KR20190113033A - Method for diagnosing parkinson's disease using nasal mucus, composition therefore, and kit comprising the same - Google Patents

Method for diagnosing parkinson's disease using nasal mucus, composition therefore, and kit comprising the same Download PDF

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Abstract

The present application relates to a method for providing information for diagnosing Parkinson′s disease, including a step of measuring the expression level of a Parkinson′s disease related gene from a nasal mucus sample of a subject; a composition for diagnosing Parkinson′s disease; and a kit including the same.

Description

콧물액을 이용한 파킨슨 질환의 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 이를 포함하는 키트{METHOD FOR DIAGNOSING PARKINSON'S DISEASE USING NASAL MUCUS, COMPOSITION THEREFORE, AND KIT COMPRISING THE SAME}METHOD FOR DIAGNOSING PARKINSON'S DISEASE USING NASAL MUCUS, COMPOSITION THEREFORE, AND KIT COMPRISING THE SAME}

본원은 대상의 콧물액 시료로부터 파킨슨 질환 관련 유전자의 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는 파킨슨 질환 진단을 위한 정보제공방법, 파킨슨 질환 진단용 조성물 및 이를 포함하는 키트에 관한 것이다.The present application relates to an information providing method for diagnosing Parkinson's disease, including a method for diagnosing Parkinson's disease, and a kit comprising the same.

평균 수명이 증가하여 고령화 사회로 진입함에 따라, 노화에 따라 발병하는 퇴행성 질환이 커다란 의료 및 사회적 문제로 대두되고 있다. 이러한 퇴행성 질환 중에서도 특히 퇴행성 운동장애 뇌질환인 파킨슨 질환 환자의 수가 급격하게 증가하는 추세에 있다.As life expectancy increases and enters an aging society, degenerative diseases caused by aging are becoming a major medical and social problem. Among these degenerative diseases, in particular, the number of patients with Parkinson's disease, which is a degenerative dyskinesia, is rapidly increasing.

파킨슨 질환 (Parkinson's disease)은 팔, 다리 또는 전신의 근육이 경련 또는 경직되며 중심을 잡지 못하는 퇴행성 신경질환이다. 이와 같은 증상은 뇌신경세포의 문제로 신경전달물질인 도파민 분비에 이상이 생기면서, 뇌의 특정 신경세포가 점차 파괴되어 발생한다. 파킨슨 질환의 전형적인 증상은 경련, 근육 경직 및 동작이 느려지는 증상 등을 포함하는 운동장애이다. Parkinson's disease is a degenerative neurological disorder in which the muscles of the arms, legs or whole body are convulsed or stiff and do not center. This symptom is caused by a problem in the nerve cells of the neurotransmitter dopamine secretion, the specific neurons of the brain is gradually destroyed. Typical symptoms of Parkinson's disease are dyskinesia, including convulsions, muscle stiffness and slow motion.

파킨슨 질환은 진행속도가 느리고 수십 년에 걸쳐서 진행되기 때문에 발병 시점을 정확히 알기 어려우며, 증상이 발견되었을 때는 이미 뇌의 흑질 부위의 신경세포가 상당히 변성된 경우가 많다. 따라서, 파킨슨 질환의 진행의 적절한 조절을 위해서는 상당한 수준의 신경세포 사멸이 나타나기 이전에 조기 진단할 수 있는 질환 특이적인 신규 마커의 발굴이 중요하다.Because Parkinson's disease progresses slowly and progresses for decades, it is difficult to know exactly when the disease occurs. When symptoms are found, nerve cells in the brain's black matter are often denatured. Therefore, for proper regulation of the progression of Parkinson's disease, it is important to discover new disease-specific markers that can be diagnosed early before significant neuronal cell death occurs.

현재는 파킨슨 질환의 조기 진단을 위한 생체 분비 시료로서 뇌척수액, 혈액 및 소변 등이 사용되고 있다. 그러나, 뇌척수액은 채취 가능한 시료의 양의 제한적이고 연구목적으로 샘플을 얻기가 어려워 다양한 종류의 마커들을 동시에 분석하는데 한계가 있었다. 혈액과 소변의 경우 비록 뇌척수액에 비해서는 비침습적 시료 채취가 가능한 장점이 있으나, 퇴행성 질환의 병변 발현 부위를 직접 대변하지 못하는 샘플에서의 간접적인 진단 마커 측정이기 때문에 감도나 일관성에 문제가 있을 수 있다. Currently, cerebrospinal fluid, blood, and urine are used as biological secretion samples for early diagnosis of Parkinson's disease. However, cerebrospinal fluid is limited in the amount of sample that can be collected and it is difficult to obtain a sample for research purposes, which limits the analysis of various markers at the same time. Although blood and urine have the advantage of non-invasive sampling compared to cerebrospinal fluid, there may be a problem with sensitivity or consistency because it is an indirect diagnostic marker measurement in a sample that does not directly represent the site of lesion development of degenerative disease. .

대한민국 등록특허 제 10-1716114 호Republic of Korea Patent No. 10-1716114

본원은, 파킨슨 환자의 80% 이상에서 조기에 후각 이상의 소견이 보고되었음에 주목하고, 파킨슨 질환의 조기진단 전략으로서 시료 채취의 용이성이 우수한 콧물액을 이용한 전사체 분석방법을 개발하고자 하였다. 파킨슨 환자에서 후각 이상은 운동 병변이 발현되기 수년 이전에 나타나는데, 이러한 후각 이상을 대변할 수 있는 콧물액을 이용한 파킨슨 질환의 조기 진단 시도는 시도된 바 없었다.The present study noted that more than 80% of Parkinson's patients reported olfactory abnormalities early, and to develop a transcript analysis method using a runny nose solution with excellent ease of sampling as an early diagnosis strategy for Parkinson's disease. Olfactory abnormalities in Parkinson's patients appear many years before the onset of motor lesions. No attempt has been made to diagnose Parkinson's disease using a runny nose that can represent these olfactory abnormalities.

이에 본원에서는, 콧물액으로부터 전사체 RNA를 추출 및 분리하고, 이로부터 실시간 정량 PCR (realtime quantitative PCR) 기법을 통해 주요 파킨슨 질환 마커들 (α-시뉴클레인(SNCA), 파킨, ZNF746 (PARIS), RNF146, c-Abl 및 AIMP2)의 발현을 정량하고자 하였다. 또한, 정상군과 파킨슨 환자의 콧물액 전사체 분석으로부터 파킨슨 병변과 연계성을 보이는 마커들을 파킨슨 질환 병변의 조기 진단 마커로서 활용하고자 하였다.Herein, the present invention extracts and isolates transcript RNA from a runny nose, and from there, a real-time quantitative PCR technique, major Parkinson's disease markers (α-synuclein (SNCA), Parkin, ZNF746 (PARIS), Expression of RNF146, c-Abl and AIMP2) was quantified. In addition, markers showing association with Parkinson's lesions from the nasal transcripts of normal and Parkinson's patients were used as early diagnosis markers of Parkinson's disease lesions.

