해된 밀 단백질은 상품명 Integrissyme로 시판되고 있다. 이 시판품은 가수분해된 밀 단백질(20%), 폴리솔베이트 20(5%) 및 글리세린(5%)을 함유하는 수용성 제제이다.

가수분해된 식물 단백질을 함유하는 시판품의 양은 일반적으로 조성물의 총 중량의 0.25 내지 5중량%의 범위이고, 바람직한 농도는 0.5 내지 3중량%의 범위이다. 따라서, 조성물은 가수분해된 식물 단백질을 0.05 내지 1%, 바람직하게는 0.1 내지 0.6% 함유할 수 있다.

비타민 C

비타민 C 및 이의 유도체는 세포 외부에서의 콜라겐의 합성 및 분비에 영향을 미친다. 이 과정에서, 비타민 C는 2가지 주요한 기능을 갖는다:

(1) 비타민 C는 트로포콜라겐의 하이드록실화를 초래하여 세포 외부에서 이의 분비를 개시하는 2개 효소, 라이실 및 프롤릴 하이드록실라제의 보조인자이다(Freiberger et al 1980, Murad et al 1981 및 1983, Tajima 및 Pinnell 1982).

(2) 비타민 C는 상이한 염색체 상에 위치한 3개의 유전자(proa₁, proa₂및 proa₃)의 복제를 조절하여 콜라겐의 생합성을 개시한다(Pinnell et al 1987).

비타민 C 및 이의 유도체(예를 들어, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트)와 본 발명의 조성물과의 배합물은, 상기 화합물을 사용하여 콜라겐을 비효소적 글리코실화에 대해 보호하면서 결합 조직의 콜라겐의 합성을 자극할 수 있기 때문에 추가로 항-글리코실화제를 개선시켜 노화 방지 치료 방법을 개선시킬 수 있다.

상기한 화합물, 특히 메틸실란올 만누로네이트, 가수분해된 식물 단백질 및, 임의로, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트의 배합물을 피부 노화 증상의 치료에 유효한 양으로 수용액 또는 크림내에 사용하는 것은 시험관내 생화학적 시험 및 세포 배양 시험에 의해 확증되었다.

가수분해된 비타민 C 또는 아스코르브산은 식물로부터 추출하거나 화학적으로 합성할 수 있다. 이는 비교적 높은 환원력을 가지며, 수용액내에서 분자 산소, 알칼리 금속의 존재하에 및 특정 pH 조건하에 산화에 대해 매우 민감하다. 이것이 상기 물질이 이의 분자 형태로 바람직하게는 2.5 내지 4의 산성 pH 조건하에 사용될 경우에 바람직한 이유이다.

또한, 상기 물질의 보다 안정한 유도체, 예를 들어, 아르코르빌 염 또는 아스코르빌 에스테르 및 비타민 C의 캡슐화된 형태: 마그네슘 아스코르베이트(Vitacedone^RUCIB) 또는 마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG^R, Jan Dekker) 또는 아스코르빌 및 이나트륨 설페이트(Nikkol VC-SS^R, Jan Dekker) 또는 아스코르빌 팔미테이트 또는 아스코르브산 폴리펩타이드(Vitazyme C^R, Brooks) 또는 아스코르빌메틸실란올 펙티네이트(Ascorbilane^R, Exsymol) 또는 벽이 비타민 C를 캡슐화하고 있는 카라게닌으로 제조된 미소구체(Lipotec) 또는 벽이 마그네슘 아스코르빌 포스페이트를 캡슐화하고 있는 아테로콜라겐으로 제조된 미소구체(Thallaspheres Coletica)가 또한 존재한다. 예를 들어, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트를 사용할 경우, 수성 매질내에서의 물질의 안정성을 위한 수성 상의 pH는 바람직하게는 7 내지 8이다.

하나 이상의 비타민 C 또는 이의 유도체의 상기한 형태 또는 이의 캡슐화된 형태를 0.25 내지 30%의 양으로 수용액 또는 크림내에 사용하는 것은 유효하다. 2종 이상의 상이한 형태의 비타민 C를 배합물로 사용할 경우, 화합물의 총 농도가 조성물의 중량을 기준으로 하여 20%를 초과하지 않는 것이 바람직하다.

식물성 추출물

수득할 수 있는 적합한 오일로부터의 식물성 공급원은 헬리안투스 안누스(해바라기) 및 헤데라 헬릭스를 포함한다. 피트산은 쌀겨로부터 추출할 수 있다. 본 발명의 조성물은 헬리안투스 안누스로부터 추출한 오일, 헤데라 헬릭스로부터 추출한 오일 및 쌀겨로부터 추출한 피트산을 각각 0.005 내지 0.05%, 바람직하게는 0.01 내지 0.04% 함유할 수 있다. 헬리안투스 안누스의 추출물(3%), 헤데라 헬릭스의 추출물(2%), 쌀겨로부터의 피트산(2%), 글리세린(40%), PEG-8(15%), 카프릴릴 글리콜(4.5%), PPG-1/PEG-9/라우릴 글리콜 에테르(3%), 부틸렌 글리콜(3%) 및 나트륨 폴리아크릴레이트(0.5%)를 함유하는 수성 조성물은 상품명 Osmopur로 Sederma로부터 시판되고 있다. 이 시판 조성물은 본 발명의 조성물내에서 전체 조성물의 0.5 내지 2%, 바람직하게는 약 1%의 수준으로 사용할 수 있다.

