KR102670859B1 - 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 철갑상어 추출물 및 철갑상어 알 추출물이 함유되는 것을 특징으로 한다.
상기와 같이 철갑상어 추출물 및 철갑상어 알 추출물이 함유되는 화장료 조성물은 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민이 함유되어 있으며, 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에 우수한 피부 보습 및 진정 효과를 나타낸다.
상기와 같이 철갑상어 추출물 및 철갑상어 알 추출물이 함유되는 화장료 조성물은 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민이 함유되어 있으며, 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에 우수한 피부 보습 및 진정 효과를 나타낸다.
Description
본 발명은 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 철갑상어 추출물 및 철갑상어 알 추출물이 함유되어 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민 등이 다량 함유되어 있으며, 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에 우수한 피부 보습 및 진정 효과를 나타내는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
인체에 있어서 피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 기능을 하는 기관으로서, 인체 내의 생체성분 즉, 물이나 전해질 등의 손실을 방지하는 동시에 외부로부터 유해물질이 인체 내로 침입하지 못하도록 하는 역할을 한다.
이러한 피부는 크게 표피층, 진피층 및 피하지방층으로 구분된다. 표피층은 각질세포와 멜라닌 세포로 구성되는데, 피부 최외곽의 각질세포층은 외부환경과 직접 접촉하기 때문에 물리적, 화학적 혹은 물질의 투과에 대한 강한 저항성이 요구되며, 인체로부터 외부로 수분이 손실되는 것을 막아줌과 동시에 자체로도 적당한 수분을 보유함으로써 유연성을 유지하여야 한다.
일반적으로 피부의 수분량은 진피층에서는 70% 정도이나 표피층으로 갈수록 감소하여 각질세포층에서는 약 10 내지 30%가 된다. 진피층에서 공급된 물은 주로 수동적 확산에 의해 각질층 상부로 이동하며 최종적으로는 외부로 배출된다. 이를 경피수분손실(Trans Epidermal Water Loss:TEWL)이라 하며, 이러한 경피수분손실을 적절한 수준으로 유지시켜주는 것이 각질세포층의 지질막 성분인 피지성분과 표피지질이라고 알려져 있다. 그리고 각질 세포층에는 천연보습 인자(Natural Moisturizing Factor:NMF)라고 하는 친수성의 수분 보유능을 가진 물질이 존재하여 피부의 보습에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 정상적인 각질세포층의 수분이 10 내지 30% 정도가 유지되면 피부는 매끄럽고 부드러우며, 신체 보호기능을 정상적으로 발휘하게 된다. 그러나 각질세포층의 수분함량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 잃게 되어 노화현상이 일어난다. 예를 들어, 건성피부의 경우에는 각질세포의 결집력이 약화되어 피부표면으로부터 비늘조각과 같이 각질세포가 허옇게 벗겨져 나오는 스케일링(Scaling) 현상이 나타나는 바, 이와 같이 피부가 건성화되는 것은 각질세포층의 수분함량이 정상피부에 비해 적기 때문이다. 이 밖에, 건강한 피부라 할지라도 혹독한 외부환경, 즉, 바람, 추운날씨, 햇빛, 세안, 면도 등에 의해 수분 부족현상이 일어나 피부상태가 나빠지기도 한다. 따라서 피부의 각질세포층의 수분함량을 적절히 유지하는 것은 매우 중요하다.
그러나, 피부 장벽의 손상으로 각질세포의 필라그린이 감소하면 각질세포 간의 결합 감소로 외부 자극이 쉽게 침투하여 지속적으로 피부에 염증 반응을 발생시키고, 자연 보습인자의 감소로 피부 건조함이 유발된다. 보습 화장료 원료는 세라마이드가 가장 많이 사용되고 있으나 피부 자생력을 강화하는 보습 효과가 우수한 화장품 원료 소재는 부족한 실정이다.
한편, 철갑상어는 경골어류에 속하며 길쭉한 몸에 비늘이 없으며 몸길이 보통 2 내지 3.5m를 나타내며, 철갑상어의 알은 캐비어라고도 표현하며 벨루가, 오세트라 및 세브루가 등의 다양한 종류가 있다.
철갑상어와 철갑상어의 알에는 비타민, 지질, 미네랄 및 아미노산 등이 풍부하게 함유되어 있으며, 피부의 필라그린(filaggrin) 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현이 줄어주기 때문에, 피부 보습 및 진정효과를 나타낼 뿐만 아니라, 피부 탄력 및 미백 등의 효과를 나타낸다.
