KR102549357B1 - 밀싹 추출물을 포함하는 항염 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학 조성물, 식품학 조성물을 제공하여 항염증제 개발에 이용될 수 있는 것에 관한 것이다.
Description
본 발명은 밀싹 추출물을 포함하는 항염 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 새금강 품종으로 밀싹을 재배하고 밀싹을 추출하여 제조한 밀싹 추출물의 항염 및 면역력 증강 효과를 확인한 것이다.
최근 건강한 피부에 대한 관심이 높아지면서 천연물소재를 이용한 화장품에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 천연물 소재가 가지고 있는 다양한 생리활성 기능에 많은 관심을 가지면서 최근 의약품 및 기능성 제품의 원료로 많이 사용되고 있으며 합성물질의 안정성의 문제로 인하여 천연물 소재에 대한 연구가 더욱 활발해지고 있다.
인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하게 되고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가되고, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙하게 안 좋아지게 되고, 피부트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.
노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산, 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게된다. 또한 피부 노화가 진행되거나 피부가 자외선에 노출되면, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxidesynthase)에 의한 NO(nitric oxide) 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질 물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 기질물질의 분해 및 변성이 가속화되어 피부 기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행해지고 있는 것이 현실이다.
이러한 배경하에, 본 발명자들은 천연물 소재로 밀싹을 사용하여 항염작용에 사용될 것으로 판단하고 종래의 문제를 해결하기 위하여 예의 노력한 결과, 세포독성 및 NO생성량 억제 효과를 확인하여 항염 및 면역력 증강을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
전술한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 제1양태는,
또한, 본 발명의 제2양태는 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 제3양태는 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 제4양태는 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 사료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 제5양태는 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 보다 자세히 설명한다.
본 발명의 용어, "밀싹"은 밀의 녹색 어린 싹을 의미한다. 구체적으로, 밀종자는 새금강 품종일 수 있고, 발아 후 일주일정도 지나 15cm 내지 20cm 정도인 것일 수 있다.
본 발명의 용어, "추출물"은 액체 또는 고체 혼합물로부터 용매에 의해 분리된 물질을 의미한다.
본 발명의 용어, "항염증"은 염증 발생을 억제 또는 방지하는 것을 의미하는 것으로서, 특별히 제한되지는 않으나, 세포의 손상이나 외부 감염원에 의해 발생하는 것일 수 있다.
상기 "염증"은 조직(세포)의 손상이나 외부 감염원(박테리아, 바이러스, 곰팡이, 다양한 종류의 알레르기 유발물질)에 감염되었을 때 국소 혈관과 체액중 각종 염증 매개인자 및 면역세포가 관련되어 효소 활성화 염증 매개물질 분비, 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등 일련의 복합적인 생리적 반응과 홍반, 부종, 발열, 통증 등 외적 증상을 나타낸다. 정상인 경우 염증 반응은 외부감염원을 제거하고 손상된 조직을 재생하여 생명체 기능 회복을 하지만 항원이 제거되지 않거나 내부 물질이 원인이 되어 염증 반응이 과도하거나 지속적으로 일어나면 오히려 점막손상을 촉진하고, 그 결과 일부에서는 암 발생 등의 질환에 이른다.
본 발명의 밀싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물은 항염증용인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 약학 조성물은 염증 관련 질환의 예방 또는 치료 용도를 가지는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 용어, "염증 관련 질환"은 염증을 주병변으로 하는 질병을 의미한다. 염증은 선천 면역에 의해 매개되는 비특이적 반응으로, 병원체에 의해 일어나는 경우 병원체의 종류나 이전 감염 여부에 관계없이 일어난다. 선천 면역뿐만 아니라 일부 국소적 적응면역 역시 염증에 관여한다. 염증은 감염을 치유하거나 조직의 재생을 증진시키는 보호 기능을 가지지만, 동시에 염증의 결과로 조직의 손상이나 질병이 일어날 수 있다. 프롤로테라피 등과 같이 의도적으로 염증 반응을 유도하여 조직의 재생을 꾀하는 방법도 있다. 구체적으로, 아토피, 베체트병, 크론병, 류마티스관절염, 모소낭, 지루성 피부염, 건선, 루퍼스, 만성폐색성폐질환, 과민성장질환, 소화지방변증, 혈관염 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는 상기 밀싹 추출물이 NO생성 억제활성, 및 염증관련 사이토카인 억제활성 효능 및 아토피 피부염 억제 효능을 가지는 것을 확인하였다.
