KR19980032015A - 세파졸린 제조 방법 - Google Patents

Abstract

7-페닐아세트아미도-3-할로게노메틸-3-세펨-4-카복실산 에스테르를 2-메틸-5-머캅토-1,3,4-티아디아졸과 반응시키고, 반응 생성물을 페놀 화합물의 존재하에 탈에스테르화 반응시키고, 결과의 7-페닐아세트아미도-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산을 페니실린 G-아미다아제로 탈아실화하고, 효소적 반응 생성물을 1H-테트라졸-1-아세트산 및 산 할로겐화물 또는 알킬 할로탄산염으로부터 제조된 혼합된 산 무수물과 반응시킴을 포함하는, 세파졸린 제조 방법이 개시되어 있다.

Description

[발명의명칭]

세파졸린 제조 방법

[발명의상세한설명]

[발명의목적]

본 발명은 항생물질로서 광범위하게 사용되는 명명되는 세파졸린의 제조를 위한 신규방법에 관한 것이다.

[발명이속하는기술분야및그분야의종래기술]

세파졸린은 하기 화학식(5)의 화합물이다.

[화학식 5]

세파졸린을 제조하기 위한 통상적인 방법은 출발물질로서 7-아미노-3-아세톡시메틸-3-세펨-4-카복실산(7-ACA)를 사용하는 것이 일반적이다.

그러나, 통상적인 제조기술에 따라서, 7-ACA의 3번 위치중의 3-아세톡시메틸기의 아세톡시 잔기대신에 (2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오기를 도입하는 반응은 수득율, 선택성이 불량하고, 이 반응중에서 형성되는 부산물의 실제량은 바라는 생성물의 정제를 방해한다.

추가로, 통상적인 제조 기술에서, 세파졸린 합성을 위한 중간체, 즉 7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산의 수득율 및/또는 순도는 낮고, 고순도 및 양호한 수득율의 바라는 생성물 세파졸린을 생성하기 위해 중간체 화합물은 정제되어야 한다.

[발명이이루고자하는기술적과제]

본 발명의 목적은 선행 기술기법의 상기 단점, 즉 저선택성 및 저수득율을 극복하는데 있고, 적절한 방법으로 고순도의 세파졸린을 제조하기 위한 신규방법을 제공하는 것이다.

[발명의구성및작용]

본 발명은,

(i) 유기용매 및 물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 하나이상의 용매중에서 염기의 존재하에 화학식(1)의 화합물과 화학식(8)의 2-메틸-5-머캅토-1,3,4-티아디아졸을 반응시키거나, 유기용매 및 물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 하나이상의 용매중에서 화학식(1)의 화합물과 화학식(8)의 화합물의 염기성 염을 반응시켜 화학식(2)의 화합물을 수득하고;

(ii) 페놀 화합물의 존재하에서 화학식(2)의 화합물을 탈에스테르화 반응시켜 화학식(3)의 7-페닐아세트아미도-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산을 수득하고;

(iii) 고정화된 페니실린 G-아미다아제로 페닐아세틸기를 분할하기 위해 화학식(3)의 화합물을 탈아실화 반응시켜 화학식(4)의 7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산을 수득하고,

(iv) 유기용매중에서 염기의 존재하에 혼합된 산 무수물과 화학식(4)의 화합물을 반응시키고, 여기서 혼합된 산 무수물은 화학식(6)의 1H-테트라졸-1-아세트산과 화학식(7)의 산 할로겐화물 또는 알킬 할로탄산염을 반응시켜 제조하는 단계를 포함하는, 화학식(5)의 제조하는 방법을 제공한다:

[화학식 1]

[화학식 2]

[화학식 3]

[화학식 4]

[화학식 5]

[화학식 6]

[화학식 7]

[화학식 8]

상기식에서, X는 할로겐 원자를 나타내고, R¹은 카복실보호기를 나타내고, Y는 할로겐 원자를 나타내고, R²는 유기용매중에 염기의 존재하에서 하나이상의 할로겐 원자로 치환될 수 있는 1 내지 7개의 탄소원자를 갖는 저급 알킬기 또는 하나이상의 할로겐 원자로 치환될 수 있는 1 내지 7개의 탄소원자를 갖는 저급 알콕시기를 나타낸다.

본 발명의 방법을 나타내는 상기 반응식에서, 화학식(1)의 X는 바람직하게 염소원자, 브롬원자 또는 요오드원자이고, 화학식(1) 및 (2)의 R¹은 바람직하게 p-메톡시벤질, 디페닐메틸 또는 t-부틸이다.

본 발명에 따른 방법은 출발물질로서 화학식(1)의 7-페닐아세트아미도-3-할로게노메틸-3-세펨-4-카복실계 에스테르 유도체(이후로는 화합물(1)로 지칭한다)을 사용하고, 고수득율 및 고선택성의 세파졸린을 수득한다.

본 발명의 방법은 하기 반응식(1)으로 나타낸다.

[반응식 1]

제 1 단계

상기 반응식(1)에 예시한 바와 같이, 본 방법의 제 1 단계는 유기용매 및 물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 하나이상의 용매중에서 염기의 존재하에서 화합물(1)과 2-메틸-5-머캅토-1,3,4-티아디아졸(8)을 반응하거나 화합물(1)과 화합물(8)의 염기성 염을 반응하여 화학식(2)의 화합물을 수득한다.

본 발명에 출발물질로서 사용되는 화합물(1)은 공지되어 있고, 쉽게 이용가능한 화합물이다.

화학식(1)의 X는 할로겐 원자를 나타낸다. 할로겐 원자의 실례는 염소원자, 브롬원자, 요오드원자등을 포함한다.

화학식(1)의 R¹은 카복실 보호기를 나타낸다. 카복실 보호기 R¹과 같이, 문헌[Chapter 5 of Protective Groups in Organic Synthesis, by Theodora W. Greene, 1981, John Wiley Sons, Inc.]에 언급된 매우 다양한 보호기가 사용된다.

따라서, 임의의 보호기는 제 1 단계의 반응동안에 제거되지 않는한 사용가능하고, 하기 기술한 제 2 단계중에서 제거될 수 있다. 따라서, 예를 들면, 벤질, p-메톡시벤질, p-니트로벤질, 디페닐메틸, 트리메톡시벤질, t-부틸, 메톡시에톡시메틸, 피페로닐, 디톨일메틸, 트리메톡시디클로로벤질, 트리클로로메틸, 비스(p-메톡시페닐)메틸등이 언급될 수 있다.

