KR102602502B1 - 신경퇴행성 장애의 치료를 위한 세마포린-4d 결합 분자의 용도 - Google Patents

신경퇴행성 장애의 치료를 위한 세마포린-4d 결합 분자의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명에서는, 세마포린-4D(SEMA4D)에 또는 그의 플렉신-B1 또는 플렉신-B2 수용체에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기대상에서 증상을 완화하는 방법이 제공된다.

Description

신경퇴행성 장애의 치료를 위한 세마포린-4D 결합 분자의 용도 {USE OF SEMAPHORIN-4D BINDING MOLECULES FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISORDERS}
관련 출원에 대한 교차참조
본 국제특허출원은 2014년 6월 16일에 출원된 미국 가출원 제62/012,805호, 2014년 4월 14일에 출원된 미국 가출원 제61/979,384호, 및 2013년 10월 21일에 출원된 미국 가출원 제61/893,814호의 이익을 주장하며, 이들 내용은 그 전체가 참고로 본원에 포함되어 있다.
전자적으로 제출된 서열목록에 관한 참조
본원과 함께 출원된 ASCII 텍스트 파일의 전자적으로 제출된 서열목록(파일명: "58008-137466seq-lstg.txt"; 크기: 32,256 바이트; 및 생성일: 2014년 10월 20일)의 내용은 그 전체가 참고로 본원에 포함되어 있다.
CD100으로도 알려진 세마포린 4D(SEMA4D)는 세마포린 유전자군에 속하는 막통과 단백질(예를 들면, 서열번호 1(인간); 서열번호 2(쥣과))이다. SEMA4D는 동형이량체로서 세포 표면 상에서 발현되지만, 세포 활성화시 SEMA4D는 단백분해 절단을 통해 세포 표면으로부터 방출되어 상기 단백질의 가용성 형태인 sSEMA4D를 생성하며, 이 역시 생물학적 활성이다. 문헌[Suzuki et al., Nature Rev. Immunol. 3:159-167 (2003); Kikutani et al., Nature Immunol. 9:17-23 (2008)]을 참고한다.
SEMA4D는 비장, 흉선, 및 림프절을 포함하는 림프 기관에서, 그리고 뇌, 심장, 및 신장과 같은 비 림프 기관에서 높은 수준으로 발현된다. 림프 기관에서, SEMA4D는 휴지상태의 T 세포 상에서 풍부하게 발현되지만, 휴지상태의 B 세포 및 항원 제시 세포(APC), 예컨대 수지상 세포(DC) 상에서는 단지 약하게 발현된다. 그러나, 그의 발현은 다양한 면역학적 자극에 의한 활성화 후 이들 세포에서 상향조절된다. 면역 세포로부터의 가용성 SEMA4D의 방출은 또한 세포 활성화에 의해 증가된다.
SEMA4D는 신경퇴행성 장애, 자가면역 질환, 탈수초 질환, 및 어떤 암의 발달에 연루되어 왔다. 그러나, SEMA4D 신호전달의 차단이 뇌와 척수를 포함하는 중추신경계(CNS)의 조직화와 기능에 미치는 효과 및 CNS에 의해 제어되는 행동에 미치는 효과는 아직 밝혀지지 않은 채로 남아 있다. CNS에서의 변화가 대상의 행동 및 삶의 질에 상당한 영향을 미치기 때문에 이것은 중요하다. 특히, 그러한 변화는 대상의 신경정신병적 행동, 인지 행동, 및 운동 기능에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 상기 장애와 관련된 증상을 완화하는 신경퇴행성 장애를 위한 치료법이 여전히 필요하다.
신경퇴행성 장애를 갖는 대상에서 증상을 완화하기 위해 세마포린 4D 결합 분자를 사용하는 방법이 본원에 개시되어 있다. 본원에 예시된 개시내용의 양태에 따르면, 세마포린 4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하고 SEMA4D의 효과를 저해하거나, 억제하거나, 예방하거나, 역전시키거나 또는 늦추는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 증상을 개선하는 방법이 제공된다.
본원에 예시된 양태에 따르면, 세마포린 4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 SEMA4D에 대한 결합은 상기 장애와 관련된 증상을 개선하는 작용을 한다.
세마포린-4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 증상을 완화하는 방법이 제공된다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 상기 결합 분자는 SEMA4D와 그의 수용체 또는 그의 수용체의 일 부분과의 상호작용을 저해한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 상기 수용체는 플렉신-B1(Plexin-B1) 및 플렉신-B2(Plexin-B2)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 상기 결합 분자는 SEMA4D 매개 플렉신-B1 신호전달을 저해한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 단리된 결합 분자는 VX15/2503 또는 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 참조 단클론성 항체와 동일한 SEMA4D 에피토프에 특이적으로 결합한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 단리된 결합 분자는 VX15/2503 또는 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 참조 단클론성 항체가 SEMA4D에 특이적으로 결합하는 것을 경쟁적으로 저해한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 단리된 결합 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론성 항체 VX15/2503 또는 67이다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 6, 7, 및 8을 포함하는 가변 중쇄(VH) CDR 1-3을 포함하는 가변 중쇄(VH), 및 각각 서열번호 14, 15, 및 16을 포함하는 가변 경쇄(VL) CDR 1-3을 포함하는 가변 경쇄(VL)를 포함한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, VH 및 VL은 각각 서열번호 9 및 서열번호 17 또는 서열번호 10 및 서열번호 18을 포함한다. 전술한 방법 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조(ataxia), 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애, CNS 낭창, 경도 인지 장애, 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 헌팅턴병이다. 전술한 방법 중 어느 하나의 어떤 구현예에서, 증상은 신경정신병적 증상, 인지 증상, 운동 기능장애, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경정신병적 증상은 불안 유사 행동을 감소시키는 것, 공간 기억을 개선하는 것, 보행 운동 능력을 증가시키는 것, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
SEMA4D에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 증상을 완화하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 결합 분자는 VX15/2503 또는 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 참조 단클론성 항체가 SEMA4D에 특이적으로 결합하는 것을 경쟁적으로 저해한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 결합 분자는 SEMA4D와 그의 수용체 또는 그의 수용체의 일 부분과의 상호작용을 저해한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 상기 수용체는 플렉신-B1 및 플렉신-B2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 결합 분자는 SEMA4D 매개 플렉신-B1 신호전달을 저해한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 단리된 결합 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론성 항체 VX15/2503 또는 67이다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 6, 7, 및 8을 포함하는 가변 중쇄(VH) CDR 1-3을 포함하는 가변 중쇄(VH), 및 각각 서열번호 14, 15, 및 16을 포함하는 가변 경쇄(VL) CDR 1-3을 포함하는 가변 경쇄(VL)를 포함한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, VH 및 VL은 각각 서열번호 9 및 서열번호 17 또는 서열번호 10 및 서열번호 18을 포함한다. 전술한 방법 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애, CNS 낭창, 경도 인지 장애, 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 헌팅턴병이다. 전술한 방법 중 어느 하나의 어떤 구현예에서, 증상은 신경정신병적 증상, 인지 증상, 운동 기능장애, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경정신병적 증상은 불안 유사 행동을 감소시키는 것, 공간 기억을 개선하는 것, 보행 운동 능력을 증가시키는 것, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
신경퇴행성 또는 신경염증성 장애를 갖는 대상을 치료하는 부가적인 방법, 또는 신경퇴행성 또는 신경염증성 장애를 갖는 대상에서 바람직한 결과를 달성하는 부가적인 방법이 본원에 제공된다. 세마포린-4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 SEMA4D에 대한 결합은 상기 장애와 관련된 증상을 완화하는 작용을 한다. SEMA4D에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 수초화(myelination)를 촉진하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 결합 분자는 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)-수초(myelin) 기능의 성상세포 매개 활성을 조절한다. SEMA4D에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 신경 세포 사멸을 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 결합 분자는 성상세포 매개 시냅스 활성을 조절한다. SEMA4D에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경염증성 또는 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 혈뇌 장벽(blood-brain barrier)에 대한 손상을 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 결합 분자는 혈뇌 장벽의 온전성의 성상세포 매개 유지를 조절한다. SEMA4D에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경염증성 또는 신경퇴행성 장애를 갖거나, 갖는 것으로 판단되거나, 갖는 것으로 의심되는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 성상세포 활성화를 예방하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 결합 분자는 혈뇌 장벽의 온전성의 성상세포 매개 유지를 조절한다. SEMA4D에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 신경염증성 또는 신경퇴행성 장애를 갖거나, 갖는 것으로 판단되거나, 갖는 것으로 의심되는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 희소돌기아교세포 전구 세포(OPC)의 성상세포 매개 영양적 지원(trophic support)을 유지하거나 회복하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 결합 분자는 성상세포 돌기(process)의 수축(retraction) 및 손상 영역으로의 OPC의 화학주성적 이동(chemotactic movement)을 예방한다. SEMA4D에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 초기 알츠하이머병을 갖거나, 갖는 것으로 판단되거나, 갖는 것으로 의심되는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 초기 알츠하이머병에서 저해성 뉴런을 퇴행으로부터 보호하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 결합 분자는 상기 대상에서 소마토스타틴 양성 뉴런, NYP 양성 뉴런, 또는 둘 모두의 수를 회복시킨다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 결합 분자는 SEMA4D와 그의 수용체 또는 그의 수용체의 일 부분과의 상호작용을 저해한다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 수용체는 플렉신-B1 및 플렉신-B2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 결합 분자는 SEMA4D 매개 플렉신-B1 신호 전달을 저해한다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 단리된 결합 분자는 VX15/2503 또는 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 참조 단클론성 항체와 동일한 SEMA4D 에피토프에 특이적으로 결합한다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 단리된 결합 분자는 VX15/2503 또는 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 참조 단클론성 항체가 SEMA4D에 특이적으로 결합하는 것을 경쟁적으로 저해한다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 단리된 결합 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론성 항체 VX15/2503 또는 67이다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열번호 6, 7, 및 8을 포함하는 가변 중쇄(VH) CDR 1-3을 포함하는 가변 중쇄(VH), 및 각각 서열번호 14, 15, 및 16을 포함하는 가변 경쇄(VL) CDR 1-3을 포함하는 가변 경쇄(VL)를 포함한다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, VH 및 VL은 각각 서열번호 9 및 서열번호 17 또는 서열번호 10 및 서열번호 18을 포함한다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애, CNS 낭창, 경도 인지 장애, 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 헌팅턴병이다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 본 발명의 방법에 의해 완화되는 대상의 증상은 신경정신병적 증상, 인지 증상, 운동 기능장애, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 본 발명의 방법에 의해 완화되는 대상의 신경정신병적 증상은 불안 유사 행동을 감소시키는 것, 공간 기억을 증가시키는 것, 보행 운동 능력을 증가시키는 것, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 방법의 어떤 구현예에서, 상기 대상은 대상으로부터의 샘플 또는 영상을 처리함으로써 신경퇴행성 장애를 갖는 것으로 판단된다.
도 1: 실시예에 기재된 실험 프로토콜의 개요.
도 2: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 또는 대조군 아이소타입("MAb 2B8")으로 처리된 CVN 마우스에서 불안 유사 행동을 측정하는 생체내 CVN 모델. 총 보행 운동 능력(도 2a) 및 개방 공간(open field)의 중심에서의 보행 운동 능력(도 2b).
도 3: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 또는 대조군 아이소타입으로 처리된 CVN 마우스(도 3b)에서 방사형 수중 미로(도 3a)에서의 공간 기억을 측정하는 생체내 CVN 모델.
도 4: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 또는 대조군 아이소타입으로 처리된 CVN 마우스에서 GABA성(GABAergic) 시냅스의 밀도 및 소포성 GABA 수송체(VGAT)의 농도를 측정하는 생체내 CVN 모델. VGAT 양성 소포체(도 4a) 및 소포체당 VGAT 염색 강도 수준(도 4b).
도 5: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 및 대조군 아이소타입으로 처리된 마우스에서 불안 유사 행동을 측정하는 생체내 YAC128 모델. 공간의 중심으로의 진입(도 5a) 및 공간의 중심에서 소비한 시간(도 5b).
도 6: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 및 대조군 아이소타입으로 처리된 마우스에서 공간 기억을 측정하는 생체내 YAC128 모델. 패널 A=시험 1(도 6a), 및 패널 B=시험 2(도 6b).
도 7: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 또는 대조군 아이소타입으로 처리된 마우스에서의 피질 부피(도 7a) 및 뇌량(corpus callosum) 부피(도 7b)를 측정하는 생체내 YAC128 모델.
도 8: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 또는 대조군 아이소타입으로 처리된 마우스에서 고환 변성을 측정하는 생체내 YAC128 모델.
도 9: 정상적인 랫트 척수에서 SEMA4D, 플렉신-B1, 및 CD72를 발현하는 세포 유형의 면역조직화학적 분석. Nkx2.2(패널 B)는 희소돌기아교세포 전구 세포 마커이고, 신경아교 섬유질 산성 단백질(GFAP)(패널 G)은 성상 세포 마커이며, Iba1(패널 N)은 미세아교 세포 마커이다. 패널 A, E, I, 및 M은 병합된 영상을 보여주며, 패널 D, H, L, 및 P는 세포 핵을 시각화하기 위해 DAPI로 염색된 동일한 절편을 보여준다.
도 10: 정상(상부 3개 패널) 및 CVN(하부 3개 패널) 마우스에서 아밀로이드 병리(pathology) 및 신경아교 활성화의 DAB 면역조직화학적 분석. 해마이행부(Subiculum) 절편을 아밀로이드-베타 1-42(좌측 패널), 미세아교 세포 마커 Iba1(중간 패널) 및 성상 세포 마커 GFAP에 대해 염색하였다.
도 11a-11b: CVN 알츠하이머병 마우스 모델에서 플렉신-B1 및 플렉신-B2 수용체의 특성규명 및 발현 패턴. 도 11a는 정상(상부 패널) 및 CVN(하부 패널) 마우스에서의 플렉신-B1 발현의 면역조직화학적 분석을 보여준다. 뇌 절편을 플렉신-B1, 및 GFAP에 대해서 뿐만 아니라 세포 핵을 시각화하는 DAPI에 대해 염색하였다. 도 11b는 SEMA4D 신호전달의 저해 후 플렉신-B1(좌측 그래프) 및 플렉신-B2(우측 그래프)의 발현 수준을 보여준다.
도 12: 정상(상부 패널) 및 YAC128(하부 패널) 마우스에서의 플렉신-B2 발현의 면역조직화학적 분석. 뇌 절편을 플렉신-B2, 및 GFAP에 대해서 뿐만 아니라 D세포 핵을 시각화하는 DAPI에 대해 염색하였다.
도 13: SEMA4D 신호전달이 건강 및 질환에서의 성상세포 기능의 조절에서 수행하는 역할의 개략적 표시. 좌측 패널: 플렉신+(성상세포 외부 표면의 어두운 영역) 성상세포 돌기는 SEMA4D+ NIKX2.2+ 희소돌기아교세포 전구 세포(OPC) 사이에 맞물려 있고, 영양적 지원을 제공한다(OPC 외부 표면의 어두운 영역으로서 나타난 SEMA4D+). CNS 질환에서, 활성화된 성상세포는 플렉신 발현을 상향조절하고 SEMA4D 신호전달을 통해 돌기를 수축시킨다. 국소적으로, 이것은 감소된 영양적 지원 및 손상 영역으로의 증가된 화학주성-주도의 POC 이동을 야기하는 반면, 병변 부위에서의 성상세포 지원의 부족은 재수초화를 방해한다. 중앙 패널: CNS 질환에서, 성상세포 활성화는 플렉신(성상세포 외부 표면의 어두운 영역) 발현의 상향조절, 증가된 SEMA4D 신호전달 및 돌기 수축을 야기하고, 이는 뉴런의 축삭 유도(neuronal axon guidance)의 손실, 감소된 영양적 지원, 및/또는 조절장애된 글루타메이트 흡수/방출을 초래한다. 결국, 질환 자극의 중증도에 따라, 시냅스 손실과 이후에 흥분독성 뉴런 사멸이 일어날 수 있다. 우측 패널: CNS 질환-유도된 성상세포 활성화는 플렉신(성상세포 외부 표면의 어두운 영역)을 통해 SEMA4D 신호전달을 증가시키며, 이는 아쿠아포린-4의 재분배에 의해 증명된 바와 같이 성상세포 발 돌기의 수축을 야기한다. 이것은 BBB의 조절장애 및 투과를 초래하여, 내피 염증과 이후에 CNS로의 백혈구 유입을 용이하게 한다.
도 14: 정상 랫트에서 GFAP+ 성상세포 돌기와 매우 밀접하게 지향된 SEMA4D-발현 OPC를 보여주는 면역조직화학적 분석. 뇌 절편을 SEMA4D(OPC), 및 GFAP(성상세포)에 대해서 뿐만 아니라 세포 핵을 시각화하는 DAPI에 대해 염색하였다.
도 15: 항-SEMA4D 항체("MAb 67") 또는 대조군 아이소타입으로 처리된 CVM 마우스에서, 각각 해마이행부 또는 치아 이랑(dentate gyrus) 내에서의 소마토스타틴-(패널 A), 신경펩타이드-Y(NPY)-(패널 B), NPY 수용체 1(NPY1R)(패널 C), 또는 NPY 수용체 2(NPY2R)(패널 D) 양성 신호전달을 측정하는 생체내 CVN 모델. 오차 막대는 표준 오차를 가리킨다. 본페로니 다중 비교 시험을 이용한 일원 ANOVA에 의해 "*"=p<0.05 및 "***"=p<0.005.
도 16: 정상 및 CVN 마우스에서 아쿠아포린-4 발현 패턴의 면역조직화학적 분석.
도 17: 항-SEMA4D 단클론성 항체 VX15/2503의 부가시 혈뇌 장벽의 온전성을 측정하는 시험관내 DIV-BBB 모델.
도 18a-18b: 랫트 성상세포에서의 성상세포 활성화를 보여주는 면역세포화학적 분석. 도 18a는 별개로 또는 티오아세타미드(TAA)를 이용한 전처리 후에 SEMA4D로 처리된 배양된 랫트 성상세포에서 GFAP 양성 면적의 상대적 증가에 의해 반영된 바와 같은, 성상세포 활성화의 면역세포화학적 분석을 보여준다. 도 18b는 별개로 또는 프로스타글란딘 D2와 조합된 SEMA4D로 처리된 배양된 랫트 성상세포에서 F-액틴 대 G-액틴의 비율로 반영된 바와 같은, 성상세포 활성화의 면역세포화학적 분석을 보여준다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다. 본페로니 다중 비교 시험을 이용한 일원 ANOVA에 의해 "*"=P<0.05.
I. 정의
용어 부정관사는 하나 이상을 가리키는 것임에 유의해야 한다. 예를 들면, "항-SEMA4D 항체"는 하나 이상의 항-SEMA4D 항체를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어들 "하나", "하나 이상," 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있다.
또한, "및/또는"은 본원에서 사용되는 경우 다른 명시된 특징 또는 구성요소와 함께 또는 없이 2개의 명시된 특징 또는 구성요소 각각의 특정한 개시로서 간주된다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 문구에서 사용된 바와 같은 용어 "및/또는"은 "A 및 B," "A 또는 B," "A"(단독), 및 "B"(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 유사하게, "A, B, 및/또는 C"와 같은 문구에서 사용된 바와 같은 용어 "및/또는"은 하기 구현예 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 기술적 용어와 과학적 용어들은 본 개시내용이 관련된 분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 당업자에게 본 개시내용에서 사용된 많은 용어들의 일반 사전을 제공한다.
단위, 접두사, 및 기호들은 이들의 국제단위계(Systeme International de Unites, SI) 허용 형태로 표시된다. 수치 범위는 상기 범위를 정의하는 수를 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 방향으로 좌측에서 우측으로 기재된다. 본원에 제공된 제목은 다양한 양태 또는 개시내용의 양태를 제한하는 것이 아니며, 이는 전체로서 본 명세서를 참조하여 이해될 수 있다. 따라서, 하기에 바로 정의된 용어들은 그 전체로 명세서를 참조하여 보다 완전하게 정의된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "비 자연 발생" 물질, 조성물, 독립체, 및/또는 물질, 조성물, 또는 독립체의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 문법적 변형은 "자연 발생"인 것으로 본 기술분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 잘 이해되는, 또는 판사 또는 행정 또는 사법 기구에 의해 "자연 발생"인 것으로 어느 때나 판단되거나 해석되거나 또는 판단 또는 해석될 수 있는, 물질, 조성물, 독립체, 및/또는 물질, 조성물, 또는 독립체의 임의의 조합의 형태들을 명백하게 배제하지만, 이들만을 배제하는, 조건부 용어이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "신경퇴행성 장애" 또는 "신경퇴행성 질환"은 신경계의 하나 이상의 영역에서의 뉴런의 사멸 및 이후에 상기 환부의 기능적 장애를 특징으로 하는 중추신경계(CNS) 장애를 가리킨다. 신경퇴행성 장애의 예는, 비제한적으로, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애(HAND, HIV-연관 신경인지 장애), CNS 낭창 및 경도 인지 장애를 포함한다. 신경퇴행성 질환은 환자와 가족의 삶 뿐만 아니라 사회 전체에 상당한 영향을 미친다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알츠하이머병"은 처음에는 부분 기억상실, 및 이후에 안절부절증(restlessness), 방향 감각 상실(disorientation), 실어증, 실인증 또는 실행증(인지력 감퇴), 치매 및 때때로 희열(euphoria) 또는 우울증이 나타나는 진행성 질환을 가리킨다. 상기 질환은 전형적으로 40세부터 90세에 시작되며 주로 여성에게 영향을 미친다. 그의 유병율과 관련하여, 추정치는 65세를 초과하는 인구의 약 13%이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "헌팅턴병"은 단백질 헌팅틴(huntingtin)(HTT 유전자에 의해 발현됨)의 N-말단에서의 폴리-글루타민 트랙의 확장으로 인해 생기는 신경퇴행성 질환을 가리키며, 여기서 상기 확장은 돌연변이된 단백질(mHTT)에서 아미노산 글루타민의 35-40 초과의 반복일 수 있다. 상기 질환은 고전적인 운동 실조 및 "무도병(Chorea)"과 같은 운동의 출현을 결정하는 선조체(striatum)의 중간-크기의 가시돌기 뉴런에서의 독성을 포함하여, 상이한 뇌 영역에서 점진적인 뉴런 사멸을 나타낸다. mHTT의 작용 기전은 야생형 단백질과 비교하여 기능의 득과 실 모두로서 기술되어 왔으며, 이는 상이한 세포 구획에서 다양한 단백질과 상호작용하는 능력의 획득 또는 손실을 포함한다.
용어 "치료적 유효량"은 대상 또는 포유동물에서 질환 또는 장애를 "치료하는" 데 효과적인 항체, 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 작은 유기 분자, 또는 다른 약물의 양을 가리킨다. 신경퇴행성 장애의 경우, 약물의 치료적 유효량은 상기 장애의 증상을 완화할 수 있거나; 증상의 발생률을 줄이거나, 감소시키거나, 지체시키거나 또는 정지시킬 수 있거나; 증상의 중증도를 줄이거나, 감소시키거나, 지체시킬 수 있거나; 증상의 징후를 저해하거나, 예를 들면, 억제하거나, 지체시키거나, 예방하거나, 정지시키거나, 또는 역전시킬 수 있거나; 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감시킬 수 있거나; 이환율 및 사망률을 감소시킬 수 있거나; 삶의 질을 개선할 수 있거나; 또는 상기 효과의 조합을 달성할 수 있다.　
본원에 언급된 바와 같은 용어 "증상"은, 예를 들면, 1) 신경정신병적 증상, 2) 인지 증상, 및 3) 운동 기능장애를 가리킨다. 신경정신병적 증상의 예는, 예를 들면, 불안 유사 행동을 포함한다. 인지 증상의 예는, 예를 들면, 학습 및 기억 결함을 포함한다. 운동 기능장애의 예는, 예를 들면, 보행 운동 능력을 포함한다.
"치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하는 것" 또는 "완화하는" 또는 "완화하는 것" 또는 "개선하는" 또는 "개선하는 것"과 같은 용어들은 1) 진단된 병리 상태 또는 장애의 증상을 치유하고, 늦추고, 줄이고, 진단된 병리적 상태 또는 장애를 역전시키고/거나 진단된 병리적 병태 또는 장애의 진행을 중단시키는 치료 수단 및 2) 표적화된 병리적 병태 또는 장애의 발달을 예방하고/거나 늦추는 예방 또는 방지 수단 모두를 가리킨다. 따라서 치료를 필요로 하는 대상은 장애를 이미 가진 대상; 장애를 갖기 쉬운 대상; 및 장애가 예방될 대상을 포함한다. 유익한 또는 원하는 임상 결과는, 검출가능하거나 검출불가능하든 간에, 비제한적으로, 증상의 완화, 질환 정도의 약화, 질환의 안정화 상태(즉, 악화되지 않는 것), 질환 진행의 지연 또는 늦춤, 질환 상태의 완화 또는 일시적 완화, 및 차도를 포함한다. "치료"는 또한 치료를 받지 않을 경우 예상되는 생존과 비교하여 생존을 연장하는 것을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 대상은 병태 또는 장애를 이미 가진 대상뿐만 아니라 병태 또는 장애를 갖기 쉬운 대상 또는 병태 또는 장애가 예방될 대상을 포함한다.
"대상" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유동물"은 진단, 예후 또는 요법이 요구되는 임의의 대상, 특히 포유동물 대상을 의미한다. 포유동물 대상은 인간, 가축, 농장 동물, 및 동물원 동물, 스포츠 동물, 또는 애완 동물, 예컨대 개, 고양이, 기니아 피그, 토끼, 랫트, 마우스, 말, 소, 암소, 곰, 등을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "항-SEMA4D 항체의 투여로부터 이익을 얻을 대상" 및 "치료를 필요로 하는 동물"과 같은 어구들은, 예를 들면, SEMA4D 폴리펩타이드의 검출을 위해(예를 들면, 진단 절차를 위해) 사용된 항-SEMA4D 항체 또는 다른 SEMA4D 결합 분자의 투여로부터 이익을 얻고/거나 항-SEMA4D 항체 또는 다른 SEMA4D 결합 분자를 이용한 질환의 치료, 즉 일시적 완화 또는 예방으로부터 이익을 얻을 포유동물과 같은 대상을 포함한다.
본 개시내용의 "결합 분자" 또는 "항원 결합 분자"는 광의의 개념으로 항원 결정기에 특이적으로 결합하는 분자를 가리킨다. 일 구현예에서, 결합 분자는 SEMA4D, 예를 들면, 약 150 kDa의 막통과 SEMA4D 폴리펩타이드 또는 약 120 kDa의 가용성 SEMA4D 폴리펩타이드(통상적으로 sSEMA4D로 불림)에 특이적으로 결합한다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 결합 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 결합 분자는 항체 분자의 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자로부터의 적어도 2개의 CDR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자로부터의 적어도 3개의 CDR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자로부터의 적어도 4개의 CDR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자로부터의 적어도 5개의 CDR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 결합 분자는 하나 이상의 항체 분자로부터의 적어도 6개의 CDR을 포함한다.
본 개시내용은 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 신경퇴행성 장애를 갖는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 증상을 완화하는 방법에 관한 것이다. 자연 발생 항체와 같은 전체-크기의 항체를 명시적으로 언급하지 않는 한, 용어 "항-SEMA4D 항체"는 전체-크기의 항체뿐만 아니라 상기 항체의 항원 결합 단편, 변이체, 유사체, 또는 유도체, 예를 들면, 자연 발생 항체 또는 면역글로불린 분자 또는 항체 분자와 유사한 방식으로 항원에 결합하는 조작된 항체 분자 또는 단편을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "인간" 또는 "완전 인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 상기에서 그리고, 예를 들면, 미국 특허 제5,939,598호(Kucherlapati et al.)에서 기재된 바와 같은, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대한 형질전환 동물이며 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는 동물로부터 단리된 항체를 포함한다. "인간" 또는 "완전 인간" 항체는 또한 중쇄의 적어도 가변 도메인, 또는 중쇄 및 경쇄의 적어도 가변 도메인을 포함하는 항체를 포함하고, 여기서 상기 가변 도메인(들)은 인간 면역글로불린 가변 도메인(들)의 아미노산 서열을 갖는다.
"인간" 또는 "완전 인간" 항체는 또한 본원에 기재된 항체 분자(예를 들면, VH 영역 및/또는 VL 영역)의 변이체(유도체 포함)를 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 또는 이루어지는, 상기에서 기재된 바와 같은 "인간" 또는 "완전 인간" 항체를 포함하며, 상기 항체 또는 이의 단편은 SEMA4D 폴리펩타이드 또는 이의 단편 또는 변이체에 면역특이적으로 결합한다. 인간 항-SEMA4D 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 돌연변이를 도입하기 위해 당해분야의 숙련가에게 공지된 표준 기술이 사용될 수 있으며, 이는, 비제한적으로, 아미노산 치환을 야기하는 부위 지향적 돌연변이유발 및 PCR 매개 돌연변이유발을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이체(유도체 포함)는 참조 VH 영역, VHCDR1, VHCDR2, VHCDR3, VL 영역, VLCDR1, VLCDR2, 또는 VLCDR3 대비 50 미만의 아미노산 치환, 40 미만의 아미노산 치환, 30 미만의 아미노산 치환, 25 미만의 아미노산 치환, 20 미만의 아미노산 치환, 15 미만의 아미노산 치환, 10 미만의 아미노산 치환, 5 미만의 아미노산 치환, 4 미만의 아미노산 치환, 3 미만의 아미노산 치환, 또는 2 미만의 아미노산 치환을 인코딩한다.
어떤 구현예에서, 아미노산 치환은 하기에 추가 논의된 보존적 아미노산 치환이다. 대안적으로, 돌연변이는 포화 돌연변이유발에 의해서와 같이, 코딩 서열의 모두 또는 일부 사이에 무작위로 도입될 수 있고, 수득된 돌연변이는 활성(예를 들면, SEMA4D 폴리펩타이드, 예를 들면, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두에 결합하는 능력)을 유지하는 돌연변이를 식별하기 위해 생물학적 활성에 대해 스크리닝될 수 있다. "인간" 또는 "완전 인간" 항체의 그러한 변이체(또는 이의 유도체)는 "최적화된" 또는 "항원 결합을 위해 최적화된" 인간 또는 완전 인간 항체로도 불릴 수 있고, 이는 항원에 대해 개선된 친화성을 갖는 항체를 포함한다.
용어들 "항체" 및 "면역글로불린"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 항체 또는 면역글로불린은 중쇄의 적어도 가변 도메인을 포함하고, 정상적으로는 중쇄 및 경쇄의 적어도 가변 도메인을 포함한다. 척추동물 시스템에서의 기본적인 면역글로불린 구조는 상대적으로 잘 이해되고 있다. 예를 들면, 문헌[Harlow et al. (1988) Antibodies: A Laboratory Manual (2nd ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press)]을 참고한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역글로불린"은 생화학적으로 구별될 수 있는 다양한 광범위한 부류(class)의 폴리펩타이드를 포함한다. 당해분야의 숙련가는 중쇄가 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론(γ, μ, α, δ, ε)(이들 가운데 일부 하위부류(예를 들면, γ1-γ4) 포함)으로서 분류된다는 것을 인식할 것이다. 항체의 "부류"를 각각 IgG, IgM, IgA IgG, 또는 IgE로서 결정하는 것은 이 사슬의 특성이다. 면역글로불린 하위부류(아이소타입), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 등은 널리 규명되어 있으며, 이는 기능적 특수화를 제공하는 것으로 알려져 있다. 이들 부류 및 아이소타입 각각의 변형된 형태는 본 개시내용을 고려하여 숙련가에게 쉽게 구별될 수 있고, 따라서, 이는 본 개시내용의 범위 내에 속한다. 모든 면역글로불린 부류는 명확히 본 개시내용의 범위 내에 속하며, 하기 논의는 일반적으로 면역글로불린 분자의 IgG 부류에 관한 것일 것이다. IgG에 대하여, 표준 면역글로불린 분자는 분자량 약 23,000 달톤의 2개의 동일한 경쇄 폴리펩타이드, 및 분자량 53,000-70,000의 2개의 동일한 중쇄 폴리펩타이드를 포함한다. 상기 4개의 사슬은 전형적으로 "Y" 배열로 디설파이드 결합에 의해 연결되며, 여기서 상기 경쇄는 "Y"의 입(mouth)에서 시작하여 가변 영역 내내 계속되는 중쇄를 묶는다.
경쇄는 카파 또는 람다(κ, λ) 중 하나로서 분류된다. 각각의 중쇄 부류는 카파 또는 람다 경쇄 중 하나와 결합될 수 있다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄는 서로 공유결합되며, 2개의 중쇄의 "테일(tail)" 부분은, 면역글로불린이 하이브리도마, B 세포 또는 유전적으로 조작된 숙주 세포 중 하나에 의해 생성될 때 공유 디설파이드 연결 또는 비-공유 연결에 의해 서로 결합된다. 중쇄에서, 아미노산 서열은 Y 배열의 갈라진 말단에 있는 N-말단으로부터 각 사슬의 하부에 있는 C-말단으로 진행한다.
경쇄 및 중쇄 모두는 구조적 및 기능적 상동성 영역으로 나뉜다. 용어들 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이와 관련하여, 경쇄 부분의 가변 도메인(VL 또는 VK) 및 중쇄 부분의 가변 도메인(VH) 모두가 항원 인식 및 특이성을 결정한다는 것이 인식될 것이다. 반대로, 경쇄의 불변 도메인(CL) 및 중쇄의 불변 도메인(전형적으로 CH1, CH2 또는 CH3)은 분비, 태반을 통과하는 이동, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 특성을 제공한다. 관례상, 불변 영역 도메인의 넘버링은 이들이 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노-말단으로부터 더 멀어질수록 증가한다. N-말단부는 가변 영역이고, C-말단부는 불변 영역이며; CH3 및 CL 도메인은 전형적으로 각각 중쇄 및 경쇄의 카복시-말단을 포함한다.
상기에 명시한 바와 같이, 가변 영역은 항체가 항원 상의 에피토프를 선택적으로 인식하여 특이적으로 결합하는 것을 가능하게 한다. 즉, 항체의 VL 도메인 및 VH 도메인, 또는 이들 가변 도메인 내의 상보성 결정 영역(CDR)의 하위집단은 결합하여 3차원적 항원 결합 부위를 정의하는 가변 영역을 형성한다. 이 4차 항체 구조는 Y의 각각의 팔의 말단에 존재하는 항원 결합 부위를 형성한다. 더 구체적으로, 항원 결합 부위는 각각의 VH 및 VL 사슬 상의 3개의 CDR에 의해 정의된다. 일부 경우, 예를 들면, 낙타과 종으로부터 유래되거나 낙타과 면역글로불린에 기초하여 조작된 어떤 면역글로불린 분자인 완전한 면역글로불린 분자는 경쇄 없이 중쇄만으로 이루어질 수 있다. 예를 들면, 문헌[Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)]을 참고한다.
자연 발생 항체에서, 각각의 항원 결합 도메인 내에 존재하는 6개의 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은, 항체가 수성 환경에서 3차원 배열을 나타낼 때, 항원 결합 도메인을 형성하기 위해 특수하게 배치된, 짧은 비인접 서열의 아미노산이다. 항원 결합 도메인 내의 상기 아미노산의 나머지는 "프레임워크" 영역으로도 불리며, 적은 분자간 가변성을 나타낸다. 프레임워크 영역은 주로 β-시트 형태를 채택하며, CDR은 β-시트 구조를 연결하는 루프를 형성하고, 일부 경우에 β-시트 구조의 일부를 형성한다. 따라서, 프레임워크 영역은 사슬간 비-공유 상호작용에 의해 CDR을 정확한 방향으로 배치시키는 것을 제공하는 스캐폴드를 형성하는 작용을 한다. 상기 배치된 CDR에 의해 형성된 항원 결합 도메인은 면역반응성 항원 상의 에피토프에 상보적인 표면을 정의한다. 이 상보적 표면은 항체가 그의 동족 에피토프에 비-공유 결합하는 것을 촉진한다. 각각 CDR 및 프레임워크 영역을 포함하는 아미노산들은 정확하게 정의되어 왔으므로, 이들은 당해분야의 숙련가에 의해 임의의 주어진 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 쉽게 식별될 수 있다(하기 참고).
당해기술 내에서 사용되고/거나 받아들여진 용어의 2 이상의 정의가 있는 경우, 명백하게 달리 언급되지 않는 한, 본원에서 사용된 용어의 정의는 그러한 모든 의미를 포함하는 것으로 의도된다. 구체적인 예는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 모두의 가변 영역 내에서 발견되는 비인접 항원 결합 부위를 기술하는 용어 "상보성 결정 영역"("CDR")의 사용이다. 이 특정 영역은 본원에 참고로 편입된 문헌[카밧 등(Kabat et al.) (1983) U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" 및 코티아(Chothia) and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]에 의해 기재되어 왔으며, 여기서 상기 정의는 서로에 대해 비교될 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 서브셋을 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 이의 변이체의 CDR을 가리키기 위해 어느 하나의 정의를 적용하는 것은 본원에 정의되고 사용된 용어의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다. 상기 언급된 참조문헌 각각에 의해 정의된 바와 같은 CDR을 포함하는 적절한 아미노산 잔기들이 비교로서 하기 표 1에 제시되어 있다. 특정한 CDR을 포함하는 정확한 잔기 수는 CDR의 서열 및 크기에 따라 달라질 것이다. 당해분야의 숙련가는 항체의 가변 영역 아미노산 서열을 고려할 때 어떤 잔기가 특정한 CDR을 포함하는지 일상적으로 결정할 수 있다.
CDR 정의1
카밧 코티아
VH CDR1 31-35 26-32
VH CDR2 50-65 52-58
VH CDR3 95-102 95-102
VL CDR1 24-34 26-32
VL CDR2 50-56 50-52
VL CDR3 89-97 91-96
1표 1 내의 모든 CDR 정의의 넘버링은 카밧 등에 의해 제시된 넘버링 규약에 따른다.(하기 참고)카밧 등은 또한 임의의 항체에 적용될 수 있는 가변 도메인 서열에 대한 넘버링 시스템을 정의하였다. 당해분야의 숙련가는 서열 자체를 넘어 어떤 실험 데이터에 대한 신뢰 없이, 이러한 "카밧 넘버링"의 시스템을 임의의 가변 도메인 서열에 분명하게 할당할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "카밧 넘버링"은 문헌[Kabat et al. (1983) U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest"]에 의해 제시된 넘버링 시스템을 가리킨다. 달리 명시되지 않는 한, 본 개시내용의 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체에서의 특정한 아미노산 잔기 위치의 넘버링에 대한 언급은 카밧 넘버링 시스템에 따른다.본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는, 비제한적으로, 다클론성, 단클론성, 다중특이성 및 이중특이성을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 팔(arm)은 SEMA4D, 인간, 인간화, 영장류화, 또는 키메라 항체, 단일-사슬 항체, 에피토프-결합 단편, 예를 들면, Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, Fvs, 단일-사슬 Fvs(scFv), 디설파이드-연결된 Fvs(sdFv), VL 또는 VH 도메인 중 하나를 포함하는 단편, Fab 발현 라이브러리에 의해 생산된 단편, 및 항-이디오타입(항-Id) 항체(예를 들면, 본원에 개시된 항-SEMA4D 항체에 대한 항-Id 항체)에 특이적이다. ScFv 분자는 당해기술에 공지되어 있고, 예를 들면, 미국 특허 제5,892,019호에 기재되어 있다. 본 개시내용의 면역글로불린 또는 항체 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 부류(예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2, 등), 또는 하위부류일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "중쇄 부분"은 면역글로불린 중쇄로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 구현예에서, 중쇄 부분을 포함하는 폴리펩타이드는 VH 도메인, CH1 도메인, 힌지(예를 들면, 상부, 중간, 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이의 변이체 또는 단편 중 적어도 하나를 포함한다. 예를 들면, 본 개시내용에서 사용하기 위한 결합 폴리펩타이드는 CH1 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 하나의 부분, 및 CH2 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬; CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 하나의 부분, 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬, 또는 CH1 도메인, 힌지 도메인의 적어도 하나의 부분, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드는 CH3 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬을 포함한다. 또한, 본 개시내용에서 사용하기 위한 결합 폴리펩타이드는 CH2 도메인의 적어도 하나의 부분(예를 들면, CH2 도메인의 모두 또는 일부)이 결여될 수 있다. 상기에 제시된 바와 같이, 당해분야의 숙련가는 자연 발생 면역글로불린 분자와 아미노산 서열이 다르도록 이들 도메인(예를 들면, 중쇄 부위)이 변형될 수 있음을 이해할 것이다.
본원에 개시된 어떤 항-SEMA4D 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체에서, 다량체의 하나의 폴리펩타이드 사슬의 중쇄 부분은 다량체의 제2 폴리펩타이드 사슬 상의 중쇄 부위와 동일하다. 대안적으로, 본 개시내용의 중쇄 부분-함유 단량체들은 동일하지 않다. 예를 들면, 각각의 단량체는 상이한 표적 결합 부위를 포함하여, 예를 들면, 이중특이적 항체를 형성할 수 있다.
본원에 개시된 방법에서 사용하기 위한 결합 분자의 중쇄 부분은 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래될 수 있다. 예를 들면, 폴리펩타이드의 중쇄 부분은 IgG1 분자로부터 유래된 CH1 도메인 및 IgG3 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 중쇄 부분은 IgG1 분자로부터 일부 유래된 힌지 영역 및, IgG3 분자로부터 일부 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 중쇄 부위는 IgG1 분자로부터 일부 유래되고 IgG4 분자로부터 일부 유래된 키메라성 힌지를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "경쇄 부분"은 면역글로불린 경쇄, 예를 들면, 카파 또는 람다 경쇄로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 경쇄 부위는 VL 또는 CL 도메인 중 적어도 하나를 포함한다.
본원에 개시된 항-SEMA4D 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는, 이들이 인식하거나 특이적으로 결합하는, 항원, 예를 들면, 본원에 개시된 표적 폴리펩타이드(예를 들면, SEMA4D)의 에피토프(들) 또는 부분(들)의 관점에서 기재되거나 명시될 수 있다. 항체의 항원 결합 도메인과 특이적으로 상호작용하는 표적 폴리펩타이드의 부분은 "에피토프," 또는 "항원 결정기"이다. 표적 폴리펩타이드는 하나의 에피토프를 포함할 수 있지만, 전형적으로 적어도 2개의 에피토프를 포함하며, 항원의 크기, 형태, 및 유형에 따라, 임의의 수의 에피토프를 포함할 수 있다. 더욱이, 표적 폴리펩타이드 상의 "에피토프"는 비-폴리펩타이드 요소이거나 이를 포함할 수 있고, 예를 들면, 에피토프는 탄수화물 측쇄를 포함할 수 있음에 유의하여야 한다.
항체에 대한 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프의 최소 크기는 약 4 내지 5개의 아미노산인 것으로 여겨진다. 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프는, 예를 들면, 적어도 7개, 적어도 9개, 또는 적어도 약 15개 내지 약 30개의 아미노산을 함유할 수 있다. CDR은 항원성 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 그의 3차 형태로 인식할 수 있으므로, 에피토프를 포함하는 아미노산들은 인접할 필요가 없으며, 일부 경우, 별개의 펩타이드 사슬 상에 존재할 수 있다. 본 개시내용의 항-SEMA4D 항체에 의해 인식되는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프는 SEMA4D의 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 15개, 적어도 20개, 적어도 25개, 또는 약 15개 내지 약 30개의 인접하거나 비인접한 아미노산의 서열을 함유할 수 있다.
"특이적으로 결합한다"는 것은 일반적으로 항체가 그의 항원 결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하는 것, 및 결합이 항원 결합 도메인 및 에피토프 사이에 상당한 상보성을 수반하는 것을 의미한다. 이 정의에 따르면, 항체가 무작위의 관련없는 에피토프에 결합하는 것보다 더 쉽게 그의 항원 결합 도메인을 통하여 상기 에피토프에 결합할 때 항체가 에피토프에 "특이적으로 결합"한다고 한다. 용어 "특이성"은 어떤 항체가 어떤 에피토프에 결합하는 상대적 친화성을 정량화하기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들면, 항체 "A"는 항체 "B"보다 제시된 에피토프에 대해 더 높은 특이성을 갖는 것으로 간주될 수 있거나, 또는 항체 "A"는 상기 항체가 관련된 에피토프 "D"에 대해 갖는 특이성보다 더 높은 특이성으로 에피토프 "C"에 결합한다고 할 수 있다.
"우선적으로 결합한다"는 것은 항체가 관련되거나, 유사하거나, 상동성이거나, 또는 비슷한 에피토프에 결합하는 것보다 더 쉽게 상기 항체가 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 의미한다. 따라서, 제시된 에피토프에 "우선적으로 결합"하는 항체는, 상기 항체가 관련된 에피토프와 교차 반응할 수 있음에도 불구하고, 관련된 에피토프에 결합하는 것보다 상기 에피토프에 결합할 가능성이 더 높을 것이다.
비-제한적인 예로서, 만약 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 KD보다 낮은 해리 상수(KD)로 제1 에피토프에 결합하면, 상기 항체는 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 간주될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예에서, 만약 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 KD보다 적어도 한 자릿수 낮은 친화성으로 제1 에피토프에 결합하면, 상기 항체는 제1 항원에 우선적으로 결합하는 것으로 간주될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예에서, 만약 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 KD보다 적어도 두 자릿수 낮은 친화성으로 제1 에피토프에 결합하면, 상기 항체는 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 간주될 수 있다.
또 다른 비제한적인 예에서, 만약 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off)보다 낮은 해리 속도(k(off))로 제1 에피토프에 결합하면, 상기 항체는 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 간주될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예에서, 만약 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off)보다 적어도 한 자릿수 낮은 친화성으로 제1 에피토프에 결합하면, 상기 항체는 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 간주될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예에서, 만약 항체가 제2 에피토프에 대한 항체의 k(off)보다 적어도 두 자릿수 낮은 친화성으로 제1 에피토프에 결합하면, 상기 항체는 제1 에피토프에 우선적으로 결합하는 것으로 간주될 수 있다. 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 5 X 10-2 sec-1, 10-2 sec-1, 5 X 10-3 sec-1 또는 10-3 sec-1 이하의 해리 속도(k(off))로 본원에 개시된 표적 폴리펩타이드(예를 들면, SEMA4D, 예를 들면, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두) 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다고 할 수 있다. 어떤 양태에서, 본 개시내용의 항체는 5 X 10-4 sec-1, 10-4 sec-1, 5 X 10-5 sec-1, 또는 10-5 sec-1, 5 X 10-6 sec-1, 10-6 sec-1, 5 X 10-7 sec-1 또는 10-7 sec-1 이하의 해리 속도(k(off))로 본원에 개시된 표적 폴리펩타이드(예를 들면, SEMA4D, 예를 들면, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두) 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다고 할 수 있다.
본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 103 M-1 sec-1, 5 X 103 M-1 sec-1, 104 M-1 sec-1 또는 5 X 104 M-1 sec-1 이상의 결합 속도(k(on))로 본원에 개시된 표적 폴리펩타이드(예를 들면, SEMA4D, 예를 들면, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두) 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다고 할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 105 M-1 sec-1, 5 X 105 M-1 sec-1, 106 M-1 sec-1, 또는 5 X 106 M-1 sec-1 또는 107 M-1 sec-1 이상의 결합 속도(k(on))로 본원에 개시된 표적 폴리펩타이드(예를 들면, SEMA4D, 예를 들면, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두) 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다고 할 수 있다.
만약 항체가 에피토프에 대한 참조 항체의 결합을 어느 정도 차단하는 정도로 상기 에피토프에 우선적으로 결합하면, 상기 항체는 제시된 에피토프에 대한 참조 항체의 결합을 경쟁적으로 저해한다고 한다. 경쟁적 저해는 당해분야에서 공지된 임의의 방법, 예를 들면, 경쟁 ELISA 분석에 의해 측정될 수 있다. 항체는 제시된 에피토프에 대한 참조 항체의 결합을 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50%까지 경쟁적으로 저해한다고 할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "친화성"은 면역글로불린 분자의 CDR과 개별적인 에피토프와의 결합의 강도의 측정값을 가리킨다. 예를 들면, 문헌[Harlow et al. (1988) Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed.) pages 27-28]을 참고한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합능(avidity)"은 면역글로불린의 집단 및 항원 사이의 복합체의 전반적인 안정성, 즉, 항원과의 면역글로불린 혼합물의 기능적 결합 강도를 가리킨다. 예를 들면, Harlow 페이지 29-34를 참고한다. 결합능은 상기 집단 내의 개별적인 면역글로불린 분자의 특정 에피토프와의 친화성 및 또한 면역글로불린 및 항원의 결합가(valency) 모두와 관련된다. 예를 들면, 2가 단클론성 항체 및 고도로 반복되는 항원, 예컨대 폴리머 사이의 상호작용은 고 결합능의 상호작용일 것이다.
본 개시내용의 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 또한 그의 교차 반응성 측면에서 기재되거나 명시될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "교차 반응성"은 제2 항원과 반응하는 하나의 항원에 대해 특이적인 항체의 능력; 2개의 상이한 항원성 물질 사이의 관련성의 측정값을 가리킨다. 따라서, 만약 항체가 그의 형성을 유도한 에피토프 이외의 에피토프에 결합하면, 상기 항체는 교차 반응성이다. 교차반응성 에피토프는 일반적으로 상기 유도성 에피토프와 동일한 많은 상보적 구조적 특징을 함유하며, 일부 경우에, 실제로 원래의 것보다 더 잘 적합할 수 있다.
예를 들면, 어떤 항체는, 상기 항체가 관련되지만 동일하지 않은 에피토프, 예를 들면, 참조 에피토프에 대해 적어도 95%, 적어도 90%, 적어도 85%, 적어도 80%, 적어도 75%, 적어도 70%, 적어도 65%, 적어도 60%, 적어도 55%, 및 적어도 50% 동일성(당해분야에서 공지되고 본원에 기재된 방법을 이용하여 계산된 바와 같음)을 갖는 에피토프에 결합한다는 점에서, 어느 정도의 교차 반응성을 갖는다. 만약 항체가 참조 에피토프에 대해 95% 미만, 90% 미만, 85% 미만, 80% 미만, 75% 미만, 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 및 50% 미만의 동일성(당해분야에서 공지되고 본원에 기재된 방법을 이용하여 계산된 바와 같음)을 갖는 에피토프에 결합하지 않으면, 상기 항체는 교차 반응성을 거의 또는 전혀 갖지 않는다고 할 수 있다. 만약 항체가 어떤 에피토프의 임의의 다른 유사체, 오르소로그, 또는 동족체에 결합하지 않으면, 상기 항체는 상기 에피토프에 대해 "매우 특이적"인 것으로 간주될 수 있다.
본 개시내용의 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체 또는 유도체는 본 개시내용의 폴리펩타이드, 예를 들면, SEMA4D, 예를 들면, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두에 대한 이들의 결합 친화성의 측면에서 기재되거나 명시될 수 있다. 어떤 구현예에서, 결합 친화성은 5 x 10-2 M, 10-2 M, 5 x 10-3 M, 10-3 M, 5 x 10-4 M, 10-4 M, 5 x 10-5 M, 10-5 M, 5 x 10-6 M, 10-6 M, 5 x 10-7 M, 10-7 M, 5 x 10-8 M, 10-8 M, 5 x 10-9 M, 10-9 M, 5 x 10-10 M, 10-10 M, 5 x 10-11 M, 10-11 M, 5 x 10-12 M, 10-12 M, 5 x 10-13 M, 10-13 M, 5 x 10-14 M, 10-14 M, 5 x 10-15 M, 또는 10-15 M 미만의 해리 상수 또는 Kd를 갖는 것들을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 개시내용의 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 5 x 10-9 내지 약 6 x 10-9의 Kd로 인간 SEMA4D에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-9 내지 약 2 x 10-9의 Kd로 쥣과 SEMA4D에 결합한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "키메라성 항체"는 면역반응성 영역 또는 부위가 제1 종으로부터 수득되거나 유래되고, 불변 영역(온전할 수 있거나, 일부일 수 있거나, 본 개시내용에 따라 변형될 수 있음)이 제2 종으로부터 수득되는 임의의 항체를 의미하기 위해 제시될 것이다. 어떤 구현예에서 표적 결합 영역 또는 부위는 비-인간 공급원(예를 들면, 마우스 또는 영장류) 유래일 것이고 불변 영역은 인간이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "조작된 항체"는 중쇄 또는 경쇄 중 하나 또는 둘 모두에서의 가변 도메인이 공지된 특이성의 항체로부터의 하나 이상의 CDR의 적어도 부분적 대체에 의해, 그리고 필요하면, 부분적 프레임워크 영역 대체 및 서열 변화에 의해, 변경된 항체를 가리킨다. CDR은 프레임워크 영역이 유래된 항체와 동일한 부류 또는 심지어 하위부류의 항체로부터 유래될 수 있음에도 불구하고, CDR은 상이한 부류의 항체로부터, 또는, 상이한 종으로부터의 항체로부터 유래될 것임이 예상된다. 공지된 특이성의 비-인간 항체로부터의 하나 이상의 "공여체" CDR이 인간 중쇄 또는 경쇄 프레임워크 영역 내로 접합된 조작된 항체는 본원에서 "인간화된 항체"로 지칭된다. 하나의 가변 도메인의 항원 결합능을 또 다른 가변 도메인으로 옮기기 위해 CDR 모두를 공여체 가변 도메인으로부터의 완전 CDR로 항상 대체할 필요는 없다. 오히려, 옮길 필요가 있는 표적 결합 부위의 활성을 유지하는 데 필요한 잔기만을 옮길 수 있다.
인간화된 항체의 중쇄 또는 경쇄, 또는 둘 모두에서의 가변 도메인 내의 프레임워크 영역은 인간 기원의 잔기만을 포함할 수 있는 것으로 더 인식되며, 이 경우 인간화된 항체의 이들 프레임워크 영역은 "완전 인간 프레임워크 영역"으로 지칭된다(예를 들면, 그 전체가 참고로 본원에 포함된, MAb 2503으로서 미국 특허출원 공개 제US 2010/0285036호에 개시된 MAbs 1515/2503 또는 67). 대안적으로, SEMA4D 항원에 대한 적절한 결합을 유지하거나 또는 SEMA4D 항원에 대한 결합을 향상시키기 위해 필요하면 인간화된 항체의 중쇄 또는 경쇄, 또는 둘 모두에서의 가변 도메인의 인간 프레임워크 영역(들)의 상응하는 위치 내에서 공여체 가변 도메인의 프레임워크 영역(들)의 하나 이상의 잔기가 조작될 수 있다. 따라서, 이러한 방식으로 조작된 인간 프레임워크 영역은 인간 및 공여체 프레임워크 잔기의 혼합물을 포함할 것이고, 이는 본원에서 "부분적 인간 프레임워크 영역"으로 지칭된다.
예를 들면, 항-SEMA4D 항체의 인간화는 설치류 또는 돌연변이 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 인간 항-SEMA4D 항체의 상응하는 서열로 치환함으로써, Winter 및 동료의 방법(Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988))에 따라 본질적으로 수행될 수 있다. 또한 본원에 참고로 포함된, 미국 특허 제5,225,539호; 제5,585,089호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 제5,859,205호를 참고한다. 수득한 인간화된 항-SEMA4D 항체는 인간화된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 도메인의 완전 인간 프레임워크 영역 내에 적어도 하나의 설치류 또는 돌연변이 설치류 CDR을 포함할 것이다. 일부 경우, 인간화된 항-SEMA4D 항체의 하나 이상의 가변 도메인의 프레임워크 영역 내의 잔기는 상응하는 비-인간(예를 들면, 설치류) 잔기에 의해 대체되고(예를 들면, 미국 특허 제5,585,089호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 및 제6,180,370호 참고), 이 경우 수득한 인간화된 항-SEMA4D 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 도메인 내에 부분적 인간 프레임워크 영역을 포함할 것이다.
더욱이, 인간화된 항체는 수령체 항체에서 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 더 개선하기 위해(예를 들면, 원하는 친화성을 얻기 위해) 이뤄진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR은 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하며 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것에 상응한다. 인간화된 항체는 선택적으로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 하나의 부분, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 추가적인 세부사항을 위해 본원에 참고로 포함된 문헌[Jones et al., Nature 331:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참고한다. 따라서, 그러한 "인간화된" 항체는 온전한 인간 가변 도메인보다 실질적으로 적은 부분이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열에 의해 치환된 항체를 포함할 수 있다. 실제로, 인간화된 항체는 전형적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하게는 일부 프레임워크 잔기가 설치류 항체 내의 비슷한 부위로부터의 잔기에 의해 치환된 인간 항체이다. 예를 들면, 미국 특허 제5,225,539호; 제5,585,089호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 제5,859,205호를 참고한다. 또한 미국 특허 제6,180,370호, 및 국제공개 제WO 01/27160호를 참조하며, 여기에는 인간화된 항체 및 미리 정해진 항원에 대해 개선된 친화성을 갖는 인간화된 항체를 생산하는 기술이 개시되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "의료 제공자"는 살아있는 대상, 예를 들면 인간 환자와 직접 상호작용하고 도움을 주는 개체 또는 기관을 가리킨다. 의료 제공자의 비-제한적인 예는 의사, 간호사, 기사, 치료사, 약사, 상담사, 대체 의학 시술자, 의료 설비, 의사의 사무실, 병원, 응급실, 병동, 긴급 보호 센터, 대체 의학 병동/설비, 및 일반 의료적, 특수 의료적, 수술적, 및/또는 임의의 다른 유형의 치료, 평가, 유지, 요법, 약물치료 및/또는 조언을 비제한적으로 포함하는, 일반 및/또는 특수 치료, 평가, 유지, 요법, 약물치료, 및/또는 환자의 건강 상태의 전부 또는 어느 일부와 관련된 조언을 제공하는 임의의 다른 독립체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "의료 혜택 제공자"는 하나 이상의 의료 혜택, 의료 제도, 건강 보험, 및/또는 건강비 계산 프로그램을 제공하고, 제시하고, 권하고, 전부 또는 일부를 지불하거나, 또는 환자들이 이것에 접근할 수 있게 해주는 것과 관련된 각각의 단체, 조직, 또는 그룹을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "임상 실험실"은 살아있는 대상, 예를 들면 인간으로부터 유래된 물질 또는 영상의 조사 또는 처리를 위한 시설을 가리킨다. 처리의 비제한적인 예는, 정보를 제공하기 위하여, 예를 들어 살아있는 대상, 예를 들어, 인간의 임의의 질환 또는 장애의 진단, 예방, 또는 치료를 위해, 또는 인간의 건강의 평가를 위해, 인체로부터 유래된 물질 또는 인체의 어느 것 또는 모든 것의 생물학적, 생화학적, 혈청학적, 화학적, 면역혈액학적, 생물물리학적, 세포학적, 병리학적, 유전적, 영상 기반, 또는 다른 조사를 포함한다. 이러한 조사는 또한 영상, 샘플을 수집하거나 수득하거나, 살아있는 대상, 예를 들면 인간의 몸, 또는 살아있는 대상, 예를 들면 인간으로부터 수득된 샘플 내에 다양한 물질의 존재 또는 부재를 준비하고, 판단하고, 측정하거나, 기술하는 과정을 포함할 수 있다.
II. 표적 폴리펩타이드 설명
본원에서 사용된 바와 같이, 용어들 "세마포린-4D," "SEMA4D" 및 "SEMA4D 폴리펩타이드"는 "SEMA4D" 및 "Sema4D"와 마찬가지로, 상호교환적으로 사용된다. 어떤 구현예에서, SEMA4D는 세포의 표면 상에서 또는 세포에 의해 발현된다. 또 다른 구현예에서, SEMA4D는 막 결합된다. 또 다른 구현예에서, SEMA4D는 가용성, 예를 들면, sSEMA4D이다. 다른 구현예에서, SEMA4D는 전체-크기의 SEMA4D 또는 이의 단편, 또는 SEMA4D 변이체 폴리펩타이드를 포함할 수 있고, 여기서 SEMA4D 또는 SEMA4D 변이체 폴리펩타이드의 단편은 전체-크기의 SEMA4D의 일부 또는 모든 기능적 특성을 보유한다.
전체-크기의 인간 SEMA4D 단백질은 150 kDa의 2개의 폴리펩타이드 사슬로 이루어지는 동형이량체 막통과 단백질이다. SEMA4D는 세포 표면 수용체의 세마포린 군에 속하며, CD100으로도 지칭된다. 인간 및 마우스 SEMA4D/Sema4D 모두는 그의 막통과 형태로부터 단백분해적으로 절단되어 120-kDa 가용성 형태를 생성하며, 이는 2개의 Sema4D 동형체의 존재를 나타낸다(Kumanogoh et al., J. Cell Science 116(7):3464 (2003)). 세마포린은 본래 발달 동안 축색돌기-안내 인자로서 정의되었던 가용성 및 막-결합 단백질로 이루어지며, 뉴런과 그의 적절한 표적 사이에 정확한 연결을 확립하는 데 있어 중요한 역할을 한다. 부류 IV 세마포린을 구조적으로 고려할 때, SEMA4D는 아미노-말단 신호 서열 이후에 특징적인 'Sema' 도메인으로 이루어지며, 이는 17개의 보존된 시스테인 잔기, Ig-유사 도메인, 라이신-풍부 스트레치(stretch), 소수성 막통과 영역, 및 세포질 테일을 함유한다.
SEMA4D의 폴리펩타이드 사슬은 약 13개의 아미노산의 신호 서열을 포함할 수 있고 약 512개 아미노산의 세마포린 도메인, 약 65개의 아미노산의 면역글로불린-유사(Ig-유사) 도메인, 104개의 아미노산의 라이신-풍부 스트레치, 약 19개의 아미노산의 소수성 막통과 영역, 및 110개의 아미노산의 세포질 테일을 추가로 포함한다. 세포질 테일 내의 티로신 인산화를 위한 공통 부위는 SEMA4D와 티로신 키나제와의 예상된 결합을 지지한다(Schlossman, et al., Eds. (1995) Leucocyte Typing V (Oxford University Press, Oxford).
SEMA4D는 적어도 3개의 기능적 수용체인 플렉신-B1, 플렉신-B2 및 CD72를 갖는 것으로 알려져 있다. 상기 수용체 중 하나인 플렉신-B1은 비 림프 조직에서 발현되며, SEMA4D에 대한 고 친화성(1 nM) 수용체인 것으로 나타났다(Tamagnone et al., Cell 99:71-80 (1999)). 플렉신-B1 신호전달의 SEMA4D 자극은 뉴런의 성장 원추 붕괴(growth cone collapse)를 유도하고, 희소돌기아교세포의 돌기 확대 붕괴(process extension collapse) 및 세포 자멸사를 유도하는 것으로 나타났다(Giraudon et al., J. Immunol. 172:1246-1255 (2004); Giraudon et al., NeuroMolecular Med. 7:207-216 (2005)). SEMA4D에 결합한 후, 플렉신-B1 신호전달은 R-Ras의 불활성화를 매개하여, 세포외 매트릭스에 대한 인테그린 매개된 부착의 감소뿐만 아니라 RhoA의 활성화를 야기하여, 세포골격 및 세포 이동의 재편성을 야기한다. 문헌[Kruger et al., Nature Rev. Mol. Cell Biol. 6:789-800 (2005); Pasterkamp, TRENDS in Cell Biology 15:61-64 (2005)]을 참고한다. 한편, 플렉신-B2는 SEMA4D에 대해 중간 친화성을 가지며, 최근 보고는 플렉신-B2가 피질 뉴런의 이동 및 성인 부뇌실 구역(subventricular zone)에서 신경아세포의 증식 및 이동을 조절한다는 것을 보여준다(Azzarelli et al,. Nat Commun 2014 Feb 27, 5:3405, DOI: 1O.1038/ncomms44O5; and Saha et al., J. Neuroscience, 2012 November 21, 32(47):16892-16905).
림프 조직에서 CD72는 저친화성(300nM) SEMA4D 수용체로서 이용된다(Kumanogoh et al., Immunity 13:621-631 (2000)). B 세포 및 APC는 CD72를 발현하고, 항-CD72 항체는 CD40-유도된 B 세포 반응의 향상 및 CD23의 B 세포 쉐딩(shedding)과 같은, sSEMA4D와 동일한 많은 효과를 갖는다. CD72는 많은 저해 수용체와 결합할 수 있는, 티로신 포스파타제 SHP-1을 동원함으로써 B 세포 반응의 음성 조절물질로서 작용하는 것으로 여겨진다. SEMA4D와 CD72과의 상호작용은 SHP-1의 해리, 및 이러한 음성 활성화 신호의 손실을 야기한다. SEMA4D는 시험관내에서 T 세포 자극 및 B 세포 응집 및 생존을 촉진하는 것으로 보고되었다. SEMA4D-발현 세포 또는 sSEMA4D의 부가는 시험관내에서 CD40-유도된 B 세포 증식 및 면역글로불린 생산을 향상시키고, 생체내 항체 반응을 가속화한다(Ishida et al., Inter. Immunol. 15:1027-1034 (2003); Kumanogoh and H. Kukutani, Trends in Immunol. 22:670-676 (2001)). sSEMA4D는 공동자극성 분자의 상향 조절 및 IL-12의 증가된 분비를 포함하는, 수지상 세포(DC)의 CD40 유도된 성숙을 향상시킨다. 또한, sSEMA4D는 면역 세포 이동을 저해할 수 있으며, 이는 차단하는 항-SEMA4D 항체의 부가에 의해 역전될 수 있다(Elhabazi et al., J. Immunol. 166:4341-4347 (2001); Delaire et al., J. Immunol. 166:4348-4354 (2001)).
Sema4D는 비장, 흉선, 및 림프절을 포함하는 림프 기관에서, 그리고 뇌, 심장, 및 신장과 같은 비 림프 기관에서 높은 수준으로 발현된다. 림프 기관에서, Sema4D는 휴지상태의 T 세포 상에서 풍부하게 발현되지만 휴지상태의 B 세포 및 항원 제시 세포(APC), 예컨대 DC 상에서는 단지 약하게 발현된다. 세포 활성화는 SEMA4D의 표면 발현 뿐만 아니라 가용성 SEMA4D(sSEMA4D)의 생성을 증가시킨다.
SEMA4D의 발현 패턴은 SEMA4D가 면역계에서 중요한 생리적 및 병리적 역할을 한다는 것을 제시한다. SEMA4D는 B 세포 활성화, 응집 및 생존을 촉진하고; CD40-유도된 증식 및 항체 생산을 향상시키고; T 세포 의존적 항원에 대한 항체 반응을 향상시키고; T 세포 증식을 증가시키고; 수지상 세포 성숙 및 T 세포를 자극하는 능력을 향상시키고; 탈수초화 및 축삭 변성에 직접 연루된다(Shi et al., Immunity 13:633-642 (2000); Kumanogoh et al., J Immunol 169:1175-1181 (2002); 및 Watanabe et al., J Immunol 167:4321-4328 (2001)).
SEMA4D 넉아웃(SEMA4D-/-) 마우스는 SEMA4D가 체액성 및 세포성 면역 반응 모두에서 중요한 역할을 한다는 추가의 증거를 제공해왔다. SEMA4D-/- 마우스에서 비 림프 조직의 주요 이상은 알려진 바 없다. SEMA4D-/- 마우스로부터의 DC는 좋지 못한 이성자극 능력(allostimulatory ability)을 가지며 공동자극성 분자의 발현에서 결함을 나타내고, 이는 sSEMA4D의 부가에 의해 구제될 수 있다. SEMA4D가 결핍된 마우스(SEMA4D-/-)는 수초 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드에 의해 유도된 실험적인 자가면역 뇌척수염을 발달시키지 못하는데, 이는 수초 희소돌기아교세포 당단백질-특이적 T 세포가 SEMA4D의 부재시에 저조하게 생성되기 때문이다(Kumanogoh et al., J Immunol 169:1175-1181 (2002)). 유의미한 양의 가용성 SEMA4D가 또한 자가면역에 걸리기 쉬운 MRL/lpr 마우스(전신 자가면역 질환의 모델, 예컨대 SLE)의 혈청에서 검출되지만, 정상 마우스에서는 검출되지 않는다. 게다가, sSEMA4D의 수준은 자가-항체의 수준과 상호관련되며, 이는 나이가 들어감에 따라 증가한다(Wang et al., Blood 97:3498-3504 (2001)). 가용성 SEMA4D는 또한 탈수초 질환을 갖는 환자의 뇌 척수액 및 혈청에서 축적되는 것으로 나타났으며, sSEMA4D는 인간 만능 신경 전구체(Dev 세포)의 세포자멸사를 유도하고, 시험관내에서 돌기 확장을 저해하고 랫트 희소돌기아교세포를 유도한다(Giraudon et al., J Immunol 172(2):1246-1255 (2004)). 이러한 세포자멸사는 항-SEMA4D MAb에 의해 차단되었다.
III. 항-SEMA4D 항체
SEMA4D에 결합하는 항체는 당해기술에서 기재되어 왔다. 예를 들면, 각각 그 전체가 참고로써 본원에 포함된, US 특허 제8,496,938호, US 공개 제2008/0219971호 A1, US 제2010/0285036호 A1, 및 US 제2006/0233793호 A1, 국제 특허 출원 WO 제93/14125호, WO 제2008/100995호, 및 WO 제2010/129917호, 및 Herold et al., Int. Immunol. 7(1): 1-8 (1995)를 참고한다.
이 개시내용은 일반적으로 SEMA4D, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체에 특이적으로 결합하는 항체의 투여를 포함하는, 신경염증성 또는 신경퇴행성 장애를 갖는 대상, 예를 들면, 인간 환자에서 증상을 완화하는 방법에 관한 것이다. 어떤 구현예에서, 상기 항체는 SEMA4D와 그의 수용체 중 하나 이상, 예를 들면, 플렉신-B1과의 상호작용을 차단한다. 이러한 특성을 갖는 항-SEMA4D 항체는 본원에 제공된 방법에서 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 항체는, 비제한적으로 MAbs VX15/2503, 67, 및 76 및 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하며, 이는 US 제2010/0285036호 A1에 충분히 기재되어 있다. 본원에 제공된 방법에서 사용될 수 있는 추가적인 항체는 US 제2006/0233793호 A1에 기재된 BD16 및 BB18 항체 뿐만 아니라 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체; 또는 MAb 301, MAb 1893, MAb 657, MAb 1807, MAb 1656, MAb 1808, Mab 59, MAb 2191, MAb 2274, MAb 2275, MAb 2276, MAb 2277, MAb 2278, MAb 2279, MAb 2280, MAb 2281, MAb 2282, MAb 2283, MAb 2284, 및 MAb 2285 중 어느 하나 뿐만 아니라 US 제2008/0219971호 A1에 기재된 바와 같은 이의 임의의 단편, 변이체 또는 유도체를 포함한다. 어떤 구현예에서 본원에 제공된 방법에서 사용하기 위한 항-SEMA4D 항체는 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두에 결합한다. 상기 언급된 항체 중 어느 것과 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및/또는 상기 언급된 항체 중 어느 것을 경쟁적으로 저해하는 항체가 또한 유용하다.
어떤 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 참조 항-SEMA4D 항체 분자, 예를 들면 상기에서 기재된 것들에 대한 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 또는 약 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 추가 구현예에서, 상기 결합 분자는 참조 항체와 적어도 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 100% 서열 동일성을 공유한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 면역글로불린 중쇄 가변 도메인(VH 도메인)을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 VH 도메인의 CDR 중 적어도 하나는 서열번호 9 또는 10의 CDR1, CDR2 또는 CDR3와 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 면역글로불린 중쇄 가변 도메인(VH 도메인)을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 VH 도메인의 CDR 중 적어도 하나는 서열번호 6, 서열번호 7, 또는 서열번호 8과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 면역글로불린 중쇄 가변 도메인(VH 도메인)을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 VH 도메인의 CDR 중 적어도 하나는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 보존적 아미노산 치환을 제외하고, 서열번호 6, 서열번호 7, 또는 서열번호 8과 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 서열번호 9 또는 서열번호 10과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 인코딩된 VH 도메인을 포함하는 항-SEMA4D 항체는 SEMA4D에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 면역글로불린 경쇄 가변 도메인(VL 도메인)을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 VL 도메인의 CDR 중 적어도 하나는 서열번호 17 또는 18의 CDR1, CDR2 또는 CDR3과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 면역글로불린 경쇄 가변 도메인(VL 도메인)을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 VL 도메인의 CDR 중 적어도 하나는 서열번호 14, 서열번호 15, 또는 서열번호 16과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 면역글로불린 경쇄 가변 도메인(VL 도메인)을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 VL 도메인의 CDR 중 적어도 하나는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 보존적 아미노산 치환을 제외하고, 서열번호 14, 서열번호 15, 또는 서열번호 16과 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
추가 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 항-SEMA4D 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 서열번호 17 또는 서열번호 18과 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하거나, 본질적으로 이들로 이루어지거나, 또는 이들로 이루어지며, 상기 인코딩된 VL 도메인을 포함하는 항-SEMA4D 항체는 SEMA4D에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다.
본원에 제공된 방법에서 사용하기 위해, 본원에 기재된 바와 같은 항-SEMA4D 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 인코딩하는 폴리펩타이드, 상기 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터, 및 상기 벡터 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주 세포가 모두 본원에서 기재된 방법에서 사용하기 위한 항-SEMA4D 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 생산하기 위해 또한 포함된다.
본 개시내용의 항-SEMA4D 항체의 적합한 생물학적 활성 변이체가 본 개시내용의 방법에서 사용될 수 있다. 그러한 변이체들은 모 항-SEMA4D 항체의 원하는 결합 특성을 보유할 것이다. 항체 변이체를 제조하는 방법은 당해기술에서 일반적으로 이용가능하다.
돌연변이유발 및 뉴클레오타이드 서열 변경 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 예를 들면, 본원에 참고로 편입된 문헌[Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York); Kunkel, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82:488-492 (1985); Kunkel et al., Methods Enzymol. 154:367-382 (1987); Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, N.Y.); 미국 특허 제4,873,192호]; 및 본원에서 인용된 참조문헌을 참고한다. 관심있는 폴리펩타이드의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 적절한 아미노산 치환에 관한 지침은 그 전체가 참고로 포함된 Atlas of Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), pp. 345-352에서의 Dayhoff et al. (1978)의 모델에서 발견될 수 있다. Dayhoff et al.의 모델은 점 허용된 돌연변이(PAM) 아미노산 유사성 매트릭스(PAM 250 매트릭스)를 이용하여 적합한 보존적 아미노산 치환을 결정한다. 어떤 구현예에서, 하나의 아미노산을 유사한 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 교환하는 것과 같은 보존적 치환이 사용될 수 있다. Dayhoff et al. 모델의 PAM 250 매트릭스에 의해 교시된 바와 같은 보존적 아미노산 치환의 예는, 비제한적으로, Gly↔Ala, Val↔Ile↔Leu, Asp↔Glu, Lys↔Arg, Asn↔Gln, 및 Phe↔Trp↔Tyr을 포함한다.
항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 관심있는 폴리펩타이드의 변이체를 제작하는 데 있어서, 변이체가 원하는 특성, 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같이 세포의 표면 상에서 발현되거나 세포에 의해 분비된, SEMA4D, 예를 들면, 인간, 쥣과, 또는 인간 및 쥣과 SEMA4D 모두에 특이적으로 결합할 수 있고 SEMA4D 차단 활성을 가질 수 있는 원하는 특성을 계속 갖도록 변형이 수행된다. 분명히, 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 DNA에서 수행된 임의의 돌연변이는 상기 서열을 해독틀 밖에 위치시키지 않아야 하며, 어떤 구현예에서는 2차 mRNA 구조를 생성할 수 있는 상보적 영역을 만들지 않을 것이다. EP 특허 출원 공개 제75,444호를 참고한다.
항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체 결합 특이성을 측정하는 방법은, 비제한적으로, 표준 경쟁적 결합 분석, T 세포 또는 B 세포에 의한 면역글로불린 분비를 모니터링하기 위한 분석, T 세포 증식 분석, 세포자멸사 분석, ELISA 분석 등을 포함한다. 예를 들면, 문헌[WO 제93/14125호; Shi et al., Immunity 13:633-642 (2000); Kumanogoh et al., J Immunol 169:1175-1181 (2002); Watanabe et al., J Immunol 167:4321-4328 (2001); Wang et al., Blood 97:3498-3504 (2001); and Giraudon et al., J Immunol 172(2):1246-1255 (2004)]에 개시된 분석을 참조하며, 이들 모두는 그 전체가 참고로 본원에 포함되어 있다.
본원에 개시된 불변 영역, CDR, VH 도메인, 또는 VL 도메인을 포함하는 어떤 특정한 폴리펩타이드가 또 다른 폴리펩타이드와 적어도 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 심지어 약 100% 동일한지 본원에서 논의할 때, % 동일성은 당해기술에 공지되어 있는 방법 및 컴퓨터 프로그램/소프트웨어, 예컨대, 비제한적으로, BESTFIT 프로그램(Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, Wis. 53711)을 이용하여 결정될 수 있다. BESTFIT는 Smith and Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489의 국부 상동성 알고리즘을 이용하여 두 서열 간의 최적의 상동성의 세그먼트를 찾는다. 특정한 서열이, 예를 들면, 본 개시내용에 따른 참조 서열과 95% 동일한지 결정하기 위해 BESTFIT 또는 어떠한 다른 서열 정렬 프로그램을 이용할 때, 동일성의 백분율이 참조 폴리펩타이드 서열의 전장에 대해 계산되도록 그리고 참조 서열 내의 아미노산의 총 수의 최대 5%의 상동성 내의 갭이 허용되도록 파라미터가 물론 설정된다.
본 개시내용의 목적을 위해, 퍼센트 서열 동일성은 12의 갭 오픈 페널티 및 2의 갭 확대 페널티, 62의 BLOSUM 매트릭스를 갖는 아핀 갭 서치(affine gap search)를 이용하는 Smith-Waterman 상동성 서치 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있다. Smith-Waterman 상동성 서치 알고리즘은 문헌[Smith 및 Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489]에 교시되어 있다. 변이체는, 예를 들면, 단지 1 내지 15 아미노산 잔기, 단지 1 내지 10 아미노산 잔기, 예컨대 6-10, 단지 5, 단지 4, 3, 2, 또는 심지어 1 아미노산 잔기가 참조 항-SEMA4D 항체(예를 들면, MAb VX15/2503, 67 또는 76)와 상이할 수 있다.
"서열 동일성"의 백분율은 또한 비교 윈도우에 대해 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정될 수 있다. 비교를 위해 서열을 최적으로 정렬하기 위해, 비교 윈도우 내의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 부분은 갭으로 불리는 부가 또는 결실을 포함할 수 있는 반면, 참조 서열은 일정하게 유지된다. 최적 정렬은, 심지어 갭을 이용하여, 참조 및 비교기(comparator) 서열 사이에 "동일한" 위치의 가장 큰 가능한 수를 생성하는 상기 정렬이다. 두 서열 간의 백분율 "서열 동일성"은 2004년 9월 1일자로 미국 국립생물공학정보센터로부터 이용가능한 프로그램 "BLAST 2 서열"의 버전을 이용하여 결정될 수 있고, 상기 프로그램은 프로그램 BLASTN(뉴클레오타이드 서열 비교를 위함) 및 BLASTP(폴리펩타이드 서열 비교를 위함)를 포함하고, 상기 프로그램은 Karlin 및 Altschul (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(12):5873-5877, 1993)의 알고리즘에 기반한다. "BLAST 2 Sequences"를 이용할 때, 2004년 9월 1일자로 디폴트 파라미터였던 파라미터들이 단어 크기(3), 오픈 갭 페널티(11), 확대 갭 페널티(1), 갭 드롭-오프(gap drop-off)(50), 기대 값(10) 및 비제한적으로 매트릭스 옵션을 포함하는 임의의 다른 필요한 파라미터를 위해 사용될 수 있다.
항-SEMA4D 항체의 불변 영역은 수많은 방식으로 효과기 기능을 변경하기 위해 돌연변이될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제6,737,056호 B1 및 미국 특허 출원 공개 제2004/0132101호 A1을 참조하며, 이는 Fc 수용체에 결합하는 항체를 최적화하는 Fc 돌연변이를 개시하고 있다.
본원에 제공된 방법에서 유용한 어떤 항-SEMA4D 항체 또는 단편, 변이체 또는 그것의 유도체에서, Fc 부분은 당해기술에서 공지된 기술을 이용하여 효과기 기능을 감소시키기 위해 돌연변이될 수 있다. 예를 들면, 불변 영역 도메인의 결실 또는 불활성화(점 돌연변이 또는 다른 수단을 통해)는 순환하는 변형된 항체의 Fc 수용체 결합을 감소시켜 종양 국재화를 증가시킬 수 있다. 다른 경우, 본 개시내용과 일치된 불변 영역 변형은 보체 결합을 완화하여 혈청 반감기를 감소시킨다. 불변 영역의 또 다른 변형은 디설파이드 연결기 또는 올리고당 모이어티를 변형하는 데 사용될 수 있고, 이는 증가된 항원 특이성 또는 항체 유연성으로 인해 향상된 국재화를 가능하게 한다. 종양 국재화, 생체분포 및 혈청 반감기와 같은, 수득된 생리적 프로파일, 생체이용률 및 다른 생화학적 효과는, 과도한 실험과정 없이, 잘 알려진 면역학적 기술을 이용하여 쉽게 측정되고 정량화될 수 있다. 본원에 제공된 방법에서 사용하기 위한 항-SEMA4D 항체는, 예를 들면, 공유 결합이 항체가 그의 동족 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 방지하지 못하도록 상기 항체에 임의의 유형의 분자를 공유 결합하여 변형된 유도체를 포함한다. 비제한적인 예를 들면, 항체 유도체는, 예를 들면, 당화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단 그룹에 의한 유도체화, 단백분해 절단, 세포성 리간드 또는 다른 단백질에의 연결 등에 의해 변형된 항체를 포함한다. 임의의 수많은 화학적 변형은, 비제한적으로 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화 등을 포함하는 공지된 기술에 의해 수행될 수 있다. 추가로, 유도체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 전하를 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 전하를 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 군은 당해기술에서 정의되어 왔다. 이들 군은 염기성 측쇄(예를 들면, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들면, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는 극성 측쇄(예를 들면, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 무극성 측쇄(예를 들면, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예를 들면, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들면, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 대안적으로, 포화 돌연변이유발에 의해서와 같이, 코딩 서열의 모두 또는 일부에 무작위로 돌연변이가 도입될 수 있고, 활성(예를 들면, 항-SEMA4D 폴리펩타이드에 결합하는 능력, 그의 수용체와의 SEMA4D 상호작용을 차단하는 능력, 또는 환자에서 신경퇴행성 장애와 연관된 증상을 완화하는 능력)을 보유하는 돌연변이를 식별하기 위해 수득된 돌연변이는 생물학적 활성에 대해 스크리닝될 수 있다.
예를 들면, 항체 분자의 프레임워크 영역에만 또는 CDR 영역에만 돌연변이를 도입할 수 있다. 도입된 돌연변이는 침묵 돌연변이(silent mutation) 또는 중립 미스센스 돌연변이(neutral missense mutation)일 수 있으며, 즉, 항원에 결합하는 항체의 능력에 전혀 또는 거의 효과를 미치지 않을 수 있다. 이러한 유형의 돌연변이는 코돈 용법을 최적화하거나, 또는 하이브리도마의 항체 생산을 개선하는 데 유용할 수 있다. 대안적으로, 비-중립 미스센스 돌연변이는 항원에 결합하는 항체의 능력을 변경할 수 있다. 당해분야의 숙련가는 항원 결합 활성에서의 변경이 없는 것 또는 결합 활성에서의 변경(예를 들면, 항원 결합 활성의 개선 또는 항체 특이성의 변화)이 없는 것과 같은 원하는 특성을 갖는 돌연변이 분자를 설계하고 시험할 수 있을 것이다. 돌연변이유발 후, 인코딩된 단백질은 일상적으로 발현될 수 있고, 인코딩된 단백질의 기능적 및/또는 생물학적 활성(예를 들면, SEMA4D 폴리펩타이드의 적어도 하나의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 능력)은 본원에 기재된 기술을 이용하여 또는 당해기술에서 공지된 일상적인 변형 기술에 의해 결정될 수 있다.
어떤 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 사용하기 위한 항-SEMA4D 항체는 적어도 하나의 최적화된 상보성-결정 영역(CDR)을 포함한다. "최적화된 CDR"은 최적화된 CDR을 포함하는 항-SEMA4D 항체에게 부여되는 결합 친화도 및/또는 항-SEMA4D 활성을 개선하기 위해 CDR이 변형되거나 최적화되었음을 의도한다. "항-SEMA4D 활성" 또는 "SEMA4D 차단 활성"은 SEMA4D와 관련된 하기 활성 중 하나 이상을 조절하는 활성을 포함할 수 있다: B 세포 활성화, 응집 및 생존; CD40-유도된 증식 및 항체 생산; T 세포 의존적 항원에 대한 항체 반응; T 세포 또는 다른 면역 세포 증식; 수지상 세포 성숙; 탈수초화 및 축삭 변성; 만능 신경 전구체 및/또는 희소돌기아교세포의 세포자멸사; 내피 세포 이동의 유도; 자발적인 단핵구 이동의 저해; 세포 표면 플렉신-B1 또는 다른 수용체에의 결합, 또는 SEMA4D+ 세포의 표면 상에서 발현된 가용성 SEMA4D 또는 SEMA4D와 관련된 임의의 다른 활성. 항-SEMA4D 활성은 또한 비제한적으로, 림프종을 포함하는 어떤 유형의 암, 자가면역 질환, 중추신경계(CNS) 및 말초 신경계(PNS) 염증성 질환을 포함하는 염증성 질환, 이식 거부, 및 침습성 신생혈관형성을 포함하는, SEMA4D 발현과 관련된 질환의 발생율 또는 중증도의 감소에 기인할 수 있다. 쥣과 항-SEMA4D MAbs BD16 및 BB18에 기반한 최적화된 항체의 예는 그 전체가 참고로 본원에 편입된 US 공개 제2008/0219971호 A1, 국제 특허 출원 WO 제93/14125호 및 Herold et al., Int. Immunol. 7(1): 1-8 (1995)에 기재되어 있다. 상기 변형은 항-SEMA4D 항체가 SEMA4D 항원에 대한 특이성을 보유하고 개선된 결합 친화도 및/또는 개선된 항-SEMA4D 활성을 갖도록 CDR 내의 아미노산의 잔기를 대체하는 것을 포함할 수 있다.
IV. 성상세포
성상세포는 혈류의 조절, 유체/이온/pH/신경전달물질 항상성, 시냅스 형성/기능, 에너지 및 기전, 및 혈뇌 장벽 유지를 포함하는, 건강한 CNS에서 많은 필수적인 복잡한 기능을 수행하는 특화된 신경아교 세포이다(Barres BA (2008). The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron 60:430-440). 중요하게도, 성상세포는 신경염증성 및 신경퇴행성 질환의 주된 병리적 특징으로서의 역할을 하는 반응성 성상아교세포증(astrogliosis)으로 불리는 과정을 통해 CNS 손상에 반응한다. 증가하는 증거는 정상적인 성상세포 기능의 손실 또는 비정상적인 활성의 증가를 통해 CNS 장애에서 주요한 또는 기여하는 역할을 하는 반응성 성상아교세포증의 잠재성을 가리킨다. 많은 CNS 질환에서의 이들의 중요한 역할을 고려할 때, 질환 진행을 효과적으로 늦추거나 심지어 역전시키기 위해 정상적인 성상세포 기능을 회복시키는 새로운 분자 표적을 식별하고 철저히 시험하는 것이 상당히 요구된다. 성상세포가 CNS 질환에 영향을 미칠 수 있는 몇 가지 잠재적인 경로가 있다.
성상세포 및 OPC 지원. 다발성 경화증과 같은 신경염증성 질환에서 일어나는 탈수초화는 희소돌기아교세포 계통을 포함하는 세포들의 현저한 파괴 및 손실과 연관된다(Ozawa K, et al. Patterns of oligodendroglia pathology in multiple sclerosis. Brain. 1994;117:1311-1322.). 성숙한 수초화 희소돌기아교세포로 완전히 분화하는 데 대한 OPC의 불능으로 인해, 부분적으로 내인성 재수초화 기전은 회복 단계 동안 실패한다(Wolswijk G. Oligodendrocyte survival, loss and birth in lesions of chronic-stage multiple sclerosis. Brain. 2000;123:105-115.). 다른 실험적으로 유도된 탈수초화 모델로부터 수득된 데이터는, 생존하는 성숙한 희소돌기아교세포와 대조적으로, 새롭게 성숙하는 OPC가 회복 단계 동안 재수초화를 위해 필요하다는 것을 보여준다(Levine JM, Reynolds R. Activation and proliferation of endogenous oligodendrocyte precursor cells during ethidium bromide-induced demyelination. Exp Neurol. 1999;160:333-347). 성상세포는 희소돌기아교세포 계통의 기능 및 생존력을 지원하는 데 있어 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다. 예를 들어, Talbott과 동료들은 에티듐 브로마이드-유도된 탈수초화된 병변에서, Nkx2.2+/Olig2+ OPC가 희소돌기아교세포로 완전하게 분화되고 재수초화를 수행하기 위해 성상세포가 필요하다는 것을 보여주었다(Exp Neurol. 2005 Mar;192(1):11-24. 24. Endogenous Nkx2.2+/Olig2+ oligodendrocyte precursor cells fail to remyelinate the demyelinated adult rat spinal cord in the absence of astrocytes. Talbott JF, Loy DN, Liu Y, Qiu MS, Bunge MB, Rao MS, Whittemore SR). Arai 및 Lo는 성상세포가 이들 세포를 증가된 산화적 스트레스로부터 보호하는 OPC에 가용성 영양 인자 지원을 제공한다는 것을 시험관내에서 입증하였다(Arai, K. and Lo, E. H. (2010), Astrocytes protect oligodendrocyte precursor cells via MEK/ERK and PI3K/Akt signaling. J. Neurosci. Res., 88: 758-763. doi: lO.1002/jnr.22256). 다른 사람들은 실험적 자가면역성 뇌척수염, 실험적 시신경염, 및 척수 손상의 환경에서 성상세포 활성화의 저해가 개선된 재수초화 프로파일 및 기능적 결과 측정을 야기한다는 것을 보여 왔다(Brambilla R, Persaud T, Hu X, Karmally S, Shestopalov VI, Dvoriantchikova G, Ivanov D, Nathanson L, Barnum SR, Bethea JR. 2009. Transgenic inhibition of astroglial NF-kappa B improves functional outcome in experimental autoimmune encephalomyelitis by suppressing chronic central nervous system inflammation. J Immunol 182:2628?2640; Brambilla R, Dvoriantchikova G, Barakat D, Ivanov D, Bethea JR, Shestopalov VI. 2012. Transgenic inhibition of astroglial NF-kappaB protects from optic nerve damage and retinal ganglion cell loss in experimental optic neuritis. J Neuroinflammation 9:213; Brambilla R, Bracchi-Ricard V, Hu WH, Frydel B, Bramwell A, Karmally S, Green EJ, Bethea JR. 2005. Inhibition of astroglial nuclear factor kappaB reduces inflammation and improves functional recovery after spinal cord injury. J Exp Med 202:145-156).
성상세포가 OPC 생존 및 기능의 촉진에서 수행하는 역할을 고려할 때, 본원에서 식별된 SEMA4D-발현 OPC 및 SEMA4D 수용체-발현 성상세포의 병치는 플렉신-B 수용체 및 SEMA4D 신호전달의 연관된 상향조절과 함께 성상세포의 질환-관련된 활성화가 OPC 기능에 지대한 효과를 미친다는 것을 제시한다.
성상세포 및 뉴런 지원. 축적되고 있는 증거는 성상세포가 글루타메이트, 퓨린(ATP 및 아데노신), GABA, 및 D-세린을 포함하는 시냅스 활성 분자의 조절된 방출을 통해 시냅스 전달에서 직접적인 역할을 한다는 것을 보여준다(Halassa MM, Fellin T, Haydon PG (2007), The tripartite synapse: roles for gliotransmission in health and disease. Trends Mol Med 13:54-63; Nedergaard M, Ransom B, Goldman SA (2003) New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain. Trends Neurosci 26:523-530에 의해 검토됨). 그러한 신경아교전달물질의 방출은 뉴런의 시냅스 활성 변화에 대한 반응으로 일어나며, 성상세포 칼슘 신호전달의 증가에 의해 반영된 바와 같은 성상세포 흥분성을 포함하고, 뉴런의 흥분성을 변화시킬 수 있다(Halassa MM, Fellin T, Haydon PG (2007), The tripartite synapse: roles for gliotransmission in health and disease. Trends Mol Med 13:54-63; Nedergaard M, Ransom B, Goldman SA (2003) New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain. Trends Neurosci 26:523-530). 신경아교전달물질의 방출을 통해 시냅스 활성에 직접적인 영향을 미치는 것 외에도, 성상세포는 성장 인자 및 관련 분자의 방출을 통해 시냅스 기능에 강력하고 장기간의 영향을 미칠 잠재성을 가지고 있다(Barres BA (2008) The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron 60:430-440).
성상세포 및 BBB 온전성. 성상세포는 혈뇌 장벽(BBB)의 형성에서 그리고 적절한 뉴런의 기능을 위해 매우 중요한 항상성 과정인 BBB를 통한 수송을 조절하는 데 있어서 필수적 역할을 한다. BBB는 혈관주위세포, 성상세포, 및 내피 세포로 구성된 분화된 신경혈관계의 매우 복잡한 뇌 내피 구조이다. BBB 타협(compromise)은 수막염, 뇌 부종, 간질, 알츠하이머병(AD), 파킨슨병(PD), 뇌졸중, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 및 다발성 경화증(MS; Zlokovic BV. Neurovascular pathways to neurodegeneration in Alzheimer's disease and other disorders. Nat Rev Neurosci. 2011;12:723-738에 의해 검토됨)을 포함하는, 많은 신경퇴행성 질환에 연루되어 왔다.
성상세포는 이들이 특정 세포 유형과 상호작용하는 독특한 세포 기구 및 막 성분으로 구성된 특화된 막 돌기를 확장한다는 점에서 "분극화된" 세포이다. 예를 들면, 대뇌 미세혈관 또는 연질막(pia) 근위의 성상세포 돌기는 높은 밀도의 수분 채널, 아쿠아포린 4(Aqp4)를 특징으로 한다(Neely JD, Amiry-Moghaddam M, Ottersen OP, Froehner SC, Agre P, Adams ME (2001) Syntrophin-dependent expression and localization of Aquaporin-4 water channel protein. Proc Natl Acad Sci U S A 98, 14108-14113; Amiry-Moghaddam M, Otsuka T, Hurn PD, Traystman RJ, Haug FM, Froehner SC, Adams ME, Neely JD, Agre P, Ottersen OP, Bhardwaj A (2003) An alpha-syntrophin-dependent pool of AQP4 in astroglial end-feet confers bidirectional water flow between blood and brain. Proc Natl Acad Sci U S A 100, 2106-2111.). 대조적으로, 시냅스 영역을 마주보는 성상세포 돌기는 글루타메이트 수송체가 풍부한 반면, Aqp4의 밀도는 비교적 낮다(Nielsen S, Nagelhus EA, Amiry-Moghaddam M, Bourque C, Agre P, Ottersen OP (1997) Specialized membrane domains for water transport in glial cells: High-resolution immunogold cytochemistry of aquaporin-4 in rat brain. J Neurosci 17, 171-180; Chaudhry FA, Lehre KP, van Lookeren Campagne M, Ottersen OP, Danbolt NC, Storm-Mathisen J (1995) Glutamate transporters in glial plasma membranes: Highly differentiated localizations revealed by quantitative ultrastructural immunocytochemistry. Neuron 15, 711-720). 흥미롭게도, 성상세포 분극화는 신경퇴행을 겪고 있는 뇌에서 파괴된다. 예를 들면, AD의 환경에서, Aqp4 염색 강도는 유의미한 아밀로이드 플라크 양(burden)을 갖는 영역에서 유의미하게 감소한다. 사실상, Yang 및 동료들은 tg-ArcSwe AD 마우스에서 아밀로이드 병리의 축적이 일시적으로 그리고 공간적으로 성상세포 분극화의 손실과 결부된다는 것을 보여주었다 (J Alzheimer's Dis. 2011;27(4):711-22. doi: 10.3233/JAD-2011-110725; Loss of astrocyte polarization in the tg-ArcSwe mouse model of Alzheimer's disease. Yang JL, Lunde LK, Nuntagij P, Oguchi T, Camassa LM, Nilsson LN, Lannfelt L, Xu Y, Amiry-Moghaddam M, Ottersen OP, Torp R.).
성상세포 활성화를 촉진하는 데 있어서 SEMA4D 신호전달의 역할. SEMA4D 수용체 발현 및 성상세포 활성화 마커 GFAP의 연관성을 고려할 때, SEMA4D 신호전달이 성상세포 활성화를 강화하여 질환 상태 동안 "피드-포워드(feed-forward)" 기전을 제공할 수 있는 가능성이 있다. 성상세포 활성화에 대한 SEMA4D의 효과를 조사하기 위해, 랫트 성상세포의 일차 배양물을 생성하고, SEMA4D 단독으로 또는 생체내에서 플렉신-B1을 유도하는 것으로 나타난 공지된 간독성 및 간암유발제인 티오아세타미드(TAA)(하기 실시예 6 및 도 18a)(Lim, J. S., Jeong, S. Y., Hwang, J. Y., Park, H. J., Cho, J. W., & Yoon, S. (2006)), 또는 CNS에서 미세아교세포에 의해 생산되는 공지된 활성화 인자인 프로스타글란딘 D2(하기 실시예 6 및 도 18b)(Thioacetamide-induced Hepatotoxicity in Mice. MOLECULAR & CELLULAR TOXICOLOGY, 2(2), 126-133.)와 조합된 SEMA4D로 처리하였다.
V. 치료적 항-SEMA4D 항체를 이용한 치료 방법
본 개시내용의 방법은 신경퇴행성 장애를 갖는 대상을 치료하기 위해 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 이의 항원 결합 단편, 변이체, 및 유도체를 포함하는, 항체를 사용하는 것에 관한 것이다. 어떤 구현예에서 내피 세포는 SEMA4D 수용체를 발현하고, 다른 구현예에서 뉴런 세포는 SEMA4D 수용체를 발현하며, 다른 구현예에서 내피 및 뉴런 세포 모두는 SEMA4D 수용체를 발현한다. 어떤 구현예에서 수용체는 플렉신-B1이다. 하기 논의가 항-SEMA4D 항체의 투여를 언급하고 있음에도 불구하고, 본원에 기재된 방법은 또한 예를 들면, SEMA4D, 예를 들면, 인간, 마우스, 또는 인간 및 마우스 SEMA4D에 특이적으로 결합할 수 있고, SEMA4D 중화 활성을 가질 수 있고/거나 SEMA-4D와 그의 수용체, 예를 들면, 플렉신-B1과의 상호작용을 차단할 수 있는, 본 개시내용의 항-SEMA4D 항체의 원하는 특성을 보유하는 이들 항-SEMA4D 항체의 항원 결합 단편, 변이체, 및 유도체 또는 다른 생물학적 또는 소분자에 적용가능하다. 또 다른 구현예에서, 상기 방법은 항-SEMA4D 항체의 투여를 언급하고, 본원에 기재된 방법은 또한 플렉신-B1 및/또는 플렉신-B2에 특이적으로 결합할 수 있고 SEMA-4D과 그의 플렉신 수용체, 예를 들면, 플렉신-B1 및/또는 플렉신-B2 중 하나 또는 모두와의 상호작용을 차단할 수 있는 항-플렉신-B1 또는 항-플렉신-B2 결합 분자의 투여를 언급한다.
일 구현예에서, 치료는 본원에 기재된 SEMA4D에 결합하고 이를 중화하는 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 다른 생물학적 또는 소분자를 신경퇴행성 장애를 갖거나 신경퇴행성 장애가 생길 위험성이 있는 환자에게 적용 또는 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료는 또한 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 신경퇴행성 장애를 갖거나 또는 신경퇴행성 장애가 생길 위험성이 있는 환자에게 적용하거나 투여하는 것을 포함하는 것으로 의도된다.
항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 결합 단편은 다양한 신경퇴행성 장애의 치료에 유용하다. 일부 구현예에서, 신경퇴행성 장애의 치료는 상기 장애와 연관된 증상의 개선을 유도하고자 하는 것이다. 다른 구현예에서, 신경퇴행성 장애의 치료는 증상 징후의 증가를 감소시키거나, 지체시키거나 또는 정지시키고자 하는 것이다. 다른 구현예에서, 신경퇴행성 장애의 치료는 증상의 징후를 저해하고, 예를 들면, 억제하거나, 지체시키거나, 예방하거나, 정지시키거나, 또는 역전시키고자 하는 것이다. 다른 구현예에서, 신경퇴행성 장애의 치료는 상기 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감시키고자 하는 것이다. 이러한 상황에서, 증상은 신경정신병적 증상, 인지 증상, 및/또는 운동 기능장애일 수 있다. 다른 구현예에서, 신경퇴행성 장애의 치료는 이환율 및 사망률을 감소시키고자 하는 것이다. 다른 구현예에서, 신경퇴행성 장애의 치료는 삶의 질을 개선하고자 하는 것이다.
일 구현예에서, 본 개시내용은, 특히 상기 장애와 연관된 증상을 개선하기 위해 신경퇴행성 장애의 치료에서 사용하기 위한 약제로서, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 사용에 관한 것이다.
본 개시내용의 방법에 따르면, 적어도 하나의 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체, 또는 다른 생물학적 또는 소분자는 신경퇴행성 장애에 관한 양성 치료적 반응을 촉진하는 데 사용될 수 있다. 신경퇴행성 장애에 대한 "양성 치료적 반응"은 상기 장애와 연관된 증상의 개선을 포함하는 것으로 의도된다. 그러한 양성 치료적 반응은 투여 경로에 제한되지 않으며, 공여체, 공여체 조직(예를 들면 기관 관류와 같음), 숙주, 이의 임의의 조합에의 투여 등을 포함할 수 있다. 특히, 본원에 제공된 방법은 환자에서 신경퇴행성 장애의 진행을 저해하거나, 예방하거나, 감소시키거나, 완화하거나, 또는 줄이는 것에 관한 것이다. 따라서, 예를 들면, 장애의 개선은 임상적으로 관찰가능한 증상의 부재, 임상적으로 관찰가능한 증상의 발생율의 감소, 또는 임상적으로 관찰가능한 증상의 변화를 특징으로 할 수 있다.
신경퇴행성 장애와 연관된 증상을 변화시키는 활성은 생체내 마우스 모델을 이용하여 검출되고 측정될 수 있다. 어떤 구현예에서, CVN 마우스 모델이 이용될 수 있다. CVN 마우스는 AD와 연관된 뇌 염증의 상태 중 일부를 재현하는 돌연변이와 함께 3개의 독립적인 계통에서 가족성 알츠하이머병(AD)의 특징인 Aβ 전구체 단백질의 돌연변이를 포함한다(Colton et al., J Alzheimer's Dis.15:571?587, 2008; Van Nostrand et al., Stroke 41:S135-S138, 2010). CVN 모델은 알츠하이머병과 연관된 일차 병리 중 일부를 나타낸다: Aβ 플라크, 신경섬유매듭(neurofibrillary tangle) 및 세포 사멸(뉴런 손실)을 야기하는 과인산화된 타우, 및 일관된 공간 기억 장애 및 신경혈관 결함. 알츠하이머병을 모델화하는 데 사용되는 다른 마우스 돌연변이와 비교하여, CVN 마우스는 더 이른 연령에 알츠하이머병 관련된 병리를 더 나타낸다. 다른 구현예에서, 헌팅턴병(HD)의 YAC128 마우스 모델이 이용될 수 있다. YAC128 마우스는 전장 돌연변이 인간 헌팅틴 유전자(mHTT)를 발현하며 HD의 많은 징후 및 증상을 정확하게 재현한다. 본 기술분야의 숙련자는 신경퇴행성 장애의 증상의 질환 기전 및 치료의 연구를 위해 문헌에서 다른 모델들이 기술되고 유용하게 이용되어 왔다는 것과, 본 개시내용이 어느 하나의 특정한 모델에 제한되지 않아야 한다는 것을 인식할 것임이 이해되어야 한다.
항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체 또는 다른 생물학적 또는 소분자는 신경퇴행성 장애를 위한 적어도 하나 이상의 다른 치료와 조합하여 사용될 수 있고; 여기서 부가적인 요법은 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체 요법 이전에, 동안에, 또는 이후에 투여된다. 따라서, 조합된 요법이 또 다른 치료제의 투여와 조합된, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 투여를 포함하는 경우, 본 개시내용의 방법은 동시 투여 또는 어느 한 순서의 연속 투여로, 별개의 제형 또는 단일 약제학적 제형을 이용한 공투여를 포함한다.
어떤 구현예에서의 개시내용의 방법 및 시스템을 적용하기 위해, 신경퇴행성 장애를 갖는 것으로 판단된 대상에게 또는 신경퇴행성 장애를 갖는 것으로 의심되는 대상에게 세마포린-4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 포함하는 요법을 투여하기 전 또는 투여 후, 또는 투여 전후 모두에 환자로부터의 샘플 또는 영상이 수득될 수 있다. 일부 경우에, 개시된 후 또는, 요법이 중지된 후, 또는 요법의 전후 모두에 환자로부터 연속적인 샘플 또는 영상이 요법이 수득될 수 있다. 샘플 또는 영상은, 예를 들면, 의료 제공자(예를 들면, 의사) 또는 의료 혜택 제공자에 의해 요청될 수 있고, 동일하거나 상이한 의료 제공자(예를 들면, 간호사, 병원) 또는 임상 실험실에 의해 수득되고/거나 처리될 수 있고, 처리 후, 결과가 또 다른 의료 제공자, 의료 혜택 제공자, 또는 환자에게 전달될 수 있다. 유사하게, 하나 이상의 의료 제공자, 의료 혜택 제공자, 및/또는 임상 실험실에 의해 하나 이상의 스코어의 측정/결정, 스코어간의 비교, 스코어의 평가 및 치료 결정이 수행될 수 있다.
전술한 과정 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애, CNS 낭창, 경도 인지 장애, 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 과정 중 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 헌팅턴병이다.
일부 양태에서, 의료 제공자는 세마포린-4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 포함하는 요법을 투여하도록 또 다른 의료 제공자를 관리하거나 지시할 수 있으며, 여기서 상기 대상은 신경퇴행성 장애를 갖거나, 갖는 것으로 판단되거나, 또는 갖는 것으로 의심된다. 의료 제공자는 또 다른 의료 제공자 또는 환자가 하기 행위를 수행하도록 권한을 주거나 지시할 수 있다: 샘플 또는 영상을 수득하고, 샘플 또는 영상을 처리하고, 샘플 또는 영상을 제출하고, 샘플 또는 영상을 받고, 샘플 또는 영상을 전달하고, 샘플 또는 영상을 분석하거나 측정하고, 샘플 또는 영상을 정량화하고, 샘플 또는 영상을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 제공하고, 샘플 또는 영상을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 받고, 하나 이상의 샘플 또는 영상을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 비교하고/스코어를 매기고, 하나 이상의 샘플로부터의 비교/스코어를 제공하고, 하나 이상의 샘플 또는 영상으로부터 비교/스코어를 수득하고, 요법, 예를 들면, 세마포린-4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하는 단리된 결합 분자의 유효량을 투여하고, 요법의 투여를 개시하고, 요법의 투여를 중지하고, 요법의 투여를 계속하고, 요법의 투여를 일시적으로 중단하고, 투여된 치료제의 양을 증가시키고, 투여된 치료제의 양을 감소시키고, 치료제의 양의 투여를 계속하고, 치료제의 투여 빈도를 증가시키고, 치료제의 투여 빈도를 감소시키고, 치료제에 대한 동일한 투여 빈도를 유지하고, 요법 또는 치료제를 적어도 또 다른 요법 또는 치료제로 대체하고, 요법 또는 치료제를 적어도 또 다른 요법 또는 추가의 치료제와 조합한다.
일부 양태에서, 의료 혜택 제공자는, 예를 들면, 샘플의 수집, 샘플의 처리, 샘플의 제출, 샘플의 수령, 샘플의 전달, 샘플의 분석 또는 측정, 샘플의 정량화, 샘플을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과의 제공, 샘플을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과의 전달, 하나 이상의 샘플을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과의 비교/스코어 매기기, 하나 이상의 샘플로부터의 비교/스코어의 전달, 요법 또는 치료제의 투여, 요법 또는 치료제의 투여의 개시, 요법 또는 치료제의 투여의 중단, 요법 또는 치료제의 투여의 계속, 요법 또는 치료제의 투여의 일시적 중단, 투여된 치료제의 양의 증가, 투여된 치료제의 양의 감소, 치료제의 양의 투여의 계속, 치료제의 투여 빈도의 증가, 치료제의 투여 빈도의 감소, 치료제에 대한 동일한 투여 빈도의 유지, 요법 또는 치료제를 적어도 또 다른 요법 또는 치료제로 대체, 또는 요법 또는 치료제의 적어도 또 다른 요법 또는 추가의 치료제와의 조합을 승인하거나 거절할 수 있다.
전술한 과정의 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애, CNS 낭창, 경도 인지 장애, 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 과정의 어느 것의 어떤 구현예에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 헌팅턴병이다.
또한, 의료 혜택 제공자는, 예를 들면, 요법의 처방을 승인하거나 거절하고, 요법의 적용범위를 승인하거나 거절하고, 요법의 비용에 대한 상환을 승인하거나 거절하고, 요법에 대한 적격성을 결정하거나 거절하는 것 등을 할 수 있다.
일부 양태에서, 임상 실험실은, 예를 들면, 샘플을 수집하거나 수득하거나, 샘플을 처리하거나, 샘플을 제출하거나, 샘플을 받거나, 샘플을 전달하거나, 샘플을 분석 또는 측정하거나, 샘플을 정량화하거나, 샘플을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 제공하거나, 샘플을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 받거나, 하나 이상의 샘플을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 비교하거나/스코어를 매기거나, 하나 이상의 샘플로부터 비교/스코어를 제공하거나, 하나 이상의 샘플로부터 비교/스코어를 수득하거나, 또는 다른 관련된 활동을 할 수 있다.
전술한 과정의 어느 것의 어떤 양태에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애, CNS 낭창, 경도 인지 장애, 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 과정의 어느 것의 어떤 양태에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 헌팅턴병이다.
어떤 양태에서, 전술한 과정 중 어느 것은 대상이 신경퇴행성 장애를 갖는지 판단하는 데 사용될 수 있다. 어떤 양태에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 다운 증후군, 운동 실조, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 전두측두엽 치매(FTD), HIV 관련 인지 장애, CNS 낭창, 경도 인지 장애, 또는 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술한 과정 중 어느 것의 어떤 양태에서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 헌팅턴병이다
일부 양태에서, 의료 제공자, 임상 실험실, 또는 다른 독립체는 예를 들면, 영상을 수집하거나 수득하거나, 영상을 처리하거나, 영상을 제출하거나, 영상을 받거나, 영상을 전달하거나, 영상을 분석 또는 측정하거나, 영상을 정량화하거나, 영상을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 제공하거나, 영상을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 받거나, 하나 이상의 영상을 분석/측정/정량화한 후에 수득된 결과를 비교하고/스코어 매기거나, 하나 이상의 영상으로부터 비교/스코어를 제공하거나, 하나 이상의 영상으로부터 비교/스코어를 수득하거나, 또는 다른 관련된 활동을 할 수 있다. 그와 같은 양태에서 사용될 수 있는 영상은, 비제한적으로, 혈관조영술, 초음파, 전산화단층촬영법(CT), 자기 공명 영상(MRI), 양전자 방출 단층촬영(PET), 광간섭 단층촬영(OCT), 근적외선 분광학(NIRS), 및 NIR 형광에 의해 수득된 영상을 포함한다. 어떤 구현예에서, 문헌에 기재된 영상화 기술이 사용될 수 있다(Tardif et al. Circ Cardiovasc Imaging 4:319-333 (2011)).
VI. 약제학적 조성물 및 투여 방법
항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 제조하고 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있거나 당해분야의 숙련가에 의해 쉽게 결정된다. 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 투여 경로는, 예를 들면, 경구, 비경구, 흡입에 의해 또는 국소일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 비경구는, 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피하, 직장, 또는 질 투여를 포함한다. 이러한 모든 투여 형태가 본 개시내용의 범위 내에 속하는 것으로서 명확하게 고려되긴 하지만, 투여를 위한 형태의 한 가지 예는 주사용 용액, 특히 정맥내 또는 동맥내 주사 또는 드립용 용액일 것이다. 적합한 주사용 약제학적 조성물은 버퍼(예를 들면 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 버퍼), 계면활성제(예를 들면 폴리소르베이트), 임의로 안정제(예를 들면 인간 알부민) 등을 포함할 수 있다. 그러나, 본원의 교시와 양립가능한 다른 방법에서, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 부정적인 세포성 집단의 부위에 직접 전달됨으로써 병든 조직이 치료제에 노출되는 것을 증가시킬 수 있다.
본원에서 논의된 바와 같이, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 신경퇴행성 장애의 생체내 치료를 위한 약제학적 유효량으로 투여될 수 있다. 이와 관련하여, 상기 개시된 결합 분자는 투여를 용이하게 하고 활성제의 안정성을 촉진하기 위해 제형화될 수 있음이 인식될 것이다. 어떤 구현예에서, 본 개시내용에 따른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 무독성 멸균 담체, 예컨대 생리적 염수, 무독성 버퍼, 보존제 등을 포함한다. 본원의 목적을 위해, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 약제학적 유효량은, 표적에의 효과적인 결합을 달성하고, 이점을 달성하는데, 예를 들면, 신경퇴행성 장애와 연관된 증상을 개선하는 데 충분한 양을 의미하는 것으로 간주될 것이다.
본 발명에서 사용되는 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하고, 이는, 예를 들면, 이온 교환기, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 버퍼 물질, 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 칼륨 소르베이트, 포화된 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 설페이트, 디나트륨 수소 포스페이트, 칼륨 수소 포스페이트, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 비닐피롤리돈, 셀룰로오스-기반 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 폴리머, 폴리에틸렌 글리콜, 및 양모지(wool fat)를 포함한다.
비경구 투여용 조제물은 멸균된 수용액 또는 비-수용액, 현탁액, 및 유화액을 포함한다. 비-수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트이다. 수성 담체는, 예를 들면, 물, 알코올성/수용액, 유화액 또는 현탁액을 포함하고, 이는 염수 및 완충 매질을 포함한다. 본 개시내용에서, 약제학적으로 허용가능한 담체는, 비제한적으로, 0.01-0.1 M, 예를 들면, 약 0.05 M 인산염 버퍼 또는 0.8% 염수를 포함한다. 다른 일반적인 비경구 비히클은 나트륨 포스페이트 용액, 링거 덱스트로오스, 덱스트로오스 및 염화나트륨, 락테이트화된 링거, 또는 고정유를 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양소 보충물, 전해질 보충물, 예컨대 링거 덱스트로오스에 기반한 것들 등을 포함한다. 예를 들면, 항미생물제, 항산화제, 킬레이트제, 및 불활성 가스 등과 같은 보존제 및 다른 첨가제가 또한 존재할 수 있다.
더 상세하게는, 주사가능한 용도에 적합한 약제학적 조성물은 멸균된 수용액(수용성인 경우) 또는 분산물 및 멸균된 주사가능 용액 또는 분산물의 즉석 제조를 위한 멸균된 분말을 포함한다. 그와 같은 경우에, 상기 조성물은 멸균되어야 하며, 주사능력이 쉬울 정도로 유체이어야 한다. 상기 조성물은 제작 및 보관의 조건하에 안정해야 하며 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균류의 오염 활동으로부터 보존될 수 있다. 담체는, 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들면, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 적합한 이들의 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산매일 수 있다. 적절한 유체성은, 예를 들면, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 본원에 개시된 치료 방법에서 사용하기 위한 적합한 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.) 16th ed. (1980)]에 기재되어 있다.
미생물의 활동은 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 방지될 수 있다. 많은 경우에, 예를 들면, 당, 폴리알코올, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨과 같은 등장제가 포함될 수 있다. 주사가능 조성물의 연장된 흡수는 조성물 내에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
어떤 경우에, 멸균된 주사가능 용액은 활성 화합물(예를 들면, 그 자체 또는 다른 활성제와 조합된, 항-SEMA4D 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체)을 필요한 양으로 본원에 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매에서 혼입한 후, 필요한 경우 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산물은 활성 화합물을, 염기성 분산매 및 상기 열거된 것들로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균된 비히클 내로 혼입함으로써 제조된다. 멸균된 주사가능 용액의 제조를 위한 멸균된 분말의 경우, 제조 방법은 진공 건조 및 냉동-건조를 포함하고, 이는 앞서 멸균-여과된 용액으로부터 활성 성분 및 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성한다. 주사용 조제물은 가공되고, 앰풀, 백, 병, 주사기 또는 바이알과 같은 용기 내로 충전되고, 당해분야에서 공지된 방법에 따라 무균 조건하에 밀봉된다. 또한, 조제물은 키트의 형태로 포장되어 판매될 수 있다. 그러한 제조 물품은 관련된 조성물이 질환 또는 장애를 겪고 있거나, 질환 또는 장애에 취약한 대상을 치료하는 데 유용하다는 것을 표시하는 라벨 또는 포장 삽입물을 가질 수 있다.
비경구 제형은 단일 볼루스 용량, 주입액 또는 로딩 볼루스 용량 후 유지 용량일 수 있다. 이들 조성물은 특정한 고정 간격 또는 가변 간격으로, 예를 들면, 1일 1회, 또는 "필요에 따라(as needed basis)" 투여될 수 있다.
본 개시내용에서 사용되는 어떤 약제학적 조성물은, 예를 들면, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 용액을 포함하는, 허용가능한 투여 형태로 경구 투여될 수 있다. 어떤 약제학적 조성물은 또한 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 그와 같은 조성물은, 벤질 알코올 또는 다른 적합한 보존제, 생체이용률을 향상시키는 흡수 촉진제, 및/또는 다른 종래의 가용화제 또는 분산제를 이용하여, 염수 중의 용액으로서 제조될 수 있다.
단일 투여 형태를 생산하기 위해 담체 물질과 조합될, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 양은 치료되는 숙주 및 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 본 조성물은 단일 용량으로서, 다중 용량으로서 또는 주입액으로 확립된 기간 동안 투여될 수 있다. 투여 요법은 최적의 원하는 반응(예를 들면, 치료 또는 예방 반응)을 제공하기 위해 조정될 수도 있다.
본 개시내용의 범위에 따라, 항-SEMA4D 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체는 치료 효과를 생성하는 데 충분한 양으로 상기 언급된 치료 방법에 따라 인간 또는 다른 동물에게 투여될 수 있다. 항-SEMA4D 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체 또는 유도체는 공지된 기술에 따라 본 개시내용의 항체를 종래의 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 조합함으로써 제조된 종래의 복용 형태로 상기 인간 또는 다른 동물에게 투여될 수 있다. 당해분야의 숙련가는 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제의 형태 및 특성이 그것이 조합될 활성 성분의 양, 투여 경로 및 다른 공지된 변수에 의해 좌우된다는 것을 인식할 것이다. 당해분야의 숙련가는 본 개시내용의 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 하나 이상의 종을 포함하는 칵테일이 사용될 수 있음을 추가로 인식할 것이다.
"치료적 유효 용량 또는 유효량" 또는 "유효량"은 투여시 치료될 질환을 갖는 환자의 치료에 대해 양성 치료 반응을 야기하는, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 양으로 의도된다. 신경퇴행성 장애의 경우, 양성 치료적 반응은 상기 장애의 증상을 완화할 수 있거나; 증상의 발생율을 줄이거나, 감소시키거나, 지체시키거나 또는 정지시킬 수 있거나; 증상의 중증도를 줄이거나, 감소시키거나, 지체시킬 수 있거나; 증상의 징후를 저해하거나, 예를 들면 억제하거나, 지체시키거나, 예방하거나, 정지시키거나, 또는 역전시킬 수 있거나; 상기 장애와 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화할 수 있거나; 이환율 및 사망률을 감소시킬 수 있거나; 삶의 질을 개선할 수 있거나; 또는 그러한 효과의 조합을 야기할 수 있다.
증상의 발생율의 감소를 위한, 본 개시내용의 조성물의 치료적 유효 용량은, 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리적 상태, 환자가 인간인지 또는 동물인지 여부, 투여된 다른 약물치료, 및 치료가 예방적인지 또는 치료적인지 여부를 포함하는 많은 상이한 인자에 따라 달라진다. 어떤 구현예에서, 환자는 인간이지만, 형질전환 포유동물을 포함하는 비-인간 포유동물 역시 치료될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 당해분야의 숙련가에게 공지된 일상적인 방법을 이용하여 적정될 수 있다.
투여될 적어도 하나의 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 양은 본 개시내용을 고려할 때 과도한 실험과정 없이 당해분야의 숙련가에 의해 쉽게 결정된다. 적어도 하나의 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 이의 항원 결합 단편, 변이체 또는 유도체의 투여 방식 및 각각의 양에 영향을 미치는 인자들은, 비제한적으로, 질환의 중증도, 질환의 이력, 및 요법을 겪고 있는 개체의 연령, 신장, 체중, 건강, 및 신체 조건을 포함한다. 유사하게, 투여될 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체, 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체의 양은 투여 방식 및 대상이 이 제제의 단일 용량 또는 다중 용량을 겪을지 여부에 좌우될 것이다.
본 개시내용은 또한 신경퇴행성 장애를 치료하기 위해, 대상을 치료하기 위한 약제의 제조에서, 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 본 개시내용의 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체의 사용을 제공하며, 여기서 상기 약제는 적어도 하나의 다른 요법으로 전처리된 대상에서 사용된다. "전처리된" 또는 "전처리"는 대상이 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하는 약제를 받기 전에 하나 이상의 다른 요법을 받았음을(예를 들면, 적어도 하나의 다른 신경퇴행성 요법으로 처리되었음을) 의도한다. "전처리된" 또는 "전처리"는 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 본원에 개시된 단클론성 항체 VX15/2503, 67 또는 76, 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하는 약제를 이용한 치료의 개시 전 2년 이내에, 18개월 이내에, 1년 이내에, 6개월 이내에, 2개월 이내에, 6주 이내에, 1개월 이내에, 4주 이내에, 3주 이내에, 2주 이내에, 1주 이내에, 6일 이내에, 5일 이내에, 4일 이내에, 3일 이내에, 2일 이내에, 또는 심지어 1일 이내에 적어도 하나의 다른 요법으로 치료되었던 대상을 포함한다. 대상이 이전 요법 또는 요법들을 이용한 전처리에 반응자였을 필요는 없다. 따라서, 상기 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체를 포함하는 약제를 받는 대상은 이전 요법을 이용한 전처리, 또는 이전 요법 중 하나 이상(여기서, 전처리는 다중 요법을 포함)에 대해 반응하였거나, 또는 반응하지 못하였을 수 있다.
본 개시내용의 실시는, 다르게 명시되지 않는 한, 본 발명의 기술 내에 속하는 세포 생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 유전자도입 생물학, 미생물학, 재조합 DNA, 및 면역학의 종래 기술을 이용할 것이다. 그러한 기술들은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들면, 문헌[Sambrook et al., ed. (1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (2nd ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press); Sambrook et al., ed. (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY); D. N. Glover ed., (1985) DNA Cloning, Volumes I and II; Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis; Mullis et al. U.S. Pat. No. 4,683,195; Hames and Higgins, eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization; Hames and Higgins, eds. (1984) Transcription And Translation; Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986); Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning; the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory); Wu et al., eds., Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155; Mayer and Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press, London); Weir and Blackwell, eds., (1986) Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV; Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986); and in Ausubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Baltimore, Md.)]을 참고한다.
항체 조작의 일반적인 원리는 문헌[Borrebaeck, ed. (1995) Antibody Engineering (2nd ed.; Oxford Univ. Press)]에 제시되어 있다. 단백질 조작의 일반적인 원리는 문헌[Rickwood et al., eds. (1995) Protein Engineering, A Practical Approach (IRL Press at Oxford Univ. Press, Oxford, Eng.)]에 제시되어 있다. 항체 및 항체-합텐 결합의 일반적인 원리는 문헌[Nisonoff (1984) Molecular Immunology (2nd ed.; Sinauer Associates, Sunderland, Mass.); and Steward (1984) Antibodies, Their Structure and Function (Chapman and Hall, New York, N.Y.)]에 제시되어 있다. 추가로, 당해기술에 공지되어 있고 명시적으로 기재되지 않은 면역학에서의 표준 방법들은 일반적으로 문헌[Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York; Stites et al., eds. (1994) Basic and Clinical Immunology (8th ed; Appleton & Lange, Norwalk, Conn.) and Mishell and Shiigi (eds) (1980) Selected Methods in Cellular Immunology (W.H. Freeman and Co., NY)]에 기재된 바와 같이 따른다.
면역학의 일반적인 원리를 제시하는 표준 참고서는 문헌[Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, New York; Klein (1982) J., Immunology: The Science of Self-Nonself Discrimination (John Wiley & Sons, NY); Kennett et al., eds. (1980) Monoclonal Antibodies, Hybridoma: A New Dimension in Biological Analyses (Plenum Press, NY); Campbell (1984) "Monoclonal Antibody Technology" in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, ed. Burden et al., (Elsevere, Amsterdam); Goldsby et al., eds. (2000) Kuby Immunology (4th ed.; H. Freemand & Co.); Roitt et al. (2001) Immunology (6th ed.; London: Mosby); Abbas et al. (2005) Cellular and Molecular Immunology (5th ed.; Elsevier Health Sciences Division); Kontermann and Dubel (2001) Antibody Engineering (Springer Verlang); Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press); Lewin (2003) Genes VIII (Prentice Hall 2003); Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press); Dieffenbach and Dveksler (2003) PCR Primer (Cold Spring Harbor Press)]을 포함한다.
상기에서 인용된 모든 참조문헌뿐만 아니라 본원에 인용된 모든 참조문헌들은 그 전체가 참고로써 본원에 포함되어 있다.
하기 실시예는 예시로서 제공되며, 제한으로서 제공되는 것이 아니다.
실시예
실시예 1: CVN 마우스 모델에서 알츠하이머병(AD)에 대한 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체, 예를 들면, VX15/2503, 67, 또는 76의 효과의 시험
실험 설계. AD와 연관된 병리 및 증상에 대한 항-SEMA4D 항체(예를 들면, MAb 67)의 효과를 연구하기 위해 CVN 모델을 사용하였다. CVN 마우스는 AD와 연관된 신경염증성 기전을 촉진하는 유전자(산화질소 합성효소-2)의 결실과 함께 3개의 독립적 계통에서 가족성 알츠하이머병(AD)의 특징인 인간 Aβ 전구체 단백질의 돌연변이를 포함한다(Colton et al., J Alzheimers Dis.15:571-587, 2008; Van Nostrand et al., Stroke 41:S135-S138, 2010).
기본적인 실험 설계가 도 1에 나타나 있다. 알츠하이머병에 걸리기 쉬운 CVN 마우스(찰스 리버로부터 수득함)를 사용하여 AD에 대한 항-SEMA4D 결합 분자의 효과를 시험하였다. 10주령에, 마우스로부터 채혈하여 기저 혈청학 수준을 수득하였다. 10-12주령 사이에, 마우스가 연구에 참여할 수 있는지 보장하기 위해 마우스에게 행동 예비시험을 수행하였다. 무작위 분류 후, CVN 마우스를 26주부터 38주까지 항-SEMA4D(Mab-67) 또는 아이소타입 대조군(MAb 2B8) 항체(30 mg/kg, i.v.)로 매주 처리하였고, 이때 몇 가지 행동 시험을 시행하였다. 상기 행동 시험은 오픈 필드 시험(open field test) 및 방사형 수중 미로(radial arm water maze)였다.
오픈 필드 시험 - 가능한 처리 유도된 과소 행동(hypoactivity) 또는 과잉 행동(hyperactivity)(대조군 시험) 또는 다른 효과에 대해 10주령 및 38주령에 오픈 필드 시험에서 동물의 탐색 활동을 연구한다. 시험에 앞서 마우스를 실험실에 두어 실험실 조건에 적어도 30분간 적응시킨다. 활동 챔버(Med Associates Inc, St Albans, VT; 27 x 27 x 20.3 cm)는 IR 빔이 구비되어 있다. 마우스를 챔버의 가운데에 두고 이들의 행동을 5분 간격(bins)으로 30분간 기록한다. 하기 5가지 의존적 측정값에 대해 정량적 분석을 수행한다: 총 보행 운동 능력, 오픈 필드의 중심에서의 보행 운동 능력, 중심에서의 서기(rearing) 비율, 총 서기 빈도 및 속도. 동물을 빛이 약 10-30 lux의 적색 빛으로 낮춰진 저-스트레스 조건에서 시험한다.
방사형 수중 미로 - 11주 및 39주령에, 시험에 앞서 마우스를 실험실에 두어 실험실 조건에 적어도 30분간 적응시킨다. 2일 방사형 수중 미로가 이전에 상세하게 기술되어 왔다(Alamed et al. 2006). 요약하면, 6-팔(six-arm) 미로를 수조에 담그고, 플랫폼을 하나의 팔의 끝에 둔다. 마우스를 2일 동안 매일 15회 시험하고, 각 시험에서 다른 팔로 출발시키는 한편 플랫폼을 함유하는 팔은 각 마우스에 대해 동일하게 유지한다. 팔의 플랫폼 위치를 주어진 연령의 각 마우스에 대해 2일간 일정하게 유지시키지만, 이 위치는 11 내지 40주령 시험 시점의 각 마우스에 대해서는 변화시킨다. 방 주위의 시각적 신호를 이용하여, 마우스는 탈출 플랫폼의 위치를 학습한다. 처음 10회 시험은 훈련으로 간주되며 보이는 플랫폼과 숨겨진 플랫폼 사이를 교대한다. 1일에 대한 마지막 시험 및 2일에의 모든 시험은 숨겨진 플랫폼을 사용한다. 오차의 수(부정확한 팔 진입)를 1분 동안 계수하였다. 상기 오차를 3회 시험에 대해 평균하여 2일 기간 동안 10 블럭을 야기한다.
행동 시험의 결론 후, 마우스를 희생시키고 뇌 조직을 포르말린-고정된 파라핀-포매된(FFPE) 면역조직화학을 위해 처리하였다. 저해성 GABA성 시냅스의 유도에서의 SEMA4D의 역할의 보고에 비추어(Kuzirian et al., J Neuroscience, 33:8961-8973·8961, 2013), 처리된 CVN 마우스의 치아 이랑(dentate gyrus)에서 소포체의 밀도 및 소포성 GABA 수송체(VGAT)의 발현의 강도를 결정하였다. 치아 이랑은 성인 CNS에서 계속된 신경발생의 몇 가지 주요 중심지 중 하나이며, 기억 형성 및 유지에서 역할을 하는 것으로 여겨진다. 모든 실험의 경우, 2원 ANOVA 시험을 이용하여 통계 분석을 수행하였다.
항-SEMA4D는 불안 유사 행동을 감소시킨다. 항-SEMA4D 또는 아이소타입 대조군으로 처리된 12마리의 AD에 걸리기 쉬운 CVN 마우스의 그룹에서 탐색 활동을 연구하였다. 보행 활동 및 불안 유사 행동에 대한 가능한 처리-유도된 효과를 위해 38주령에 오픈 필드 시험을 시행하였다. 마우스를 빛이 켜진 챔버의 중심에 두고, 이들의 행동을 6번의 5분 시간 간격으로 30분 동안 기록하였다. 본 기술분야에서 알려진 바와 같이, 불안-관련 행동의 측정값인 총 보행 운동 능력(도 2a) 및 오픈 필드의 중심에서의 보행 운동 능력(도 2b)에 대해 정량적 분석을 수행하였다.
상기 결과는 매주 항-SEMA4D 항체로 처리된 AD에 걸리기 쉬운 CVN 마우스가 대조군 MAb 2B8로 처리된 마우스보다 더 큰 오픈 필드 탐색 및 적은 불안 유사 행동(필드의 중심으로의 진입)을 나타낸다는 것을 보여주었다. 이들 결과가 도 2에 나타나 있다.
항-SEMA4D는 공간 기억을 개선한다. 39주령에, 항-SEMA4D 또는 2B8 아이소타입 대조군으로 처리된 CVN 마우스(n=9-13/그룹)를 방사형 수중 미로(Alamed et al. 2006, 도 3a에 나타나 있음)에서 2일간 시험하였다. 요약하면, 각각의 마우스를 2일 각각에 매일(블록 당 3회 시험) 15회 시험하였다. 각 시험은 상이한 팔로부터 출발한 반면, 플랫폼을 함유하는 팔은 각 시험 동안 동일하게 유지시켰다. 1일에서의 시험 블록은 훈련 목적을 위해 보이는 플랫폼과 숨겨진 플랫폼 사이를 교대하였다. 2일째의 모든 시험은 공간 기억을 평가하기 위해 숨겨진 플랫폼으로 수행하였다. 1일은 훈련/학습 기간이었고, 2일째에 플랫폼을 찾는 지연시간(latency)을 기록하였다.
상기 결과는 항-SEMA4D 항체(MAb 67) 투여가 대조군(MAb 2B8-처리된) 그룹과 비교하여 개선된 공간 기억을 제시하는 지연시간에서의 주목할만한 감소를 야기한다는 것을 보여주었다. 결과가 도 3b에 나타나 있다.
항-SEMA4D는 GABA성 시냅스를 줄인다. Mab-67 또는 MAb-2B8 처리된 CVN 및 WT 마우스(n=9-13/그룹)로부터의 FFPE 뇌 조직 절편을 항-VGAT 항체로 염색하여 GABA성 시냅스 소포체를 검출하였다. 소포체당 VGAT-양성 소포체 신호 및 VGAT 신호 강도의 백분율을 모든 동물의 치아 이랑 내에서 정량화하고, 스캔된 총 치아 이랑에 대해 정규화하였다.
상기 결과는 CVN AD 마우스의 항-SEMA4D 항체 처리가 VGAT 양성 소포체의 밀도를 감소시키는 경향 및(도 4a) 및 소포체당 VGAT 염색 강도 수준에서의 통계학적으로 유의미한 감소(도 4b)를 야기한다는 것을 보여주었고, 이는 생체내에서 GABA성 신호전달을 조절하는 데 있어서 SEMA4D에 대한 역할을 제시하며 MAb 67 처리된 CVN 마우스에서 관찰된 행동 효과에 대한 기계론적 통찰력을 제공할 수 있는 발견이다. GABA성 신호전달은 이종 계열의 저해성 뉴런과 연관된다. 하기 실시예 6의 도 15에서 입증된 바와 같이, 소마토스타틴-, NPY-, 또는 NPY2R-양성 뉴런의 하위집단에 대해 분석이 집중될 때 저해성 뉴런의 밀도에 대한 항-SEMA4D 항체 처리의 보다 유의미한 효과가 관찰된다.
실시예 2: YAC128 마우스 모델에서 헌팅턴병(HD)에 대한 항-SEMA4D 결합 분자, 예를 들면, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 변이체, 또는 유도체, 예를 들면, MAbs VX15/2503 또는 67의 효과의 시험
실험 설계. HD와 연관된 병리 및 증상에 대한 항-SEMA4D 항체의 효과를 연구하기 위해 생체내 YAC128 모델을 이용하는 두 번째 실험을 수행하였다. 기본적인 실험 설계는 상기 실시예 1, 및 도 1에 나타난 것과 유사하였으나, 이 사례에서 MAb(항체) 투여는 그룹당 13 내지 22마리의 YAC128 또는 WT 마우스를 이용하여 6주부터 47주까지 매주 수행하였다. YAC128 마우스를 채혈하고, 브리티시 컬럼비아 대학의 분자 의학치료연구소에서 유지시켰다.
항-SEMA4D는 YAC128 마우스 모델에서 불안 유사 행동을 감소시킨다. 오픈-필드 탐색 동안 불안을 평가하기 위해, 형광 천정등이 밝게 켜진 방안에 20 cm 높이의 50×50 cm 개방형 회색 아크릴 상자의 하부 좌측 코너에 MAb-처리된 마우스를 두었다. 천장에 고정된 비디오 카메라에 의해 오픈 필드 활동을 10분간 기록하였다. 필드 중심으로의 진입(도 5a) 및 필드 중심에서 보낸 시간(도 5b)을 불안 유사 행동의 측정값으로서 점수를 매겼다.
YAC128 마우스가 야생형(WT) 마우스보다 오픈 필드 탐색에서 더 큰 불안 유사 행동을 나타내는 대조군 처리된 동물과 대조적으로, 항-SEMA4D 항체(MAb 67) 로 처리된 WT 및 YAC128 마우스 사이에 차이가 없으며, 이는 MAb-67이 YAC128 마우스에서 불안 유사 행동을 완화한다는 것을 가리킨다. 상기 결과가 도 5에 나타나 있다.
항-SEMA4D는 YAC128 마우스 모델에서 공간 기억을 개선한다. 새로운 장소에서 공지된 물체에 대한 선호도를 평가하기 위해, 2개의 상이한 새로운 물체를 오픈 필드 상자의 상부 좌측 및 우측 코너에 두었다. 항-SEMA4D-처리된 마우스를 상기 상자에 하부 좌측 코너로 넣고, 천장에 고정된 비디오 카메라에 의해 5분간 기록하였고, 이 시간 동안 2개의 새로운 물체의 조사 횟수를 기록하였다(Trial 1, 도 6a). 그리고 나서, 마우스를 상자에서 5분간 빼내고, 상자의 상부 우측 코너에 있는 물체를 상자의 하부 우측 코너로 옮겼다. 마우스를 박스에 다시 넣고 5분간 더 기록하였다(시험 2, 도 6b). 모든 코 찌르기(poke) 대비 표적 물체(새로운 장소에 있는 것)에 대한 상기 조사, 또는 코 찌르기의 백분율을 계산하였다.
시험 2에서 새로운 장소에서 물체를 우선적으로 탐색하는 대조군 또는 Mab 67-처리된 야생형(WT) 동물과 대조적으로, 대조군-처리된 YAC128 마우스는 새로운 장소에서 물체를 인식하거나 이에 대해 선호도를 나타내지 않는다. 항-SEMA4D 항체 처리는 YAC128 마우스에서 정상적인 새로운 물체 선호를 회복한다(p<0.01). 이것은 YAC128 마우스에서의 공간 기억이 Mab-67 처리에 의해 개선되어 이들이 물체가 새로운 장소에 있었음을 인식하였음을 제시한다. 상기 결과가 도 6에 나타나 있다.
항-SEMA4D는 YAC128 마우스에서 피질 및 뇌량 변성을 예방한다. 12월령의 MAb-처리된 YAC128 및 WT 마우스(n=13-21/그룹)로부터의 자유부유하는 뇌 조직 절편을 항-NeuN 항체로 염색하였다. StereoInvestigator 소프트웨어(Microbrightfield)를 이용하여 연속적 절편에서 상기 정의된 구조의 외주(perimeter)를 추적함으로써 피질(도 7a) 및 뇌량(도 7b) 부피를 결정하고, 카발리에리 원리(Cavalieri principle)를 이용하여 부피를 결정하였다.
상기 결과는 항-SEMA4D 항체 처리가 12월령의 YAC128 마우스에서 피질 및 뇌량 부피에서의 정상 질환 관련된 감소를 저해한다는 것을 보여준다. 상기 결과가 도 7에 나타나 있다.
Mab 67은 YAC128 마우스에서 고환 변성을 예방한다. 고환 변성은 남성 HD 환자에서 발견되며 수컷 YAC128 마우스에서 재현된다. 도 8에 나타난 바와 같이, 항-SEMA4D 항체 처리는 12월령 YAC128 마우스에서 고환 변성을 예방한다. 뇌와 고환 모두에 대한 질환 및 항-SEMA4D 항체의 효과가 이들 조직의 정상적인 기능에서 세포내 액틴-의존적 수송 기전에 대한 공통 의존성을 반영할 가능성이 있다.
실시예 3: 랫트 CNS에서 SEMA4D, 플렉신-B1, 플렉신-B2 및 CD72의 발현 패턴의 조사
SEMA4D 및 그의 수용체 플렉신-B1, 플렉신-B2, 및 CD72를 발현하는 CNS 내의 세포 유형을 시각화하기 위해, 나이브(naive) 랫트로부터의 관상 척수 절편 상에서 공동-면역조직화학법을 수행하였다(도 9 A-P). 나이브 랫트로부터의 척수 절편 상에서 희소돌기아교세포 전구 세포 마커, Nkx2.2, 및 SEMA4D(도 9 A-C), 플렉신-B1 및 성상세포 마커, GFAP(도 9 E-G), 플렉신-B1 및 CD72(도 9 I-K), 및 플렉신-B1 및 미세아교 마커, Iba1(도 9 M-O)에 대한 공동-염색을 수행하였다. 또한, 세포 핵을 시각화하기 위해 모든 절편을 DPAI로 염색하였다(도 9 D, H, L, 및 P). 슬라이드를 올림푸스 Ix50 현미경이 결합된 EXi-Aqua-14 bit 카메라를 이용하여 60X 배율로 영상화하였다.
도 9에서의 결과는 정상적인 CNS 내에서, SEMA4D가 Nkx2.2-양성 희소돌기아교세포 전구체 상에서 강력하게 발현되는 반면, 그의 수용체, 플렉신-B1, 플렉신-B2(데이터는 나타나 있지 않음), 및 CD72는 다수의 세포 유형 상에서 발현되고, 신경아교 섬유질 산성 단백질(GFAP)-양성 성상세포 상에서 특히 두드러진다는 것을 보여준다.
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*실시예 4: CVN 알츠하이머병 마우스 모델에서 플렉신-B1 및 플렉신-B2 수용체의 발현 패턴의 특성규명
동형접합성 이원성 CVN AD 마우스는 동일 연령의 야생형 마우스와 비교하여 해마이행부(Subiculum)에서 전통적인 아밀로이드 병리 및 신경아교 활성화를 나타낸다. 플렉신-B1의 발현 패턴을 알츠하이머병의 CVN 마우스 모델에서 조사하였다. CVN(APPSwDI/NOS2-/-로도 알려짐) 이원성 마우스는 아밀로이드 전구체 단백질 Swedish-Dutch-Iowa 돌연변이(APPSwDI) 이식유전자 및 산화질소 합성효소 2(Nos2, 또는 유도성 NOS, iNOS) 유전자좌의 표적화된 "무효화(null)" 돌연변이를 갖는다. 41주령에, CVN 및 야생형 대조군 마우스를 희생시키고 DAB 면역조직화학을 위해 처리하였다. 상기 결과가 도 10에 나타나 있고, 상부 패널에는 야생형 마우스 절편이, 하부 패널에 CVN 마우스 절편이 나타나 있다. 절편들을 아밀로이드-베타 1-42 펩타이드(좌측의 상부 및 하부 패널), 미세아교 마커 Iba1(상부 및 하부 중심 패널), 또는 성상세포 마커 GFAP(우측의 상부 및 하부 패널)에 대해 개별적으로 염색하였다. 슬라이드를 올림푸스 Ix50 현미경이 결합된 Retiga QICAM-12 bit 카메라를 이용하여 20X 배율로 영상화하였다.
도 10에서의 결과는 동형접합성 이원성 CVN 마우스(APPSwDI/NOS2-/-)가 고전적인 아밀로이드 병리, 미세아교 활성화, 및 성상교세포증(astrogliosis)(하부 패널)을 발달시킨다는 것을 보여준다.
CVN AD 마우스에서의 활성화된 성상세포는 동일 연령의 야생형 마우스와 비교하여 향상된 플렉신-B1 발현을 나타낸다. 41주령에, CVN 및 야생형 대조군 마우스를 희생시키고 형광성 공동-면역조직화학을 위해 처리하였다(도 11a). 절편을 SEMA4D 수용체 플렉신-B1 및 성상세포 마커 GFAP, 및 세포 핵을 시각화하는 DAPI로 개별적으로 염색하였다. 합성 영상이 가장 좌측 패널에 나타나 있다. 슬라이드를 올림푸스 Ix50 현미경이 결합된 EXi-Aqua-14 bit 카메라를 이용하여 60X 배율에서 영상화하였다.
도 11a에 나타난 바와 같이, CVN 및 동일 연령의 야생형 마우스의 뇌 내의 플렉신-B1(좌측으로부터 두 번째 패널) 및 GFAP-양성 성상세포(좌측으로부터 세 번째 패널)의 공동-면역조직화학적 분석은, 증가된 GFAP 마커 염색에 의해 증명된 바와 같이, 성상세포 활성화가 향상된 공동-등록된 플렉신-B1 발현과 양적으로 상관관계가 있음을 입증하며, 이는 SEMA4D/플렉신 신호전달이 성상세포 활성화의 과정에 관여한다는 것을 제시한다.
CVN AD 마우스에서 SEMA4D 신호전달을 저해하는 것은 동일 연령의 야생형 마우스와 비교하여 플렉신-B2 발현을 회복시킨다. CVN AD 마우스에서 SEMA4D 신호전달을 차단하는 것이 AD 발병학에서 조기에 영향을 받은 뇌 영역에서, 플렉신-B1 및/또는 그의 대안적인 동족 수용체인 플렉신-B2의 발현에 영향을 미칠지 결정하기 위해, 26주령 CVN 및 야생형 대조군 마우스에게 13주 동안 30 mg/kg 항-SEMA4D 단클론성 항체(67-2) 또는 대조군 IgG(2B8)를 정맥내로 매주 주사하였다. 41주령에, 마우스를 희생시키고 MAb-처리된 마우스로부터의 뇌 조직 절편을 항-플렉신-B1 또는 항-플렉신-B2로 염색하여 항-SEMA4D 처리가 진행중인 AD-관련 발병학의 환경에서 동족 수용체 발현을 변화시켰는지 여부를 검출하였다. 플렉신-B1 및 플렉신-B2-양성 신호의 백분율을 모든 동물의 해마이행부 내에서 정량화하고 스캔된 총 해마이행부에 대해 정규화하였다.
도 11b에 나타난 바와 같이, CVN AD 마우스의 항-SEMA4D 항체 처리는 플렉신-B2(우측 그래프) 염색 강도 수준을 WT 대조군 마우스에서 정량화된 것으로 회복시켰으나, 동일 연령의 CVN AD 대조군 마우스 대비 플렉신-B1에서의 유의미한 변화가 없었다(좌측 그래프). 이러한 결과들은 항체 매개 SEMA4D 저해가 선택적으로 플렉신-B2의 탈안정화를 야기하고/거나 플렉신-B2 발현을 선택적으로 촉진하는 SEMA4D-주도의 피드-포워드 기전을 방해한다는 것을 제시한다.
실시예 5: YAC128 헌팅턴병 마우스 모델에서 플렉신-B2 수용체의 발현 패턴의 특성규명
YAC128 마우스는 전장의 돌연변이 인간 헌팅틴 유전자(mHTT)를 발현하며 HD의 많은 징후 및 증상을 정확하게 재현한다(또한 실시예 2 참조). YAC128 헌팅턴 질환 마우스에서의 활성화된 성상세포는 동일 연령의 야생형 마우스와 비교하여 향상된 플렉신-B2 발현을 나타낸다. 12월령에서, YAC128 마우스 및 야생형 대조군 마우스를 희생시키고 형광성 공동-면역조직화학을 위해 처리하였다(도 12). 절편을 플렉신-B2(플렉신-B2, 좌측으로부터 세 번째 패널), 성상세포 마커 GFAP(좌측으로부터 두 번째 패널) 및 세포핵을 시각화하는 DAPI에 대해 공동-염색하였다. 합성 영상이 가장 좌측 패널에 나타나 있다. 슬라이드를 올림푸스 Ix50 현미경이 결합된 EXi-Aqua-14 bit 카메라를 이용하여 60X 배율로 영상화하였다.
도 12에 나타난 바와 같이, YAC128 및 야생형 마우스의 뇌 내의 플렉신-B2 및 GFAP-양성 성상세포의 공동-면역조직화학적 분석은, 증가된 GFAP 마커 염색에 의해 입증된 바와 같이, 성상세포 활성화가 공동-등록된 SEMA4D 수용체 발현과 한번 더 양성적으로 상관관계가 있음을 입증한다. 플렉신-B2(이의 가장 잘 규명된 리간드는 SEMA4C임)는 또한 SEMA4D에 대해 중간 친화성을 갖는다(Azzarelli R, et al. An antagonistic interaction between PlexinB2 및 Rnd3 controls RhoA activity and cortical neuron migration. Nature Commun. 2014; DOI:10.1038/ncomms4405)
실시예 6: SEMA4D 신호전달이 성상세포 기능을 조절할 수 있는 기전의 조사
AD 및 HD 신경퇴행성 질환 모두의 환경에서 향상된 SEMA4D 수용체 발현 및 성상세포 활성화 간의 상관관계는 SEMA4D 신호전달이 성상세포 기능 및/또는 기능장애에서 역할을 한다는 것을 제시한다. 이론에 의해 구속되기를 바라는 것은 아니지만, 이 실시예는 SEMA4D 신호전달이 급성 또는 만성 자극으로부터인지 여부에 관계없이 CNS 손상에 대한 반응 동안 성상세포 기능의 조절에 관여할 수 있다는 증거를 제시한다. 상기 데이터에 의해 뒷받침되는 개요 모델이 도 13에 묘사되어 있으며, 이는 SEMA4D 신호전달이 성상세포 기능을 잠재적으로 조절할 수 있는 세 가지 기전을 보여준다.
성상세포의 역할 및 OPC 지원. 플렉신+ 성상세포 돌기는 SEMA4D+ NKX2.2+ 희소돌기아교세포 전구 세포(OPC) 사이에서 맞물려 있으며 영양적 지원을 제공한다. CNS 질환에서, 활성화된 성상세포는 플렉신 발현을 상향조절하고 SEMA4D 신호전달을 통해 돌기를 수축시킨다. 국소적으로, 이러한 성상세포:OPC 근접의 손실은 감소된 영양적 지원 및 손상 영역을 향한 증가된 주화성-주도의 OPC 이동을 야기할 수 있는 반면, 병변 부위에서의 성상세포 지원의 부족은 OPC 분화 및 재수초화를 방해할 수 있다.
이러한 가설을 시험하기 위해, 야생형 대조군 랫트를 희생시키고 척수를 형광 공동-면역조직화학을 위해 처리하였다(도 14). 절편을 SEMA4D(좌측으로부터 두 번째 패널), 성상세포 마커 GFAP(좌측으로부터 세 번째 패널) 및 세포 핵을 시각화하는 DAPI(우측 패널)에 대해 공동-염색하였다. 합성 영상이 가장 좌측 패널에 나타나 있고, 점선 박스는 하기 1.67X 확대된 삽입물을 묘사한다. 슬라이드를 올림푸스 Ix50 현미경에 결합된 EXi-Aqua-14 bit 카메라를 이용하여 60X 배율로 영상화하였다.
도 14에 나타난 바와 같이, SEMA4D-발현 OPC는 GFAP+ 성상세포 돌기와 매우 근접하여 위치한다. 성상세포가 OPC 생존 및 기능의 촉진에서 수행하는 역할을 고려할 때, SEMA4D-발현 OPC 및 SEMA4D 수용체-발현 성상세포의 병치는 플렉신-B 수용체 및 SEMA4D 신호전달과 연관된 성상세포의 질환-관련된 활성화가 OPC 기능에 영향을 미칠 수 있음을 제시한다.
뉴런 지원에서의 성상세포의 역할. CNS 질환에서, 성상세포 활성화는 플렉신 발현의 상향조절, 증가된 SEMA4D 신호전달 및 돌기 수축을 야기하고, 이는 뉴런의 축색 돌기 안내의 손실, 감소된 영양적 지원, 및/또는 하향조절된 글루타메이트 흡수/방출을 초래한다. 결국, 질환 자극의 중증도에 따라, 시냅스 손실 및 이후의 흥분독성 뉴런 사멸이 일어날 수 있다.
CVN AD 마우스에서 SEMA4D 신호전달을 차단하는 것이 AD 병리학에서 조기에 영향을 받은 영역에서 시냅스 마커 발현에 영향을 미칠지 여부를 결정하기 위해, 26주령 CVN 및 야생형 대조군 마우스에게 13주 동안 30 mg/kg 항-SEMA4D 단클론성 항체(67-2) 또는 대조군 IgG(2B8)를 정맥내로 매주 주사하였다. 41주령에, 마우스를 희생시키고 MAb-처리된 마우스로부터의 뇌 조직 절편을 항-소마토스타틴 항체, 항-신경펩타이드-Y(NPY), 항-NPY 수용체 1(NPY1R), 또는 항-NPY 수용체 2(NPY2R)로 염색하여 조기 AD에서 변성하는 저해성 뉴런의 특정한 하위집단을 검출하였다. 소마토스타틴-양성 신호의 백분율을 해마이행부 내에서 정량화하고, NPY-, NPY1R-, 또는 NPY2R-양성 신호를 모든 동물에 대해 치아 이랑 내에서 정량화하고, 각각 스캔된 총 해마이행부 또는 치아 이랑 면적에 대해 정규화하였다. 상기 결과가 도 15 A-D에 나타나 있다.
도 15A-15D는 CVN AD 마우스의 항-SEMA4D 항체 처리가 소마토스타틴(패널 A), NPY(패널 B), 및 NPY2R(패널 D) 염색 강도 수준을 야생형 마우스의 특징적인 수준까지 회복시킨다는 것을 보여준다. 흥미롭게도, NPY1R의 작용제들은 스트레스 및 불안을 감소시키는 것으로 보고되는 한편, NPY2R에 특이적인 길항제들은 스트레스 및 불안을 감소시킨다(Markus Heilig. The NPY system in stress, anxiety and depression. Neuropeptides 38 (2004) 213-224). 상기 도 2에 나타나 바와 같이, 항-SEMA4D로 처리된 CVN 마우스는 정규화된(더 낮은) NPY2R 수준과 상관관련된 발견인, 오픈 필드 시험에서 감소된 불안의 중증도를 나타낸 반면, NPY1R 수준은 항-SEMA4D MAb 처리에 의해 변화하지 않았고 야생형 마우스보다 더 높게 유지되었다. 따라서, NPY 수용체 수준에서의 이러한 변화는 생체내에서의 신경전달의 조절에서의 SEMA4D의 역할을 추가로 뒷받침하는 발견인, 항-SEMA4D 처리된 CVN 마우스에서 관찰된 감소된 불안 행동과 일치한다. CVN AD 모델에서 관찰된 저해성 NPY 신경전달물질의 하향조절이 또한 알츠하이머병을 갖는 환자의 대뇌 피질에서 보고되었다는 것은 주목할 만하다(Beal, et al., Ann. Neurol. 20, 282-288 (1986).
혈뇌 장벽 온전성을 유지하는 데 있어서 성상세포의 역할. 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이, 대뇌 미세혈관 또는 연질막에 근접한 성상세포 돌기는 높은 밀도의 수분 채널인 아쿠아포린 4(Aqp4)를 특징으로 한다. 시냅스 영역을 마주보는 성상세포 돌기는 글루타메이트 수송체가 풍부하며, 여기서 Aqp4의 밀도는 비교적 낮다. CNS 질환-유도된 성상세포 활성화는 플렉신을 통해 SEMA4D 신호전달을 증가시키며, 이는 아쿠아포린-4의 재분포에 의해 증명된 바와 같이 성상세포 발 돌기의 수축을 야기한다. 이것은 BBB의 이상조절 및 투과를 야기함으로써, 내피 염증 및 이후의 CNS 내로의 백혈구 유입을 촉진한다. AD의 환경에서, Aqp4 염색 강도는 유의미한 아밀로이드 플라크 양을 갖는 영역에서 유의미하게 감소한다.
동일 연령의 야생형 마우스과 비교하여 CVN AD 마우스에서의 아쿠아포린-4 발현 패턴을 측정하기 위해, CVN 및 야생형 대조군 마우스를 41주령에 희생시키고 형광 공동-면역조직화학을 위해 처리하였다. 상기 결과가 도 16에 나타나 있으며, 상부 패널에 야생형 마우스가, 하부 패널에 CVN 마우스가 나타나 있다. 절편을 아쿠아포린-4(좌측으로부터 두 번째 패널), 성상세포 마커 GFAP(좌측으로부터 세 번째 패널) 및 세포핵을 시각화하는 DAPI(우측 패널)로 공동-염색하였다. 합성 영상이 가장 좌측 패널에 나타나 있다. 슬라이드를 올림푸스 Ix50 현미경에 결합된 EXi-Aqua-14 bit 카메라를 이용하여 60X 배율로 영상화하였다.
도 16에 나타난 바와 같이, 동일 연령의 CVN 마우스에서의 Aqp4 염색은 확산 패턴을 향한 유의미한 이동(shift)을 밝혀내었다. 이것은 야생형 마우스의 뇌 내에서의 Aqp4 및 GFAP-양성 성상세포의 공동-면역조직화학적 분석과 대조적이며, 이는 미소혈관계에 근접한 면적에 제한된 해마이행부에서의 Aqp4 염색 패턴을 입증한다. Aqp4 분포에서의 이러한 변화, 또는 분극성에서의 손실은, GFAP 염색에서 증가된 강도에 의해 증명된 바와 같이, 높은 성상세포 활성화와 상관관계가 있다. 활성화된 성상세포에서의 플렉신-B1 염색에서의 강한 공동-등록(도 11) 및 세포 돌기 수축에서의 SEMA4D/플렉신-B1 신호전달의 역할을 고려할 때, 이들 데이터는 SEMA4D 신호전달이 질환 동안 BBB 계면에서 성상세포 분극성의 변화에서 역할을 할 수 있다는 것을 제시한다.
BBB에 대한 SEMA4D의 영향을 분석하기 위해, 동적 시험관내 혈뇌 장벽(DIV-BBB) 모델을 이용하였다. 요약하면, 상기 모델은 모세관 2 내지 4-μm 직경 공극을 함유하는 공동(hollow) 프로필렌 섬유로 이루어진다. 상기 섬유를 상기 섬유를 통해 매질 및 실험 화합물의 지속적인 유동 및 내피 유동 수용체의 정상적인 자극을 용이하게 하는 박동형 펌프에 연결하였다. 인간 뇌 내피 세포를 루미날 내실(luminal compartment) 내로 접종하고 섬유의 내부 벽에 부착하여 코팅시킨 반면, 인간 성상세포는 비루미날 내실 내로 시딩하여 섬유의 표면 외부를 세척하였다. 내피 세포 및 성상세포는 막을 통과하여 상호작용하여 내피 세포 간에 견고한 접합을 갖는 장벽의 형성을 유도한다. 이 장벽의 온전성은 내피세포 단층의 전기 저항성(trans-endothelial electrical resistance(TEER))의 측정에 의해 지속적으로 관찰될 수 있다. 인간 뇌 내피 세포를 루미날 내실에 접종하고 폴리프로필렌 섬유에 부착하게 하고, 인간 성상세포를 섬유의 비루미날 표면 상에 개별적으로 시딩하였다. 최대 TEER(시험관내에서 약 14일)에, 0.5, 5, 및 50μg/ml 재조합 SEMA4D를 12시간 간격으로 연속적으로 부가하였다. 최초 SEMA4D 노출 후 36시간에, 250 μg/ml 대조군 IgG(MAb 2955; 1 DIV-BBB 단위) 또는 항-SEMA4D(VX15/2503; 2 DIV-BBB 단위)를 부가하고 TEER을 추가 132시간 동안 측정하였다. 상기 결과가 도 17에 나타나 있다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다. 나타낸 데이터는 3개의 개별 실험을 나타내며, 각각은 DIV-BBB 온전성에 대한 SEMA4D 및 항체의 비슷한 효과를 입증한다.
도 17에 나타난 바와 같이, BBB의 파괴는 항-SEMA4D 항체(VX15/2503)의 부가에 의해 24시간 이내에 역전되었다. 대조군 재조합 단백질의 도입은 TEER의 감소를 야기하지 않았다(데이터는 나타나 있지 않음). 더욱이, 대조군 IgG 항체(MAb 2955)의 도입은 SEMA4D-유도된 BBB 타협에 영향을 미치지 않았다.
이들 데이터는 CNS 질환-유도된 성상세포 활성화가 플렉신-B1 및/또는 플렉신-B2 상향조절을 통해 SEMA4D 신호전달을 증가시키며, 이는 아쿠아포린-4의 재분포에 의해 증명된 바와 같이 성상세포 발 돌기의 수축을 야기한다는 것을 제시한다. 이는 BBB의 이상조절 및 투과를 야기함으로써, 내피 염증 및 이후의 CNS 내로의 백혈구 유입을 촉진한다.
