BR112019012686A2

BR112019012686A2 - métodos e formulações para a redução do tempo de reconstituição de polipeptídeos liofilizados

Info

Publication number: BR112019012686A2
Application number: BR112019012686-4A
Authority: BR
Inventors: Michael Heynes Christopher; John Lim Fredric; Angelo Eleazar Zarraga Isidro; Edward Luoma Jacob
Original assignee: Genentech Inc
Priority date: 2016-12-22
Filing date: 2017-12-21
Publication date: 2019-11-19
Also published as: TW201827078A; IL267439B; KR102579836B1; US20190389974A1; AR110431A1; US11377505B2; IL267439B2; JP2020503316A; US20220298263A1; AU2017382281A1; IL267439A; WO2018119312A1; WO2018119312A8; KR20190099212A; EP3558366A1; CN110049778A; CA3044686A1; TWI783958B; JP2023012465A; MX2019007433A

Abstract

a presente invenção refere-se a métodos e formulações úteis para reduzir o tempo de reconstituição de polipeptídeos liofilizados.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODOS E FORMULAÇÕES PARA A REDUÇÃO DO TEMPO DE RECONSTITUIÇÃO DE POLIPEPTÍDEOS LIOFILIZADOS. REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório US n^Q 62/438.232, depositado em 22 de dezembro de 2016, que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO [002] A presente invenção refere-se a métodos e formulações úteis para reduzir o tempo de reconstituição de polipeptídeos liofilizados.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [003] As moléculas biológicas para usos farmacêuticos ou outros usos são geralmente liofilizadas, um processo no qual a água é removida de uma composição líquida após ser congelada e colocada sob vácuo. Em geral, a liofilização aprimora a estabilidade de uma composição de polipeptideo pela remoção de água (uma vez que muitas degradações químicas biológicas são hidrolíticas) e pela diminuição da mobilidade geral do sistema (uma vez que o movimento dinâmico de cadeias laterais e moléculas é necessário para eventos de degradação química e física ocorrerem). Os polipeptídeos liofilizados são subsequentemente reconstituídos anteriormente ao uso, geralmente nos mesmos recipientes ou frascos nos quais os mesmos foram liofilizados e armazenados. É preferível um tempo de reconstituição curto, especialmente no contexto de reconstituição de uma composição de polipeptideo liofilizado medicinal (por exemplo, uma composição de anticorpo).

[004] Alta concentração e altas doses (por exemplo, quantidades de gramas) de produtos farmacêuticos liofilizados apresentam desafios únicos de processamento e manipulação, incluindo longos ciclos de

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2/60 liofilização e frequentemente longos tempos de reconstituição. (Vide, por exemplo, American Pharmaceutical Review, 13 (2010), pp. 31-32 34-38.) Uma abordagem para controlar o tempo de reconstituição de moléculas biológicas é diminuir a concentração de proteína, aumentando assim o volume de preenchimento. No entanto, esta abordagem pode ser inadequada para formulações de doses altas, nas quais o aumento do volume de preenchimento exigiría o uso de vários frascos por dose. Em tais casos, são necessárias formulações e métodos alternativos de liofilização.

[005] Foi demonstrado que a presença de álcool terc-butílico (TBA) em formulações de liofilização melhora o tempo de reconstituição de pequenas quantidades ou doses baixas (por exemplo, quantidades de miligramas) de moléculas biológicas (Vide, por exemplo, Publicação de Pedido de Patente U.S. n^Q 2014/0044717; Nail et al., (2002) J Pharma Sci. Vol. 91; Degobert et al., (2016) Drying Technology; Yong et al., (2009) Int J Pharmaceutics, 371:71-81; Teagarden e Baker (2002) Eur J Pharma Sci 15:115-133; Vessot e Andrieu (2012) Drying Technology (2012) 30:377-385).

[006] No entanto, o uso de TBA em um sistema de co-solvente em formulações liofilizadas de moléculas biológicas e seus efeitos no tempo de reconstituição e estabilidade de polipeptídeos não foi bem caracterizado em formulações de polipeptídeos contendo grandes quantidades de proteína (por exemplo, quantidades em grama) ou com altas concentrações de proteína.

[007] Existe, portanto, uma necessidade de métodos e formulações de moléculas biológicas liofilizadas para grandes quantidades e concentrações (ou seja, alta concentração, alta dose) composições de polipeptídeo, incluindo composições de anticorpo, que fornecem tempos de reconstituição reduzidos ou rápidos, bem como mantêm a integridade e estabilidade da molécula biológica. A presente invenção

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3/60 atende a essa necessidade fornecendo métodos e formulações para reduzir tempos de reconstituição de polipeptídeos liofilizados, nos quais os métodos e formulações mantêm a integridade e estabilidade dos polipeptídeos liofilizados, particularmente para composição de anticorpo liofilizado de formulações de alta concentração e/ou de alta dose.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [008] A presente invenção fornece métodos e formulações úteis para reduzir o tempo de reconstituição de polipeptídeos liofilizados, por exemplo, composição de anticorpo liofilizado.

[009] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar um polipeptídeo líquido/TBA, congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 0,5% e cerca de 20% em volume. Em outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA é selecionada dentre o grupo que consiste em 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em ainda outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar a mistura de poliPetição 870190056668, de 19/06/2019, pág. 17/89

4/60 peptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 1% a cerca de 20% em volume, cerca de 1% a cerca de 10% em volume, cerca de 1% a cerca de 5% em volume, cerca de 5% a cerca de 20% em volume, ou cerca de 5% a cerca de 10% em volume. Em uma modalidade, o TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o polipeptídeo imediatamente antes de congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA. Em certas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0010] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo, adicionar álcool tercbutílico (TBA) à composição líquida para formar um anticorpo líquido/TBA, congelando a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizando a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizada e reconstituindo a composição de anticorpo liofilizada com um diluente, em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menos do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 0,5% e cerca de 20% em volume. Em outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA é selecionada dentre o grupo que consiste em 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em ainda outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à compo

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5/60 sição de polipeptídeo líquido para formar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 1% a cerca de 20% em volume, cerca de 1% a cerca de 10% em volume, cerca de 1% a cerca de 5% em volume, cerca de 5% a cerca de 20% em volume, ou cerca de 5% a cerca de 10% em volume. Em algumas modalidades, o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida. Em uma modalidade, o TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o polipeptídeo imediatamente antes de congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal de humano. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal humanizado. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo quimérico. Em uma modalidade, o anticorpo é um fragmento de anticorpo. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo biespecífico. Em uma modalidade, o anticorpo é um conjugado anticorpo-fármaco (por exemplo, um imunoconjugado).

[0011] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, em que a concentração do peptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 10 mg/ml a cerca de 150 mg/mL, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar um polipeptídeo líquido/TBA, congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para re

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6/60 constituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a concentração do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 10 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 100 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 150 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml e cerca de 100 mg/ml, entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml a cerca de 125 mg/ml ou entre cerca de 50 mg/ml e cerca de 125 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 25 mg/ml, cerca de 40 mg/ml, cerca de 50 mg/ml, cerca de 60 mg/ml, cerca de 70 mg/ml, cerca de 100 mg/ml, cerca de 125 mg/ml, cerca de 150 mg/ml, cerca de 200 mg/ml ou cerca de 250 mg/ml. Em certas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 0,5% e cerca de 20% em volume. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0012] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, em que a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 150 mg a cerca de 11 gramas, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar um polipeptídeo líquido/TBA, congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, liofi

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7/60 lizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 150 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 750 mg, cerca de 1 grama, cerca de 2 gramas, cerca de 3 gramas, cerca de 4 gramas 5 gramas, cerca de 6 gramas, cerca de 7 gramas, cerca de 8 gramas, cerca de 9 gramas, cerca de 10 gramas ou cerca de 11 gramas. Em algumas modalidades, a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 150 mg e 11 gramas. Em algumas modalidades, a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 150 mg a cerca de 1 grama, entre cerca de 500 mg e cerca de 1 grama, entre cerca de 500 mg e cerca de 5 gramas, entre cerca de 1 grama e 5 gramas, entre cerca de 1 grama a cerca de 10 gramas, ou entre cerca de 5 gramas e cerca de 10 gramas. Em algumas modalidades, a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é superior a 11 gramas. Em certas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 0,5% e cerca de 20% em volume. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0013] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um mé

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8/60 todo para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar um polipeptídeo líquido/TBA, congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menos do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA, em que o tempo para reconstituir a composição de polipepídeos liofilizados que foi liofilizada na presença de TBA é reduzido em cerca de 40% a cerca de 95% em comparação com o tempo para reconstituir a mesma quantidade da mesma composição de polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o tempo para reconstituir a composição de polipéptido liofilizado que foi liofilizado na presença de TBA é reduzido em cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 50% a cerca de 60%, cerca de 60% a cerca de 70%, cerca de 70% a cerca de 80%, cerca de 80% a cerca de 90%, ou cerca de 90% a cerca de 95% em comparação com o tempo para reconstituir a mesma quantidade da mesma composição de polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0014] Em algumas modalidades da presente invenção, a mistura de polipeptídeo líquido/TBA é liofilizada em um frasco, em uma seringa (incluindo seringa de câmara dupla) ou em um cartucho. Em algumas

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9/60 modalidades, a mistura de polipeptídeo líquido/TBA é liofilizada em um frasco de vidro. Em algumas modalidades, o frasco é um frasco de 6 cc, um frasco de 10 cc, um frasco de 15 cc, um frasco de 20 cc, um frasco de 50 cc ou um frasco de 100 cc. Em algumas modalidades, o frasco de vidro é um frasco de 6 cc, um frasco de 10 cc, um frasco de 15 cc, um frasco de 20 cc, um frasco de 50 cc ou um frasco de 100 cc. Em algumas modalidades, os frascos têm uma capacidade ou volume de preenchimento de 0,1 ml, 0,3 ml, 0,5 ml, 1 ml, 2 ml, 2,5 ml, 5 ml, 10 ml, 20 ml, 25 ml, 50 ml ou 100 ml. Em algumas modalidades, os frascos de vidro têm uma capacidade ou volume de preenchimento de 0,1 ml, 0,3 ml, 0,5 ml, 1 ml, 2 ml, 2,5 ml, 5 ml, 10 ml, 20 ml, 25 ml, 50 ml ou 100 ml.

[0015] Em algumas modalidades, a reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado é realizada sob condições em que a reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado é realizada sob vácuo. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, adicionar álcool tercbutílico (TBA) à composição líquida para formar um polipeptídeo líquido/TBA, congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, em que a reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado é realizada sob condições nas quais a composição de polipeptídeo liofilizado está sob vácuo e em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o vácuo é um vácuo profundo. Em algumas modalidades, o vácuo é um

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10/60 vácuo parcial. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 100 Torr. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 50 Torr. Em certas modalidades, o vácuo está entre 100 mTorr e 50 Torr. Em uma modalidade, o vácuo está a 100 mTorr. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0016] Em algumas modalidades, a reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado é realizada usando um agitador, tal como um agitador mecânico. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar um polipeptídeo líquido/TBA, congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente usando um agitador, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o frasco ou recipiente é colocado no agitador. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0017] Em algumas modalidades, a reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado é realizada sob condições nas quais a composição de polipeptídeo liofilizado está sob um vácuo e usando um

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11/60 agitador. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, adicionar álcool tercbutílico (TBA) à composição líquida para formar um polipeptídeo líquido/TBA, congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente usando um agitador, em que a reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado é realizada sob condições nas quais a composição de polipeptídeo liofilizado está sob vácuo e em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o vácuo é um vácuo profundo. Em algumas modalidades, o vácuo é um vácuo parcial. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 100 Torr. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 50 Torr. Em certas modalidades, o vácuo está entre 100 mTorr e 50 Torr. Em uma modalidade, o vácuo está a 100 mTorr. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0018] A presente invenção fornece formulações líquidas de polipeptídeos adequadas para liofilização. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece formulações de polipeptídeos líquidos adequadas para liofilização, em que a formulação compreende o polipeptídeo, um diluente e TBA, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na

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12/60 ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na formulação líquida é dentre cerca de 0,5-20% em volume. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na formulação líquida é selecionada dentre o grupo que consiste em 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 1% a cerca de 20% em volume, entre cerca de 1% a cerca de 10% em volume, entre cerca de 1% a cerca de 5% em volume, entre cerca de 5% a cerca de 20% em volume, ou entre cerca de 5% a cerca de 10% em volume. Em uma modalidade, o TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o polipeptídeo imediatamente antes de congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA. Em certas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e a formulação compreende adicionalmente um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1.