화합물(1)을 화학식(2)의 7-페닐아세트아미도-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실계 에스테르 유도체(이후로는 화합물(2)로 지칭한다)로 전환하기 위한 과정은 염기의 존재하에서 화합물(1)과 화학식(8)의 2-메틸-5-머캅토-1,3,4-티아디아졸을 혼합하거나, 화합물(1)과 상기 제조된 화합물(8)의 염기성 염을 혼합하는 것을 포함한다.

화합물(8)은 또한 공지되어 있고, 쉽게 이용가능한 화합물이다. 더욱이, 화합물(8)의 염기성 염의 제법은 통상적인 방법 예를 들면, 수산화나트륨과 같은 염기의 필요량으로 중화하여 쉽게 수행될 수 있다.

화합물(8) 또는 그의 염기성 염의 양은 광범위하게 선택될 수 있지만, 일반적으로 화합물(1)의 몰당 약 1 내지 약 100몰, 바람직하게 약 1 내지 약 10몰이다.

제 1 단계의 반응에 사용될 수 있는 염기는 탄산수소 나트륨, 탄산수소 칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨과 같은 알칼리 금속의 탄산수소염, 탄산염 및 수산화물, 암모니아, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, t-부틸, 특히 디- 또는 트리(C₁내지 C₄알킬)아민과 같은 저급 알킬기로 치환되는 2차 또는 3차 아민, 및 상응하는 그의 4차 암모늄 염을 포함한다. 상기 화합물(8)의 염기성 염의 제조에 사용되는 염기는 또한 상기 언급한 염기로부터 선택될 수 있다.

상기 염기의 양은 일반적으로 화합물(1)의 몰당 약 1 내지 약 100몰, 특히 약 1 내지 약 10몰이다. 상기 언급된 염기는 그들의 둘이상의 적합한 혼합물로 사용될 수 있다.

본 발명의 방법의 제 1 단계에서, 염기성 이온교환수지는 상기 염기로서 사용될 수 있다. 이러한 염기성 이온교환수지는 상기 형태의 반응에 통상적으로 사용되는 염기성 이온교환수지들로부터 적합하게 선택될 수 있고, 화합물(1) 및 화합물(8)의 반응에 효과를 줄 수 있는 임의의 염기성 이온교환수지일 수 있다. 강염기성 및 약 염기성 이온교환수지 둘다가 유용하지만, 일반적으로 약 염기성 이온교환수지를 사용하는 것이 바람직하다.

상기 염기성 이온교환수지의 전형적인 실례는 첫번째로 삼차원의 망상구조를 갖는 거대분자 매트릭스수지를 염화메틸화한다음 결과의 생성물을 아민화하여 제조되는 것을 포함하고, 삼차원 망상 거대분자 매트릭스의 실례는 스트렌과 같은 주성분 단량체 및 디비닐벤젠과 같은 가교결합 단량체의 공중합체, 또는 아크릴계 중합체를 포함한다.

이러한 염기성 이온교환수지는 공지되어 있고, 그 중에서도 문헌[Saishin Kobunshi Zairyo Gijutsu Soran(Manual of Up-to-Date Polymer Materials and Technology), December 9, 1988, Tekku Shuppan Kabushiki Kaisha, pp. 301-304]에 기술되어 있다.

또한, 이들 염기성 이온교환수지는 많은 제조업자로부터 상업적으로 입수가능하다. 전형적으로 시판되는 즉, 본 발명에 유용한 염기성 이온교환수지로서, Diaion WA-10, WA-11, WA-20, WA-21, WA-30(미쯔비시 케미칼 코포레이션), Amberlite IRA-35, IRA-93ZU, IRA-94S(오가노 코포레이션), 및 Lewatit MP-62, MP-64, AP-49, CA-9222(미쯔비시 도아츠 케미칼스 인코포레이티드)가 언급될 수 있다. 상기 기술한것 이외에도, 염기성 이온교환수지인 한 광범위하게 다른 염기성 이온교환수지가 또한 사용될 수 있다.

염기성 이온교환수지의 양은 중요하게 조절될 필요는 없다. 일반적으로 말하여, 화합물(1)의 몰당 약 1 내지 약 100몰, 바람직하게 약 1 내지 약 10몰의 작동능력에 상응하는 양이 사용된다.

제 1 단계의 반응에 사용하기 위한 반응용매는 임의의 용매 또는 임의의 용매 혼합물, 즉 화합물(1), 화합물(8) 및 임의의 양에 염기를 용해시킬 수 있고, 반응을 방해하지 않는다. 이온교환수지는 용해될 필요가 없다는 것을 이해하여야 한다. 따라서, 다른 유기용매중에서 사용될 수 있는 반응용매는 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 디에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤등과 같은 케톤, 포름산 메틸, 포름산 에틸, 포름산 프로필, 아세트산 메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 프로피온산 메틸, 프로피온산 에틸등과 같은 에스테르, 메탄올, 에탄올, 프로판올등과 같은 지방족 알콜, 디에틸 에테르, 디프로필 에테르, 디부틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 디옥산등과 같은 에테르, 디클로로메탄, 디브로모메탄, 클로로포름, 브로모포름, 사염화탄소등과 같은 할로겐화 탄화수소, 니트로메탄, 니트로에탄, 니트로프로판등과 같은 니트로알칸, 아세토니트릴, 프로피오니트릴, 부티로니트릴, 발레로니트릴등과 같은 니트릴 뿐만 아니라 물을 포함한다. 특히 바람직한 것은 상기 언급한 다양한 용매중에서 선택되는 물 또는 수용성 유기용매이다. 상기 용매량은 일반적으로 화합물(1)의 중량부당 약 1 내지 약 100중량부, 바람직하게는 약 5 내지 20중량부이다.

제 1 단계중의 반응은 일반적으로 대기압하에서 실행되지만, 필요하다면 상승된 압력하에서 실행될 수 있다. 상기 반응온도는 일반적으로 -20℃ 내지 110℃이고, 바람직하게는 0℃ 내지 80℃이다. 반응시간은 반응온도, 반응물의 농도 및 사용되는 화합물(8)의 몰수등에 의존하지만, 일반적으로 0.1 내지 24시간이고, 바람직하게는 0.5 내지 8시간이다.