본 발명의 목적은 철갑상어 추출물 및 철갑상어 알 추출물이 함유되어 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민이 다량 함유되어 있으며, 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에 우수한 피부 보습 및 진정 효과를 나타내는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 철갑상어 알 추출물 및 철갑상어 추출물이 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물을 제공함에 의해 달성된다.
본 발명의 바람직한 특징에 따르면, 상기 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물은 철갑상어 알 추출물 0.1 내지 10 중량% 및 철갑상어 추출물 0.1 내지 10 중량%가 함유되는 것으로 한다.
본 발명의 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 철갑상어 알 추출물은 철갑상어 알에 카제인 용액을 혼합하여 제조되는 것으로 한다.
본 발명의 더욱 바람직한 특징에 따르면, 상기 철갑상어 알 추출물은 철갑상어 알에 질량농도가 4 내지 6%인 카제인 용액을 혼합하여 4 내지 6℃의 온도에서 1 내지 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 2 내지 4%인 카제인 용액 400 내지 600 중량부를 혼합하고 초음파를 40 내지 60분 동안 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 1 내지 3%인 케제인 수용액을 혼합하고 75 내지 85℃의 온도에서 15 내지 25분 동안 3차 추출한 후에 냉각하고, 냉각된 3차 추출물에 질량농도가 0.5 내지 1.5%인 카제인 용액 및 알칼라아제를 혼합하고 45 내지 55℃의 온도에서 2 내지 4시간 동안 반응시키고 알칼라아제를 추가로 혼합하여 4 내지 6시간 동안 반응시켜 4차 추출하고, 4차 추출물을 110 내지 130℃의 온도로 8 내지 12분 동안 가열한 후에 냉각 및 원심분리하여 제조되는 것으로 한다.
본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 철갑상어 추출물은 철갑상어에 레몬 파우더 추출물을 혼합하여 제조되는 것으로 한다.
본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 철갑상어 추출물은 철갑상어 100 중량부에 질량농도가 4 내지 6%인 레몬 파우더 추출물을 혼합하고 4 내지 10℃의 온도로 2 내지 4시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 2 내지 4%인 레몬 파우더 추출물을 추가로 혼합하고 초음파를 90 내지 150분 동안 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 1 내지 3%인 레몬 파우더 추출물을 추가로 혼합하고 15 내지 25℃의 온도에서 1 내지 3시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 0.5 내지 1.5%인 레몬 파우더 추출물 및 알칼라아제를 혼합하고 45 내지 55℃의 온도에서 2 내지 4시간 반응시킨 후에, 알칼라아제를 추가로 혼합하고 4 내지 6시간 동안 반응시켜 4차 추출하고, 4차 추출물을 110 내지 130℃의 온도로 8 내지 12분 동안 가열한 후에 냉각 및 원심분리하여 제조되는 것으로 한다.
본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물은 필라그린의 발현을 증가시키며, IL-1α의 발현을 감소시키는 것으로 한다.
본 발명에 따른 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법은 철갑상어 추출물 및 철갑상어 알 추출물이 함유되어 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민이 다량 함유되어 있으며, 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에 우수한 피부 보습 및 진정 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 탁월한 효과를 나타낸다.
도 1은 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물, 실시예 7 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 각질형성세포(HaCaT)에서의 독성실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물, 실시예 7 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 대식세포(RAW264.7)에서의 독성실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물, 실시예 7 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 필라그린의 발현 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물, 실시예 7 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 IL-1α 발현 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물, 실시예 7 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 대식세포(RAW264.7)에서의 독성실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물, 실시예 7 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 필라그린의 발현 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물, 실시예 7 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 IL-1α 발현 결과를 나타낸 그래프이다.
이하에는, 본 발명의 바람직한 실시예와 각 성분의 물성을 상세하게 설명하되, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 발명을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세하게 설명하기 위한 것이지, 이로 인해 본 발명의 기술적인 사상 및 범주가 한정되는 것을 의미하지는 않는다.
본 발명에 따른 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물은 철갑상어 알 추출물 및 철갑상어 추출물이 함유되며, 철갑상어 알 추출물 0.1 내지 1 중량% 및 철갑상어 추출물 0.1 내지 1 중량%가 함유되는 것이 바람직하다.