[0019] A presente invenção fornece uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que a composição de polipeptídeo liofilizado é produzida ao preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA, congelar o polipeptídeo líquido/TBA, liofilizar a mistura polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que após reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na formulação líquida é dentre cerca de 0,5% a cerca de 20% em volume. Em algumas modalidades, a

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13/60 quantidade de TBA na formulação líquida é selecionada dentre o grupo que consiste em 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeo líquido para formar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA é dentre cerca de 1% a cerca de 20% em volume, entre cerca de 1% a cerca de 10% em volume, entre cerca de 1% a cerca de 5% em volume, entre cerca de 5% a cerca de 20% em volume, ou entre cerca de 5% a cerca de 10% em volume. Em uma modalidade, o TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o polipeptídeo imediatamente antes de congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA. Em certas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo. Em certas modalidades, a adição de TBA à formulação de polipeptídeos não tem efeito na integridade ou estabilidade do polipeptídeo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo é um anticorpo e a composição de polipeptídeo liofilizado é produzido ao preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e uma açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos 360:1 antes de adicionar TBA à composição líquida.

[0020] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizando a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na pre

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14/60 sença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na presença de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de polipeptídeos líquidos para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é selecionada dentre o grupo que consiste em 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume. Em ainda outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% e cerca de 10% em volume. Em uma modalidade, o TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o anticorpo imediatamente antes de congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA. Em certas modalidades, o anticorpo é um anticorpo completo. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal de humano. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo monoclonal humanizado. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo quimérico. Em uma modalidade, o anticorpo é um fragmento de anticorpo. Em uma modalidade, o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno tal como Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; diabodies; anticorpos lineares; moléculas de anticorpos de cadeia única (por exemplo, scFv); e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos. Em uma modalidade, o anticorpo é um anticorpo biespecífico. Em uma modalidade, o anticorpo é um conjugado anticorpofármaco (por exemplo, um imunoconjugado). Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose ou trealose. Em certas modalidades, a adição de TBA à composição líquida não tem efeito na integridade ou estabilidade do anticorpo.

[0021] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um mé

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15/60 todo para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, em que a concentração do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo é dentre cerca de 10 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na presença de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume. Em algumas modalidades, a concentração do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo é dentre cerca de 25 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 100 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 150 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml a cerca de 125 mg/ml ou entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 125 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 25 mg/ml, cerca de 40 mg/ml, cerca de 50 mg/ml, cerca de 60 mg/ml, cerca de 70 mg/ml, cerca de 100 mg/ml, cerca de 125 mg/ml, cerca de 150 mg/ml, cerca de 200 mg/ml ou cerca de 250 mg/ml. Em algumas modalidades, o açúcar

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16/60 é sacarose ou trealose. Em certas modalidades, a adição de TBA à composição líquida não tem efeito na integridade ou estabilidade do anticorpo.

[0022] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, em que a quantidade do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo é dentre cerca de 150 mg a cerca de 11 gramas, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na presença de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume. Em algumas modalidades, a quantidade do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo é de cerca de 150 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 750 mg, cerca de 1 grama, cerca de 2 gramas, cerca de 3 gramas, cerca de 4 gramas, cerca de 5 gramas, cerca de 6 gramas, cerca de 7 gramas, cerca de 8 gramas, cerca de 9 gramas, cerca de 10 gramas ou cerca de 11 gramas. Em algumas modalidades, a quantidade do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo é dentre cerca de 150 mg a cerca de 1 grama, entre cerca de 500 mg e cerca de 1 gra

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17/60 ma, entre cerca de 500 mg e cerca de 5 gramas, entre cerca de 1 grama e 5 gramas, entre cerca de 1 grama a cerca de 10 gramas, ou entre cerca de 5 gramas e cerca de 10 gramas. Em algumas modalidades, a quantidade do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo é superior a 11 gramas. Em algumas modalidades, o açúcar é uma sacarose ou uma trealose. Em certas modalidades, a adição de TBA à composição líquida não tem efeito na integridade ou estabilidade do anticorpo.

[0023] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA, em que o tempo para reconstituir a composição de anticorpo liofilizado que foi liofilizado na presença de TBA é reduzido em cerca de 40% a cerca de 95% em comparação com o tempo para reconstituir a mesma quantidade da mesma composição de anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume. Em algumas modalidades, o tempo para reconstituir a composição de anticorpo liofilizado que foi liofilizada

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18/60 na presença de TBA é reduzido em cerca de 40%, em cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 50% a cerca de 60%, cerca de 60% a cerca de 70%, cerca de 70% a cerca de 80%, cerca de 80% a cerca de 90%, ou cerca de 90% a cerca de 95% em comparação com o tempo para reconstituir a mesma quantidade da mesma composição de anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose ou trealose. Em certas modalidades, a adição de TBA à composição líquida não tem efeito na integridade ou estabilidade do anticorpo.

[0024] Em algumas modalidades da presente invenção, a mistura de anticorpo líquido/TBA é liofilizada em um frasco, em uma seringa (incluindo seringa de câmara dupla) ou em um cartucho. Em algumas modalidades, a mistura de anticorpo líquido/TBA é liofilizada em um frasco de vidro. Em algumas modalidades, o frasco é um frasco de 6 cc, um frasco de 10 cc, um frasco de 15 cc, um frasco de 20 cc, um frasco de 50 cc ou um frasco de 100 cc. Em algumas modalidades, os frascos têm uma capacidade ou volume de preenchimento de 0,1 ml, 0,3 ml, 0,5 ml, 1 ml, 2 ml, 2,5 ml, 5 ml, 10 ml, 20 ml, 25 ml, 50 ml ou 100 ml.

[0025] Em algumas modalidades, a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado é realizada sob condições em que a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado é realizada sob vácuo. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, adicionar álcool tercbutílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a

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19/60 mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente, em que a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado é realizada sob condições nas quais a composição de anticorpo liofilizado está sob um vácuo, e adicionalmente em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume. Em algumas modalidades, o vácuo é um vácuo profundo. Em algumas modalidades, o vácuo é um vácuo parcial. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 100 Torr. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 50 Torr. Em certas modalidades, o vácuo está entre 100 mTorr e 50 Torr. Em uma modalidade, o vácuo está a 100 mTorr.

[0026] Em algumas modalidades, a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado é realizada usando um agitador, tal como um agitador mecânico. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente usando um agitador, em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofi

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20/60 lizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o frasco ou recipiente é colocado no agitador. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume.

[0027] Em algumas modalidades, a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado é realizada sob condições nas quais a composição de anticorpo liofilizado está sob um vácuo e usando um agitador. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, em que o método compreende preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, adicionar álcool tercbutílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente usando um agitador, em que a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado é realizada sob condições nas quais a composição de anticorpo liofilizado está sob um vácuo, e adicionalmente em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, o vácuo é um vácuo profundo. Em algumas modalidades, o vácuo é um vácuo parcial. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 100 Torr. Em certas modalidades, o vácuo é menor do que 50 Torr. Em certas modalidades, o vácuo está entre 100 mTorr e 50 Torr. Em uma modalida

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21/60 de, o vácuo está a 100 mTorr. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume.

[0028] As etapas dos métodos da presente divulgação podem ser realizadas em uma pessoa ou entidade, ou as etapas podem ser realizadas por várias pessoas ou várias entidades. As etapas podem ser realizadas por várias pessoas ou várias entidades direcionadas a uma pessoa ou entidade. Por exemplo, uma pessoa ou entidade pode preparar a composição líquida compreendendo o polipeptídeo e um açúcar, e uma pessoa ou entidade diferente pode adicionar TBA à composição líquida para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA antes de congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA. Em outro exemplo, uma pessoa ou entidade pode liofilizar a mistura polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado, e uma pessoa ou entidade diferente pode reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente.

[0029] Nesse sentido, em um aspecto, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeos ou anticorpos liofilizados, no qual o método compreende adicionar álcool terc-butílico (TBA) a uma composição líquida que inclui a polipeptídeo ou anticorpo e um açúcar na razão molar de pelo menos cerca de 360:1 para formar uma mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido ou anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo ou anticorpo liofilizado e reconstituir a composição de polipeptídeos ou anticorpos liofilizados com um diluente, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo ou anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o

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22/60 tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo ou anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume.

[0030] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de um polipeptídeo liofilizado ou composição de anticorpo, em que o método compreende adicionar álcool terc-butílico (TBA) a uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo ou anticorpo e um açúcar em uma razão molar de pelo menos cerca de 360:1 para formar uma mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 20% em peso, congelar a mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA e liofilizar a mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeos ou anticorpos liofilizados, em que a composição de polipeptídeos ou anticorpos liofilizados é subsequentemente reconstituída por um diluente, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo ou anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo ou anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na mistura de polipeptídeo ou anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% a 6% em volume.

[0031] A presente invenção fornece formulações de anticorpos líquidos adequadas para liofilização. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece formulações de anticorpos líquidos adequadas para liofilização, em que a formulação compreende o anticorpo, um açúcar, um diluente e TBA, em que a quantidade de TBA na formulação líquida é entre cerca de 5% -20% em volume, em que a quantidade de açúcar na formulação líquida está em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, e em que o tempo para

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23/60 reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir o mesmo quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na formulação líquida é selecionada dentre o grupo que consiste em 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% e cerca de 10% em volume. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na formulação líquida é entre cerca de 5% a 6% em volume. Em uma modalidade, o TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o anticorpo imediatamente antes de congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA. Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose ou trealose. Em certas modalidades, a presença de TBA na formulação de anticorpos líquida não tem efeito na integridade ou estabilidade do anticorpo.

[0032] A presente invenção fornece uma composição de anticorpo liofilizado, em que a composição de anticorpo liofilizado é produzida ao preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% a 20% em volume, congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado, em que mediante reconstituição da composição de anticorpo liofilizado com um diluente, o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA na formulação líquida é selecionada dentre o grupo que consiste em 5%,

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7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% e cerca de 10% em volume. Em algumas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição de anticorpos líquida para formar a mistura de anticorpo líquido/TBA é dentre cerca de 5% e cerca de 6% em volume. Em uma modalidade, o TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o anticorpo imediatamente antes de congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA. Em algumas modalidades, o açúcar é sacarose ou trealose. Em certas modalidades, a adição de TBA à composição líquida não tem efeito na integridade ou estabilidade do anticorpo na composição líquida ou na composição de anticorpo liofilizado.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0033] A Figura 1 apresenta dados que mostram tempos de reconstituição para uma formulação de anticorpos liofilizados contendo 0%, 0,5%, 1%, 5% e 20% (v/v) de álcool terc-butílico.

