KR102675203B1 - 시들음병 또는 궤양병 방제용 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주 및 이의 용도 - Google Patents
시들음병 또는 궤양병 방제용 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주 및 이의 용도 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 시들음병 또는 궤양병의 피해를 감소시키는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(기탁번호: KACC 92341P), 상기 균주를 포함하는 미생물 제제를 제공함으로써, 친환경적으로 시들음병 또는 궤양병을 방제할 수 있다.
Description
본 발명은 시들음병 또는 궤양병의 피해를 감소시키는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(기탁번호: KACC 92341P), 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제, 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
시들음병 또는 궤양병을 발생시키는 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis)에 의한 토마토 궤양병은 2008년에 처음 국내에 보고된 병으로 주로 종자로 전염되나 사람의 손과 도구로도 쉽게 전염이 되며 인체에는 무해하나 토마토에 감염되면 최고 70%까지 수확이 줄어든다고 알려진 병이다. 병의 증상은 초기 잎 끝이 시들고 병이 진전되면 줄기가 터지고 과일이 백색이 되는 현상이 발생된다.
시들음병 또는 궤양병을 발생시키는 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주는 종내에서 생존하며, 보통 2년 6개월간 생존할 수 있다. 병든 열매에서 채종한 것은 30∼의 발병율을 나타내기도 한다. 토양 중에서도 2년 이상 생존하며, 2차 전염은 비바람, 해충, 동물 등에 의해 일어난다. 뿌리의 상처, 적아, 적심자 등에 의해서도 잘 전염된다.
시들음병 및 궤양병은 세균병으로, 뚜렷한 방제방법이 없으므로 예방 위주의 방제가 필요하다. 기존에 사용하던 방법으로는, 작업 기구를 뜨거운 물이나, 차아염소산나트륨 등으로 소독하는 방법, 건전한 종자를 사용하며 종자를 소독하여 사용하는 방법, 발병된 밭은 다른 작물로 1년 이상 윤작하는 방법, 아그리마이신 또는 농용신수화제를 15일 내지 20일 간격으로 사용하는 방법 등을 사용하였다.
그러나 기존의 방식과 같이, 화학약제를 사용할 경우, 토양과 하천의 심각한 오염을 유발한다. 또한, 농작물에 이들 농약이 잔류함으로써 독성, 환경오염 및 사람과 가축에 대한 독성 등의 문제를 일으키기 때문에 농약 사용은 현재 세계적으로 그에 대한 제제 조치가 강화되고 있는 실정이다.
이와 같은 농약에 대한 우려와 삶의 질에 대한 관심이 커지면서 최근에는 새로운 대안으로서 농작물 병해충 방제에 미생물이나 식물추출물을 이용하는 생물학적 방제가 관심의 대상이 되고 있다.
이에 따라, 시들음병 또는 궤양병에 대한 친환경적인 방제방법이 요구되고 있다.
본 발명은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주를 이용하여, 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제 및 상기 미생물 제제의 제조방법을 제공함으로써, 친환경적으로 시들음병 또는 궤양병을 방제하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 식물 시들음병 또는 궤양병 방제용 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 식물은 토마토 또는 감자일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 균주는 서열목록 1의 16s rRNA 유전자 염기서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 시들음병 또는 궤양병은 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주로부터 발병되는 것일 수 있다.
본 발명은 식물 시들음병 또는 궤양병 방제용 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P), 상기 균주의 배양액 및 상기 배양액의 추출물 중 적어도 하나를 유효성분으로 포함하는 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 식물은 토마토이고, 상기 시들음병 또는 궤양병은 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주로부터 발병되고, 상기 균주는 서열목록 1의 16s rRNA 유전자 염기서열을 포함할 수 있다.
본 발명은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)를 25℃ 내지 30℃에서 60시간 내지 84시간 동안 배양하는 단계, 상기 배양액을 원심분리하고 상기 배양액의 상등액을 취하는 단계, 상기 배양액의 상등액을 여과하는 단계, 상기 여과액을 헥산, 디클로로메탄, N-부탄올, 에틸아세테이트, 또는 물 중 적어도 하나와 혼합하는 단계, 및 상기 혼합액을 추출하는 단계를 포함하는 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 추출한 상기 미생물 제제는 1mg/ml 내지 100mg/ml일 수 있다.
본 발명에 따른 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(기탁번호: KACC 92341P)를 이용하여 식물(토마토)에서 발생하는 시들음병 또는 궤양병에 의한 피해를 감소시킬 수 있다.