그러나, 본원이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the problem to be solved by the present application is not limited to the above-mentioned problem, another task that is not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

본원의 제 1 측면은, 분리된 콧물액에서 파킨슨 질환 관련 유전자의 발현 수준을 측정하기 위한 제제를 포함하는 파킨슨 질환 진단용 조성물을 제공할 수 있다.The first aspect of the present application may provide a composition for diagnosing Parkinson's disease, including an agent for measuring the expression level of Parkinson's disease-related genes in an isolated runny nose.

본원의 제 2 측면은, 본원의 제 1 측면에 따른 파킨슨 질환 진단용 조성물을 포함하는 파킨슨 질환 진단용 키트를 제공할 수 있다.The second aspect of the present application can provide a Parkinson's disease diagnostic kit comprising a composition for diagnosing Parkinson's disease according to the first aspect of the present application.

본원의 제 3 측면은, 파킨슨 질환 의심 환자로부터 콧물액을 분리하고; 상기 콧물액 내의 세포로부터 파킨슨 질환 관련 유전자 전사체, 또는 이로부터 발현되는 펩타이드 또는 단백질의 발현 수준을 측정하고, 이를 표준 유전자의 발현에 대해 정규화시키고; 정규화된 발현 수준을, 정상인에 대해 측정되고 정규화된 발현 수준과 비교하는 것을 포함하는, 파킨슨 질환 진단을 위한 정보제공방법을 제공할 수 있다.A third aspect of the present disclosure is directed to separating a runny nose from a patient suspected of Parkinson's disease; Measuring expression levels of Parkinson's disease related gene transcripts, or peptides or proteins expressed therefrom, from cells in the runny nose and normalizing them for expression of standard genes; Informational methods can be provided for diagnosing Parkinson's disease, including comparing normalized expression levels with those measured for normal individuals and normalized expression levels.

상술한 과제 해결 수단은 단지 예시적인 것으로서, 본 발명을 제한하려는 의도로 해석되지 않아야 한다. 상술한 예시적인 구현예 외에도, 도면 및 발명의 상세한 설명에 기재된 추가적인 구현예 및 실시예가 존재할 수 있다.The above-mentioned means for solving the problems are merely exemplary, and should not be construed to limit the present invention. In addition to the exemplary embodiments described above, there may be additional embodiments and embodiments described in the drawings and detailed description of the invention.

본원은, 후각 이상을 보이는 잠재적 파킨슨 질환 환자의 콧물액 전사체 중의 콧물액 특이적 파킨슨 질환 마커를 정량함으로써 파킨슨 질환의 조기 진단 내지 확진 방법을 제공하고자 하였다. 특히, 정상군과 파킨슨 환자의 콧물액 전사체 분석으로부터 파킨 전사체의 감소 및 AIMP2 전사체의 증가가 파킨슨 병변과 유의적으로 연계성을 보임을 확인하여, 콧물액 내의 파킨과 AIMP2를 파킨슨 질환 병변의 조기 진단 마커로서 활용하고자 하였다. 또한, 콧물액으로부터의 전사체 분리 정제, 그리고 파킨 및 AIMP2 전사체 정량을 통한 효율적이고 선택적인 감도 높은 파킨슨 질환의 진단키트 개발에 응용하고자 하였다.The present application aims to provide a method for early diagnosis or confirmation of Parkinson's disease by quantifying a runny nose specific Parkinson's disease marker in a runny nose transcript of a potential Parkinson's disease patient with olfactory abnormalities. In particular, the analysis of runny nose transcripts from normal and Parkinson's patients confirmed that the reduction of Parkin transcripts and the increase of AIMP2 transcripts were significantly associated with Parkinson's lesions. It was intended to be used as an early diagnostic marker. In addition, it was intended to be applied to the separation and purification of transcripts from a runny nose and to develop an efficient and selective sensitive diagnostic kit of Parkinson's disease by quantifying Parkin and AIMP2 transcripts.

본원은 최초로 파킨슨 질환 환자의 콧물액 내의 전사체를 정량하고, 콧물액 전사체 특이적인 파킨슨 질환 마커의 발현 양상으로부터 파킨슨 질환의 조기 진단 방법을 제공하고자 한 것이다.The present application aims to quantify transcripts in a runny nose of a Parkinson's disease patient for the first time and to provide a method for early diagnosis of Parkinson's disease from the expression of a runny nose transcript-specific Parkinson's disease marker.

도 1a는 본원의 일 실시예에 따라 콧물액으로부터 목적 유전자의 전사체를 정량하기 위한 공정의 순서도이고, 도 1b는 콧물액으로부터 목적 유전자의 전사체가 정상적으로 정제되었음을 확인한 전기영동 결과이다.
도 2는 본원의 일 실시예에 따라 수행된 목적 유전자의 cDNA의 PCR 및 용융 곡선 측정 조건을 나타낸 것이다.
도 3은 본원의 일 실시예에 따라 정상군 및 파킨슨 환자의 콧물액에서 발현되는 목적 유전자들의 PCR 산물의 용융 곡선을 나타내는 그래프이다.
도 4a 내지 도 4c는 정상군 및 파킨슨 환자의 콧물액에서 발현되는 목적 유전자들의 정량 결과를 나타내는 그래프이고, 도 4d는 실험에 사용된 샘플수를 보여주는 표이다.
Figure 1a is a flow chart of the process for quantifying the transcript of the target gene from the runny nose according to an embodiment of the present application, Figure 1b is an electrophoresis result confirming that the transcript of the target gene is normally purified from the runny nose.
Figure 2 shows the PCR and melting curve measurement conditions of the cDNA of the gene of interest performed according to an embodiment of the present application.
Figure 3 is a graph showing the melting curve of the PCR product of the target genes expressed in the runny nose of the normal group and Parkinson's patients according to an embodiment of the present application.
Figures 4a to 4c is a graph showing the quantitative results of the target genes expressed in the runny nose of the normal group and Parkinson's patients, Figure 4d is a table showing the number of samples used in the experiment.

아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본원이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본원을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였다.DETAILED DESCRIPTION Hereinafter, exemplary embodiments of the present disclosure will be described in detail with reference to the accompanying drawings so that those skilled in the art may easily implement the present disclosure. As those skilled in the art would realize, the described embodiments may be modified in various different ways, all without departing from the spirit or scope of the present invention. In the drawings, parts irrelevant to the description are omitted in order to clearly describe the present application.

본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다. Throughout this specification, when a part is said to "include" a certain component, it means that it can further include other components, without excluding the other components unless specifically stated otherwise.

본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "~(하는) 단계" 또는 "~의 단계"는 "~ 를 위한 단계"를 의미하지 않는다. As used throughout this specification, the terms "about", "substantially" and the like are used at, or in the sense of, numerical values when a manufacturing and material tolerance inherent in the stated meanings is indicated, Accurate or absolute figures are used to assist in the prevention of unfair use by unscrupulous infringers. As used throughout this specification, the term "step to" or "step of" does not mean "step for."

본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.Throughout this specification, the term "combination of these" included in the expression of the makushi form means one or more mixtures or combinations selected from the group consisting of constituents described in the expression of the makushi form, wherein the constituents It means to include one or more selected from the group consisting of.

본원 명세서 전체에서, "A 및/또는 B" 의 기재는, "A, B, 또는, A 및 B" 를 의미한다. Throughout this specification, description of "A and / or B" means "A, B, or A and B."

본원 명세서 전체에서, "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 그 중에서도 본 발명은 파킨슨 질환의 진단에 유용하다. 본원은 파킨슨 질환의 발병 및 진행을 예측하는 것을 포함한다. 특히 파킨슨 질환의 발병을 조기에 예측할 수 있는 지표가 매우 중요한데, 본원의 방법에 따르면 후각 이상의 소견을 보이는 파킨슨 질환 의심 환자에서 용이하게 채취할 수 있는 콧물을 내의 파킨슨 질환 연관 유전자 내지 단백질의 수준을 파킨슨 질환 진단 마커로 이용할 수 있다. 여기서 "진단용 마커 또는 진단 마커(diagnosis marker)란 파킨슨 질환 환자의 세포를 파킨슨 질환이 없는 정산인의 세포와 구분하여 진단할 수 있는 물질로서, 정상인의 세포에 비하여 파킨슨 질환 환자의 세포에서 증가 또는 감소 양상을 보이는 폴리펩타이드, 핵산, 지질 , 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 다당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등으로부터 선택될 수 있다.Throughout this specification, "diagnosis" means identifying the presence or characteristic of a pathological condition. Among them, the present invention is useful for the diagnosis of Parkinson's disease. This disclosure includes predicting the onset and progression of Parkinson's disease. In particular, it is very important to be able to predict early onset of Parkinson's disease. According to the present method, Parkinson's level of Parkinson's disease-related genes or proteins in runny nose that can be easily collected from suspected Parkinson's disease patients with olfactory abnormalities. It can be used as a disease diagnosis marker. Here, the "diagnosis marker or diagnosis marker (diagnosis marker) is a substance that can diagnose the cells of Parkinson's disease patients from the cells of the settler who does not have Parkinson's disease, and increases or decreases in the cells of Parkinson's disease patients compared to the cells of normal people. Organic biomolecules such as polypeptides, nucleic acids, lipids, glycolipids, glycoproteins, sugars (monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, etc.) and the like.

본원 명세서 전체에서, "핵산"은 임의의 DNA 또는 RNA, 예를 들어, 조직 샘플에 존재하는 염색체, 미토콘드리아, 바이러스 및/또는 세균 핵산을 포함하는 의미이다. 이중가닥 핵산 분자의 하나 또는 두개 모두의 가닥을 포함하고, 무손상 핵산 분자의 임의의 단편 또는 일부를 포함한다.Throughout this specification, “nucleic acid” is meant to include any DNA or RNA, eg, chromosomes, mitochondria, viruses and / or bacterial nucleic acids present in tissue samples. One or both strands of a double stranded nucleic acid molecule and any fragment or portion of an intact nucleic acid molecule.

본원 명세서 전체에서, "유전자"는 단백질 코딩 또는 전사시에 또는 다른 유전자 발현의 조절시에 기능적 역할을 갖는 임의의 핵산 서열 또는 그의 일부를 의미한다. 유전자는 기능적 단백질을 코딩하는 모든 핵산 또는 단백질을 코딩 또는 발현하는 핵산의 일부만으로 이루어질 수 있다. 핵산 서열은 엑손, 인트론, 개시 또는 종료 영역, 프로모터 서열, 다른 조절 서열 또는 유전자에 인접한 특유한 서열 내에 유전자 이상을 포함할 수 있다.Throughout this specification, "gene" refers to any nucleic acid sequence or portion thereof that has a functional role in protein coding or transcription or in the regulation of other gene expression. The gene may consist of any nucleic acid encoding a functional protein or only a portion of a nucleic acid encoding or expressing a protein. Nucleic acid sequences may include gene abnormalities in exons, introns, initiation or termination regions, promoter sequences, other regulatory sequences, or unique sequences adjacent to genes.

본원 명세서 전체에서, "유전자 발현"이란 용어는 일반적으로 전사체, 그리고 나아가 생물학적 활성이 있는 폴리펩티드가 DNA 서열로부터 생성되고 세포에서 생물학적 활성을 나타내는 세포 과정을 의미한다. 그런 의미로, 유전자 발현은 전사 및 해독 과정을 포함할 뿐만 아니라, 유전자 또는 유전자 산물의 생물학적 활성에 영향을 끼칠 수 있는 전사후 및 해독후 과정을 포함한다. 상기 과정들은 RNA 합성, 가공 및 수송뿐만 아니라, 폴립펩티드 합성, 수송 및 폴리펩티드의 해독후 변형을 포함하지만, 이들에 국한되는 것은 아니다. 본원에서는 유전자 발현의 일 양태로 mRNA 발현 및 단백질 발현의 경우를 모두 포함한다.Throughout this specification, the term "gene expression" generally refers to a cellular process in which a transcript, and further biologically active polypeptide, is generated from a DNA sequence and exhibits biological activity in a cell. In that sense, gene expression includes not only transcriptional and translational processes, but also posttranscriptional and posttranslational processes that can affect the biological activity of a gene or gene product. The processes include, but are not limited to, RNA synthesis, processing and transport, as well as post-translational modifications of polypeptide synthesis, transport and polypeptide. As used herein, one aspect of gene expression includes both mRNA expression and protein expression.

본원 명세서 전체에서, "프라이머"는 상보성 RNA 또는 DNA 표적 폴리뉴클레오티드에 혼성화하고 예를 들어 PCR에서 발생하는 뉴클레오티딜트랜스퍼라제의 작용에 의해 모노뉴클레오티드로부터 폴리뉴클레오티드의 단계적 합성을 위한 출발점으로 기능하는 올리고뉴클레오티드 서열을 의미한다.Throughout this specification, "primers" are oligos that hybridize to complementary RNA or DNA target polynucleotides and serve as a starting point for the stepwise synthesis of polynucleotides from mononucleotides by the action of nucleotidyltransferases, eg, occurring in PCR. Nucleotide sequence.

이하, 본원의 파킨슨 질환 진단용 조성물, 파킨슨 질환 진단용 키트, 및 파킨슨 질환 진단을 위한 정보제공방법에 대하여 구현예 및 실시예와 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본원이 이러한 구현예 및 실시예와 도면에 제한되는 것은 아니다. Hereinafter, a composition for diagnosing Parkinson's disease, a kit for diagnosing Parkinson's disease, and a method for providing information for diagnosing Parkinson's disease will be described in detail with reference to embodiments, examples, and drawings. However, the present application is not limited to these embodiments, examples and drawings.

본원의 제 1 측면은, 분리된 콧물액에서 파킨슨 질환 관련 유전자의 발현 수준을 측정하기 위한 제제를 포함하는 파킨슨 질환 진단용 조성물에 관한 것이다. The first aspect of the present application relates to a composition for diagnosing Parkinson's disease, including an agent for measuring the expression level of a Parkinson's disease related gene in isolated runny nose.

본원의 조성물은, 일반적으로 파킨슨 질환 진단에 사용되는 뇌척수액에 비해 수집이 용이한 콧물액을 이용하여 파킨슨 질환을 진단하기 위한 것으로서, 파킨슨 질환에서 조기에 관찰되는 병변의 일종인 후각이상이 나타나는 코로부터 콧물액을 채취하여 이로부터 파킨슨 질환 관련 유전자의 발현 수준을 측정함으로써 높은 정확도로 조기에 파킨슨 질환을 진단할 수 있다.The composition of the present application is for diagnosing Parkinson's disease using a runny nose, which is easier to collect than cerebrospinal fluid, which is generally used for diagnosing Parkinson's disease. By collecting a runny nose and measuring the expression level of Parkinson's disease-related genes from it, Parkinson's disease can be diagnosed early with high accuracy.

예를 들어, 상기 콧물액은 비강 세척액으로부터 수득한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 예를 들어, 상기 비강 세척은 식염수 또는 물 (증류수)를 이용해 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.For example, the runny nose solution may be obtained from a nasal wash, but may not be limited thereto. For example, the nasal wash may be performed using saline or water (distilled water), but may not be limited thereto.

상기 분리된 콧물액에서 파킨슨 질환 관련 유전자의 발현 수준을 측정하는 것은, 콧물액 내의 세포를 분리하고, 상기 세포들에서 상기 유전자의 발현 수준을 측정하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.Measuring the expression level of Parkinson's disease-related genes in the isolated runny nose may be to isolate the cells in the runny nose and measure the expression level of the gene in the cells, but may not be limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 파킨슨 질환 관련 유전자는 α-시뉴클레인(또는 SNCA), 파킨 (parkin), ZNF746 (또는 PARIS), RNF146, OMP, c-Abl 및 AIMP2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있으며, 정상인의 그것에 비해 파킨슨 환자의 콧물액에서 달리 발현되는 유전자라면 제한 없이 사용할 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the Parkinson's disease-related gene is one selected from the group consisting of α-synuclein (or SNCA), parkin (parkin), ZNF746 (or PARIS), RNF146, OMP, c-Abl and AIMP2. It may be, but is not limited thereto, and genes that are otherwise expressed in the runny nose of Parkinson's patients compared to those of normal persons may be used without limitation.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 발현 수준을 측정하기 위한 제제는 파킨슨 질환 관련 유전자의 핵산 서열 또는 이에 대응하는 서열에 결합하는 핵산 프라이머, 또는 파킨슨 질환 유전자에 의해 발현되는 펩타이드 또는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 앱타머를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있으며, 본원이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 수행되는 유전자 발현의 정량 방법이라면 제한 없이 사용할 수 있다.According to one embodiment of the present application, the agent for measuring the expression level is specifically directed to a nucleic acid primer or a peptide or protein expressed by a Parkinson's disease gene, or a nucleic acid primer that binds to a nucleic acid sequence or a corresponding sequence of a Parkinson's disease related gene. It may include an antibody or aptamer to bind, but may not be limited thereto, and any method may be used without limitation as long as it is a quantitative method for gene expression commonly performed in the art.

본원의 제 2 측면은, 본원의 제 1 측면에 다른 조성물을 포함하는 파킨슨 질환 진단용 키트에 관한 것이다.A second aspect of the present application relates to a Parkinson's disease diagnostic kit comprising another composition in the first aspect of the present application.

본원의 키트가 만일 PCR 증폭 과정에 적용되는 경우, 상기 키트는 선택적으로, PCR 증폭에 필요한 시약, 예컨대, 완충액, DNA 중합효소 (예를 들어 Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis 또는 Pyrococcus furiosus(Pfu)로부터 수득한 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있다.If the kits herein are subjected to a PCR amplification process, the kits may optionally contain reagents necessary for PCR amplification, such as buffers, DNA polymerases (eg Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth), Thermus filiformis). , Thermis flavus, Thermococcus literalis or thermally stable DNA polymerase obtained from Pyrococcus furiosus (Pfu)), DNA polymerase cofactors and dNTPs.

본원의 키트가 면역 분석에 적용되는 경우, 상기 키트는 선택적으로, 이차항체 및 표지의 기질을 포함할 수 있다. 나아가, 본원에 따른 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다.When the kits of the present application are subjected to an immunoassay, the kit may optionally comprise a substrate of a secondary antibody and a label. Furthermore, the kits according to the invention can be produced in a number of separate packaging or compartments comprising the reagent components described above.

본원의 제 3 측면은, 파킨슨 질환 의심 환자로부터 콧물액을 분리하고; 상기 콧물액 내의 세포로부터 파킨슨 질환 관련 유전자 또는 이의 전사체, 또는 이로부터 발현되는 펩타이드 또는 단백질의 발현 수준을 측정하고, 이를 표준 유전자의 발현에 대해 정규화시키고; 정규화된 발현 수준을, 정상인에 대해 측정되고 정규화된 발현 수준과 비교하는 것을 포함하는, 파킨슨 질환 진단을 위한 정보제공방법에 관한 것이다.A third aspect of the present disclosure is directed to separating a runny nose from a patient suspected of Parkinson's disease; Measuring expression levels of Parkinson's disease related genes or transcripts thereof, or peptides or proteins expressed therefrom from cells in the runny nose and normalizing them for expression of standard genes; A method of providing information for diagnosing Parkinson's disease, comprising comparing normalized expression levels with those measured for normal individuals and normalized expression levels.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 파킨슨 질환 관련 유전자는 α-시뉴클레인 (SNCA), 파킨 (parkin), ZNF746 (PARIS), RNF146, c-Abl 및 AIMP2로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the Parkinson's disease-related gene may be selected from the group consisting of α-synuclein (SNCA), parkin (parkin), ZNF746 (PARIS), RNF146, c-Abl and AIMP2, but is not limited thereto. It may not be.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 표준 유전자는 GAPDH일 수 있으나, 파킨슨 질환의 유무에 관계없이 개체들 사이에서 일정한 발현을 보이는 유전자라면 제한 없이 사용될 수 있다.According to the exemplary embodiment of the present application, the standard gene may be GAPDH, but any gene showing a constant expression among individuals with or without Parkinson's disease may be used without limitation.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 유전자의 발현 수준은 역전사효소 중합반응 (RT-PCR), 경쟁적 역전사효소 중합효소반응 (competitive RT-PCR), 실시간 역전사 효소 중합효소반응 (real time quantitative RT-PCR), 정량적 중합효소반응 (quantitative RT-PCR), RNase 보호 분석법 (RNase protection method), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩 방법(DNA chip technology)을 이용하여 측정될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the expression level of the gene is reverse transcriptase polymerase (RT-PCR), competitive reverse transcriptase polymerase (competitive RT-PCR), real time quantitative RT-PCR (real time quantitative RT-PCR) ), Quantitative RT-PCR, RNase protection method, Northern blotting or DNA chip technology, but are not limited thereto. Can be.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 단백질 또는 펩타이드의 발현 수준은 웨스턴블롯 (Western blot), ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법 (Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법 (Complement Fixation Assay), 유세포분석 (Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩 (protein chip)을 이용하여 측정될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the expression level of the protein or peptide is Western blot, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), immunoprecipitation assay (Immunoprecipitation Assay), complement fixation assay (Complement Fixation Assay), flow cytometry (Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), or may be measured using a protein chip (protein chip), but may not be limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, 정규화된 발현 수준의 비교는, 미리 결정된 컷오프 값과 비교하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 이 경우, 상기 컷오프 값은 검사한 수치의 민감도와 1-특이도로 그려지는 곡선인 ROC 곡선 (Receiver Operation Characterstic Curve)에 따라 결정되는 것일 수 있다. 즉, 미리 준비된 파킨슨 환자의 콧물액 내의 유전자 발현 수준과 정상인의 콧물액 내의 유전자 발현 수준을 정규화한 후 이를 이용한 ROC 곡선 결과로부터 컷오프값을 미리 결정한 후, 진단하고자 하는 대상의 콧물액 내의 유전자 발현 수준의 정규화 값과 상기 미리 결정된 컷오프 값을 비교하여 파킨슨 질환의 진단을 위한 정보를 제공할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.According to one embodiment of the present disclosure, the comparison of normalized expression levels may be compared with a predetermined cutoff value, but may not be limited thereto. In this case, the cutoff value may be determined according to a receiver operation characteristic curve (ROC curve), which is a curve drawn with sensitivity and 1-specificity of the inspected value. That is, after normalizing the gene expression level in the runny nose solution of Parkinson's patient and the normal expression level in the runny nose solution of the Parkinson's patient, the cutoff value is determined in advance from the ROC curve results using the same, and the gene expression level in the runny nose of the subject to be diagnosed. By comparing the normalized value of and the predetermined cutoff value may provide information for the diagnosis of Parkinson's disease, but may not be limited thereto.

본원에 따른 파킨슨 질환 진단을 위한 정보제공방법에서, 상기 파킨슨 질환 관련 유전자 발현 수준 (정규화된 발현 수준) 측정 결과를 정상군에 대한 측정 결과와 대비하여 파킨슨 질환을 진단할 수도 있고, 또는 미리 결정된 컷오프값과 대비하여 진단할 수도 있다. In the information providing method for diagnosing Parkinson's disease according to the present invention, Parkinson's disease-related gene expression level (normalized expression level) measurement may be compared to the result of the measurement for the normal group Parkinson's disease, or predetermined cut-off You can also diagnose against the value.

본원의 일 구현예에 따르면, 파킨의 정규화된 발현 수준이 컷오프값에 비해 낮은 경우 파킨슨 질환이 있는 것으로 판단할 수 있다.According to one embodiment of the present application, it may be determined that there is Parkinson's disease when the normalized expression level of Parkin is lower than the cutoff value.

본원의 일 구현예에 따르면, 파킨의 정규화된 발현에 있어서 컷오프값이 0.65일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.According to an embodiment of the present disclosure, the cutoff value may be 0.65 in normalized expression of Parkin, but may not be limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, AIMP2의 정규화된 발현 수준이 컷오프값에 비해 높은 경우 파킨슨 질환이 있는 것으로 판단할 수 있다.According to one embodiment of the present application, it may be determined that there is Parkinson's disease when the normalized expression level of AIMP2 is higher than the cutoff value.

본원의 일 구현예에 따르면, 파킨의 AIMP2의 정규화된 발현에 있어서 컷오프값이 1.9일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.According to an embodiment of the present disclosure, the cutoff value may be 1.9 in normalized expression of AIMP2 of Parkin, but may not be limited thereto.

본원은 파킨슨 질환의 신규 조기진단법에 관한 것으로서 콧물액으로부터 전사체를 분석함으로써 파킨슨 질환의 진단이 가능함을 최초로 제시하였다. 또한 여러 파킨슨 질환 관련 유전자 중 파킨 및 AIMP2가 파킨슨 질환 특이적인 바이오 마커로 유용하게 활용될 수 있음을 제시한 것이다.The present application relates to a novel early diagnosis method of Parkinson's disease, and for the first time, it is possible to diagnose Parkinson's disease by analyzing a transcript from a runny nose. In addition, Parkin and AIMP2 among Parkinson's disease-related genes suggest that Parkinson's disease-specific biomarkers can be usefully used.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본원의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the following examples are for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the present application.

[[ 실시예Example ]]

1. One. 콧물액Runny nose 세포에서의 전체  Whole in cells 전사체Transcript 정제 및 cDNA 합성 Purification and cDNA Synthesis

콧물액 세포로부터 검출가능한 수준의 전사체를 정제할 수 있는지에 대한 확인 실험이 먼저 수행되었다 (도 1a). 사람의 비강 세척액의 세포 펠렛에 대해서 QIAzol을 이용하여 총 RNA를 정제하였다. 미량의 콧물 RNA를 온전히 분리하기 위해서 이스트 tRNA를 캐리어로 첨가하여 정제를 진행하였다. 분리된 RNA로부터 cDNA 라이브러리를 합성 후, GAPDH에 대한 프라이머쌍을 이용해 PCR을 수행한 결과, cDNA 라이브러리 특이적인 PCR 산물이 합성되는 것을 아가로즈 젤에서 확인할 수 있었다 (도 1b). 신경아세포종(neuroblastoma) 세포주인 SH-SY5Y에서의 정제 RNA에서 합성한 cDNA 라이브러리와 비교 결과, 소량이지만 PCR에서 검출 가능한 GAPDH 전사체가 존재함을 증명할 수 있었다. Confirmation experiments were first conducted to see if detectable levels of transcripts could be purified from runny nose cells (FIG. 1A). Total RNA was purified using QIAzol on cell pellets of human nasal washes. In order to completely separate trace runny RNA, yeast tRNA was added as a carrier for purification. After synthesizing the cDNA library from the isolated RNA, PCR was performed using primer pairs for GAPDH, and it was confirmed that the cDNA library-specific PCR product was synthesized on an agarose gel (FIG. 1B). Comparison with the cDNA library synthesized from the purified RNA in the neuroblastoma cell line SH-SY5Y showed that there was a small amount of GAPDH transcript that was detectable by PCR.

2. 2. RTQRTQ PCR을PCR 통한  through 타겟target 유전자의 정량 Quantification of genes

정상군과 파킨슨 환자의 콧물액에 대해서 cDNA 라이브러리를 합성한 후, 파킨슨 질환 연계 유전자들 (α-시뉴클레인, c-Abl, RNF146, OMP, AIMP2, 파킨(Parkin) 및 ZNF746 (PARIS))에 대해서 특이적인 프라이머쌍을 디자인하여 RTQ PCR을 수행하였다. 사용된 프라이머의 정보는 표 1 및 서열목록에 나타나 있으며, RTQ PCR 수행 조건이 도 2에 나타나 있다. 구체적으로, 도 2 하단의 표와 같은 조성을 가지는 샘플에 대해서, 도 2 상단에 나타난 프로토콜로 RTQ PCR을 42 사이클 수행하였다. SYBR 그린의 형광은 매 증폭 단계에서 측정하였으며, PCR 산물의 선택성을 확인하기 위해 용융 곡선 단계 (melt curve stage)에서 목적 유전자의 앰플리콘에 대해 피크를 확인하였다. After synthesizing the cDNA library for the runny nose of normal and Parkinson's patients, Parkinson's disease linkage genes (α-synuclein, c-Abl, RNF146, OMP, AIMP2, Parkin and ZNF746 (PARIS)) Specific primer pairs were designed to perform RTQ PCR. The primers used are shown in Table 1 and Sequence Listing, and RTQ PCR performance conditions are shown in FIG. 2. Specifically, for the sample having the composition as shown in the table at the bottom of FIG. Fluorescence of SYBR green was measured at each amplification step, and peaks were identified for amplicons of the target gene at the melt curve stage to confirm the selectivity of the PCR products.

유전자gene 프라이머 방향Primer direction 서열order 1One c-Ablc-Abl ForwardForward CATCACGCCAGTCAACAGTCT (서열번호 1)CATCACGCCAGTCAACAGTCT (SEQ ID NO: 1) ReverseReverse GTACACCCTCCCTTCGTATCT (서열번호 2)GTACACCCTCCCTTCGTATCT (SEQ ID NO: 2) 22 α-시뉴클레인α-synuclein ForwardForward AAGAGGGTGTTCTCTATGTAGGC (서열번호 3)AAGAGGGTGTTCTCTATGTAGGC (SEQ ID NO: 3) ReverseReverse GCTCCTCCAACATTTGTCACTT (서열번호 4)GCTCCTCCAACATTTGTCACTT (SEQ ID NO: 4) 33 AIMP2AIMP2 ForwardForward AGGTAAAGCCCTATCACGGG (서열번호 5)AGGTAAAGCCCTATCACGGG (SEQ ID NO: 5) ReverseReverse ACAGGTTAGACTCTTCCTGCA (서열번호 6)ACAGGTTAGACTCTTCCTGCA (SEQ ID NO: 6) 44 파킨Parkin ForwardForward CAGCAGTATGGTGCAGCGGA (서열번호 7)CAGCAGTATGGTGCAGCGGA (SEQ ID NO: 7) ReverseReverse TCAAATACGGCACTGCACTC (서열번호 8)TCAAATACGGCACTGCACTC (SEQ ID NO: 8) 55 PARISPARIS ForwardForward GCTGGAATTTCCGGTGTAAACC (서열번호 9)GCTGGAATTTCCGGTGTAAACC (SEQ ID NO: 9) ReverseReverse GGGGTCCAAGATGGCCTCT (서열번호 10)GGGGTCCAAGATGGCCTCT (SEQ ID NO: 10) 66 RNF146RNF146 ForwardForward ATTCCCGAGGATTTCCTTGACA (서열번호 11)ATTCCCGAGGATTTCCTTGACA (SEQ ID NO: 11) ReverseReverse GCTCATCGTACTGCCACCA (서열번호 12)GCTCATCGTACTGCCACCA (SEQ ID NO: 12) 77 OMPOMP ForwardForward TACCGCCTCAACTTCACCCA (서열번호 13)TACCGCCTCAACTTCACCCA (SEQ ID NO: 13) ReverseReverse CCTCCTTGCGCCAGAAGATG (서열번호 14)CCTCCTTGCGCCAGAAGATG (SEQ ID NO: 14) 88 GAPDHGAPDH ForwardForward AAACCCATCACCATCTTCCAG (서열번호 15)AAACCCATCACCATCTTCCAG (SEQ ID NO: 15) ReverseReverse AGGGGCCATCCACAGTCTTCT (서열번호 16)AGGGGCCATCCACAGTCTTCT (SEQ ID NO: 16)

정상군 및 파킨슨 환자 콧물액 cDNA 라이브러리에 대한 PCR 산물의 앰플리콘이 타겟 유전자들에 대해서 메인 피크가 하나로 잡혔으므로, 콧물액 라이브러리에 대한 PCR이 성공적으로 수행되었음을 확인할 수 있었다. Since the amplicon of the PCR product for the normal group and the Parkinson's patient's runny nose cDNA library had a single main peak for the target genes, the PCR for the nasal fluid library was successfully performed.

정상군 (CTRL)과 파킨슨 환자 (IPD)의 콧물에서의 각 유전체의 정량값을 내부 로딩 대조군(internal loading control)으로 사용된 GAPDH의 정량값으로 정규화하여 각 군에서의 타겟 유전자들의 상대적인 양을 확인하였다. 도 4a는 α-시뉴클레인 (SNCA), c-Abl (cAbl) 및 RNF146, 도 4b는 OMP와 AIMP2, 그리고 도 4c는 파킨 (PK)와 PARIS의 상대적인 전사체 양을 보여준다. 유의성 검사를 위해 독립표본 양측 스튜던트 t 검정 (unpaired two-tailed student t test)을 수행하였다 (*P < 0.05, **P < 0.01, *** P < 0.001, n.s = 유의성 없음). 각 유전자에 대한 정량값은 GAPDH의 발현량으로 정규화한 후 각 군에서의 상대적인 값으로 계산하였다. 각각의 실험에 대해서 실험에 사용된 샘플수는 도 4d에 나타나 있다. α-시뉴클레인, c-Abl, RNF146 및 파킨의 경우 파킨슨 환자의 콧물에서 유의적인 양적 감소를 보였으며, OMP와 AIMP2는 증가하는 양상을 보였다 (도 4a 내지 4c). 신기하게도, RNF146, AIMP2 및 파킨의 경우 정상군에서 샘플간의 변동이 적었으며 (도 4b 및 4c), 특히 AIMP2와 파킨은 높은 신뢰 수준에서 유의성을 가지고 파킨슨 질환 환자의 콧물액에서 양이 변화하는 것으로 나타났다. Quantification of each genome in the runny nose of the normal group (CTRL) and Parkinson's patient (IPD) was normalized to the quantitative value of GAPDH used as internal loading control to identify the relative amounts of target genes in each group. It was. 4A shows the relative transcript amounts of α-synuclein (SNCA), c-Abl (cAbl) and RNF146, FIG. 4B shows OMP and AIMP2, and FIG. 4C shows Parkin (PK) and PARIS. An unpaired two-tailed student t test was performed for significance (* P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001, ns = no significance). Quantitative values for each gene were normalized to the expression level of GAPDH and calculated as relative values in each group. For each experiment, the number of samples used in the experiment is shown in FIG. 4D. α-synuclein, c-Abl, RNF146, and Parkin showed a significant quantitative decrease in the runny nose of Parkinson's patients, with an increase in OMP and AIMP2 (FIGS. 4A-4C). Surprisingly, RNF146, AIMP2 and Parkin had little variation between samples in the normal group (FIGS. 4B and 4C), especially AIMP2 and Parkin showed significant changes in the runny nose of Parkinson's disease patients with significance at high confidence levels. appear.

파킨과 AIMP2는 파킨슨 질환 병리와 연계성을 가진 유전자로 알려져 있다. 파킨은 기질 단백질의 유비퀴틴화 표지 및 프로테아좀을 통한 분해를 매개하는 E3 리가아제 효소로서 이 유전자의 돌연변이는 파킨의 효소 활성을 저해함으로써 파킨슨 질환의 열성 유전을 유발한다고 알려져 있다. 파킨의 돌연변이뿐만 아니라 니트로실화(nitrosylation), 인산화, 및 용해성의 감소 또한 산발성 파킨슨 질환 병리에 관여되는 것으로 보고되었다. 파킨슨 질환과 비강 세척액에서의 파킨 전사체의 감소 연계성에 대해서는 이전에 보고된 바 없다. AIMP2은 파킨에 의해서 조절되는 독성 단백질로서, 정상 상태에서는 낮은 수준으로 존재하지만 파킨의 돌연변이나 효소 활성 저하 상황에서 양적인 축적이 나타나는 것으로 파킨슨 환자의 중뇌 조직 부검을 통해 보고된 바 있다. 특히 동물실험을 통해서 밝혀진 바에 따르면, AIMP2의 축적이 도파민 신경세포의 사멸을 포함한 파킨슨 질환의 주요 병변을 유발하는데 중요한 병리적 역할을 한다. 그러나 마찬가지로 파킨슨 질환 환자의 비강 세척액에서의 AIMP2 전사체의 변화 및 질병 연계성 역시 이전에 보고된 바 없다. 따라서, 본원은 콧물액 내의 파킨 전사체의 감소 및 AIMP2 전사체의 증가는 파킨슨 질환으로의 발전에 대한 위험인자로서 조기 진단 마커로서 활용될 수 있음을 최초로 확인하였다.Parkin and AIMP2 are known genes that are linked to Parkinson's disease pathology. Parkin is an E3 ligase enzyme that mediates ubiquitination labeling of substrate proteins and degradation via proteasomes. Mutations in this gene are known to cause recessive inheritance of Parkinson's disease by inhibiting Parkin's enzymatic activity. Parkin's mutations as well as reduction of nitrosylation, phosphorylation, and solubility have also been reported to be involved in sporadic Parkinson's disease pathology. There has been no previously reported linkage of Parkin transcripts with Parkinson's disease in nasal lavage. AIMP2 is a toxic protein regulated by Parkin, which is present at low levels in normal conditions but quantitative accumulation occurs in Parkinson's patients with Parkinson's midbrain tissue autopsy. In particular, animal studies have shown that AIMP2 accumulation plays an important pathological role in inducing major lesions in Parkinson's disease, including the death of dopamine neurons. Similarly, changes in AIMP2 transcripts and disease linkages in nasal lavage in Parkinson's disease patients have not been previously reported. Therefore, the present application first confirmed that the reduction of Parkin transcripts and the increase of AIMP2 transcripts in the runny nose can be utilized as an early diagnostic marker as a risk factor for the development of Parkinson's disease.

특히, ROC 곡선으로부터 계산된 정규화된 유전자 발현 수준의 컷오프값은 파킨 (역수화 수치)의 경우 약 0.654918이었고, 이 경우 민감도가 약 91%, 특이도가 약 87%로 계산되었다. AIMP2의 경우 컷오프값이 약 1.9472, 민감도가 약 82%, 특이도가 약 71%로 계산되었다. 따라서, 상기 컷오프값들을 이용한 콧물액 내의 파킨 및 AIMP2 전사체의 정량이 파킨슨 질환의 조기 진단을 위한 정확하고 유용한 수단이 될 것으로 기대된다.In particular, the cutoff value of the normalized gene expression level calculated from the ROC curve was about 0.654918 for Parkin (reversal value), with a sensitivity of about 91% and a specificity of about 87%. For AIMP2, the cutoff value was about 1.9472, sensitivity about 82%, and specificity about 71%. Therefore, quantification of Parkin and AIMP2 transcripts in runny nose using these cutoff values is expected to be an accurate and useful means for early diagnosis of Parkinson's disease.

전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다. The above description of the present application is intended for illustration, and it will be understood by those skilled in the art that the present invention may be easily modified in other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present application. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are exemplary in all respects and not limiting. For example, each component described as a single type may be implemented in a distributed manner, and similarly, components described as distributed may be implemented in a combined form.

본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다. The scope of the present application is indicated by the following claims rather than the above description, and it should be construed that all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims and their equivalents are included in the scope of the present application.

<110> Research and Business Foundation SUNGKYUNKWAN UNIVERSITY <120> METHOD FOR DIAGNOSING PARKINSONS DISEASE USING NASAL MUCUS, COMPOSITION THEREFORE AND KIT COMPRISING THE SAME <130> R-2017-0855-KR-1 <160> 16 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> c-Abl F <400> 1 catcacgcca gtcaacagtc t 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> c-Abl R <400> 2 gtacaccctc ccttcgtatc t 21 <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> a-synuclein F <400> 3 aagagggtgt tctctatgta ggc 23 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> a-synuclein R <400> 4 gctcctccaa catttgtcac tt 22 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> AIMP2 F <400> 5 aggtaaagcc ctatcacggg 20 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> AIMP2 R <400> 6 acaggttaga ctcttcctgc a 21 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Parkin F <400> 7 cagcagtatg gtgcagcgga 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Parkin R <400> 8 tcaaatacgg cactgcactc 20 <210> 9 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PARIS F <400> 9 gctggaattt ccggtgtaaa cc 22 <210> 10 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PARIS R <400> 10 ggggtccaag atggcctct 19 <210> 11 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RNF146 F <400> 11 attcccgagg atttccttga ca 22 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RNF146 R <400> 12 gctcatcgta ctgccacca 19 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OMP F <400> 13 taccgcctca acttcaccca 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OMP R <400> 14 cctccttgcg ccagaagatg 20 <210> 15 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH F <400> 15 aaacccatca ccatcttcca g 21 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH R <400> 16 aggggccatc cacagtcttc t 21 <110> Research and Business Foundation SUNGKYUNKWAN UNIVERSITY <120> METHOD FOR DIAGNOSING PARKINSONS DISEASE USING NASAL MUCUS,          COMPOSITION THEREFORE AND KIT COMPRISING THE SAME <130> R-2017-0855-KR-1 <160> 16 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> c-Abl F <400> 1 catcacgcca gtcaacagtc t 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> c-Abl R <400> 2 gtacaccctc ccttcgtatc t 21 <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> a-synuclein F <400> 3 aagagggtgt tctctatgta ggc 23 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> a-synuclein R <400> 4 gctcctccaa catttgtcac tt 22 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> AIMP2 F <400> 5 aggtaaagcc ctatcacggg 20 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> AIMP2 R <400> 6 acaggttaga ctcttcctgc a 21 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Parkin F <400> 7 cagcagtatg gtgcagcgga 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Parkin R <400> 8 tcaaatacgg cactgcactc 20 <210> 9 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PARIS F <400> 9 gctggaattt ccggtgtaaa cc 22 <210> 10 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PARIS R <400> 10 ggggtccaag atggcctct 19 <210> 11 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RNF146 F <400> 11 attcccgagg atttccttga ca 22 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RNF146 R <400> 12 gctcatcgta ctgccacca 19 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OMP F <400> 13 taccgcctca acttcaccca 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> OMP R <400> 14 cctccttgcg ccagaagatg 20 <210> 15 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH F <400> 15 aaacccatca ccatcttcca g 21 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH R <400> 16 aggggccatc cacagtcttc t 21