[0034] A Figura 2 apresenta dados que mostram tempos de reconstituição para uma formulação de anticorpos liofilizados de 2,5 ml contendo 0%, 5% e 10% (v/v) de álcool terc-butílico liofilizado em frascos de 6cc.

[0035] A Figura 3 apresenta dados que mostram tempos de reconstituição para uma formulação de 25 mL de anticorpos liofilizados contendo 0%, 1%, 5%, 10% e 20% (v / v) de álcool terc-butílico liofilizado em frascos de 50 cc.

[0036] A Figura 4 apresenta dados que mostram o efeito do vácuo nos tempos de reconstituição para uma formulação de 60 ml de anticorpos liofilizados contendo 0%, 5% e 10% (v/v) de álcool terc-butílico liofilizado em frascos de 100 cc.

[0037] A Figura 5 apresenta dados que mostram o efeito de um

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25/60 agitador nos tempos de reconstituição para uma formulação de 100 ml_ de anticorpos liofilizados contendo 0%, 5% e 10% (v/v) de álcool tercbutílico liofilizado em frascos de 100 cc.

[0038] A Figura 6 apresenta dados que mostram o efeito do vácuo e um agitador nos tempos de reconstituição para uma formulação de 100 ml de anticorpos liofilizados contendo 0%, 5% e 10% (v/v) de álcool terc-butílico liofilizado em frascos de 100 cc.

[0039] A Figura 7 estabelece os dados que mostram o efeito do vácuo, agitador e vácuo e agitador nos tempos de reconstituição para uma formulação de 100 ml de anticorpo liofilizado contendo 0% ou 5% (v/v) de álcool terc-butílico em frascos de 100 cc.

[0040] As Figuras 8A e 8E3 estabelecem dados que mostram uma análise de estabilidade de 7 dias de uma formulação de anticorpos contendo 0%, 1%, 5%, 10% e 20% (v/v) de álcool terc-butílico de 2 a 8°C ou 30°C conforme medido por cromatografia de exclusão por tamanho (SEC).

[0041] A Figura 9 apresenta dados que mostram uma análise de estabilidade de 7 dias de uma formulação de anticorpos contendo 0%, 1%, 5%, 10% e 20% (v / v) de álcool terc-butílico a 2-8°C ou 30°C medido por IEC.

[0042] As Figuras 10A e 10B apresentam dados que mostram a análise de estabilidade de 4 meses de formulações de anticorpos liofilizados a 50°C que foram gerados a partir de misturas de anticorpos líquidos de pré-liofilização contendo 0%, 5% ou 10% (v / v) de álcool terc-butílico. As porcentagens de monômero foram medidas por SEC. A Figura 10A mostra resultados para mAb1 e a Figura 10B mostra resultados para mAb2.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0043] A presente invenção fornece, inter alia, formulações de polipeptídeos, formulações de liofilização, métodos de preparar formula

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26/60 ções de liofilização e métodos e formulações úteis para reduzir o tempo de reconstituição de um polipeptídeo liofilizado.

Definições [0044] O termo anticorpo neste documento é usado no sentido o mais amplo e engloba várias estruturas de anticorpo, incluindo mas não limitado a anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos bio específicos), e os fragmentos de anticorpo por tanto tempo quanto eles exibam a atividade de ligação de antígeno desejada.

[0045] Um fragmento de anticorpo se refere a uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma parte de um anticorpo intacto que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não estão limitados a Fv, Fab, Fab', Fab’-SH, F(ab')₂; diabodies; anticorpos lineares; moléculas de anticorpo de cadeia única (por exemplo, scFv) e anticorpos multiespecíficos formados de fragmentos de anticorpo.

[0046] O termo anticorpo quimérico se refere a um anticorpo no qual uma parte da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma fonte ou espécie específica, enquanto o restante da cadeia pesada e/ou leve é derivado de uma fonte ou espécie diferente.

[0047] A classe de um anticorpo se refere ao tipo de domínio constante ou região constante possuída por sua cadeia pesada. Existem cinco classes principais de anticorpos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, e várias destas podem ser ainda divididas em subclasses (isótipos), por exemplo, IgGi, lgG₂, IgGs, lgG4, IgAi, e lgA₂. Os domínios constantes da cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são denominados α,δ,ε,γθ μ, respectivamente.

[0048] Os termos anticorpo de completo, anticorpo intacto e anticorpo inteiro são usados intercambiavelmente neste documento para se referir a um anticorpo com uma estrutura substancialmente

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27/60 similar a uma estrutura de anticorpo nativo ou com cadeias pesadas contendo uma região Fc, conforme definido neste documento.

[0049] Um anticorpo humano é aquele que tem uma sequência de aminoácidos que corresponde a de um anticorpo produzido por um ser humano ou uma célula humana ou derivado de uma fonte não humana que utiliza repertórios de anticorpo humano ou outras sequências codificadoras de anticorpo humano. Tal definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado compreendendo resíduos de ligação ao antígeno não humano.

[0050] O anticorpo humanizado diz respeito a um anticorpo quimérico compreendendo resíduos de aminoácidos de HVRs não humanos e resíduos de aminoácidos de FRs humanas. Em determinadas modalidades, um anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e normalmente dois, domínios variáveis, nos quais todas ou substancialmente todas as HVRs (por exemplo, CDRs) correspondem àquelas de um anticorpo não humano, e todas ou substancialmente todas as FRs correspondem àquelas de um anticorpo humano. Um anticorpo humanizado pode compreender opcionalmente pelo menos uma porção de uma região constante do anticorpo derivado de um anticorpo humano. Uma forma humanizada de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo não humano, se refere a um anticorpo que foi submetido à humanização.

[0051] Um imunoconjugado é um anticorpo conjugado a uma ou mais moléculas heterólogas, incluindo, mas não se limitando a um agente citotóxico.

[0052] Um conjugado anticorpo-fármaco é um anticorpo conjugado a uma ou mais moléculas heterólogas, incluindo, mas não se limitando a um agente citotóxico.

[0053] Um indivíduo ou sujeito é um mamífero. Os mamíferos incluem, mas não estão limitados a, animais domésticos (por exemplo,

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28/60 vacas, ovelha, gatos, cães e cavalos), primatas (por exemplo, primatas humanos e não humanos, tais como macacos), coelhos e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Em determinadas modalidades, o indivíduo ou sujeito é um ser humano.

[0054] Um anticorpo isolado é um o qual foi separado de um componente de seu ambiente natural. Em algumas modalidades, um anticorpo é purificado para mais do que 95% ou 99% de pureza, conforme determinado, por exemplo, por eletroforese (por exemplo, SDSPAGE, focagem isoelétrica (IEF), eletroforese capilar) ou cromatografia (por exemplo, troca iônica ou HPLC de fase reversa). Para análise crítica dos métodos para a avaliação da pureza do anticorpo, vide, por exemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. 6 848:79-87 (2007).

[0055] O termo anticorpo monoclonal conforme usado neste documento, se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos e/ou se ligam ao mesmo epítopo, exceto por possíveis anticorpos variantes, por exemplo, contendo mutações de ocorrência natural ou originados durante a produção de uma preparação de anticorpo monoclonal, essas variantes geralmente estando presentes em quantidades menores. Em contraste com as preparações de anticorpos policlonais, as quais tipicamente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monoclonal é direcionado a um único determinante em um antígeno. Assim, o modificador monoclonal indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como exigente de produção do anticorpo por qualquer método específico. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados de acordo com a presente invenção podem ser feitos por uma variedade de técnicas, inclu

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29/60 indo, mas não se limitando ao método de hibridoma, métodos de DNA recombinante, métodos de exibição de fago e métodos que utilizam animais transgênicos contendo todos ou parte dos loci de imunoglobulina humana. Esses métodos e outros métodos exemplificativos para produzir anticorpos monoclonais são descritos neste documento.

[0056] Um anticorpo nu se refere a um anticorpo que não está conjugado com uma fração heteróloga (por exemplo, uma fração citotóxica) ou radiomarcação. O anticorpo puro pode estar presente em uma formulação farmacêutica.

[0057] Anticorpos nativos se referem a moléculas de imunoglobulina de ocorrência natural com estruturas variáveis. Por exemplo, os anticorpos IgG nativos são glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150.000 daltons, compostos de duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas que são ligadas por dissulfeto. Do terminal N ao C, cada cadeia pesada tem uma região variável (VH), também denominada de domínio pesado variável ou um domínio variável de cadeia pesada, seguido por três domínios constantes (CH1, CH2 e CH3). Da mesma forma, a partir do terminal N para C, cada cadeia leve tem uma região variável (VL), também chamada de domínio leve variável ou domínio variável de cadeia leve, seguido por um domínio leve constante (CL). A cadeia leve de um anticorpo pode ser atribuída a um dos dois tipos, denominados kappa (κ) e lambda (λ), com base na sequência de aminoácidos de seu domínio constante.

[0058] O termo formulação farmacêutica se refere a uma preparação em cuja forma permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo contido nela seja eficaz, e que não contém componentes adicionais que sejam inaceitável mente tóxicos a um sujeito ao qual a formulação será administrada.

[0059] Um veículo farmaceuticamente aceitável se refere a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente do ingrediente

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30/60 ativo, que é não tóxico a um sujeito. Um veículo farmaceuticamente aceitável inclui, mas não está limitado a, um tampão, excipiente, estabilizante, protetor criogênico (por exemplo, sacarose, trealose) ou conservante. Um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável inclui água estéril para injeção.

[0060] Conforme usado neste documento, tempo de reconstituição e variações gramaticais do mesmo referem-se à quantidade de tempo necessária para uma molécula liofilizada ser dissolvida e/ou suspensa em uma forma líquida. Por exemplo, o tempo de reconstituição inclui, mas não está limitado a, o tempo necessário para um pélete ou bolo seco (ou seja, liofilizado) de um polipeptídeo para se tornar suspenso em água ou um tampão seguinte à liofilização. Um tempo de reconstituição de redução ou redução ou redução e variações gramaticais do mesmo significa que é necessário menos tempo para uma quantidade de um polipeptídeo liofilizado sob uma primeira formulação e/ou condição para suspender em um líquido em comparação com a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado sob uma segunda formulação e/ou condição e suspenso no mesmo líquido.

[0061] Conforme usado neste documento, o termo bolo ou bolo liofilizado ou bolo de liofilização (bolo de lio) refere-se a uma composição ou formulação de um polipeptídeo liofilizado (isto é, liofilizado). [0062] Como usado neste documento, tratamento (e variações gramaticais do mesmo tal como tratar ou tratando) se refere à intervenção clínica na tentativa de alterar o curso natural do indivíduo sendo tratado e pode ser realizado para fins de profilaxia ou durante o curso da patologia clínica. Os efeitos desejáveis do tratamento incluem, mas não estão limitados a, prevenção da ocorrência ou recorrência da doença, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, prevenção de metástase, diminuição da taxa de progressão da doença, melhora ou

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31/60 paliação do estado da doença e remissão ou prognóstico aprimorado. Em algumas modalidades, os anticorpos da invenção são usados para retardar o desenvolvimento de uma doença ou reduzir a progressão de uma doença.

Formulações Farmacêuticas [0063] Formulações farmacêuticas de um anticorpo conforme descrito neste documento são preparados pela mistura de tal anticorpo tendo o desejado grau de pureza com uma ou mais transportadoras farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington's Pharmaceutical Sciences 16a. ed., Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Veículos farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos aos recebedores nas dosagens e concentrações empregadas, e incluem, mas não estão limitados a: tampões, tais como fosfato, citrato, e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; álcool fenólico, butílico ou benzílico; alquilparabenos, tais como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina, ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos, e outros carboidratos, incluindo glicose, manose, ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal, tais como sódio; complexos metálicos (por exemplo complexos de Znproteína); e/ou surfactantes não iônicos, tais como polietilenoglicol (PEG). Veículos farmaceuticamente aceitáveis exemplificativos neste documento incluem adicionalmente agentes de dispersão de fármacos

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32/60 intersticiais, tais como glicoproteínas de hialuronidase ativas neutras solúveis (sHASEGP), por exemplo, glicoproteínas da hialuronidase PH-20 solúveis humanas, tais como rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Determinados sHASEGPs exemplificativos e métodos de uso, incluindo rHuPH20, são descritos na Publicação de Patente US n^Q 2005/0260186 e 2006/0104968. Em um aspecto, uma sHASEGP é combinada com uma ou mais glicosaminoglicanases adicionais, tais como condroitinases.

