ITMI970694A1 - Uso di proteine estraibili da organi animali per la preparazione di medicamenti per il trattamento di condizioni patologiche - Google Patents
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Description
La presente invenzione riguarda l'uso di proteine estraibili da organi animali per la preparazione di medicamenti per il trattamento di condizioni patologiche caratterizzate da iperproduzione di Fattore di Necrosi Tumorale (TNF).
Il TNF, noto anche come cachettina, è una citochina proinfiammatoria e gioca un ruolo centrale nell'iniziare, assieme alla IL-1, la cascata di altre citochine e fattori che attivano risposta immunitaria nei processi infettivi e nel cancro. Questa risposta è fondamentale per una completa risoluzione dei processi infettivi e dei processi metastatici, ma può avvenire in modo incontrollato, causando danni all'ospite. Una iperproduzione di TNF è stata implicata in molte situazioni patologiche, quali lo shock settico, la cachessia tumorale, le malattie autoimmuni (artrite reumatoide, Sclerosi multipla), la setticemia meningococcica,morbo di Chron etc..
In WO/9210197 sono state descritte frazioni proteiche estraibili con acido perclorico da organi di mammiferi, e il loro uso come agenti antitumorali. All'interno di queste frazioni potevano essere riconosciute tre componenti principali, di peso molecolare di 50, 14 e 10 KDa su gel elettroforesi.L'estratto purificato contenente queste tre componenti sarà di seguito definito con la sigla UK 101. La sequenza della componente proteica a 14 KDa, che è la principale, se non l'unica, responsabile delle attività descritte, è riportata in 96/02567 ed è risultata correiabile a quella descritta da altri autori (Levy-Favatier, Eur. Biochem. 1903, 212 (3) 665-73) che hanno ipotizzato 1'appartenenza delle nuove sequenze identificate alla famiglia delle proteine note come chaperonine,a cui appartengono le stesse HSP.
Le proteine descritte in WO 92/10197 e quelle WO 96/02567 (indicate di seguito con la sigla UK 114) presentano comunque proprietà mai riscontrate per le chaperonine o in proteine analoghe. Si è ora trovato in particolare che tali proteine sono in grado di abbassare significativamente i livelli ematici di TNF e possono pertanto essere utilizzate per il trattamento di condizioni patologiche caratterizzate da iperproduzione di TNF.
L'invenzione riguarda preferibilmente l'uso della proteina UK 114 purificata.
Inoltre l'invenzione comprende anche l'uso di proteine presentanti un grado di omologia rispetto a UK 114 di almeno l'80%, preferibilmente di almeno 90%.
L'attività delle proteine UK 101 e UK 114 è stata messa in evidenza in vitro. su leucociti mononucleati da sangue periferico e in vivo, valutando l'effetto della somministrazione di UK 101 in splenociti di topo sulla produzione di TNF, come di seguito riportato.
Esperimenti in vitro
Leucociti mononucleati del sangue periferico (PBMC), alla concentrazione di 1 milione/ml erano stimolati in vitro con lipopolisaccaride (100/ ng/ml), per 4 ore, in assenza o presenza di UK 114 (1 pg/ml e 10 pg/ml).
Il TNF veniva dosato con ELISA.
Risultati
La produzione di TNF da aperte di PBMC veniva inibita dall'aggiunta in vitro di UK 114.
La diminuzione era del 90% alla dose di UK 114 di 1 pg/ml e del 70% alla dose di UK 114 di 10 μ/ml.
Esperimenti in vivo
Trattamento:
Sono stati trattati topi con 100 pg/topo di UK 101 a giorni alterni per 15 giorni (7 iniezioni).
Il TNF è stato dosato 48 ore dopo la prima iniezione e 48 ore dopo l'ultima somministrazione.
Preparazione delle cellule e dosaggio del TNF
Gli splenociti (4 x IO6 cellule/ml)sono stati incubati in presenza di 10 pg/ml del mitogeno policlonale Concanavalina-A (Con-A), per 48 ore, a 37eC, 5% ∞2·
La quantità di TNF prodotto e rilasciato nel sovranatante è stata valutata utilizzando un metodo immunoenzimatico (ELISA).
Risultati
Il trattamento con UK 101 diminuisce in modo significativo la produzione ' di TNF da parte degli splenociti di topi. L'effetto è evidente 4& ore dopo la prima somministrazione e continua ad essere presente anche 48 ore dopo la settima somministrazione.
TNF,pg/ml
Si.ritiene pertanto che UK 101 e UK.114 siano in grado di modificare il decorso o prevenire condizioni patologiche caratterizzate da iperproduzione di TNF, quali sclerosi multipla, artrite reumatoide, forme tumorali, schock settico,morbo di Chron etc..
Le proteine dell'invenzione possono essere somministrate ricorrendo ad opportune formulazioni,per lo più iniettabili.
Le modalità di somministrazione (dosi, frequenza di somministrazione,ecc.) saranno determinate caso per caso, a seconda di diversi fattori quali condizioni del paziente, stadio della malattia,ma è comunque da attendersi un intervallo di dosaggio giornaliero conpreso tra 1 e 100 mg..
Ser Val
Claims (3)
- RIVENDICAZIONI 1. Uso di proteine estraibili con acido pèrclorico da fegato di mammiferi, per la preparazione di medicamenti per la prevenzione e il trattamento di patologie caratterizzate da iperproduzione di TNF.
- 2. Uso secondo la rivendicazione 1, in cui la proteina ha la seguente sequenza:121 Val Glu ILE Glu Ala Ile Ala Val Gin Gly Pro Leu Thr Thr Ala 116 Ser Val
- 3. Uso secondo la rivendicazione 1, in cui le proteine utilizzate hanno un'omologia di almeno l'80% rispetto alla proteina della rivendicazione 2.
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