KR102579836B1

KR102579836B1 - 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 감소시키기 위한 방법 및 제제

Info

Publication number: KR102579836B1
Application number: KR1020197017398A
Authority: KR
Inventors: 크리스토퍼 마이클 헤이니즈; 제이콥 에드워드 루오마; 프레드릭 존 림; 이시드로 안젤로 엘리자르 자라가
Original assignee: 제넨테크, 인크.
Priority date: 2016-12-22
Filing date: 2017-12-21
Publication date: 2023-09-15
Also published as: IL267439B; JP7553241B2; US20220298263A1; AU2017382281B2; TW201827078A; AR110431A1; AU2017382281A1; TWI783958B; MX2019007433A; US20190389974A1; BR112019012686A2; KR20190099212A; IL267439B2; JP2020503316A; WO2018119312A8; EP3558366A1; JP2023012465A; CN110049778A; US11377505B2; IL267439A

Abstract

본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 감소시키기에 유용한 방법 및 제제에 관한 것이다.

Description

동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 감소시키기 위한 방법 및 제제

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2016년 12월 22일자로 출원된 미국 가출원 제62/438,232호(본 명세서에 참고로 그 전문이 포함됨)의 이익을 주장한다.

기술분야

본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 감소시키기에 유용한 방법 및 제제(formulation)에 관한 것이다.

약제학적 또는 다른 용도에 대한 생물학적 분자가 대개 동결건조되고, 이는 이것이 동결되고 진공 하에 배치된 후 액체 조성물로부터 물이 제거되는 공정이다. 일반적으로, 동결건조는 (많은 생물학적 화학 분해가 가수분해성이므로) 물의 제거에 의해 그리고 (화학적 및 물리적 분해 사건이 일어나게 하도록 측쇄 및 분자의 동적 이동이 필요하므로) 시스템의 전체 이동도를 감소시킴으로써 폴리펩타이드 조성물의 안정성을 개선한다. 동결건조된 폴리펩타이드는 후속하여 대개는 이들이 동결건조되고 저장되는 바로 그 동일한 컨테이너 또는 바이알에서 사용 전에 재구성된다. 짧은 재구성 시간은 특히 동결건조된 의학용 폴리펩타이드 조성물(예를 들어, 항체 조성물)의 재구성의 맥락에서 바람직하다.

고농도 및 고용량(예를 들어, 그램 분량)의 동결건조된 약제학적 생성물은 긴 동결건조 사이클 및 대개 긴 재구성 시간을 포함하는 고유한 공정처리 및 취급 도전과제를 부여한다. (예를 들어, 문헌[American Pharmaceutical Review, 13 (2010), pp. 31-32 34-38] 참조.) 생물학적 분자에 대한 재구성 시간을 제어하기 위한 하나의 접근법은 단백질 농도를 감소시켜서, 충전 용적을 증가시키는 것이다. 그러나, 이 접근법은 고용량 제제에 부적합할 수 있고, 여기서 증가하는 충전 용적은 용량마다 다수의 바이알의 사용을 필요로 할 것이다. 이러한 경우에, 대안적인 동결건조 제제 및 방법이 필요하다.

동결건조 제제 내의 tert-뷰틸 알코올(TBA)의 존재는 낮은 분량 또는 저용량(예를 들어, 밀리그램 분량)의 생물학적 분자의 재구성 시간을 개선하는 것으로 나타났다(예를 들어, 미국 특허 출원 공보 US 제2014/0044717호; 문헌[Nail et al., (2002) J Pharma Sci. Vol. 91; Degobert et al., (2016) Drying Technology; Yong et al., (2009) Int J Pharmaceutics, 371:71-81; Teagarden and Baker (2002) Eur J Pharma Sci 15:115-133; Vessot and Andrieu (2012) Drying Technology (2012) 30:377-385] 참조).

그러나, 생물학적 분자의 동결건조된 제제에서의 공용매 시스템 내의 TBA의 사용 및 재구성 시간 및 폴리펩타이드 안정성에 대한 이의 효과는 많은 분량의 단백질(예를 들어, 그램 분량)을 함유하는 또는 높은 단백질 농도를 갖는 폴리펩타이드 제제에서 널리 규명되어 있지 않다.

따라서, 감소된 또는 신속한 재구성 시간을 제공하면서 생물학적 분자의 통합성 및 안정성을 유지시키는 항체 조성물을 포함하는 높은 분량 및 농도(즉, 고농도, 고용량) 폴리펩타이드 조성물에 대한 동결건조된 생물학적 분자의 방법 및 제제에 대한 수요가 존재한다. 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 감소시키기 위한 방법 및 제제를 제공함으로써 이 수요를 충족시키고, 여기서 상기 방법 및 제제는 특히 고농도 및/또는 고용량 제제의 동결건조된 항체 조성물에 대해 동결건조된 폴리펩타이드의 통합성 및 안정성을 유지시킨다.

본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드, 예를 들어 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키기에 유용한 방법 및 제제를 제공한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 0.5용적% 내지 약 20용적%이다. 다른 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위한 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 0.5용적%, 1용적%, 2.5용적%, 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더욱 다른 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위한 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 1용적% 내지 약 20용적%, 약 1용적% 내지 약 10용적%, 약 1용적% 내지 약 5용적%, 약 5용적% 내지 약 20용적% 또는 약 5용적% 내지 약 10용적%이다. 일 실시형태에서, TBA는 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가된다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 항체를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 0.5용적% 내지 약 20용적%이다. 다른 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위한 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 0.5용적%, 1용적%, 2.5용적%, 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더욱 다른 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위한 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 1용적% 내지 약 20용적%, 약 1용적% 내지 약 10용적%, 약 1용적% 내지 약 5용적%, 약 5용적% 내지 약 20용적% 또는 약 5용적% 내지 약 10용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, TBA는 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가된다. 일 실시형태에서, 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 인간 단일클론 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 인간화된 단일클론 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 키메라 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 항체 단편이다. 일 실시형태에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 항체-약물 접합체(예를 들어, 면역접합체)이다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계(여기서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 농도는 약 10㎎/㎖ 내지 약 150㎎/㎖임), tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 농도는 약 10㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 25㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 50㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 100㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 150㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 25㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖, 약 50㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖, 약 25㎎/㎖ 내지 약 125㎎/㎖ 또는 약 50㎎/㎖ 내지 약 125㎎/㎖이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 농도는 약 25㎎/㎖, 약 40㎎/㎖, 약 50㎎/㎖, 약 60㎎/㎖, 약 70㎎/㎖, 약 100㎎/㎖, 약 125㎎/㎖, 약 150㎎/㎖, 약 200㎎/㎖ 또는 약 250㎎/㎖이다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이다. 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 0.5용적% 내지 약 20용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계(여기서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 양은 약 150㎎ 내지 약 11그램임), tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 양은 약 150㎎, 약 250㎎, 약 500㎎, 약 750㎎, 약 1그램, 약 2그램, 약 3그램, 약 4그램, 약 5그램, 약 6그램, 약 7그램, 약 8그램, 약 9그램, 약 10그램 또는 약 11그램이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 양은 약 150㎎ 내지 11그램이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 양은 약 150㎎ 내지 약 1그램, 약 500㎎ 내지 약 1그램, 약 500㎎ 내지 약 5그램, 약 1그램 내지 약 5그램, 약 1그램 내지 약 10그램 또는 약 5그램 내지 약 10그램이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 분량은 11그램 초과이다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이다. 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 0.5용적% 내지 약 20용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하되, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 폴리펩타이드 조성물의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간과 비교하여 약 40% 내지 약 95% 감소된다. 몇몇 실시형태에서, TBA의 존재 하에 동결건조되는 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 폴리펩타이드 조성물의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 50% 내지 약 60%, 약 60% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90% 또는 약 90% 내지 약 95% 감소된다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.

본 발명의 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물은 바이알, 주사기(이중-챔버 주사기 포함) 또는 카트리지에서 동결건조된다. 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물은 유리 바이알에서 동결건조된다. 몇몇 실시형태에서, 바이알은 6㏄ 바이알, 10㏄ 바이알, 15㏄ 바이알, 20㏄ 바이알, 50㏄ 바이알 또는 100㏄ 바이알이다. 몇몇 실시형태에서, 유리 바이알은 6㏄ 바이알, 10㏄ 바이알, 15㏄ 바이알, 20㏄ 바이알, 50㏄ 바이알 또는 100㏄ 바이알이다. 몇몇 실시형태에서, 바이알은 0.1㎖, 0.3㎖, 0.5㎖, 1㎖, 2㎖, 2.5㎖, 5㎖, 10㎖, 20㎖, 25㎖, 50㎖ 또는 100㎖의 용량 또는 충전 용적을 갖는다. 몇몇 실시형태에서, 유리 바이알은 0.1㎖, 0.3㎖, 0.5㎖, 1㎖, 2㎖, 2.5㎖, 5㎖, 10㎖, 20㎖, 25㎖, 50㎖ 또는 100㎖의 용량 또는 충전 용적을 갖는다.

몇몇 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계는 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 것이 진공 하에 수행되는 조건 하에 수행된다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계는 동결건조된 폴리펩타이드 조성물이 진공 하에 있는 조건 하에 수행되고, 추가로 TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 딥 진공(deep vacuum)이다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 부분 진공이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 50Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100mTorr 내지 50Torr이다. 일 실시형태에서, 진공은 100mTorr에 있다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.

몇몇 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계는 진탕기, 예컨대 기계적 진탕기를 사용하여 수행된다. 일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계, 및 진탕기를 사용함으로써 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 바이알 또는 컨테이너는 진탕기에 배치된다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.

몇몇 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계는 동결건조된 폴리펩타이드 조성물이 진공 하에 있는 조건 하에 진탕기를 사용하여 수행된다. 일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계, 및 진탕기를 사용함으로써 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계는 동결건조된 폴리펩타이드 조성물이 진공 하에 있는 조건 하에 수행되고, 추가로 TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 딥 진공이다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 부분 진공이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 50Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100mTorr 내지 50Torr이다. 일 실시형태에서, 진공은 100mTorr에 있다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 방법은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.

본 발명은 동결건조에 적합한 액체 폴리펩타이드 제제를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명은 동결건조에 적합한 액체 폴리펩타이드 제제를 제공하고, 여기서 상기 제제는 폴리펩타이드, 희석제 및 TBA를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 제제 내의 TBA의 양은 약 0.5용적% 내지 20용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 액체 제제 내의 TBA의 양은 0.5용적%, 1용적%, 2.5용적%, 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위한 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 1용적% 내지 약 20용적%, 약 1용적% 내지 약 10용적%, 약 1용적% 내지 약 5용적%, 약 5용적% 내지 약 20용적% 또는 약 5용적% 내지 약 10용적%이다. 일 실시형태에서, TBA는 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가된다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 제제는 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비의 당을 추가로 포함한다.