상기 철갑상어 알 추출물은 0.1 내지 1 중량%가 함유되며, 철갑상어 알에 카제인 용액을 혼합하여 제조될 수 있는데, 상기와 같이 카제인 용액이 혼합되어 제조되는 철갑상어 알 추출물은 철갑상어 알에 함유된 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민이 등과 같은 유효성분의 용출량이 향상되어 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에, 우수한 피부보습 및 진정 효과를 나타내게 된다.
이때, 상기 철갑상어 알 추출물의 제조과정을 보다 상세하게 설명하면, 상기 철갑상어 알 추출물은 철갑상어 알에 질량농도가 4 내지 6%인 카제인 용액을 혼합하고 4 내지 10℃의 온도로 1 내지 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물 100 중량부에 질량농도가 2 내지 4%인 카제인 용액을 400 내지 600 중량부를 혼합하고 초음파를 40 내지 60분 동안 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 1 내지 3%인 케제인 수용액을 혼합하고 75 내지 85℃의 온도에서 15 내지 25분 동안 3차 추출한 후에 냉각하고, 냉각된 3차 추출물에 질량농도가 0.5 내지 1.5%인 카제인 용액 및 알칼라아제를 혼합하고 45 내지 55℃의 온도에서 2 내지 4시간 동안 반응시키고 알칼라아제 효소를 추가로 혼합하여 4 내지 6시간 동안 반응시켜 4차 추출하고, 4차 추출물을 110 내지 130℃의 온도로 8 내지 12분 동안 가열한 후에 냉각 및 원심분리하여 제조되는 것이 바람직하다.
상기 철갑상어 알 추출물의 함량이 0.1 중량% 미만이면 상기의 효과가 미미하며, 상기 철갑상어 알 추출물의 함량이 1 중량%를 초과하게 되면 상기의 효과는 크게 향상되지 않으면서 화장료 조성물의 제조비용이 지나치게 증가되기 때문에 바람직하지 못하다.
또한, 상기 철갑상어 추출물은 0.1 내지 1 중량%가 함유되며, 철갑상어에 레몬 파우더 추출물을 혼합하여 제조될 수 있는데, 상기와 같이 레몬 파우더 추출물이 혼합되어 제조되는 철갑상어 알 추출물은 철갑상어 알에 함유된 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민 등과 같은 유효성분의 용출량이 향상되어 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에, 우수한 피부보습 및 진정 효과를 나타내게 된다.
이때, 상기 철갑상어 추출물의 제조과정을 보다 상세하게 설명하면, 철갑상어 100 중량부에 질량농도가 4 내지 6%인 레몬 파우더 추출물을 혼합하고 4 내지 10℃의 온도로 2 내지 4시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 2 내지 4%인 레몬 파우더 추출물을 추가로 혼합하고 초음파를 90 내지 150분 동안 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 1 내지 3%인 레몬 파우더 추출물을 추가로 혼합하고 15 내지 25℃의 온도에서 1 내지 3시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 0.5 내지 1.5%인 레몬 파우더 추출물 및 알칼라아제를 혼합하고 45 내지 55℃의 온도에서 2 내지 4시간 반응시킨 후에, 알칼라아제를 추가로 혼합하고 4 내지 6시간 동안 반응시켜 4차 추출하고, 4차 추출물을 110 내지 130℃의 온도로 8 내지 12분 동안 가열한 후에 냉각 및 원심분리하여 제조되는 것이 바람직하다.
상기 철갑상어 추출물의 함량이 0.1 중량% 미만이면 상기의 효과가 미미하며, 상기 철갑상어 추출물의 함량이 1 중량%를 초과하게 되면 상기의 효과는 크게 향상되지 않으면서 화장료 조성물의 제조비용이 지나치게 증가되기 때문에 바람직하지 못하다.
또한, 본 발명을 통해 제조되는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물은 식품의약품안전처에 등록된 화장품 원료 리스트 및 ICID(국제화장품 원료집)에 등재되어 있는 성분 중에서 1종 이상을 더 포함할 수 있다.
예를 들면, 상기 화장료 조성물은 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 방향제, 계면활성제, 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제, 방부제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 염료 및 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 하나 이상 더 포함할 수 있다.