본 발명의 용어 "NO생성 억제"는 염증상태에서 나타나는 NO가 생성으로 혈관 투과성, 부종 등 염증 반응을 촉진시키는 것을 억제하는 것을 의미한다. 구체적으로, NO는 혈관 투과성, 부종 등의 염증 반응을 촉진시킬 뿐만 아니라 염증 매개체의 생합성을 촉진하고 혈관을 확장시키거나 암 조직의 성장을 억제하고, 바이러스나 세균들의 증식을 저해하거나 직접 사멸시키는 등 인체 면역 염증 반응에 있어서 중요한 역할을 한다. 따라서, 항염증 활성을 가지는 물질에 대해서 NO생성 억제에 대한 검토는 필수적으로 수행되고, NO생성 억제율로 항염효과를 확인할 수 있다.
본 발명의 용어 "사이토카인(cytokine)"은 면역 세포가 분비하는 단백질을 통틀어 일컫는 말이다. 사이토카인은 세포로부터 분비된 후 다른 세포나 분비한 세포 자신에게 영향을 줄 수 있다. 즉, 대식세포의 증식을 유도하거나 분비 세포 자신의 분화를 촉진하기도 한다. 사이토카인은 수용체를 통해서 작용하며, 면역계에서 특히 중요하다. 사이토카인은 건강 유지와 질병에도 중요한데, 특히 감염, 면역반응, 염증, 외상, 폐혈증, 암 및 생식 등에 대한 신체의 반응에 중요하다.
병원균, 바이러스들이 숙주 안에 들어오면, 병원균을 인식하고 신호를 보내 전사인자인 NF-kB을 활성시키고 이는 염증 유전자 물질(사이토카인)을 유도하여 여러 질병을 유발한다. 본 발명의 밀싹 추출물은 NO생성 억제, 사이토카인 활성을 억제하여 항염효과를 나타내는 것을 확인하였다.
따라서, 상기 구체적인 일 실시예를 통하여 밀싹 추출물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 항염증 용도를 가지는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 나아가 염증 관련 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 용도로 사용될 수 있음을 시사한다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 용어, "약학적으로 허용 가능한 염"은 양이온과 음이온이 정전기적 인력에 의해 결합하고 있는 물질인 염 중에서도 약학적으로 사용될 수 있는 형태의 염을 의미하며, 통상적으로 금속염, 유기염기와의 염, 무기산과의 염, 유기산과의 염, 염기성 또는 산성 아미노산과의 염 등이 될 수 있다. 예를 들어, 금속염으로는 알칼리 금속염(나트륨염, 칼륨염 등), 알칼리 토금속염(칼슘염, 마그네슘염, 바륨염 등), 알루미늄염 등이 될 수 있고; 유기염기와의 염으로는 트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 2,6-루티딘, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민, N,N-디벤질에틸렌디아민 등과의 염이 될 수 있으며; 무기산과의 염으로는 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산 등과의 염이 될 수 있고; 유기산과의 염으로는 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프탈산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레인산, 시트르산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등과의 염이 될 수 있으며; 염기성 아미노산과의 염으로는 아르기닌, 라이신, 오르니틴 등과의 염이 될 수 있고; 산성 아미노산과의 염으로는 아스파르트산, 글루탐산 등과의 염이 될 수 있다.
본 발명의 용어, "예방"은 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 염증의 발병을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, "개선"은 본 발명에 따른 조성물을 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어, "치료"는 상기 약학 조성물의 투여에 의해 염증의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학 조성물은, 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있는데, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturallyoccuring carrier)를 포함할 수 있다.
