KR20000010591A - 항b형간염백신의안정화정제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 포유 동물에 투여시 포유 동물이 B형 간염 감염증에 대하여 면역성을 갖도록 하는 안정화된 B형 간염 바이러스의 항원성 표면 단백질을 함유하는 안정화된 항B형 간염 백신 정제 및 상기 정제의 제조 방법에 관한 것이다. 상기 안정화의 열쇠는 C₅H₁₀O₅, 또는 아라비아 검이다.

Description

항Ｂ형 간염 백신의 안정화 정제

발명의 요약

본 발명은 B형 간염을 억제하기 위하여 후에 투여될 수 있는 표면 항원의 안정화 방법에 관한 것이다. 구체적으로는 이 항원은 정제 형태이고 냉장을 요하지 않으며 그의 설하 흡수로 항B형 간염의 주사에 대한 필요성을 없애준다. 이것은 안정제를 통하여 성취된다.

B형 간염은 일반적으로 바이러스 감염으로 인한, 때로 유독 제제로 인한 간의 염증이다. 구체적으로는 B형 간염은 B형 간염 바이러스에 의해 야기되는, 일반적으로 인큐베이션 시간이 50 내지 160일로 긴 바이러스성 질환이며 일반적으로 감염된 혈액, 혈액 파생물의 주사에 의해 또는 오염된 주사바늘, 란셋 또는 다른 기구의 사용에 의해 전달된다. B형 간염은 바이러스성 A형 간염과 임상적으로, 그리고 병리학적으로 유사하지만, 교차 방어 면역성은 없다.

일반적으로 B형 간염 질환은 백신을 정맥내 또는 피하 주사하여 억제한다. 그러나 백신은 그의 활성을 유지시키기 위하여 냉장되어야 한다. 본 발명은 안정화되어 냉장을 요하지 않는 항B형 간염 정제로 이루어진다. 상기 신규 정제는 안정화된 B형 간염 표면 항원으로 이루어진다.

따라서 적당한 냉장의 결핍으로 인하여 주사를 통한 B형 간염 백신에 정상적으로 접근하지 못하는 개인들은 항B형 간염 백신 정제에 접근할 것이다. 이것은 특히 제3 세계 국가에 사는 개인에게 있어서 사실이다.

또한 상기 정제는 고통스러운 주사에 대한 필요성을 없애주고 간염 및 HIV를 포함하는 다양한 질환에 오염된 주사바늘로 인한 가능한 감염의 위험성을 감소시킨다.

본 발명의 원리는 설하 림프관총이 항원성 표면 단백질을 흡수함으로써 전체 소화관 및 간을 효과적으로 우회한다는 사실에 기초한다. 림프관총은 결국 항상성 기작을 수반하여 표면 단백질을 모세혈관, 이어서 상대정맥으로 옮길 것이고 여기에서 표면 단백질은 전신적으로 분포하게 될 것이다. 따라서 상기 전신적으로 분포하게 하는 방법은 피하 주사를 통하여 수득되는 결과와 동일하다.

구체적으로는 설하 림프관총에 허용가능한 임의의 물질 (즉 그의 성분 중 어느 것의 직경도 림프모세관의 직경 미만임)은 간으로 들어가는 대정맥을 통과하지 않지만 결국 흉관에 모인다. 이 물질 (예를 들어 항원성 표면 단백질)은 흉관으로부터 상대정맥 (간을 우회함)을 통하여 혈류에 침투하여 우심방 내로 직접적으로 흘러들어가 여기에서 전신적으로 순환된다.

본 발명의 잇점은 냉장의 필요성을 없앰으로써 본 제품을 특히 열대 및 제3 세계 환경으로의 선적용으로 적당하게 만드는 것을 포함하여 많이 있다.

본 발명은 또한 주사의 필요성을 없앰으로써 에이즈와 같은 전염성 질환의 가능성을 감소시킨다. 또한 주사의 고통과 불편함을 없애준다.

마지막으로 본 발명의 방법을 사용하면 제조 비용이 약 60% 감소된다.