상기 반응에 대해 추가로 언급하면, 화합물(1), 화합물(8) 및 염기를 혼합하는 방법에 특별한 제한은 없다. 전형적으로, 화합물(1)은 상기 언급한 반응용매중에서 분산되어 화합물(8)과 염기를 함유하는 용액이 가해지는 분산액이 제조된다. 그러나, 화합물(1), 화합물(8) 및 염기는 완전히 용해될 필요는 없다. 반응 시스템은 동종 시스템 또는 이종 시스템일 수 있다. 상기 반응은 밀봉 반응기 또는 개방 반응기에서 수행된다. 상기 반응을 완결한 후에, 반응 혼합물을 바람직하다면 약 0℃ 내지 약 10℃로 냉각하고, 생성된 결정체를 여과하여 수집한다. 이런 방법으로, 바라는 화합물(2)을 양적인 수득율로 얻을 수 있다.

제 2 단계

화합물(2)을 화학식(3)(이후로는 화합물(3)이라 지칭함)의 전환하기 위해 일본 공개특허공보(고고쿠) 제 H6-4638호(4638/1994)에 기술된 방법을 활용할 수 있다.

따라서, 이 탈에스테르화 반응은 산의 존재하에서 임의적으로 페놀 화합물중에서 수행된다.

본 발명에 사용되는 페놀 화합물은 페놀, m-크레졸, o-크레졸, p-크레졸등을 포함한다. 하나이상의 페놀게 하이드록실기를 함유하는 다른 화합물을 또한 사용할 수 있다.

이 반응에 사용하기 위한 페놀 화합물의 양은 화합물(2)의 몰당 약 1 내지 약 1,000몰, 바람직하게는 약 5 내지 약 100몰이다.

상기 반응에서, 바람직하다면 반응을 촉진하기 위해 산을 사용할 수 있다. 이 목적으로 사용되는 산은 염산, 황산, 질산, 인산등과 같은 미네랄산, 및 포름산, 아세트산, 프로피온산, 트리플루오로아세트산등과 같은 유기산을 포함한다. 다른 산성 물질이 또한 사용될 수 있다. 촉매로서 작용하는 산은 반응을 촉진하고, 따라서 임의의 적합한 방법에 가해질 수 있다. 더우기, 산의 첨가는 필요하게 필수적인 것은 아니다. 산이 사용될때, 산의 양은 일반적으로 화합물(2)의 중량부당 약 10중량부, 바람직하게는 약 0.01 내지 1중량부이다.

이 반응에서, 용매로서 페놀 화합물이 작용하는 것이 유용하다. 따라서, 상기 반응은 용매를 사용하지 않고 수행될 수 있다. 그러나, 바람직하다면 용매가 사용될 수 있다. 이러한 용매는 다른 유기용매중에서 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 디에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤등과 같은 케톤, 포름산 메틸, 포름산 에틸, 포름산 프로필, 아세트산 메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 프로필, 프로피온산 메틸, 프로피온산 에틸등과 같은 에스테르, 메탄올, 에탄올, 프로판올등과 같은 지방족 알콜, 디에틸 에테르, 디프로필 에테르, 디부틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 디옥산등과 같은 에테르, 디클로로메탄, 디브로모메탄, 클로로포름, 브로모포름, 사염화탄소등과 같은 할로겐화 탄화수소, 니트로메탄, 니트로에탄, 니트로프로판등과 같은 니트로알칸, 아세토니트릴, 프로피오니트릴, 부티로니트릴, 발레로니트릴등과 같은 니트릴 뿐만 아니라 물을 포함한다. 이들 용매는 단독으로 또는 혼합하여 사용될 수 있다.

이 반응은 일반적으로 대기압하에서 실행되지만, 필요하다면 상승된 압력하에서 실행될 수 있다. 상기 반응온도는 일반적으로 -20℃ 내지 110℃이고, 바람직하게는 0℃ 내지 80℃이다. 반응시간은 반응온도, 반응물의 농도, 페놀 화합물의 양, 산 촉매의 양등에 의존하지만, 일반적으로 0.1 내지 24시간이고, 바람직하게는 0.5 내지 8시간이다.

상기 반응에서, 화합물(2) 및 페놀 화합물을 혼합하는 방법, 및 사용되는 산 촉매에는 특별한 제한은 없다. 예를 들면, 화합물(2)은 페놀 화합물이나 상기 용매중의 페놀 화합물의 용액에 가해지고, 임의적으로 상기 산 촉매를 함유할 수 있다. 화합물(2) 및 산은 완전히 용해될 필요는 없다. 상기 반응 시스템은 동종 시스템이나 이종 시스템일 수 있다. 상기 반응은 밀봉 반응기 또는 개방 반응기에서 수행된다.

상기 반응을 완결한 후에, 생성 화합물(3)을 알칼린 수용액으로 추출한다. 알칼린 수용액은 탄산수소 나트륨, 탄산수소 칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨등과 같은 알칼리 금속의 탄산수소염, 탄산염 및 수산화물, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, t-부틸등과 같이 저급 알킬기로 치환된 암모니아, 2차 또는 3차 아민, 특히 디- 또는 트리(C₁내지 C₄알킬)아민, 및 상응하는 그의 4차 암모늄 염의 임의의 수용액일 수 있다. 상기 용액의 농도는 바람직하게는 약 1 내지 약 10중량%이지만 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.

다음으로, 산을 수용액에 가하고 추출하여 결정체의 첨전이 발생하는 값에 도달시킨다. 상기 산은 다양한 산성 물질로부터 적합하게 선택될 수 있고, 예를 들면 염산, 황산, 질산등과 같은 미네랄산, 또는 포름산, 아세트산, 프로피온산등과 같은 유기산일 수 있다. 상기 침전된 결정체는 여과하여 수집함으로써 고효율 및 고순도를 갖는 바라는 화합물(3)을 얻는다.

그러나, 합성 흡수제 또는 이온교환수지로 정제된 후에, 상기 화합물(3)의 수성 추출물은 다음 반응단계에 바로 연결될 수 있다.