상기 비타민은 수용성 또는 유용성 비타민을 포함할 수 있고, 상기 수용성 비타민은 수용성 비타민으로서 화장품에 배합 가능한 것으로, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 보다 바람직하게는 콜라겐 합성이 도움을 주는 비타민 C를 포함할 수 있다. 또한, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 포함될 수 있고, 상기 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 피부 보습 및 피부 진정 효과를 증진시키고 부작용을 최소화하기 위해 피부보호제, 활성제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 화장수, 유액, 로션, 크림, 페이스트, 젤, 용액, 현탁액, 오일, 왁스, 팩, 파우더, 파운데이션, 스프레이 및 계면활성제-함유 클렌징류 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
바람직하게는, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 고형비누, 액상비누, 스틱형 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 클렌징 티슈 및 스프레이 등의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물이 크림 또는 젤 제형인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액 제형인 경우에는 용매, 용매화제 또는 유탁화제로, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 현탁액 제형인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이 제형인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더를 더 포함할 수 있고, 특히 스프레이 제형인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물이 계면활성제-함유 클렌징 제형인 경우에는 담체 성분으로 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 단독 또는 중복으로 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용 횟수를 달리할 수 있다.
이하에서는, 본 발명에 따른 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물의 제조방법 및 그 제조방법을 통해 제조된 화장료 조성물의 물성을 실시예를 들어 설명하기로 한다.
<실시예 1> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 질량농도가 5%인 카제인 용액 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 추출하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<실시예 2> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 질량농도가 5%인 카제인 용액 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 카제인 용액 500mL를 혼합하고 상온에서 1시간 동안 초음파를 조사하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<실시예 3> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 질량농도가 5%인 카제인 용액 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 카제인 용액 500mL를 혼합하고 상온에서 1시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 카제인 용액 200mL를 혼합한 후 80℃에서 20분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<실시예 4> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 질량농도가 5%인 카제인 용액 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 카제인 용액 500mL를 혼합하고 상온에서 1시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 카제인 용액 200mL를 혼합한 후 80℃에서 20분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하여 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 1% 카제인 용액 200mL를 혼합하고 121℃에서 10분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하고 고속으로 원심분리하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<실시예 5> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 질량농도가 5%인 카제인 용액 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 카제인 용액 500mL를 혼합하고 상온에서 1시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 카제인 용액 200mL를 혼합한 후 80℃에서 20분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하여 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 1% 카제인 용액 200mL를 혼합하고 알칼라아제(Novozyme) 0.1% 처리 후 50℃에서 3시간 반응시키고 121℃에서 10분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하고 고속으로 원심분리하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<실시예 6> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 질량농도가 5%인 카제인 용액 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 카제인 용액 500mL를 혼합하고 상온에서 1시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 카제인 용액 200mL를 혼합한 후 80℃에서 20분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하여 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 1% 카제인 용액 200mL를 혼합하고 알칼라아제(Novozyme) 0.1% 처리 후 50℃에서 3시간 반응시키고, 알칼라아제 0.1%를 추가로 처리하여 5시간 반응시킨 후에 121℃에서 10분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하고 고속으로 원심분리하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<실시예 7> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 600g에 질량농도가 5%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 추출하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<실시예 8> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 600g에 질량농도가 5%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합 후 상온에서 2시간 동안 초음파를 조사하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<실시예 9> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 1kg에 질량농도가 5%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합 후 상온에서 2시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 레몬 파우더 추출물 2L를 혼합한 후 20℃에서 2시간 동안 추출하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<실시예 10> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 600g에 질량농도가 5%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합 후 상온에서 2시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 레몬 파우더 추출물 2L를 혼합한 후 20℃에서 2시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 1%인 레몬 파우더 추출물 2L를 혼합하고 121℃에서 10분 추출하고 -20℃에서 30분 냉각하고 고속 원심분리하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<실시예 11> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 1kg에 질량농도가 5%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합 후 상온에서 2시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 레몬 파우더 추출물 2L를 혼합한 후 20℃에서 2시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 1%인 레몬 파우더 추출물 2L를 혼합하고 알칼라아제(Novozyme) 0.2% 처리 후 50℃에서 3시간 반응시키고, 121℃에서 10분 추출하고 -20℃에서 30분 냉각하고 고속 원심분리하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<실시예 12> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 600g에 질량농도가 5%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 3%인 레몬 파우더 추출물 1L를 혼합 후 상온에서 2시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 2%인 레몬 파우더 추출물 2L를 혼합한 후 20℃에서 2시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 1%인 레몬 파우더 추출물 2L를 혼합하고 알칼라아제(Novozyme) 0.2% 처리 후 50℃에서 3시간 반응시키고, 알칼라아제 0.2% 를 추가로 처리하여 5시간 반응시킨 후에 121℃에서 10분 추출하고 -20℃에서 30분 냉각하고 고속 원심분리하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<실시예 13>
상기 실시예 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 0.5 중량%, 상기 실시예 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 0.5 중량% 및 정제수 잔량으로 하여 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물을 제조하였다.