올리고펩타이드 및 유도체

올리고펩타이드 또는 유도체는 바람직하게는 팔미토일 올리고펩타이드이다. 이 물질은 다음과 같은 시판품으로 제공한다:

글리세릴 폴리메타크릴레이트, 프로필렌 글리콜, 및 올리고펩타이드가 글리신, 히스티딘 및 라이신 잔기로 구성된 팔미토일 올리고펩타이드를 함유하는 Biopeptide CL(Sederma).

글리세릴 폴리메타크릴레이트, 부틸렌 글리콜, 및 올리고펩타이드가 아르기닌, 글리신, 아스파르트산 및 세린 잔기로 구성된 팔미토일 올리고펩타이드를 함유하는 Biopeptide FN(Sederma).

아르기닌 및 라이신 잔기로 구성된 폴리펩타이드인 Amadorine(Solavia).

사카로마이세스 폴리펩타이드인 Citogard(Pentapharm).

본 발명의 제형내에 포함될 수 있는 시판품(예: Biopeptide CL)의 양은 일반적으로 조성물의 총 중량의 1 내지 20중량%, 바람직하게는 2 내지 7중량%의 범위이다.

비타민 E

비타민 E 및 이의 유도체는 수개의 형태로 사용할 수 있으며, 이는 당해 분야의 숙련가에 의해 어려움없이 선택될 수 있다. 예를 들어, DL-토코페롤 또는 토코페릴 아세테이트가 바람직하다.

본 발명의 조성물내에서의 비타민 E의 농도는 일반적으로 조성물의 총 중량의 0.05 내지 2중량%의 범위이다.

비타민 A

비타민 A 및 이의 유도체는 수개의 형태로 사용할 수 있으며, 이는 당해 분야의 숙련가에 의해 어려움없이 선택될 수 있다. 예를 들어, 레티놀, 레티닐 아세테이트 또는 레티닐 팔미테이트가 바람직하다.

본 발명의 조성물내에서의 비타민 A의 농도는 일반적으로 조성물의 총 중량의 0.02 내지 1중량%의 범위이다.

조성물의 제형화

상기한 화합물의 배합물은 바람직하게는 물/오일 에멀젼(물/실리콘 오일 에멀젼 포함), 오일/물 에멀젼 또는 다중 물/오일/물 에멀젼 또는 위(pseudo)-에멀젼(증점제를 사용한, 수성 상 중의 유성 상인 2개의 불혼화성 상의 분산액)내에 혼입할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 조성물은 물/오일 에멀젼, 오일/물 에멀젼, 또는 다중 물/오일/물 에멀젼 또는 위-에멀젼의 형태로 존재한다. 이러한 에멀젼 또는 위-에멀젼은 다음 물질을 포함할 수 있다:

(a) 유성 상

본 발명의 에멀젼의 유성 상은, 예를 들어, 이하의 것을 함유할 수 있다:

탄화수소유, 예를 들어, 파라핀 또는 광유, 예를 들어, 이소헥사데칸, 천연유, 예를 들어, 해바라기유, 앵초유, 호호바유, 수소첨가된 피마자유, 아보카도유 또는 수소첨가된 팜유,

천연 트리글리세라이드, 예를 들어, 카프릴산/카프린산 트리글리세라이드, 카프릴산/카프린산/리놀산 트리글리세라이드 또는 카프릴산/카프린산/석신산 트리글리세라이드,

실리콘 오일, 예를 들어, 사이클로메티콘, 디메티콘 또는 디메티콘올,

지방산 에스테르, 예를 들어, 미리스틸 미리스테이트 또는 이소프로필 미리스테이트,

지방 알콜, 예를 들어, 헥사데실 알콜 또는 스테아릴 알콜,

납, 예를 들어, 밀랍, 파라핀, 카르나우바 납 또는 지랍,

라놀린 및 이의 유도체(오일, 알콜, 납), 또는

이의 혼합물.

본 발명의 조성물을 포함하는, 특히 바람직한 물/오일 에멀젼, 또는 오일/물 에멀젼 또는 다른 매질내에서, 유성 상은 상기 조성물의 약 5 내지 약 30중량%, 바람직하게는 약 10 내지 약 20중량%에 상당한다.

(b) 유화제

본 발명의 조성물에서 사용할 수 있는 유화제는 당해 분야에 공지되고 물/오일 또는 오일/물 에멀젼에서 사용가능한 유화제 가운데서 선택할 수 있다.

물/오일 및 오일/물 조성물은 이하의 것을 포함한 화장품에 허용되는 유화제 가운데서 선택된 유화제를 사용함으로써 제조할 수 있다:

세스퀴올레에이트, 예를 들어, 솔비탄 세스퀴올레에이트,

실리콘 오일을 기재로 한 유화제, 예를 들어, 실리콘 폴리올,

솔비탄 에스테르 및 에톡실화 솔비탄 에스테르, 예를 들어, 솔비탄 스테아레이트 또는 폴리솔베이트,

글리세릴 에스테르, 예를 들어, 글리세릴 스테아레이트 또는 글리세릴 이소스테아레이트,

수크로에스테르, 예를 들어, 사카로스 코코에이트 및 사카로스 디스테아레이트,

에톡실화 지방 알콜, 예를 들어, 에톡실화 헥사데실 알콜 또는 에톡실화 스테아릴 알콜,

에톡실화 대두 스테롤, 또는

상기한 유화제의 혼합물.