[0064] As formulações de anticorpo liofilizadas exemplares são descritas na Patente US n^Q 6.267.958. Formulações de anticorpo aquosas incluem aquelas descritas na Patente US n^Q 6.171.586 e W02006/044908, as últimas formulações incluindo um tampão de histidina-acetato. Em certas modalidades, uma formulação de anticorpos da presente invenção compreende uma composição de anticorpos líquida e TBA, em que o TBA é adicionado à composição de anticorpos líquida antes da liofilização. Em alguns aspectos, uma formulação de anticorpos da presente invenção compreende uma quantidade de TBA na composição de anticorpos líquida selecionada dentre o grupo que consiste em 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% e 20% em volume. Em outras modalidades, a quantidade de TBA na composição de anticorpos líquida é dentre cerca de 1% a cerca de 20% em volume, entre cerca de 1% a cerca de 10% em volume, entre cerca de 1% a cerca de 5% em volume, entre cerca de 5% a cerca de 20% em volume, ou entre cerca de 5% a cerca de 10% em volume.

[0065] Em algumas modalidades, as composições e formulações de anticorpos da presente divulgação compreendem o anticorpo e um açúcar em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1. Em algumas modalidades, a razão molar de açúcar:anticorpo é pelo menos cerca de 360:1, pelo menos cerca de 380:1, pelo menos cerca de 400:1, pelo menos cerca de 420:1, pelo

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33/60 menos cerca de 440:1, pelo menos cerca de 460:1, pelo menos cerca de 480:1, ou pelo menos cerca de 500:1, incluindo todos os valores entre estes números. Em algumas modalidades, a razão é entre cerca de 360:1 e cerca de 500:1. O açúcar pode ser sacarose ou trealose ou qualquer outro açúcar conhecido na técnica para melhorar a estabilidade das proteínas durante a liofilização. Conforme usado neste documento, o peso de trealose na formulação para calcular a razão em peso do anticorpo para a trealose é baseado na quantidade de trealose anidra (PM 342,30). Se forem usadas outras formas de trealose (por exemplo, trealose di-hidratada), o peso da trealose na formulação deve ser convertido a partir do peso de trealose di-hidratada com a mesma concentração molar. Ao calcular a razão molar de açúcar:anticorpo, um peso molecular de 150 kDa pode ser assumido para o anticorpo.

[0066] A formulação neste documento também pode conter mais de um ingrediente ativo conforme necessário para a indicação específica sendo tratada, preferencialmente aquelas com atividades complementares que não prejudiquem umas às outras. Tais ingredientes ativos estão adequadamente presentes juntamente com quantidades que são eficazes para a finalidade pretendida.

[0067] Preparações de liberação prolongada podem ser preparadas. Os exemplos adequados de preparações de liberação prolongada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o anticorpo, cujas matrizes estão na forma de artigos moldados, por exemplo, filmes ou microcápsulas.

[0068] As formulações a serem usadas para a administração in vivo são geralmente estéreis. A esterilidade pode ser facilmente realizada, por exemplo, pela filtração através de membranas de filtração estéreis.

[0069] A presente invenção fornece, inter alia, formulações de po

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34/60 lipeptídeos, formulações de liofilização e métodos para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado. As metodologias e técnicas de liofilização são bem conhecidas na técnica. Geralmente, o processo de liofilização é o seguinte: uma substância dissolvida (por exemplo, molécula biológica, polipeptídeo) é congelada em sua embalagem final ou recipiente de armazenamento (por exemplo, frasco, seringa ou cartucho) a baixa temperatura (por exemplo, -60 °C). A liofilização, ou liofilização, é um processo no qual a água é removida de um produto depois de congelada e colocada sob vácuo, permitindo que o gelo mude diretamente de sólido para vapor sem passar por uma fase líquida. O processo envolve três processos separados e interdependentes: congelamento, secagem primária (sublimação) e secagem secundária (dessorção). O que resulta é um bolo de liofilização seco (isto é, um bolo de lio seco), cuja estrutura, incluindo sua densidade, tamanho de poro, volume total de poros e área de superfície são controlados pela produção (por exemplo, diluente, temperatura, vácuo, condições de secagem, condições de congelamento, etc.). Com o armazenamento adequado, as moléculas biológicas e os polipeptideos liofilizados normalmente permanecem estáveis por 2 ou 3 anos.

[0070] Os recipientes de liofilização incluem, por exemplo, frascos, seringas ou cartuchos. Vários recipientes de liofilização de vários tamanhos estão comercialmente disponíveis, muitos dos quais são feitos de vidro. Os tamanhos dos frascos para uso na liofilização incluem, mas não estão limitados a, frascos de 6cc, frascos de 10cc, frascos de 15cc, frascos de 20 cc, frascos de 50 cc, frascos de 100 cc, etc. Estão também disponíveis frascos de liofilização de várias capacidades (ou volumes de enchimento), incluindo frascos com uma capacidade ou volume de enchimento de 0,1 ml, 0,3 ml, 0,5 ml, 1 ml, 2 ml, 2,5 ml, 5 ml, 10 ml, 20 ml, 25 ml, 50 ml. 100 ml, etc.

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35/60 [0071] A presente invenção fornece um método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado, compreendendo o método: (a) preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, (b) adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA, (c) congelar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA, (d) liofilizar a mistura de polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado (ou seja, um bolo de polipeptídeo liofilizado), (e) reconstituir a composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA.

[0072] A presente invenção fornece métodos e formulações para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado na qual o TBA é adicionado a uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo antes da liofilização. Em certas modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 0,5% em volume a cerca de 20% em volume, de cerca de 1% em volume a cerca de 20% em volume, de cerca de 1% em volume a cerca de 10% em volume, de cerca de 1% em volume a cerca de 5% em volume, de cerca de 5% em volume a cerca de 20% em volume, de cerca de 5% em volume a cerca de 10% em volume, ou de cerca de 10% em volume a cerca de 20% em volume.

[0073] Em outras modalidades, a quantidade de TBA adicionada à composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15%, 17,5% ou 20% em volume. Em uma modalidade, a quantidade de TBA adicionada à composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 5% a 6% em volume. Em uma modalidade, a quantidade de TBA adicionada à

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36/60 composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 5% em volume. Em uma modalidade, a quantidade de TBA adicionada à composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de 4,5%, 4,6%, 4,7%, 4,8%, 4,9%, 5%, 5,1%, 5,2%, 5,3%, 5,4%, 5,5%, 5,6%, 5,7%, 5,8%, 5,9%, 6%, 6,1%, ou 6,2%. Em uma modalidade, a quantidade de TBA adicionada à composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 10% em volume. Em uma modalidade, a quantidade de TBA adicionada à composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 20% em volume.

[0074] Os métodos e formulações da presente invenção são eficazes na redução do tempo de reconstituição de várias concentrações de um polipeptídeo e, particularmente, úteis e eficazes na redução do tempo de reconstituição de composições de alta concentração de polipeptídeo. Por exemplo, a presente invenção fornece métodos e formulações eficazes na redução do tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado ao adicionar TBA a uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo antes da liofilização, na qual a composição líquida compreendendo o polipeptídeo tem uma alta concentração de polipeptídeo. Em certas modalidades, a concentração do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 10 mg/ml e 250 mg/ml. Em certas modalidades, a concentração do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 25 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 100 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 150 mg/mml a cerca de 250 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml a cerca de 125 mg/ml, ou entre cerca de 50 mg/ml a cerca de 125 mg/ml. Em algumas modalidades, a concentração do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é de cerca de 25 mg/ml, cerca

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37/60 de 40 mg/ml, cerca de 50 mg/ml, cerca de 60 mg/ml, cerca de 70 mg/ml, cerca de 100 mg/ml, cerca de 125 mg/ml, cerca de 150 mg/ml, cerca de 200 mg/ml ou cerca de 250 mg/ml.

[0075] Os métodos e formulações da presente invenção são eficazes na redução do tempo de reconstituição de várias quantidades de um polipeptídeo. Por exemplo, a presente invenção fornece métodos e formulações eficazes na redução do tempo de reconstituição de uma composição de polipeptídeo liofilizado ao adicionar TBA a uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo antes da liofilização, na qual a composição líquida compreendendo o polipeptídeo tem grande quantidade do polipeptídeo. Em certas modalidades, a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é dentre cerca de 150 mg e 11 gramas. Em certas modalidades, a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo (e seguindo a liofilização) é de cerca de 150 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 750 mg, cerca de 1 grama, cerca de 2 gramas, cerca de 3 gramas, cerca de 4 gramas 5 gramas, cerca de 6 gramas, cerca de 7 gramas, cerca de 8 gramas, cerca de 9 gramas, cerca de 10 gramas ou cerca de 11 gramas. Em algumas modalidades, a quantidade do polipeptídeo na composição líquida compreendendo o polipeptídeo é superior a 11 gramas.

[0076] Agitar ou agitar o recipiente de liofilização pode aprimorar adicionalmente o tempo de reconstituição de um polipeptídeo liofilizado. Em algumas modalidades da presente invenção, a reconstituição do polipeptídeo liofilizado é realizada adicionando um diluente ao polipeptídeo liofilizado no recipiente de liofilização e agitando o recipiente (periódica ou continuamente) até que o polipeptídeo liofilizado seja dissolvido ou suspenso no diluente. Em outras modalidades da presente invenção, a reconstituição do polipeptídeo liofilizado é realizada adicionando um diluente ao polipeptídeo liofilizado no recipiente de liofili

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38/60 zação e colocando o recipiente em um agitador (por exemplo, um agitador mecânico) e agitando o recipiente de liofilização até o peptídeo liofilizado ser dissolvido ou suspenso no diluente.

[0077] A reconstituição do polipeptídeo sob vácuo também pode aprimorar o tempo de reconstituição de um polipeptídeo liofilizado. Em algumas modalidades da presente invenção, o recipiente de liofilização compreendendo o polipeptídeo liofilizado é mantido sob vácuo durante a reconstituição. Em uma modalidade, o recipiente de liofilização compreendendo o polipeptídeo liofilizado está sob vácuo total durante a reconstituição. Em certas modalidades, o recipiente de liofilização compreendendo o polipeptídeo liofilizado está a menos de 100 Torr durante a reconstituição. Em certas modalidades, o recipiente de liofilização compreendendo o polipéptido liofilizado está a menos de 50 Torr durante a reconstituição. Em certas modalidades, o recipiente de liofilização compreendendo o polipeptídeo liofilizado está entre 100 mTorr e 50 Torr. Em uma modalidade, o recipiente de liofilização compreendendo o polipeptídeo liofilizado está a 100 mTorr.

[0078] A presente invenção fornece composições de polipeptídeo liofilizado produzidas por um método da presente invenção. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que a composição de polipeptídeo liofilizado é produzida ao preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptídeo, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de polipeptídeo líquido/TBA, congelando o polipeptídeo líquido/TBA, liofilizando a mistura polipeptídeo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptídeo liofilizado, em que após reconstituição da composição de polipeptídeo liofilizado com um diluente, o tempo para reconstituir o polipeptídeo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptídeo liofilizado na ausência de TBA. Em

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39/60 certas modalidades, a composição de polipeptideo liofilizado é um bolo liofilizado compreendendo o polipeptideo.

[0079] A presente invenção fornece composições de polipeptideo líquido produzidas por um método da presente invenção. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece uma composição de polipeptideo líquido, em que a composição de polipeptideo líquido é produzida ao preparar uma composição líquida compreendendo o polipeptideo e adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de polipeptideo líquido/TBA, em que após a mistura de polipeptideo líquido/TBA para formar uma composição de polipeptideo liofilizado e reconstituição seguinte da composição de polipeptideo liofilizado com um diluente, o tempo para reconstituir o polipeptideo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo polipeptideo liofilizado na ausência de TBA.

[0080] Em algumas modalidades da presente divulgação, a adição de TBA à composição líquida que compreende um anticorpo e um açúcar numa razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA está entre cerca de 5% e 20% em volume, não tem efeito na integridade ou estabilidade do anticorpo na mistura anticorpo líquido/TBA, na composição de anticorpo liofilizado ou na formulação de anticorpo líquido adequada para liofilização. Em tais modalidades, o anticorpo retém essencialmente a sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica após armazenamento numa composição líquida ou numa composição liofilizada. De preferência, o anticorpo nas composições e formulações aqui fornecidas retém essencialmente sua estabilidade física e química, bem como sua atividade biológica quando do armazenamento. O período de armazenamento é geralmente selecionado com base no prazo de validade pretendi

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40/60 do da formulação. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade da proteína estão disponíveis na técnica e são analisadas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por exemplo. A estabilidade pode ser medida em uma temperatura selecionada durante um período de tempo selecionado.

[0081] Em certas modalidades, a formulação de anticorpo líquido adequada para liofilização é estável a cerca de 40 °C durante pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21,28 ou mais dias. Em certas modalidades, a formulação de anticorpo líquido é estável a cerca de 40 °C durante pelo menos cerca de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais semanas. Em certas modalidades, a formulação de anticorpo líquido é estável a cerca de 25 °C durante pelo menos 1,2,3, 4, 5, 6, 7,8,9, 10, 11,

12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou mais meses. Em certas modalidades, a formulação de anticorpo líquido é estável a cerca de 5 °C durante pelo menos 1,2,3, 4, 5, 6,7,8,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou mais meses. Em certas modalidades, a formulação de anticorpo líquido é estável a cerca de 20 °C ou menos durante pelo menos 1,2,3, 4, 5, 6,7,8,9,10,11,12,

13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 ou mais meses. Além disso, a formulação de anticorpo líquido é de preferência estável após congelação (para, por exemplo, -20 °C, -40 °C ou -70 °C) e descongelação da formulação de anticorpo líquido, por exemplo após 1,2 3, 4 ou 5 ciclos de congelação e descongelação.

[0082] Em certas modalidades, a composição de anticorpo liofilizado é estável a cerca de 25 °C durante pelo menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais semanas, ou durante pelo menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou mais meses.

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Em certas modalidades, a composição de anticorpo liofilizado é estável a cerca de 5 °C durante pelo menos 1,2,3, 4, 5, 6,7,8,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24 ou mais meses. Em certas modalidades, a composição do anticorpo liofilizado é estável a cerca de -20 °C ou inferior durante pelo menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais anos.

[0083] A estabilidade pode ser avaliadas qualitativa e/ou quantitativamente de várias maneiras diferentes, incluindo a avaliação da formação de agregados (por exemplo, utilizando cromatografia por exclusão por tamanho, medindo-se a turbidez e/ou por inspeção visual); avaliando-se a heterogeneidade de carga usando cromatografia de troca catiônica, foco isoelétrico capilar de imagem (iclEF) ou eletroforese de zona capilar; análise da sequência amino-terminal ou carboxiterminal; análise espectrométrica de massa; análise SDS-PAGE para comparar anticorpo reduzido e intacto; análise do mapa peptídico (por exemplo, tríptico ou LYS-C); avaliação da atividade biológica ou função de ligação ao antígeno do anticorpo; etc. A instabilidade pode envolver qualquer um ou mais de: agregação, desamidação (por exemplo, desamidação de Asn), oxidação (por exemplo, oxidação de Met), isomerização (por exemplo, isomerização de Asp), corte/hidrólise/fragmentação (por exemplo, fragmentação da região de dobradiça), formação de succinimida, cisteína não pareada, extensão de N-terminal, processamento de C-terminal, diferenças de glicosilação, etc.

[0084] Um anticorpo retém sua estabilidade física em uma composição ou formulação farmacêutica se não mostrar sinais ou muito pouco de agregação, precipitação e/ou desnaturação mediante exame visual de cor e/ou claridade, tal como, por exemplo, dispersão de luz UV ou por cromatografia de exclusão por tamanho.

[0085] Um anticorpo retém sua estabilidade química em uma

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42/60 composição ou formulação farmacêutica, se a estabilidade química em um dado momento é tal que o anticorpo é considerado como ainda retendo sua atividade biológica conforme definido abaixo. A estabilidade química pode ser avaliada, por exemplo, detectando e quantificando formas quimicamente alteradas do anticorpo. A alteração química pode envolver modificação de tamanho (por exemplo, clipagem) que pode ser avaliada usando cromatografia de exclusão por tamanho, SDSPAGE e/ou ionização por dessorção a laser assistida por matriz/espectrometria de massa de tempo de voo (MALDI/TOF MS), por exemplo. Outros tipos de alteração química incluem a alteração de carga (por exemplo, ocorrendo como resultado da desamidação) que pode ser avaliada por cromatografia de troca iônica ou iclEF, por exemplo.

[0086] Um anticorpo retém sua atividade biológica em uma composição ou formulação farmacêutica, se a atividade biológica do anticorpo em um dado momento estiver dentro de cerca de 10% (dentro dos erros do ensaio) da atividade biológica exibida no momento da composição ou se a formulação farmacêutica foi preparada como determinado num ensaio de ligação ao antígeno, por exemplo. Outros ensaios de atividade biológica para anticorpos são aqui elaborados abaixo.

[0087] Como aqui utilizado, a atividade biológica de um anticorpo monoclonal refere-se à capacidade do anticorpo se ligar ao antígeno. Pode ainda incluir a ligação do anticorpo ao antígeno e resultando numa resposta biológica mensurável que pode ser medida in vitro ou in vivo. Tal atividade pode ser antagônica ou agonística.

Anticorpos [0088] Técnicas exemplares para a produção de anticorpos que podem ser formuladas de acordo com a presente invenção são aqui fornecidas. Em uma modalidade, o antígeno ao qual o anticorpo se liga

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43/60 é uma proteína biologicamente importante e a administração do anticorpo para um mamífero que sofre de uma doença ou distúrbio pode resultar em um benefício terapêutico naquele mamífero. Entretanto, os anticorpos direcionados contra antígenos não polipeptídeos (tais como antígenos glicolipídios associados ao tumor, veja Patente US 5.091.178) também são contemplados.

[0089] Quando o antígeno é um polipeptídio, ele pode ser uma molécula transmembrana (por exemplo, um receptor) ou ligante, como um fator de crescimento. Exemplos de antígenos incluem moléculas tais como renina; um hormônio de crescimento, incluindo o hormônio de crescimento humano e o hormônio de crescimento bovino; fator de liberação do hormônio de crescimento; hormônio da paratireoide; hormônio estimulante da tireoide; lipoproteínas; alfa-1-antitripsina; cadeia A de insulina; cadeia B de insulina; proinsulina; hormônio folículoestimulante; calcitonina; hormônio luteinizante; glucagon; fatores de coagulação como fator VIIIC, fator IX, fator tecidual (TF) e fator von Willebrands; fatores anticoagulantes, como a proteína C; fator natriurético atrial; surfactante pulmonar; um ativador de plasminogênio, tal como uroquinase ou urina humana ou ativador de plasminogênio do tipo tecido (t-PA); bombesina; trombina; fator de crescimento hemopoiético; fator de necrose tumoral alfa e beta; encefalinase; RANTES (regulada por ativação, normal mente expressa e secretada por células T); proteína inflamatória de macrófagos humanos (MIP-1-alfa); uma albumina de soro tal como albumina de soro humano; substância inibidora do Muelleriano; cadeia A de relaxina; cadeia B de relaxina; prorelaxina; peptídeo associado a gonadotropina de camundongo; uma proteína microbiana, tal como beta-lactamase; DNase; IgE; um antígeno associado a linfócitos T citotóxicos (CTLA), tal como CTLA-4; inibina; ativina; fator de crescimento endotelial vascular (VEGF); receptores para hormônios ou fatores de crescimento; proteína A ou D; fatores reuma

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44/60 toides; um fator neurotrófico tal como o fator neurotrófico derivado do osso (BDNF), neurotrofina-3, -4, -5 ou -6 (NT-3, N-T4, NT-5 ou NT-6), ou um fator de crescimento nervoso tal como NGF-b; fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF); fator de crescimento de fibroblastos, como aFGF e bFGF; fator de crescimento epidérmico (EGF); fator de crescimento transformante (TGF), tal como TGF-alfa e TGF-beta, incluindo TGF-b1, TGF-b2, TGF-b3, TGF-b4 ou TGF-b5; um fator de necrose tumoral (TNF) tal como TNF-alfa ou TNF-beta; fator de crescimento semelhante a insulina I e II (IGF-I e IGF-II); des(1-3)IGF-I (IGF-I cerebral), proteínas de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina; proteínas CD tais como CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22 e CD40; eritropoietina; fatores osteoindutivos; imunotoxinas; uma proteína morfogenética óssea (BMP); um interferon como interferon-alfa, beta e gama; fatores estimuladores de colônias (CSF), por exemplo, M-CSF, GM-CSF e G-CSF; interleucinas (ILs), por exemplo, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9 e IL-10; superóxido dismutase; Receptores de células T; proteínas de superfície de membrana; fator de aceleração de decaimento; antígeno viral tal como, por exemplo, uma porção do envelope do vírus da AIDS; proteínas transportadoras; receptores de endereçamento; adressinas; proteínas regulatórias; integrinas tais como CD1 la, CD1 lb, CD1 Ic, CD18, um ICAM, VLA-4 e VCAM; um antígeno associado a tumor, tal como receptor HER2, HER3 ou HER4; e fragmentos de qualquer um dos polipeptídeos listados acima.

[0090] Alvos moleculares exemplificativos para anticorpos abrangidos pela presente invenção incluem proteínas CD tais como CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD34 e CD40; membros da família de receptores ErbB, tais como o receptor EGF, receptor HER2, HER3 ou HER4; antígenos da superfície da célula B, tais como CD20 ou BR3; um membro da superfamília de receptores de necrose tumoral, incluin

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45/60 do DR5; antígeno de células-tronco da próstata (PSCA); moléculas de adesão celular tais como LFA-1, Macl, pl50.95, VLA-4, ICAM-1, VCAM, integrina alfa4/beta7 e integrina alphav/beta3 incluindo as suas subunidades alfa ou beta (por exemplo, anti-CD1 Ia, anticorpos anti-CD 18 ou anti-CD 1 Ib); fatores de crescimento, tais como o VEGF, bem como receptores respectivos; fator tecidual (TF); um fator de necrose tumoral (TNF) tal como TNF-alfa ou TNF-beta, interferon alfa (alfa-IFN); uma interleucina, tal como IL-8; IgE; antígenos do grupo sanguíneo; receptor flk2/flt3; receptor de obesidade (OB); receptor mpl; CTLA-4; proteína C etc.