<실시예 14>
상기 실시예 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 0.1 중량%, 상기 실시예 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 0.1 중량% 및 정제수 잔량으로 하여 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물을 제조하였다.
<실시예 15>
상기 실시예 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 10 중량%, 상기 실시예 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 10 중량% 및 정제수 잔량으로 하여 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물을 제조하였다.
<비교예 1> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 정제수 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 정제수 500mL를 혼합하고 상온에서 1시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 정제수 200mL를 혼합한 후 80℃에서 20분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하여 3차 추출하고, 3차 추출물에 정제수 200mL를 혼합하고 121℃에서 10분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하고 고속으로 원심분리하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<비교예 2> 철갑상어 알 추출물의 제조
철갑상어 알 100g에 정제수 100mL을 혼합한 후 4℃에서 2시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 정제수 500mL를 혼합하고 상온에서 1시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 정제수 200mL를 혼합한 후 80℃에서 20분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하여 3차 추출하고, 3차 추출물에 정제수 200mL를 혼합하고 알칼라아제(Novozyme) 0.1% 처리 후 50℃에서 3시간 반응시키고, 알칼라아제 0.1%를 추가로 처리하여 5시간 반응시킨 후에 121℃에서 10분 동안 추출하고 -20℃에서 30분 냉각을 진행하고 고속으로 원심분리하여 철갑상어 알 추출물을 제조하였다.
<비교예 3> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 600g에 정제수 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 정제수 1L를 혼합 후 상온에서 2시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 정제수 2L를 혼합한 후 20℃에서 2시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 정제수 2L를 혼합하고 121℃에서 10분 추출하고 -20℃에서 30분 냉각하고 고속 원심분리하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<비교예 4> 철갑상어 추출물의 제조
철갑상어 600g에 질량농도가 정제수 1L를 혼합한 후 4℃에서 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 정제수 1L를 혼합 후 상온에서 2시간 동안 초음파를 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 정제수 2L를 혼합한 후 20℃에서 2시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 정제수 2L를 혼합하고 알칼라아제(Novozyme) 0.2% 처리 후 50℃에서 3시간 반응시키고, 알칼라아제 0.2% 를 추가로 처리하여 5시간 반응시킨 후에 121℃에서 10분 추출하고 -20℃에서 30분 냉각하고 고속 원심분리하여 철갑상어 추출물을 제조하였다.
<비교예 5>
상기 실시예 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 0.01 중량%, 상기 실시예 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 0.01 중량% 및 정제수 잔량으로 하여 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물을 제조하였다.
<비교예 6>
상기 실시예 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 15 중량%, 상기 실시예 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물 15 중량% 및 정제수 잔량으로 하여 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물을 제조하였다.
상기 실시예 1 내지 6 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 실시예 7 내지 12 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 세포독성을 측정하여 아래 도 1 내지 2에 나타내었다.
{단, 세포독성은 각질형성세포(keratinocyte, HaCaT ATCC)는 혈구계(hemacytometer)를 이용하여 계수한 후, 96 웰 플레이트에 1×104 세포/웰 농도로 분주하였다. 대식세포 (Macrophage, RAW264.7, ATCC)는 혈구계(hemacytometer)를 이용하여 계수한 후, 96 웰 플레이트에 4×103 세포/웰 농도로 분주하였다. 각각 24시간 동안 배양한 후, 각질형성세포, 대식세포에 제조된 철갑상어 알 추출물과 철갑상어 추출물을 전체 2.5% 농도로 각각 웰에 첨가하고, 5% 페니실린/스트렙토마이신이 포함된 DMEM 배지 100μL를 이용하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 상등액을 제거하고 DMEM 배지와 WST 용액(EZ-cytox)을 9:1의 중량 비율로 혼합한 혼합물을 첨가한 다음 37℃, 5% CO2 배양기에서 2시간 동안 반응시키고, 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 정도(세포 생존율)는 시험물질 및 비교물질과 같은 용매를 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 하여 백분율(%)로 표시하였다.