도 1은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 16S rRNA 유전자를 이용한 계통유전학적인 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)에 의한 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 억제능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 추출물(water)을 처리한 토마토의 병 피해도(desease severity)를 나타낸 그래프이다.
도 2는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)에 의한 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 억제능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 추출물(water)을 처리한 토마토의 병 피해도(desease severity)를 나타낸 그래프이다.
본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 본문에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
이하, 본 명세서에 개시된 실시예들을 도면을 참조하여 상세하게 설명하고 자 한다. 상세한 설명, 도면들 및 청구항들에서 상술하는 예시적인 실시예들은 한정을 위한 것이 아니며, 기재된 실시예들과 다른 실시예들이 이용될 수 있으며, 여기서 개시되는 기술의 사상이나 범주를 벗어나지 않는 한 다른 변경들도 가능하다.
개시된 기술에 관한 설명은 구조적 내지 기능적 설명을 위한 실시예에 불과하므로, 개시된 기술의 권리범위는 본문에 설명된 실시예에 의하여 제한되는 것으로 해석되어서는 아니된다. 즉, 실시예는 다양한 변경이 가능하고 여러 가지 형태를 가질 수 있으므로 개시된 기술의 권리범위는 기술적 사상을 실현할 수 있는 균등물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
여기서 사용된 모든 용어들은 다르게 정의되지 않는 한, 개시된 기술이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 관련기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미를 지니는 것으로 해석 될 수 없다.
본 발명은 시들음병 또는 궤양병의 피해를 감소시키는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(기탁번호: KACC 92341P), 상기 균주의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 미생물 제제, 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 명세서에서 "식물"은 식물계에 속하는 임의의 살아있는 유기체 (즉, 식물계 내의 임의의 속/종)를 지칭하여, 나무, 허브, 관목, 목초, 덩굴, 양치식물, 이끼 및 녹조류와 같으나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(기탁번호: KACC 92341P) 또는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(기탁번호: KACC 92341P)를 포함하는 조성물에 의해 시들음병 또는 궤양병의 방제효과를 나타내는 식물은 토마토, 감자 등을 포함할 수 있다. 여기서, 토마토는 예를 들어, 대추방울토마토, 완숙토마토 등을 포함할 수 있다.
이하에서는, 설명의 편의를 위해 본 발명의 일 실시예에 따른 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주 또는 이를 포함하는 조성물이 토마토 및 감자에 적용된 것을 일 예로서 설명한다.
시들음병은 아랫잎이 누렇게 변하며 서서히 식물이 죽는다. 주로 곁뿌리가 나온 부분으로 병원균이 침투하여 물관을 침해한다. 식물이 시들음병에 감염될 경우, 기온이 상승한 낮 동안에 심하게 시들고, 기온이 낮은 아침과 저녁에는 다소 회복되기도 하는데, 심한 경우 줄기 내부의 물관은 아래 잎자루까지 암갈색으로 변하기도 한다. 땅과 인접한 줄기에 괴저증상이 나타나기도 하며, 진전될 경우 줄기의 전 둘레가 썩는다. 시들음병에 감염되어 병든 식물의 과실은 작고 불량해진다.
궤양병은, 작물의 잎, 줄기, 열매에 발생한다. 잎자루에 직경 1mm 내지 2mm 크기의 담갈색 내지 황갈색 점무늬로 나타나고, 진전되면 궤양증상으로 나타난다. 잎은 가장자리부터 말라 시들고, 엽맥 사이는 황변하며, 후에 갈색으로 변해 마른다. 줄기의 표면이 감염되면 표피가 갈라지고, 궤양증상이 나타난다. 열매에는 수침 상의 점무늬가 형성되어 약간 돌출한 갈색의 궤양증상으로 나타난다. 줄기의 유관속이 감염되면 그루 전체가 시들어 죽는다. 병든 줄기를 가로로 잘라보면 유관속이 갈색으로 변해 있으며, 악취는 나지 않는다.
시들음병 또는 궤양병을 발생시키는 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주는 종내에서 생존하며, 보통 2년 6개월간 생존할 수 있다. 병든 열매에서 채종한 것은 30∼의 발병율을 나타내기도 한다. 토양 중에서도 2년 이상 생존하며, 2차 전염은 비바람, 해충 등에 의해 일어난다. 뿌리의 상처, 적아, 적심자등에 의해서도 잘 전염된다. 발병은 25∼℃에서 잘 되고, 고온인 한여름에는 거의 진전되지 않는다. 최근 외국에서 수입한 품종을 재배하는 시설재배 포장에서도 병 발생이 확인되었다.
