KR102527041B1 - Cosmetic composition for promoting lipid and collagen biosynthesis containing extracts of arctium lappa seed and lupine peptide - Google Patents

Cosmetic composition for promoting lipid and collagen biosynthesis containing extracts of arctium lappa seed and lupine peptide Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부 탄력 효과를 개선하기 위해 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물을 함유하는 화장료 조성물로서, 더욱 상세하게는 루핀 펩타이드 추출물이 콜라겐의 합성을 촉진하고 우방자 추출물이 세라마이드, 콜레스테롤, 트리글리세라이드의 합성을 촉진함으로써 단백질과 지질의 생합성이 동시에 이루어져 피부 탄력 효과를 우수하게 개선하고, 주름의 발생을 억제하여 피부 노화를 예방하는 화장료 조성물을 제공한다.The present invention is a cosmetic composition containing a lupine peptide extract and a raspberry extract to improve skin elasticity. More specifically, the lupine peptide extract promotes the synthesis of collagen and the extract promotes the synthesis of ceramide, cholesterol, and triglyceride By doing so, biosynthesis of proteins and lipids is performed simultaneously to provide a cosmetic composition that excellently improves the skin elasticity effect and prevents skin aging by suppressing the occurrence of wrinkles.

Description

우방자와 루핀 펩타이드 추출물을 유효성분으로 함유하는 콜라겐 및 지질 생합성을 촉진하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR PROMOTING LIPID AND COLLAGEN BIOSYNTHESIS CONTAINING EXTRACTS OF ARCTIUM LAPPA SEED AND LUPINE PEPTIDE}COSMETIC COMPOSITION FOR PROMOTING LIPID AND COLLAGEN BIOSYNTHESIS CONTAINING EXTRACTS OF ARCTIUM LAPPA SEED AND LUPINE PEPTIDE}

본 발명은 루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물을 유효 성분으로 함유하여 피부에 탄력 효과를 부여하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 루핀 펩타이드 추출물이 콜라겐의 생합성을 촉진시키고, 우방자 추출물이 콜레스테롤, 트리글리세라이드의 생합성을 촉진시킴으로써 단백질과 지질이 동시에 생합성되어 각 추출물을 단독으로 사용하는 것보다 피부의 탄력 개선 효과가 더욱 증진된 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing a lupine peptide extract and an extract of Raisinus japonica as active ingredients to impart elasticity to the skin. More specifically, the lupine peptide extract promotes the biosynthesis of collagen, and the extract of Astragalus chinensis promotes the biosynthesis of cholesterol and triglyceride, so that proteins and lipids are biosynthesized at the same time, and the effect of improving skin elasticity is more effective than using each extract alone. It relates to enhanced cosmetic compositions.

피부는 외부 환경으로부터 피부를 보호하는 일차 방어막이면서, 동시에 체온 조절 등의 항상성 유지에 중요한 역할을 하는 신체 기관이다. 이러한 피부는 노화, 자외선 및 스트레스 등 다양한 내, 외부 자극에 의해 손상 되는데, 그 결과 피부의 탄력이 손실되고, 피부가 위축될 뿐만 아니라 피부 재생 능력이 저하된다.The skin is a body organ that plays an important role in maintaining homeostasis, such as regulating body temperature, while being a primary barrier that protects the skin from the external environment. Such skin is damaged by various internal and external stimuli such as aging, ultraviolet rays, and stress. As a result, skin elasticity is lost, skin atrophy, and skin regeneration ability is lowered.

피부의 탄력에 직접적으로 영향을 주는 성분은 콜라겐, 엘라스틴 등의 단백질 성분과 콜레스테롤, 세라마이드 등의 지질 성분이다. 이러한 성분이 충분하게 합성되어 제기능을 할 경우 피부 또한 탄력 있고 건강한 피부로 유지 될 수 있으나, 나이가 들어감에 따라 합성이 저하되거나 외부 자극에 의해 손상, 파괴될 경우 피부가 탄력을 잃고 회복력을 더디게 하여 주름을 발생시키는데 직접적인 영향을 주게 된다.Components that directly affect skin elasticity are protein components such as collagen and elastin, and lipid components such as cholesterol and ceramide. If these ingredients are sufficiently synthesized and function properly, the skin can also be maintained as elastic and healthy skin. This has a direct effect on the occurrence of wrinkles.

이러한 이유로 콜라겐의 합성을 촉진 시키는 화장료 조성물(대한민국 공개특허 제10-2010-0061089호, 대한민국 공개특허 제2000-0018467호)이나, 지질 생합성을 촉진시키는 화장료 조성물(대한민국 공개특허 제10-2014-0076758호)에 대한 연구를 통해 피부 탄력을 개선시키고, 피부 노화를 방지하려는 노력이 꾸준히 이루어지고 있다.For this reason, a cosmetic composition that promotes collagen synthesis (Korean Patent Publication No. 10-2010-0061089, Korean Patent Publication No. 2000-0018467) or a cosmetic composition that promotes lipid biosynthesis (Korean Patent Publication No. 10-2014-0076758 Ho), efforts to improve skin elasticity and prevent skin aging have been steadily made.

본 발명자들은 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물을 함유함으로써 콜라겐과 지질 생합성을 촉진하고 피부 탄력 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 확인하여 본 발명을 완성하였다. The present inventors have completed the present invention by confirming a cosmetic composition that promotes collagen and lipid biosynthesis and has excellent skin elasticity improvement effect by containing a lupine peptide extract and a raspberry extract.

이에, 본 발명은 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물을 이용하여 피부를 구성하고 있는 단백질 성분과 지질 성분의 생합성을 동시에 촉진 시켜 피부의 탄력 개선 효과를 크게 증진시킴으로써 주름 발생 등의 피부 노화를 예방하고 그 증상을 더욱 지속시키는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Therefore, the present invention prevents skin aging such as wrinkles by promoting the biosynthesis of protein components and lipid components constituting the skin at the same time using a lupine peptide extract and an extract of Raisinus japonica to greatly enhance the effect of improving skin elasticity, thereby preventing skin aging such as wrinkles and the symptoms It is an object to provide a cosmetic composition that further lasts.

상기한 과제는 루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물에 의해 달성된다. The above object is achieved by a cosmetic composition for improving skin elasticity containing a lupine peptide extract and a raspberry extract as active ingredients.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 콜라겐과 지질 생합성 증가에 의해 탁월한 피부 탄력 개선 효과 및 노화 방지 효과를 갖는다.Preferably, the cosmetic composition has an excellent skin elasticity improvement effect and anti-aging effect by increasing collagen and lipid biosynthesis.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 콜라겐, 콜레스테롤, 또는 트리글리세라이드 발현양을 증가시키는 것을 특징으로 한다. Preferably, the cosmetic composition is characterized by increasing the expression level of collagen, cholesterol, or triglyceride.

또한, 바람직하게는 상기 루핀 펩타이드 추출물과 상기 우방자 추출물 각각은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 각각 0.00001 ~ 30.0 중량%로 함유되는 것을 특징으로 한다.In addition, preferably, each of the lupine peptide extract and the coriander extract is characterized in that they are contained in an amount of 0.00001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.

본 발명의 의한 조성물의 제형에 특별한 제한이 있는 것은 아니며, 사용하기 적합한 형태로 할 수 있다. 예를 들면 용액, 현탁액, 유탁액, 페이트스, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 팩 마사지크림 및 스프레이의 제형으로 제조될 수 있다. The formulation of the composition according to the present invention is not particularly limited, and may be in a form suitable for use. For example, it can be prepared in the form of solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, cleansing, oils, powder foundations, pack massage creams and sprays.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부에 대한 안전성이 우수하여 피부 부작용이 없으면서, 피부의 탄력 개선 효과 및 주름 개선 효과 등 피부 노화를 예방하는 효과가 탁월하다. The cosmetic composition according to the present invention has excellent skin safety and has no side effects on the skin, and is excellent in preventing skin aging such as skin elasticity improvement effect and wrinkle improvement effect.

도 1은 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물에 의한 지질 생합성을 확인한 그래프이다.
도 2는 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물이 함유된 화장료 조성물을 사용했을 때 피부 탄력 변화를 확인한 그래프이다.
1 is a graph confirming lipid biosynthesis by a lupine peptide extract and a raspberry extract.
Figure 2 is a graph confirming the change in skin elasticity when using a cosmetic composition containing a lupine peptide extract and a raspberry extract.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.All technical terms used in the present invention, unless otherwise defined, have the following definitions and correspond to the meanings commonly understood by those of ordinary skill in the art related to the present invention. In addition, although preferred methods or samples are described in this specification, those similar or equivalent thereto are also included in the scope of the present invention.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.The term “about” means a reference amount, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length of 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, means an amount, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, quantity, weight or length that varies by 4, 3, 2 or 1%.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.Throughout this specification, unless the context requires otherwise, the terms "comprise" and "comprising" include a given step or element, or group of steps or elements, but any other step or element, or It is to be understood that steps or groups of components are not excluded.

본 발명은 루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 개선 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition for improving skin elasticity containing a lupine peptide extract and an extract of Raisinus japonica as active ingredients.

상기 화장료 조성물은 루핀 펩타이드 추출물에 의해 단백질 성분인 콜라겐 합성이 촉진되고, 우방자 추출물에 의해 지질 성분인 콜레스테롤, 트리글리세라이드, 또는 세라마이드의 생합성이 증가하여 피부 탄력을 증진시키고 주름의 발생을 억제함으로써 피부 노화를 예방 한다.The cosmetic composition promotes the synthesis of collagen, which is a protein component, by the lupine peptide extract, and increases the biosynthesis of cholesterol, triglyceride, or ceramide, which are lipid components, by the extract of Azalea extract, thereby enhancing skin elasticity and suppressing the occurrence of wrinkles, thereby reducing skin aging prevent

루핀(Lupin)은 종자(곡물)를 생산하는 콩과의 식물로서, 루핀의 재배 역사는 2,000년 이상 되는 작물이다. 루핀은 척박한 토양이나 산성 토양에 잘 자라기 때문에 청예나 사일리지용으로 재배되기도 하나 대부분의 루핀은 독성이 있거나 기호성을 떨어뜨리는 알칼로이드 함량이 높다. 이 알칼로이드들은 쓴맛을 내기 때문에 해충이나 가축의 방목으로부터 자신을 보호하는 기능이다. 옛날에는 종자를 침지하여 알칼로이드를 제거하였으나 1920년대 독일 육종학자에 의해서 사람이나 가축이 바로 먹을 수 있는 저 알칼로이드 또는 스윗 루핀 품종이 육성되어 있고 지금도 육성개발 중에 있다. 루핀 종자(곡물)는 높은 영양 가치를 갖는 단백질이 풍부하나 상대적으로 지방은 낮다. 대두로부터 유도되는 것(이하, "대두유" 및 "대두유제품"으로 호칭한다)과 유사하게, 루핀 곡물을 가축 사료나 우유와 같은 낙농 대체 제품으로 생산하기 위해 가공하려는 시도가 이전부터 있어 왔다. 또한, 인간식품의 많은 부분을 대체할 수 있는데 단백질과 카로틴이 높아서 제품의 영양가치를 높이는데 이용된다. 루핀의 껍질과 가루는 파스타와 빵의 재료로 쓰이며, 크런치, 과자, 아기분유, 죽과 샐러드에도 이용된다. Lupin is a leguminous plant that produces seeds (grains), and the cultivation history of lupin is a crop of more than 2,000 years. Because lupine grows well in barren or acidic soil, it is also cultivated for greening or silage, but most lupine is toxic or has a high alkaloid content that reduces palatability. Because these alkaloids taste bitter, they function to protect themselves from pests or livestock grazing. In the past, alkaloids were removed by soaking the seeds, but in the 1920s, a German breeder developed low alkaloid or sweet lupine varieties that can be eaten immediately by humans or livestock, and are still in development. Lupine seeds (grains) are rich in protein with high nutritional value, but relatively low in fat. Similar to those derived from soybeans (hereafter referred to as "soybean oil" and "soybean milk products"), there have been previous attempts to process lupine grains to produce livestock feed or dairy substitute products such as milk. In addition, it can replace many parts of human food, and it is used to increase the nutritional value of the product due to its high protein and carotene. The skin and powder of lupine are used as ingredients in pasta and bread, and are also used in crunches, snacks, baby formula, porridge and salads.

본 발명에서 이용되는 루핀 펩타이드 추출물은 프랑스 EXPANSCIENCE사의 “ACTIMP®POWDER BIO”라는 원료명을 가진 하이드롤라이즈드 루핀 펩타이드 추출물을 사용했다. 바람직하게는, 상기 루핀 펩타이드 추출물은 한국공개특허 제2017-0026401호에 기재된 방법으로 제조될 수 있다. The lupine peptide extract used in the present invention used a hydrolyzed lupine peptide extract with the raw material name "ACTIMP® POWDER BIO" from EXPANSCIENCE, France. Preferably, the lupine peptide extract can be prepared by the method described in Korean Patent Publication No. 2017-0026401.

상기 루핀 펩타이드 추출물의 함량은 조성물의 전체 중량에 대해서 0.00001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 1.0 중량% 함유된다. 상기 추출물의 함량이 0.00001 중량% 미만인 경우에는 유효 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다. The content of the lupine peptide extract is contained in an amount of 0.00001 to 30.0% by weight based on the total weight of the composition, more preferably 0.001 to 1.0% by weight based on the total weight. If the content of the extract is less than 0.00001% by weight, no effective effect appears, and if it exceeds 30.0% by weight, the degree of improvement in the increase in the content is insignificant, and there are problems with safety and stability of the formulation, and it is not economical. .

우엉은 높이가 50~150cm이고, 곧은 뿌리가 30~60cm까지 자라며 끝에서 줄기가 나온다. 겉면은 짙은 녹색이지만 뒷면에 흰 솜털이 빽빽이 나며, 가장자리에 이 모양의 톱니가 있다. 꽃은 7~8월에 피는데 검은 자줏빛이 돌며, 두화는 가지 끝에 산방꽃차례로 달린다. 총포는 둥글고 포는 바늘 모양이며 끝이 갈고리처럼 생긴다. 꽃은 관상화이고 종자는 검은색이며 관모는 갈색이다. 열매는 수과로서 9월에 익는다. 우엉의 뿌리에는 이눌린과 약간의 팔미트산이 들어 있는 것으로 알려져 있다. 유럽에서는 이뇨제와 발한제로 쓰고 종자는 부기가 있을 때 이뇨제로 사용하며, 인후통과 독충의 해독제로 쓴다. 우엉의 씨앗은 우방자라고도 하며 풍열을 소통시켜 흩어지게 하고 폐기를 통하게 하며 두진이 돋아나게 하고 부기를 가라앉히며 해독하는 효능이 있는 약재로도 쓰인다. Burdock is 50~150cm high, straight roots grow up to 30~60cm, and a stem comes out from the end. The outer surface is dark green, but white downy hairs grow densely on the back side, and there are tooth-shaped sawtooth edges. Flowers bloom in July-August, and are black purplish, and douhwa hangs in corymbose at the end of branches. The guns are round, the guns are needle-shaped, and the ends are like hooks. Flowers are tubular, seeds are black, and hairs are brown. The fruit is an achene and ripens in September. Burdock root is known to contain inulin and some palmitic acid. In Europe, it is used as a diuretic and diaphoretic, and the seeds are used as a diuretic when there is swelling, and as an antidote for sore throat and poisonous insects. The seeds of burdock are also called Woobangja, and are also used as medicinal materials that have the effect of dispersing wind heat, dispersing waste, causing headaches to sprout, relieving swelling, and detoxifying.

본 발명에서 이용되는 우방자 추출물은 하기 특정 제조예를 참조하여 제조 되었으며, 제조방법을 설명하면 다음과 같다: 우방자를 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 그 건조 중량의 1-10배의 저급알코올을 가한다. 일정온도 에서 일정기간 추출하고 여과한 후, 회전 감압증발기로 건조한다. The extract used in the present invention was prepared with reference to the following specific preparation examples, and the manufacturing method is described as follows: After washing with purified water, and then drying and crushing into small pieces, 1 of its dry weight -Add 10 times lower alcohol. After extracting at a certain temperature for a certain period of time and filtering, it is dried with a rotary vacuum evaporator.

상기 우방자 추출물은 조성물의 전체 중량에 대해서 각각 0.00001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 0.001 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.00001 중량% 미만인 경우에는 유효 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다. The coriander extract is characterized in that it contains 0.00001 to 30.0% by weight, respectively, more preferably, 0.001 to 10% by weight based on the total weight of the composition. If the content of the extract is less than 0.00001% by weight, no effective effect appears, and if it exceeds 30.0% by weight, the degree of improvement in the increase in the content is insignificant, and there are problems with safety and stability of the formulation, and it is not economical. .

본 발명의 일 실시형태에 따르면, 상기 화장료 조성물은 루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물을 1:3 내지 3:1의 중량비로 포함하는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는, 루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물을 1:1의 중량비로 포함할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물을 상기 중량비로 혼합하여 포함함으로써, 단독으로 포함하는 경우보다 더욱 우수한 콜라겐 생합성 및 지질 생합성 효과가 있다. According to one embodiment of the present invention, the cosmetic composition preferably comprises a lupine peptide extract and a bellflower extract in a weight ratio of 1:3 to 3:1. More preferably, it may include the lupine peptide extract and the chinensis extract in a weight ratio of 1:1. The cosmetic composition of the present invention has more excellent collagen biosynthesis and lipid biosynthesis effects than when the lupine peptide extract and the chinensis extract are mixed and included in the weight ratio above.

상기 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이트스, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 팩 마사지크림 및 스프레이의 제형으로 제조 될 수 있다.The cosmetic composition containing the lupine peptide extract and the Astragalus extract may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, It can be made into a formulation of soap, cleansing, oil, powder foundation, pack massage cream and spray.

제조예 1 : 우방자 추출물의 제조 Preparation Example 1 : Preparation of Woobangja Extract

본 발명에서 사용한 우방자 추출물의 제조방법은 다음과 같다. 우방자 100g을 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 그 건조 중량의 1-10배의 70% 저급알코올을 가한다. 15-35℃에서 5일간 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 다시 와트만 5번 여과지로 여과한 후, 회전 감압증발기로 건조하여, 건조 중량 28.7 g인 우방자 추출물을 얻었다.The method for preparing the extract of Raisinus japonica used in the present invention is as follows. After washing 100 g of Brussels sprouts with purified water, drying and crushing into small pieces, 70% lower alcohol in an amount of 1 to 10 times its dry weight is added thereto. After extracting at 15-35° C. for 5 days, the mixture was filtered with a 300 mesh filter cloth, again filtered with a Whatman No. 5 filter paper, and then dried with a rotary vacuum evaporator to obtain an extract having a dry weight of 28.7 g.

실험예 1 : 콜라겐 생합성 촉진 효과 측정 Experimental Example 1 : Measurement of collagen biosynthesis promoting effect

콜라겐 생합성 촉진 효과를 알아보기 위해, 인체 정상 섬유아세포(fibroblast)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-wellmicroplate)의 각 웰(well)에 1X10 4 세포가 되도록 접종하여 디엠이엠(DMEM: dulbecco,s Modified Eagle's Medium) 배지에서 24시간 배양한다. 배양 후 우방자 추출물 및 루핀 펩타이드 추출물, 혹은 우방자 추출물과 루핀 펩타이드 추출물을 1:1(중량비)로 혼합한 추출물을, 최종 농도 100㎍/ml가 되도록 조정한 혈청이 없는 디엠이엠 배지로 교체한 후 48시간 더 배양한다. 배양 마지막 24시간 전에 아스코르빅산 50㎍ /ml를 첨가하여 콜라겐 합성을 촉진시킨다. 배양 후 각 웰을 세척하고 혈청이 함유되지 않은 디엠이엠 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. 배양 후 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 타입 아이씨-펩타이드(PICP, Type-I C-peptide)양을 키트(Kit, Takara, Kyoto, Japan)를 이용하여 새로 합성된 콜라겐 양을 PICP 양으로 측정하였 으며 PICP 양은 ng/2X10 4 세포로 환산하여 콜라겐의 합성효과를 하기 표 1에 나타내었다. 하기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 대조군과 비교하여 우방자 추출물은 콜라겐 합성량이 유의미하게 증가하지 않으나, 루핀 펩타이드 추출물은 대조군 대비 콜라겐 합성량이 크게 증가하였으며, 특히 우방자 추출물과 루핀 펩타이드를 1:1(중량비)로 혼합했을 경우 루핀 펩타이드 추출물을 단독으로 처리한 경우보다 콜라겐 합성량이 증가하는 것을 확인할 수 있다. In order to examine the effect of promoting collagen biosynthesis, human normal fibroblasts were inoculated into each well of a 96-well microplate to become 1X10 4 cells, and DMEM: dulbecco,s Modified Eagle's Medium) culture medium for 24 hours. After culturing, the extract and lupine peptide extract, or the extract obtained by mixing the extract and lupine peptide extract at a ratio of 1:1 (weight ratio) were replaced with serum-free DMEM medium adjusted to a final concentration of 100 μg/ml. 48 Incubate more time. 50 μg/ml of ascorbic acid was added 24 hours prior to the end of culture to promote collagen synthesis. After culturing, each well was washed, replaced with serum-free DMM medium, and cultured for another 24 hours. After culturing, the supernatant of each well was collected and the amount of newly synthesized collagen was measured as the amount of PICP using a kit (Kit, Takara, Kyoto, Japan) for the amount of procollagen type I C-peptide (PICP). The amount of PICP was converted into ng/2X10 4 cells, and the synthesis effect of collagen was shown in Table 1 below. As confirmed in Table 1 below, compared to the control group, the amount of collagen synthesis in the extract of the coriander extract did not significantly increase, but the amount of collagen synthesis in the lupine peptide extract increased significantly compared to the control group. ), it can be seen that the amount of collagen synthesis is increased compared to the case of treating the lupine peptide extract alone.

 구분division 콜라겐 합성량(ng/2X104 )Amount of collagen synthesis (ng/2X10 4 ) 대조군control group 135135 우방자 추출물Woobangja Extract 140140 루핀 펩타이드 추출물Lupine Peptide Extract 184184 우방자 추출물 + 루핀 펩타이드 추출물(1:1 중량비)Woobangja extract + lupine peptide extract (1:1 weight ratio) 215215

실험예 2 : 콜레스테롤 측정 Experimental Example 2 : Cholesterol Measurement

사람의 피지세포주인 SZ95 세포를 독일 베를린자유대학의 대학의학센터 벤자민 프랭크린(The Free University of Berlin University Medical center Benjamin Franklin)의 Dr. Zouboulis 로부터 분양받은 Human immortalized sebocyte(SZ95) 세포를 10% FBS가 첨가된 Dulbecco's modified eagle medium (DMEM)/F12(1:1)을 사용하여 CO2 배양기(37℃,5%CO2)에서 배양하였다. 그리고 48시간 주기로 배양액을 교체하였다.Human sebaceous cell line SZ95 cells were prepared by Dr. Benjamin Franklin, The Free University of Berlin University Medical center, Germany. Human immortalized sebocyte (SZ95) cells received from Zouboulis were cultured in a CO2 incubator (37°C, 5% CO2) using Dulbecco's modified eagle medium (DMEM)/F12 (1:1) supplemented with 10% FBS. And the culture medium was replaced every 48 hours.

이렇게 배양된 SZ95 세포를 10 cm 배양 용기에 분주하고 루핀 펩타이드 추출물(30ug/ml) 및 우방자 추출물(30ug/ml)을 따로 처리한 샘플 혹은 루핀 펩타이드 추출물(15ug/ml)과 우방자 추출물(15ug/ml)을 함께 처리한 샘플을 제작한 다음, 5일간 배양하고 콜레스테롤을 정량하였다. 콜레스테롤 정량 방법은 상기 5일 간 배양된 세포에 라이시스 완충액(EDTA 10 μL, 100mM SPB 용액, PMSF 1 μL, Triton X-100 10 μL)를 처리하고 초음파로 분해하였다. 세포용해액에 클로로포름:메탄올 (2:1) 용액을 첨가하고 혼합하여 원심분리기(2000 rpm, 15분)하여 하층액을 취하여 질소가스(N2)로 농축시켰다. 상기 농축된 시료에 에탄올 300 μL를 넣어 녹인 후 총 콜레스테롤 키트(total cholesterol kit, AM 202-K)를 이용하여 측정하였다. 1 mL의 효소 시액에 100 μL의 시료를 첨가하고 혼합하여 37℃에서 5분 동안 배양 후 500 nm의 파장에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다. 표준액의 콜레스테롤은 3 mL의 효소시액에 20 μL의 표준 액을 넣어 3 mg/mL 값으로 하였다. 콜레스테롤 양은 아래 수학식 1로 산출하였다.SZ95 cells cultured in this way were dispensed into a 10 cm culture container, and samples separately treated with lupine peptide extract (30ug/ml) and chamomile extract (30ug/ml) or lupine peptide extract (15ug/ml) and chamomile extract (15ug/ml) ) were prepared and then cultured for 5 days and cholesterol was quantified. In the method for quantifying cholesterol, cells cultured for 5 days were treated with a lysis buffer (EDTA 10 μL, 100 mM SPB solution, PMSF 1 μL, Triton X-100 10 μL) and disaggregated by ultrasonic waves. A chloroform:methanol (2:1) solution was added to the cell lysate, mixed, centrifuged (2000 rpm, 15 minutes), and the lower layer was collected and concentrated with nitrogen gas (N2). After dissolving 300 μL of ethanol in the concentrated sample, total cholesterol kit (AM 202-K) was used to measure the total cholesterol. 100 μL of sample was added to 1 mL of enzyme solution, mixed, and incubated at 37° C. for 5 minutes, and then absorbance was measured with an ELISA reader at a wavelength of 500 nm. Cholesterol in the standard solution was set to 3 mg/mL by adding 20 μL of the standard solution to 3 mL of the enzyme solution. The amount of cholesterol was calculated by Equation 1 below.

Figure 112020125583718-pat00001
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측정된 콜레스테롤의 양을 표 2에 나타내었다. 표 2를 보면, 대조군이 0.81mg/ml이고 우방자 추출물을 단독으로 처리했을 때나(0.88 mg/ml), 루핀 펩타이드 추출물을 단독으로 처리했을 때보다(0.83 mg/ml) 우방자 추출물과 루핀 펩타이드 추출물을 같이 처리했을 때(1.23 mg/ml) 콜레스테롤 합성이 증가하는 것을 알 수 있다.The amount of cholesterol measured is shown in Table 2. Looking at Table 2, when the control group was 0.81mg / ml and treated with the extract of the raspberry extract alone (0.88 mg / ml), or when the lupine peptide extract was treated alone (0.83 mg / ml), the extract and the peptide extract of the lupine were more It can be seen that cholesterol synthesis increases when treated together (1.23 mg/ml).

 구분division 총콜레스테롤(mg/ml protein) Total cholesterol (mg/ml protein) 대조군control group 0.810.81 우방자 추출물Woobangja Extract 0.880.88 루핀 펩타이드 추출물Lupine Peptide Extract 0.830.83 우방자 추출물 + 루핀 펩타이드 추출물(1:1 중량비)Woobangja extract + lupine peptide extract (1:1 weight ratio) 1.231.23

실험예 3 : 트리글리세라이드 측정 Experimental Example 3 : Triglyceride measurement

실험예 2에서 배양한 SZ95 세포를 10 cm 배양용기에 분주하고 루핀 펩타이드 추출물(30ug/ml) 및 우방자 추출물(30ug/ml)을 따로 처리한 샘플, 루핀 펩타이드 추출물(15ug/ml) 및 우방자 추출물(15ug/ml)을 함께 처리한 샘플을 제작한 다음, 5일간 배양하고 트리글리세라이드를 정량하였다. 트리글리세라이드 정량 방법은 상기 5일 간 배양된 세포에 라이시스 완충액(EDTA 10uL, 100mM SPB 용액, PMSF 1uL, Triton X-100 10uL)를 처리하고 초음파로 분해하였다. 세포용해액에 클로로포름:메탄올 (2:1) 용액을 첨가하고 혼합하여 원심분리기(2000 rpm, 15 분)하여 하층액을 취하여 질소가스(N2)로 농축시켰다. 상기 농축된 시료에 에탄올 300 μl를 넣어 녹인 후 Triglycerides kit(GPO-PAP)를 이용하여 트리글리세라이드를 측정하였다. 1mL의 효소시액에 100 μL의 시료를 첨가하고 혼합하여 37℃에서 5분 동안 배양 후 546nm의 파장에서 ElISA Reader로 흡광도를 측정하였다. 표준액의 트리글리세라이드는 3mL의 효소시액에 20 μl의 표준액을 넣어 3mg/ml 값으로 하였다. 트리글리세라이드 양은 아래 수학식 2로 산출하였다.SZ95 cells cultured in Experimental Example 2 were dispensed into a 10 cm culture container, and samples separately treated with lupine peptide extract (30ug/ml) and chamomile extract (30ug/ml), lupine peptide extract (15ug/ml) and chamomile extract ( 15ug/ml) were prepared, and then cultured for 5 days and triglyceride was quantified. In the triglyceride quantification method, cells cultured for 5 days were treated with lysis buffer (EDTA 10uL, 100mM SPB solution, PMSF 1uL, Triton X-100 10uL) and disaggregated by ultrasonic waves. A chloroform:methanol (2:1) solution was added to the cell lysate, mixed, centrifuged (2000 rpm, 15 minutes), and the lower layer was collected and concentrated with nitrogen gas (N2). After dissolving the concentrated sample in 300 μl of ethanol, triglycerides were measured using a Triglycerides kit (GPO-PAP). 100 μL of the sample was added to 1 mL of the enzyme solution, mixed, and incubated at 37° C. for 5 minutes, and the absorbance was measured with an ElISA Reader at a wavelength of 546 nm. The triglyceride of the standard solution was set to 3 mg/ml by adding 20 μl of the standard solution to 3 mL of the enzyme solution. The amount of triglyceride was calculated by Equation 2 below.

Figure 112020125583718-pat00002
Figure 112020125583718-pat00002

측정된 트리글리세라이드의 양을 표 3에 나타내었다. 표 3을 보면, 대조군이 1.97 mg/ml이고 우방자를 단독으로 처리했을 때나(2.33 mg/ml), 루핀 펩타이드를 단독으로 처리 했을 때보다(2.11 mg/ml) 우방자와 루핀 펩타이드를 같이 처리했을 때(2.98 mg/ml) 트리글리세라이드 합성이 증가하는 것을 알 수 있다.The amount of triglyceride measured is shown in Table 3. Looking at Table 3, when the control group was 1.97 mg / ml and treated with woobangja alone (2.33 mg / ml), or when treated with lupine peptide alone (2.11 mg / ml), when treated with woobangja and lupine peptide together (2.98 mg/ml) it can be seen that triglyceride synthesis is increased.

 구분division 총 트리글리세라이드(mg/ml protein)Total triglycerides (mg/ml protein) 대조군control group 1.971.97 우방자 추출물Woobangja Extract 2.332.33 루핀 펩타이드 추출물Lupine Peptide Extract 2.112.11 우방자 추출물 + 루핀 펩타이드 추출물(1:1 중량비)Woobangja extract + lupine peptide extract (1:1 weight ratio) 2.982.98

실험예 4 : 지질 생합성 측정 Experimental Example 4 : Measurement of lipid biosynthesis

인간 정상 피부 세포인 각질세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1X106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양하고 지질 생성량은 Nile red staning & flow cytometry를 통하여 측정하였다.Human normal skin cells, keratinocytes (Korea Cell Line Bank, Korea) were inoculated into 48-well microplates (Nunc, Denmark) to be 1X10 6 cells per well, and cultured in DMEM medium (Sigma, United States of America) and at 37°C for 24 After culturing for a period of time, lipid production was measured by Nile red staning & flow cytometry.

배양된 각질 세포에 우방자 추출물, 루핀 펩타이드 추출물 및 두 추출물의 1:1(중량비) 혼합물 12.5μg/ml 및 양성대조군으로 리놀렌산 200μg/ml을 각각 처리하고 48시간 배양하였다. 상기 각 월에서 각질 세포를 수거한 후, 1μM Nile red 용액으로 10분간 염색하여 552/636(Ex/Em)nm에서 형광강도를 측정하였다. 측정 결과를 도 1에 도시하였다. 도 1을 보면, 우방자는 지질 생성(99.12)이 양성 대조군인 리놀렌산 200μg/ml(93.54)보다 우수하게 나타났으나, 루핀 펩타이드 추출물(40.12)은 지질 생성량이 리놀렌산 대비 적었다. 또한 우방자 추출물과 루핀 펩타이드 추출물을 혼합한 경우(109.33) 지질 생성량은 우방자 추출물을 단독으로 사용한 것보다 지질 생성량이 더욱 증가하는 것을 확인할 수 있었다. The cultured keratinocytes were treated with 12.5 μg/ml of a 1:1 (weight ratio) mixture of the chinensis extract, the lupine peptide extract, and the two extracts and 200 μg/ml of linolenic acid as a positive control, respectively, and cultured for 48 hours. After collecting keratinocytes from each month, they were stained with 1 μM Nile red solution for 10 minutes, and fluorescence intensity was measured at 552/636 (Ex/Em) nm. The measurement results are shown in FIG. 1 . Referring to Figure 1, the lipid production (99.12) of Woobangja was superior to that of the positive control, linolenic acid 200 μg / ml (93.54), but the lupine peptide extract (40.12) had less lipid production than linolenic acid. In addition, it was confirmed that lipid production was more increased in case of mixing the coriander extract and the lupine peptide extract (109.33) than in the case of using the coriander extract alone.

제형예 1 : 루핀 펩타이드 및 우방자 추출물을 함유하는 조성물의 제조 Formulation Example 1 : Preparation of a Composition Containing Lupine Peptides and Corianja Extract

루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물을 포함하는 제형예 1을 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 루핀 펩타이드 추출물을 단독으로 포함하는 조성물(비교제형예 1), 우방자 추출물을 단독으로 포함하는 조성물(비교제형예 2), 및 상기 추출물을 모두 포함하지 않는 조성물(비교제형예 3)을 하기 표 4에 나타내었다. Formulation Example 1 containing a lupine peptide extract and a raspberry extract was prepared, and for comparison of efficacy, a composition containing the lupine peptide extract alone (Comparative Formulation Example 1) and a composition containing the Astragalus raspberry extract alone (Comparative Formulation Example 2 ), and a composition (Comparative Formulation Example 3) not including all of the extracts are shown in Table 4 below.

구분division 원료(중량%)Raw material (% by weight) 제형예 1Formulation Example 1 비교제형예 1Comparative Formulation Example 1 비교제형예 2Comparative Formulation Example 2 비교제형예 3Comparative Formulation Example 3 1One 루핀 펩타이드 추출물Lupine Peptide Extract 0.10.1 0.20.2 -- -- 22 우방자 추출물Woobangja Extract 0.10.1 -- 0.20.2 -- 33 정제수Purified water To 100To 100 To 100To 100 To 100To 100 To 100To 100 44 글리세린glycerin 22 22 22 22 55 1,3-부틸렌글라이콜1,3-butylene glycol 33 33 33 33 66 잔탄검xanthan gum 0.020.02 0.020.02 0.020.02 0.020.02 77 방부제antiseptic 적량Appropriate amount 적량Appropriate amount 적량Appropriate amount 적량Appropriate amount 88 향료Spices 적량Appropriate amount 적량Appropriate amount 적량Appropriate amount 적량Appropriate amount 99 다이카프릴릴카보네이트dicaprylyl carbonate 22 22 22 22 1010 플리아크릴레이트크로스폴리머-6Polyacrylate Crosspolymer-6 0.30.3 0.30.3 0.30.3 0.30.3 1111 폴리글리세릴-3메틸글루코오스다이스테아레이트Polyglyceryl-3methylglucose distearate 22 22 22 22 1212 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드Caprylic/Capric Triglyceride 33 33 33 33 합계Sum 100100 100100 100100 100100

실험예 5 : 루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물의 피부 탄력 효과 Experimental Example 5 : Skin elasticity effect of lupine peptide extract and Azalea extract

상기 제형예 1 및 비교제형예 1 내지 3에서 제조한 크림을 피부에 도포하여 피부 탄력 효과를 측정하였다. 피부 탄력 측정은 Cutometer MPA580(Courage+Khazaka electronic GmBH, Germany)을 이용하여 시험 제품 사용 전 후에 동일한 부위를 측정하였다. R2(피부의 재 변형력) 값을 피부 탄력도 평가 자료로 사용하였다. R2값은 총체적인 탄성으로 1에 가까운 값일수록 피부가 더욱 탄력적임을 의미한다.The creams prepared in Formulation Example 1 and Comparative Formulation Examples 1 to 3 were applied to the skin to measure the skin elasticity effect. Skin elasticity measurement was measured in the same area before and after using the test product using Cutometer MPA580 (Courage+Khazaka electronic GmBH, Germany). R2 (skin re-deformation force) value was used as skin elasticity evaluation data. The R2 value is the overall elasticity, and the closer the value is to 1, the more elastic the skin is.

도 2에 나타나 있듯이, 제형예 1 및 비교제형예 1 내지 3로 제조한 크림을 피부에 도포하고 각각 사용전, 1주 후, 2주 후의 피부 탄력을 측정한 결과 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물을 함유하지 않은 비교제형예 3과 비교하여 루핀 펩타이드 추출물만 함유한 비교제형예 1 혹은 비교제형예 2가 각각 1주 후, 2주 후 모두 피부 탄력이 증가하는 것을 알 수 있으며, 특히 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물을 모두 함유한 제형예 1은 각 추출물만 함유한 비교제형예 1 또는 2보다 피부 탄력이 더욱 증가하는 것을 확인할 수 있다.As shown in Figure 2, the creams prepared in Formulation Example 1 and Comparative Formulation Examples 1 to 3 were applied to the skin, and the skin elasticity was measured before, after 1 week, and after 2 weeks, respectively. Compared to Comparative Formulation Example 3, which did not contain only the lupine peptide extract, Comparative Formulation Example 1 or Comparative Formulation Example 2, which contained only the lupine peptide extract, showed an increase in skin elasticity after 1 week and 2 weeks, respectively. It can be seen that formulation example 1 containing all extracts increases skin elasticity more than comparative formulation examples 1 or 2 containing only each extract.

Claims (5)

루핀 펩타이드 추출물 및 우방자 추출물을 1:3 내지 3:1의 중량비로 혼합한 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for improving skin elasticity containing a mixture obtained by mixing a lupine peptide extract and a raspberry extract in a weight ratio of 1:3 to 3:1 as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 콜라겐 및 지질 성분 합성 촉진을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin elasticity according to claim 1, wherein the cosmetic composition promotes the synthesis of collagen and lipid components. 제2항에 있어서, 상기 지질 성분 합성 촉진은 콜레스테롤 또는 트리글리세라이드의 발현량을 증가시키는 것을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin elasticity according to claim 2, wherein the promotion of lipid component synthesis increases the expression level of cholesterol or triglyceride. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 루핀 펩타이드 추출물과 우방자 추출물 각각을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.00001 ~ 30.0 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin elasticity according to any one of claims 1 to 3, wherein the cosmetic composition comprises 0.00001 to 30.0% by weight of each of the lupine peptide extract and the coriander extract in an amount of 0.00001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition . 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이트스, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 팩 마사지크림 및 스프레이의 제형을 특징으로 하는 피부 탄력 개선용 화장료 조성물.According to any one of claims 1 to 3, the cosmetic composition is a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, cleansing, oil, powder foundation, pack massage cream and spray Cosmetic composition for improving skin elasticity, characterized in that the formulation of.
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