오일/물, 물/오일 조성물에 존재할 수 있는 유화제의 양은 바람직하게는 상기 조성물의 약 0.5 내지 약 15중량%의 범위내이다. 본 발명의 다중 물/오일/물 에멀젼에 존재할 수 있는 유화제의 양은 바람직하게는 상기 조성물의 약 7 내지 약 20중량%의 범위내이다.

(c) 제형 중의 다른 성분

본 발명의 조성물은 이하의 것과 같은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 하나 이상의 다른 성분을 추가로 포함할 수 있다:

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.2 내지 약 4중량% 범위의 양의 에멀젼 안정화용 전해질, 예를 들어, 염화나트륨 또는 황산마그네슘 또는 시트르산나트륨,

바람직하게는 상기 조성물의 약 1 내지 약 10중량% 범위의 양의 습윤제, 예를 들어, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 솔비톨,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.05 내지 약 1중량% 범위의 양의 증점제, 예를 들어, 크산탄 검, 셀룰로스의 유도체, 카보머, 아크릴산의 공중합체, 검 공피,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.01 내지 약 0.5중량% 범위의 양의 킬레이트화제, 예를 들어, 사나트륨 EDTA,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.5 내지 약 10중량% 범위의 양의 연화제, 예를 들어, 지방산 에테르 또는 지방산 에스테르,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.01 내지 약 5중량% 범위의 양의 수화제, 예를 들어, D-판텐올, 히알루론산, 나트륨 피롤리돈 카복실레이트,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.05 내지 약 3중량% 범위의 양의 피부 표면 상에의 연전을 촉진시키는 필름-성형제, 예를 들어, 폴리메타크릴레이트,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.5 내지 약 5중량% 범위의 양의 유기 일광 차단제, 예를 들어, 옥틸 메톡시신나메이트, 부틸 메톡시디벤조일메탄, 이소아밀 메톡시신나메이트, 옥틸 디메틸 PABA, 옥틸 살리실레이트, 벤조페논 3, 옥틸 트리아존, 에틸 4-폴리에톡시-5-아미노벤조에이트, 이소프로필 4-디벤조일-메탄, 2-페닐-벤즈이미다졸-5-설폰산, 2-하이드록시-4-메톡시-벤조페논-5-설폰산,

불용성 안료, 예를 들어, 이산화티탄, 금홍석 이산화티탄, 예추석 이산화티탄,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.5 내지 약 5중량% 범위의 양의 무기 썬스크린제, 예를 들어, P 25^R(Degussa)와 같은 화성 초미세 이산화티탄, Sun Veil^R(Ikeda)과 같은 초미세 이산화티탄, 실리콘, 아미노산, 레시틴 또는 금속함유 스테아레이트에 의해 표면 처리된 초미세 이산화티탄, 초미세 산화철, 실리콘, 아미노산, 레시틴 또는 금속함유 스테아레이트에 의해 표면 처리된 산화철, 산화아연, UFZO^R(Cosmo Trends Corporation)와 같은 초미세 산화아연, 이산화티탄으로 피복된 운모,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.05 내지 약 3중량% 범위의 양의 방부제, 예를 들어, 메틸 p-하이드록시벤조에이트, 프로필 p-하이드록시벤조에이트, 페녹시에탄올, 2-브로모-2-니트로프로판-1,3-디올 또는 이의 혼합물,

바람직하게는 상기 조성물의 약 0.05 내지 약 0.6중량% 범위의 양의 향료,

바람직하게는 상기 조성물의 미량 내지 약 3×10^-3중량% 범위의 양의 착색제, 또는

이의 혼합물.

본 발명은 단지 실례로서 제공된 다음 실시예에 의해 설명한다. 다음 실시예에서는, 각각의 성분은 전체 조성물의 중량을 기준으로 하여 백분율로 표시한다.

실시예 1: 나이트 크림(물/실리콘 오일 에멀젼)

유성 상의 조성

성분	%
사이클로메티콘	5
사이클로메티콘/디메티콘 코폴리올	10
디메티콘 및 디메티콘올	5
PPG-3의 미리스틸 에테르	1.5
토코페릴 아세테이트	0.5
레티닐 팔미테이트(주 1)	0.15
베헨산 에스테르의 디메티콘	1
(1) 레티닐 팔미테이트의 산화를 방지하기 위해 유성 상의 다른 화합물과 함께 이를 가열하지 않는 것이 바람직하다. 이를 유화 초기에 상에 혼입하는 것이 바람직하다.

수성 상의 조성

성분	%
사나트륨 EDTA	0.05
염화나트륨	0.8
글리세린	5
PEG-8	1.5
메틸 p-하이드록시벤조에이트	0.25
프로필 p-하이드록시벤조에이트	0.15
페녹시에탄올	1
마그네슘 아스코르빌 포스페이트(주 2)(Nikkol VC-PMG)	1
가수분해된 밀 단백질(20%), 폴리솔베이트 20(5%) 및 글리세린(5%)을 함유하는 수성 제제(주 2)(Integrissyme)	0.5
메틸실란올 만누로네이트의 1% 수용액(주 2)(Algisium C)	3
Red FD＆C No. 40	1.5×10^-3
향료(주 2)	0.15
물	충분량
(2) 감열성 화합물

상기한 감열성 화합물을 제외한 유성 및 수성 상을 따로따로 50±1℃로 가열한다. 다음, 이를 미세와동형 교반기(Rayneri^R, France)에 의해 강하게 교반하면서 혼합한다. 에멀젼의 온도가 30℃로 떨어질 때까지 일정한 속도로 계속 교반한다. 이 단계에서, 균질화 속도를 감소시키고 감열성 성분을 혼입한다. 크림이 완전히 균질하게 될 때까지 계속 유화시킨다.