구체적으로, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 폴리카프로락톤(polycaprolactone), 폴리락틱액시드(Poly Lactic Acid), 폴리-L-락틱액시드(poly-L-lactic acid), 광물유 등을 들 수 있다. 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 담체의 형태로는 각종 부정형의 담체, 마이크로 스피어, 나노파이버 등을 포함할 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 포함된 밀싹 추출물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 함량은 특별히 제한되지 않는다. 상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 실시 양태는 상기 밀싹 추출물을 포함하는 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 실시 양태는 본 발명에 따른 밀싹 추출물은 우수한 염증 억제 효과를 나타내므로, 염증 예방 또는 개선을 목적으로 식품 조성물에 포함될 수 있으며, 상기 식품 조성물은 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 염증의 예방 또는 개선에 대하여 높은 효과를 기대할 수 있다.
이때, 상기 "밀싹", "염증", "개선" "치료" 및 "예방"에 대한 설명은 상기 서술한 바와 같다.
본 발명의 용어, "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, '기능성'은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 한편, 건강식품은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품은 건강 보조 목적의 식품을 의미하는데, 경우에 따라, 건강기능식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 혼용될 수 있다.
본 발명의 밀싹 추출물은 그대로 첨가되거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
본 발명의 식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조 시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 구체적으로, 상기 식품 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 또한, 상기 식품 조성물은 방부제, 살균제, 산화방지제, 착색제, 발색제, 표백제, 조미료, 감미료, 향료, 팽창제, 강화제, 유화제, 증점제, 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 식품의 제형은 식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품용 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고 휴대성이 뛰어나므로, 본 발명의 식품은 염증의 예방 또는 개선의 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
본 발명의 밀싹 추출물은 염증의 예방 또는 개선 효과를 나타낼 수 있다면 식품 조성물에 다양한 중량%로 포함될 수 있다. 구체적으로 식품 조성물의 총 중량대비 0.00001 내지 100 중량% 또는 0.01 내지 80 중량%로 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 건강 및 위생을 목적으로 장기간 섭취할 경우에는 상기 범위 이하의 함량을 포함할 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 실시 양태는 상기 밀싹 추출물을 포함하는 항염증용 또는 염증 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.
이때, 상기 "밀싹", "항염증", "염증", "개선" "치료" 및 "예방"에 대한 설명은 상기에서 서술한 바와 같다.
본 발명에 따른 밀싹 추출물은 우수한 염증 억제 효과를 나타내므로, 염증의 예방 또는 개선을 목적으로 사료 조성물에 포함될 수 있으며, 상기 사료 조성물은 동물이 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 염증의 예방 또는 개선에 대하여 높은 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 용어, "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미한다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
구체적인 일 실시예에서는, 본 발명의 밀싹 추출물이 도 2 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 세포독성이 없으며, 도 3, 도 5, 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 밀싹 추출물의 NO생성 억제활성을 확인하였고, 도 6에 나타낸 바와 같이, 사이토카인(IL-6, IL-1, TNF-α)의 억제활성을 확인하였다.
따라서, 상기 구체적인 일 실시예를 통하여 밀싹 추출물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 항염증 용도를 가지는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 나아가 염증 관련 질환을 예방 또는 개선, 치료할 수 있는 용도로 사용될 수 있음을 시사한다.
본 발명의 밀싹 추출물을 포함하는 조성물은 세포독성 및 NO생성량 억제 효과를 확인하여 항염 및 면역력 증강 조성물로 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 밀싹 및 밀종자를 나타낸 사진이다.
도 2는 본 발명의 밀싹 추출물(WS), 새싹귀리 추출물(OS), 트리트케일싹 추출물(TS), 새싹보리 추출물(BS)에 대한 세포독성을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 밀싹 추출물(WS), 새싹귀리 추출물(OS), 트리트케일싹 추출물(TS), 새싹보리 추출물(BS)의 LPS에 의해 증가된 NO 억제 활성을 비교한 그래프이다.