시들음병은 식물의 뿌리 또는 줄기에 발생한 상처를 통해 식물로 유입되며, 상기 균주가 식물의 물관에 도달하면 전신 감염 가능성이 있다. 시들음병에 감염된 경우, 시들음은 잎의 양쪽에서 나타날 수도 있고 한쪽에만 나타날 수도 있다. 상기 미시가넨시스 균주는 식물 내의 물관에서 식물 조직 1g 당 최대 1x109개의 박테리아 역가(Titer)를 형성할 수 있다.
궤양병은 감염된 식물의 잎자루에 직경 1mm 내지 2mm 크기의 담갈색 내지 황갈색 점무늬가 나타나고, 진전되면 궤양 증상으로 나타난다. 상기 잎은 가장자리부터 말라 시들고, 엽맥 사이는 황변하며, 후에 갈색으로 변해 마른다. 줄기의 표면이 감염되면 표피가 갈라지고, 궤양 증상이 나타난다. 열매에는 수침 상의 점무늬가 형성되어 약간 돌출한 갈색의 궤양 증상이 나타난다. 줄기의 유관속이 감염되면 개체가 시들어 죽을 수 있다. 상기 궤양병의 발병은 25℃내지 27℃에서 잘 일어나기 때문에 서늘한 지방에서는 병 발생이 적고, 감염되어도 병 증상이 잘 나타나지 않다고 생육 중기나 후기에 기온이 올라갈 때 병 증상이 나타날 수 있다.
시들음병 및 궤양병은 세균병으로, 뚜렷한 방제방법이 없으므로 예방 위주의 방제가 필요하다. 기존에 사용하던 방법으로는, 작업 기구를 뜨거운 물이나, 차아염소산나트륨 1%액 등으로 소독하는 방법, 건전한 종자를 사용하며 종자를 소독하여 사용하는 방법, 발병된 밭은 다른 작물로 1년 이상 윤작하는 방법, 아그리마이신 또는 농용신수화제를 15일 내지 20일 간격으로 사용하는 방법 등을 사용하였다.
본 발명은 식물의 시들음병 또는 궤양병 방제용 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)를 제공한다. 상기 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)는 서열번호 1로 표시되는 16S rRNA 염기서열을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른, 상기 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)는 2021년 03월 23일자로 국립농업과학원에 미생물을 기탁하였으며, 수탁번호로 KACC 92342P를 부여받았다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)는 토마토 및 감자 중 적어도 하나의 시들음병 또는 궤양병을 방제하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 시들음병 또는 궤양병은 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주로부터 발병되는 것일 수 있다.
본 발명은 상기 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P) 또는 상기 균주의 배양액 및 상기 배양액의 추출물을 포함하는 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제를 제공할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 배양액은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)를 25℃ 내지 30℃의 진탕 배양기(shaking incubator)에서 60시간 내지 84시간 동안 배양한 후, 4,000rpm 내지 10,000rpm에서 5분 내지 15분 동안 원심 분리하여 상등액을 취하고, 상기 상등액을 0.1μm 내지 1.0 μm 크기의 필터(filter)로 여과한 것을 사용하였다. 상기 여과액을 헥산(Hexane), 디클로로메탄(Dichloromethane), N-부탄올(N-butanol), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 또는 물(Water) 중 적어도 하나와 혼합(Shaking)하였다. 상기 혼합액은 추출물의 농도가 0.1μg/ml 내지 100μg/ml가 되도록 추출한 것을 사용하였다.
<실험예 1> 바실러스 아리아바타이(
Bacillus aryabhattai
) H8-1
균주의 분리 및 시들음병 또는 궤양병균 방제 균주 선발
1. 균주 분리 및 배양방법
본 실험예에 따른 균주는 2004년 경기도 양평읍 상추 재배지의 비근권 토양에서 분리하였다. 분리한 토양 1g을 살균수에 넣고 희석하였으며, TSA(Tryptic soy agar), 28℃에서 48시간 배양한 후 균주를 분리하였다. 분리한 균주는 TSB(Tryptic soy broth)에서 1일동안 배양한 후 20% 글리세롤(glycerol)을 첨가하여 -80℃에서 보관하였다.
2. 분리결과
분리된 상기 균주는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)이며, 서열번호 1로 표시되는 16S rRNA 염기서열을 갖는다.
도 1은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 16S rRNA 유전자를 이용한 계통유전학적인 분석 결과를 나타낸 것이다.
