KR102553088B1 - Biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis and use thereof - Google Patents
Biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis and use thereof Download PDFInfo
- Publication number
- KR102553088B1 KR102553088B1 KR1020210080558A KR20210080558A KR102553088B1 KR 102553088 B1 KR102553088 B1 KR 102553088B1 KR 1020210080558 A KR1020210080558 A KR 1020210080558A KR 20210080558 A KR20210080558 A KR 20210080558A KR 102553088 B1 KR102553088 B1 KR 102553088B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- membranous glomerulonephritis
- mir
- diagnosing
- expression level
- composition
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 막성사구체신염 진단을 위한 바이오마커 조성물 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 miR-1229-3p, miR-340-3p 및 miR-99b-5p로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 miRNA를 유효성분으로 포함하는 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 막성사구체신염에 특이적으로 발현하는, 혈액 또는 혈청 유래 엑소좀으로부터 유래된 miRNA를 포함함으로써 막성사구체신염을 보다 용이하게 진단할 수 있고, 막성사구체신염을 조기 진단함으로써, 그에 따른 적절한 치료를 통해 증상 악화 및 이에 따른 합병증 등을 최소화하여 보다 효과적으로 막성사구체신염을 치료할 수 있다.The present invention relates to a biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis and its use, and more particularly, to any one or more miRNAs selected from the group consisting of miR-1229-3p, miR-340-3p and miR-99b-5p. It provides a biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis comprising as an active ingredient.
The composition can diagnose membranous glomerulonephritis more easily by including miRNA derived from blood or serum-derived exosomes that are specifically expressed in membranous glomerulonephritis, and by early diagnosis of membranous glomerulonephritis, appropriate treatment accordingly Through this, it is possible to treat membranous glomerulonephritis more effectively by minimizing worsening symptoms and complications.
Description
본 발명은 막성사구체신염(membranous glomerulonephritis, MGN) 진단을 위한 마이크로 RNA (microRNA) 바이오마커 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to a microRNA biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis (MGN) and its use.
일차성 신증후군(primary nephrotic syndrome)은 심한 부종, 다량의 단백뇨와 혈액의 저알부민혈증을 특징으로 정의된다. 일차성 신증후군의 원인 질환은 신장의 사구체(glomerulus)에 염증이 발생하는 사구체 질환(glomerulitis)으로, 그 종류는 10가지 이상이며 발병률을 기준으로 막성사구체신염(membranous glomerulonephritis, MGN)과 특발성 사구체신염(idiopathic nephrotic syndrome, INS)이 대다수를 차지한다. 일차성 신증후군은 질환별로 치료 방법 및 치료 예후가 다양한 것이 특징이다. MGN는 일반적으로 스테로이드 단독 치료에는 반응하지 않으며, 관해(resolution)를 위해서는 고용량의 스테로이드와 시클로포스파미드(cyclophosphamide)와 같은 다른 면역억제제 병합 치료가 필요하다. 이러한 치료에도 불구하고 치료에 반응하지 않는 난치성 MGN도 존재한다. Primary nephrotic syndrome is defined as characterized by severe edema, massive proteinuria and blood hypoalbuminemia. The cause of primary nephrotic syndrome is glomerulitis, in which the glomerulus of the kidney becomes inflamed. There are more than 10 types of glomerulonephritis. (idiopathic nephrotic syndrome, INS) accounts for the majority. Primary nephrotic syndrome is characterized by various treatment methods and treatment prognoses for each disease. MGN generally does not respond to steroid therapy alone, and resolution requires combination therapy with high-dose steroids and other immunosuppressive agents such as cyclophosphamide. Despite these treatments, there are also refractory MGN that do not respond to treatment.
신증후군에서 원인 질환의 정확한 진단을 위해서 gun needle을 이용하여 신장 조직을 채취하는 침습적인 조직검사(kidney biopsy)가 필수적이다. 또한 심장병과 뇌혈관 질환의 재발을 위해 복용하는 항혈소판제(antiplatelet agents), 항응고제(anticoagulation) 복용 시에는 침습적인 조직검사는 매우 위험한 검사이다. 따라서 침습적인 진단 방법인 조직검사와 더불어 질환의 확진에 도움을 주거나, 침습적인 조직검사가 불가능한 경우를 위한 비침습적인 바이오마커의 개발은 매우 중요하다.In order to accurately diagnose the causative disease in nephrotic syndrome, an invasive kidney biopsy that collects kidney tissue using a gun needle is essential. In addition, invasive biopsy is a very dangerous test when taking antiplatelet agents and anticoagulation, which are taken for the recurrence of heart disease and cerebrovascular disease. Therefore, in addition to biopsy, which is an invasive diagnostic method, it is very important to develop non-invasive biomarkers that help confirm the disease or when invasive biopsy is not possible.
한편, 마이크로 RNA(microRNA; miRNA; miR)는 동·식물 모두의 게놈에 존재하는 비암호화의 작은 RNA로 생물의 전반적인 모든 과정에 관여하는 것으로 알려져 있으며, 최근 이러한 miRNA를 질병 진단용 바이오마커로 사용하기 위한 연구들이 진행되고 있다. 현재 임상에서 사용되는 대부분의 바이오마커는 체액에 순환하는 단백질이나, 불행히도 새로운 단백질 기반의 바이오마커 개발은 시료 내 표적 단백질의 낮은 친화도로 인하여 상당한 기술적 어려움에 직면해 있는 바, miRNA를 이용한 바이오마커의 개발은 단백질 바이오마커의 한계점을 극복할 수 있는 하나의 대안이 될 수 있다. On the other hand, microRNA (miRNA; miR) is a non-coding small RNA present in the genomes of both animals and plants and is known to be involved in all processes of living things. studies are in progress. Most biomarkers currently used clinically are proteins circulating in body fluids, but unfortunately, the development of new protein-based biomarkers faces considerable technical difficulties due to the low affinity of the target protein in the sample. Development can be an alternative that can overcome the limitations of protein biomarkers.
본 발명의 목적은 막성사구체신염을 효과적으로 진단할 수 있는 조성물을 제공하는 데에 있다.An object of the present invention is to provide a composition capable of effectively diagnosing membranous glomerulonephritis.