실시예 2: 데이 크림(다중 물/오일/물 에멀젼)

1차 에멀젼의 조성

성분	%
유성 상
이소헥사데칸	2
세틸 옥타노에이트	5
사이클로메티콘	3.5
세틸디메티콘 코폴리올	4.2
옥틸 메톡시신나메이트	2
부틸 메톡시디벤조일메탄	0.5
토코페릴 아세테이트	0.5
레티닐 팔미테이트	0.15
수성 상
시트르산나트륨	0.4
황산마그네슘	0.5
사나트륨 EDTA	0.1
크산탄 검	0.1
마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PGM)	1
판텐올	1
프로필렌 글리콜	2.5
PEG-8	2
메틸 p-하이드록시벤조에이트	0.2
프로필 p-하이드록시벤조에이트	0.1
2-브로모-2-니트로프로판-1,3-디올	0.05
향료	0.15
물	44

외부 수성 상의 조성

성분	%
히알루론산나트륨	0.03
PEG-8	2
메틸-p-하이드록시벤조에이트	0.2
프로필 p-하이드록시벤조에이트	0.1
2-브로모-2-니트로프로판-1,3-디올	0.05
폴리글리세릴메타크릴레이트/프로필렌 글리콜/PVM/MA 공중합체	5
Red FD＆C No. 40	1.5×10^-3
세테쓰-20	2.1
대두 스테롤 PEG-25	0.9
메틸실란올 만누로네이트의 1% 수용액(Algisium C)	3
가수분해된 밀 단백질(20%), 폴리솔베이트 20(5%) 및 글리세린(5%)을 함유하는 수성 제제(Integrissyme)	0.5
폴리메틸메타크릴레이트	0.8
물	충분량

다중 에멀젼을 문헌[참조: Tokgoz 1996]에서 이미 기술한 2단계 유화 방법을 사용하여 제조한다. 이 방법에서는 1차 물/오일 에멀젼을 제조하고 상기 에멀젼을 친수성 유화제, 증점제, 활성제 및 이외의 성분을 함유하는 외부 수성 상에 분산시킨다. 1차 물/오일 유화액을 제조하는 유화의 제1 단계에서는, 상(오일 및 수성 상)을 실시예 1에서와 같이 가열하고 혼합한다. 그러나, 제2 단계에서, 1차 에멀젼을 주위 온도에서 외부 상에 방울방울 혼입하고(혼입 시간=20분) 매우 낮은 속도로 교반한다(균질화 시간=10분).

실시예 3: 데이 크림(액체 결정 상을 함유하는 오일/물 에멀젼)

유성 상의 조성

성분	%
사이클로메티콘	5
디옥틸 석시네이트	3
폴리아크릴아미드(45%)/C13, C14 이소파라핀(25%)/라우레쓰-7(8%)(Sepigel 305)	3
수소첨가된 레시틴	2
토코페릴 아세테이트	0.5
레티닐 팔미테이트	0.15
팔미트산	1
C12, C16 알콜	1

수성 상의 조성

성분	%
나일론-12	2
검 공피	0.3
사나트륨 EDTA	0.05
PEG-8	1.5
메틸 p-하이드록시벤조에이트	0.25
프로필 p-하이드록시벤조에이트	0.15
O-시멘-5-올	0.1
마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PGM)	1
가수분해된 밀 단백질(20%), 폴리솔베이트 20(5%) 및 글리세린(5%)을 함유하는 수성 제제(Integrissyme)	0.5
메틸실란올 만누로네이트의 1% 수용액(Algisium C)	3
Red FD＆C No. 40	1.5×10^-3
향료	0.40
물	충분량

실시예 1의 제제에 대한 제조 방법과 동일한 제조 방법을 사용한다.

실시예 4: 바디 로션(오일/물 에멀젼)

유성 상의 조성

성분	%
이소헥사데칸	8
광유	5
솔비탄 스테아레이트	2
세테쓰 20	2
토코페릴 아세테이트	0.5
레티닐 팔미테이트	0.15
사이클로메티콘	1
헥사데실 알콜	0.5

수성 상의 조성

성분	%
글리세린	5
프로필렌 글리콜	5
메틸 p-하이드록시벤조에이트	0.25
프로필 p-하이드록시벤조에이트	0.15
나트륨 카보머	0.35
마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG)	1
가수분해된 밀 단백질(20%), 폴리솔베이트 20(5%) 및 글리세린(5%)을 함유하는 수성 제제(Integrissyme)	0.5
메틸실란올 만누로네이트의 1% 수용액(Algisium C)	3
Red FD＆C No. 40	1.5×10^-3
향료	0.15
물	충분량

실시예 5: 데이 크림(유화제 비함유 오일/물 에멀젼)

유성 상의 조성

성분	%
이소헥사데칸	15
미리스틸 미리스테이트	3
밀랍	1.5
스쿠알렌	0.075
이산화티탄	1
토코페릴 아세테이트	0.5
레티닐 팔미테이트	0.15
대두 스테롤	0.5
마카다미아유	0.2
사이클로메티콘	2
헥사데실 알콜	1.5