도 4는 본 발명의 밀싹 추출물의 농도별 세포독성을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 밀싹 추출물의 농도별 NO 함량 억제를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 밀싹 추출물의 농도별 처리로 사이토카인 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 밀싹을 50% 주정 및 100%주정으로 추출한 추출물의 농도별 NO함량 억제를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 밀싹 추출물(WS), 새싹귀리 추출물(OS), 트리트케일싹 추출물(TS), 새싹보리 추출물(BS)에 대한 세포독성을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 밀싹 추출물(WS), 새싹귀리 추출물(OS), 트리트케일싹 추출물(TS), 새싹보리 추출물(BS)의 LPS에 의해 증가된 NO 억제 활성을 비교한 그래프이다.
도 4는 본 발명의 밀싹 추출물의 농도별 세포독성을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 밀싹 추출물의 농도별 NO 함량 억제를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 밀싹 추출물의 농도별 처리로 사이토카인 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 밀싹을 50% 주정 및 100%주정으로 추출한 추출물의 농도별 NO함량 억제를 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 밀싹 재배방법
도 1에 나타낸 밀싹의 종자는 우리밀 품종인 '새금강'으로 재배하였다. 종자를 24시간 동안 침지한 후, 18시간 이상 암조건에서 발아시켰다. 발아시킨 종자는 물빠짐이 좋은 메쉬망에 골고루 뿌려놓고 새싹을 재배하고, 발아 후 약 일주일정도 지나 어린입이 자라 15 내지 20cm 정도에 절삭기로 수확하여 밀싹을 얻었다.
실시예 2: 밀싹 추출물 제조방법
상기 실시예 1로 재배된 밀싹을 세척한 후 50℃에서 건조하여 100mesh 이상의 크기로 분쇄하고, 분쇄된 밀싹은 50% 및 100%프레탄올(주정)로 130rpm 에서 24시간 교반 추출하였고, 추출 후 7500rpm으로 10분간 원심분리하고, 상등액을 제조하였다. 상등액은 감압농축기로 추출용매를 완전하게 제거한 후, 남은 추출물은 100% 디메틸설폭시드(Dimethyl Sulfoxide, DMSO)를 2mL을 이용하여 최종농도 100mg/mL 농도로 추출물을 제조하였다.
실시예 3: 세포독성 시험
RAW 264.7 세포(cell) (mouse macrophage cell, ATCC)는 37℃, 5% CO2 조건에서 10% 소태아혈청(FBS, fetal bovine serum), 페니실린(penicillin) (100 U/mL), 스트렙토마이신(streptomycin) (100 μg/mL)이 첨가된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle medium)) 배지로 배양하였다. 배양 3일 간격으로 충분히 증식되면, 1 mL의 0.25% trypsin-EDTA 용액을 넣고 실온에서 1분간 처리한 다음 세포를 탈착하여 계대 배양하였다. 탈착된 세포는 10% FBS가 첨가된 DMEM 배양액 10 mL에 부유시킨 다음, 새로운 배양용기에 옮겨 1 : 2의 split ratio로 CO2 배양기(37℃, 5% CO2)에서 배양하였다. 밀싹 이 세포독성을 보이는지 확인하기 위해 세포 생존율을 측정하였다. 세포 생존율은 MTT assay 로 생존율을 측정하였다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 밀싹 추출물(WS)의 RAW 264.7 cell 에 대한 세포독성을 새싹귀리(OS), 트리트케일싹(TS), 새싹보리(BS) 추출물과 비교하였을 경우, 밀싹 추출물(WS)은 세포독성이 저농도(20 ug/mL) 및 고농도(50 ug/mL)에서 모두 없는 것으로 확인되었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, LPS 처리한 Raw 264.7 세포에 대한 세포독성을 살펴본 결과 밀싹 추출물은 전 농도에서 세포독성이 없는 것으로 확인되었다.
실시예 4: NO생성 억제 평가
96well plate에 well 당 5×104 cell/well의 Raw 264.7 세포(cell)을 분주한 후 18시간 동안 배양하였다. 배양 후 상기 실시예 2로 제조된 밀싹 추출물을 각 농도 별로 처리하고 30분 후 염증 반응 유도 인자인 지방질다당류(lipopolysaccharide (LPS))를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 생성된 NO의 양은 그리스 시약(griess reagent)을 이용하여 세포 배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 세포 배양 상등액 100 μL와 그리스시약 100 μL를 혼합하여 10분 동안 상온에서 반응 시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 배양액의 NO농도는 아질산소듐(sodium nitrite)의 표준물질(standard)로 비교하였다.
