KR102541800B1 - 신장 질환 진단 또는 치료용 조성물 - Google Patents

신장 질환 진단 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신장 질환 진단 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 진단용 조성물, VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 등을 제공한다.
신 손상, 신장 섬유화의 진행 등에 관여하는 것으로 확인된 VSIG4 유전자 또는 이의 단백질을 이용하여 신장 질환을 효과적으로 진단할 수 있고, 상기 VSIG4 유전자 또는 이의 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 이용하여 신장 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.

Description

신장 질환 진단 또는 치료용 조성물{COMPOSITION FOR DIAGNOSING OR TREATING KIDNEY DISEASES}
본 발명은 신장 질환 진단 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 진단용 조성물, 상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 예방 또는 치료용 조성물 등에 관한 것이다.
만성 콩팥병(chronic kidney disease)은 전 세계적으로 전체 인구의 약 7-10% 정도를 차지할 정도로 매우 흔하며, 우리나라 또한 비슷한 양상을 보인다. 특히 말기신부전증으로 인해 신 대체요법(혈액투석, 복막투석, 신장이식)을 받고 있는 환자 수는 인구 백만 명당 1,600여 명에 달한다. 최근 노령 인구의 증가로 인해 그 수는 점차 증가하고 있으며, 신 대체치료를 받는 환자 수 또한 계속 증가하고 있다. 이로 인해 투석에 들이는 의료비도 증가하고 있으며, 우리나라에서 전체 인구의 0.14%에 해당하는 신장투석 환자가 전체 의료비의 3%를 차지할 정도로 의료 재정에 미치는 영향이 크다.
말기신부전증의 최종 신장 내 소견은 신장 섬유화라고 할 수 있다. 신장 섬유화는 질환에 따라 사구체 또는 신세관 부위부터 시작되긴 하지만, 신세관 섬유화가 최종 소견이다. 신장 섬유화에는 다양한 인자가 관여한다고 알려져 있다.
신장 섬유화는 불가역적인 소견이라 받아들여졌으나, 제1형 당뇨병으로 인한 신장 손상 환자에게 췌장이식 시행 10년 후에 신장 섬유화의 주된 소견인 메산지움 증식과 신세관 섬유화증이 감소된다는 것이 밝혀졌다. 즉 당뇨병 신증의 주된 원인 인자인 고혈당을 해결하는 경우 신장 섬유화도 호전된다는 것이다. 따라서 신장의 섬유화 반응은 가역적이라는 것을 말해주는 것으로 적합한 치료법을 적용한다면 진행성 신장 질환 환자의 신기능도 회복시킬 가능성이 있다.
현재 만성 콩팥병 치료를 위해서는 금연과 저염식, 저단백식이, 혈압 관리, 고지혈증 관리, 레닌-앤지오텐신-알도스테론(renin-angiotensin-aldosteron) 차단제 등 보존적인 치료에 의존하고 있다. 이러한 노력에도 불구하고 신장 기능이 40% 이하로 감소된 경우 신장 기능의 추가적인 악화를 피할 수 없으며 결국 투석이나 이식을 받을 수밖에 없다. 즉 이 단계에서는 신장 섬유화를 근본적으로 치료하지 않고서는 다른 대안이 없다.
기존에 알려진 신장 섬유화의 각 단계를 차단하려는 다양한 시도에도 불구하고 아직 신장 섬유화를 명확히 차단하거나 줄일 수 있는 약제는 없다. 따라서 신장 섬유화를 억제할 수 있는 새로운 타겟을 발굴해야하는 실정이다.
대한민국 공개특허 제10-2013-0107203호 (2013.10.01. 공개)
본 발명의 목적은 신장 질환 진단에 효과적인 새로운 타겟을 포함하는 바이오마커 조성물, 신장 질환 진단용 조성물 및 키트를 제공하는 데에 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 타겟을 이용한 신장 질환 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법 및 신장 질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 신장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물, 건강기능식품 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명은 VSIG4의 발현수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 진단용 조성물을 포함하는 신장 질환 진단용 키트를 제공한다.
본 발명은 신장 질환이 의심되는 개체로부터 분리된 시료에서 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는 신장 질환 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명은 개체에서 분리된 생물학적 시료에 시험물질을 처리하는 단계; 상기 시험물질을 처리한 시료에서 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 감소된 시험물질을 선별하는 단계;를 포함하는 신장 질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명은 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 바이오마커 조성물 등은 신 손상 또는 신장 섬유화 진행에 관여하는 것으로 확인된 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자를 이용하여 신장 섬유화증을 비롯한 다양한 신장 질환을 효과적으로 진단할 수 있고, 상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 억제제를 이용하여 신장 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.
더불어, 신장 섬유화증에 대한 빠른 진단과 치료를 통해, 신장 섬유화증을 일으키는 다양한 질환의 예방 또는 치료에도 도움을 줄 수 있다.