본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 제공하고, 여기서 동결건조된 폴리펩타이드 조성물은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계에 의해 제조되고, 희석제에 의한 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 제제 내의 TBA의 양은 약 0.5용적% 내지 약 20용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 액체 제제 내의 TBA의 양은 0.5용적%, 1용적%, 2.5용적%, 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하기 위한 액체 폴리펩타이드 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 1용적% 내지 약 20용적%, 약 1용적% 내지 약 10용적%, 약 1용적% 내지 약 5용적%, 약 5용적% 내지 약 20용적% 또는 약 5용적% 내지 약 10용적%이다. 일 실시형태에서, TBA는 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가된다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드 제제에 대한 TBA의 첨가는 폴리펩타이드의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드는 항체이고, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물은 TBA를 액체 조성물에 첨가하는 단계 전에 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계에 의해 제조된다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다. 더욱 다른 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 약 10용적%이다. 일 실시형태에서, TBA는 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 항체를 포함하는 액체 조성물에 첨가된다. 소정의 실시형태에서, 항체는 전장 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 단일클론 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 인간 단일클론 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 인간화된 단일클론 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 키메라 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 항체 단편이다. 일 실시형태에서, 항체는 항원 결합 단편, 예컨대 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; 다이아바디; 선형 항체; 단쇄 항체 분자(예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일 실시형태에서, 항체는 항체-약물 접합체(예를 들어, 면역접합체)이다. 몇몇 실시형태에서, 당은 수크로스 또는 트레할로스이다. 소정의 실시형태에서, 액체 조성물에 대한 TBA의 첨가는 항체의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계(여기서, 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 항체의 농도는 약 10㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖임), tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 항체의 농도는 약 25㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 50㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 100㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 150㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 25㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖, 약 50㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖, 약 25㎎/㎖ 내지 약 125㎎/㎖ 또는 약 50㎎/㎖ 내지 약 125㎎/㎖이다. 몇몇 실시형태에서, 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 항체의 농도는 약 25㎎/㎖, 약 40㎎/㎖, 약 50㎎/㎖, 약 60㎎/㎖, 약 70㎎/㎖, 약 100㎎/㎖, 약 125㎎/㎖, 약 150㎎/㎖, 약 200㎎/㎖ 또는 약 250㎎/㎖이다. 몇몇 실시형태에서, 당은 수크로스 또는 트레할로스이다. 소정의 실시형태에서, 액체 조성물에 대한 TBA의 첨가는 항체의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계(여기서, 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 항체의 양은 약 150㎎ 내지 약 11그램임), tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 항체의 양은 약 150㎎, 약 250㎎, 약 500㎎, 약 750㎎, 약 1그램, 약 2그램, 약 3그램, 약 4그램, 약 5그램, 약 6그램, 약 7그램, 약 8그램, 약 9그램, 약 10그램 또는 약 11그램이다. 몇몇 실시형태에서, 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 항체의 양은 약 150㎎ 내지 약 1그램, 약 500㎎ 내지 약 1그램, 약 500㎎ 내지 약 5그램, 약 1그램 내지 약 5그램, 약 1그램 내지 약 10그램 또는 약 5그램 내지 약 10그램이다. 몇몇 실시형태에서, 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 항체의 분량은 11그램 초과이다. 몇몇 실시형태에서, 당은 수크로스 또는 트레할로스이다. 소정의 실시형태에서, 액체 조성물에 대한 TBA의 첨가는 항체의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다.

일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 동결건조된 항체 조성물을 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체 조성물의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간과 비교하여 약 40% 내지 약 95% 감소된다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다. 몇몇 실시형태에서, TBA의 존재 하에 동결건조되는 동결건조된 항체 조성물을 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체 조성물의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간과 비교하여 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 50% 내지 약 60%, 약 60% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90% 또는 약 90% 내지 약 95% 감소된다. 몇몇 실시형태에서, 당은 수크로스 또는 트레할로스이다. 소정의 실시형태에서, 액체 조성물에 대한 TBA의 첨가는 항체의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다.

본 발명의 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물은 바이알, 주사기(이중-챔버 주사기 포함) 또는 카트리지에서 동결건조된다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물은 유리 바이알에서 동결건조된다. 몇몇 실시형태에서, 바이알은 6㏄ 바이알, 10㏄ 바이알, 15㏄ 바이알, 20㏄ 바이알, 50㏄ 바이알 또는 100㏄ 바이알이다. 몇몇 실시형태에서, 바이알은 0.1㎖, 0.3㎖, 0.5㎖, 1㎖, 2㎖, 2.5㎖, 5㎖, 10㎖, 20㎖, 25㎖, 50㎖ 또는 100㎖의 용량 또는 충전 용적을 갖는다.

몇몇 실시형태에서, 동결건조된 항체 조성물의 재구성은 동결건조된 항체 조성물의 재구성이 진공 하에 수행되는 조건 하에 수행된다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계는 동결건조된 항체 조성물이 진공 하에 있는 조건 하에 수행되고, 추가로 TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 딥 진공이다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 부분 진공이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 50Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100mTorr 내지 50Torr이다. 일 실시형태에서, 진공은 100mTorr에 있다.

몇몇 실시형태에서, 동결건조된 항체 조성물의 재구성은 진탕기, 예컨대 기계적 진탕기를 사용하여 수행된다. 일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 진탕기를 사용함으로써 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 바이알 또는 컨테이너는 진탕기에 배치된다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다.

몇몇 실시형태에서, 동결건조된 항체 조성물의 재구성은 동결건조된 항체 조성물이 진공 하에 있는 조건 하에 진탕기를 사용하여 수행된다. 일 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 진탕기를 사용함으로써 희석제에 의해 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계는 동결건조된 항체 조성물이 진공 하에 있는 조건 하에 수행되고, 추가로 TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 딥 진공이다. 몇몇 실시형태에서, 진공은 부분 진공이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 50Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 진공은 100mTorr 내지 50Torr이다. 일 실시형태에서, 진공은 100mTorr에 있다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다.

본 개시내용의 방법의 단계는 한 사람 또는 집합체에 의해 수행될 수 있거나, 단계는 다수의 사람 또는 다수의 집합체에 의해 수행될 수 있다. 단계는 한 사람 또는 한 집합체의 방향에서 다수의 사람 또는 다수의 집합체에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 한 사람 또는 집합체는 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 및 당을 제조할 수 있고, 상이한 사람 또는 집합체는 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 전에 TBA를 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성할 수 있다. 또 다른 예에서, 한 사람 또는 집합체는 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성할 수 있고, 상이한 사람 또는 집합체는 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성할 수 있다.

따라서, 일 양태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 몰비로 tert-뷰틸 알코올(TBA)을 폴리펩타이드 또는 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체 조성물을 형성하는 단계, 및 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 폴리펩타이드 또는 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 여기서 상기 방법은 적어도 약 360:1의 몰비로 tert-뷰틸 알코올(TBA)을 폴리펩타이드 또는 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 및 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체 조성물을 형성하는 단계를 포함하고, 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체 조성물은 후속하여 희석제에 의해 재구성되고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드 또는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 폴리펩타이드 또는 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 폴리펩타이드 또는 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다.

본 발명은 동결건조에 적합한 액체 항체 제제를 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명은 동결건조에 적합한 액체 항체 제제를 제공하고, 여기서 상기 제제는 항체, 당, 희석제 및 TBA를 포함하고, 액체 제제 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%이고, 액체 제제 내의 당의 양은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비이고, TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 제제 내의 TBA의 양은 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 약 10용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 액체 제제 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다. 일 실시형태에서, TBA는 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 항체를 포함하는 액체 조성물에 첨가된다. 몇몇 실시형태에서, 당은 수크로스 또는 트레할로스이다. 소정의 실시형태에서, 액체 항체 제제 내의 TBA의 존재는 항체의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다.

본 발명은 동결건조된 항체 조성물을 제공하고, 여기서 동결건조된 항체 조성물은 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임), 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계에 의해 제조되고, 희석제에 의한 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시, TBA의 존재 하에 동결건조되는 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 몇몇 실시형태에서, 액체 제제 내의 TBA의 양은 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 약 10용적%이다. 몇몇 실시형태에서, 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하기 위해 액체 항체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 약 6용적%이다. 일 실시형태에서, TBA는 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 항체를 포함하는 액체 조성물에 첨가된다. 몇몇 실시형태에서, 당은 수크로스 또는 트레할로스이다. 소정의 실시형태에서, 액체 조성물에 대한 TBA의 첨가는 액체 조성물 또는 동결건조된 항체 조성물 내의 항체의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다.

도 1은 0%, 0.5%, 1%, 5% 및 20%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 동결건조된 항체 제제에 대한 재구성 시간을 나타내는 데이터를 기재한다.
도 2는 6㏄ 바이알에서 동결건조된 0%, 5% 및 10%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 2.5㎖의 동결건조된 항체 제제에 대한 재구성 시간을 나타내는 데이터를 기재한다.
도 3은 50㏄ 바이알에서 동결건조된 0%, 1%, 5%, 10% 및 20%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 25㎖의 동결건조된 항체 제제에 대한 재구성 시간을 나타내는 데이터를 기재한다.
도 4는 100㏄ 바이알에서 동결건조된 0%, 5% 및 10%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 60㎖의 동결건조된 항체 제제에 대한 재구성 시간에 대한 진공의 효과를 나타내는 데이터를 기재한다.
도 5는 100㏄ 바이알에서 동결건조된 0%, 5% 및 10%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 100㎖의 동결건조된 항체 제제에 대한 재구성 시간에 대한 진탕기의 효과를 나타내는 데이터를 기재한다.
도 6은 100㏄ 바이알에서 동결건조된 0%, 5% 및 10%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 100㎖의 동결건조된 항체 제제에 대한 재구성 시간에 대한 진공 및 진탕기의 효과를 나타내는 데이터를 기재한다.
도 7은 100㏄ 바이알에서 0% 또는 5%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 100㎖의 동결건조된 항체 제제에 대한 재구성 시간에 대한 진공, 진탕기, 및 진공 및 진탕기의 효과를 나타내는 데이터를 기재한다.
도 8a 및 도 8b는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정된 바대로 2-8℃ 또는 30℃에서 0%, 1%, 5%, 10% 및 20%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 항체 제제의 7일 안정성 분석을 나타내는 데이터를 기재한다.
도 9는 IEC에 의해 측정된 바대로 2 내지 8℃ 또는 30℃에서 0%, 1%, 5%, 10% 및 20%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 항체 제제의 7일 안정성 분석을 나타내는 데이터를 기재한다.
도 10a 및 도 10b는 0%, 5% 또는 10%(v/v)의 tert-뷰틸 알코올을 함유하는 예비동결건조 액체 항체 혼합물로부터 생성된 50℃에서의 동결건조된 항체 제제의 4개월 안정성 분석을 나타내는 데이터를 기재한다. 단량체 백분율은 SEC에 의해 측정된다. 도 10a는 mAb1에 대한 결과를 나타내고, 도 10b는 mAb2에 대한 결과를 나타낸다.