본 발명의 다른 목적은 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 데에 있다.Another object of the present invention is to provide a method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 miR-1229-3p, miR-340-3p 및 miR-99b-5p로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 miRNA를 유효성분으로 포함하는 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is a biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis comprising any one or more miRNAs selected from the group consisting of miR-1229-3p, miR-340-3p and miR-99b-5p as an active ingredient. provides
본 발명은 miR-1229-3p, miR-340-3p 및 miR-99b-5p로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 miRNA의 발현수준을 측정할 수 있는 제제를 유효성분으로 포함하는 막성사구체신염 진단용 조성물 및 이를 포함하는 막성사구체신염 진단용 키트를 제공한다.The present invention relates to a composition for diagnosing membranous glomerulonephritis comprising, as an active ingredient, an agent capable of measuring the expression level of any one or more miRNAs selected from the group consisting of miR-1229-3p, miR-340-3p and miR-99b-5p, and It provides a diagnostic kit for membranous glomerulonephritis comprising the same.
또한, 본 발명은 환자로부터 분리된 시료로부터 miR-1229-3p, miR-340-3p 및 miR-99b-5p로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 miRNA의 발현수준을 측정하는 단계; 및 상기 miRNA의 발현수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention measures the expression level of any one or more miRNAs selected from the group consisting of miR-1229-3p, miR-340-3p and miR-99b-5p from a sample isolated from a patient; And comparing the expression level of the miRNA with a normal control sample; provides a method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis, including.
본 발명은 혈액 또는 혈청 유래 엑소좀으로부터 정상군 또는 특발성 신증후군에 비해 막성사구체신염에서 특이적으로 발현하는 miRNA를 선별하였고, 이를 이용하여 막성사구체신염을 보다 용이하게 진단할 수 있다. The present invention selected miRNAs specifically expressed in membranous glomerulonephritis compared to normal group or idiopathic nephrotic syndrome from blood or serum-derived exosomes, and membranous glomerulonephritis can be diagnosed more easily using this.
또한, 상기의 miRNA를 이용하여 막성사구체신염을 조기 진단함으로써, 그에 따른 적절한 치료를 통해 증상 악화 및 이에 따른 합병증 등을 최소화하여 보다 효과적으로 막성사구체신염을 치료할 수 있다.In addition, by early diagnosis of membranous glomerulonephritis using the miRNA, it is possible to treat membranous glomerulonephritis more effectively by minimizing worsening symptoms and complications thereof through appropriate treatment accordingly.
도 1은 정상군(HV) 및 특발성 신증후군(INS) 대상자들의 혈청에서 분리한 엑소좀 내 마이크로 RNA(miRNA)의 발현수준을 비교분석한 결과로서, 도 1a는 정상군에 비해 특발성 신증후군에서 유의적으로 2배 이상 (p < 0.05) 발현이 감소 또는 증가한 miRNA의 발현수준에 따른 계층적 클러스터링을 수행한 히트맵 결과이고, 도 1b는 상기에서 검출된 miRNA의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과이다.
도 2는 특발성 신증후군(INS) 및 막성사구체신염(MGN) 대상자들의 혈청에서 분리한 엑소좀 내 miRNA의 발현수준을 비교분석한 결과로서, 도 2a는 특발성 신증후군에 비해 막성사구체신염에서 유의적으로 2배 이상 (p < 0.05) 발현이 감소 또는 증가한 miRNA의 발현수준에 따른 계층적 클러스터링을 수행한 히트맵 결과이고, 도 2b는 상기에서 검출된 miRNA의 발현수준에 따른 산점도 결과이다.
도 3은 정상군(HV) 및 막성사구체신염(MGN) 대상자들의 혈청에서 분리한 엑소좀 내 miRNA의 발현수준을 비교분석한 결과로서, 도 3a는 정상군에 비해 막성사구체신염에서 유의적으로 2배 이상 (p < 0.05) 발현이 감소 또는 증가한 miRNA의 발현수준에 따른 계층적 클러스터링을 수행한 히트맵 결과이고, 도 3b는 상기에서 검출된 miRNA의 발현수준에 따른 산점도 결과이다.
도 4는 상기 도 1, 2, 3의 결과로부터 발현이 유의하게 변화된 miRNA만을 벤다이어그램으로 표현하여 정상군(HV) 또는 특발성 신증후군(INS)에 비해 막성사구체신염군(MGN)에서만 발현이 변화된 miRNA만을 도출한 결과 (3개) 이다.
도 5는 상기 도 4에서 도출된 3개의 miRNA의 정상군(HV) 및 특발성 신증후군(INS)과 막성사구체신염군(MGN) 간의 유의적인 발현 차이를 확인한 결과이다.Figure 1 is a result of comparative analysis of the expression level of microRNA (miRNA) in exosomes isolated from the serum of normal group (HV) and idiopathic nephrotic syndrome (INS) subjects. It is a heat map result of performing hierarchical clustering according to the expression level of miRNAs whose expression was significantly reduced or increased by more than 2 times (p < 0.05), and FIG. 1b is a scatter plot according to the expression level of miRNAs detected above. ) is the result.
Figure 2 is a result of comparative analysis of the expression level of miRNA in exosomes isolated from the serum of subjects with idiopathic nephrotic syndrome (INS) and membranous glomerulonephritis (MGN), Figure 2a is significant in membranous glomerulonephritis compared to idiopathic nephrotic syndrome It is a heat map result of performing hierarchical clustering according to the expression level of the miRNA whose expression is reduced or increased by more than 2 times (p < 0.05), and FIG. 2b is a scatter plot result according to the expression level of the miRNA detected above.
Figure 3 is a result of comparative analysis of the expression level of miRNA in the exosomes isolated from the serum of normal group (HV) and membranous glomerulonephritis (MGN) subjects, Figure 3a is significantly 2 in membranous glomerulonephritis compared to normal group It is a heat map result of performing hierarchical clustering according to the expression level of miRNAs whose expression is decreased or increased by more than twofold (p < 0.05), and FIG. 3b is a scatter plot result according to the expression level of miRNAs detected above.
Figure 4 shows only miRNAs whose expression was significantly changed from the results of Figures 1, 2, and 3 in a Venn diagram, showing that the expression was changed only in the membranous glomerulonephritis group (MGN) compared to the normal group (HV) or idiopathic nephrotic syndrome (INS). This is the result of deriving only miRNA (three).