Claims (14)

분리된 콧물액에서 파킨슨 질환 관련 유전자의 발현 수준을 측정하기 위한 제제를 포함하는, 파킨슨 질환 진단용 조성물.
Parkinson's disease diagnostic composition comprising an agent for measuring the level of expression of Parkinson's disease-related genes in isolated runny nose.
제 1 항에 있어서,
상기 파킨슨 질환 관련 유전자는 α-시뉴클레인 (SNCA), 파킨 (parkin), ZNF746 (PARIS), RNF146, OMP, c-Abl 및 AIMP2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 조성물.
The method of claim 1,
The Parkinson's disease related gene is selected from the group consisting of α-synuclein (SNCA), parkin (parkin), ZNF746 (PARIS), RNF146, OMP, c-Abl and AIMP2.
제 1 항에 있어서,
상기 발현 수준을 측정하기 위한 제제는 파킨슨 질환 관련 유전자의 핵산 서열 또는 이에 대응하는 서열에 결합하는 핵산 프라이머, 또는 파킨슨 질환 관련 유전자에 의해 발현되는 펩타이드 또는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 앱타머를 포함하는 것인, 조성물.
The method of claim 1,
The agent for measuring the expression level may be a nucleic acid primer that binds to a nucleic acid sequence or a corresponding sequence of a Parkinson's disease related gene, or an antibody or aptamer that specifically binds to a peptide or protein expressed by a Parkinson's disease related gene. It comprises, composition.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 파킨슨 질환 진단용 키트.
A kit for diagnosing Parkinson's disease, comprising the composition of any one of claims 1 to 3.
파킨슨 질환 의심 환자로부터 콧물액을 분리하고;
상기 콧물액 내의 세포로부터 파킨슨 질환 관련 유전자 전사체, 또는 이로부터 발현되는 펩타이드 또는 단백질의 발현 수준을 측정하고, 이를 표준 유전자의 발현에 대해 정규화시키고;
정규화된 발현 수준을, 정상인에 대해 측정되고 정규화된 발현 수준과 비교하는 것을 포함하는, 파킨슨 질환 진단을 위한 정보제공방법.
Separating a runny nose from a patient suspected of Parkinson's disease;
Measuring expression levels of Parkinson's disease related gene transcripts, or peptides or proteins expressed therefrom, from cells in the runny nose and normalizing them for expression of standard genes;
A method of providing information for diagnosing Parkinson's disease, comprising comparing normalized expression levels with those measured and normalized for normal individuals.
제 5 항에 있어서,
상기 파킨슨 질환 관련 유전자는 α-시뉴클레인 (SNCA), 파킨 (parkin), ZNF746 (PARIS), RNF146, OMP, c-Abl 및 AIMP2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인, 정보제공방법.
The method of claim 5,
The Parkinson's disease-related gene is selected from the group consisting of α-synuclein (SNCA), parkin (parkin), ZNF746 (PARIS), RNF146, OMP, c-Abl and AIMP2.
제 5 항에 있어서,
상기 표준 유전자는 GAPDH인, 정보제공방법.
The method of claim 5,
The standard gene is GAPDH.
제 5 항에 있어서,
상기 유전자의 발현 수준은 역전사효소 중합반응 (RT-PCR), 경쟁적 역전사효소 중합효소반응 (competitive RT-PCR), 실시간 역전사 효소 중합효소반응 (real time quantitative RT-PCR), 정량적 중합효소반응 (quantitative RT-PCR), RNase 보호 분석법 (RNase protection method), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩 방법(DNA chip technology)을 이용하여 측정되는 것인, 정보제공방법.
The method of claim 5,
The expression level of the gene is reverse transcriptase polymerase (RT-PCR), competitive reverse transcriptase polymerase (competitive RT-PCR), real time transcriptase polymerase (real time quantitative RT-PCR), quantitative polymerase reaction (quantitative) RT-PCR), RNase protection method (RNase protection method), Northern blotting (Northern blotting) or DNA chip technology (DNA chip technology) information measuring method.
제 5 항에 있어서,
상기 단백질 또는 펩타이드의 발현 수준은 웨스턴블롯 (Western blot), ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법 (Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법 (Complement Fixation Assay), 유세포분석 (Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩 (protein chip)을 이용하여 측정되는 것인, 정보제공방법.
The method of claim 5,
The expression level of the protein or peptide is Western blot, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), immunoprecipitation assay, complement fixation assay, Fluorecence Activated Cell Sorter (FACS) Or measuring information using a protein chip.
제 6 항에 있어서,
정규화된 발현 수준의 비교는, 미리 결정된 컷오프 값과 비교하는 것인, 정보제공방법.
The method of claim 6,
The comparison of normalized expression levels is to compare with a predetermined cutoff value.
제 10 항에 있어서,
파킨의 정규화된 발현 수준이 컷오프값에 비해 낮은 경우 파킨슨 질환이 있는 것으로 판단하는 것인, 정보제공방법.
The method of claim 10,
If the normalized expression level of Parkin is low compared to the cutoff value is to determine that there is Parkinson's disease, information providing method.
제 11 항에 있어서,
파킨의 정규화된 발현에 있어서 컷오프값이 0.65인, 정보제공방법.
The method of claim 11,
And wherein the cutoff value is 0.65 for normalized expression of Parkin.
제 10 항에 있어서,
AIMP2의 정규화된 발현 수준이 컷오프값에 비해 높은 경우 파킨슨 질환이 있는 것으로 판단하는 것인, 정보제공방법.
The method of claim 10,
If the normalized expression level of AIMP2 compared to the cutoff value is determined to have Parkinson's disease, information providing method.
제 13 항에 있어서,
파킨의 AIMP2의 정규화된 발현에 있어서 컷오프값이 1.9인, 정보제공방법.
The method of claim 13,
An information providing method, wherein the cutoff value is 1.9 in normalized expression of Parkin's AIMP2.
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