본 발명은 특히 폴리펩타이드 제제, 동결건조 제제, 동결건조 제제를 제조하는 방법 및 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 감소시키기에 유용한 방법 및 제제를 제공한다.

정의

본 명세서에서 용어 "항체"는 가장 광의로 사용되고, 이것이 원하는 항원 결합 활성을 나타내는 한, 다양한 항체 구조, 예를 들어 단일클론 항체, 다중클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 및 항체 단편(이들로 제한되지는 않음)을 포함한다.

"항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 부분을 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 의미한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; 다이아바디; 선형 항체; 단쇄 항체 분자(예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.

용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 소스 또는 종으로부터 유래하지만 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지가 상이한 소스 또는 종으로부터 유래하는 항체를 의미한다.

항체의 "종류"는 이의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 의미한다. IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 항체의 5개의 주요 종류가 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위종류(아이소타입), 예를 들어 IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ 및 IgA₂로 추가로 분할될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 종류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라 불린다.

용어 "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"는 네이티브 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본 명세서에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 의미하도록 본 명세서에서 상호 교환되어 사용된다.

"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체 코팅 서열을 이용하는 비인간 소스로부터 유래된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 이 정의는 구체적으로 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 배제한다.

"인간화된" 항체는 비인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 의미한다. 소정의 실시형태에서, 인간화된 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 HVR(예를 들어, CDR)이 비인간 항체의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR이 인간 항체의 것에 상응하는 적어도 1개 및 통상적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이다. 인간화된 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비인간 항체의 "인간화된 형태"는 인간화를 겪은 항체를 의미한다.

"면역접합체"는 세포독성 물질(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 하나 이상의 비상동성 분자(들)에 접합된 항체이다.

"항체-약물 접합체"는 세포독성 물질(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 하나 이상의 비상동성 분자(들)에 접합된 항체이다.

"개체" 또는 "대상체"는 포유류이다. 포유류는 가축 동물(예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어, 인간 및 비인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.

"단리된" 항체는 이의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 몇몇 실시형태에서, 항체는 예를 들어 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동(isoelectric focusing: IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바대로 95% 초과 또는 99%의 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가를 위한 방법의 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Flatman et al., J. Chromatogr . B 848:79-87(2007)]을 참조한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "단일클론 항체"는, 예를 들어 천연 발생 돌연변이를 함유하거나 단일클론 항체 제제의 제조 동안 생기는 가능한 변이체 항체를 제외하고, 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 생긴 항체를 의미하고, 즉 집단을 포함하는 개별 항체는 동일하고/하거나 동일한 에피토프에 결합하고, 이러한 변이체는 일반적으로 소량으로 존재한다. 상이한 결정부위(에피토프)에 지향된 상이한 항체를 통상적으로 포함하는 다중클론 항체 제제와 반대로, 단일클론 항체 제제의 각각의 단일클론 항체는 항원에서 단일 결정부위에 대해 지향된다. 따라서, 수식어 "단일클론"은 항체의 특성을 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 생기는 것으로 기재하고, 임의의 특정한 방법에 의해 항체의 제조를 요하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지 디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전좌위의 모두 또는 일부(이들로 제한되지는 않음)를 함유하는 형질전환 동물을 사용하는 방법을 포함하는 다양한 기법에 의해 제조될 수 있고, 단일클론 항체를 제조하기 위한 이러한 방법 및 다른 예시적인 방법은 본 명세서에 기재되어 있다.

"네이키드 항체"는 비상동성 모이어티(예를 들어, 세포독성 모이어티) 또는 방사성 동위원소에 접합되지 않는 항체를 의미한다. 네이키드 항체는 약제학적 제제에 존재할 수 있다.

"네이티브 항체"는 다양한 구조를 갖는 천연 발생 면역글로불린 분자를 의미한다. 예를 들어, 네이티브 IgG 항체는 이황화 결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 이루어진 약 150,000달톤의 이종사합체 당단백질이다. N 말단으로부터 C 말단으로, 각각의 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인이라고도 불리는 가변 영역(VH), 이어서 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N 말단으로부터 C 말단으로, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인이라고도 불리는 가변 영역(VL), 이어서 불변 경쇄(CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(κ) 및 람다(λ)라 불리는 2개의 유형 중 하나로 지정될 수 있다.

용어 "약제학적 제제"는 내부에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이게 허용하게 하는 형태로 있고, 제제가 투여되는 대상체에게 허용되지 않게 독성인 제제를 의미한다.

"약제학적으로 허용 가능한 담체"는 대상체에게 비독성인 활성 성분 이외의 약제학적 제제 내의 성분을 의미한다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정화제, 동결보호제(예를 들어, 수크로스, 트레할로스) 또는 보존제를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제는 무균 주사용수를 포함한다.

본 명세서에 사용된 바대로, "재구성 시간" 및 이의 문법적 변형어는 동결건조된 분자가 액체 형태로 용해되고/되거나 현탁되는데 필요한 시간의 양을 의미한다. 예를 들어, 재구성 시간은 동결건조 후 폴리펩타이드의 건조된(즉, 동결건조된) 펠릿 또는 케이크가 물 또는 완충제 중에 현탁되는데 필요한 시간을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. "감소" 또는 "감소시키는" 또는 "감소된" 재구성 시간 및 이의 문법적 변형어는, 제1 제제 및/또는 조건 하에 동결건조되고 액체 중에 현탁되는 폴리펩타이드의 양에 대해 제2 제제 및/또는 조건 하에 동결건조되고 동일한 액체 중에 현탁되는 동일한 폴리펩타이드의 동일한 양과 비교하여 더 적은 시간이 필요하다는 것을 의미한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "케이크" 또는 "동결건조된 케이크" 또는 "리오 케이크(lyo cake)"는 동결 건조(즉, 동결건조된) 폴리펩타이드 조성물 또는 제제를 의미한다.

본 명세서에 사용된 바대로, "치료"(및 이의 문법적 변형어, 예컨대 "치료한다" 또는 "치료하는")는 치료되는 개체의 천연 과정을 변경하려는 시도에서의 임상 중재를 의미하고, 예방을 위해 또는 임상 병리학의 과정 동안 수행될 수 있다. 원하는 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 경감, 질환의 임의의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이의 예방, 질환 진행의 속도의 감소, 질환 상태의 경감 또는 완화, 및 관해 또는 예후의 개선을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 항체는 질환의 발생을 지연시키거나 질환의 진행을 느리게 하도록 사용될 수 있다.

약제학적 제제

본 명세서에 기재된 바와 같은 항체의 약제학적 제제는 원하는 정도의 순도를 갖는 이러한 항체를 동결건조된 제제 또는 수성 용액의 형태로 하나 이상의 선택적인 약제학적으로 허용 가능한 담체(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합함으로써 제조된다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로 사용된 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제(예컨대, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 뷰틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레솔); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글라이신, 글루카민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이팅 물질, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 본 명세서에서 예시적인 약제학적으로 허용 가능한 담체는 추가로 간질성 약물 분산액 물질, 예컨대 가용성 천연 활성 히알우로니다제 당단백질(sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알우로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20(HYLENEX(등록상표), Baxter International, Inc.)을 포함한다. rHuPH20을 포함하는 소정의 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공보 제2005/0260186호 및 제2006/0104968호에 기재되어 있다. 일 양태에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가적인 글라이코사미노글라이카나스, 예컨대 콘드로이티나스와 조합된다.

예시적인 동결건조된 항체 제제는 미국 특허 제6,267,958호에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국 특허 제6,171,586호 및 WO 제2006/044908호에 기재된 단계를 포함하고, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체 제제는 액체 항체 조성물 및 TBA를 포함하고, 여기서 TBA는 동결건조 전에 액체 항체 조성물에 첨가된다. 몇몇 양태에서, 본 발명의 항체 제제는 액체 항체 조성물 내에 0.5용적%, 1용적%, 2.5용적%, 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 및 20용적%로 이루어진 군으로부터 선택된 TBA의 양을 포함한다. 다른 실시형태에서, 액체 항체 조성물 내의 TBA의 양은 약 1용적% 내지 약 20용적%, 약 1용적% 내지 약 10용적%, 약 1용적% 내지 약 5용적%, 약 5용적% 내지 약 20용적% 또는 약 5용적% 내지 약 10용적%이다.

몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 조성물 및 제제는 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 항체 및 당을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 당:항체의 몰비는 적어도 약 360:1, 적어도 약 380:1, 적어도 약 400:1, 적어도 약 420:1, 적어도 약 440:1, 적어도 약 460:1, 적어도 약 480:1, 또는 적어도 약 500:1(이들 수 사이의 모든 값 포함)이다. 몇몇 실시형태에서, 비율은 약 360:1 내지 약 500:1이다. 당은 수크로스 또는 트레할로스 또는 동결건조 동안 단백질의 안정성을 개선하는 것으로 당해 분야에서 공지된 임의의 다른 당일 수 있다. 본 명세서에 사용된 바대로, 항체 대 트레할로스의 중량비를 계산하기 위한 제제 내의 트레할로스의 중량은 무수 트레할로스의 양(MW 342.30)에 기초한다. 트레할로스의 다른 형태(예를 들어, 트레할로스 이수화물)가 사용되는 경우, 제제 내의 트레할로스의 중량은 동일한 몰 농도로 트레할로스 이수화물의 중량으로부터 전환되어야 한다. 당:항체의 몰비를 계산할 때, 150KDa의 분자량은 항체에 추정될 수 있다.

본 명세서에서 제제는 치료되는 특정한 적응증에 필요한 바대로 하나 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로에 부정적으로 영향을 미치지 않는 상보성 활성을 갖는 것을 또한 함유할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도되는 목적을 위해 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.

서방형 제제를 제조할 수 있다. 서방방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반중첩성 매트릭스를 포함하고, 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.

생체내 투여에 사용하고자 하는 제제는 일반적으로 무균이다. 무균성은 예를 들어 무균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 수행될 수 있다.