Figure 5 is a result of confirming the significant expression difference between the normal group (HV), idiopathic nephrotic syndrome (INS), and membranous glomerulonephritis group (MGN) of the three miRNAs derived in FIG. 4 above.
이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명자들은 막성사구체신염을 효과적으로 진단할 수 있는 바이오마커를 발굴하기 위해 혈청 유래 엑소좀에 존재하는 마이크로 RNA(miRNAs)를 분석하여 정상 대조군 또는 특발성 신증후군 환자군에 비해 막성사구체신염 환자군에서 발현이 유의하게 변화하는 miRNA를 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.In order to discover biomarkers that can effectively diagnose membranous glomerulonephritis, the present inventors analyzed microRNAs (miRNAs) present in serum-derived exosomes, and the expression was significant in the membranous glomerulonephritis patient group compared to the normal control group or idiopathic nephrotic syndrome patient group. The present invention was completed by identifying miRNAs that change in different ways.
본 발명은 miR-1229-3p, miR-340-3p 및 miR-99b-5p로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 miRNA를 유효성분으로 포함하는 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.The present invention provides a biomarker composition for diagnosis of membranous glomerulonephritis comprising at least one miRNA selected from the group consisting of miR-1229-3p, miR-340-3p and miR-99b-5p as an active ingredient.
본 명세서에서, "막성사구체신염(membranous glomerulonephritis, MGN)"이란, 신조직 소견상 면역 침착으로 사구체 모세혈관 막이 두꺼워지는 질환으로, '막성신증' 또는 '막성사구체병증'이라고도 한다. 형태학적으로는 미만성의사구체 기저막 비후와 내장상피 하부와 관련하여 과립상의 전자밀도성 면역글로불린의 침착을 특징으로 하는 신질환이다. 35세 이상의 성인에게 가장 흔하게 나타나고, 남성이 여성에 비해 2배 정도 많이 발생한다. 환자의 80% 정도는 단백뇨, 혈중 알부민의 감소, 지방질 증가, 부종 등 신증후군의 4대 증세가 나타난다. In the present specification, "membranous glomerulonephritis (MGN)" is a disease in which the glomerular capillary membrane thickens due to immune deposition in renal tissue, and is also referred to as 'membranous nephropathy' or 'membranous glomerulopathy'. Morphologically, it is a renal disease characterized by diffuse glomerular basement membrane thickening and granular electron-dense immunoglobulin deposition in the lower visceral epithelium. It is most common in adults over the age of 35 and occurs twice as often in men than in women. About 80% of patients show four major symptoms of nephrotic syndrome, such as proteinuria, decreased blood albumin, increased lipids, and edema.
본 명세서에서, "진단(diagnosis)"이란, 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것으로, 본 발명의 목적상 막성사구체신염의 발병 여부 또는 발명 가능성을 확인하는 것을 의미하며, 막성사구체신염 또는 이의 적어도 하나 이상의 증상에 대한 대상의 감수성을 판정하는 것, 테라메트릭스(therametrics)(예를 들어, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링하는 것) 등을 포함한다. 또한, 임상 상태의 일차 진단 또는 재발한 질병의 진단을 포함한다.As used herein, "diagnosis" is to confirm the presence or characteristics of a pathological state, and for the purpose of the present invention, it means to determine whether membranous glomerulonephritis occurs or whether there is an inventive possibility, membranous glomerulonephritis or at least one thereof. determining a subject's susceptibility to one or more symptoms, therametrics (eg, monitoring a subject's condition to provide information about the efficacy of a treatment), and the like. It also includes primary diagnosis of a clinical condition or diagnosis of a recurrent disease.
본 명세서에서, "바이오마커(biomarker)"란, 몸 안의 변화를 알아낼 수 있는 지표로서, 생명체의 정상 또는 병리적인 상태, 이의 변화 여부 등을 확인할 수 있는 물질로, 폴리펩타이드, 핵산, 지질, 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함할 수 있고, 이를 이용하여 본 발명과 같이 막성사구체신염 여부를 진단할 수 있다.In the present specification, a "biomarker" is an indicator that can detect changes in the body, and is a substance that can determine the normal or pathological state of a living organism, whether or not it is changed, and includes polypeptides, nucleic acids, lipids, and glycolipids. , glycoproteins, sugars (monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, etc.), and the like, and the like, and the like can be used to diagnose membranous glomerulonephritis as in the present invention.
상기 바이오마커 조성물에 있어서, 상기 miRNA는 엑소좀으로부터 유래된 것일 수 있고, 보다 바람직하게는 혈액 또는 혈청 유래 엑소좀으로부터 유래된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the biomarker composition, the miRNA may be derived from exosomes, more preferably from blood or serum-derived exosomes, but is not limited thereto.
보다 상세하게는, 상기 miR-1229-3p는 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어질 수 있고, 상기 miR-340-3p는 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 이루어질 수 있으며, 상기 miR-99b-5p는 서열번호 3으로 표시되는 염기서열로 이루어질 수 있다.More specifically, the miR-1229-3p may consist of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1, the miR-340-3p may consist of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, and the miR-99b- 5p may consist of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 3.