상기 정제를 위해 사용될 수 있는 합성 흡수제 또는 이온교환수지는 제 2 단계에 사용되고, 미량의 수성 추출물에 존재하는 페놀 화합물 및 용매를 제거할 수 있는 다양한 합성 흡수제 또는 이온교환수지를 포함한다.

상기 합성 흡착제의 전형적인 예는 스티렌, 메타아크릴산 에스테르, 비닐피리딘 등과 가교결합 단량체(예: 디비닐벤젠)의 용액중합에 의해 수득된 다공성 가교결합된 중합체이다.

사용할 수 있는 이온교환수지는 제 1 단계에서 언급한 염기성 이온교환수지 뿐만 아니라 산성 이온교환수지를 포함한다. 전형적인 산성 이온교환수지는 설폰산, 카복실산 또는 인산 그룹의 삼차원 망상 중합체 매트릭스로의 혼입에 의해 수득될 수 있는 것이다. 상기 삼차원 망상 중합체 매트릭스의 예는 스티렌과 가교결합 단량체(디비닐벤젠, 아크릴 중합체 또는 메타아크릴 중합체)의 공중합체를 포함한다.

위에서 언급한 합성 흡착제 및 이온교환수지는 공지되어 있고 특히 다음 문헌에 개시되어 있다[참조: Saishin Kobunshi Zairyo-Gijutsu Soran(Manual of Up-to-Date Polymer Materials and Technology), 12월 9일, 1988, Tekku Shuppan Kabushiki Kaisha, pp.301-306].

또한, 이러한 합성 흡착제 및 이온교환수지는 몇몇 제조업체들로부터 시판중이다. 본 발명의 실용에서 유리하게 사용할 수 있는 시판중인 제품으로서, Diaion^,HP계, SP계, WK계(WK-10, WK-11, WK-20), WA계(WA-10, WA-11, WA-20, WA-21, WA-30)(제조원: Mitsubishi Chemical Corp.), 앰버라이트^,AXT(Amberlite^,AXT)계 (예: AXT-33, ORGANO CORP.), IRA계(IRA-35, IRA-93ZU, IRA-94S)(ORGANO CORP.) 및 루바티트^,(Lewatit^,) MP-62, MP-64, AP 49 및 CA-9222(Mitsui Toatsu Chemicals, Inc.)를 언급할 수 있다. 다른 일반적으로 사용되는 합성 흡착제 및 이온교환수지도 또한 사용할 수 있다.

이러한 합성 흡착제 또는 이온교환수지를 사용하면, 이를 칼럼에 충전시키고 상기 수성 추출물을 칼럼으로 통과시키는데 유리하다.

제 3 단계

이어서, 화합물(3)을 페닐아세틸 그룹을 분리하기 위한 탈아실화 반응에 의해 부동화 페니실린 G-아미다아제를 사용하여 화학식(4)의 7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산(이후 화합물(4)이라 지칭함)으로 전환시킨다.

이러한 효소반응에 사용하기 위한 부동화 페니실린 G-아미다아제는 임의의 미생물로부터 유도될 수 있다. 따라서, 사용할 수 있는 것은 예를 들면 에스케리치아 속[예: 에스케리치아 콜라이(ATCC-9367, ATCC-11105 및 NCIB-6743)], 바실러스 속[예: 바실러스 가테륨(ATCC-14945)], 알칼리제네스 속[예: 알칼리제네스 패칼리스(MB-10)], 아르트로박터 속[예: 아르트로박터 비스코서스(ATCC-15294)], 노카디아 속[예: 노카디아 sp.(ATCC-13655)], 스트렙토마이세스 속[예: 스트렙토마이세스 암보파스렌스(SPSL-15)] 및 클루이베라 속[예: 클루이베라 시트로펠리아(KY-7844)] 등의 미생물로부터 유도된 효소이다. 상기 효소들과는 별도로, 페니실린 G-아미다아제 활성을 가지는 다른 효소를 또한 사용할 수 있다. 이러한 효소는 공지되어 있으며 특히 다음 문헌에 기재되어 있다[참조: 일본 미심사된 공개특허공보(Kokai) 제 H2-138188 호(90-138188)].

본 발명에 사용하기 위한 부동화 페니실린 G-아미다이제는 상기 페니실린 G-아미다아제를 임의의 불용성 담체(예: 당해 기술분야에 통상적으로 사용되는 수지)상에 통상적으로 공지된 방법에 의해 부동화시켜 제조된 부동화된 효소이다.

본 발명에 사용하기 위한 부동화 페니실린 G-아미다아제는 시판중인 제품이다. 이러한 시판중인 제품의 예로서, PGA-450 및 PGA-150의 상표명(제조원: Boehringer-Mannheim)으로 시판되는 담체 고정화된 페니실린 G-아미다아제를 용이하게 이용할 수 있다.

상기 부동화 페니실린 G-아마다아제의 양은 넓은 범위로부터 적절하게 선택할 수 있으며 엄격하게 조절할 필요는 없으나, 일반적으로 화합물(3) 1 g당 약 1 U 내지 100 kU, 바람직하게는 약 10 U 내지 약 1 kU이다.

이러한 반응의 pH 범위는 6 내지 10, 바람직하게는 7 내지 8이다. pH 조절에 사용할 수 있는 염기는 염기성 이온교환수지, 알칼리 금속의 탄산수소염, 탄산염 및 수산화물(예:탄산수소나트륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등), 암모니아, 저급 알킬 그룹(예: 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, t-부틸 등)에 의해 치환된 2급 또는 3급 아민, 특히 디- 또는 트리(C₁-C₄알킬) 아민, 및 이의 상응하는 4급 암모늄 염 등을 포함한다. 이러한 염기는 단독으로 또는 적절한 혼합물로 사용할 수 있다.

염기성 이온교환수지는 제 1 단계와 관련해서 언급한 것일 수 있다.

pH 조절용 염기의 농도는 반응을 방해하지 않는 한 어떤 제한도 없다.

반응 온도는 효소를 불활성화할 정도로 너무 높아서는 안되며, 일반적으로 약 10 내지 약 40℃ 및 바람직하게는 약 20 내지 약 35℃이다.