본 발명은 특히 폴리펩타이드 제제, 동결건조 제제 및 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공한다. 동결건조 방법론 및 기법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 동결건조의 공정은 하기와 같다: 용해된 물질(예를 들어, 생물학적 분자, 폴리펩타이드)은 낮은 온도(예를 들어, -60℃)에서 이의 최종 패키지 또는 저장 컨테이너(예를 들어, 바이알, 주사기, 또는 카트리지)에서 동결된다. 동결건조, 또는 동결 건조는 물이 동결되고 진공 하에 배치된 후 생성물로부터 제거되어서 얼음이 액상을 통과하지 않으면서 직접적으로 고체로부터 증기로 변하는 공정이다. 공정은 3개의 별개의 상호의존적 공정: 동결, 1차 건조(승화) 및 2차 건조(탈착)를 수반한다. 생성되는 것은 밀도, 기공 크기, 전체 기공 용적 및 표면적을 포함하는 구조가 제조(예를 들어, 희석제, 온도, 진공 강도, 건조 조건, 동결 조건 등)에 의해 제어되는 건조 동결건조 케이크(즉, 건조 리오 케이크)이다. 적절한 저장에 의해, 동결건조된 생물학적 분자 및 폴리펩타이드는 통상적으로 2년 또는 3년 동안 안정하게 남아 있다.

동결건조 컨테이너는 예를 들어 바이알, 주사기 또는 카트리지를 포함한다. 다양한 크기의 다양한 동결건조 컨테이너는 상업적으로 구입 가능하고, 이들 대부분은 유리로 제조된다. 동결건조에서 사용하기 위한 바이알 크기는 6㏄ 바이알, 10㏄ 바이알, 15㏄ 바이알, 20㏄ 바이알, 50㏄ 바이알, 100㏄ 바이알 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 0.1㎖, 0.3㎖, 0.5㎖, 1㎖, 2㎖, 2.5㎖, 5㎖, 10㎖, 20㎖, 25㎖, 50㎖, 100ml 등의 용량 또는 충전 용적을 갖는 바이알을 포함하는 다양한 용량(또는 충전 용적)의 동결건조 바이알이 또한 이용 가능하다.

본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, (b) tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, (c) 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, (d) 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물(즉, 동결건조된 폴리펩타이드 케이크)을 형성하는 것, (e) 희석제에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 재구성하는 단계를 포함하고, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다.

본 발명은 TBA가 동결건조 전에 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키기 위한 방법 및 제제를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 0.5용적% 내지 약 20용적%, 약 1용적% 내지 약 20용적%, 약 1용적% 내지 약 10용적%, 약 1용적% 내지 약 5용적%, 약 5용적% 내지 약 20용적%, 약 5용적% 내지 약 10용적% 또는 약 10용적% 내지 약 20용적%이다.

다른 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 0.5용적%, 1용적%, 2.5용적%, 5용적%, 7.5용적%, 10용적%, 12.5용적%, 15용적%, 17.5용적% 또는 20용적%이다. 일 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적% 내지 6용적%이다. 일 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 5용적%이다. 일 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 4.5%, 4.6%, 4.7%, 4.8%, 4.9%, 5%, 5.1%, 5.2%, 5.3%, 5.4%, 5.5%, 5.6%, 5.7%, 5.8%, 5.9%, 6%, 6.1% 또는 6.2%이다. 일 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 10용적%이다. 일 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는 TBA의 양은 약 20용적%이다.

본 발명의 방법 및 제제는 다양한 폴리펩타이드의 농도의 재구성 시간을 감소시키는 데 효과적이고, 특히 고농도 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키기에 유용하고 효과적이다. 예를 들어, 본 발명은 동결건조 전에 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 TBA를 첨가하는 단계에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 데 효과적인 방법 및 제제를 제공하고, 여기서 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물은 높은 폴리펩타이드 농도를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 농도는 약 10㎎/㎖ 내지 250㎎/㎖이다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 농도는 약 25㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 50㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 100㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 150㎎/㎖ 내지 약 250㎎/㎖, 약 25㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖, 약 50㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖, 약 25㎎/㎖ 내지 약 125㎎/㎖ 또는 약 50㎎/㎖ 내지 약 125㎎/㎖이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 농도는 약 25㎎/㎖, 약 40㎎/㎖, 약 50㎎/㎖, 약 60㎎/㎖, 약 70㎎/㎖, 약 100㎎/㎖, 약 125㎎/㎖, 약 150㎎/㎖, 약 200㎎/㎖ 또는 약 250㎎/㎖이다.

본 발명의 방법 및 제제는 다양한 양 및 분량의 폴리펩타이드의 재구성 시간을 감소시키는 데 효과적이다. 예를 들어, 본 발명은 동결건조 전에 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물에 TBA를 첨가하는 단계에 의해 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 데 효과적인 방법 및 제제를 제공하고, 여기서 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물은 폴리펩타이드의 높은 분량 또는 양을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 양은 약 150㎎ 내지 약 11그램이다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의(그리고 동결건조 후의) 폴리펩타이드의 분량은 약 150㎎, 약 250㎎, 약 500㎎, 약 750㎎, 약 1그램, 약 2그램, 약 3그램, 약 4그램, 약 5그램, 약 6그램, 약 7그램, 약 8그램, 약 9그램, 약 10그램 또는 약 11그램이다. 몇몇 실시형태에서, 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물 내의 폴리펩타이드의 분량은 11그램 초과이다.

동결건조 컨테이너의 와류 또는 진탕은 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 추가로 개선할 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성은 동결건조 컨테이너 내에서 희석제를 동결건조된 폴리펩타이드에 첨가하고 동결건조된 폴리펩타이드가 희석제 중에 용해되거나 현탁되기 전에 (주기적으로 또는 계속해서) 컨테이너를 와류시킴으로써 수행된다. 본 발명의 다른 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성은 동결건조 컨테이너 내에서 희석제를 동결건조된 폴리펩타이드에 첨가하고 동결건조된 폴리펩타이드가 희석제 중에 용해되거나 현탁되기 전에 진탕기(예를 들어, 기계적 진탕기)에 컨테이너를 배치하고 동결건조 컨테이너를 진탕시킴으로써 수행된다.

진공 하의 폴리펩타이드의 재구성은 또한 동결건조된 폴리펩타이드의 재구성 시간을 개선할 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 컨테이너는 재구성 동안 진공 하에 유지된다. 일 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 컨테이너는 재구성 동안 완전 진공 하에 있다. 소정의 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 컨테이너는 재구성 동안 100Torr 미만에 있다. 소정의 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 컨테이너는 재구성 동안 50Torr 미만이다. 소정의 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 컨테이너는 100mTorr 내지 50Torr이다. 일 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 컨테이너는 100mTorr에 있다.

본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명은 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 제공하고, 여기서 동결건조된 폴리펩타이드 조성물은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하는 단계에 의해 제조되고, 희석제에 의한 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다. 소정의 실시형태에서, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물은 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조된 케이크이다.

본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 액체 폴리펩타이드 조성물을 제공한다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명은 액체 폴리펩타이드 조성물을 제공하고, 여기서 액체 폴리펩타이드 조성물은 폴리펩타이드를 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, 및 tert-뷰틸 알코올(TBA)을 액체 조성물에 첨가하여 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물을 형성하는 단계에 의해 제조되고, 동결건조된 폴리펩타이드 조성물을 형성하기 위한 액체 폴리펩타이드/TBA 혼합물 및 후속하는 희석제에 의한 동결건조된 폴리펩타이드 조성물의 재구성 시, TBA의 존재 하에 동결건조된 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 양의 동일한 폴리펩타이드를 재구성하기 위한 시간보다 짧다.

본 개시내용의 몇몇 실시형태에서, 적어도 약 360:1의 당:항체의 몰비로 TBA를 항체를 포함하는 액체 조성물 및 당에 첨가하는 단계(여기서, 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 약 5용적% 내지 20용적%임)는 액체 항체/TBA 혼합물, 동결건조된 항체 조성물 또는 동결건조에 적합한 액체 항체 제제 내의 항체의 통합성 또는 안정성에 대한 효과를 갖지 않는다. 이러한 실시형태에서, 항체는 본질적으로 액체 조성물 또는 동결건조된 조성물 내의 저장 시 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 보유한다. 바람직하게는, 본 명세서에 제공된 조성물 및 제제 내의 항체는 본질적으로 저장 시 이의 물리적 및 화학적 안정성, 및 이의 생물학적 활성을 보유한다. 저장 기간은 일반적으로 제제의 의도된 저장기간에 기초하여 선택된다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기법은 당해 분야에서 이용 가능하고, 예를 들어 문헌[Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) 및 Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)]에서 검토되어 있다. 안정성은 선택된 시간 기간 동안 선택된 온도에서 측정될 수 있다.

소정의 실시형태에서, 동결건조에 적합한 액체 항체 제제는 적어도 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 14일, 21일, 28일 이상 동안 약 40℃에서 안정하다. 소정의 실시형태에서, 액체 항체 제제는 적어도 약 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주 이상 동안 약 40℃에서 안정하다. 소정의 실시형태에서, 액체 항체 제제는 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월 이상 동안 약 25℃에서 안정하다. 소정의 실시형태에서, 액체 항체 제제는 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월 이상 동안 약 5℃에서 안정하다. 소정의 실시형태에서, 액체 항체 제제는 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월, 25개월, 26개월, 27개월, 28개월, 29개월, 30개월, 31개월, 32개월, 33개월, 34개월, 35개월, 36개월, 37개월, 38개월, 39개월, 40개월, 41개월, 42개월, 43개월, 44개월, 45개월, 46개월, 47개월, 48개월 이상 동안 약 -20℃ 이하에서 안정하다. 더욱이, 액체 항체 제제는 바람직하게는 (예를 들어, -20℃, -40℃ 또는 -70℃로의) 액체 항체 제제의 동결 및 해동 후, 예를 들어 동결 및 해동의 1회, 2회, 3회, 4회 또는 5회 사이클 후 안정하다.

소정의 실시형태에서, 동결건조된 항체 조성물은 적어도 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주 이상 동안, 또는 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월 이상 동안 약 25℃에서 안정하다. 소정의 실시형태에서, 동결건조된 항체 조성물은 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월 이상 동안 약 5℃에서 안정하다. 소정의 실시형태에서, 동결건조된 항체 조성물은 적어도 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년, 10년 이상 동안 약 -20℃ 이하에서 안정하다.

안정성은 응집체 형성의 평가(예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여, 탁도 측정에 의해 및/또는 시각 검사에 의해); 양이온 교환 크로마토그래피를 사용한 전하 이종성, 영상 모세관 등전점 전기영동(icIEF) 또는 모세관 구역 전기영동의 평가; 아미노 말단 또는 카복시 말단 서열 분석; 질량 분광학적 분석; 감소된 및 온전한 항체를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩타이드 맵(예를 들어, 트립신작용 또는 LYS-C) 분석; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능의 평가; 등을 포함하는 다양한 상이한 방식으로 정성적으로 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정성은 응집, 탈아미노화(예를 들어, Asn 탈아미노화), 산화(예를 들어, Met 산화), 이성질체화(예를 들어, Asp 이성질체화), 클리핑/가수분해/단편화(예를 들어, 힌지 영역 단편화), 숙신이미드 형성, 고립 시스테인(들), N 말단 연장, C 말단 공정처리, 글라이코실화 차이 등 중 임의의 하나 이상을 수반할 수 있다.