바람직한 실시 형태의 상세한 설명

실시예 1

본 발명은 일련의 혼합 단계를 포함한다. B형 간염 백신은 안정화된 설하용 정제의 형태이며 20그램의 동결건조된 B형 간염 항원성 표면 단백질 (97% 이상의 순도)을 2500 밀리리터의 2회 증류된 H₂O; 500그램의 제약학적 등급의 락토스; 및 4그램의 동결건조된 고도 정제된 ("HP") 알부민과 혼합시킨 후 125그램의 Na₂HPO₄및 110그램의 NaH₂PO₄를 40그램의 티메로살과 함께 이 용액 내로 혼합시킨다.

이어서 상기 혼합물을 원액 (Stock Solution)과 합한다. 원액에는 알콜이 없어야 한다. 원액은 증류수, 1250그램의 제약학적 등급의 C₅H₁₀O₅; 7800그램의 제약학적 등급의 NaCl; 및 8,800그램의 제약학적 등급의 Al₂HO₃를 20배 희석시킴으로써 제조한다. 상기 혼합은 약 4.4℃ (40^OF)의 온도 및 약 60%의 상대 습도에서 행해진다. 혼합은 외과적으로 무균인 환경 하에서 행해지며 자동화 장치를 사용하여 행해질 수 있다. 원액에서 중요한 것은 주로 아라비아 검으로 통상 공지된 안정제인 C₅H₁₀O₅이다.

이어서 상기 혼합물을 50%의 락토스 + 50%의 쌀 스타치 (둘 모두 제약학적 등급임)으로 제조된 88.35킬로그램의 부형제 과립 상에 미세 분무한다. 희석물은 11.65킬로그램의 용해된 고체를 함유한다. 이것은 건조 후에 각각 100 mg인 설하용 정제 1,000,000개를 압축시키기에 충분한 전체 1000킬로그램이 된다. 압축시킬 과립의 분무는 상기 양에 있어서 100분 이상의 시간에 걸쳐 수행되어야 한다. 상기 공정 동안 과립의 전체 매스는 완전히 그리고 끊임없이 교반시켜야 한다. 정제는 높은 밀도로 압축시켜야 하지만 혀 아래에서 부서지기에 10분 이상이 걸려야 한다. 전체 공정은 우수 제조 실행 (Good Manufacturng Practice, GMP)의 표준과 정확하게 일치하는 환경에서 행하여야 한다. 이어서 정제를 6 내지 10℃ 사이의 온도에서 진공 건조시킨다.

완제품은 발포제 포장 스트립에서 보관하여야 한다. 완제품은 발포제 포장 후 냉장을 요하지 않으며 실온 내지 28℃에서 안전하게 보관될 수 있다. 그러나, 상기 제품은 6개월 내지 5년의 장기간 동안은 온화한 냉장 (6 내지 12℃) 하에서 보관될 것이 권고된다. 백신은 결코 냉동 상태로 유지되어서는 안된다.

항B형 간염 백신 정제의 표면 항원은 재조합 DNA 방법 및 표준 분자 생물학적 기술을 사용하여 B형 간염 바이러스의 표면을 코딩하는 유전자를 효모의 게놈 내로 삽입시킴으로써 형질전환시킨 효모 배양물로부터 수득된다. 정제된 표면 항원은 약 22 nm의 입자를 형성하는 응집물로서 수득되며 방부제로서 티메로살이 첨가된 (0.5 mg/20g의 투여량) 수산화 알루미늄 겔 (0.5 mg A/3 +/20g의 투여량)에 궁극적으로 흡수된다. 최종 산물의 외관은 방부제 물질이 용해된 인산 완충 염수 (PBS)로 이루어진, 본질적으로 단백질이 없는 투명 상청액과, 다음으로 98% 이상의 항원이 흡수된 침전된 수산화 알루미늄 겔의 2상을 특징으로 하는, 용기의 바닥에 침전된 백색/회색 물질이다. 진탕시키면 안정화에 사용되는 재료인, 수분 동안 유지되는 불투명 회색 현탁물이 발생한다. 발효 및 정제 방법은 최적화하고 대규모화 및 표준화하여 배치마다 일관성 및 재연성을 유지하였다.