일반적으로 반응 용매는 바람직하게는 물이지만, 필요한 경우, 효소, 화합물(3) 및 생성물 화합물(4)이 역효과를 받지 않는 한 저급 지방산 에스테르(예: 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트 등)) 및 저급 지방족 알콜(예: 메탄올, 에탄올, 이소프로필 알콜 등)과 같은 유기 용매를 가할 수 있다. 물 또는 물과 유기 용매의 혼합물의 양은 엄격하게 조절할 필요는 없으나, 넓은 범위로부터 선택할 수 있다. 따라서, 일반적으로 화합물(3)의 중량부당 약 1 내지 약 10,000중량부, 바람직하게는 약 10 내지 약 100중량부이다.

출발 화합물(3), 효소 및 용매가 혼합되는 방법은 반응이 방해받지만 않으면 중요하지 않다. 일반적으로, 화합물(3) 및 효소를 물과 같은 용매에 가하고, 혼합물을 상기 각각 언급한 범위 이내에서 조절된 온도 및 pH에서 교반한다. 이러한 반응은 일반적으로 대기압에서 수행되지만, 필요한 경우, 상승된 압력하에 수행될 수 있다. 반응기는 밀폐된 반응기 또는 개방된 반응기일 수 있다.

반응 시간은 반응 온도, 반응물의 농도 및 화합물(3)에 대한 효소의 양, 그밖에 다른 인자가 의존하나, 일반적으로는 약 0.1 내지 약 24시간 및 바람직하게는 약 0.1 내지 약 8시간이다.

반응의 완결 후, 촉매를 여과제거하고 여과액을 산으로 등전점(pH 3.8)까지 조절하여 화합물(4)를 침전시킨다. 이 결정을 여과에 의해 수거하여 고순도의 화합물(4)를 정량적인 수율로 수득한다.

위에서 기술한 바와 같이, 2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-머캅토 그룹을 7-아미노세팔로스포란산 유도체의 3-위치에서의 메틸 그룹으로 혼입시킴을 포함하는 화합물(4)를 제조하기 위한 통상적인 방법은 반응 효율에 있어서 불리하며, 화합물(4)의 순도 및 경제적인 면이 불만족스럽다.

반면, 상기 제 1, 제 2 및 제 3 단계를 포함하는 본 발명의 방법에 따르면, 중간생성 화합물(4)을 고수율 및 고순도로 수득할 수 있다.

제 4 단계

목적하는 화학식(5)의 화합물을 화합물(4)로부터 수득하기 위해, 소위 화합물(4)이 혼합된 산 무수물과 반응하는 혼합된 산 무수물 방법을 사용한다.

(a) 혼합된 산 무수물의 제조

본 발명에서 사용하기 위한 혼합된 산 무수물은 예를 들면 다음 공정에 의해 제조할 수 있다. 따라서, 화학식(6)의 1H-테트라졸-1-아세트산을 유기 용매중에서 염기의 존재하에 산 할라이드 또는 화학식(7)의 알킬 할로탄산염과 반응시킨다.

[화학식 6]

[화학식 7]

상기식에서,

Y는 염소, 브롬 또는 요오드 원자와 같은 할로겐 원자이고,

R²는 하나 이상의 할로겐 원자로 선택적으로 치환된 탄소수 1 내지 7, 바람직하게는 2 내지 5의 저급 알킬 그룹이거나 또는

R²는 하나 이상의 할로겐 원자로 선택적으로 치환된 탄소수 1 내지 7, 바람직하게는 2 내지 5의 저급 알콕시 그룹이다.

상기 화학식(7)에 있어서, R²그룹은 C_1-7, 바람직하게는 C_1-5, 알킬 또는 알콕시 그룹 또는 1 내지 14개, 바람직하게는 1 내지 5개, 더욱 바람직하게는 1 내지 2개의 할로겐원자로 치환된 상기 알킬 또는 알콕시 그룹에 상응하는 치환된 할로알킬 또는 할로알콕시 그룹이다. 할로겐 원자는 예를 들면 염소, 브롬 또는 요오드 원자일 수 있다.

상기 혼합된 산 무수물을 화학식(6)의 1H-테트라졸-1-아세트산과 함께 제조하기 위해 사용할 수 있는 화학식(7)의 화합물[이후, 화합물(7)이라 지칭함]중, 탄소수 2 내지 8, 바람직하게는 3 내지 6의 저급 지방산의 산 할라이드를 언급할 수 있다. 구체적으로는, 아세트산, 프로피온산, 피발산, 발레르산, 이소발레르산 등의 산 할라이드(염화물, 브롬화물, 요오드화물 등), 브로모아세틸 클로라이드, 2-클로로프로피오닐 클로라이드, 3-클로로프로피오닐 클로라이드, 4-클로로부티릴 클로라이드 등을 언급할 수 있다.

역시 화학식(7)으로 표현되는 알킬 할로탄산염은 R²의 알콕시 그룹이 C_1-7, 바람직하게는 C_1-4, 알콕시 그룹(메톡시, 에톡시, 프로필옥시, 이로프로필옥시, 부틸옥시 또는 t-부틸옥시)이고 Y의 할로겐 원자는 염소, 브롬 또는 요오드 원자인 화합물을 포함한다.

상기 혼합된 산 무수물의 제조제 있어서, 화합물(7)은 일반적으로 화학식(6)의 1H-테트라졸-1-아세트산의 1몰당 약 1 내지 약 50몰, 바람직하게는 약 1 내지 약 10몰의 양으로 사용된다.

이러한 반응에 사용할 수 있는 염기는 염기성 이온교환수지, 알칼리 금속의 탄산수소염, 탄산염 및 수산화물(예: 탄산수소나트륨, 탄산수소칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등), 저급 알킬 그룹(예: 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, t-부틸 등)에 의해 치환된 2급 또는 3급 아민, 특히 디- 또는 트리(C₁-C₄알킬) 아민, 및 이의 상응하는 4급 암모늄 염을 포함한다.

염기성 이온교환수지는 제 1 단계와 관련지어 설명한 것일 수 있다.

염기의 양은 일반적으로 화합물(6) 1몰당 약 0.1 내지 약 50몰, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 10몰이다(염기성 이온교환수지의 경우, 수지는 화합물(6) 1몰당 약 0.1 내지 약 50몰, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 10몰의 작업 용량에 상응하는 양으로 사용된다.