- miR-1229-3p : cucucaccacugcccucccacag (서열번호 1)-miR-1229-3p: cucucaccacugcccucccacag (SEQ ID NO: 1)
- miR-340-3p : uccgucucaguuacuuuauagc (서열번호 2)- miR-340-3p: uccgucucaguuacuuuauagc (SEQ ID NO: 2)
- miR-99b-5p : cacccguagaaccgaccuugcg (서열번호 3)-miR-99b-5p: cacccguagaaccgaccuugcg (SEQ ID NO: 3)
상기 miRNA는 정상 대조군 또는 특발성 신증후군 환자군과 비교하여 막성사구체신염 환자군에서 발현이 유의적으로 변화될 수 있고, 바람직하게는 상기 miRNA는 정상 대조군 또는 특발성 신증후군 환자군에 비해 막성사구체신염 환자군에서 발현이 감소될 수 있다.The expression of the miRNA can be significantly changed in the membranous glomerulonephritis patient group compared to the normal control group or the idiopathic nephrotic syndrome patient group. can be reduced
본 발명의 일 실시예에 따르면, 정상 대조군 또는 특발성 신증후군 환자군의 상기 miRNA 발현량 대비 막성사구체신염 환자군의 상기 miRNA의 발현량을 log2 (fold change) 값으로 계산한 값이 -2 내지 -5일 수 있다.According to an embodiment of the present invention, the miRNA expression level of the normal control group or the idiopathic nephrotic syndrome patient group compared to the miRNA expression level of the membranous glomerulonephritis patient group calculated as log2 (fold change) value is -2 to -5 days can
본 발명에 따른 바이오마커는 반복된 실험에도 동일한 결과를 나타내고, 이의 발현량의 변화가 유의성 있는 결과를 보이므로 신뢰도가 높은 마커로 볼 수 있으며, 이에 따라 예측된 결과는 타당하게 신뢰될 수 있다.Since the biomarker according to the present invention shows the same results even in repeated experiments, and the change in its expression level shows significant results, it can be regarded as a highly reliable marker, and thus the predicted results can be reasonably trusted.
본 발명은 miR-1229-3p, miR-340-3p 및 miR-99b-5p로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 miRNA의 발현수준을 측정할 수 있는 제제를 유효성분으로 포함하는 막성사구체신염 진단용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for diagnosis of membranous glomerulonephritis comprising, as an active ingredient, an agent capable of measuring the expression level of any one or more miRNAs selected from the group consisting of miR-1229-3p, miR-340-3p and miR-99b-5p. to provide.
상기 miRNA의 발현수준을 측정할 수 있는 제제는 상기 miRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.An agent capable of measuring the expression level of the miRNA may be a primer or probe that specifically binds to the miRNA, but is not limited thereto.
본 명세서에서, "프라이머(primer)"는 짧은 자유 3말단 수산화기(free 3' hydroxl group)를 가지는 핵산 서열로, 상보적인 주형과 염기쌍을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 시점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA polymerase 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오타이드 트리포스페이트(nucleotide triphosphate)의 존재 하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당해 기술 분야에 공지된 기술에 따라 적절히 선택될 수 있다.As used herein, a "primer" is a nucleic acid sequence having a short free 3' hydroxl group, capable of forming base pairs with a complementary template and serving as a starting point for template strand copying. Refers to a short nucleic acid sequence. The primer can initiate DNA synthesis in the presence of a reagent for polymerization (ie, DNA polymerase or reverse transcriptase) and four different nucleotide triphosphates in an appropriate buffer and temperature. PCR conditions and lengths of sense and antisense primers can be appropriately selected according to techniques known in the art.
본 명세서에서, "프로브(probe)"는 miRNA와 특이적으로 결합을 이룰 수 있는 수 개 내지 수백 개의 염기서열의 단편을 의미하며, 라벨링 되어있어서 상기 miRNA의 존재 유무, 발현량을 확인할 수 있다. 적절한 프로브 및 혼성화 조건은 당해 기술 분야에 공지된 기술에 따라 적절히 선택될 수 있다.In the present specification, "probe" refers to a fragment of several to hundreds of nucleotide sequences capable of specifically binding to miRNA, and is labeled so that the presence or absence of the miRNA and the expression level can be confirmed. Appropriate probes and hybridization conditions can be appropriately selected according to techniques known in the art.
본 발명은 상기의 막성사구체신염 진단용 조성물을 포함하는 막성사구체신염 진단용 키트를 제공한다. 상기 키트는 막성사구체신염이 의심되는 개체로부터 분리된 시료에서 상기 miRNA의 발현수준을 측정하여 막성사구체신염 발병 여부를 진단하는 데 사용될 수 있다.The present invention provides a kit for diagnosing membranous glomerulonephritis comprising the composition for diagnosing membranous glomerulonephritis. The kit can be used to diagnose the onset of membranous glomerulonephritis by measuring the expression level of the miRNA in a sample isolated from an individual suspected of having membranous glomerulonephritis.
상기 막성사구체신염 진단용 키트는 상기 miRNA 발현수준을 측정하는 제제 뿐만 아니라 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액, 또는 장치를 포함할 수 있다. The kit for diagnosing membranous glomerulonephritis may include not only an agent for measuring the miRNA expression level, but also one or more other component compositions, solutions, or devices suitable for analysis methods.
예를 들어, 본 발명에 따른 키트는 PCR을 수행하기 위해 분석하고자 하는 시료로부터 유래된 게놈 DNA, 본 발명의 마커 유전자에 대해 특이적인 프라이머 세트, 적당량의 DNA 중합 효소, dNTP 혼합물, PCR 완충용액 및 물을 포함하는 키트일 수 있다. 상기 PCR 완충용액은 KCl, Tris-HCl 및 MgCl2를 함유할 수 있다. 이외에 PCR 산물의 증폭 여부를 확인할 수 있는 전기영동 수행에 필요한 구성 성분들이 본 발명의 키트에 추가로 포함될 수 있다. For example, the kit according to the present invention includes genomic DNA derived from a sample to be analyzed to perform PCR, a primer set specific for the marker gene of the present invention, an appropriate amount of DNA polymerase, a dNTP mixture, a PCR buffer and It may be a kit containing water. The PCR buffer may contain KCl, Tris-HCl and MgCl 2 . In addition, the kit of the present invention may additionally include components necessary for performing electrophoresis to confirm whether the PCR product is amplified or not.
또한, 본 발명에 따른 키트는 RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. RT-PCR 키트는 마커 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍 외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액, 데옥시뉴클레오티드(dNTPs), Taq-폴리머레이즈 및 역전사 효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제, DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다. 또한 정량 대조군으로 사용되는 유전자에 특이적인 프라이머 쌍을 포함할 수 있다. In addition, the kit according to the present invention may be a kit including essential elements necessary for performing RT-PCR. The RT-PCR kit contains, in addition to each pair of primers specific for a marker gene, a test tube or other suitable container, reaction buffer, deoxynucleotides (dNTPs), enzymes such as Taq-polymerase and reverse transcriptase, DNase, RNase inhibitors, DEPC -Water (DEPC-water), sterilized water, etc. may be included. It may also include a primer pair specific to a gene used as a quantitative control.