조성물 또는 약제학적 제제에서 항체는 이것이 색상 및/또는 탁도의 시각 검사 시, 또는 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들어 UV 광 산란 또는 크기 배제 크로마토그래피 등에 의해 측정된 바대로 징후를 나타내지 않거나 매우 적은 응집, 침전 및/또는 변성을 나타내는 경우 "이의 물리적 안정성을 보유한다".

조성물 또는 약제학적 제제에서 항체는 이것이 항체가 하기 정의된 바대로 이의 생물학적 활성을 여전히 보유하는 것으로 생각되도록 주어진 시간에 화학 안정성이 있는 경우 "이의 화학 안정성을 보유한다". 화학 안정성은 예를 들어 항체의 화학적으로 변경된 형태를 검출하고 정량화함으로서 평가될 수 있다. 화학 변경은 예를 들어 크기 배제 크로마토그래피, SDS-PAGE 및/또는 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화/비행 시간 질량 분석법(MALDI/TOF MS)을 이용하여 평가될 수 있는 크기 변형(예를 들어, 클리핑)을 수반할 수 있다. 다른 유형의 화학 변경은 예를 들어 이온 교환 크로마토그래피 또는 icIEF에 의해 평가될 수 있는 (예를 들어, 탈아미노화의 결과로서 발생하는) 전하 변경을 포함한다.

조성물 또는 약제학적 제제에서 항체는 예를 들어 항원 결합 검정에서 결정된 바대로 조성물 또는 약제학적 제제가 제조되는 시간에 나타난 생물학적 활성의 약 10% 내(검정 오차 내)인 경우 "이의 생물학적 활성을 보유한다". 항체에 대한 다른 "생물학적 활성" 검정은 하기 본 명세서에서 상술된다.

본 명세서에 사용된 바대로, 단일클론 항체의 "생물학적 활성"은 항원에 결합하는 항체의 능력을 의미한다. 이것은 항원에 결합하고 시험관내 또는 생체내 측정될 수 있는 측정 가능한 생물학적 반응을 발생시키는 항체를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 활성은 길항성 또는 작용성일 수 있다.

항체

본 발명에 따라 제제화될 수 있는 항체를 제조하기 위한 예시적인 기법은 본 명세서에 제공된다. 일 실시형태에서, 항체가 결합하는 항원은 생물학적으로 중요한 단백질이고, 질환 또는 장애를 겪는 포유류에 대한 항체의 투여는 그 포유류에서 치료학적 이익을 발생시킬 수 있다. 그러나, 비폴리펩타이드 항원(예컨대, 종양 연관된 당지질 항원; 미국 특허 제5,091,178호 참조)에 지향된 항체가 또한 고려된다.

항원이 폴리펩타이드인 경우, 이것은 막관통 분자(예를 들어, 수용체) 또는 리간드, 예컨대 성장 인자일 수 있다. 예시적인 항원은 분자, 예컨대 레닌; 성장 호르몬, 예를 들어 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬; 성장 호르몬 방출 인자; 부갑상선 호르몬; 갑상선 자극 호르몬; 지질단백질; 알파-1-항트립신; 인슐린 A-사스; 인슐린 B-사슬; 프로인슐린; 난포 자극 호르몬; 칼시토닌; 황체형성 호르몬; 글루카곤; 응고 인자, 예컨대 VIIIC 인자, IX 인자, 조직 인자(TF) 및 폰 빌레브란트 인자; 항응고 인자, 예컨대 단백질 C; 심방 나트륨이뇨 인자; 폐 계면활성제; 플라스미노겐 활성자, 예컨대 우로키나제 또는 인간 뇨 또는 조직-타입 플라스미노겐 활성자(t-PA); 봄베신; 트롬빈; 조혈 성장 인자; 종양 괴사 인자-알파 및 -베타; 엔케팔리나제; RANTES(활성화 시 조절되는 일반적으로 T 세포 발현되고 분비된); 인간 대식세포 염증성 단백질(MIP-1 -알파); 혈청 알부민, 예컨대 인간 혈청 알부민; 뮐러 저해 물질; 렐락신 A-사슬; 렐락신 B-사슬; 프로렐락신; 마우스 고나도트로핀 연관된 펩타이드; 미생물 단백질, 예컨대 베타-락타마제; DNase; IgE; 세포독성 T 림프구 연관된 항원(CTLA), 예컨대 CTLA-4; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자(VEGF); 호르몬 또는 성장 인자에 대한 수용체; 단백질 A 또는 D; 류마티스성 인자; 신경영양적 인자, 예컨대 골 유래 신경영양적 인자(BDNF), 뉴로트로핀-3, -4, -5 또는 -6(NT-3, NT-4, NT-5 또는 NT-6), 또는 신경 성장 인자, 예컨대 NGF-b; 혈소판 유래 성장 인자(PDGF); 섬유아세포 성장 인자, 예컨대 aFGF 및 bFGF; 표피 성장 인자(EGF); 변환 성장 인자(TGF), 예컨대 TGF-알파 및 TGF-베타, 예를 들어 TGF-bl, TGF-b2, TGF-b3, TGF-b4 또는 TGF-b5; 종양 괴사 인자(TNF), 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타; 인슐린양 성장 인자-I 및 -II(IGF-I 및 IGF-II); des(l-3)-IGF-I(뇌 IGF-I), 인슐린양 성장 인자 결합 단백질; CD 단백질, 예컨대 CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22 및 CD40; 에리쓰로포이에틴; 골유도성 인자; 면역독소; 소 형태발생 단백질(BMP); 인터페론, 예컨대 인터페론-알파, -베타 및 -감마; 콜로니 자극 인자(CSF), 예를 들어 M-CSF, GM-CSF 및 G-CSF; 인터류킨(IL), 예를 들어 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9 및 IL-10; 슈퍼옥사이드 디스무타아제; T 세포 수용체; 표면 막 단백질; 분해 가속 인자; 바이러스 항원, 예를 들어 AIDS 엔벨로프의 부분 등; 운반 단백질; 귀소 수용체; 어드레신; 조절 단백질; 인테그린, 예컨대 CD1 la, CD1 lb, CD1 lc, CD18, ICAM, VLA-4 및 VCAM; 종양 연관 항원, 예컨대 HER2, HER3 또는 HER4 수용체; 및 임의의 상기 기재된 폴리펩타이드의 단편을 포함한다.

본 발명에 의해 포함되는 항체에 대한 예시적인 분자 표적은 CD 단백질, 예컨대 CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD34 및 CD40; ErbB 수용체 패밀리의 구성원, 예컨대 EGF 수용체, HER2, HER3 또는 HER4 수용체; B 세포 표면 항원, 예컨대 CD20 또는 BR3; 종양 괴사 수용체 슈퍼패밀리의 구성원, 예를 들어 DR5; 전립선 줄기 세포 항원(PSCA); 세포 부착 분자, 예컨대 LFA-1, Macl, pl50.95, VLA-4, ICAM-1, VCAM, 알파4/베타7 인테그린 및 알파v/베타3 인테그린, 예를 들어 이의 알파 또는 베타 하위단위(예를 들어, 항-CD 1 la, 항-CD 18 또는 항-CD 1 lb 항체); 성장 인자, 예컨대 VEGF, 및 이에 대한 수용체; 조직 인자(TF); 종양 괴사 인자(TNF), 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타, 알파 인터페론(알파-IFN); 인터류킨, 예컨대 IL-8; IgE; 혈액형 항원; flk2/flt3 수용체; 비만(OB) 수용체; mpl 수용체; CTLA-4; 단백질 C 등을 포함한다.

다른 분자에 선택적으로 접합된 가용성 항원 또는 이의 단편은 항체를 생성하기 위한 면역원으로서 사용될 수 있다. 막관통 분자, 예컨대 수용체에 대해, 이들의 단편(예를 들어, 수용체의 세포외 도메인)은 면역원으로서 사용될 수 있다. 대안적으로, 막관통 분자를 발현하는 세포는 면역원으로서 사용될 수 있다. 이러한 세포는 천연 소스(예를 들어, 암 세포주)로부터 유래될 수 있거나, 막관통 분자를 발현하기 위해 재조합 기법에 의해 형질전환된 세포일 수 있다. 다른 항원 및 항체를 제조하기에 유용한 이의 형태는 당업자에게 명확할 것이다.