[0091] Os antígenos solúveis ou fragmentos dos mesmos, opcionalmente conjugados com outras moléculas, podem ser utilizados como imunógenos para gerar anticorpos. Para moléculas transmembrana, tais como receptores, fragmentos dos mesmos (por exemplo, o domínio extracelular de um receptor) podem ser utilizados como imunógeno. Alternativamente, células que expressam a molécula transmembrana podem ser usadas como o imunógeno. Tais células podem ser derivadas de uma fonte natural (por exemplo, linhagens celulares de câncer) ou podem ser células que foram transformadas por técnicas recombinantes para expressar a molécula transmembrana. Outros antígenos e formas dos mesmos úteis para a preparação de anticorpos serão evidentes para aqueles versados na técnica.

[0092] Anticorpos exemplificativos que podem ser formulados de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitados aos seguintes: anticorpos anti-ErbB, incluindo anticorpos anti-HER2 (por exemplo, trastuzumabe (HERCEPTIN®) ou pertuzumabe); anticorpos que se ligam a um marcador de superfície de células B, como CD20 (por exemplo, rituximabe e 2H7/ocrelizumabe humanizado), CD22, CD40 ou BR3; anticorpos que se ligam a IgE, incluindo omalizumabe (XOLAIR®) comercialmente disponível a partir de Genentech, E26,

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HAE1, anticorpo IgE com uma substituição de aminoácido na posição 265 de uma região Fc deste (US 2004/0191244 Al), Hu-901, um anticorpo IgE como no documento W02004/070011, ou anticorpo que se liga ao pequeno segmento extracelular em IgE, ΜΓ (por exemplo, 47H4v5; ver Patente US No. 8.071.097), ver, também, Presta et al., J. Immunol. 151: 2623-2632 (1993); Publicação Internacional No. WO 95/19181; Patente US No. 5.714.338, emitida em 3 de fevereiro de 1998; Patente US No. 5.091.313, emitida em 25 de fevereiro de 1992; WO 93/04173 emitida em 4 de março de 1993; WO 99/01556 emitida em 14 de janeiro de 1999; e Patente US No. 5.714.338; anticorpos que se ligam ao fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) (por exemplo, bevacizumabe) ou a um receptor de VEGF; anticorpos antiIL-8 (St John et al., Chest, 103: 932 (1993) e Publicação Internacional No. WO 95/23865); anticorpos anti-PSCA (W001/40309); anticorpos anti-CD40, incluindo S2C6 e suas variantes humanizadas (documento WOOO/75348); anticorpos anti-CD1 Ia, incluindo efalizumabe (RAPTIVA®) (Patente US No. 5.622.700, WO 98/23761, Steppe et al, Transplant Intl. 4:3-7 (1991) e Hourmant et al., Transplantation 58:377-380 (1994)); anticorpos anti-CD18 (Patente US No. 5.622.700, emitida em 22 de Abril de 1997, ou como em WO 97/26912, publicada em 31 de Julho de 1997); anticorpo antirreceptor de Apo-2 (WO 98/51793 publicado em 19 de Novembro de 1998); anticorpos anti-TNF-alfa incluindo cA2 (REMICADE®) e adalimumabe (HUMIRA®), CDP571 e MAK-195 (Afelimomabe) (Ver, Patente US No. 5.672.347 emitida em 30 de Setembro de 1997, Lorenz et al. J. Immunol. 156(4): 1646-1653 (1996) e Dhainaut et al. Grit. Care Med. 23(9):1461-1469 (1995)); fator antitecido (TF) (Patente Européia No. 0 420 937 Bl concedida em 9 de Novembro de 1994); integrina α4β7 anti-humana (WO 98/06248 publicada em 19 de Fevereiro de 1998); anticorpos anti-EGFR, incluindo o anticorpo 225 quimerizado ou humanizado como no documento WO

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96/40210 publicado em 19 de Dezembro de 1996; anticorpos antiCD3, tais como OKT3 (Patente US No. 4.515.893, emitida em 7 de Maio de 1985); anticorpos anti-CD25 ou antitac, tais como CHI-621 (SIMULECT®) e (ZENAPAX®) (Ver Patente US No. 5.693.762, emitida em 2 de Dezembro de 1997); anticorpos anti-CD4 tais como o anticorpo cM-7412 (Choy et al. Arthritis Rheum 39 (I): 52-56 (1996)); anticorpos anti-CD52, como o alemtuzumabe (CAMPATH-1 H®) (Riechmann et al. Nature 332:323-337 (1988); anticorpos de receptor anti-Fc tais como o anticorpo M22 direcionado contra FcyRI, como em Graziano et al. J. Immunol. 155 (10): 4996-5002 (1995); anticorpos antiantígeno carcinoembrionário (CEA) tais como hMN-14 (Sharkey et al. Cancer Res. 55 (23Suppl): 5935s-5945s (1995); anticorpos direcionados contra células epiteliais da mama, incluindo huBrE-3, hu-Mc3 e CHL6 (Ceriani et al. Cancer Res. 55 (23): 5852s-5856s (1995); e Richman et al. Cancer Res. 55 (23 Supp): 5916s-5920s (1995)); anticorpos que se ligam a células de carcinoma do cólon, tais como C242 (Litton et al. Eur J. Immunol. 26(1): 1-9 (1996)); anticorpos anti-CD38, por exemplo, AT 13/5 (Ellis et al. J. Immunol. 155(2): 925-937 (1995)); anticorpos anti-CD33 tais como Hu M195 (Jurcic et al. Cancer Res 55(23 Suppl):5908s-5910s (1995) e CMA-676 ou CDP771; anticorpos anti-CD22 tais como LL2 ou LymphoCide (Juweid et al. Cancer Res 55 (23 Suppl): 5899s-5907s (1995); anticorpos anti-EpCAM tais como 17-1 A (PANOREX®); anticorpos anti-Gpllb/llla tais como abciximabe ou Fab c7E3 (REOPRO®); anticorpos anti-RSV tais como MEDI-493 (SYNAGIS®); anticorpos anti-CMV tais como PROTOVIR®; anticorpos antiHIV tais como PR0542; anticorpos anti-hepatite tais como o anticorpo anti-Hep B OSTAVIR®; anticorpo anti-CA 125 OVARex; anticorpo antiepítopo de GD3 anti-idiotípico BEC2; anticorpo anti-avP3 VITAXIN®; anticorpo anticarcinoma de células renais humanas tal como ch-G250; ING-1; anticorpo 17-1A anti-humano (3622W94); anticorpo antitumoral

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48/60 colorretal humano (A33); anticorpo antimelanoma humano R24 direcionado contra o gangliosíddeo GD3; carcinoma de células escamosas anti-humano (SF-25); e anticorpos de antígeno leucocitário humano (HLA) como Smart ID 10 e o anticorpo anti-HLA DR Oncolym (Lym-1); anti-CCR5 (PRO 140); ABT-325; ABT-308; ABT-147; anti-beta7 (etrolizumabe); anti-HER3/EGFR DAF (DLI Se); receptor anti-interleucina 6 (IL6R) tal como tocilizumabe (ACTEMRA®); anti-FluA (ver WO2014/078268) e anti-Abeta (ver documento W02003/070760 e W02008/011348) etc.

EXEMPLOS [0093] A seguir encontram-se exemplos de métodos e composições da invenção. Entende-se que várias outras modalidades podem ser praticadas, dada a descrição geral fornecida acima.

Exemplo 1. Reconstituição de bolos de mAb de 2,5 ml e 25 ml com 0 - 20% de TBA [0094] As soluções (mAb1 e mAb2) de anticorpo monoclonal purificado (mAb) foram diluídas a 70 mg/ml num tampão contendo sacarose de 168 mM, His-HCI a 20 mM, PS20 a 0,03%. O TBA foi aquecido acima do seu ponto de fusão de 25°C e depois adicionado às amostras de mAb como se segue. O TBA foi adicionado diretamente às soluções de 70 mg/ml de mAb para concentrações finais de TBA até 5%. Para amostras com uma concentração final de TBA de 10% ou 20% (volume/volume), foram utilizadas concentrações iniciais mais elevadas de mAb1 (90 mg/ml) e mAb2 (100 mg/ml) e diluídas para 70 mg/ml de proteína usando 20 mM e tampão His contendo 168 mM de sacarose e 0,03% de PS20 após a adição da quantidade apropriada de TBA para obter concentrações de 10% de TBA ou 20% de TBA (v/v) nas soluções finais de mAb.

[0095] As misturas mAb/TBA foram então adicionadas a frascos de tubos Schott lavados e despirogenados: frascos de 6 cc para 2,5

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49/60 ml_ de enchimento; frascos de 50cc para enchimento de 25 ml. Os frascos foram tapados com rolhas de lyo Daikyo D777-1 de 20mm. Os frascos foram então carregados num liofilizador de laboratório (Lyostar II, FTS Systems, Stone Ridge, NY ou Lyostar III, SP Scientific, Stone Ridge, NY).

[0096] A liofilização foi realizada da seguinte forma. Para experimentos utilizando de nucleação não controlada, fracos foram equilibrados a 5°C por 1 hora. A temperatura da prateleira foi então reduzida para -35°C a uma taxa de -0,3°C/min e mantida a esta temperatura durante 6 horas.

[0097] Para experimentos utilizando nucleação controlada, os frascos foram equilibrados a -10°C durante 2 horas. A câmara foi pressurizada a 28,5 psig com nitrogênio durante 5 minutos e depois despressurizada durante ~2 segundos. A temperatura da prateleira foi então reduzida para -35°C a uma taxa de -0,3°C/min e mantida a esta temperatura durante 6 horas. Todas as amostras de frascos em um dado experimento foram consolidadas em um liofilizador para secagem, a fim de evitar qualquer possível variabilidade interliofilizante no comportamento de secagem. A secagem primária foi realizada a uma temperatura de prateleira de -10°C e com uma pressão de câmara de 100 mTorr até que o medidor Pirani convergisse com o manômetro de capacitância. A secagem secundária (para diminuir a umidade nos bolos secos até um nível aceitável de 0,5-2%) foi conduzida a uma temperatura de prateleira de 20°C e com uma pressão na câmara de 100 mTorr durante 12 horas. Após a liofilização, os frascos foram armazenados a 5°C.

[0098] As composições de anticorpos monoclonais liofilizados foram reconstituídas com água esterilizada para injeção (diluente) em quantidades suficientes para produzir soluções com concentrações de proteína mAb idênticas a concentrações de proteína antes da liofiliza

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50/60 ção. Adicionaram-se 2,2 ml de água estéril para injeção a cada frasco de 6cc que originalmente continha 2,5 ml de enchimento; 22 ml de água estéril para injeção foram adicionados a cada frasco de 50cc que originalmente continha 25 ml de enchimento. Antes da reconstituição, os frascos e a água estéril para injeção (diluente de reconstituição) foram deixados a equilibrar à temperatura ambiente.

[0099] A reconstituição de mAb1 em frascos de 6cc foi realizada adicionando-se 2,2 ml de água estéril para injeção e rodado durante 5 segundos; após o que os frascos foram colocados num agitador orbital a 60 rpm até a solução de anticorpo ser totalmente reconstituída (isto é, dissolução completa). A reconstituição de mAb2 em frascos de 6cc foi realizada pela adição de 2,2 ml de água estéril para injeção e rodando-os por 5 segundos; após o que os frascos foram agitados manualmente durante 5 segundos a cada 10 minutos até a solução de anticorpo estar totalmente reconstituída. A reconstituição de mAb1 em frascos de 50cc foi realizada pela adição de 22 ml de água estéril para injeção e rodando-os por 5 segundos; após o que os frascos foram agitados durante 5 segundos a cada 10 minutos até a solução de anticorpo estar totalmente reconstituída.

[00100] Os frascos contendo amostras para reconstituição manual foram rodados durante 5 segundos imediatamente a seguir à adição de diluente e depois agitados aproximadamente de dez em dez minutos até se confirmar que o sólido restante foi dissolvido, por inspeção visual. A agitação foi interrompida ocasionalmente para avaliar visualmente o sólido restante.

[00101] A Figura 1 mostra o efeito de diferentes concentrações de TBA no tempo de reconstituição (minutos) de mAb1 liofilizado dos frascos de 6cc (2,5 ml de enchimento). Como mostrado na Figura 1, a adição de 0,5%, 1%, 5% ou 20% de TBA à solução de anticorpo antes da liofilização resultou numa redução no tempo de reconstituição de

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51/60 mAb1. Em particular, a adição de 5% de TBA reduziu o tempo de reconstituição do anticorpo liofilizado de mais de 20 minutos para menos de 5 minutos, uma redução de aproximadamente 80% no tempo de reconstituição em comparação com o controle não tratado com TBA.

[00102] A Tabela 1 abaixo mostra os tempos de reconstituição específicos associados à experiência acima descrita para três frascos separados de 6cc para cada concentração de TBA testada.

TABELA 1

	Tempo de Reconstituição (minutos)
Quantidade de TBA	Frasco A	Frasco B	Frasco C	Média	Desvio Padrão
0% TBA	22,18	20,5	ND	21,34	1,19
0.5% TBA	7,38	11,17	13,68	10,74	3,17
1%TBA	6,28	9,4	12,13	9,27	2,93
5% TBA	5,02	4,42	3,03	4,156	1,02
20% TBA	14,03	13,4	14,03	14,49	1,37

[00103] A Figura 2 mostra o efeito de diferentes concentrações de TBA no tempo de reconstituição (minutos) de mAb2 liofilizado dos frascos de 6cc (2,5 ml de enchimento). Como mostrado na Figura 2, a adição de 5% ou 10% de TBA à solução de anticorpo antes da liofilização resultou numa redução no tempo de reconstituição de mAb2. Em particular, a adição de 5% de TBA reduziu o tempo de reconstituição do anticorpo liofilizado de mais de 20 minutos para aproximadamente 7,5 minutos.

[00104] A Figura 3 mostra o efeito de diferentes concentrações de TBA no tempo de reconstituição (minutos) de mAb1 liofilizado dos frascos de 50cc (25 ml de enchimento). Como mostrado na Figura 3, a adição de 1%, 5%, 10% ou 20% de TBA à solução de anticorpo antes da liofilização resultou numa redução no tempo de reconstituição de mAb1. Em particular, a adição de 5% de TBA reduziu o tempo de reconstituição do anticorpo liofilizado de aproximadamente 70 minutos

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52/60 para aproximadamente 27 minutos.

[00105] Em conjunto, estes resultados mostraram que a adição de TBA a uma solução de anticorpo antes da liofilização resulta numa redução no tempo de reconstituição. Além disso, estes resultados mostraram que 5% de TBA fornece a maior redução no tempo de reconstituição em comparação com o obtido com 1% de TBA, 10% de TBA ou 20% de TBA.

Exemplo 2. Reconstituição com TBA e Vácuo [00106] O efeito no tempo de reconstituição de mAb1 liofilizado sob vácuo parcial v.s. vácuo total em combinação com TBA foi examinado como se segue. Para este estudo, utilizaram-se frascos de 100 cc contendo 60 ml de volume de enchimento de mAb1 a 70 mg/ml. Adicionou-se TBA às soluções de mAb1 para uma concentração final de 5% ou 10% de TBA. Após a liofilização, os frascos foram preenchidos a 100 mTorr (vácuo) ou 200 Torr (controle parcial de vácuo).

[00107] O mAb1 liofilizado nos frascos de 100 cc foi reconstituído para o volume de enchimento original de 60 ml por adição de água estéril para injeção, rodado durante 5 segundos, após o que os frascos foram agitados durante 5 segundos a cada 10 minutos até a solução de anticorpo estar total mente reconstituída (ou seja, dissolução completa).

[00108] A Figura 4 mostra o efeito de diferentes concentrações de TBA (5% e 10% de TBA) no tempo de reconstituição de mAb1 liofilizado em frascos de 100 cc sob duas condições de vácuo diferentes (100 mTorr ou 200 Torr). Como mostrado na Figura 4, a adição de 5% de TBA ou 10% de TBA à solução de anticorpo antes da liofilização resultou em uma redução no tempo de reconstituição de mAb1 nos frascos de 100 cc com 60 ml de volume de enchimento, consistente com os resultados obtidos com os frascos de 6cc ou 50cc contendo 2,5 ml de volume de enchimento ou 25 ml de volume de enchimento, respecti

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53/60 vamente. Em particular, sob condições de 200 Torr, a adição de 5% de TBA ou 10% de TBA reduziu o tempo de reconstituição de mais de 110 minutos sem TBA para aproximadamente 60 minutos com 5% de TBA e para aproximadamente 80 minutos com 10% de TBA.

[00109] Quando as reconstituições foram realizadas em condições de 100 mTorr, os tempos de reconstituição foram bastante reduzidos. Em particular, sob condições de 100 mTorr, a adição de 5% de TBA ou 10% de TBA reduziu os tempos de reconstituição de aproximadamente 40 minutos sem TBA para aproximadamente 20 minutos com 5% de TBA e aproximadamente 40 minutos com 10% de TBA.

[00110] Em conjunto, estes resultados mostraram que a combinação de TBA com vácuo mostrou uma maior redução no tempo de reconstituição em comparação com o uso de TBA ou vácuo sozinho.

Exemplo 3. Reconstituição com TBA sob várias condições de agitação [00111] O efeito no tempo de reconstituição de mAb1 liofilizado quando a reconstituição foi realizada com ou sem o auxílio de um agitador em combinação com TBA foi examinado como se segue. Para este estudo, utilizaram-se frascos de 100 cc contendo 60 ml de volume de enchimento de mAb1 a 70 mg/ml. Adicionou-se TBA às soluções de mAb1 para uma concentração final de 5% ou 10% de TBA.

[00112] O mAb1 liofilizado nos frascos de 100 cc foi reconstituído para o volume de enchimento original de 60 ml por adição de água estéril para injeção. Os frascos contendo amostras para reconstituição manual foram rodados durante 5 segundos imediatamente a seguir à adição de diluente e depois agitados aproximadamente de dez em dez minutos até se confirmar que o sólido restante foi dissolvido, por inspeção visual. Os frascos contendo amostras para reconstituição por agitador foram agitados com um Xolair Shaker da Novartis/Genentech 500 rpm (South San Francisco, CA) após a adição de diluente. A agi

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54/60 tação foi interrompida ocasionalmente para avaliar visualmente o sólido restante.

[00113] A Figura 5 mostra o efeito de diferentes concentrações de TBA (5% e 10% de TBA) no tempo de reconstituição do mAb1 liofilizado em frascos de 100 cc quando reconstituído com ou sem o uso de um agitador. Como mostrado na Figura 5, a adição de 5% de TBA ou 10% de TBA à solução de anticorpo antes da liofilização resultou numa redução no tempo de reconstituição do mAb1 nos frascos de 100 cc com 60 ml_ de volume de enchimento. Em particular, sob condições de controle (sem agitador), a adição de TBA antes da liofilização reduziu o tempo de reconstituição de mais de 110 minutos sem TBA para aproximadamente 60 minutos com 5% de TBA e para aproximadamente 80 minutos com 10% de TBA.

[00114] Quando a reconstituição foi realizada usando um agitador a 500 rpm, os tempos de reconstituição foram bastante reduzidos. Em particular, quando a reconstituição foi realizada com um agitador, a adição de TBA reduziu os tempos de reconstituição de aproximadamente 18 minutos sem TBA para aproximadamente 10 minutos com 5% de TBA ou 10% de TBA.

[00115] Em conjunto, estes resultados mostraram que a combinação de TBA com agitador mostrou uma maior redução no tempo de reconstituição em comparação com o uso de TBA sozinho.

Exemplo 4. Reconstituição com TBA, vácuo e agitador [00116] O efeito no tempo de reconstituição de mAb1 liofilizado quando a reconstituição foi realizada sob vácuo (100 mTorr) com a ajuda de um agitador em combinação com TBA foi examinado como se segue. Para este estudo, utilizaram-se frascos de 100 cc contendo 60 ml de volume de enchimento de mAb1 a 70 mg/ml. Adicionou-se TBA às soluções de mAb1 para uma concentração final de 5% ou 10% de TBA. As condições de vácuo e agitador foram como descrito acima

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55/60 no Exemplo 3.

[00117] A Figura 6 mostra o efeito de diferentes concentrações de TBA (5% e 10% de TBA) no tempo de reconstituição de mAb1 liofilizado em frascos de 100 cc quando reconstituído sob 100 mTorr com o uso de um agitador. Como mostrado na Figura 6, a reconstituição levou aproximadamente 110 minutos para frascos de 100 cc contendo 60 ml de enchimento sem TBA, sem vácuo e sem agitador (rodando durante 5 segundos a cada 10 minutos). No entanto, a adição de vácuo, TBA e agitador reduziu drasticamente os tempos de reconstituição, para menos de 10 minutos; a combinação destes três parâmetros reduziu o tempo de reconstituição em mais de 95%.

[00118] Utilizando uma combinação de 5% de TBA, vácuo e agitador, o tempo de reconstituição para 4,2 gm de proteína foi reduzido de uma média de 115 minutos para 5 minutos, permitindo a preparação de formulações biomoleculares de dose elevada com tempos de reconstituição rápidos.

[00119] A Figura 7 mostra o efeito do vácuo, agitador e vácuo e agitador nos tempos de reconstituição para uma formulação de 100 ml de anticorpo liofilizado contendo 0% ou 5% (v/v) de álcool terc-butílico em frascos de 100 cc.

Exemplo 5. Estudos de estabilidade líquida [00120] Estudos de estabilidade para examinar os efeitos de TBA na estabilidade de mAb1 no líquido foram realizados. A estabilidade de mAb1 foi medida por cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) e por cromatografia de troca iônica (IEC). Adicionou-se mAb1 (70 mg/mL) a frascos de 50 cc (25 mL de enchimento) contendo 0% de TBA, 1% de TBA, 5% de TBA, 10% de TBA ou 20% de TBA. Os frascos foram então mantidos a 2-8°C ou 30°C durante 7 dias, durante os quais a estabilidade do anticorpo foi determinada no dia 0, dia 3 e dia 7 para cada condição por análise SEC e IEC.

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56/60 [00121] A análise SEC foi realizada utilizando um HPLC Agilent 1100 ou 1200 HPLC (Santa Clara, CA) com uma coluna Tosoh Biosciences TSK gel 7,8 mm ID x 30 cm L (South San Francisco, CA). A análise IEC foi realizada utilizando urn HPLC Agilent 1200 com uma coluna Analica Dionex ProPac WCX-10 BioLC™ 4x250 mm (Sunnyvale, CA).

[00122] Como mostrado nas Figuras 8A e 8B, o mAb1 manteve uma boa estabilidade após a adição de várias concentrações de TBA ao longo de 7 dias a 2-8°C ou 30°C, como a análise SEC mostrou manutenção de alta porcentagem do pico do monômero ao longo de 7 dias. A Figura 8B mostra uma versão expandida do gráfico mostrado na Figura 8A (isto é, a Figura 8B mostra os dados da Figura 8A sem incluir os dados associados com 20% de TBA a 30°C).

[00123] Como mostrado na Figura 9, o mAb1 manteve boa estabilidade após a adição de várias concentrações de TBA ao longo de 7 dias a 2-8°C ou 30°C, pois a análise IEC mostrou manutenção do pico principal comparável aos controles em todos os casos ao longo de 7 dias.

[00124] Tomados em conjunto, estes resultados mostraram que em concentrações de TBA abaixo de 20% (por exemplo, 1%, 5%, 10% de TBA), a estabilidade do anticorpo é mantida durante pelo menos 7 dias; alguma perda de estabilidade, no entanto, foi observada em condições de 20% de TBA.

Exemplo 6. Análise de Umidade [00125] O efeito da adição de TBA a mAb1 ou mAb2 antes da liofilização nos níveis de umidade dos mAbs secos após liofilização foi examinado. Adicionou-se mAb1 e mAb2 (ambos a 70 mg/ml) a frascos de 6cc como descrito acima. Adicionou-se TBA às soluções de mAb para uma concentração final de 0%, 5% ou 10% de TBA. As amostras foram então liofilizadas como descrito acima. Após liofilização, o teor

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57/60 de umidade das amostras liofilizadas (isto é, amostras no estado sólido) foi determinado utilizando um Titulador Mettler Toledo DL31 Volumetric Karl Fischer (Columbus, OH).

[00126] Como mostrado na Tabela 2 abaixo, a adição de TBA não afeta os níveis de umidade das preparações de anticorpos liofilizados.

TABELA 2

Anticorpo	Quantidade de TBA	Umidade (por cento)
mAb1	0% TBA	0,80%
5% TBA	0,81%
10% TBA	0,77%
mAb2	0% TBA	0,78%
5% TBA	0,71%
10% TBA	0,78%

[00127] O teor de umidade foi posteriormente examinado para mAb1 (40 mg/ml em frascos de 50cc) com várias concentrações de TBA (0%, 5%, 10%) sob nucleação não controlada (UCN) e nucleação controlada (CN). Como mostrado na Tabela 3 abaixo, a adição de TBA não afeta os níveis de umidade de preparações de anticorpos liofilizados usando a técnica de congelamento padrão (nucleação não controlada). A adição de TBA diminui o teor de umidade de preparações de anticorpos liofilizados usando nucleação controlada

TABELA 3

Condição de nucleação	Quantidade de TBA	Umidade (por cento)
UCN	0% TBA	0,67%
5% TBA	0,65%
10% TBA	0,62%
CN	0% TBA	0,97%
5% TBA	0,44%
10% TBA	0,46%

[00128] A adição de TBA à preparação de anticorpos monoclonais, como mostrado na Tabela 1 e na Tabela 2, mostra que a adição de

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TBA não tem muito efeito sobre os níveis de umidade em bolos de UCN e diminui os níveis de umidade em bolos de CN.

Exemplo 7. Análise de BET para determinar a área de superfície específica [00129] O efeito de várias concentrações de TBA na área superficial específica da estrutura do bolo de anticorpo liofilizado foi examinado. O mAb1 e o mAb2 foram adicionados aos frascos de 6cc a 70 mg/ml com 0%, 5% ou 10% de TBA e liofilizados como descrito acima. A medição específica da área de superfície foi realizada com um analisador de área de superfície e tamanho de poros automatizado Quantachrome Quadrasorb Evo (Boynton Beach, FL). As amostras foram esmagadas em um porta-luvas com umidade relativa < 3% e carregadas em lâmpadas taradas. Utilizou-se um tamanho de amostra de aproximadamente 100 mg. A dessorção da água residual foi realizada a 40°C com um forte vácuo por pelo menos 3 horas. A análise multiponto de Brunauer-Emmett-Teller (BET) foi então realizada com pressões relativas P/Po de 0,05 a 0,24 usando Krypton como o adsorvato.

[00130] A Tabela 4 abaixo mostra os resultados das determinações da área de superfície específica (SSA), apresentadas como m²/grama. Como mostrado na Tabela 4 abaixo, a adição de TBA às preparações de anticorpos antes da liofilização resultou num aumento da área superficial dos bolos liofilizados.

TABELA 4

Anticorpo	Quantidade de TBA	SA (m²/g)
mAb1	0% TBA	0,330
5% TBA	2,262
10% TBA	6,124
mAb2	0% TBA	0,525
5% TBA	1,369
10% TBA	2,835

[00131] A área de superfície foi ainda examinada usando análise

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BET para mAb1 (40 mg/ml em frascos de 50cc) com várias concentrações de TBA (0%, 5%, 10%) com nucleação não controlada (UCN) e nucleação controlada (CN). O tamanho dos poros dos bolos de mAb1 com nucleação não controlada (UCN) e nucleação controlada (CN) é mostrado abaixo na Tabela 5.

TABELA 5

Condição de nucleação	Quantidade de TBA	SA (m²/g)
UCN	0% TBA	0,696
5% TBA	3,668
10% TBA	2,906
CN	0% TBA	0,488
5% TBA	3,281
10% TBA	7,794
[00132] A análise B	ET sugeriu que a adição de TBA resultou em

diferenças no tamanho do poro e na estrutura do bolo liofilizado, possivelmente devido ao TBA formar poros verticais conforme sublima durante a liofilização. (Veja Nail, SL et al. Freeze-Drying of tertButanol/Water Cosolvent Systems: A Case Report on Formation of a Friable Freeze-Dried Powder of Tobramycin Sulfate. Journal of Pharmaceutical Sciences. Vol. 91, No. 4. Abril de 2002. American Pharmacists Association.)

Exemplo 8. Estudos de Estabilidade de Anticorpos Liofilizados [00133] Foram realizados estudos de estabilidade para examinar os efeitos de TBA na mistura de anticorpo líquido pré-liofilização/TBA na estabilidade do anticorpo na composição de anticorpo subsequentemente liofilizada. A estabilidade foi medida por cromatografia de exclusão por tamanho (SEC).

[00134] Frascos de 6cc foram preenchidos com 2,5 mL de formulações contendo 70 mg/mL de anticorpo (mAb1 ou mAb2), 168 mM de sacarose, 20 mM de Histidina HCI a pH 5,8, 0,028% de polissorbato 20

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60/60 e 0,5 ou 10% (v/v) de TBA. Os frascos foram liofilizados com um ciclo conservador de liofilização e incubados a 50 °C durante quatro meses. As amostras foram recolhidas mensalmente e colocadas a -20 Ό até à análise do lote por cromatografia de exclusão por tamanho. A Figura 10A mostra a percentagem de monômero mantida nas composições liofilizadas de mAb1 em cada ponto de tempo mensal. A Figura 10B mostra os resultados para as composições de mAb2 liofilizadas.

[00135] Os resultados mostram que a degradação acelerada do mAb liofilizado a 50 O ainda se encontra dentro do intervalo típico e aceitável para os mAb liofilizados quando o TBA a 5% está presente na mistura de anticorpo líquido pré-liofilizado/TBA. Como descrito acima, este nível de TBA também foi mostrado para minimizar o tempo de reconstituição do mAb liofilizado. Assim, a adição de 5% de TBA à formulação de anticorpo líquido pré-liofilização pode proporcionar uma vantagem para produtos de alta dose de mAb liofilizado que requerem frascos grandes (p. ex., 50 ou 100cc) e em que os tempos de reconstituição podem ser significativamente mais longos comparados com frascos de menor volume.

Claims

1. Método para reduzir o tempo de reconstituição de uma composição de anticorpo liofilizado, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) preparar uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, (b) adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é cerca de 5% a 6% em volume, (c) congelar a mistura de anticorpo líquido/TBA, (d) liofilizar a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizado, (e) reconstituir a composição de anticorpo liofilizado com um diluente, em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a quantidade de TBA na mistura de anticorpo líquido/TBA é de cerca de 5% em volume.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a razão molar de açúcar:anticorpo está entre cerca de 360:1 e cerca de 500:1.

4. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que TBA é adicionado à composição líquida compreendendo o anticorpo imediatamente antes do congelamento da mistura de anticorpo líquido/TBA.

5. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo de comprimento total.

6. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a concentração do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo é entre cerca de 10 mg/ml a cerca de 250

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2/4 mg/ml, entre cerca de 25 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, cerca de 50 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, cerca de 100 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, cerca de 150 mg/ml a cerca de 250 mg/ml, cerca de 25 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, cerca de 50 mg/ml a cerca de 100 mg/ml, cerca de 25 mg/ml a cerca de 125 mg/ml ou cerca de 50 mg/ml a cerca de 125 mg/ml.

7. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a quantidade do anticorpo na composição líquida compreendendo o anticorpo está entre cerca de 150 mg e 11 gramas.

8. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o açúcar é sacarose ou trealose.

9. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a mistura de anticorpo líquido/TBA é liofilizada num frasco de vidro.

10. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o frasco de vidro é um frasco de 6 cc, um frasco de 10 cc, um frasco de 15 cc, um frasco de 20 cc, um frasco de 25 cc, um frasco de 50 cc ou um frasco de 100 cc.

11. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o frasco de vidro tem um volume de enchimento de 2,5 ml, 25 ml, 50 ml ou 100 ml.

12. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tempo para a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado que foi liofilizado na presença de TBA é reduzido em cerca de 40-95% em comparação com o tempo para reconstituir a mesma quantidade da mesma composição de anticorpo liofilizada na ausência de TBA.

13. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tempo para reconstituir a composição de anticorpo liofilizado que foi liofilizado na presença de TBA é reduzido em cerca

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3/4 de 50%, em cerca de 60%, em cerca de 70%, em cerca de 80%, em cerca de 90%, ou em cerca de 95% em comparação com o tempo para reconstituir a mesma quantidade da mesma composição de anticorpo liofilizado na ausência de TBA.

14. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tempo para a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado que foi liofilizado na presença de TBA é reduzido em cerca de 50-60%, em cerca de 60-70%, em cerca de 70-80%, em cerca de 80-90%, ou em cerca de 90-95% em comparação com o tempo para reconstituir a mesma quantidade da mesma composição de anticorpo liofilizado na ausência de TBA.

15. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a reconstituição da composição de anticorpo liofilizado é realizada sob condições em que a composição de anticorpo liofilizado está sob vácuo.

16. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o vácuo é inferior a 100 Torr, inferior a 50 Torr, ou entre 100 mTorr e 50 Torr.

17. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o vácuo é de 100 mTorr.

18. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a reconstituição da composição do anticorpo liofilizado é realizada utilizando um agitador.

19. Formulação de anticorpo líquido adequada para liofilização, caracterizada pelo fato de que a formulação compreende o anticorpo, um açúcar, um diluente e TBA, em que a quantidade de TBA na formulação líquida é cerca de 5% -6% em volume, em que a quantidade de açúcar na formulação líquida está em uma razão molar de açúcar: anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, e em que o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que

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4/4 o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA.

20. Formulação de anticorpo líquido de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que a quantidade de TBA na composição líquida é de cerca de 5% em volume.

21. Composição de anticorpo liofilizada, caracterizada pelo fato de que a composição de anticorpo liofilizada é produzida por preparação de uma composição líquida compreendendo o anticorpo e um açúcar a uma razão molar de açúcar:anticorpo de pelo menos cerca de 360:1, adicionar álcool terc-butílico (TBA) à composição líquida para formar uma mistura de anticorpo líquido/TBA, em que a quantidade de TBA na formulação líquida é cerca de 5% a 6% em volume, congelando a mistura de anticorpo líquido/TBA, liofilizando a mistura de anticorpo líquido/TBA para formar uma composição de anticorpo liofilizada, em que mediante reconstituição da composição de anticorpo liofilizada com um diluente, o tempo para reconstituir o anticorpo liofilizado na presença de TBA é menor do que o tempo para reconstituir a mesma quantidade do mesmo anticorpo liofilizado na ausência de TBA.

22. Formulação de anticorpo liofilizado de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que a quantidade de TBA na composição líquida é de cerca de 5% em volume.