본 발명은 환자로부터 분리된 시료로부터 miR-1229-3p, miR-340-3p 및 miR-99b-5p로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 miRNA의 발현수준을 측정하는 단계; 및 상기 miRNA의 발현수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.The present invention measures the expression level of any one or more miRNAs selected from the group consisting of miR-1229-3p, miR-340-3p and miR-99b-5p from a sample isolated from a patient; And comparing the expression level of the miRNA with a normal control sample; provides a method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis, including.
상기 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법은 상기 miRNA의 발현수준을 특발성 신증후군 환자군 시료와 비교하는 단계;를 더 포함할 수 있다.The method for providing information necessary for the diagnosis of membranous glomerulonephritis may further include comparing the expression level of the miRNA with that of idiopathic nephrotic syndrome patient group samples.
상기 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액 또는 뇨 등을 포함할 수 있고, 바람직하게는 혈액 또는 혈청일 수 있으며, 보다 바람직하게는 혈액 또는 혈청 유래 엑소좀일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The sample may include tissue, cell, whole blood, blood, serum, plasma, saliva, sputum, cerebrospinal fluid or urine, preferably blood or serum, and more preferably blood or serum-derived exosomes. However, it is not limited thereto.
상기 miRNA의 발현수준이 정상 대조군 또는 특발성 신증후군 환자군 시료의 발현수준보다 감소한 경우 막성사구체신염일 가능성이 높은 것으로 판단할 수 있다.If the expression level of the miRNA is lower than that of the normal control group or idiopathic nephrotic syndrome patient group sample, it can be determined that the possibility of membranous glomerulonephritis is high.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 정상 대조군 또는 특발성 신증후군 환자군의 상기 miRNA 발현수준 대비 막성사구체신염 환자군의 상기 miRNA의 발현수준을 log2 (fold change) 값으로 계산한 값이 -2 내지 -5일 때, 막성사구체신염일 가능성이 높은 것으로 판단할 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the miRNA expression level of the normal control group or the idiopathic nephrotic syndrome patient group compared to the miRNA expression level of the membranous glomerulonephritis patient group calculated as log2 (fold change) value is -2 to -5 days When it occurs, it can be judged that the possibility of membranous glomerulonephritis is high.
상기 miRNA의 발현수준은 중합효소연쇄반응(PCR), 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR), 경쟁적 RT-PCR(Competitive RT-PCR), 실시간 RT-PCR(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA: RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 마이크로어레이(microarray) 칩으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 방법으로 측정할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The expression level of the miRNA is polymerase chain reaction (PCR), reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), competitive RT-PCR (Competitive RT-PCR), real-time RT-PCR (Real-time RT-PCR), RNase It can be measured by one or more methods selected from the group consisting of RNase protection assay (RPA), Northern blotting, and DNA microarray chip, but is not limited thereto.
상기 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법은 환자로부터 분리된 시료로부터 단백뇨 증가 수준을 확인하는 단계를 추가로 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis may further include a step of confirming an increased level of proteinuria from a sample isolated from the patient, but is not limited thereto.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples will be described in detail to aid understanding of the present invention. However, the following examples are merely illustrative of the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.
<실험예> <Experimental example>
하기의 실험예는 본 발명에 따른 각각의 실시예에 공통적으로 적용되는 사항을 제공하기 위한 것이다.The following experimental examples are intended to provide items commonly applied to each embodiment according to the present invention.
1. 분석 대상 모집1. Recruitment of analysis subjects
본 발명자들은 막성사구체신염을 조기에 진단하고 막성사구체신염 관련 합병증의 발병을 예방하기 위한 막성사구체신염 진단용 바이오마커를 발굴하기 위해, 각각 정상군(HV) 20명, 막성사구체신염군(MGN) 19명, 특발성 신증후군(INS) 21명의 대상자들을 모집하였고, 상기 각 군의 대상자들로부터 혈청을 제공받았다.To discover biomarkers for diagnosis of membranous glomerulonephritis for early diagnosis of membranous glomerulonephritis and prevention of complications related to membranous glomerulonephritis, 20 normal group (HV) and 19 membranous glomerulonephritis group (MGN), respectively. 21 subjects with idiopathic nephrotic syndrome (INS) were recruited, and serum was provided from subjects in each group.
2. 혈청으로부터 RNA 분리 및 서열분석 수행2. RNA isolation and sequencing from serum
앞서 각 군의 대상자들로부터 채취한 혈청 샘플에 대하여 Exoquick(SBI, USA)을 사용하여 엑소좀(exosome)을 분리하였고, 상기 분리된 엑소좀으로부터 Qiagen miRNeasy kit를 이용하여 총 RNA를 추출하였으며, 추출된 총 RNA의 질은 Agilent RNA Bioanalyzer를 이용하여 제조사의 지시에 따라 측정하였다.Previously, exosomes were isolated using Exoquick (SBI, USA) from serum samples collected from subjects in each group, and total RNA was extracted from the isolated exosomes using Qiagen miRNeasy kit, and extraction The quality of total RNA obtained was measured using an Agilent RNA Bioanalyzer according to the manufacturer's instructions.
이후 상기 분리된 RNA를 이용하여 마크로젠사에서 Takara SMARTer smRNA for illumina kit를 사용하여 라이브러리를 제작한 후, Hiseq 2500으로 차세대 염기서열 분석(NGS)을 실시하여 microRNA를 검출하였다. Then, using the isolated RNA, a library was prepared using the Takara SMARTer smRNA for illumina kit from Macrogen, and then microRNA was detected by next-generation sequencing (NGS) using the Hiseq 2500.
<실시예 1> 막성사구체신염 진단용 마이크로 RNA(microRNA) 발굴<Example 1> Discovery of microRNA for diagnosis of membranous glomerulonephritis
1. 정상군 vs. 특발성 신증후군의 발현수준에 차이가 있는 microRNA 확인1. Normal vs. normal group Identification of microRNAs with differences in expression levels of idiopathic nephrotic syndrome
먼저, 앞선 실험예와 같이 모집된 정상군 20명과 특발성 신증후군 21명의 혈액 유래 엑소좀에서 발현수준의 차이가 나는 microRNA(miRNA)를 동정하기 위하여, 상기 실험예와 같이 각 대상자들에서 채취한 혈청으로부터 엑소좀을 분리하고 추출된 총 RNA에 대한 NGS 분석을 실시하였다. 분석 결과 228개의 miRNA가 검출되었으며, 나아가 상기 검출된 miRNA의 발현수준을 비교하였다. First, in order to identify microRNA (miRNA) with a difference in expression level in the blood-derived exosomes of 20 normal people and 21 people with idiopathic nephrotic syndrome, serum collected from each subject as in the above experimental example Exosomes were isolated from and NGS analysis was performed on the extracted total RNA. As a result of the analysis, 228 miRNAs were detected, and the expression levels of the detected miRNAs were further compared.
그 결과, 도 1a에 나타낸 바와 같이 정상군과 특발성 신증후군을 비교하였을 때, 2배 이상 발현 차이가 나고 p < 0.05인 miRNA 44개 중 발현이 증가하는 것이 33개, 발현이 감소하는 것이 11개로 확인되었다. 또한, 상기 유의한 발현 변화를 보이는 miRNA의 발현수준에 따른 산점도(scatter plot) 결과를 도 1b와 같이 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 1a, when comparing the normal group and the idiopathic nephrotic syndrome, 33 miRNAs showed increased expression and 11 decreased expression among 44 miRNAs with a difference of more than 2-fold and p < 0.05. Confirmed. In addition, the result of a scatter plot according to the expression level of the miRNA showing the significant expression change was confirmed as shown in FIG. 1B.
2. 특발성 신증후군 vs. 막성사구체신염의 발현수준에 차이가 있는 microRNA 확인2. Idiopathic nephrotic syndrome vs. Identification of microRNAs with differences in expression levels of membranous glomerulonephritis
상기 특발성 신증후군 21명과 막성사구체신염군 19명의 혈액 유래 엑소좀에서 발현수준의 차이가 나는 miRNA를 동정하기 위하여, 상기와 동일한 방법으로 얻은 엑소좀 내 총 RNA에 대한 NGS 분석을 실시하였다. 분석 결과 228개의 miRNA가 검출되었으며, 상기 검출된 miRNA의 발현수준을 비교하였다.In order to identify miRNAs with different expression levels in the blood-derived exosomes of 21 patients with idiopathic nephrotic syndrome and 19 patients with membranous glomerulonephritis, NGS analysis was performed on total RNA in exosomes obtained in the same manner as described above. As a result of the analysis, 228 miRNAs were detected, and the expression levels of the detected miRNAs were compared.
그 결과, 도 2a에 나타낸 바와 같이 특발성 신증후군과 막성사구체신염을 비교하였을 때, 2배 이상 발현 차이가 나고 p < 0.05인 miRNA 11개 중 발현이 증가하는 것이 3개, 발현이 감소하는 것이 8개로 확인되었다. 또한, 상기 유의한 발현 변화를 보이는 miRNA의 발현수준에 따른 산점도 결과를 도 2b와 같이 확인하였다.As a result, when idiopathic nephrotic syndrome and membranous glomerulonephritis were compared, as shown in FIG. 2a, 3 out of 11 miRNAs with a 2-fold or more expression difference and p < 0.05 showed increased expression and 8 decreased expression. identified as a dog. In addition, the scatter plot result according to the expression level of the miRNA showing the significant expression change was confirmed as shown in FIG. 2b.
3. 정상대조군 vs. 막성사구체신염의 발현수준에 차이가 있는 microRNA 확인3. Normal control vs. Identification of microRNAs with differences in expression levels of membranous glomerulonephritis
상기 정상군 20명과 막성사구체신염 19명의 혈액 유래 엑소좀에서 발현수준의 차이가 나는 miRNA를 동정하기 위하여, 상기와 동일한 방법으로 얻은 엑소좀 내 총 RNA에 대한 NGS 분석을 실시하였다. 분석 결과 228개의 miRNA가 검출되었으며, 상기 검출된 miRNA의 발현수준을 비교하였다. In order to identify miRNAs having different expression levels in blood-derived exosomes of 20 normal patients and 19 patients with membranous glomerulonephritis, NGS analysis was performed on total RNA in exosomes obtained in the same manner as described above. As a result of the analysis, 228 miRNAs were detected, and the expression levels of the detected miRNAs were compared.
그 결과, 도 3a에 나타낸 바와 같이 정상군과 막성사구체신염을 비교하였을 때, 2배 이상 발현 차이가 나고 p < 0.05인 miRNA 58개 중 발현이 증가하는 것이 31개, 발현이 감소하는 것이 27개로 확인되었다. 또한, 상기 유의한 발현 변화를 보이는 miRNA의 발현수준에 따른 산점도 결과를 도 3b와 같이 확인하였다. As a result, as shown in Figure 3a, when comparing the normal group and membranous glomerulonephritis, expression difference was more than 2 times and p < 0.05 of 58 miRNAs, 31 increased expression and 27 decreased expression. Confirmed. In addition, the scatter plot result according to the expression level of the miRNA showing the significant expression change was confirmed as shown in FIG. 3b.
4. 4. 막성사구체신염membranous glomerulonephritis 진단용 for diagnosis microRNAmicroRNA 확인 check
앞서 확인된 결과에 기초하여 막성사구체신염을 특이적으로 진단할 수 있는 miRNA를 발굴하기 위하여, 상기 각 분석결과 발현이 유의적으로 변화하는 것으로 확인된 miRNA를 도 4와 같이 벤다이어그램으로 나타내었다. In order to discover miRNAs capable of specifically diagnosing membranous glomerulonephritis based on the results identified above, miRNAs confirmed to have significantly changed expression as a result of each analysis are shown in a Venn diagram as shown in FIG.
그 결과, 정상군 및 특발성 신증후군에 비해 막성사구체신염에서 발현이 유의하게 변화한 3종의 miRNA가 선별되었다. As a result, three miRNAs whose expression was significantly changed in membranous glomerulonephritis compared to the normal group and idiopathic nephrotic syndrome were selected.
하기 표 1은 유의적으로 변화된 상기 3종의 miRNA를 나타낸 것이다.Table 1 below shows the three miRNAs that were significantly changed.
fold changecompared to normal group
fold change
(p=0.038)-2.02
(p=0.038)
(p=0.002)-3.45
(p=0.002)
(p=0.019)-2.44
(p=0.019)
상기 miRNA의 정상군 또는 특발성 신증후군과 막성사구체신염 간의 유의한 차이를 확인한 도 5 및 상기 표 1을 참조하면, 상기 3종의 miRNA는 막성사구체신염에서 정상군에 비해 각각 2.57배, 4.53배 및 2.06배의 유의한 차이를 나타내고 특발성 신증후군에 비해 2.02배, 3.45배 및 2.44배 유의한 차이를 나타냄을 확인할 수 있다.Referring to Figure 5 and Table 1 confirming the significant difference between the normal group or idiopathic nephrotic syndrome and membranous glomerulonephritis of the miRNA, the three miRNAs were 2.57 times, 4.53 times and 4.53 times respectively compared to the normal group in membranous glomerulonephritis It can be seen that it shows a significant difference of 2.06 times and shows a significant difference of 2.02 times, 3.45 times and 2.44 times compared to idiopathic nephrotic syndrome.
따라서 상기 결과들은 각각 정상군 또는 특발성 신증후군에 비해 막성사구체신염에서만 발현이 유의하게 변화하는 3종의 miRNA를 막성사구체신염을 특이적으로 진단할 수 있는 바이오마커로 유용하게 이용할 수 있음을 보여준다. Therefore, the above results show that the three miRNAs whose expression is significantly changed only in membranous glomerulonephritis compared to the normal group or idiopathic nephrotic syndrome can be usefully used as biomarkers for specifically diagnosing membranous glomerulonephritis.
<< 실시예Example 2> 혈청 지표 확인 2> Identification of Serum Indicators
앞선 실험예에서 수집된 정상군(HV) 20명, 막성사구체신염군(MGN) 19명, 특발성 신증후군(INS) 21명의 혈청에서 다양한 지표의 수준변화를 표 2와 같이 확인하였다.In the serum of 20 normal group (HV), 19 membranous glomerulonephritis (MGN), and 21 idiopathic nephrotic syndrome (INS) collected in the previous experimental example, the level changes of various indicators were confirmed as shown in Table 2.
(MGN vs Idiopathic NS)P value
(MGN vs Idiopathic NS)
(n = 21)Idiopathic NS
(n = 21)
82.3±49.3
82.3±49.3
7046.3±4423.2*
7046.3±4423.2*
9023.6±4062.6**
9023.6±4062.6**
0.220
0.220
(* HVs vs MGN P value < 0.05; ** HVs vs Idiopathic NS P value < 0.05(* HVs vs MGN P value < 0.05; ** HVs vs Idiopathic NS P value < 0.05
HVs-Health volunteers, MGN-Membranous glomerulonephritis, NSnephrotic syndrome. Hb-hemoglobin, PLT-platelet, BUN-blood urea nitrogen, Crcreatinine, eGFR-estimated glomerular filtration rate, HDL-high density lipoprotein, LDL-low density lipoprotein)HVs-Health volunteers, MGN-Membranous glomerulonephritis, NSnephrotic syndrome. Hb-hemoglobin, PLT-platelet, BUN-blood urea nitrogen, Crcreatinine, eGFR-estimated glomerular filtration rate, HDL-high density lipoprotein, LDL-low density lipoprotein)
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.Having described specific parts of the present invention in detail above, it is clear to those skilled in the art that these specific descriptions are only preferred embodiments, and the scope of the present invention is not limited thereby. do. That is, the substantial scope of the present invention is defined by the appended claims and their equivalents.
<110> Research Cooperation Foundation of Yeungnam University <120> BIOMARKER COMPOSITION FOR DIAGNOSING MEMBRANOUS GLOMERULONEPHRITIS AND USE THEREOF <130> ADP-2021-0250 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-1229-3p <400> 1 cucucaccac ugcccuccca cag 23 <210> 2 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-340-3p <400> 2 uccgucucag uuacuuuaua gc 22 <210> 3 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-99b-5p <400> 3 cacccguaga accgaccuug cg 22 <110> Research Cooperation Foundation of Yeungnam University <120> BIOMARKER COMPOSITION FOR DIAGNOSING MEMBRANOUS GLOMERULONEPHRITIS AND USE THEREOF <130> ADP-2021-0250 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> RNA <213> artificial sequence <220> <223> miR-1229-3p <400> 1 cucucaccac ugcccuccca cag 23 <210> 2 <211> 22 <212> RNA <213> artificial sequence <220> <223> miR-340-3p <400> 2 uccgucucag uuacuuuaua gc 22 <210> 3 <211> 22 <212> RNA <213> artificial sequence <220> <223> miR-99b-5p <400> 3 cacccguaga accgaccuug cg 22
Claims (16)
상기 miR-340-3p는,
정상 대조군과 비교하여 발현이 감소되는 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물.According to claim 1,
The miR-340-3p,
A biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis, characterized in that expression is reduced compared to a normal control group.
상기 miR-340-3p는,
엑소좀 유래인 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물.According to claim 1,
The miR-340-3p,
A biomarker composition for diagnosis of membranous glomerulonephritis, characterized in that it is derived from exosomes.
상기 엑소좀은,
혈액 또는 혈청 유래인 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물.According to claim 3,
The exosome,
A biomarker composition for diagnosis of membranous glomerulonephritis, characterized in that it is derived from blood or serum.
상기 miR-340-3p의 발현수준을 측정할 수 있는 제제는,
상기 miR-340-3p에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브인 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단용 조성물.According to claim 5,
The agent capable of measuring the expression level of the miR-340-3p,
A composition for diagnosing membranous glomerulonephritis, characterized in that the primer or probe specifically binds to the miR-340-3p.
상기 miR-340-3p의 발현수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.Measuring the expression level of miR-340-3p from a sample isolated from the patient; and
A method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis, comprising: comparing the expression level of miR-340-3p with a normal control sample.
상기 방법은,
상기 miR-340-3p의 발현수준을 특발성 신증후군 환자군 시료와 비교하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.According to claim 8,
The method,
Comparing the expression level of miR-340-3p with idiopathic nephrotic syndrome patient group samples; method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis, characterized in that it further comprises.
상기 시료는,
혈액 또는 혈청인 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.According to claim 8 or 9,
The sample is
A method for providing information necessary for diagnosis of membranous glomerulonephritis, characterized in that it is blood or serum.
상기 시료는,
혈액 또는 혈청 유래 엑소좀인 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.According to claim 10,
The sample is
A method for providing information necessary for diagnosis of membranous glomerulonephritis, characterized in that it is blood or serum-derived exosomes.
상기 방법은,
환자로부터 분리된 시료로부터 단백뇨 증가 수준을 확인하는 단계를 추가로 더 포함하는 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.According to claim 8,
The method,
A method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis, further comprising the step of determining an increased level of proteinuria from a sample isolated from the patient.
상기 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물은 miR-1229-3p 또는 miR-99b-5p을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단용 바이오마커 조성물.According to claim 1,
The biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis is a biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis, characterized in that it contains miR-1229-3p or miR-99b-5p as an active ingredient.
상기 막성사구체신염 진단용 조성물은 miR-1229-3p 또는 miR-99b-5p의 발현수준을 측정할 수 있는 제제를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단용 조성물.According to claim 5,
The composition for diagnosing membranous glomerulonephritis is a composition for diagnosing membranous glomerulonephritis, characterized in that it comprises an agent capable of measuring the expression level of miR-1229-3p or miR-99b-5p as an active ingredient.
상기 막성사구체신염 진단용 키트는 miR-1229-3p 또는 miR-99b-5p의 발현수준을 측정할 수 있는 제제를 유효성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단용 키트.According to claim 7,
The kit for diagnosing membranous glomerulonephritis is a kit for diagnosing membranous glomerulonephritis, characterized in that it comprises a composition comprising an agent capable of measuring the expression level of miR-1229-3p or miR-99b-5p as an active ingredient.
상기 방법은 miR-1229-3p 또는 miR-99b-5p의 발현수준을 측정하는 단계; 및
상기 miR-1229-3p 또는 miR-99b-5p의 발현수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 막성사구체신염 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.According to claim 8,
The method includes measuring the expression level of miR-1229-3p or miR-99b-5p; and
Comparing the expression level of the miR-1229-3p or miR-99b-5p with a normal control sample; a method for providing information necessary for diagnosing membranous glomerulonephritis, comprising the.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020210080558A KR102553088B1 (en) | 2021-06-22 | 2021-06-22 | Biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020210080558A KR102553088B1 (en) | 2021-06-22 | 2021-06-22 | Biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis and use thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20220170036A KR20220170036A (en) | 2022-12-29 |
KR102553088B1 true KR102553088B1 (en) | 2023-07-10 |
Family
ID=84539344
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020210080558A KR102553088B1 (en) | 2021-06-22 | 2021-06-22 | Biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis and use thereof |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR102553088B1 (en) |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20080091234A (en) | 2008-08-19 | 2008-10-09 | 모자이크 다이아그노스틱스 앤드 쎄라퓨틱스 아게 | Method and markers for the diagnosis of renal diseases |
-
2021
- 2021-06-22 KR KR1020210080558A patent/KR102553088B1/en active IP Right Grant
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Biomed Res Int, 2020:3170927. (2020.12.29.) |
Exp Cell Res, 318(9):993-1000. (2012.05.05.) |
Expert Rev Mol Diagn, 15(3):361-74. (2015.02.08.) |
J Cell Mol Med, 23(6):3927-3939. (2019.04.04.)* |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20220170036A (en) | 2022-12-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6092655B2 (en) | Classification of test body fluid samples | |
KR102110039B1 (en) | Biomarker microRNA-26b or microRNA-4449 for diagnosing obesity and use thereof | |
KR102178922B1 (en) | Biomarker microRNA let-7 or microRNA-150 for diagnosing diabetic nephropathy and use thereof | |
KR102492149B1 (en) | MicroRNA-1246 for diagnosing of ovarian cancer and use thereof | |
WO2013179672A1 (en) | Method for assessing endometriosis | |
JP6827067B2 (en) | Methods for detecting lupus nephritis or predicting its risk and its applications | |
KR102178919B1 (en) | Biomarker microRNAs for diagnosing diabetic nephropathy and use thereof | |
US20190390275A1 (en) | Chronic kidney disease diagnostic | |
KR102553088B1 (en) | Biomarker composition for diagnosing membranous glomerulonephritis and use thereof | |
KR102498098B1 (en) | Biomarker composition for diagnosing idiopathic nephrotic syndrome and use thereof | |
KR101381894B1 (en) | Serum miRNA as a marker for the diagnosis of lymph node metastasis of gastric cancer | |
KR102165841B1 (en) | Biomarker microRNA let-7b or microRNA-664a for diagnosing diabetes and use thereof | |
KR102505618B1 (en) | Urinary exosome-derived miRNA gene biomarkers for diagnosis of antibody-mediated rejection in kidney allografts and use thereof | |
KR20190113033A (en) | Method for diagnosing parkinson's disease using nasal mucus, composition therefore, and kit comprising the same | |
KR102548285B1 (en) | Biomarker composition for diagnosing idiopathic nephrotic syndrome and use thereof | |
KR20230134833A (en) | Biomarker composition for diagnosing refractory membranous glomerulonephritis and use thereof | |
KR20220124941A (en) | Biomarker for diagnosing pre-diabetes or predicting development of diabetic complications and use thereof | |
KR20220028418A (en) | MicroRNA biomarker for predicting drug response to diabetes treatment and use thereof | |
JP3901684B2 (en) | Examination method of body fluid of neuroblastoma | |
KR102480430B1 (en) | MicroRNA-31-5p for diagnosing rosacea and use thereof | |
KR102110050B1 (en) | Biomarker microRNA-423 or microRNA-424 for diagnosing diabetes and use thereof | |
US11655507B2 (en) | Method for diagnosing Parkinson's disease using nasal mucus, composition therefore, and kit comprising the same | |
KR102110038B1 (en) | Biomarker let-7a or let-7f for diagnosing obesity and use thereof | |
KR102545543B1 (en) | Urinary exosome-derived miRNA gene biomarkers for diagnosis of BK virus nephropathy in kidney allografts and use thereof | |
KR20240006745A (en) | Biomarker composition for diagnosing fatty liver disease and use thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |