KR20010005705A

KR20010005705A - 동물의 장기로부터 추출가능한 단백질을 이용하여 종양괴사인자 (ｔｎｆ)를 과잉생산하는 특성을 나타내는 질병 치료용 약물을 제조하는 방법

Info

Publication number: KR20010005705A
Application number: KR1019997008773A
Authority: KR
Inventors: 파네라이알베르토; 메로니피에르루이지; 바르토렐리알베르토
Original assignee: 스피니엘로 살바토르; 제테시스 에스.피.아.
Priority date: 1997-03-25
Filing date: 1998-03-16
Publication date: 2001-01-15
Also published as: JP2001518107A; WO1998042366A1; ITMI970694A1; HUP0002304A2; PL335829A1; HUP0002304A3; EP0969859A1; BR9808625A; IL132013A0; CA2284548A1; IT1290828B1; TR199902331T2; NO994622D0; NO994622L; CN1251043A; NZ337985A; US6255283B1; AU7207298A

Abstract

과염소산을 이용하여 포유동물의 간, 특히 염소의 간으로부터 추출가능한 단백질은 종양괴사인자 (TNF)의 혈중 농도를 저하시킬 수 있으며 다발성 경화성, 류마티스성 관절염, 패혈성 쇼크 및 TNF를 과잉 생산하는 특성을 나타내는 기타 질병들을 치료하는데 사용될 수 있다.

Description

동물의 장기로부터 추출가능한 단백질을 이용하여 종양괴사인자 (ＴＮＦ)를 과잉생산하는 특성을 나타내는 질병 치료용 약물을 제조하는 방법{The use of proteins extractable from animal organs for the preparation of medicaments for the treatment of pathological conditions characterized by hyperproduction of tumor necrosis factor (TNF)}

카켁틴 (cachectin)으로도 알려진 TNF는 일종의 염증조장성 사이토키닌 (proflammatory cytokine)으로서 IL-1과 함께 감염과 암에서 면역반응을 유발하는 인자들 및 기타 사이토키닌의 캐스케이드를 개시하는데 중요한 역할을 한다. 이러한 반응은 감염과 물질대사 반응을 완전히 해결한다는 점에서는 매우 만족스럽지만 제어불능한 방법으로 일어나게 되면 숙주를 손상시킬 수 있다. TNF의 과잉 생산은 패혈성 쇼크 (septic shock), 종양성 악액질, 자동면역 질환 (류마티스성 관절염, 다발성 경화증), 수막염구균성 패혈증 (meningococcal septicemia), 크론즈 질병 (Chron's disease) 등과 같은 다수의 질병과 관련이 있는 것으로 여겨진다.

국제특허공개공보 WO92/10197호는 과염소산을 이용하여 포유동물의 장기로부터 추출해낼 수 있는 단백질 부분 및 이를 항암제로 이용하는 방법을 개시하고 있다. 이들 단백질 부분내에는 3개의 주성분이 동정될 수 있는데, 겔 전기영동법에 의하면 이들 각각의 분자량은 50, 14 및 10KDa이다. 이하, 이들 세개의 주성분을 포함하는 정제된 추출물을 UK 101로서 부르기로 한다. 유일한 단백질이 아니라면 적어도 주성분이며 소정의 활성을 담당하는 14KDa 성분의 씨퀀스가 국제특허공개공보 WO96/02567호에 개시되어 있는데, 이 씨퀀스는 새로이 확인된 씨퀀스가 HSP (Heat Shock Protein) 자체가 속해있으며 일명 카페로닌 (chaperonin)이라 알려진 단백질 종류에 속한다는 것을 입증한 다른 저자 (Levy-Favatier, Eur. Biochem. 1903, 212 (3) 665-73)에 의해 개시된 것과 관련이 있는 것으로 판명되었다.

국제특허공개공보 WO92/10197호 및 WO96/02567호에 개시된 단백질들 (이하, UK 114라 칭함)은 카페로닌 또는 유사 단백질들에서는 이전에 발견되지 않았던 특성들을 나타낸다. 특히, 상기 단백질들이 TNF의 혈중 농도를 현저하게 낮춤으로써 TNF를 과잉 생산하는 특성을 나타내는 질병들을 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.

본 발명은 동물의 장기로부터 추출가능한 단백질을 이용하여 종양괴사인자 (TNF)를 과잉 생산하는 특성을 나타내는 질병 치료용 약물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 특히 정제된 단백질인 UK 114의 이용방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 UK114와 매우 높은 상동성, 즉 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 동질성을 나타내는 단백질들을 이용하는 방법도 포함한다.

단백질 UK 101 및 UK 114에 대한 생체외 테스트 및 생체내 테스트를 후술하는 바와 같이 실시하였는데, 생체외 테스트는 말초 혈액으로부터의 단핵성 백혈구에 대하여 실시되었고, 생체내 테스트는 쥐의 비세포 (splenocyte)에 의한 생산에 있어서의 UK 101의 투여 효과 측정에 의해 실시되었다.

생체외 테스트

UK 114 (1㎍/㎖ 및 10㎍/㎖)의 존재 또는 부재하에서, 리포폴리사카라이드 (100/ng/㎖)를 이용하여 말초혈액으로부터의 단핵성 백혈구 (PBMC) 1밀리온/㎖을 4시간 동안 생체외적으로 자극하였다.

TNF 농도를 ELISA법으로 측정하였다.

결과

PBMC에 의한 TNF의 생산이 UK 114의 첨가로 인해 저해되었다.

TNF 생산은 UK 114 1㎍/㎖를 투여하였을 때 90%까지, 그리고 10㎍/㎖를 투여하였을 때 70%까지 감소하였다.

생체내 테스트

치료:

15일에 걸쳐서 쥐 1마리당 100㎍의 UK 101을 격일로 투여 (7회 주사)하여 치료하였다.

1차로 투여한지 48시간 후에, 그리고 마지막으로 투여한지 48시간 후에 TNF를 측정하였다.

세포의 준비 및 TNF의 측정

10㎍/㎖의 다클론성 미토겐 콘카나발린-A (With-A)의 존재하에, 37℃ 및 5% CO₂에서 48시간 동안 비세포 (4×10⁶세포/㎖)를 인큐베이트하였다.

상등액으로 배출된 TNF 생산량을 면역효소법 (ELISA)으로 측정하였다.

결과

UK 101로 치료한 결과 쥐의 비세포에 의한 TNF의 생산이 현저하게 감소하였다. 이러한 효과는 1차로 투여한지 48시간 후의 결과에서 분명하게 나타났으며, 7번째로 투여한지 48시간 후까지도 지속되었다.

	생리식염수	UK-101
1차 투여 48시간 후의 TNF (pg/㎖)	387±72	247±30°
7차 투여 48시간 후의 TNF (pg/㎖)	366±46	264±76,1°

°= p 값

따라서, UK 101과 UK 114는 TNF를 과잉 생산하는 특성을 나타내는 질병, 즉 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 종양 발생, 패혈성 쇼크, 크론스 질병 등의 진행 과정을 변화시키거나 그의 발병을 예방할 수 있다.

본 발명의 단백질은 적당한 제형으로 투여될 수 있는데, 바람직한 것은 주사에 의해 투여하는 것이다.

투여 방법 (투여량, 투여 횟수 등)은 환자의 상태, 병세와 같은 여러가지 요인에 따라서 달라질 수 있다. 그러나, 통상 하루 투여량으로 1 내지 100㎎이 적당하다.

Claims

과염소산으로 포유동물의 간으로부터 추출가능한 단백질을 이용하여 TNF를 과잉 생산하는 특성을 나타내는 질병의 예방 및 치료용 약물을 제조하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 단백질이 하기의 씨퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 사용된 단백질이 제2항 기재의 씨퀀스를 갖는 단백질과 80% 이상의 동질성을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.