바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 16S rRNA 유전자(1,368bp)를 분석하여 이지바이오 클라우드(EZBioCloud)에서 검색한 결과, 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) B8W22(T)와 100.0%, 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium) NBRC15308(T)와 99.85%의 상동성을 보였다. 따라서, H8-1균주는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai)로 동정하였다.
<실험예 2> 바실러스 아리아바타이(
Bacillus aryabhattai
) H8-1
균주의 배양액 추출물에 의한 시들음병 또는 궤양병균의 생존력 억제 효과
본 실험예는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)가 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis)의 생존력을 억제하는 효과가 있는지 확인하기 위한 것이다.
바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 배양액을 용매로 추출하기 위해, 1/2 TSB(Tryptic soy broth; Difco, USA) 배지, 28℃150 rpm으로 설정한 진탕 배양기(Shaking incubator)에서 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)를 3일간(72시간) 배양(28℃150 rpm)한 후 6,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 상등액을 여과(0.45 μm)하였다. 여과한 배양액을 헥산(Hexane), 디클로로메탄(Dichloromethane), N-부탄올(N-butanol), 및 에틸 아세테이트(ethyl acetate)와 같은 유기용매로 순차적으로 추출한 후 감압 농축하였다. 상기 유기용매 추출물은 최종농도 1, 10, 100, 500, 및 1,000μg/mL이다. 물 추출물은 다양한 농도(Final concentration; 1, 10, 25, 50, 및 100 mg/ml)로 제조하였다.
클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주를 NBY(Nutrient-broth yeast) 액체배지, 28℃150 rpm으로 설정한 진탕 배양기(Shaking incubator)에서 하루(24시간) 동안 배양한 후 3,500 rpm에서 5분간 2번 원심분리하여 상등액을 제거하고 10mM MgSO4를 첨가하여 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주의 배양액을 제조하였다. 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주가 배양된 NBY(Nutrient-broth yeast) 배지에 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P) 추출물을혼합하여 최종적으로 OD640=0.1으로 설정한 후 24시간 동안 배양하고 생존력(cell viability)을 측정하였다. 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 물 추출물에서 배양할 경우 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis)의 생존력이 감소하는 경향을 확인하였다.
도 2는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)에 의한 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주의 억제능을 나타낸 그래프이다.
도 2를 참조하면, 추출물은 y=(-1.8E-06)x2-0.0041x+0.6891으로 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 농도가 증가할수록 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주의 생존력이 감소하는 경향을 나타내었다. 여기서, 균주 세포의 생존력(cell viability)은 상대값으로서 OD(Optical density)값을 측정하여 나타내었다.
<실험예 3> 바실러스 아리아바타이(
Bacillus aryabhattai
) H8-1
균주의 배양액 처리에 의한 토마토 시들음병 또는 궤양병 완화 효과
본 실험예는 토마토에 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 배양액을 처리할 경우, 토마토의 시들음병 또는 궤양병 완화 효과가 있는지 확인하기 위한 것이다.
토마토(슈퍼도태랑 및 코레곤 품종)를 파종한 후 생장실에서 3주간 재배(25±5℃16h light/8h dark)하였다. 상기 토마토는 온도 20℃ 내지 30℃에서 16시간 동안 빛을 조사하고, 8시간 동안 빛을 차단하는 조건 하에서 재배하였다. NBY(Nutrient-broth yeast) 액체 배지에 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주를 첨가하고, 28℃150 rpm으로 설정한 진탕 배양기(Shaking incubator)에서 2일간 배양한 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주의 배양액을 제조하였다.
상기 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주의 배양액을 원심분리기를 이용하여3,500rpm으로 5분간 2번 원심분리하였다. 원심분리한 배양액에서 상등액을 모두 제거한 후 MgSO-4 10mM을 넣어 주고 미생물 물 추출물을 혼합하여 다양한 농도(1, 10, 100, 및 1,000 mg/ml)로 만들어 실험을 진행하였다. 18일 뒤 질병(토마토 시들음병 또는 궤양병) 중증도(desease severity)를 확인한 결과 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 물 추출물 1ppm을 처리한 경우 대조구와 차이가 없었으나 물 추출물 10, 100, 및 1,000ppm을 처리한 경우 대조구와 유의미한 차이가 있음을 확인하였다.
도 3은 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 추출물(water)을 처리한 토마토의 병 피해도(desease severity)를 나타낸 그래프이다.