본 발명에 따라 제제화될 수 있는 예시적인 항체는 하기를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다: 항-ErbB 항체, 예를 들어 항-HER2 항체(예를 들어, 트라스투주맙(HERCEPTIN(등록상표)) 또는 페르투주맙); B 세포 표면 마커, 예컨대 CD20(예를 들어, 리툭시맙 및 인간화된 2H7/오크렐리주맙), CD22, CD40 또는 BR3에 결합하는 항체; IgE에 결합하는 항체, 예를 들어 Genentech로부터 상업적으로 구입 가능한 오말리주맙(XOLAIR(등록상표)), E26, HAE1, Fc 영역의 265번 위치에서 아미노산 치환을 갖는 IgE 항체(US 제2004/0191244호 Al), Hu-901, WO 제2004/070011호에서와 같은 IgE 항체, 또는 IgE에서 작은 세포외 분절에 결합하는 항체, Ml '(예를 들어, 47H4v5; 미국 특허 제8,071,097호 참조), 또한, 문헌[Presta et al, J. Immunol. 151 :2623-2632 (1993)]; 국제 공보 WO 제95/19181호; 미국 특허 제5,714,338호(1998년 2월 3일 등록); 미국 특허 제5,091,313호(1992년 2월 25일 등록); WO 제93/04173호(1993년 3월 4일 공개); WO 제99/01556호(1999년 1월 14일 공개); 및 미국 특허 제5,714,338호 참조; 혈관 내피 성장 인자(VEGF)에 결합하는 항체(예를 들어, 베바시주맙) 또는 VEGF 수용체; 항-IL-8 항체(St John et al, Chest, 103:932 (1993), 및 국제 공보 WO 제95/23865호); 항-PSCA 항체(WO 제01/40309호); 항-CD40 항체, 예를 들어 S2C6 및 이의 인간화된 변이체(WO 제00/75348호); 항-CDl la 항체, 예를 들어 에팔리주맙(RAPTIVA(등록상표))(미국 특허 제5,622,700호, WO 제98/23761호, Steppe et al, Transplant Intl. 4:3-7 (1991), 및 Hourmant et al, Transplantation 58:377-380 (1994)); 항-CD18 항체(미국 특허 제5,622,700호(1997년 4월 22일 등록), 또는 WO 제97/26912호(1997년 7월 31일 공개)에서와 같은); 항-Apo-2 수용체 항체(WO 제98/51793호(1998년 11월 19일 공개)); 항-TNF-알파 항체, 예를 들어 cA2(REMICADE(등록상표)) 및 아달리무맙(HUMIRA(등록상표)), CDP571 및 MAK-195(아펠리모맙)(미국 특허 제5,672,347호(1997년 9월 30일 등록), Lorenz et al. J. Immunol. 156(4): 1646-1653 (1996), 및 Dhainaut et al. Crit. Care Med. 23(9): 1461-1469 (1995) 참조); 항-조직 인자(TF)(유럽 특허 제0 420 937호 B1(1994년 11월 9일 등록)); 항-인간 α4β7 인테그린(WO 제98/06248호(1998년 2월 19일 공개)); 항-EGFR 항체, 예를 들어 WO 제96/40210호(1996년 12월 19일 공개)에서처럼 키메라화된 또는 인간화된 225 항체; 항-CD3 항체, 예컨대 OKT3(미국 특허 제4,515,893호(1985년 5월 7일 등록)); 항-CD25 또는 항-tac 항체, 예컨대 CHI-621(SIMULECT(등록상표)) 및(ZENAPAX(등록상표))(미국 특허 제5,693,762호(1997년 12월 2일 등록) 참조); 항-CD4 항체, 예컨대 cM-7412 항체(Choy et al. Arthritis Rheum 39(l):52-56 (1996)); 항-CD52 항체, 예컨대 알렘투주맙(CAMPATH-1H(등록상표))(Riechmann et al. Nature 332:323-337(1988); 항-Fc 수용체 항체, 예컨대 문헌[Graziano et al. J. Immunol. 155(10):4996-5002 (1995)]에서처럼 FcγRI에 지향된 M22 항체; 항암배아성 항원(CEA) 항체, 예컨대 hMN-14(Sharkey et al. Cancer Res. 55(23Suppl): 5935s-5945s (1995); huBrE-3, hu-Mc 3 및 CHL6을 포함하는 유방 상피 세포에 지향된 항체(Ceriani et al. Cancer Res. 55(23): 5852s-5856s (1995); 및 Richman et al. Cancer Res. 55(23 Supp): 5916s-5920s (1995)); C242와 같은 결장 암종 세포에 결합하는 항체(Litton et al. Eur J. Immunol. 26(1): 1-9 (1996)); 항-CD38 항체, 예를 들어 AT 13/5(Ellis et al. J. Immunol. 155(2):925-937 (1995)); 항-CD33 항체, 예컨대 Hu M195(Jurcic et al. Cancer Res 55(23 Suppl):5908s-5910s (1995) 및 CMA-676 또는 CDP771; 항-CD22 항체, 예컨대 LL2 또는 LymphoCide(Juweid et al. Cancer Res 55(23 Suppl):5899s-5907s (1995); 항-EpCAM 항체, 예컨대 17-1 A(PANOREX(등록상표)); 항-GpIIb/IIIa 항체, 예컨대 압식시맙 또는 c7E3 Fab(REOPRO(등록상표)); 항-RSV 항체, 예컨대 MEDI-493(SYNAGIS(등록상표)); 항-CMV 항체, 예컨대 PROTOVIR(등록상표); 항-HIV 항체, 예컨대 PR0542; 항-간염 항체, 예컨대 항-Hep B 항체 OSTAVIR(등록상표); 항-CA 125 항체 OvaRex; 항-이디오티픽 GD3 에피토프 항체 BEC2; 항-avP3 항체 VITAXIN(등록상표); 항-인간 신장 세포 암종 항체, 예컨대 ch-G250; ING-1; 항-인간 17-1A 항체(3622W94); 항-인간 대장결장 종양 항체(A33); GD3 강글리오사이드에 지향된 항-인간 흑색종 항체 R24; 항-인간 편평 세포 암종(SF-25); 및 항-인간 백혈구 항원(HLA) 항체, 예컨대 Smart ID 10 및 항-HLA DR 항체 Oncolym(Lym-1); 항-CCR5(PRO 140); ABT-325; ABT-308; ABT-147; 항-베타7(에트롤리주맙); 항-HER3/EGFR DAF(DLl If); 항-인터류킨 6 수용체(IL6R), 예컨대 토클리주맙(ACTEMRA(등록상표)); 항-FluA(WO 제2014/078268호 참조) 및 항-A베타(WO 제2003/070760호 및 WO 제2008/011348호 참조) 등.

실시예

하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 상기 제공된 일반 설명을 고려하여 다양한 다른 실시형태가 실행될 수 있다고 이해된다.

실시예 1. 0 내지 20%의 TBA에 의한 2.5㎖ 및 25㎖의 mAb 케이크의 재구성

정제된 단일클론 항체(mAb) 용액(mAb1 및 mAb2)을 168mM 수크로스, 20mM His-HCl, 0.03% PS20를 함유하는 완충제 중에 70㎎/㎖로 희석하였다. TBA를 25℃의 이의 융점 초과로 가온시키고, 이후 하기한 바대로 mAb 샘플에 첨가하였다. TBA를 5% 이하의 최종 TBA 농도에 대해 직접적으로 70㎎/㎖의 mAb 용액으로 첨가하였다. 10% 또는 20%(용적/용적)의 최종 TBA 농도를 갖는 샘플에 대해, mAb1(90㎎/㎖) 및 mAb2(100㎎/㎖)의더 높은 초기 농도를 사용하고, TBA의 적절한 양의 첨가 후 168mM 수크로스 및 0.03% PS20를 함유하는 20mM His 완충제를 사용하여 70㎎/㎖의 단백질로 희석하여 최종 mAb 용액에서 10% TBA 또는 20% TBA(v/v) 농도를 얻었다.

이후, mAb/TBA 혼합물을 첨가하여 세척하고 Schott 배관 바이알을 탈고열반응시켰다: 2.5㎖ 충전을 위해 6㏄ 바이알; 25㎖ 충전을 위해 50㏄ 바이알. 바이알을 Daikyo D777-1 20㎜ 리오 스톱퍼(lyo stopper)에 의해 스토핑하였다. 이후, 바이알을 실험실 동결건조기(Lyostar II, FTS 시스템(뉴욕주 스톤 리지) 또는 Lyostar III, SP Scientific(뉴욕주 스톤 리지))로 로딩하였다.

동결건조를 하기와 같이 수행하였다. 비제어된 핵화를 이용한 실험을 위해, 바이알을 5℃에서 1시간 동안 평형화시켰다. 이후, 저장 온도를 -0.3℃/분의 속도로 -35℃로 감소시키고, 이 온도에서 6시간 동안 유지시켰다.

제어된 핵화를 이용한 실험을 위해, 바이알을 -10℃에서 2시간 동안 평형화시켰다. 챔버를 질소에 의해 5분 동안 28.5psig로 가압시키고, 약 2초에 걸쳐 감압시켰다. 이후, 저장 온도를 -0.3℃/분의 속도로 -35℃로 감소시키고, 이 온도에서 6시간 동안 유지시켰다. 주어진 실험에서 모든 바이알 샘플을 건조를 위해 하나의 동결건조기에서 통합되어서 건조 거동에서 임의의 가능한 동결건조기간의 변동을 피했다. 1차 건조를 Pirani 게이지가 커패시턴스 마노미터에 의해 수렴할 때까지 -10℃의 저장 온도에서 100mTorr의 챔버 압력에 의해 수행하였다. (건조된 케이크에서 0.5% 내지 2%의 허용 가능한 수준으로 수분을 감소시키도록) 2차 건조를 12시간 동안 20℃의 저장 온도에서 100mTorr의 챔버 압력에 의해 수행하였다. 동결건조 이후에, 바이알을 5℃에서 저장하였다.

동결건조된 단일클론 항체 조성물을 동결건조 전에 단백질 농도와 동일한 mAb 단백질 농도를 갖는 용액을 제조하기에 충분한 양으로 무균 주사용수(희석제)에 의해 재구성하였다. 2.2㎖의 무균 주사용수를 원래 2.5㎖ 충전을 함유하는 각각의 6㏄ 바이알에 첨가하고; 22㎖의 무균 주사용수를 원래 2.5㎖ 충전을 함유하는 각각의 50㏄ 바이알에 첨가하였다. 재구성 전에, 바이알 및 무균 주사용수(재구성 희석제)가 실온에서 평형을 이룰 수 있게 하였다.

6㏄ 바이알에서 mAb1의 재구성은 2.2㎖의 무균 주사용수를 첨가함으로써 수행되고, 5초 동안 와류되고; 이후 바이알은 항체 용액이 완전히 재구성될 때까지(즉, 완전한 용해) 60rpm에서 오비탈 진탕기에 배치되었다. 6㏄ 바이알에서 mAb2의 재구성은 2.2㎖의 무균 주사용수를 첨가함으로써 수행되고, 5초 동안 와류되고; 이후 바이알은 항체 용액이 완전히 재구성될 때까지 10분마다 5초 동안 수동으로 와류되었다. 50㏄ 바이알에서 mAb1의 재구성은 22㎖의 무균 주사용수를 첨가함으로써 수행되고, 5초 동안 와류되고; 이후 바이알은 항체 용액이 완전히 재구성될 때까지 10분마다 5초 동안 와류되었다.

수동 재구성을 위한 샘플을 함유하는 바이알은 희석제의 첨가 직후에 5초 동안 와류되고, 이후 남은 고체가 시각 검사에 의해 용해된다고 확인될 때까지 대략 10분마다 와류되었다. 때때로 남은 고체를 시각적으로 평가하기 위해 아지테이션을 중단하였다.

도 1은 6㏄ 바이알(2.5㎖ 충전)로부터 동결건조된 mAb1의 재구성 시간(분)에 대한 TBA의 상이한 농도의 효과를 나타낸다. 도 1에 도시된 바대로, 동결건조 전에 항체 용액에 대한 0.5%, 1%, 5% 또는 20% TBA의 첨가는 mAb1의 재구성 시간을 감소시켰다. 특히, 5% TBA의 첨가는 동결건조된 항체의 재구성 시간을, TBA 비치료된 대조군과 비교하여 재구성 시간의 대략 80% 감소인, 20분 초과로부터 5분 미만으로 감소시켰다.

하기 표 1은 시험된 각각의 TBA 농도에 대해 3개의 별개의 6㏄ 바이알에 대해 상기 기재된 실험과 연관된 특정한 재구성 시간을 나타낸다.