도 1은 포도당 처리에 따른 신세관 세포의 VSIG4 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 2는 포도당 및 siVSIG4 처리에 따른 VSIG4 및 비멘틴(vimentin)의 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 3은 siTGF-β 또는 TGF-β 처리에 따른 VSIG4 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 4는 포도당 및 안지오텐신(angiotensin) Ⅱ 처리에 따른 족세포의 VSIG4 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 5는 db/db 제2형 당뇨 마우스 모델에서의 VSIG4 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 6은 db/db 제2형 당뇨 마우스 모델의 소변 내 단백뇨(albuminuria)와 VSIG4 발현과의 관계를 나타낸 것이다.
도 7은 일측성 요로 폐색(unilateral ureteral obstruction, UUO) 마우스 모델에서의 VSIG4 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 8 및 도 9는 아드리아마이신(Adriamycin) 신 손상 모델에서의 VSIG4 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 10은 노화 마우스 모델에서의 단백뇨 및 VSIG4 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 11은 제2형 당뇨병 신증 환자에게서 VSIG4 발현 양상 등을 확인한 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.
본 발명자는 만성 콩팥병의 병인에 다양한 기전이 관여하기 때문에 신장 손상의 중간 단계 중 한 가지 기전을 차단하는 것보다 신장 손상의 최종 단계인 신장 섬유화 반응 단계에서 차단하는 것이 효과적일 것이라 생각하고, VSIG4가 만성 콩팥병에서 신장 섬유화 반응에 관여함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 명세서에서, "VSIG4 (V-set and immunoglobulin domain containing 4; VSIG4 gene ID: 11326)"는 B7 패밀리 관련 단백질로서, 주로 대식세포에서 발현하여 T 세포의 CR1/CR3와 결합하여 T 세포를 억제한다. VSIG4는 대식세포 외에도 간이나 폐, 심장, 복강 내에서도 발현한다고 보고되었다. VSIG4는 다양한 염증 반응에 관여하는 것으로도 알려져 있으나, T 세포 기능을 억제하는 것 외에 다른 기능은 아직 명확하지 않다.
상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자는 다양한 신 손상 또는 신장 섬유화가 진행되면 상기 단백질 또는 이의 유전자의 발현 또는 활성이 증가할 수 있기에, 이를 이용하여 신장 질환을 진단할 수 있다.
상기 신장 질환은 당뇨병성 신증(diabetic nephropathy), 고혈압성 신증(hypertensive nephropathy), 사구체신염(glomerulitis), 다낭신(polycystic kidney disease), 요로 폐색증(urinary tract obstruction) 및 신장 섬유화증(kidney fibrosis)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 질환일 수 있으며, 바람직하게는 신장 섬유화증일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "신장 섬유화증(kidney fibrosis)"이란, 신장조직에서 발생되는 과다한 염증반응, 산화적 스트레스, 상피세포의 섬유 세포화와 같은 다양한 원인들의 결과로서 신장 조직이 섬유화되어 신장의 기능을 상실하게 되는 증상을 의미한다. 상기 신장 섬유화는 그 자체로서도 세뇨관 세포의 손상, 상피 중배엽 세포 전이, 염증 반응의 증가, 대식세포의 유입, 간질 섬유화세포의 증식, 신장 기능의 저하 등의 다양한 증상을 나타내는 병변일 뿐만 아니라, 신부전 등의 다양한 신장 질환의 중요한 표지자로서 알려져 있다.
본 명세서에서, "진단"이란, 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 신장 질환 발병 여부를 확인하는 것으로, 구체적으로 신장 질환이 의심되는 개체에서 분리된 시료에서 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자가 정상 대조군에 비해 이의 발현 또는 활성이 증가되는지 여부를 확인하여 신장 질환을 확인하는 것일 수 있다.
본 명세서에서, "바이오마커"란, 몸 안의 변화를 알아낼 수 있는 지표로서, 생명체의 정상 또는 병리적인 상태, 이의 변화 여부 등을 확인할 수 있는 물질로, 폴리펩타이드, 핵산, 지질, 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함할 수 있고, 이를 이용하여 본 발명과 같이 신장 질환에 대해 진단할 수 있다.
본 발명에 따른 바이오마커는 반복된 실험에도 동일한 결과를 나타내고, 이의 발현량의 변화가 유의성 있는 결과를 보이므로 신뢰도가 높은 마커로 볼 수 있으며, 이에 따라 예측된 결과는 타당하게 신뢰될 수 있다.
본 발명은 VSIG4의 발현수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 진단용 조성물을 제공한다.
상기 제제는 상기 VSIG4 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브, 상기 VSIG4 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 펩타이드 미메틱스, 앱타머 또는 화합물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "프라이머(primer)"는 짧은 자유 3말단 수산화기(free 3' hydroxl group)를 가지는 핵산 서열로, 상보적인 주형과 염기쌍을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 시점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA polymerase 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오타이드 트리포스페이트(nucleotide triphosphate)의 존재 하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다.