상기 혼합된 산 무수물을 제조할 때, 화합물(6), 화합물(7) 및 염기를 등몰량으로 또는 실질적으로 등몰량의 비율로 사용하는 것이 가장 바람직하다.

상기 혼합된 산 무수물의 제조시 사용할 수 있는 유기 용매는 다양한 케톤(예: 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 디에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 등), 에스테르(예: 메틸 포르메이트, 에틸 포르메이트, 프로필 포르메이트, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 프로필 아세테이트, 메틸 프로피오네이트, 에틸 프로피오네이트 등), 지방족 알콜(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올 등), 에테르(예: 디에틸 에테르, 디프로필 에테르, 디부틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 디옥산 등), 할로겐화 탄화수소(예: 디클로로메탄, 디브로모메탄, 클로로포름, 브로모포름, 사염화탄소 등), 니트로알칸(예: 니트로메탄, 니트로에탄, 니트로프로판 등) 및 니트릴(예: 아세토니트릴, 프로피오니트릴, 부티로니트릴, 발레로니트릴 등)을 포함하고, 이러한 용매는 단독으로 또는 혼합물 형태로 사용할 수 있다. 위에서 언급한 용매중 특히 바람직한 용매는 할로겐화 탄화수소 및 에테르이다.

상기 유기 용매의 양은 화합물(6) 1부당 약 1 내지 1,000중량부, 바람직하게는 약 5 내지 약 100중량부이다.

반응 조건은 통상적으로 사용되는 조건에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 일반적으로, 반응 온도는 약 -50 내지 약 50℃이고 바람직하게는 약 -30 내지 약 10℃이다. 반응 시간은 약 0.1 내지 약 24시간이고 바람직하게는 약 0.1 내지 약 8시간이다.

반응을 완결한 후, 혼합된 산 무수물을 시효경화시키기 위해 반응 혼합물이 약 0℃에서 0 내지 약 8시간 동안 유지되는 것이 바람직하다.

(b) 혼합된 산 무수물과 화합물(4)의 반응

이렇게 제조된 상응하는 혼합된 산 무수물을 화학식(4)의 7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산과 염기의 존재하에 유기용매중에 반응시키고, 이로써 화학식(5)의 목적하는 생성물 수득한다.

이러한 반응에서, 혼합된 산 무수물을 화합물(4) 1몰당 약 1 내지 약 50몰, 바람직하게는 약 1 내지 약 10몰의 양으로 사용한다. 혼합된 산 무수물로서, 상기 단계(a)에서 수득된 반응 혼합물을 이와 같이 사용한다. 이러한 반응 혼합물이 일반적으로 약 60 내지 80%의 수율로 수득된 혼합된 산 무수물을 함유하기 때문에, 이는 혼합된 산 무수물 및 화합물(4)의 양을 상기 언급한 범위로부터 선택할 때 고려된다.

이러한 반응에 사용할 수 있는 염기는 상기 (a) 혼합된 산 무수물의 제조의 설명에서 언급된 것을 포함한다. 염기의 이러한 양은 일반적으로 화합물(4) 1몰당 약 1 내지 약 100몰, 바람직하게는 약 1 내지 약 30몰이다(염기성 이온교환수지가 염기로서 사용되면, 화합물(4) 1몰당 약 1 내지 약 100몰, 바람직하게는 약 1 내지 30몰의 작업 용량에 상응하는 양으로 사용된다. 한가지 이상의 염기를 적절한 비율로 사용할 수 있다.

이러한 반응에 사용하기 위한 유기 용매는 임의의 종류의 유기용매, 또는 용매 혼합물[여기서, 화합물(4) 및 혼합된 산 무수물은 적어도 어느 정도까지는 가용성이고 반응을 방해하지 않는다]이다. 용매의 예는 다른 유기 용매중에서, 케톤(예: 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 디에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 등), 에스테르(예: 메틸 포르메이트, 에틸 포르메이트, 프로필 포르메이트, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 프로필 아세테이트, 메틸 프로피오네이트, 에틸 프로피오네이트 등), 지방족 알콜(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올 등), 에테르(예: 디에틸 에테르, 디프로필 에테르, 디부틸 에테르, 테트라하이드로푸란, 디옥산 등), 할로겐화 탄화수소(예: 디클로로메탄, 디브로모메탄, 클로로포름, 브로모포름, 사염화탄소 등), 니트로알칸(예: 니트로메탄, 니트로에탄, 니트로프로판 등) 및 니트릴(예: 아세토니트릴, 프로피오니트릴, 부티로니트릴, 발레로니트릴 등)을 포함한다. 특히 바람직한 것은 할로겐화 탄화수소 및 에테르이다.

용매의 양은 화합물(4) 1중량부당 1 내지 100중량부, 바람직하게는 5 내지 20중량부이다.

이러한 반응은 일반적으로 대기압하에 일어나지만, 필요한 경우, 상승된 압력하에 수행될 수 있다. 반응 온도는 일반적으로 -50 내지 110℃이고 바람직하게는 -30 내지 10℃이다. 반응 시간은 반응 온도, 반응물의 농도 및 혼합된 산 무수물의 양에 의존하지만 일반적으로 0.1 내지 24시간이고 바람직하게는 1 내지 8시간이다.

화합물(4), 혼합된 산 무수물 및 염기가 제 4 단계에서 혼합되는 방법은 중요하지 않다. 따라서, 예를 들면 상기 유기용매중의 화합물(4)의 균질성 용액을 미리 제조된 혼합된 산 무수물 용액에 서서히 가한다. 염기의 부가 시간은 염기가 상기 화합물(4)의 용액 및 혼합된 산 무수물이 혼합되기 전에 부가되기만 하면 중요하지 않다.

이렇게 수득된 목적하는 화합물(5), 즉 세파졸린은 통상적인 방법으로 단리되고 정제될 수 있다. 바람직한 정제공정은 반응 혼합물에 물을 부가하여 수성층으로 세파졸린을 추출하고 pH를 산성 쪽으로 조절한 후 재결정화하는 것을 포함한다. 경우에 따라, 상기 추출 단계를 수행하여 수득한 수성층을 통상적인 방법으로 활성화된 탄소로 처리하거나 또는 합성 흡착제 또는 제 3 단계와 관련하여 예사화된 이온교환수지로 처리할 수 있다.

따라서, 화합물(1)로부터 시작하여 상기 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 단계를 본 발명에 따라 수행함으로써, 고순도의 세파졸린을 고수율로 수득할 수 있다.

또한, 상기 제 1, 제 2 및 제 3 단계를 수행하여, 세파졸린의 제조에 유용한 중간생성물, 즉 화학식(4)의 7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산을 고수율 및 고순도로 임의의 제조공정도 사용하지 않고 제조할 수 있으며, 그 결과 최종 생성물 세파졸린을 또한 고수율 및 고순도로 수득할 수 있다.

하기 실시예는 단지 본 발명을 추가로 상세히 예시하려는 것으로 본 발명의 범주를 제한하려는 것으로 해석해서는 안된다.

제 1, 제 2 및 제 3 단계에서 각각 수득된 중간체 화합물, 및 제 4 단계에서 수득된 세파졸린은 모두 공지된 화합물이다. 이들 중간체 화합물 및 세파졸린은 IR, NMR 및 질량 분광계 뿐만 아니라 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통해 분광학적 분석을 하였고, 이들 구조는 수득된 데이터가 실질적 샘플의 상응하는 데이터에 일치한다는 사실로 확인되었다.

실시예 1

(1) 제 1 단계

p-메톡시벤질 제조

200㎖ 용량의 4구 플라스크에 10g의 p-메톡시벤질 7-페닐아세트아미도-3-클로로메틸-3-세펨-4-카복실레이트(이후 간단히 GCLE로서 지칭함) 및 100㎖의 아세톤을 투입하고, 혼합물을 교반하면서 35℃로 가열하였다. 이러한 과정에서, 대부분의 GCLE는 완전히 용해되지 않고 슬러리를 형성하였다.

한편, 3.3g의 5-메틸-2-머캅토-1,3,4-티아디아졸을 22.6㎖의 1N 수산화나트륨 수용액에 용해시켰다. 이 용액을 상기 슬러리에 20 내지 30분에 걸쳐 적가하였다. 적가가 완료되었을 때, 슬러리는 균질한 용액이 되었으나, 이어서 수분 내에 결정이 형성되었다.

적가가 완료된 지 수분 후, 4.2㎖의 0.5N 염산을 첨가하고 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 이어서, 89㎖의 물로 적가한 후, 결정화를 위해 반응 혼합물을 5℃ 이하로 냉각하고 1시간 동안 숙성하였다.

숙성 후, p-메톡시벤질 간단히 GTDE로서 지칭함)의 결정을 흡입 여과하여 수거하고 10㎖의 차가운 아세톤으로 세척하였다. 이렇게 수득된 GTDE 결정을 40℃까지의 온도에서 건조시켜 11.64g(수율 97%)의 무수 GTDE를 수득하였다.

(2) 제 2 단계

7-페닐아세트아미도-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산의 제조

200㎖ 용량의 4구 플라스크에 60㎖의 m-크레졸 및 0.24㎖의 농축 황산을 투입하고, 투입물을 35℃까지 가열하였다. 이어서, 10g의 무수 GTDE를 첨가하고 반응시켰다. 온도를 30 내지 40℃ 범위내로 조절하며, 반응물을 약 2 내지 3시간 동안 모니터하였다.

반응이 완료된 후, 200㎖의 부틸 아세테이트를 첨가하였고, 혼합물을 5℃ 이하로 냉각시켰다. 냉각된 반응 혼합물에 65㎖의 4% 중탄산나트륨 수용액을 첨가하여 간단히 GTDA로서 지칭함)을 수성 층으로 추출하였고, 이어서 분리시켰다. 그 다음 10㎖의 물을 추가로 부틸 아세테이트/m-크레졸 층에 첨가하고, 남은 GTDA를 추가로 수성 층 내로 추출하였다. 두가지 수성 GTDA 추출물을 합하여 30㎖의 부틸 아세테이트로 세척하고, 이어서 부틸 아세테이트 층을 버렸다.

생성된 GTDA 나트륨 수용액을 고 다공성 수지 비드 칼럼(25㎖의 AXT-33 수지, 오가노 코포레이션의 제품)에 충진시켰다. 칼럼은 75㎖의 물로 세척하였다.

(3) 제 3 단계

7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산의 제조

수성 GTDA 추출물(중탄산나트륨 수용액 중) 및 제 2 단계에서 칼럼 세척물을 넣고, 4g의 담체 고정화된 페니실린 G-아미다아제(상품명 PGA-450, 베링거 만하임 제품)을 함유하는 효소 반응기에 공급하고, 효소적 탈아크릴화 반응이 교반하에 수행하였고, 이 동안 반응 온도는 28℃, pH는 7.7 내지 8.1로 유지시켰다.

1N 수성 암모니아가 pH를 조절하기 위해 사용되었다. 암모니아의 소비가 중단되고, 이어서 반응의 최종 지점을 확인하였다. 반응이 완료된 후, 효소를 여과하고 증류수로 세척하였다.

거의 정량적으로 생산된 7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산(이후 간단히 ATDA로서 지칭함) 용액을 5℃ 이하로 냉각시키고, 3N 염산을 사용하여 pH 3.8로 조정하였다. pH 조정 후, 용액을 5℃ 이하의 온도에서 1시간 동안 숙성시켰다. 침전된 ATDA 결정은 여과하여 수거하고, 20㎖의 냉수로 세척한 뒤, 20㎖ 아세톤으로 세척하였다. 이렇게 수득된 ATDA 결정을 진공하에 40℃를 초과하지 않는 온도에서 건조시켜 5.55g의 무수 ATDA를 수득하였다(수율 94%, GTDE를 기준으로 배합된 제 2 및 제 3 단계에 대한 전체 수율).

(4) 제 4 단계

세파졸린의 합성

(i) 혼합된 산 무수물의 제조

100㎖ 용량의 4구 플라스크에 3.72g의 1H-테트라졸-1-아세트산 및 40㎖의 메틸렌 클로라이드를 투입한 후, 2.94g의 트리에틸아민을 첨가하고, 혼합물을 -10℃로 냉각하였다. -10℃ 이하의 온도에서, 3.32g의 피발로일 클로라이드를 첨가하였다. 이어서 온도를 0℃로 조정하고, 혼합물을 1시간 동안 숙성하였다.

(ii) 메틸렌 클로라이드 중 ATDA 용액의 제조

100㎖ 용량의 4구 플라스크에 4.3g의 디이소프로필아민 및 30㎖의 메틸렌 클로라이드를 투입하였다. 이러한 메틸렌 클로라이드 용액에 2.94g의 ADTA를 용해시키고, 용액을 -20℃ 이하로 냉각시켰다.

(iii) 세파졸린의 합성 반응

상기 (i)에서 제조된 혼합된 산 무수물 용액에 상기 (ii)에서 제조된 ATDA의 메틸렌 클로라이드 용액을 20 내지 30분에 걸쳐 -20℃ 이하의 온도에서 적가하였다.

적가가 완료된 후, 냉각을 중단하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 최종 지점을 확인한 후, 60㎖의 물을 반응 혼합물에 첨가하여 세파졸린을 추출하고, 수성 층을 분리하였다. 이어서, 40㎖의 물을 메틸렌 클로라이드 층에 첨가하여 추가로 세파졸린을 추출하였다. 2가지 세파졸린 추출물을 합하여 pH 4.5로 조정하였다.

이어서, 이러한 수성 세파졸린 추출물에 30㎖의 디클로로메탄을 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 상을 분리하고, 디클로로메탄 상을 처분하였다. 수성 층에 1.5g의 활성 탄소를 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 활성화된 탄소를 여과하고, 여액은 결정화를 위해 3N 염산을 사용하여 pH 2로 조정하고, 5℃ 이하에서 1시간 동안 숙성시켰다. 숙성 후, 세파졸린 결정을 여과하여 수거하고, 203의 냉수로 세척하였다. 결정을 진공하에 40℃ 이하의 온도에서 건조시켜, 6.07g(수율 92%)의 세파졸린 결정을 수득하였다.

[발명의효과]

내용 없음.

Claims (9)

1. (i) 유기용매 및 물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 하나이상의 용매중에서 염기의 존재하에 화학식(1)의 화합물과 화학식(8)의 2-메틸-5-머캅토-1,3,4-티아디아졸을 반응시키거나, 유기용매 및 물로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 하나이상의 용매중에서 화학식(1)의 화합물과 화학식(8)의 화합물의 염기성 염을 반응시켜 화학식(2)의 화합물을 수득하고;

   (ii) 페놀 화합물의 존재하에서 화학식(2)의 화합물을 탈에스테르화 반응시켜 화학식(3)의 7-페닐아세트아미도-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산을 수득하고;

   (iii) 고정화된 페니실린 G-아미다아제로 페닐아세틸기를 분리하기 위해 화학식(3)의 화합물을 탈아실화 반응시켜 화학식(4)의 7-아미노-3-(2-메틸-1,3,4-티아디아졸-5-일)티오메틸-3-세펨-4-카복실산을 수득하고,

   (iv) 유기용매중에서 염기의 존재하에 혼합된 산 무수물과 화학식(4)의 화합물을 반응시키고, 여기서 혼합된 산 무수물은 유기 용매중에서 염기의 존재하에 화학식(6)의 1H-테트라졸-1-아세트산과 화학식(7)의 산 할로겐화물 또는 알킬 할로탄산염을 반응시켜 제조하는 단계를 포함함을 특징으로 하는, 화학식(5)의 제조하는 방법:

   [화학식 1]

   [화학식 2]

   [화학식 3]

   [화학식 4]

   [화학식 5]

   [화학식 6]

   [화학식 7]

   [화학식 8]

   상기식에서, X는 할로겐 원자를 나타내고, R¹은 카복실보호기를 나타내고, Y는 할로겐 원자를 나타내고, R²는 하나이상의 할로겐 원자로 치환될 수 있는 1 내지 7개의 탄소원자를 갖는 저급 알킬기 또는 하나이상의 할로겐 원자로 치환될 수 있는 1 내지 7개의 탄소원자를 갖는 저급 알콕시기를 나타낸다.
2. 제 1 항에 있어서,

   화학식(1)중의 X가 염소원자, 브롬원자, 요오드원자를 나타내고, 화학식(1) 및 화학식(2)중의 R¹이 p-메톡시벤질, 디페닐메틸 또는 t-부틸을 나타내는 방법.
3. 제 1 항에 있어서,

   단계(i)에서 사용되는 염기가 알칼리 금속 탄산수소염, 알칼리 금속 탄산염 및 알칼리 금속 수산화물, 암모니아, 디- 또는 트리(C_1-4알킬)아민, 상응하는 4차 암모늄 염 및 염기성 이온교환수지로 구성된 그룹에서 선택되는 하나의 구성원인 방법.
4. 제 1 항에 있어서,

   단계(ii)에서 사용되는 페놀 화합물이 페놀, m-크레졸, o-크레졸 또는 p-크레졸인 방법.
5. 제 1 항에 있어서,

   단계(ii)에서 페놀 화합물중 화학식(2)의 화합물의 탈에스테르화 반응이 산의 존재하에 수행되는 방법.
6. 제 1 항에 있어서,

   단계(ii)에서 탈에스테르화 반응후에 수득된 반응 혼합물을 알칼리 수용액으로 추출하고, 수성 추출물을 합성 흡수체 또는 이온교환수지로 정제하고, 이어서 단계(iii)에서 페닐아세틸 그룹을 분할하기 위해 정제된 추출물을 탈아실화 반응시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
7. 제 1 항에 있어서,

   단계(iii)에서 사용되는 고정화된 페니실린 G-아미다아제가 페니실린 G-아미다아제의 활성을 갖는 효소인 방법.
8. 제 1 항에 있어서,

   화학식(7)중의 R²가 C_1-5알킬 또는 알콕시 그룹 또는 1 내지 5개의 할로겐 원자로 치환된 C_1-5알킬 또는 알콕시 그룹인 방법.
9. 제 1 항에 있어서,

   단계(iv)에 사용되는 염기가 염기성 이온교환수지, 알칼리 금속 수산화물, 알칼리 금속 탄산수소염, 알칼리 금속 탄산염, 디- 또는 트리(C_1-4알킬)아민 및 상응하는 4차 암모니아 염으로 구성된 그룹에서 선택되는 하나 이상의 구성원인 방법.