성상세포 활성화를 촉진하는 데 있어서 SEMA4D 신호전달의 역할. SEMA4D 수용체 발현 및 성상세포 활성화 마커 GFAP의 연관성을 고려할 때, SEMA4D 신호전달은 성상세포 활성화를 강화함으로써, 질환 상태 동안 "피드-포워드" 기전을 제공할 가능성이 있다. 성상세포 활성화에 대한 SEMA4D의 효과를 조사하기 위해, 랫트 성상세포의 1차 배양물을 생성하고, SEMA4D를 단독으로 또는 생체내에서 플렉신-B1 발현을 유도하는 것으로 알려진, 널리 공지된 간독성 및 간암유발제인 티오아세타미드(TAA) 전처리와 조합된 SEMA4D로 처리하였다(Lim, J. S., et al., (2006). Mol. Cell. Tox., 2(2), 126-133). 랫트 일차 성상세포를 TAA로 4시간 동안 전처리한 후 가용성 SEMA4D로 24시간 동안 처리하였다. 그리고 나서, 세포를 고정시키고 GFAP에 대해 염색하고 20x 배율로 스캔하였다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다. "*"=p<0.05 본페로니 다중 비교 시험을 이용한 1원 ANOVA에 의함.
도 18a에 나타난 바와 같이, TAA로 전처리된 세포에 SEMA4D를 부가시 성상세포에 대한 활성화 마커인 GFAP에서의 유의미한 향상이 관찰되었고, 이는 SEMA4D 신호전달이 성상세포 활성화를 향상시킨다는 것을 제시한다.
시험관내 연구의 두 번째 세트에서, 일차 랫트 성상세포를 배양하고 CNS에서 소교세포에 의해 생산되는 공지된 활성화 인자인 프로스타글란딘 D2로 또는 프로스타글란딘 D2 없이 처리한 후, 재조합 SEMA4D 단백질에 8시간 또는 24시간 노출시켰다. 세포를 고정시키고, 팔로이딘(F-액틴) 및 Dnase(G-액틴) 조직화학을 위해 처리하고, F-액틴/G-액틴 면적 비율을 각 처리 조건에 대해 계산하였다. 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다. "**"=p<0.01 본페로니 다중 비교 시험을 이용한 2-원 ANOVA에 의함.
도 18b에 나타난 바와 같이, 재조합 SEMA4D에 노출된 PGD2-활성화된 성상세포는 액틴 세포 골격에서 구형에서 섬유모양으로의 전이를 겪으며, 이는 SEMA4D/플렉신 매개 신호전달 및 고조된 성상세포 활성화 상태를 가리킨다.
본원에 제시된 개시내용의 많은 변형 및 다른 구현예가 전술한 설명 및 연관된 도면에서 제시된 교시의 이점을 갖는 이들 개시내용이 속하는 기술분야의 숙련가에게 떠오를 것이다. 그러므로, 상기 개시내용은 개시된 특정한 구현예에 제한되는 것이 아니며, 변형 및 다른 구현예는 첨부된 청구항 및 본원에 개시된 구현예의 목록의 범위 내에 포함되고자 한다는 것이 이해될 것이다. 특정한 용어가 본원에서 사용됨에도 불구하고, 이들은 단지 포괄적이고 설명하는 개념으로 사용되며, 제한을 위한 것이 아니다.
SEQUENCE LISTING <110> Smith, Ernest S. Zauderer, Maurice Bowers, William J. Jonason, Alan <120> USE OF SEMAPHORIN-4D BINDING MOLECULES FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISORDERS <130> 58008-137466 <140> To be assigned <141> Herewith <150> US 62/012805 <151> 2014-06-16 <150> US 61/979384 <151> 2014-04-14 <150> US 61/893814 <151> 2013-10-21 <160> 40 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 862 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Arg Met Cys Thr Pro Ile Arg Gly Leu Leu Met Ala Leu Ala Val 1 5 10 15 Met Phe Gly Thr Ala Met Ala Phe Ala Pro Ile Pro Arg Ile Thr Trp 20 25 30 Glu His Arg Glu Val His Leu Val Gln Phe His Glu Pro Asp Ile Tyr 35 40 45 Asn Tyr Ser Ala Leu Leu Leu Ser Glu Asp Lys Asp Thr Leu Tyr Ile 50 55 60 Gly Ala Arg Glu Ala Val Phe Ala Val Asn Ala Leu Asn Ile Ser Glu 65 70 75 80 Lys Gln His Glu Val Tyr Trp Lys Val Ser Glu Asp Lys Lys Ala Lys 85 90 95 Cys Ala Glu Lys Gly Lys Ser Lys Gln Thr Glu Cys Leu Asn Tyr Ile 100 105 110 Arg Val Leu Gln Pro Leu Ser Ala Thr Ser Leu Tyr Val Cys Gly Thr 115 120 125 Asn Ala Phe Gln Pro Ala Cys Asp His Leu Asn Leu Thr 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Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Tyr Gly Arg His Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VH 67 <400> 10 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Asn Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Thr Thr Gly Gly Ala Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Glu Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Tyr Tyr Tyr Gly Arg His Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL CDR1 <400> 11 aaggccagcc aaagcgtgga ttatgatggc gatagctata tgaac 45 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL CDR2 <400> 12 gctgcatcca atctggaaag c 21 <210> 13 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL CDR3 <400> 13 cagcaaagca atgaggatcc ctacacc 27 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL CDR1 <400> 14 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn 1 5 10 15 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL CDR2 <400> 15 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL CDR3 <400> 16 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 1 5 <210> 17 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL 2503 <400> 17 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp 20 25 30 Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 18 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL 67 <400> 18 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp 20 25 30 Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 19 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VH 2503 <400> 19 caggtgcagc tggtgcagag cggcgctgag gtgaagaagc ctggcagcag cgtgaaggtc 60 tcctgcaagg ctagcggcta cagcttcagc gactactaca tgcactgggt gagacaggcc 120 cctggccaag gcctggagtg gatgggccag attaatccta ccactggcgg cgctagctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccaccatt accgtggaca aaagcaccag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt attactgtgc cagatattac 300 tacggcagac acttcgatgt ctggggccaa ggcaccacgg tcaccgtctc ttca 354 <210> 20 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VH 67 <400> 20 caggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgcaagg cttctggtta ctcattcagt gactactaca tgcactgggt gaagcaaagt 120 cctgaaaata gtcttgagtg gattggacag attaatccta ccactggggg tgctagctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacatta actgtagata aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca agagcctgac atctgaagag tctgcagtct attactgtac aagatattac 300 tacggtagac acttcgatgt ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtttc ctca 354 <210> 21 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL 2503 <400> 21 gacatcgtga tgacccagag cccagacagc ctggctgtga gcctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca aggccagcca aagcgtggat tatgatggcg atagctatat gaactggtac 120 cagcagaaac caggccagcc tcctaagctg ctgatttacg ctgcatccaa tctggaaagc 180 ggcgtgcctg acagattcag cggcagcggc agcggcacag atttcactct gaccatcagc 240 agcctgcagg ctgaagatgt ggcagtgtat tactgtcagc aaagcaatga ggatccctac 300 accttcggcc aagggaccaa gctcgagatc aaa 333 <210> 22 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL 67 <400> 22 gacattgtga tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60 atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttatat gaactggtac 120 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 180 gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtac 300 acgttcggag gggggaccaa gctcgagatc aaa 333 <210> 23 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VH 76 <400> 23 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Thr Gly Tyr Ser Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Tyr Gly Trp Thr Met Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VH 76 CDR1 <400> 24 Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 25 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VH 76 CDR2 <400> 25 Tyr Ile Asn Pro Ser Thr Gly Tyr Ser Asp Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VH 76 CDR3 <400> 26 Asp Pro Tyr Gly Trp Thr Met Asp Ser 1 5 <210> 27 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL 76 <400> 27 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL 76 CDR1 <400> 28 His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp Leu Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL 76 CDR2 <400> 29 Lys Ala Ser Asn Leu His Thr 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide anti-CD100 VL 76 CDR3 <400> 30 Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 31 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VH 76 <400> 31 caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaaaac ctggggcctc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtactgga tgcactgggt aaaacagagg 120 cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gcactggtta ttctgattac 180 aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagacccc 300 tacggctgga ctatggactc ctggggccaa gggactctgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 32 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VH 76 CDR1 <400> 32 ggctacacct ttactaggta ctggatgcac 30 <210> 33 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VH 76 CDR2 <400> 33 tacattaatc ctagcactgg ttattctgat tacaatcaga agttcaagga c 51 <210> 34 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VH 76 CDR3 <400> 34 gacccctacg gctggactat ggactcc 27 <210> 35 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL 76 <400> 35 gacatccaga tgacccagtc tccatccagt ctgtctgcat cccttggaga cacaattacc 60 atcacttgcc atgccagtca gaacattaat gtttggttaa gctggtacca gcagaaacca 120 ggaaatattc ctaaactatt gatctataag gcttccaact tgcacacagg cgtcccatca 180 aggtttagtg gcagtggatc tggaacaggt ttcacattaa ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagacattg ccacttacta ctgtcaacag ggtcaaagtt atccgtacac gttcggaggg 300 gggaccaagc tcgagatcaa a 321 <210> 36 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL 76 CDR1 <400> 36 catgccagtc agaacattaa tgtttggtta agc 33 <210> 37 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL 76 CDR2 <400> 37 aaggcttcca acttgcacac a 21 <210> 38 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Polynucleotide anti-CD100 VL 76 CDR3 <400> 38 caacagggtc aaagttatcc gtacacg 27 <210> 39 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 2282 VL domain <400> 39 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp His Thr Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 40 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 2282 VH domain <400> 40 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Val Asn Pro Tyr His Gly Tyr Ala Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Glu Asn Ser Tyr Asp Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims (11)

  1. 세마포린-4D(SEMA4D)에 특이적으로 결합하고 SEMA4D와 그의 수용체 또는 그의 수용체의 일부와의 상호작용을 저해하는 유효량의 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 신경퇴행성 장애를 가진 대상에서 성상교세포증(astrogliosis)을 예방 또는 완화시키기 위한 약제학적 조성물로서, 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열번호 6, 7, 및 8을 포함하는 가변 중쇄(VH) CDR 1-3을 포함하는 가변 중쇄(VH), 및 각각 서열번호 14, 15, 및 16을 포함하는 가변 경쇄(VL) CDR 1-3을 포함하는 가변 경쇄(VL)를 포함하는 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 수용체는 플렉신-B1(Plexin-B1) 및 플렉신-B2(Plexin-B2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEMA4D 매개 플렉신-B1 신호 전달을 저해하는 것인 약제학적 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 성상세포 매개 시냅스 활성을 조절함으로써 신경 세포 사멸을 예방하는 것인 약제학적 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 VX15/2503 또는 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 참조 단클론성 항체와 동일한 SEMA4D 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 약제학적 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 VX15/2503 또는 67로 이루어진 군으로부터 선택되는 참조 단클론성 항체가 SEMA4D에 특이적으로 결합하는 것을 경쟁적으로 저해하는 것인 약제학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, VH 및 VL은 각각 서열번호 9 및 서열번호 17 또는 서열번호 10 및 서열번호 18을 포함하는 것인 약제학적 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 신경퇴행성 장애는 알츠하이머병 또는 초기 알츠하이머병인 약제학적 조성물.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 대상이 인간인 약제학적 조성물.
  10. 삭제
  11. 삭제
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2011011718A (es) 2009-05-08 2012-01-27 Vaccinex Inc Anticuerpos anti-cd100 y metodos para su uso.
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US9708601B2 (en) 2012-04-26 2017-07-18 Vaccinex, Inc. Fusion proteins to facilitate selection of cells infected with specific immunoglobulin gene recombinant vaccinia virus
US10494440B2 (en) 2012-05-11 2019-12-03 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4D binding molecules to promote neurogenesis following stroke
WO2014116982A2 (en) * 2013-01-25 2014-07-31 Brandeis University Methods of modulating gabaergic inhibitory synapse formation and function
DK3013350T3 (da) 2013-06-25 2020-04-14 Vaccinex Inc Anvendelse af semaphorin-4D-hæmmende molekyler i kombination med en immunmodulerende terapi for at hæmme tumorvækst og metastaser
NZ630881A (en) 2013-10-10 2016-03-31 Vaccinex Inc Use of semaphorin-4d binding molecules for treatment of atherosclerosis
NZ630892A (en) 2013-10-21 2016-03-31 Vaccinex Inc Use of semaphorin-4d binding molecules for treating neurodegenerative disorders
EP4059516A1 (en) 2016-04-22 2022-09-21 Vaccinex, Inc. Integral membrane protein display on poxvirus extracellular enveloped virions
CN109563143A (zh) 2016-08-02 2019-04-02 瓦西尼斯公司 在牛痘病毒/真核细胞中产生多核苷酸文库的改良方法
JP7084689B2 (ja) * 2016-12-08 2022-06-15 公益財団法人東京都医学総合研究所 脳組織の異常を伴う非ヒト動物の作製方法およびその利用
US20190383836A1 (en) * 2017-02-22 2019-12-19 Vaccinex, Inc. Early detection of glial cell activation in neurodegenerative or neuroinflammatory diseases
DK3600419T5 (en) * 2017-03-20 2023-11-13 Vaccinex Inc Treatment of cancer with a semaphorin-4d antibody in combination with an epigenetic modulating agent
AU2018261947A1 (en) * 2017-05-05 2019-11-07 Vaccinex, Inc. Human anti-semaphorin 4D antibody
CN109410218B (zh) * 2018-10-08 2020-08-11 百度在线网络技术（北京）有限公司 用于生成车辆损伤信息的方法和装置
EP3693380A1 (en) * 2019-02-11 2020-08-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Dual inhibition of plexin-b1 and plexin-b2
CA3181833A1 (en) * 2020-06-25 2021-12-30 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4d binding molecules for the treatment of rett syndrome
JPWO2022137964A1 (ko) * 2020-12-23 2022-06-30
WO2023048726A1 (en) * 2021-09-27 2023-03-30 Vaccinex, Inc. Predictive outcome profiling for use of an anti-semaphorin-4d binding molecule to treat neurodegenerative disorders
US20230331863A1 (en) 2022-02-13 2023-10-19 Vaccinex, Inc. Combination therapy with semaphorin-4d blockade and htt-lowering agent for treatment of huntington's disease

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013055922A1 (en) * 2011-10-11 2013-04-18 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4d binding molecules for modulation of blood brain barrier permeability

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ201918A (en) 1981-09-18 1987-04-30 Genentech Inc N-terminal methionyl analogues of bovine growth hormone
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4873192A (en) 1987-02-17 1989-10-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Process for site specific mutagenesis without phenotypic selection
US5892019A (en) 1987-07-15 1999-04-06 The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services Production of a single-gene-encoded immunoglobulin
US5070192A (en) 1988-03-23 1991-12-03 The Johns Hopkins University Cloned human topoisomerase i: cdna expression, and use for autoantibody detection
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1991010741A1 (en) 1990-01-12 1991-07-25 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6497872B1 (en) 1991-07-08 2002-12-24 Neurospheres Holdings Ltd. Neural transplantation using proliferated multipotent neural stem cells and their progeny
FR2686087A1 (fr) 1992-01-13 1993-07-16 Inst Nat Sante Rech Med Nouvel antigene lymphocytaire, anticorps correspondant et leurs applications.
US5639856A (en) 1993-09-13 1997-06-17 The Regents Of The University Of California Semaphorin gene family
US5595756A (en) 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US6576754B2 (en) 1995-11-09 2003-06-10 Dana-Farber Cancer Institute CD100 antigen and uses therefor
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
DE69829891T2 (de) 1997-04-07 2005-10-06 Genentech, Inc., South San Francisco Anti-VEGF Antikörper
JP2001516226A (ja) 1997-04-11 2001-09-25 デンドレオン コーポレイション 腫瘍関連性の抗原に対する免疫応答を誘導するための組成物および方法
EP0892047A3 (de) 1997-07-09 2000-03-08 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Humanes und murines Semaphorin L
US5968829A (en) 1997-09-05 1999-10-19 Cytotherapeutics, Inc. Human CNS neural stem cells
US6638501B1 (en) 1997-09-29 2003-10-28 Neurospheres Holdings Ltd. Use of multipotent neural stem cell progeny to augment non-neural tissues
US5958767A (en) 1998-08-14 1999-09-28 The Children's Medical Center Corp. Engraftable human neural stem cells
EP1137769B1 (en) 1998-11-10 2008-09-03 University Of Rochester Methods for the generation of dna libraries
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6849425B1 (en) 1999-10-14 2005-02-01 Ixsys, Inc. Methods of optimizing antibody variable region binding affinity
JP3787473B2 (ja) 1999-11-30 2006-06-21 独立行政法人科学技術振興機構 セマフォリン受容体
WO2001046384A2 (en) 1999-12-23 2001-06-28 Cornell Research Foundation, Inc. A method for isolating and purifying multipotential neural progenitor cells and multipotential neural progenitor cells
US6635742B1 (en) 2000-01-25 2003-10-21 Nuvelo, Inc. Antibodies specific for semaphorin-like polypeptides
WO2002102854A2 (en) 2001-06-20 2002-12-27 Morphosys Ag Antibodies that block receptor protein tyrosine kinase activation, methods of screening for and uses thereof
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
EP1365018A1 (en) 2002-05-23 2003-11-26 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) CD100 semaphorin in myelination
DE60334453D1 (de) 2002-05-30 2010-11-18 Macrogenics Inc Cd16a bindungsproteine und verwendung zur behandlung von immunkrankheiten
EP1442749A1 (en) 2003-01-31 2004-08-04 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Use of anti-CD100 antibodies for the treatment and the diagnosis of inflammatory disorder affecting the central nervous system
ME00425B (me) 2003-05-30 2011-10-10 Genentech Inc Liječenje sa anti-vegf antitijelima
JP2008507252A (ja) 2003-12-11 2008-03-13 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｃ−ｍｅｔ二量体化及び活性化を阻害するための方法と組成物
AU2005267720B2 (en) 2004-08-05 2012-02-23 Genentech, Inc. Humanized anti-cmet antagonists
US20060147449A1 (en) 2004-11-15 2006-07-06 Brass Lawrence F Method of using CD100 (or Sema4D) to mediate platelet activation and inflammatory responses
CA2603780A1 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Sema4d in cancer diagnosis, detection and treatment
JP2007308465A (ja) 2006-05-15 2007-11-29 Boehringer Ingelheim Internatl Gmbh 炎症性疾患、自己免疫疾患又は骨吸収異常の治療方法
DE602008004296D1 (de) 2007-02-14 2011-02-17 Vaccinex Inc Humanisierte anti-cd100-antikörper
AR070134A1 (es) 2008-01-10 2010-03-17 Genentech Inc Agonistas de plexind1 que comprende un fragmento de semaforina 3e(sema3e) y su uso
MX2011011718A (es) 2009-05-08 2012-01-27 Vaccinex Inc Anticuerpos anti-cd100 y metodos para su uso.
ES2679043T3 (es) 2009-05-15 2018-08-21 Irx Therapeutics, Inc. Inmunoterapia de vacuna
US8834883B2 (en) 2010-06-14 2014-09-16 Vaccinex, Inc. Anti-VEGF antibodies and uses thereof
CN103945868B (zh) 2011-05-13 2016-10-26 国立大学法人东京医科齿科大学 骨生成促进剂
US8790652B2 (en) 2011-12-06 2014-07-29 Vaccinex, Inc. Use of the combination of semaphorin-4D inhibitory molecules and VEGF inhibitory molecules to inhibit angiogenesis
US9090709B2 (en) 2012-03-28 2015-07-28 Vaccinex, Inc. Anti-SEMA4D antibodies and epitopes
US9708601B2 (en) 2012-04-26 2017-07-18 Vaccinex, Inc. Fusion proteins to facilitate selection of cells infected with specific immunoglobulin gene recombinant vaccinia virus
US10494440B2 (en) * 2012-05-11 2019-12-03 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4D binding molecules to promote neurogenesis following stroke
DK3013350T3 (da) 2013-06-25 2020-04-14 Vaccinex Inc Anvendelse af semaphorin-4D-hæmmende molekyler i kombination med en immunmodulerende terapi for at hæmme tumorvækst og metastaser
NZ630881A (en) 2013-10-10 2016-03-31 Vaccinex Inc Use of semaphorin-4d binding molecules for treatment of atherosclerosis
NZ630892A (en) 2013-10-21 2016-03-31 Vaccinex Inc Use of semaphorin-4d binding molecules for treating neurodegenerative disorders
EP4059516A1 (en) 2016-04-22 2022-09-21 Vaccinex, Inc. Integral membrane protein display on poxvirus extracellular enveloped virions
CN109563143A (zh) 2016-08-02 2019-04-02 瓦西尼斯公司 在牛痘病毒/真核细胞中产生多核苷酸文库的改良方法
US20190383836A1 (en) 2017-02-22 2019-12-19 Vaccinex, Inc. Early detection of glial cell activation in neurodegenerative or neuroinflammatory diseases

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013055922A1 (en) * 2011-10-11 2013-04-18 Vaccinex, Inc. Use of semaphorin-4d binding molecules for modulation of blood brain barrier permeability

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Brain Research, 제1142권, 223-236면(2007.1.27.)*

Also Published As

Publication number Publication date
IL275720A (en) 2020-08-31
EA201690813A1 (ru) 2016-08-31
US9598495B2 (en) 2017-03-21
CN106029093B (zh) 2023-03-28
US10800853B2 (en) 2020-10-13
CN106029093A (zh) 2016-10-12
AU2019257379A1 (en) 2019-11-14
US20150353641A1 (en) 2015-12-10
CA3193983A1 (en) 2015-04-30
EP3639853A1 (en) 2020-04-22
CN116966293A (zh) 2023-10-31
ES2773961T3 (es) 2020-07-15
AU2021202095A1 (en) 2021-05-06
KR20220110853A (ko) 2022-08-09
MX2020009260A (es) 2020-10-01
US10385136B2 (en) 2019-08-20
EP3060252B1 (en) 2019-12-11
BR112016009047A2 (pt) 2017-09-19
ZA201602686B (en) 2020-11-25
US9249227B2 (en) 2016-02-02
KR20160065981A (ko) 2016-06-09
US20170198053A1 (en) 2017-07-13
JP6875363B2 (ja) 2021-05-26
IL245089B (en) 2020-10-29
AU2014340210B2 (en) 2019-08-08
KR20230159633A (ko) 2023-11-21
AU2021202095B9 (en) 2023-11-09
KR102308493B1 (ko) 2021-10-07
DK3060252T3 (da) 2020-03-16
JP2017502920A (ja) 2017-01-26
IL275720B (en) 2022-09-01
KR20210118246A (ko) 2021-09-29
CA2927841A1 (en) 2015-04-30
JP2019059786A (ja) 2019-04-18
EA033072B1 (ru) 2019-08-30
SG10201707786QA (en) 2017-10-30
CA2927841C (en) 2023-05-23
NZ630892A (en) 2016-03-31
SG11201603167YA (en) 2016-05-30
IL295045B1 (en) 2023-12-01
PL3060252T3 (pl) 2020-05-18
WO2015061330A1 (en) 2015-04-30
BR112016009047B1 (pt) 2024-02-06
IL295045A (en) 2022-09-01
JP6461944B2 (ja) 2019-01-30
EP3060252A1 (en) 2016-08-31
AU2019257379B2 (en) 2021-04-01
US20190322757A1 (en) 2019-10-24
US20150110800A1 (en) 2015-04-23
AU2021202095B2 (en) 2023-11-02
PT3060252T (pt) 2020-03-04
IL245089A0 (en) 2016-06-30
AU2014340210A1 (en) 2016-05-05
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IL295045B2 (en) 2024-04-01
MX2016005050A (es) 2016-08-17

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