상기 정제의 효능을 시험하기 위하여 24마리의 햄스터에 대하여 표준 ELISA 시험을 사용하여 B형 간염 항원이 없는지를 확인하였다. 12마리의 햄스터의 설하 환경에 햄스터의 중량에 상응하는 정제의 양으로, 제1일, 제7일 및 제30일째의 각각의 백신 접종일에 정제화 백신의 용액을 2회 발랐다. 대조군은 처리하지 않았다. 최종 투여 7일 후 B형 간염 항체가 표준 ELISA 시험을 사용하여 B형 간염으로 처리된 햄스터의 혈청에서 검출되었다. 12마리의 대조군은 음성으로 남아 있었다. 그 후 모든 24마리의 햄스터를 B형 간염 바이러스로 오염시켰다. 정제화 백신으로 처리한 동물 중 어느 것도 이 질환에 걸리지 않았지만, 반면 전체 대조군은 B형 간염에 감염되었다.

Claims (19)

1. B형 간염 항원성 표면 단백질을 안정제인 C₅H₁₀O₅와 혼합시키는 것을 포함하는, 이후에 B형 간염 감염증을 억제하기 위하여 포유 동물에 투여될 수 있는 항원성 표면 단백질의 안정화 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질과 상기 C₅H₁₀O₅가 약 75 중량% 85 중량%의 B형 간염의 항원성 단백질 대 약 15 중량% 내지 25 중량%의 C₅H₁₀O₅의 범위에서 함께 존재하는 것인 방법.
3. 제2항에 있어서, 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질과 상기 C₅H₁₀O₅가 약 80 중량%의 B형 간염 항원성 표면 단백질 대 약 20 중량%의 C₅H₁₀O₅의 비율로 함께 존재하는 것인 방법.
4. 제3항에 있어서, 상기 포유 동물이 사람인 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 혼합 후 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질과 C₅H₁₀O₅를 이후에 설하용 정제로 제조하는 것인 방법.
6. 제5항에 있어서, 상기 C₅H₁₀O₅가 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질과 혼합되기 전에 원액으로 존재하는 것인 방법.
7. 제6항에 있어서, 20그램의 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질을 1,250그램의 제약학적 등급의 C₅H₁₀O₅를 함유하는 상기 원액과 혼합시키는 것인 방법.
8. 제7항에 있어서, 20그램의 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질을 동결건조시키고 물, 락토스 및 알부민과 혼합시켜 상기 원액과 혼합시키기 전에 일차 혼합물을 제조하는 것인 방법.
9. 제8항에 있어서, Na₂HPO₄, NaHPO₄및 티메로살을 상기 원액과 혼합시키기 전에 상기 일차 혼합물에 첨가하는 것인 방법.
10. 제9항에 있어서, 상기 원액이 2회 증류된 물, NaCl 및 Al₂HO₃을 또한 함유하는 것인 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 일차 혼합물과 상기 원액과의 혼합이 약 0.44℃ (4^OF) 및 약 60%의 상대 습도에서 행해지는 것인 방법.
12. 제11항에 있어서, 상기 일차 혼합물과 상기 원액의 배합물을 약 50%의 락토스 및 약 50%의 쌀 스타치로 구성된 부형제 상에 미세 분무시켜 최종 혼합물을 제조하는 것인 방법.
13. 제12항에 있어서, 상기 최종 혼합물을 설하용 정제로 압축시키고 상기 정제를 6 내지 10℃ 사이의 온도에서 진공 건조시키는 것인 방법.
14. 후에 B형 간염 바이러스에 노출될 미감염 포유 동물에게 투여시 B형 간염을 억제할 수 있는, B형 간염 항원성 표면 단백질 및 안정제인 C₅H₁₀O₅를 함유하는 안정화된 항B형 간염 백신 정제.
15. 제14항에 있어서, 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질이 약 75 중량% 내지 85 중량%의 B형 간염의 항원성 표면 단백질 대 약 15 중량% 내지 25 중량%의 C₅H₁₀O₅로 존재하는 정제.
16. 제15항에 있어서, 상기 B형 간염의 항원성 표면 단백질이 약 80 중량%의 B형 간염의 항원성 표면 단백질 대 약 20 중량%의 C₅H₁₀O₅로 존재하는 정제.
17. 제16항에 있어서, 상기 미감염 포유 동물이 사람인 정제.
18. 제16항에 있어서, 상기 정제가 설하용인 정제.
19. 제18항에 있어서, 상기 포유 동물의 혀 아래에서 용해되는 데 기껏해야 약 10분이 걸리는 정제.