도 3을 참조하면, 대조구에서는 2.87±0.48, 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 추출물(water)을 1ppm 처리한 경우 1.87±0.46, H8-1 균주를 10ppm 처리한 경우 1.37±0.35, H8-1 균주를 100ppm 처리한 경우 1.18±0.41, H8-1 균주를 1,000ppm 처리한 경우 0.93±0.32의 병 피해도(desease severity)를 나타내었다.
바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)의 물 추출물의 농도가 증가할수록 토마토의 병 피해도(disease severity)가 감소하는 경향을 나타내었다. 여기서, 병 피해도는 상대값으로서 임의단위(arbitrary unit)으로 나타내었다.
상기의 본 발명은 바람직한 실험예를 중심으로 살펴보았으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 본질적 기술 범위 내에서 상기 본 발명의 상세한 설명과 다른 형태의 실시예들을 구현할 수 있을 것이다. 여기서 본 발명의 본질적 기술범위는 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
<110> REPUBLIC OF KOREA
<120> Preventing wilt and canker disease by Bacillus aryabhattai H8-1
and use thereof
<130> FP-2104017-KR
<160> 1
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1368
<212> RNA
<213> Unknown
<220>
<223> Bacillus aryabhattai H8-1
<400> 1
cgtgggcaac ctgcctgtaa gactgggata acttcgggaa accgaagcta ataccggata 60
ggatcttctc cttcatggga gatgattgaa agatggtttc ggctatcact tacagatggg 120
cccgcggtgc attagctagt tggtgaggta acggctcacc aaggcaacga tgcatagccg 180
acctgagagg gtgatcggcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc 240
agcagtaggg aatcttccgc aatggacgaa agtctgacgg agcaacgccg cgtgagtgat 300
gaaggctttc gggtcgtaaa actctgttgt tagggaagaa caagtacgag agtaactgct 360
cgtaccttga cggtacctaa ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta 420
atacgtaggt ggcaagcgtt atccggaatt attgggcgta aagcgcgcgc aggcggtttc 480
ttaagtctga tgtgaaagcc cacggctcaa ccgtggaggg tcattggaaa ctggggaact 540
tgagtgcaga agagaaaagc ggaattccac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga 600
ggaacaccag tggcgaaggc ggctttttgg tctgtaactg acgctgaggc gcgaaagcgt 660
ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg 720
ttagagggtt tccgcccttt agtgctgcag ctaacgcatt aagcactccg cctggggagt 780
acggtcgcaa gactgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg 840
tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatcctc tgacaactct 900
agagatagag cgttcccctt cgggggacag agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc 960
tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgat cttagttgcc 1020
agcatttagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg 1080
acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac gtgctacaat ggatggtaca 1140
aagggctgca agaccgcgag gtcaagccaa tcccataaaa ccattctcag ttcggattgt 1200
aggctgcaac tcgcctacat gaagctggaa tcgctagtaa tcgcggatca gcatgccgcg 1260
gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca ccacgagagt ttgtaacacc 1320
cgaagtcggt ggagtaaccg taaggagcta gccgcctaag gtgggaca 1368
Claims (9)
- 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주 방제용 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P).
- 삭제
- 제1 항에 있어서,
상기 균주는 서열목록 1의 16s rRNA 유전자 염기서열을 포함하는 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P). - 삭제
- 클라비박터 미시가넨시스 subsp. 미시가넨시스(Clavibacter michiganensis subsp. Michiganensis) 균주 방제용 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P), 상기 균주의 배양액 및 상기 배양액의 추출물 중 적어도 하나를 유효성분으로 포함하는 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제.
- 제5 항에 있어서,
상기 균주는 서열목록 1의 16s rRNA 유전자 염기서열을 포함하는 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제. - 제1 항의 바실러스 아리아바타이(Bacillus aryabhattai) H8-1 균주(KACC 92341P)를 25℃ 내지 30℃에서 60시간 내지 84시간 동안 배양하는 단계;
상기 배양액을 원심분리하고 상기 배양액의 상등액을 취하는 단계;
상기 배양액의 상등액을 여과하는 단계;
상기 여과액을 헥산, 디클로로메탄, N-부탄올, 에틸아세테이트, 또는 물 중 적어도 하나와 혼합하는 단계; 및
상기 혼합액을 추출하는 단계를 포함하는 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제 제조방법. - 제7 항에 있어서,
추출한 상기 미생물 제제의 농도는 1mg/ml 이상인 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제 제조방법. - 제8 항에 있어서,
추출한 상기 미생물 제제의 농도는 10mg/ml 이상인 시들음병 또는 궤양병 방제용 미생물 제제 제조방법.
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| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |