KR102604154B1 - 서양뒤영벌 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물 - Google Patents
서양뒤영벌 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 서양뒤영벌 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서양뒤영벌의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 서양뒤영벌 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처 회복 및 피부 보습에 효과적인 복합 용도의 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.
인간을 포함하는 동물의 피부의 가장 중요한 역할은 외부의 손상 및 세균의 침입으로부터 신체를 보호하는 방어 장벽(defense barrier)의 역할을 함과 동시에 내부로부터의 열과 수분의 손실을 방지하는 것이다. 이러한 기능을 하는 피부는 여러 개의 층으로 구성되어 있으며, 이 가운데 가장 바깥에 위치하는 것을 표피(epidermis)라고 하는데, 이들 표피에서 재생능력을 보이는 것으로 알려진 것은 기저층에 존재하는 피부의 각질 줄기세포(Keratinocyte stem cells, KSC)이다.
이러한 피부는 세포의 변이, 활성산소 라디칼, 독성 물질의 축적 및 피부 간극 구성 단백질 변형 등에 의해 노화가 발생하는 것으로 알려져 있고, 보통 어릴 때는 피부 손상이 일어나더라도 흉터가 남지 않는 반면, 나이가 들어 피부 손상이 일어나게 되면 흉터가 남는 이유는 피부 재생에 필요한 세포의 증식의 수준 정도가 나이에 따라 현저하게 낮아지기 때문인 것으로 보인다. 즉, 노화가 진행하게 되면, 상기한 세포들의 증식 정도가 낮아지게 되며, 이는 피부 재생 능력이 감퇴하는 것으로, 상처 등의 회복이 지연되거나, 피부 보습 및 탄력 감소가 심화되어 주름이 발생할 수 있다.
이러한 피부 노화, 주름 개선 등의 문제를 해결하기 위하여 콜라겐의 변화에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다. 콜라겐의 생산을 촉진하는 저분자 화합물은 현재 피부주름 및 기미, 색소침착 개선을 위해 널리 사용되고 있는 레티노이드류, 그 중에서도 레티놀(비타민 A)에 대한 피부 주름제거 임상 결과들이 다양하게 보고되고 있다. 그러나 레티놀은 건성피부에 사용할 경우 피부의 각질을 벗겨내 피부자극이 심해 지거나 더욱 건성이 될 가능성이 있다. 또한, 재조합 단백질 원료의 경우 고가의 비용이 소요되며, 천연 추출물의 경우 재현성이 떨어지는 단점이 있다.
서양뒤영벌은 주로 일벌이나 여왕벌의 분획물인 글라이코자미노글라이칸으로써 주로 의약품 용도로 연구되어 왔다. 예를 들어, 서양뒤영벌 일벌을 포함한 뒤영벌류의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물(특허등록 제10-1403520)이 개시되었으나, 화장품으로서의 효능에 대하여는 알려져 있지 않은 실정이다.
따라서 피부 건조를 막고 면역기능을 강화하기 위해 개발된 여러 화장료 조성물들의 부작용을 해결하기 위하여, 본 발명자들은 천연 재료인 서양뒤영벌의 추출물에서 피부 보습, 콜라겐 생성 및 피부 재생 및 상처회복 성분을 갖는 화장료 조성물을 찾으려고 연구 노력한 결과 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 한 측면은 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 복합 용도의 기능성 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 견지에 의하면 서양뒤영벌의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 기능성 화장료 조성물이 제공된다.
서양뒤영벌 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물은 피부에 안전한 천연 유래 성분을 이용하여 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 기능성 화장료 조성물을 제공할 수 있으며, 특히 최근 급속도로 시장이 증가하고 있는 미세먼지 등과 같은 유해 환경으로부터 피부를 보호해주는 안티폴루션 화장품으로 활용이 가능하다.
도 1은 인간진피섬유아세포에 대한 서양뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물의 세포독성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 서양뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 PIP(Type-1 Procollagen) 생성에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 과산화수소(H2O2)에 의한 인간진피섬유아세포 손상 조건 확인을 위한 (a)세포독성 실험, (b)히알루론산 및 (c)세라마이드 인산화효소 생성 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 과산화수소(500μM H2O2) 처리에 의한 산화적 손상 조건에서 서양 뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 (a)히알루론산 및 (b)세라마이드 인산화효소 생성에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 세포이동(피부재생)에 미치는 영향을 나타낸 것으로, (a)피부 세포 스크래치 직후 및 추출물 처리 8시간 후 현미경 사진 비교 및 (b)길이 측정을 통한 상처회복(wound healing) 효과 비교 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 서양뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 PIP(Type-1 Procollagen) 생성에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 과산화수소(H2O2)에 의한 인간진피섬유아세포 손상 조건 확인을 위한 (a)세포독성 실험, (b)히알루론산 및 (c)세라마이드 인산화효소 생성 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 과산화수소(500μM H2O2) 처리에 의한 산화적 손상 조건에서 서양 뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 (a)히알루론산 및 (b)세라마이드 인산화효소 생성에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 세포이동(피부재생)에 미치는 영향을 나타낸 것으로, (a)피부 세포 스크래치 직후 및 추출물 처리 8시간 후 현미경 사진 비교 및 (b)길이 측정을 통한 상처회복(wound healing) 효과 비교 결과를 나타낸 것이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 형태를 설명한다. 그러나, 본 발명의 실시 형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 의하면 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 복합 용도의 기능성 화장료 조성물이 제공되며, 보다 상세하게 본 발명의 기능성 화장료 조성물은 서양뒤영벌의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는 것이다.
상기 본 발명의 기능성 화장료 조성물은 콜라겐 생성 촉진에 의해 피부 탄력을 증진시키고, 세포이동(cell migration) 촉진에 의해 피부 재생을 증진시키며, 및/또는 히알루론산(Hyaluronic acid, HA) 및 세라마이드 인산화효소(Ceramide kinase, CERK)의 분비 촉진에 의해 피부 보습을 증진시킬 수 있는 복합적인 기능성을 발현하는 것이다.
본 발명에 사용될 수 있는 상기 서양뒤영벌(Bombus terrestris)은 벌목 꿀벌과의 곤충으로 유럽이 원산지이며 한국에는 자원곤충으로 도입되었다. 본 발명에 있어서 상기 서양뒤영벌은 서양뒤영벌의 수벌, 일벌 및 여왕벌로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 것일 수 있으며, 바람직하게는 여왕벌인 것이다. 여왕벌의 몸길이는 20~22㎜이고, 수벌의 몸길이는 14~16㎜이며 일벌의 몸길이는 11~17㎜이다.
서양뒤영벌의 알코올 추출물을 획득하기 위한 상기 알코올은 탄소수 1 내지 3의 알코올, 헥산 및 클로로포름으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있으며, 예를 들어 메탄올, 에탄올 및 프로판올로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다. 농도는 70 내지 100%(v/v), 예를 들어 70 내지 95%(v/v)의 농도가 바람직하다.
상기 유효성분은 기능성 화장료 조성물 부피를 기준으로 15 내지 500 μg/ml의 농도로 포함되는 것일 수 있으며, 예를 들어 30 내지 250 μg/ml, 또는 60 내지 250 μg/ml일 수 있다. 상기 유효성분이 15μg/ml 미만인 경우에는 본 발명의 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습 효과가 불충분할 수 있으며, 500 μg/ml를 초과하는 경우에는 함량 증가 대비 효과의 증가가 크지 않은 경향이 있다. 다만, 이에 제한되는 것은 아니며, 상기 유효한 양은 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 피부 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 추출물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명의 상기 기능성 화장료 조성물은 화장품학적 또는 피부학적으로 허용될 수 있는 담체와 함께 용액, 현탁액, 에멀션, 페이스트, 젤, 크림, 파우더 또는 스프레이 제형으로 제제화될 수 있다.
한편, 상기 화장료 조성물은 보존제, 유화제, 안정화제, 계면활성제, 용해제, 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 및 제한제 중 적어도 하나 이상의 성분을 더 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 보습제 등의 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
본 발명에 있어서 피부는 얼굴, 손, 팔, 다리, 발, 가슴, 배, 등, 엉덩이, 및 두피를 포함하는 신체의 모든 피부 부위를 포함한다.
구체적으로 본 발명의 상기 기능성 화장료 조성물은 화장수, 영양 크림, 로션, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 비누 또는 파운데이션으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액(에멀션)인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 상기 서양뒤영벌의 알코올 추출물은 서양뒤영벌을 2배 내지 30배의 중량비의 알코올을 이용하여 5 내지 35℃에서 추출한 추출원액을 여과 및 농축하여 획득된 것일 수 있다.
보다 상세하게, 서양뒤영벌을 2배 내지 30배, 예를 들어 5배 내지 25배, 또는 10배내지 20배의 중량비의 알코올을 이용하여 실온, 예를 들어 5 내지 35℃에서 추출한 추출원액을 마련한다. 이와 같은 추출 과정은 예를 들어 12시간 내지 3일, 바람직하게는 24시간 내지 48시간 동안 수행될 수 있다.
그 후 상기 추출원액을 여과하여 고형물을 제외하고 추출 용액을 획득한다. 이때 여과의 방식은 특히 제한되는 것은 아니며, 예를 들어 여과지에 의한 여과 등 당업계에 알려진 어떠한 고액 분리 방법도 사용할 수 있다.
나아가, 상기 추출 용액을 회수하고 농축하여 서양뒤영벌 추출물을 제조한다. 이때 농축 방법은 특히 제한되는 것은 아니며, 예를 들어 감압농축에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 서양뒤영벌 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 피부에 안전한 천연 유래 성분을 이용하여 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 기능성 화장료 조성물 및/또는 약학적으로 허용되는 담체와 함께 약학 조성물로 활용이 가능하다.
이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시에 불과하며, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 서양뒤영벌 추출물의 제조
실시예 1: 서양뒤영벌 여왕벌 추출물의 제조
서양뒤영벌 여왕벌 1㎏을 물로 2회 세척 후 체를 이용하여 탈수하고, 60℃에서 12 시간 건조 후 분쇄하였다. 그 결과 분쇄물을 20 배 중량비의 95% 에탄올을 이용하여 48시간 동안 실온(20℃)에서 추출하였다. 이 추출원액을 여과지(Wattman No 4)를 이용하여 여과한 후에 감압농축하여 서양뒤영벌 여왕벌 추출물을 얻었다.
실시예 2: 서양뒤영벌 수벌 추출물의 제조
서양뒤영벌 수벌을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 과정에 의해 추출하여 서양뒤영벌 수벌 추출물을 얻었다.
2. 세포 독성 실험
인간진피섬유아세포(HDF)를 37℃, 5% CO2 조건에서 10% FBS(fetal bovine serum), 페니실린(100 U/㎖), 스트렙토마이신(100 ㎍/㎖)이 첨가된 DMEM 배지로 배양하였다. 세포들은 75 cm2 플라스크에 배양하였으며, 배양은 3일 간격으로 배양 표면을 PBS(phosphate buffered saline) 용액으로 씻어준 후 세포를 탈착하여 일정 비율로 10% FBS가 첨가된 DMEM 배양액에 부유시킨 다음 75 cm2 플라스크에 옮겨 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하였다.
실시예 1의 서양뒤영벌 여왕벌 추출물 및 실시예 2의 서양뒤영벌 수벌 추출물의 대식세포 세포독성을 측정하기 위하여 MTT 어세이(assay)를 수행하였다. 보다 상세하게 인간진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 2×104 cell이 되도록 96 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 추출물을 농도 별로 24시간 동안 처리하였다. 이후, MTT 용액을 웰(well) 당 20 ㎕씩 첨가한 후 2시간 동안 배양하였고, 배양 상등액(supernatant)을 모두 제거한 후 DMSO를 웰(well) 당 200 ㎕씩 첨가하여 세포 내 생성된 포마잔(formazan)을 완전히 용해시킨 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율(cell viability)은 무처리구 대조군(CON) 대비 추출물 처리구의 흡광도 %로 산출하였으며 그 결과를 도 1에 나타내었다. 이때 대조군(CON)은 뒤영벌 추출물을 첨가하지 않은 무처리군을 나타낸다.
도 1을 참고하면 바람직하게는 본 발명의 추출물 500 ㎍/㎖ 이하의 농도까지는 모두 세포독성이 없음을 확인하였다.
3. 콜라겐 생성 실험
본 발명의 서양뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 콜라겐 생합성에 미치는 영향을 평가하기 위해 인간 진피섬유아세포의 PIP(Type-1 Procollagen) 생성에 미치는 영향을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 상세하게 인간 진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 2×104 cell이 되도록 96 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 각 웰의 세포들을 무혈청 DMEM 배양액으로 세척한 다음 각 웰에 추출물을 농도별로 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 이후 배양액을 수집하여 Procollagen type I C-peptide assay kit(Takara Bio Inc.)를 사용하여 콜라겐 함량을 측정하였으며, 이때 콜라겐의 농도는 kit에 포함되어 있는 표준용액으로부터 산출된 표준곡선으로부터 계산하였다. 이때 대조군(CON)은 뒤영벌 추출물을 첨가하지 않은 무처리군을 나타내며, '기존 피부재생에 효과가 있는 고시형 기능성 화장품원료로서 추출물의 효능을 비교하기 위한 양성대조군으로 '아데노신(Adenosine)' 500 ㎍/㎖을 이용하였다.
그 결과 도 2를 참고하면 본 발명의 추출물은 PIP(콜라겐) 생성에 의한 피부재생 효과를 증가시키는 것을 확인할 수 있으며, 특히 여왕벌 추출물의 경우 수벌 추출물에 비하여 보다 향상된 추출물은 PIP(콜라겐) 생성에 의한 피부재생 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
4. 과산화수소(H
2
O
2
)에 의한 인간진피섬유아세포 손상 조건 확인
피부 손상 모델로 활용하기 위한 피부세포의 손상을 유도하기 위해 인간 진피섬유아세포에 과산화수소(H2O2)를 처리하여 산화적 손상을 유도한 후 (a)세포독성, (b)히알루론산 생성량 및 (c)세라마이드 인산화효소(Ceramide Kinase) 생성량을 분석하였다.
보다 상세하게, 세포독성은 상기 도 1과 동일한 방법으로 분석하였다. 한편, 히알루론산 생성량은 인간 진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 2×104 cell이 되도록 96 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 농도별로 과산화수소(H2O2)를 2시간 동안 처리하였다. 이후 상등액을 수집하여 HA(Human Hyaluronic acid) ELISA Kit(CUSABIO)으로 히알루론산 생성량을 측정하였다. 세라마이드 인산화효소 생성량의 경우 상기 히알루론산 분석법과 동일한 방법으로 인간 진피섬유아세포에 농도 별로 과산화수소(H2O2)를 처리한 후 세포외 및 세포내 함량을 비교하기 위해 각각 상등액과 세포를 분리하였다. 이로부터 획득된 세포를 RIPA Lysis Buffer(BIOMAX)로 처리하여 1,800rpm에서 5분간 원심분리를 통해 상등액을 수집하여 세포 용해물(Cell lysate) 시료를 획득하였다. 이후 획득한 상등액 및 세포 용해물 시료를 CERK(Human Ceramide Kinase) ELISA Kit(CUSABIO)를 사용하여 상등액과 세포내 세라마이드 인산화효소 생성량을 비교분석하였다.
그 결과, 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이 인간 진피섬유아세포에 과산화수소(H2O2)를 처리한 결과 500 μM 농도부터 산화적 손상으로 인해 세포생존율이 급격히 감소됨과 동시에 인간 진피섬유아세포가 생성하는 피부 구성성분인 히알루론산 및 세라마이드 인산화효소 생성량이 함께 감소하는 것으로 나타났다. 결과적으로 500 μM 농도의 과산화수소(H2O2) 처리는 인간 진피섬유아세포가 손상되는 최적 조건임을 확인하였으며, 이하 도 4의 실험에서 동일한 방법을 적용하여 수벌 및 여왕벌 추출물의 효능을 비교분석 하였다. 이때 대조군(CON)은 과산화수소(H2O2)를 처리하지 않은 무처리군을 나타낸다.
5. 산화적 손상 조건에서 본 발명의 추출물의 영향 확인
수벌 및 여왕벌 추출물이 과산화수소에 의한 산화적 피부 손상에 효과가 있는지 확인하기 위해 상기 4.(도 3)에서 제시한 방법과 동일하게 인간 진피섬유아세포를 배양한 후 수벌 및 여왕벌 추출물을 농도 별로 1시간 동안 전처리 하였다. 이후 상기 4.에서 확인한 바에 기초하여 500μM의 과산화수소를 인간 진피섬유아세포에 2시간 동안 처리하여 히알루론산 생성량 및 세포 내 세라마이드 인산화효소 생성량을 비교 분석하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다. 이때 대조군(CON)은 추출물 및 과산화수소(H2O2)를 처리하지 않은 무처리군을 나타낸다.
그 결과 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이 본 발명의 추출물에 의한 히알루론산(도 4(a)) 및 세라마이드 인산화효소(도 4(b)) 생성의 증가를 확인할 수 있었으며, 특히 여왕벌 추출물을 이용한 경우 이들의 현저한 생성의 증가가 획득될 수 있음을 알 수 있었다. 한편, 과산화수소만 처리한 경우 산화적 손상으로 인해 대조군(CON)에 비해 히알루론산 및 세라마이드 인산화효소 생성량이 급격히 감소하는 것으로 나타났으나, 본 발명에 의한 수벌 및 여왕벌 추출물 처리구의 경우 추출물 농도가 증가할수록 히알루론산 및 세라마이드 인산화 효소 생성량이 증가하여 과산화수소에 의한 산화적 손상을 감소시키는 것으로 나타났다.
특히, 여왕벌 추출물의 경우 수벌에 비해 피부구성 성분으로 피부보습에 효과적인 히알루론산 및 세라마이드 생성량이 더욱 증가하여 과산화수소에 의한 인간진피섬유아세포의 산화적 손상을 방지하는 효과가 더욱 큰 것으로 확인되었다.
6. 본 발명의 추출물의 피부 재생 효과 확인
본 발명에 의한 서양뒤영벌 여왕벌 추출물이 인간 진피섬유아세포의 세포이동을 통한 상처회복(wound healing) 능력, 즉 피부재생에 미치는 영향을 확인하기 위하여 보다 상세하게 인간 진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 5×105 cell이 되도록 6 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시켰다. 이후 스크래처(Scratcher, SPL Inc.)를 이용하여 웰 플레이트 중앙을 긁어서 상처를 낸 후 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물을 농도 별로 처리하여 8시간 후 현미경 관찰을 통해 상처 사이의 길이(Wound closure length)를 측정하여 상처 회복 정도를 분석하였다. 이때 대조군(CON)은 뒤영벌 추출물을 첨가하지 않은 무처리군을 나타내며, 기존 피부재생에 효과가 있는 고시형 기능성 화장품원료로서 추출물의 효능을 비교하기 위한 양성대조군으로 '아데노신(Adenosine)' 500 ㎍/㎖을 이용하였다.
그 결과, 도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이 피부 세포에 상처를 내고 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물을 처리하여 8시간 동안 배양할 경우 대조구(CON)에 비하여 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물을 처리하였을 때 피부재생을 통한 상처회복이 빠른 것을 현미경 사진으로 확인할 수 있었으며(도 5(a)), 상처의 길이 측정을 통한 상처회복(wound healing) 효과를 확인할 수 있었다(도 5(b)).
이상에서 본 발명의 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.
Claims (10)
- 서양뒤영벌(Bombus terrestris) 여왕벌의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하며, 세포이동(cell migration) 촉진에 의해 피부 재생 및 상처회복을 증진시키는, 기능성 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 알코올은 탄소수 1 내지 3의 알코올로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나인, 기능성 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유효성분은 기능성 화장료 조성물 부피를 기준으로 15 내지 500 μg/ml의 농도로 포함되는, 기능성 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 에멀션, 페이스트, 젤, 크림, 파우더 또는 스프레이 제형인, 기능성 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 로션, 화장수, 영양 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 비누 또는 파운데이션인, 기능성 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 서양뒤영벌 여왕벌의 알코올 추출물은 서양뒤영벌 여왕벌을 2배 내지 30배의 중량비의 알코올을 이용하여 5 내지 35℃에서 추출한 추출원액을 여과 및 농축하여 획득된 것인, 기능성 화장료 조성물.
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| 연구보고서, 동물성 부산물 유래 뮤코 다당류를 활용하여 피부흡수 효능이 증대된 화장품 시제품 제작 (2019.12.5.)* |
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