상기 프라이머는 상기 유전자에 특이적인 프라이머로 7개 내지 50개의 뉴클레오타이드 서열을 가진 센스 및 안티센스 핵산일 수 있고, DNA 합성의 개시점으로 작용하는 프라이머의 기본 성질을 변화시키지 않는 한, 추가의 특징을 혼입할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당해 기술 분야에 공지된 기술에 따라 적절히 선택될 수 있다.
본 명세서에서, "프로브(probe)"는 mRNA와 특이적으로 결합을 이룰 수 있는, 짧게는 수 염기 내지 길게는 수백 염기에 해당하는 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며, 라벨링 되어있어서 특정 mRNA의 존재 유무, 발현량을 확인할 수 있다. 프로브는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide) 프로브, 단쇄 DNA(single strand DNA) 프로브, 이중쇄 DNA(double strand DNA) 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 형성될 수 있다. 적절한 프로브 및 혼성화 조건은 당해 기술 분야에 공지된 기술에 따라 적절히 선택될 수 있다.
본 명세서에서, "항체(antibody)"는 당해 기술 분야에 공지된 용어로서, 항원성 부위에 대하여 지시되는 특이적인 면역글로불린을 의미한다. 본 발명에서의 항체는 상기 유전자에 의해 인코딩되는 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 당해 기술분야의 통상적인 방법에 따라 항체를 제조할 수 있다. 상기 항체의 형태는 폴리클로날(polyclonal) 항체 또는 모노클로날(monoclonal) 항체를 포함하며, 모든 면역글로불린 항체가 포함될 수 있다. 상기 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 갖는 완전한 형태를 의미한다. 또한, 상기 항체는 인간화 항체 등의 특수 항체도 포함될 수 있다.
본 명세서에서 "펩타이드(peptide)"는 표적 물질에 대한 결합력이 높은 장점이 있고, 열/화학 처리 시에도 변성이 일어나지 않는다. 또한 분자 크기가 작기 때문에 다른 단백질에 붙여서 융합 단백질로의 이용이 가능하다. 구체적으로 고분자 단백질 체인에 붙여서 이용이 가능하므로 진단 키트 및 약물 전달 물질로 이용될 수 있다.
본 명세서에서 "앱타머(aptamer)"는 그 자체로 안정된 삼차 구조를 가지면서 표적 분자에 높은 친화성과 특이성으로 결합할 수 있는 특징을 가진 특별한 종류의 단일가닥 핵산 (DNA, RNA, 또는 변형 핵산)으로 구성된 폴리뉴클레오티드(polynucleotide)의 일종을 의미한다. 상술한 바와 같이, 앱타머는 항체와 동일하게 항원성 물질에 특이적으로 결합할 수 있으면서도, 단백질보다 안정성이 높고, 구조가 간단하며, 합성이 용이한 폴리뉴클레오티드로 구성되어 있어, 항체를 대체하여 사용될 수 있다.
본 발명은 상기의 신장 질환 진단용 조성물을 포함하는 신장 질환 진단용 키트를 제공한다. 상기 키트는 신장 질환이 의심되는 개체로부터 분리된 시료에서 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준을 측정하여 신장 질환 발병 여부를 진단하는 데 사용될 수 있다.
상기 신장 질환 진단용 키트는 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치 등을 더 포함할 수 있으며, 상기 키트는 프라이머 키트, DNA 칩 키트, 단백질 칩 키트 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 키트는 기질, 완충용액, 발색 효소 또는 형광물질로 표지된 2차 항체, 발색 기질 등을 더 포함할 수 있다. 상기 기질은 니트로셀룰로오스 막, 폴리비닐 수지로 합성된 96웰 플레이트, 폴리스티렌 수지로 합성된 96웰 플레이트 및 유리로 된 슬라이드 글라스 등을 포함할 수 있다. 상기 발색 효소는 퍼옥시다아제(peroxidase), 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase) 등을 포함할 수 있으며, 상기 형광물질은 FITC(Fluorescein isothiocyanate), RITC(rhodamine B isothiocyanate) 등이 사용될 수 있다. 또한, 상기 발색 기질액은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)), OPD(O-phenylene diamine), 또는 TMB(tetramethylbenzidin)가 사용될 수 있다.
본 발명은 신장 질환이 의심되는 개체로부터 분리된 시료에서 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 단계; 및 상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계를 포함하는 신장 질환 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
상기 정보 제공 방법을 통해 상기 시료의 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준이 정상 대조군 시료보다 높을 때 신장 질환으로 판단할 수 있고, 이러한 정보를 제공함으로써 신장 질환 발병에 따른 향후 치료 방향 등을 설정하여 보다 빠르고 효과적으로 치료할 수 있다.
본 명세서에서, "개체"란, 신장 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미한다.
상기 개체로부터 분리된 시료는 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준이 차이나는 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 타액 또는 뇨와 같은 시료 등을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 뇨일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 개체에서 분리된 생물학적 시료에 시험물질을 처리하는 단계; 상기 시험물질을 처리한 시료에서 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 단계; 및 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준이 감소된 시험물질을 선별하는 단계;를 포함하는 신장 질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.
상기 스크리닝 방법은 신장 질환 치료제 후보 물질의 존재 및 부재 하에서 상기 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성의 증가 또는 감소를 비교하는 방법으로, 신장 질환 치료제, 신장 섬유화증 억제제 등을 스크리닝하는데 유용하게 사용될 수 있으며, 상기 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 수준을 감소시키는 물질은 신장 질환 치료제 또는 신장 섬유화증 치료제로서 선택될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 단백질 발현 또는 활성 수준은 웨스턴 블랏, 효소면역분석법(Enzymelinked immunosorbent assay; ELISA), 방사선면역분석(Radioimmunoassay; RIA), 방사면역 확산법(Radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(rocket) 면역 전기영동, 조직면역염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation assay), 보체고정분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석법(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS) 및 단백질 칩(protein chip)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 방법으로 측정될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 유전자의 발현 수준은 중합효소반응(PCR), 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA: RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 마이크로 어레이 칩으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 방법으로 측정될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성을 억제함으로써, 신장 질환의 발병을 예방 또는 치료할 수 있다.
상기 억제제는 VSIG4 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드, 작은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA), 및 짧은 헤어핀 RNA(short hairpin RNA; shRNA)로 이루어진 군에서 선택될 수 있고, 또는 VSIG4에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 펩타이드 미메틱스, 앱타머, 화합물 및 천연물로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "예방"이란, 본 발명에 따른 약학 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 투여에 의해 신장 질환, 또는 이의 적어도 하나 이상의 증상의 발생을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 재발을 예방하거나 방지하기 위해 상기 질병에 차도가 있는 대상의 치료를 포함한다.
본 명세서에서, "치료"란, 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 신장 질환, 또는 이의 적어도 하나 이상의 증상을 완화, 감소, 또는 소멸시키는 등 그 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서, "약학 조성물"이란, 특정한 목적을 위해 투여되는 조성물로, 본 발명의 목적상 신장 질환, 또는 이의 적어도 하나 이상의 증상을 예방하거나 또는 치료하기 위해 투여되는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 약학 조성물은 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 적절한 담체와 배합될 수 있고, 필요에 따라, 부형제, 희석제, 분산제, 유화제, 완충제, 안정제, 결합제, 붕해제, 용제 등을 더 포함하여 제조될 수 있다. 상기 적절한 담체 등은 본 발명에 따른 억제제의 활성 또는 특성을 저해하지 않는 것으로, 투여 형태 및 제형에 따라 달리 선택될 수 있다.
본 명세서에서, "약학적으로 허용가능한"이란, 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 어떠한 제형으로도 적용될 수 있고, 보다 상세하게는 통상의 방법에 따라 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 비경구형 제형으로 제형화하여 사용될 수 있다.
상기 경구형 제형 중 고형 제형은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등의 형태로, 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 솔비톨, 만니톨, 셀룰로오스, 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있고, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 포함될 수 있다. 또한, 캡술제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 포함할 수 있다.
상기 경구형 제형 중 액상 제형은 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 비경구 제형은 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 이에 제한되지 않고, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제를 모두 사용 가능하다.
또한, 본 발명에 따른 약학 조성물은 치료 효능의 증진을 위해 칼슘이나 비타민 등을 더 첨가할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다.
본 명세서에서, "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다.
상기 약학 조성물의 유효 용량 수준은 사용 목적, 환자의 연령, 성별, 체중 및 건강 상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 달리 결정될 수 있다. 예를 들어, 일정하지는 않지만 일반적으로 0.001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 10mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여될 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 신장 질환이 발생할 수 있는 임의의 동물에 투여할 수 있고, 상기 동물은 예를 들어, 인간 및 영장류뿐만 아니라 소, 돼지, 말, 개 등의 가축 등을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 제제 형태에 따른 적당한 투여 경로로 투여될 수 있고, 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 투여 방법은 특히 한정할 필요 없이, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피부 도포, 호흡기내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracere-broventricular) 주사 등의 통상적인 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 신장 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로 사용될 수 있고, 수술 또는 다른 약물 치료 등과 병용하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 VSIG4 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 신장 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 명세서에서, "개선"이란, 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물의 섭취에 의해 신장 질환, 또는 이의 적어도 하나 이상의 증상을 완화, 감소, 또는 소멸시키는 등 그 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서, "건강기능식품"이란, 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 포함하며, 영양 공급 외에도 본 발명의 목적상 신장 질환의 예방, 생체 방어, 면역, 회복 등의 생체 조절 기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료 효과가 높은 식품을 의미한다.
이에 상응하는 특징들은 상술된 부분에서 대신할 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 건강기능식품은 신장 질환의 예방 또는 개선 목적으로, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료 등으로 제조될 수 있다. 상기 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 상기 약학 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가될 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 건강기능식품은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있다. 예를 들어, 음료 및 각종 드링크, 과실 및 그의 가공식품(과일통조림, 잼 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(햄, 베이컨 등), 빵류 및 면류, 쿠키 및 스낵류, 유제품(버터, 치즈 등) 등이 가능하며, 통상적인 의미에서의 기능성 식품을 모두 포함할 수 있다. 또한 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 식품학적으로 허용 가능한 식품 첨가제(식품 첨가물) 및 적절한 기타 보조 성분을 더 포함하여 제조될 수 있다. 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정할 수 있다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류 등을 들 수 있다.
상기 기타 보조 성분은 예를 들어, 향미제, 천연 탄수화물, 감미제, 비타민, 전해질, 착색제, 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 특히, 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 사용할 수 있으며, 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품에 함유된 상기 억제제의 유효 용량은 신장 질환 예방 또는 개선 등 그 사용 목적에 따라 적절하게 조절될 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 식품을 원료로 하여 일반 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 신장 질환의 예방 또는 개선을 위한 보조제로 섭취될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실험방법>
1. 세포 실험
1-1. 세포 배양
1-1-1. HK2 세포 배양
불멸화한 인간의 콩팥 근위세관 세포인 HK2 cell (A TCC, Manassan, VA)을 DMEM medium (Mediatech Inc., Corning Subsidiary, Manassas, VA)에 10% 열 비활성 소태아혈청(heat inactivated fetal bovine serum, Tissue Culture Biologicals, Tulare, CA, USA)과 100 IU/mL 페니실린(penicillin), 100 mg/mL 스트렙토마이신(streptomycin)을 섞어 37℃의 5% CO2 습한 대기 환경에서 배양하였다.
HK2 세포에 저 포도당(low glucose, LG, 5.5 mM)과 고 포도당(high glucose, HG, 55 mM)을 처리하고 72시간째에 VSIG4 mRNA와 단백 발현을 평가하였다 (VSIG4 gene ID : 11326). 구입한 scrambled siRNA (control siRNA)와 VSIG4 siRNA (z391g, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)를 각각 200 MOI로 형질주입(transfection) 시켜 HK2 세포의 VSIG4 발현을 억제하였다.
TGF-β 발현을 억제하기 위해 TGF-β-siRNA (Santa Cruz Biotechnology , Santa Cruz, CA, USA)를 이용하였으며, TGF-β 자극 실험을 위해 10 ng/mL recombinant TGF-β (R&D systems, Minneapolis, MN, USA) 를 이용하였다.
1-1-2. 족세포 배양
Mouse podocyte cell line 에 RPMI 배양액에 10% 열 비활성 소태아혈청, 100 IU/mL 페니실린, 100 mg/mL 스트렙토마이신을 섞어 37℃의 5% CO2 습한 대기 환경에서 배양하였다.
VSIG4 발현을 평가하기 위해 저 포도당(low glucose, LG, 5.5 mM)과 고 포도당(high glucose, HG, 55 mM), 안지오텐신(angiotensin) Ⅱ 100 nM, 아드리아마이신(adriamycin) 1.0 μg/mL과 3.0 μg/mL 을 처리하였다.
1-2. mRNA 발현 평가
세포 배양 중인 plate의 배지를 걷어 내고 Trizol (Life Technologies, Gaithersburg, MD, USA)을 이용하여 RNA를 추출하였다 역전사(reverse transcription, RT)는 cDNA 합성 키트(Applied biosystems, Roche Inc., Foster City, CA, USA)를 이용하였으며, 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)을 이용하여 mRNA 발현을 평가하였고, β-actin 또는 GAPDH로 발현량을 보정하였다. 각각의 프라이머(primer)는 하기 표 1 및 2와 같다.
Human Forward Reverse
VSIG4 AACTCCTGTCTCCAAGCCC (서열번호 1) GCAGTGCAGAAATAGGAGCC (서열번호 2)
β-actin GCCGGGACCTGACTGACTAC (서열번호 3) TCTTCTCCAGGGAGGAGCTG (서열번호 4)
Mouse Forward Reverse
VSIG4 TCCCTGGCTTCCTTTCTTCT (서열번호 5) CCAAACCCAGGATTTCTCAA (서열번호 6)
β-actin GGACTCCTATGTGGGTGACG (서열번호 7) CTTCTCCATGTCGTCCCAGT (서열번호 8)
1-3. 웨스턴 블로팅(Western blotting)
세포 용해물(cell lysate)에 RIPA 버퍼를 처리하여 얻은 단백질을 정량하고 20μg 단백을 8-15% SDS-PAGE를 이용하여 분리하였다. 10% SDS-PAGE를 이용하여 전기영동하여 단백을 분리한 후 단백질을 PAGE 트랜스퍼 버퍼 (Amersham Life Science, Arlington Heights, IL)를 이용하여 270 mA로 4시간 동안 PVDF 막(membrane) (Millipore corporation bedford, USA)에 옮긴 후, 블로킹 용액(blocking solution, 5% skim milk)으로 4℃에서 밤새 반응시키고 Tris buffered saline with Tween-20 (TBS-T buffer; 10mM Tris-Cl, pH 7.8, 150nM Nacl, 0.05% Tween-20)으로 세척하였다.
HK2 세포에는 1차 항체인 anti-VSIG4, anti-Vimentin (1:500 희석, Abcam, Cambridge, MA, USA)와 anti-GAPDH (Aviva Systems Biology, San Diego, CA, USA)를 이용하여 처리하고, 족세포에는 1차 항체인 anti-VSIG4 (1:500 희석, Abcam, Cambridge, MA, USA), anti-beta actin (1:2000 희석, Sigma, Saint Louis, MO, USA) 를 이용하여 처리한 후, TBS-T buffer에 1:200에서 1:1000으로 희석하여 실온에서 1시간 반응시켰다. 이 후 TBS-T buffer로 3회 세척하고 2차 항체를 1:1000으로 희석하여 실온에서 1시간 반응시킨 다음, ECL kit (Amersham Life Science)를 이용하여 막을 감광시켜 Las-3000을 이용하여 촬영하였다.
2. 동물 실험
2-1. 당뇨 모델
6주령 수컷 당뇨 db/db mice (C57BLKS/J-leprdb/leprdb, Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)를 구입하여 일정한 온도(23+2℃)와 습도(55+5%) 하에서 유지하였다 대조군인 비당뇨쥐 (db/m)와 당뇨쥐 (db/db)는 각각 6 마리씩 분류하여 8주령을 기준으로 12주간 유지하였다. 12주째 쥐를 희생시켜 왼쪽 신장은 형태적인 분석을 위해 절제한 뒤 4% 파라포름알데히드(paraformaldehyde) 용액에 고정하고, 오른쪽 신장은 피질 부위만을 박리 후 RNase 억제제와 혼합하여 -70℃에 보관하였다.
2-2. 일측성 요로 폐색 모델
8주령 C57/BL6 쥐를 이용하여 대조군과 일측성 요로 폐색 모델(unilateral ureteral obstruction, UUO) 군으로 나누어 실험을 진행하였다. UUO 모델을 만들기 위해 개복 후 좌측 요관을 6-0 silk 실로 2군데 묶고 요관을 잘랐으며, 이후 14일간 유지 후 쥐를 희생하여 신장을 적출하였으며 조직을 나누어 형태적인 분석을 위해서는 4% 파라포름알데히드 용액에 고정하고, 나머지 부분은 피질 부위만을 박리 후 RNase 억제제와 혼합하여 -70℃에 보관하였다.
2-3. 아드리아마이신( Adriamycin ) 신 손상 모델
6주령의 Balb/c 수컷 쥐 (RaonBio, Yongin Korea)를 대조군과 Adriamycin 투여군 각각 9마리를 배정하였다. Adriamycin 11 mg/kg을 꼬리 정맥에 1회 투여하였으며 상기 기술한 조건과 동일하게 4주간 유지하였다. 4주째에 쥐를 희생시켰으며, 이때 소변과 신장 적출 과정은 상기 기술한 내용과 동일하게 진행하였다.
2-4. 노화 모델
6주령 수컷 당뇨 db/m과 db/db mice (C57BLKS/J-leprdb/leprdb, Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)를 각각 36마리를 구입하여 진행하였다. 8주령부터 4주 간격으로 24주까지 총 5회와 마지막 38주령에 각각 6마리씩 희생시켰으며 희생 전 6시간 동안 소변을 모았다. 동물 유지 조건 및 소변 배양법은 상기 기술한 내용과 동일하다.
2-5. 소변
쥐를 희생하기 전 24시간 동안 대사케이지(metabolic cage)를 이용하여 소변을 모아서 보관하였다. 보관된 소변은 ELSIA를 이용하여 VSIG4 (Bioassay Technology Laboratory, Shanghai, China)를 측정하였으며, 크레아티닌(creatinine)으로 보정하였다.
2-6. mRNA 발현 평가
신장의 피질 부위를 균질화(homogenize) 한 후, TRI reagent (GibCo BRL, USA)를 이용하여 RNA를 추출하였다. cDNA 합성은 kit (Applied Biosystems, Roche, USA)를 이용하여 역전사하여 합성하였다. Quantitative RT-PCR은 SYBR Green technology를 이용하여 LightCycler 1.5 system (Roche diagnostics Corporation, Indianapolis, IN)에서 22-30 cycles로 95℃에서 10초간 변성(denaturation)시킨 후, 53℃ (VSIG4), 57℃ (β-actin)으로 4초간 어닐링(annealing) 하였다.
VSIG4와 β-actin의 프라이머는 상기 표 2와 같다.
2-7. 병리 조직 검사와 면역 세포 화학법을 통한 신증의 진행 과정 평가
파라포름알데히드로 고정된 조직을 4μm 두께로 절편을 만들고 크실렌(Xylene)으로 파라핀을 제거한 후, 100, 95, 70% 알코올에 차례로 함수하였다. 시트레이트(citrate) 완충용액 (pH 6.0)으로 80℃에서 30분간 끓여서 항원을 노출시킨 후 내인성 과산화 효소를 제거하기 위해 3% MeOH-H2O2에 10분간 처리하였다.
비특이적인 단백 결합을 방지하기 위하여 horse 혈청에 20분간 실온에 방치하였다. 항 VSIG4 (R&D system, Minneapolis, MS)를 1:100으로 희석하여 4℃에서 밤새 반응시킨 후, tris 완충용액으로 3차례 수세하고 이차항체 키트(anti-goat HRP-DAB cell & tissue staining kit)를 이용하여 이차항체 반응과 발색을 한 후, 디아미노벤지딘(diaminobenzidine)으로 발색을 하여 헤마톡실린(hematoxylin)으로 대조 염색한 다음 봉입하여 슬라이드를 완성하였다.
3. 당뇨병 신증 환자에서 신손상 예측 추정
제2형 당뇨병 환자와 비당뇨병 신증 환자 총 131명이 포함되었다. 등록할 당시의 신기능 지표인 혈청 크레아티닌 (1.95 ± 1.61 mg/dL)과 소변에서 단백뇨 (1.60 ± 2.33 g/gCr)와 VSIG4 (6.35 ± 8.85 ng/mgCr) 농도를 측정하였다. 사구체 여과율은 혈청 크레아티닌을 기초로 CKD-EPI 공식을 이용하여 계산하였다. 이후 3년간 환자들의 혈청 크레아티닌을 측정하여 신기능 악화 정도를 평가하였다. 3년 후 신기능 지표인 사구체여과율이 30% 이상 감소하거나 투석이나 이식과 같은 신대체 치료를 받는 경우를 일차 지표로 선정하였다.
4. 통계처리
모든 실험결과는 통계프로그램인 SPSS 25.0을 이용하며, P < 0.05 일 경우 통계학적으로 유의한 것으로 정의하였다.
<실험결과>
1. 고 포도당 자극을 받은 신장 세포의 VSIG4 발현 양상 확인
1-1. 고 포도당 자극을 받은 신세관 세포의 VSIG4 발현 양상 확인
1) 사람의 신장 세관 세포 중 근위부위 세포인 HK2 세포에 저 포도당(low glucose, LG, 5.5mM)과 고 포도당(high glucose, HG, 55mM)을 처리했을 때, 고 포도당(HG)에서 72시간째에 VSIG4 mRNA와 단백 발현이 증가하는 것으로 나타났다 (도 1).
2) 고 포도당(HG)을 처리했을 때 VSIG4와 비멘틴(vimentin)이 상승하고, siVSIG4를 이용하여 VSIG를 억제하였을 때 비멘틴 합성이 감소하는 것으로 나타났다 (도 2). 이 때, 고 포도당(HG)일 때 발생하는 섬유화 반응에 VSIG4가 관여함을 확인할 수 있다.
3) 신세관 세포에 고 포도당 처리 후 siTGF-β를 처리했을 때 VSIG4 발현이 감소하고 TGF-β를 처리했을때는 VSIG4 발현이 증가하는 것으로 나타났다 (도 3).
1-2. 고 포도당 자극을 받은 족세포(podocyte)의 VSIG4 발현 양상 확인
당뇨병 신증 발생과 진행에 중요한 역할 담당하는 족세포에 신 손상의 주된 물질인 고 포도당과 안지오텐신(angiotensin) Ⅱ를 자극하였을 때 저 포도당에 비해 VSIG4 mRNA와 단백발현이 증가하는 것으로 나타났다. (도 4)
2. db/db 마우스에서 VSIG4 발현 양상 확인
제2형 당뇨모델인 db/db 마우스에서 VSIG4는 비당뇨군인 db/m 마우스에 비해 VSIG4 mRNA 발현이 의미있게 상승하였고, VSIG4 단백의 면역화학염색에서도 의미있는 차이가 나타났다 (도 5). 이를 통해, 당뇨병 신증의 진행에 VSIG4가 관여함을 확인할 수 있다.
제2형 당뇨 모델인 db/db 마우스에서 VSIG4는 비당뇨군인 db/m 마우스에 비해 소변 내 VSIG4 단백 발현이 의미있게 상승하였고, 이때 알부민와 의미있는 상관관계를 보였다. 또한, 신 조직의 VSIG4 mRNA와 단백 발견도 의미있는 차이를 보여주었다 (도 6). 따라서 제2형 당뇨병 신증의 진행에 VSIG4가 관여함을 확인할 수 있다.
3. UUO 모델에서 VSIG4 발현 양상 확인
신 섬유화의 한 모델인 UUO 모델에서 VSIG4 mRNA 발현을 평가한 결과, 대조군에 비해 UUO 모델에서 신장 내 VSIG4 mRNA 발현이 증가하는 것으로 나타났고, 면역화학염색에서도 뚜렷한 차이를 보이는 것으로 확인되었다. 또한, 소변에서 VSIG4 단백 발현이 대조군에 비해 UUO 모델에서 의미있게 상승하는 것으로 나타났다 (도 7).
이를 통해, 신 섬유화 진행에 VSIG4가 관여함을 예상할 수 있다.
4. Adriamycin 신 손상 모델에서 VSIG4 발현 양상 확인
1) Adriamycin을 4주간 주입하였을 때 24시간 단백뇨와 VSIG4 단백 발현은 의미있게 상승하였다. 또한 신 조직 내 VSIG4 mRNA 발현도 의미있게 상승하였다 (도 8).
2) 족세포에 Adriamycin 1.0 μg/mL과 3.0 μg/mL을 각각 12시간과 24시간 동안 투여했을 때 두 가지 농도 모두에서 시간이 지남에 따라 VSGI4 mRNA와 단백 발현이 증가하였다 (도 9).
이상의 결과를 바탕으로 Adriamycin 신 손상 모델에서 VSIG4가 관련이 있다는 것을 확인하였다.
5. 노화 모델에서 VSGI4 발현 양상 확인
1) 정상 쥐인 db/m 마우스에서 소변 내 VSIG4 양은 24주까지 큰 변화가 없다가 38주령에서 3배 이상 증가하였다. 이때 대표적인 신손상 지표인 단백뇨(albuminuria)도 유사한 양상을 보였다 (도 10).
2) 제2형 당뇨쥐 모델인 db/db 마우스에서 소변 내 VSIG4양과 albuminuria 양은 초기부터 상승하여 시간이 지남에 따라 발현양이 증가하였다.
이상의 결과를 바탕으로 정상쥐와 제2형 당뇨병 쥐에서 VSIG4 양상이 노화와 관련이 있다는 것을 확인하였다.
6. 제2형 당뇨병 신증 환자에서 VSIG4 발현 양상 확인
제2형 당뇨병 환자와 비 당뇨병 환자 131명에서 소변 내 VSIG4는 단백뇨와 의미있는 양의 상관관계가 있었다. 3년 후 신기능 지표인 사구체 여과율이 30% 이상 감소하거나 신대체치료 (투석 또는 이식)를 받을 가능성에 대해 ROC AUC 값이 단백뇨와 유사한 정도로 의미있는 지표라는 것을 확인하였다 (도 11).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.
<110> inje university industry-academic cooperation foundation <120> COMPOSITION FOR DIAGNOSING OR TREATING KIDNEY DISEASES <130> ADP-2021-0335 <150> KR 10-2020-0072162 <151> 2020-06-15 <160> 8 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> H VSIG4-f primer <400> 1 aactcctgtc tccaagccc 19 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> H VSIG4-r primer <400> 2 gcagtgcaga aataggagcc 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin-f primer <400> 3 gccgggacct gactgactac 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin-r primer <400> 4 tcttctccag ggaggagctg 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> M VSIG4-f primer <400> 5 tccctggctt cctttcttct 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> M VSIG4-r primer <400> 6 ccaaacccag gatttctcaa 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin-f primer <400> 7 ggactcctat gtgggtgacg 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin-r primer <400> 8 cttctccatg tcgtcccagt 20

Claims (10)

  1. VSIG4 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자를 유효성분으로 포함하는 당뇨병성 신증, 고혈압성 신증, 사구체신염, 다낭신 또는 요로 폐색증 진단용 바이오마커 조성물.
  2. 삭제
  3. VSIG4 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 당뇨병성 신증, 고혈압성 신증, 사구체신염, 다낭신 또는 요로 폐색증 진단용 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 제제는,
    상기 VSIG4 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브, 상기 VSIG4 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 펩타이드 미메틱스, 앱타머 또는 화합물인 것을 특징으로 하는 당뇨병성 신증, 고혈압성 신증, 사구체신염, 다낭신 또는 요로 폐색증 진단용 조성물.
  5. 제 3 항 또는 제 4 항에 따른 조성물을 포함하는 당뇨병성 신증, 고혈압성 신증, 사구체신염, 다낭신 또는 요로 폐색증 진단용 키트.
  6. 환자로부터 분리된 시료에서 VSIG4 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    상기 VSIG4 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는 당뇨병성 신증, 고혈압성 신증, 사구체신염, 다낭신 또는 요로 폐색증 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 시료는,
    소변인 것을 특징으로 하는 당뇨병성 신증, 고혈압성 신증, 사구체신염, 다낭신 또는 요로 폐색증 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  8. 신장 질환 환자로부터 분리된 생물학적 시료에 시험물질을 처리하는 단계;
    상기 시험물질을 처리한 시료에서 VSIG4 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 상기 VSIG4 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 감소된 시험물질을 선별하는 단계;를 포함하는 당뇨병성 신증, 고혈압성 신증, 사구체신염, 다낭신 또는 요로 폐색증 치료제의 스크리닝 방법.
  9. 삭제
  10. 삭제
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