도 2는 6㏄ 바이알(2.5㎖ 충전)로부터 동결건조된 mAb2의 재구성 시간(분)에 대한 TBA의 상이한 농도의 효과를 나타낸다. 도 2에 도시된 바대로, 동결건조 전에 항체 용액에 대한 5% 또는 10% TBA의 첨가는 mAb2의 재구성 시간을 감소시켰다. 특히, 5% TBA의 첨가는 동결건조된 항체의 재구성 시간을 20분 초과로부터 대략 7.5분으로 감소시켰다.

도 3은 50㏄ 바이알(25㎖ 충전)로부터 동결건조된 mAb1의 재구성 시간(분)에 대한 TBA의 상이한 농도의 효과를 나타낸다. 도 3에 도시된 바대로, 동결건조 전에 항체 용액에 대한 1%, 5%, 10% 또는 20% TBA의 첨가는 mAb1의 재구성 시간을 감소시켰다. 특히, 5% TBA의 첨가는 동결건조된 항체의 재구성 시간을 대략 70분으로부터 대략 27분으로 감소시켰다.

종합하면, 이 결과는 동결건조 전에 항체 용액에 대한 TBA의 첨가가 재구성 시간의 감소를 발생시킨다는 것을 나타낸다. 추가적으로, 이 결과는 5% TBA가 1% TBA, 10% TBA, 또는 20% TBA에 의해 얻은 것과 비교하여 가장 큰 재구성 시간 감소를 제공한다는 것을 나타낸다.

실시예 2. TBA 및 진공에 의한 재구성

TBA와 조합된 완전 진공에 대해 부분 진공 하에 동결건조된 mAb1의 재구성 시간에 대한 효과는 하기한 바대로 조사되었다. 이 연구를 위해, 70㎎/㎖에서 mAb1의 60㎖ 충전 용적을 함유하는 100㏄ 바이알을 사용하였다. TBA는 5% 또는 10% TBA의 최종 농도로 mAb1 용액에 첨가되었다. 동결건조 이후에, 바이알을 100mTorr(진공) 또는 200Torr(부분 진공 대조군)로 역충전하였다.

100㏄ 바이알에서 동결건조된 mAb1은 무균 주사용수의 첨가에 의해 원래의 60㎖ 충전 용적으로 재구성되고, 5초 동안 와류되고, 이후 바이알은 항체 용액이 완전히 재구성될 때까지(즉, 완전한 용해) 10분마다 5초 동안 와류되었다.

도 4는 2개의 상이한 진공 조건(100mTorr 또는 200Torr) 하에 100㏄ 바이알에서 동결건조된 mAb1의 재구성 시간에 대한 TBA(5% 및 10% TBA)의 상이한 농도의 효과를 나타낸다. 도 4에 도시된 바대로, 동결건조 전에 항체 용액에 대한 5% TBA 또는 10% TBA의 첨가는, 각각 2.5㎖ 충전 용적 또는 25㎖ 충전 용적을 함유하는 6㏄ 또는 50㏄ 바이알에 의해 얻은 결과와 일치하는, 60㎖ 충전 용적을 갖는 100㏄ 바이알에서 mAb1의 재구성 시간을 감소시켰다. 특히, 200Torr 조건 하에, 5% TBA 또는 10% TBA의 첨가는 TBA 부재에 의해 110분 초과로부터 5% TBA에 의해 대략 60분 및 10% TBA에 의해 대략 80분으로 재구성 시간을 감소시켰다.

재구성이 100mTorr 조건 하에 수행될 때, 재구성 시간은 크게 감소하였다. 특히, 100mTorr 조건 하에, 5% TBA 또는 10% TBA의 첨가는 TBA 부재에 의해 대략 40분으로부터 5% TBA에 의해 대략 20분 및 10% TBA에 의해 대략 40분으로 재구성 시간을 감소시켰다.

종합하면, 이 결과는 TBA와 진공의 조합이 TBA 또는 진공 단독을 사용하는 것과 비교하여 더 큰 재구성 시간 감소를 나타낸다는 것을 나타냈다.

실시예 3. 다양한 진탕기 조건 하에 TBA에 의한 재구성

재구성이 TBA와 조합되어 진탕기의 도움에 의해 또는 이것 없이 수행될 때 동결건조된 mAb1의 재구성 시간에 대한 효과는 하기와 같이 조사되었다. 이 연구를 위해, 70㎎/㎖에서 mAb1의 60㎖ 충전 용적을 함유하는 100㏄ 바이알을 사용하였다. TBA는 5% 또는 10% TBA의 최종 농도로 mAb1 용액에 첨가되었다.

100㏄ 바이알에서 동결건조된 mAb1은 무균 주사용수를 첨가함으로써 원래의 60㎖ 충전 용적으로 재구성되었다. 수동 재구성을 위한 샘플을 함유하는 바이알은 희석제의 첨가 직후에 5초 동안 와류되고, 이후 남은 고체가 시각 검사에 의해 용해된다는 것이 확인될 때까지 대략 10분마다 와류되었다. 진탕기에 의한 재구성을 위한 샘플을 함유하는 바이알은 희석제의 첨가 이후에 Novartis/Genentech 500rpm Xolair 진탕기(South San Francisco, 캘리포니아주)에 의해 아지테이션되었다. 때때로 남은 고체를 시각적으로 평가하기 위해 아지테이션을 중단하였다.

도 5는 진탕기의 사용에 의해 또는 이것 없이 재구성될 때 100㏄ 바이알에서 동결건조된 mAb1의 재구성 시간에 대한 TBA의 상이한 농도(5% 및 10% TBA)의 효과를 나타낸다. 도 5에 도시된 바대로, 동결건조 전에 항체 용액에 대한 5% TBA 또는 10% TBA의 첨가는 60㎖ 충전 용적을 갖는 100㏄ 바이알에서 mAb1의 재구성 시간을 감소시켰다. 특히, 대조군(진탕기 무) 조건 하에, 동결건조 전에 TBA의 첨가는 TBA 부재에 의해 110분 초과로부터 5% TBA에 의해 대략 60분 및 10% TBA에 의해 대략 80분으로 재구성 시간을 감소시켰다.

재구성이 500rpm에서 진탕기를 사용하여 수행될 때, 재구성 시간은 크게 감소하였다. 특히, 재구성이 진탕기에 의해 수행될 때, TBA의 첨가는 TBA 부재에 의해 대략 18분으로부터 5% TBA 또는 10% TBA에 의해 대략 10분으로 재구성 시간을 감소시켰다

종합하면, 이 결과는 TBA와 진탕기의 조합이 TBA 단독을 사용하는 것과 비교하여 더 큰 재구성 시간 감소를 나타낸다는 것을 나타냈다.

실시예 4. TBA, 진공 및 진탕기에 의한 재구성

재구성이 TBA와 조합되어 진탕기의 도움에 의해 진공 하에(100mTorr) 수행될 때 동결건조된 mAb1의 재구성 시간에 대한 효과는 하기와 같이 조사되었다. 이 연구를 위해, 70㎎/㎖에서 mAb1의 60㎖ 충전 용적을 함유하는 100㏄ 바이알을 사용하였다. TBA는 5% 또는 10% TBA의 최종 농도로 mAb1 용액에 첨가되었다. 진공 및 진탕기 조건은 실시예 3에서 상기 기재된 바와 같다.

도 6은 진탕기의 사용에 의해 100mTorr 하에 재구성될 때 100㏄ 바이알에서 동결건조된 mAb1의 재구성 시간에 대한 TBA의 상이한 농도(5% 및 10% TBA)의 효과를 나타낸다. 도 6에 도시된 바대로, 재구성은 TBA 무, 진공 무 및 진탕기 무(10분마다 5초 동안의 와류)에 의해 60㎖ 충전을 함유하는 100㏄ 바이알에 대략 110분이 걸렸다. 그러나, 진공, TBA 및 진탕기의 추가는 10분 미만으로 재구성 시간을 극적으로 감소시키고; 이들 3개의 매개변수의 조합은 95% 초과로 재구성 시간을 감소시켰다.

5% TBA, 진공 및 진탕기의 조합을 사용하여, 4.2gm의 단백질에 대한 재구성 시간은 평균 115분으로부터 5분으로 감소하여서, 신속한 재구성 시간을 갖는 고용량 바이오분자 제제의 제조를 허용한다.

도 7은 100㏄ 바이알에서 0% 또는 5%(v/v) tert-뷰틸 알코올을 함유하는 100㎖의 동결건조된 항체 제제에 대해 재구성 시간에 대한 진공, 진탕기, 및 진공 및 진탕기의 효과를 나타낸다.

실시예 5. 액체 안정성 연구

액체에서 mAb1 안정성에 대한 TBA의 효과를 조사하기 위한 안정성 연구를 수행하였다. mAb1 안정성은 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 및 이온 교환 크로마토그래피(IEC)에 의해 측정되었다. mAb1(70㎎/㎖)은 0% TBA, 1% TBA, 5% TBA, 10% TBA, 또는 20% TBA를 함유하는 50㏄ 바이알(25㎖ 충전)에 첨가되었다. 이후, 바이알은 7일 동안 2 내지 8℃ 또는 30℃에서 유지되고, 이 기간 동안 항체의 안정성은 SEC 및 IEC 분석에 의해 각각의 조건에 대해 0일, 3일 및 7일에 결정되었다.

SEC 분석은 Tosoh Biosciences TSK 겔 7.8㎜ ID x 30㎝ L 칼럼(캘리포니아주 사우스 샌프란시스코)에 의해 Agilent 1100 또는 1200 HPLC(캘리포니아주 산타 클라라)를 사용하여 수행되었다. IEC 분석은 Dionex ProPac WCX-10 BioLC(상표명) 4x250㎜ Analytical 칼럼(캘리포니아주 써니베일)에 의해 Agilent 1200 HPLC를 사용하여 수행되었다.

도 8a 및 도 8b에 도시된 바대로, SEC 분석이 7일에 걸쳐 단량체 피크의 높은 백분율의 유지를 나타내면서, mAb1은 2 내지 8℃ 또는 30℃에서 7일에 걸쳐 TBA의 다양한 농도의 첨가 시 양호한 안정성을 유지시켰다. 도 8b는 도 8a에 도시된 그래프의 확장된 버전을 나타낸다(즉, 도 8b는 30℃에서 20% TBA와 연관된 데이터를 포함하지 않으면서 도 8a의 데이터를 나타낸다).

도 9에 도시된 바대로, IEC 분석이 7일에 걸쳐 모든 사례에서 대조군과 필적하는 주요 피크의 유지를 나타내면서, mAb1은 2 내지 8℃ 또는 30℃에서 7일에 걸쳐 TBA의 다양한 농도의 첨가 시 양호한 안정성을 유지시켰다.

종합하면, 이 결과는 20% 미만(예를 들어, 1%, 5%, 10% TBA)의 TBA 농도에서, 항체의 안정성은 적어도 7일 동안 유지되지만; 20% TBA 조건에서 안정성의 약간의 손실이 관찰된다는 것을 나타낸다.

실시예 6. 수분 분석

동결건조 이후에 건조된 mAb의 수분 수준에 대한 동결건조 전의 mAb1 또는 mAb2에 대한 TBA 첨가의 효과는 조사되었다. mAb1 및 mAb2(둘 다 70㎎/㎖)는 상기 기재된 바대로 6㏄ 바이알에 첨가되었다. TBA는 0%, 5% 또는 10% TBA의 최종 농도로 mAb 용액에 첨가되었다. 이후, 샘플은 상기 기재된 바대로 동결건조되었다. 동결건조 이후에, 동결건조된 샘플(즉, 솔리드-스테이트 샘플)의 수분 함량은 Mettler Toledo DL31 Volumetric Karl Fischer Titrator(오하이오주 콜럼버스)를 사용하여 결정되었다.

하기 표 2에 기재된 바대로, TBA의 첨가는 동결건조된 항체 제제의 수분 수준에 영향을 미치지 않는다.

수분 함량은 비제어된 핵화(UCN) 및 제어된 핵화(CN) 하에 TBA의 다양한 농도(0%, 5%, 10%)에 의해 mAb1(50㏄ 바이알에서 40㎎/㎖)에 대해 추가로 조사되었다. 하기 표 3에 기재된 바대로, TBA의 첨가는 표준 동결 기법(비제어된 핵화)을 이용하여 동결건조된 항체 제제의 수분 수준에 영향을 미치지 않는다. TBA의 첨가는 제어된 핵화를 이용하여 동결건조된 항체 제제의 수분 함량을 감소시킨다.

표 1 및 표 2 둘 다에서 기재된 바대로 단일클론 항체 제제에 대한 TBA의 첨가는 TBA의 첨가가 UCN 케이크에서 수분 수준에서 더 많은 효과를 갖지 않고 CN 케이크에서 수분 수준을 감소시킨다는 것을 나타낸다.

실시예 7. 비표면적을 결정하기 위한 BET 분석

동결건조된 항체 케이크 구조의 비표면적에 대한 TBA의 다양한 농도의 효과는 조사되었고, mAb1 및 mAb2는 0%, 5% 또는 10% TBA에 의해 70㎎/㎖에서 6㏄ 바이알에 첨가되고, 상기 기재된 바대로 동결건조되었다. 비표면적 측정은 Quantachrome Quadrasorb Evo Automated Surface Area and Pore Size Analyzer(Boynton Beach(플로리다주))에 의해 수행되었다. 샘플을 3% 미만의 상대 습도를 갖는 글러브 박스에서 크러싱하고 테어드 벌브(tared bulb)에 로딩하였다. 대략 100㎎의 샘플 크기를 사용하였다. 잔류 물의 탈착을 적어도 3시간 동안 강한 진공에 의해 40℃에서 수행하였다. 이후, 다중점 Brunauer-Emmett-Teller(BET) 분석은 흡착질로서 Krypton을 사용하여 0.05 내지 0.24의 상대 압력 P/Po에 의해 수행되었다.

하기 표 4는 ㎡/그램으로 제시된 비표면적(SSA) 결정의 결과를 나타낸다. 하기 표 4에 기재된 바대로, 동결건조 전에 항체 제제에 대한 TBA의 첨가는 동결건조된 케이크의 표면적을 증가시켰다.

표면적은 비제어된 핵화(UCN) 및 제어된 핵화(CN)에 의해 TBA의 다양한 농도(0%, 5%, 10%)에 의해 mAb1(50㏄ 바이알에서 40㎎/㎖)에 대해 BET 분석을 이용하여 추가로 조사되었다. 비제어된 핵화(UCN) 및 제어된 핵화(CN)에 의해 mAb1 케이크에 대한 기공 크기는 하기 표 5에 기재되어 있다.

BET 분석은 TBA의 첨가가 이것이 동결건조 동안 승화하면서 가능하게는 수직 기공을 형성하는 TBA로 인해 기공 크기 및 동결건조된 케이크 구조의 차이를 발생시킨다는 것을 제안한다. (문헌[Nail, SL et al. Freeze-Drying of tert-Butanol/Water Cosolvent Systems: A Case Report on Formation of a Friable Freeze-Dried Powder of Tobramycin Sulfate. Journal of Pharmaceutical Sciences. Vol. 91, No. 4. April 2002. American Pharmacists Association] 참조.)

실시예 8. 동결건조된 항체 안정성 연구

후속하여 동결건조된 항체 조성물에서 항체의 안정성에 대한 예비동결건조 액체 항체/TBA 혼합물에서의 TBA의 효과를 조사하기 위한 안정성 연구를 수행하였다. 안정성은 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정되었다.

6㏄ 바이알을 70㎎/㎖의 항체(mAb1 또는 mAb2), 168mM 수크로스, 20mM 히스티딘 HCl(pH 5.8), 0.028% 폴리소르베이트 20, 및 0, 5, 또는 10%(v/v) TBA를 함유하는 2.5㎖의 제제에 의해 충전하였다. 바이알을 보존적 동결건조 사이클에 의해 동결건조시키고, 4개월 초과 동안 50℃에서 항온처리하였다. 샘플을 달마다 취하고, 크기 배제 크로마토그래피에 의한 뱃지 분석까지 -20℃에 놓았다. 도 10a는 백분율 단량체가 각각의 달마다의 시점에서 동결건조된 mAb1 조성물에서 유지된다는 것을 나타낸다. 도 10b는 동결건조된 mAb2 조성물에 대한 결과를 나타낸다.

결과는, 5% TBA가 예비동결건조 액체 항체/TBA 혼합물에 존재할 때, 50℃에서 동결건조된 mAb의 가속 분해가 동결건조된 mAb에 대해 통상적이고 허용 가능한 범위 내에 여전히 있다는 것을 나타낸다. 상기 기재된 바대로, TBA의 이 수준은 또한 동결건조된 mAb의 재구성 시간을 최소화하는 것으로 나타났다. 따라서, 예비동결건조 액체 항체 제제에 대한 5% TBA의 첨가는 큰(예를 들어, 50 또는 100cc) 바이알을 요하는 고용량 동결건조된 mAb 생성물, 및 재구성 시간이 더 작은 용적 바이알과 비교하여 유의미하게 더 길 수 있는 경우에 이점을 제공할 수 있다.

Claims

동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법으로서, (a) 적어도 360:1의 당:항체의 몰비로 상기 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, (b) tert-뷰틸 알코올(TBA)을 상기 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계로서, 상기 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 5용적% 내지 6용적%인 단계, (c) 상기 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, (d) 상기 동결된 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계, (e) 희석제에 의해 상기 동결건조된 항체 조성물을 재구성하는 단계를 포함하되, 상기 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 상기 항체의 양은 150㎎ 내지 11그램이고, TBA의 존재 하에 동결건조된 상기 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧은, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 액체 항체/TBA 혼합물 내의 TBA의 양은 5용적%인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 당:항체의 몰비는 360:1 내지 500:1인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, TBA는 상기 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계 바로 전에 상기 항체를 포함하는 액체 조성물에 첨가되는, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 항체는 전장 항체인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 상기 항체의 농도는 10㎎/㎖ 내지 250㎎/㎖인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 상기 항체의 농도는 150㎎/㎖ 내지 250㎎/㎖인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 상기 항체의 농도는 50㎎/㎖ 내지 100㎎/㎖인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 당은 수크로스 또는 트레할로스인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 액체 항체/TBA 혼합물은 유리 바이알에서 동결건조되는, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제10항에 있어서, 상기 유리 바이알은 6㏄ 바이알, 10㏄ 바이알, 15㏄ 바이알, 20㏄ 바이알, 25㏄ 바이알, 50㏄ 바이알, 또는 100㏄ 바이알인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제10항에 있어서, 상기 유리 바이알은 2.5㎖, 25㎖, 50㎖, 또는 100㎖의 충전 용적을 갖는, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, TBA의 존재 하에 동결건조된 상기 동결건조된 항체 조성물을 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체 조성물의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간과 비교하여 40% 내지 95% 감소되는, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, TBA의 존재 하에 동결건조된 상기 동결건조된 항체 조성물을 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체 조성물의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간과 비교하여 적어도 50% 감소되는, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 동결건조된 항체 조성물의 재구성은 상기 동결건조된 항체 조성물이 진공 하에 있는 조건 하에 수행되는, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제15항에 있어서, 상기 진공은 100Torr 미만인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제15항에 있어서, 상기 진공은 100mTorr인, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 동결건조된 항체 조성물의 재구성은 진탕기를 사용하여 수행되는, 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
동결건조에 적합한 액체 항체 제제(liquid antibody formulation)로서, 상기 제제는 항체, 당, 희석제, 및 TBA를 포함하고, 상기 액체 제제 내의 상기 TBA의 양은 5용적% 내지 6용적%이고, 상기 액체 제제 내의 상기 당의 양은 적어도 360:1의 당:항체의 몰비로 있고, 상기 항체를 포함하는 액체 제제 내의 상기 항체의 양은 150㎎ 내지 11그램이고, TBA의 존재 하에 동결건조된 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧은, 액체 항체 제제.
제19항에 있어서, 상기 액체 제제 내의 상기 TBA의 양은 5용적%인, 액체 항체 제제.
동결건조된 항체 조성물로서, 상기 동결건조된 항체 조성물은 적어도 360:1의 당:항체의 몰비로 상기 항체 및 당을 포함하는 액체 조성물을 제조하는 단계, tert-뷰틸 알코올(TBA)을 상기 액체 조성물에 첨가하여 액체 항체/TBA 혼합물을 형성하는 단계로서, 상기 액체 조성물 내의 상기 TBA의 양은 5용적% 내지 6용적%인 단계, 상기 액체 항체/TBA 혼합물을 동결시키는 단계, 및 상기 동결된 항체/TBA 혼합물을 동결건조시켜 동결건조된 항체 조성물을 형성하는 단계에 의해 제조되고, 상기 항체를 포함하는 액체 조성물 내의 상기 항체의 양은 150㎎ 내지 11그램이고, 희석제에 의한 상기 동결건조된 항체 조성물의 재구성 시, TBA의 존재 하에 동결건조된 항체를 재구성하기 위한 시간은 TBA의 부재 하에 동결건조된 동일한 항체의 동일한 양을 재구성하기 위한 시간보다 짧은, 동결건조된 항체 조성물.
제21항에 있어서, 상기 액체 조성물 내의 상기 TBA의 양은 5용적%인, 동결건조된 항체 조성물.
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