도 3에 나타난 바와 같이, 밀싹 추출물(WS)을 새싹귀리(OS), 트리트케일싹(TS), 새싹보리(BS) 추출물과 비교하였을 경우, LPS에 의해 증가된 NO를 억제능은 밀싹 추출물의 억제능이 가장 우수한 것을 확인하였다.
도 5에 나타난 바와 같이, LPS 처리에 의해 증가된 NO 생성량에 대한 밀싹 추출물의 억제 효능을 살펴본 결과 PC(positive control)로 사용한 퀘르세틴(Quercetin)보다 우수하며, 밀싹 추출물의 NO 억제 효능이 농도의존적인 것을 확인할 수 있다.
도 7에 나타난 바와 같이, 밀싹 추출물을 50% 주정으로 추출한 추출물 대비 100% 주정으로 추출한 추출물에서 NO 저해 활성이 더 높게나타나는 것을 확인하였다.
실시예 5: 사이토카인 생성량 평가
사이토카인(Cytokine)인 TNF-α와 IL-6, IL-1의 생성량 측정은 RAW 264.7 세포를 96 well plate에 2×105 cell/well의 농도로 분주한 24시간 후 종자 추출물을 10~100 μg/mL로 처리하고, 24시간 배양 후 세포의 상층액을 모아서 각각의 ELISA kit (Enzo Inc., Ann Arbor, MI, USA)를 이용하여 측정하였다. 측정방법은 단일클론항체가 코팅된 미량정량판(microtiter plate)에 시료를 넣은 다음 실온에서 반응시킨 후 제공된 washing buffer로 세척하였다. 이어 다중클론성 항체를 넣어 각각의 cytokine을 plate에 부착시킨 후 실온에서 반응시키고 세척 후 측정하고자 하는 cytokine의 conjugate 용액을 넣고 반응 시켰다. 반응시킨 plate를 washing buffer로 다시 세척하고 substrate solution으로 실온에서 발색시킨 다음 stop solution을 넣어 발색반응을 정지시키고 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 6에 나타난 바와 같이, 밀싹 추출물의 농도별로 처리 하였을 때 사이토카인 생성량을 측정하였고, LPS 처리에 의해 증가된 사이토카인(IL-6, IL-1, TNF-α)은 밀싹 추출물 농도별로 처리하였을 경우 감소하는 것으로 확인되었다. 밀싹 추출물은 PC(positive control)로 사용한 퀘르세틴(Quercetin)보다 사이토카인(IL-6, TNF-α)의 저해활성이 더욱 우수한 것을 확인하였다. 또한, LPS 처리에 의해 증가된 사이토카인은 밀싹 추출물 농도별로 처리하였을 경우 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였다.
본 발명의 실시예 1 내지 실시예 5를 종합하면, 본 발명의 밀싹 추출물은 100%주정으로 추출하여 NO 저해 활성 및 사이토카인 생성 억제를 확인하여 항염 효과를 제공하는 것을 확인할 수 있다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (8)
- 새금강 싹 주정 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 항염증은 IL-6, TNF-α의 발현억제 및 NO 저해 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 항염증용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 염증은 세포의 손상이나 외부 감염원에 의해 발생하는 것인, 항염증용 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 새금강 싹 주정 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 건강기능식품 조성물.
- 새금강 싹 주정 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 사료 조성물.
- 새금강 싹 주정 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 화장료 조성물.
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| KR1020200168678A KR102549357B1 (ko) | 2020-12-04 | 2020-12-04 | 밀싹 추출물을 포함하는 항염 조성물 |
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2020
- 2020-12-04 KR KR1020200168678A patent/KR102549357B1/ko active IP Right Grant
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
| GRNT | Written decision to grant |