수성 상의 조성

성분	%
폴리글리세릴메타크릴레이트	4.8
프로필렌 글리콜	0.12
PEG-8	3
메틸 p-하이드록시벤조에이트	0.25
프로필 p-하이드록시벤조에이트	0.15
O-시멘-5-올	0.1
2-브로모-2-니트로프로판-1,3-디올	0.05
사나트륨 EDTA	0.05
나트륨 카보머	0.35
마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC- PMG)	1
가수분해된 밀 단백질(20%), 폴리솔베이트 20(5%) 및 글리세린(5%)을 함유하는 수성 제제(Integrissyme)	0.5
메틸실란올 만누로네이트의 1% 수용액(Algisium C)	3
Red FD＆C No. 40	1.5×10^-3
향료	0.15
물	충분량

실시예 6

유성 상의 조성

성분	%
카프릴산/카프린산 트리글리세라이드	3
세테아릴 옥타노에이트	4
스테아르산	1.5
세틸 알콜	1
글리세릴 스테아레이트	2
사이클로메티콘	2
토코페릴 아세테이트	0.5
레티닐 팔미테이트	0.15
PEG-10 대두 스테롤	1
밀랍(Cera alba)	1.2
세틸 팔미테이트	3

수성 상의 조성

성분	%
사나트륨 EDTA	0.05
메틸 글루세쓰-20	3
글리세레쓰-26	2
아크릴레이트/C10-30 알킬아크릴레이트 가교중합체(Pemuten TRI)	0.2
바이오사카라이드 검-1(Fucogel 1000 pp)	5
PEG-8	1.5
메틸 p-하이드록시벤조에이트	0.3
프로필 p-하이드록시벤조에이트	0.2
O-시멘-5-올	0.1
페녹시에탄올	0.90
히알루론산나트륨	0.1
수산화나트륨	0.22
마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG)	1
글리세린	3
가수분해된 밀 단백질(20%), 폴리솔베이트 20(5%) 및 글리세린(5%)을 함유하는 수성 제제(Integrissyme)	0.5
메틸실란올 만누로네이트의 1% 수용액(Algisium C)	3
글리세린(40%), PEG-18(15%), 카프릴릴 글리콜(4.5%), 헬리안투스 안누스의 추출물(3%), PPG-1-PEG-9-라우릴 글리콜 에테르(3%), 부틸렌 글리콜(3%), 헤데라 헬릭스의 추출물(2%), 쌀겨로부터 추출한 피트산(2%) 및 폴리아크릴레이트(0.5%)를 함유하는 수성 제제(Osmopur)	1
향료	충분량
물	충분량

시험관내 글리코실화 억제 시험

메틸화된 실란올의 유도체(Algisium C^R), 가수분해된 밀 단백질(Integrissyme^R) 및 상기 유도체를 포함하는 본 발명의 조성물을 처음에 일련의 시험관내 생화학 분석에 적용시켜 이의 유효성을 측정한다. 사용된 시험 프로토콜은 문헌[참조: Rosenberg et al 1979, Schinder 및 Kohn 1980]에 공지되어 있고 실험실 조건하에 단백질의 비효소적 글리코실화를 유도하기 위해 고안된 간단한 시험이다.

사용된 시험관내 분석은 소 혈청 알부민(BSA) 및 D-글루코스 및 포스페이트 완충액(pH 7.4) 중의 활성 화합물의 샘플을 37℃에서 3주 동안 배양하는 것으로 이루어져 있다. 이 배양으로 가교 결합된 BSA를 수득한다. 글리코실화되면, BSA를 산성 가수분해 반응에 적용시켜 5-하이드록시메틸푸르알데히드(HMF)의 반응성 카보닐 그룹을 유리시킨다. BSA를 배지로부터 침전 및 제거한 후에, 티오바르비투르산(TBA)을 첨가하여 착색 반응을 일으켜 글리코실화된 단백질의 양에 비례하는 아민/헥소스 결합의 양을 측정한다. 유효한 항-글리코실화 화합물은 배지내의 유리 HMF의 양 또는, 다른 표현으로 글리코실화의 양을 감소시킨다.

상기 시험의 결과는 도 1 내지 3에 제시한다. 이들 도면에서 글리코실화율은 사용된 활성 화합물의 농도의 함수로서 나타낸다. 도 1의 경우, 활성 물질은 단독으로 사용된 메틸실란올 만누레이트(Algisium C)이다. 도 2의 경우, 활성 물질은 단독으로 사용된 가수분해된 밀 단백질 추출물(Integrissyme)이다. 도 3은 메틸실란올 만누레이트 단독(Algisium C 농도 3%), 또는 가수분해된 밀 단백질 추출물 단독(Integrissyme 농도 0.5%), 또는 가수분해된 밀 단백질 추출물 단독(Integrissyme 농도 0.5%), 또는 메틸실란올 만누레이트(Algisium C 농도 3%)와 가수분해된 밀 단백질 추출물(Integrissyme 농도 0.5%)의 혼합물을 포함하는 조성물을 사용하여 수득된 결과를 제시한다.

도 1, 2 및 3에서 제시한 바와 같이, 본원에 기술한 바와 같은 2개의 항-글리코실화제의 배합물은 이들 중 단지 한 화합물만을 다량으로 사용하는 경우보다 효과적으로 글리코실화를 억제하는 것으로 보인다.

사실, 가수분해된 밀 단백질 추출물(Integrissyme^R)의 항-글리코실화 활성은 단독으로 시험할 경우, 메틸실란올 만누로네이트(Algisium C^R)의 것보다 높은 것으로 보인다. Algisium C^R의 경우, 7%보다 높은 농도에서 겨우 글리코실화의 유의한 감소를 수득한다. Algisium C^R는 3%의 농도로 사용할 경우 무효한 것으로 입증되었다. 그러나, Algisium C^R(3%)와 Integrissyme^R(0.5%)과의 배합물은 배지내에서 유리 HMF를 현저하게 감소시킨다.

생체내 콜라겐 합성에 미치는 본 발명의 조성물의 영향

콜라겐의 합성의 자극 및 콜라겐 원섬유간의 비가역적 가교 결합의 형성의 제한에 미치는 본 발명의 조성물(마그네슘 아스코르빌 포스페이트와 함께 2개의 항-글리코실화제를 포함)의 영향을 사람 섬유아세포 상에서 생체내 평가한다.

사용된 세포는 제4 계대(R4)에서 사용되고 다음 배지: MEM/M199, 3/1(Gibco 31570021/2115130), 중탄산나트륨(Gibco 25080060) 1.87mg/ml, L-글루타민(Gibco 25030024) 2mmol/ℓ, 페니실린(Polylabo 60703) 50UI/ml, 및 태아 송아지 혈청(v/v Gibco 10106151) 10%내에서 5% CO₂분위기하에 37℃에서 배양된 정상 사람 섬유아세포(NHDF 784)이다.

무균 배양 배지 중의 6개의 제제를 다음과 같이 제조한다:

제제 1: 비타민 C(1mg/ml)(Vit-C),

제제 2: 마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG-1%)(Vit-C PMG),

제제 3: D-글루코스(1%),

제제 4: 마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG-1%) + 메틸실란올 만누로네이트(Algisium C-3%)(혼합물 1),

제제 5: 마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG-1%) + 가수분해된 밀 단백질(Integrissyme-0.5%)(혼합물 2) 및

제제 6: 마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG-1%) + 메틸실란올 만누누로네이트(Algisium C-3%) + 가수분해된 밀 단백질(Integrissyme-0.5%)(혼합물 3).

섬유아세포를 4개의 12웰 플레이트(콜라겐 합성에 대한 2개의 플레이트, 글리코실화에 대한 2개의 플레이트)에 9×10⁴세포/웰의 비율로 분포시키고 생성물의 분포 전에 24시간 동안 배양한다(〉 80% 콘플루언스).

당해 연구에서 사용된 혼합물은 무균 배양 배지로 제조된 상기 원액 중의 1/40 희석액이다. 이는 예비 시험에 따른 비-세포독성 용량이다. 비타민 C는 20㎍/ml(113μmol/ℓ)의 최종 농도로 시험한다. 이 농도는 생체내에서 프로콜라겐의 합성을 자극하는데 최적이다(Freiberger et al 1980). 글루코스는 배지 중의 '콜드' 글루코스의 양의 2배에 해당하는 0.1%의 최종 농도로 시험한다. 각각의 실험 조건은 3개씩(3개의 배양 웰) 수행한다. 대조군 웰에는 배양 배지 1.2ml를 단독으로 제공한다.

시험 배지를 24시간 간격으로 새롭게 갈면서 72시간 동안 배양을 지속한다. 대사 라벨링은 L-[2,3-³H]-프롤린 40μCi/웰(33.3μCi/ml), 44Ci/mmol(16.3TBq/mmol, Amersham, TRK628) 또는 D-[5-³H]-글루코스, 14.3Ci/mmol(503GBq/mmol, Amersham, TRK290)을 사용하여 마지막 24시간 동안 발생한다.

배양 말기에, 배양 배지를 함유하는 플레이트를 동결/해동 사이클에 적용시킨다. 각각의 웰의 배지(1.2ml)를 샘플링하고, 각각의 웰을 빙수 1ml로 2회 세척한다. 각각의 웰의 배양 배지 및 세척액을 함께 가한다. 이들은 유리 방사능 및 가용성 세포와 세포외 단백질내에 혼입된 방사능을 함유한다. 불용성 물질을 함유하는 각각의 웰의 바닥을 다시 세척하고 플레이트를 얼음내에 보관한다. 가용성 분획의 단백질을 10% w/v 트리클로로아세트산(TCA) 0.3용적에 의해 침전시킨 다음, 3% TCA로 2회 세척한다(유리 방사능의 제거). 단백질을 42개의 각각의 칼럼(Micro-spin G-25, Pharmacia) 상에서 원심분리시켜 정제한다. 이 작업으로 잔류하는 미량의 유리 방사능을 제거하고 샘플내에 존재하는 TCA(콜라게나제 억제제)를 제거한다.

다음, 가용성 및 불용성 단백질 샘플을 Tris-HCl 50mmol/ℓ, CaCl₂5mmol/ℓ 완충액(최종 농도) 중의 초고순도 콜라게나제 5단위(Sigma, C0775)에 의해 37℃에서 3시간 동안 분해한다. 사용된 콜라게나제는 중성 프로테아제 활성(카제이나제) 0.2단위/mg에 대해 콜라게나제 1390단위/mg을 함유한다. 분액을 취하여 단백질내에 혼입된 방사능을 카운팅하고 TCA를 사용하여 최종 침전시켜 콜라게나제-불감성 물질로부터 콜라게나제에 의해 분해된 물질(콜라겐 기원)을 분리한다. 혼입된 방사능은 가용성/불용성 단백질 분획의 축적 후에 액체 신틸레이션에 의해 LKB 1211 Rackbeta 카운터로 카운팅한다.

상기 시험의 결과는 2개의 항-글리코실화제(Algisium C^R및 Integrissyme^R)와 마그네슘 아스코르빌 포스페이트와의 배합물이 새로운 콜라겐 분자의 합성, 즉, 새롭게 합성된 콜라겐 분자내로의 방사능표지된 프롤린의 혼입을 매우 현저하게 증강시킴을 제시한다(도 4). 또한, 이 경우에는 배지내에서의 글리코실화된 콜라겐의 증가, 즉, 콜라겐 매트릭스내로의 방사능표지된 글루코스의 혼입을 수반하지 않는다(도 5).

도 4에서 비타민 C(단독), 마그네슘 아스코르빌 포스페이트(단독), 혼합물 2 및 혼합물 3이 콜라겐의 합성을 자극하는 것으로, 즉, 신합성된 콜라겐내의 방사능표지된 '프롤린'의 양이 현저하게 증가하는 것으로 나타난다. 2개의 항-글리코실화제 및 마그네슘 아스코르빌 포스페이트의 배합물(혼합물 3)을 사용하여 최선의 결과를 수득한다.

대조적으로, 혼합물 1은 실질적으로 콜라겐 합성의 자극에 영향을 미치지 않으며, 이는 콜라겐간에 형성된 비가역적 가교 결합의 양을 증가시킨다(도 5). 이 결과는 바람직하게는 마그네슘 아스코르빌 포스페이트와 배합된 2개의 항-글리코실화제간의 공동 상승 효과에 의해 설명할 수 있다.

결론적으로, 혼합물 3에 의해 유도된 콜라겐의 신합성은 글리케이션율의 증가를 수반하지 않는다. 즉, 글리케이션율은 콜라겐의 상이한 양에 대해 동일하게 유지된다. 그럼에도 불구하고, 혼합물 3은 엄밀히 말해 글리케이션을 억제하지 않으므로, 본 발명자들은 콜라겐의 신합성 및 글리케이션의 조절(제한적으로)에 미치는 중요한 영향을 추론할 수 있다.

본 발명의 조성물의 항-오염 활성

본 발명의 조성물의 항-오염 활성은 다음 시험으로 입증한다.

21 내지 57세의 12명의 여성 지원자가 시험에 참가하였다. 각각의 지원자의 전완 상에서 3개의 영역을 선택한다. 제1 영역에 실시예 6의 생성물을 2㎕/㎠ 비율로 도포한다. 메틸실란올 만누로네이트(Algisium C), 가수분해된 밀 단백질(Integrissyme), 마그네슘 아스코르빌 포스페이트(Nikkol VC-PMG) 또는 헬리안투스 안누스 및 헤데라 헬리스의 추출물 및 피트산을 함유하는 제제(Osmopur)를 함유하지 않는 것을 제외하고는 실시예 6과 동일한 조성물을 제2 영역에 2㎕/㎠ 비율로 도포한다. 제3 영역은 비처리한다. 20분 후에, 탄소의 현탁액을 각각의 영역에 2㎕/㎠ 비율로 도포한다. 40분 후에, 영역을 물로 세정하고, 종이 손수건으로 닦아내고 공기 중에서 말린다. 10분 후에, 각각의 영역에 접착 테이프를 붙여 떼어내어 각각의 영역내의 피부 상에 잔류하는 탄소를 제거한다. 다음, 접착 테이프를 비디오 현미경으로 조사하여 각각의 영역에 잔류하는 탄소의 양을 측정한다. 결과를 다음 수학식에 의해 계산되는 보호율 P로서 표현한다.

P = [(ZNT - ZT)/ZNT] × 100

상기식에서, ZNT는 비처리된 영역에 잔류하는 탄소의 양이고 ZT는 처리된 영역에 잔류하는 탄소의 양이다. 모든 지원자의 제1 영역에 대해 계산된 P의 평균값은 74%이고 제2 영역에 대해 계산된 P의 평균값은 57%이다. 이 결과는 통계학적으로 유의하다(스튜던트 t-시험에 의한 p〈0.001). P의 값이 보다 높을수록 조성물이 대기 오염에의 노출의 불리한 결과를 억제하는데 보다 유효하다.

참고 문헌

Lehninger A.L. Principles of Biochemistry Worth Publications Inc 3rd. Edition, 1984

Cerami A., Vlassara H. 및 Brownlee M., Pour la Science, July 72-79(1987)

Brownlee M., Vlassara H., Kooney A., Ulrich P. 및 Cerami A., Science, June, 1629-1631(1986)

Shin D.H., Hayase F. 및 Kato H., Agric. Biol. Chem., 52 1451-1458(1988)

Igaki N., Yamada H., Oimomi M. 및 Kasuga M., Clinica Chimica Acta, 199 113-116(1991)

Freiberger H., Grove D., Sivarajah A. 및 Pinnell S., J. Invest. Dermatol., 75 425-430(1980)

Murad S., Sivarajah A. 및 Pinnell S., Biochem. Biophys. Res. Commun., 101 868-875(1981)

Murad S., Tajima S., Johnson G.R., Sivarajah A. 및 Pinnell S., J. Invest. Dermatol., 81 158-162(1983)

Pinnell S., Murad S. 및 Darr D., Arch. Dermatol., 123 1684-1687(1987)

Tokgoz N.S., Doctoral Thesis in Pharmaceutical Sciences of the Universite de Paris-Sud, Paris XI, France, 1996

Rosenberg H., Modrak J.B., Hassing J.M., Al-Turk W.A. 및 Stohs S.J., Biochem Biophys Res Commun., 91 498-501(1979)

Schinder S.L. 및 Kohn R.R., J. Clin. Invest., 66 1179-1181(1980)

Claims

전체 조성물의 0.01 내지 0.2중량%의 메틸화된 실란올의 하나 이상의 유도체 및 전체 조성물의 0.05 내지 1중량%의 가수분해된 보리 단백질, 가수분해된 밀 단백질 또는 가수분해된 귀리 단백질인 가수분해된 식물 단백질의 하나 이상의 유도체의 배합물을 포함하는, 피부 노화 증상을 치료하기 위한 피부과용 및/또는 화장용 조성물.
제1항에 있어서, 메틸화된 실란올의 유도체가 메틸실란올 만누로네이트인 조성물.
제1항에 있어서, 가수분해된 식물 단백질의 유도체가 가수분해된 밀 단백질의 추출물인 조성물.
제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 비타민 C 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체를 추가로 함유하는 조성물.
제4항에 있어서, 비타민 C의 유도체가 마그네슘 아스코르빌 포스페이트인 조성물.
제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 식물성 공급원으로부터 추출된 하나 이상의 오일 및/또는 피트산을 추가로 함유하는 조성물.
제6항에 있어서, 하나 이상의 오일이 헬리안투스 안누스(Helianthus annuus) 및/또는 헤데라 헬릭스(Hedera Helix)로부터 추출되고 피트산이 쌀겨로부터 추출되는 조성물.
제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 올리고펩타이드 또는 이의 유도체를 추가로 함유하는 조성물.
제8항에 있어서, 올리고펩타이드의 유도체가, 올리고펩타이드가 글리신, 히스티딘 및 라이신 잔기 또는 아르기닌, 글리신 아스파르트산 및 세린 잔기로 구성되거나; 올리고펩타이드가 아르기닌 및 라이신 잔기로 구성된 폴리펩타이드이거나 올리고펩타이드가 사카로마이세스 폴리펩타이드인 팔미토일 올리고펩타이드인 조성물.
제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 있어서, 비타민 E 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체를 추가로 함유하는 조성물.
제10항에 있어서, 비타민 E 또는 이의 유도체가 DL-토코페롤 또는 토코페릴 아세테이트인 조성물.
제1항 내지 제11항 중의 어느 한 항에 있어서, 비타민 A 및/또는 하나 또는 다수의 이의 유도체를 추가로 함유하는 조성물.
제12항에 있어서, 비타민 A 또는 이의 유도체가 레티놀, 레티닐 아세테이트 또는 레티닐 팔미테이트인 조성물.
제4항 또는 제5항에 있어서, 비타민 C 및/또는 이의 유도체가 조성물 중 0.25 내지 30중량%의 양으로 존재하는 조성물.
제6항 또는 제7항에 있어서, 각각의 하나 이상의 식물성 오일 및/또는 피트산이 조성물 중 약 0.005 내지 0.05중량%의 양으로 존재하는 조성물.
제7항에 있어서, 헬리안투스 안누스로부터 추출된 오일이 조성물 중 약 0.01 내지 0.04%의 양으로 존재하고, 헤데라 헬릭스로부터 추출된 오일이 조성물 중 약 0.01 내지 0.04%의 양으로 존재하고 피트산(존재할 경우)이 조성물 중 약 0.01 내지 0.04%의 양으로 존재하는 조성물.
제10항 또는 제11항에 있어서, 비타민 E 및/또는 이의 유도체가 조성물 중 약 0.05 내지 2중량%의 양으로 존재하는 조성물.
제12항 또는 제13항에 있어서, 비타민 A 및/또는 이의 유도체가 조성물 중 약 0.02 내지 1중량%의 양으로 존재하는 조성물.
제1항 내지 제18항 중의 어느 한 항에 있어서, 조성물이 물/오일 에멀젼, 물/실리콘 오일 에멀젼, 오일/물 에멀젼, 다중 물/오일/물 에멀젼 또는 위(pseudo)-에멀젼의 형태임을 특징으로 하는 조성물.
제19항에 있어서, 조성물이 물/실리콘 오일 에멀젼 또는 다중 물/오일/물 에멀젼의 형태임을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제20항 중의 어느 한 항에 따른 조성물의 의약품으로서의 용도.
제1항 내지 제20항 중의 어느 한 항에 따른 피부 노화 증상 치료용 또는 대기 오염에의 노출 결과 치료용 의약품을 제조하기 위한, 전체 조성물의 0.01 내지 0.2중량%의 메틸화된 실란올의 하나 이상의 유도체 및 전체 조성물의 0.05 내지 1중량%의 가수분해된 보리 단백질, 가수분해된 밀 단백질 또는 가수분해된 귀리 단백질인 가수분해된 식물 단백질의 하나 이상의 유도체의 배합물의 용도.