[계산식 1]
세포 생존율(%) = 시료물질 첨가군 흡광도 / 대조군 흡광도 × 100
아래 도 1 내지 2에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 1 내지 12 및 비교예 1 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 철갑상어 추출물은 세포독성이 낮은 것을 알 수 있다.
또한, 상기 실시예 1 내지 6 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 실시예 7 내지 12 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 필라그린 발현을 분석하여 아래 도 3에 나타내었다.
{단, 각질형성세포(keratinocyte, HaCaT ATCC)는 혈구계(hemacytometer)를 이용하여 계수한 후, 24 웰 플레이트에 2×105 세포/웰 농도로 분주하였다. 24시간 동안 DMEM 배지(10% 우태아혈청, 5% 페니실린/스트렙토마이신)에서 배양한 후, 10% 우태아혈청이 없는 DMEM 배지로 교체 후 24시간 추가 배양하였다. 실시예 1 내지 12 및 비교예 1 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 철갑상어 추출물을 전체 1% 농도로 48시간 처리하였다. 배양액을 회수한 후 필라그린 ELISA(Cloud-Clone SEJ103Hu)를 진행하였다. 필라그린 ELISA는 제조사에서 제공한 프로토콜을 이용하였다. 실험의 양성대조군으로 TGF-b 10ng/ml(BioLegend 580702)을 처리하여 검증하였다.}
아래 도 3에 나타낸 것처럼, 실시예 1 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 철갑상어 추출물은 비교예 1 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물 및 철갑상어 추출물에 비해 필라그린 발현 효과가 우수한 것을 알 수 있다.
또한, 상기 실시예 1 내지 6 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 실시예 7 내지 12 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물의 IL(Interleukin)-1α의 발현을 분석하여 아래 도 4에 나타내었다.
{단, 대식세포(Macrophage, RAW264.7, ATCC)는 혈구계(hemacytometer)를 이용하여 계수한 후, 24 웰 플레이트에 2×105 세포/웰 농도로 분주하였다. 24시간 동안 DMEM 배지(10% 우태아혈청, 5% 페니실린/스트렙토마이신)에서 배양한 후, LPS(L2630, Sigma) 1ug/ml와 실시예 1 내지 12 및 비교예 1 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 철갑상어 추출물을 전체 1% 농도로 각각 웰에 첨가하고 37℃ 및 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 동안 시료 처리 후, 배양액을 회수하고, IL-1α ELISA(R&D systems MLA00)를 수행하였다. ELISA는 제조사에서 제공한 프로토콜을 이용하였다. 실험의 양성대조군으로 Dexamethasone(5μM, Sigma D4902)을 사용하였다.}
아래 도 4에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 1 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 철갑상어 추출물은 비교예 1 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 철갑상어 추출물에 비해 IL-1α의 발현을 낮추는 효과가 우수한 것을 알 수 있다. 특히, 실시예 4, 6, 10 및 12를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 철갑상어 추출물이 IL-1α의 발현을 낮추는 효과가 더욱 우수한 것을 알 수 있다.
또한, 상기 실시예 4 내지 6 및 비교예 1 내지 2를 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 실시예 10 내지 12 및 비교예 3 내지 4를 통해 제조된 철갑상어 추출물에 함유된 콘드로이틴의 함량을 측정하여 아래 표 1에 나타내었다.
{단, Chondroitin sulfate는 SeQuant ZIC-HILIC (C18 4.6*250mm, 5um), 1.0 mL/min 유량 하에, 일정 비율로 혼합한 용리액을 ELSD에 의해 분석하였다. 컬럼의 온도는 30℃로 분석시간 동안 유지하였고 주입량은 10uL로 Chondroitin sulfate 분석을 진행하였다.}
<표 1>
상기 표 1에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 4 내지 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 실시예 10 내지 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물은 콘드로이틴의 함량이 높은 것을 알 수 있으며, 특히, 실시예 6을 통해 제조된 철갑상어 알 추출물과 실시예 12를 통해 제조된 철갑상어 추출물에 함유된 콘드로이틴의 함량이 더욱 높은 것을 알 수 있다.
또한, 상기 실시예 13 내지 15 및 비교예 5 내지 6을 통해 제조된 화장료 조성물의 피부 보습 및 진정 효과를 측정하여 아래 표 2에 나타내었다.
{단, 화장료 조성물의 피부 보습 및 진정 효과는 피시험자 50명을 대상으로 하되, 피시험자들로 하여금 하루 2mL씩 얼굴에 12시간 간격으로 2회 도포하는 과정을 30일 동안 반복하도록 한 후에 5점 척도법으로 조사하여 평균값으로 나타내는 방법을 이용하였다.
5점:매우 개선, 4점:개선, 3점:변화 없음, 2점:악화: 1점:매우 악화}
<표 2>
상기 표 2에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 13 내지 15를 통해 제조된 화장료 조성물은 피부 보습 및 피부 진정 효과가 우수한 것을 알 수 있다.
반면, 비교예 5를 통해 제조된 화장료 조성물은 피부 보습이나 피부 진정 효과가 미미하였으며, 비교예 6을 통해 제조된 화장료 조성물은 철갑상어 알 추출물 및 철갑상어 추출물이 과량 함유되었음에도 피부 보습 및 피부 진정 효과가 크게 향상되지 않는 것을 알 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물 및 이의 제조방법은 철갑상어 추출물 및 철갑상어 알 추출물이 함유되어 콘드로이틴, 단백질, 오메가-3 지방산, 미네랄 및 비타민이 다량 함유되어 있으며, 필라그린(filaggrin)의 발현을 증가시키고, IL-1α의 발현을 줄여주기 때문에 우수한 피부 보습 및 진정 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공한다.
Claims (7)
- 철갑상어 알 추출물 및 철갑상어 추출물이 함유되되,
상기 철갑상어 알 추출물은 철갑상어 알에 질량농도가 4 내지 6%인 카제인 용액을 혼합하여 4 내지 6℃의 온도에서 1 내지 3시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 2 내지 4%인 카제인 용액 400 내지 600 중량부를 혼합하고 초음파를 40 내지 60분 동안 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 1 내지 3%인 케제인 수용액을 혼합하고 75 내지 85℃의 온도에서 15 내지 25분 동안 3차 추출한 후에 냉각하고, 냉각된 3차 추출물에 질량농도가 0.5 내지 1.5%인 카제인 용액 및 알칼라아제를 혼합하고 45 내지 55℃의 온도에서 2 내지 4시간 동안 반응시키고 알칼라아제를 추가로 혼합하여 4 내지 6시간 동안 반응시켜 4차 추출하고, 4차 추출물을 110 내지 130℃의 온도로 8 내지 12분 동안 가열한 후에 냉각 및 원심분리하여 제조되는 것을 특징으로 하는, 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물은 철갑상어 알 추출물 0.1 내지 10 중량% 및 철갑상어 추출물 0.1 내지 10 중량%가 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물.
- 청구항 1 또는 2에 있어서,
상기 철갑상어 알 추출물은 철갑상어 알에 카제인 용액을 혼합하여 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물.
- 삭제
- 청구항 1 또는 2에 있어서,
상기 철갑상어 추출물은 철갑상어에 레몬 파우더 추출물을 혼합하여 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물.
- 청구항 3에 있어서,
상기 철갑상어 추출물은 철갑상어 100 중량부에 질량농도가 4 내지 6%인 레몬 파우더 추출물을 혼합하고 4 내지 10℃의 온도로 2 내지 4시간 동안 1차 추출하고, 1차 추출물에 질량농도가 2 내지 4%인 레몬 파우더 추출물을 추가로 혼합하고 초음파를 90 내지 150분 동안 조사하여 2차 추출하고, 2차 추출물에 질량농도가 1 내지 3%인 레몬 파우더 추출물을 추가로 혼합하고 15 내지 25℃의 온도에서 1 내지 3시간 동안 3차 추출하고, 3차 추출물에 질량농도가 0.5 내지 1.5%인 레몬 파우더 추출물 및 알칼라아제를 혼합하고 45 내지 55℃의 온도에서 2 내지 4시간 반응시킨 후에, 알칼라아제를 추가로 혼합하고 4 내지 6시간 동안 반응시켜 4차 추출하고, 4차 추출물을 110 내지 130℃의 온도로 8 내지 12분 동안 가열한 후에 냉각 및 원심분리하여 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물은 필라그린의 발현을 증가시키며, IL-1α의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 피부 보습 및 진정용 화장료 조성물.
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